Glicocorticóides modulam a resposta imune de forma complexa em vertebrados expostos a diferentes estressores. Dado que as populações naturais têm estado expostas a uma multiplicidade de estressores, uma melhor compreensão da associação funcional entre a duração e a intensidade da resposta ao estresse, as mudanças resultantes nos níveis dos hormônios esteróides e seu impacto sobre os diferentes aspectos da imunocompetência emergem como um ponto chave para as estratégias de conservação dos vertebrados. Nós investigamos as relações entre os níveis plasmáticos de hormônios esteróides e a imunocompetência inata em anfíbios anuros, incorporando as metodologias de desafio de contenção, elevação experimental dos níveis de corticosterona por aplicação transdérmica, capacidade bactericida por espectrofotometria e o desafio imunológico com fitohemaglutinina. Nossos resultados demonstram que a capacidade bactericida plasmática (CBP) medida por espectrofotometria é um método confiável e preciso para estimar a imunocompetência de anfíbios anuros, além disso, mostramos a existência de uma grande diversidade interespecífica na CBP de anuros machos. Quando quatro diferentes espécies de Bufonídeos foram submetidas a um desafio de contenção, as respostas gerais incluíram aumento dos níveis plasmáticos de corticosterona (CORT) e da relação neutrófilo/linfócito (N:L) e diminuição dos níveis plasmáticos de testosterona (T). As respostas da CBP à contenção foram muito mais variáveis, com R. ictérica mostrando diminuição e R. marina mostrando aumento dos valores de CBP. Adicionalmente, CORT e N:L tenderam a aumentar mais em resposta à contenção com restrição de movimento do que à contenção sem restrição de movimento, indicando que os sapos demostraram um aumento da resposta ao estresse quando submetidos ao estressor mais intenso. Todas as variáveis estudadas mostraram variação interespecífica. Rhinella ornata apresentou os maiores níveis basais de CORT quando comparado com as outras espécies, enquanto R. ornata e R. ictérica mostraram os maiores valores basais de CBP. Entretanto, as mudanças na relação N:L, nos níveis de T e na CBP, não foram correlacionadas com o aumento em CORT, dentro ou entre espécies. A aplicação transdérmica de corticosterona eficientemente simulou eventos repetidos de resposta ao estresse agudo em Rhinella ictérica, sem alterar os parâmetros imunitários, mesmo após treze dias de tratamento. Curiosamente, o cativeiro a longo prazo não atenuou a resposta ao estresse, uma vez que estes sapos mantiveram um aumento de três vezes em CORT mesmo depois de três meses sob estas mesmas condições. Além disso, a manutenção em cativeiro a longo prazo, nas mesmas condições, aumentou a contagem total de leucócitos (TLC) e gerou uma diminuição ainda maior na CBP, sugerindo que as consequências da resposta ao estresse podem ser agravadas pelo tempo em cativeiro. Com base em nossos resultados, consideramos que uma avaliação cuidadosa é necessária para compreender a modulação da resposta imunitária pelo estresse a nível intra e interespecífico. A inclusão de diferentes segmentos da resposta imune é desejável, e a padronização da coleta de dados para todas as espécies sob o mesmo período (em geral, dentro ou fora da época reprodutiva) e mesma atividade (em geral, vocalizando ou forrageando) se faz obrigatória / Glucocorticoids modulate the immune response in complex ways in vertebrates exposed to different stressors. Given that natural populations have been exposed to a multitude of stressors, a better understanding of the functional association between duration and intensity of the stress response, the resulting changes in steroid hormone levels and their impact on different aspects of immunocompetence emerges as a cornerstone for vertebrate conservation strategies. We investigated the relationships between steroids levels and innate immunocompetence in anuran amphibians, incorporating the methodology of restraint challenge, experimental elevation of corticosterone levels by transdermal application, bacterial killing ability by spectrophotometry and the immune challenge with phytohemagglutinin. Our results demonstrate that the bacterial killing ability (BKA) measured by spectrophotometry is a reliable and accurate method to estimate the immunocompetence of anuran amphibians, additionally showed the existence of a large interspecific diversity in BKA from male anurans. When four different species of Bufonids were submitted to a restraint challenge, the general responses included increased in corticosterone plasma levels (CORT) and neutrophil/lymphocyte ratio (N:L) and decreased in testosterone plasma levels (T). The responses of BKA to restraint were much more variable, with R. icterica showing decreased and R. marina showing increased values. Additionally, CORT and N:L tended to increase more in response to restraint with movement restriction than to restraint without movement restriction, indicating that toads showed an increased stress response to the more intense stressor. All variables studied show interspecific variation. Rhinella ornate showed higher baseline CORT when compared to other species, while R. ornate and R. icterica showed the highest baseline BKA values. However, changes in N:L ratio, T levels and BKA, were not correlated to increased CORT within or between species. Transdermal application of corticosterone efficiently mimics repeated acute stress response events in Rhinella icterica, without changing the immune parameters even after thirteen days of treatment. Interestingly, long-term captivity did not mitigate the stress response, since the toads maintained three fold increased CORT even after three months under these conditions. Moreover, long-term captivity in the same condition increased total leukocyte count (TLC) and generated an even greater decrease in BKA, suggesting that consequences of the stress response can be aggravated by time in captivity. Based on our results, we consider that a careful evaluation is necessary in order to understand the modulation of the immune response by stress at intra and interspecific levels. The inclusion of different segments of the immune response is desirable, and a standardized data collection for all the species under the same period (e.g. inside or outside of breeding season) and same activity (e.g. calling or foraging) is mandatory

Orientador: José Martins Filho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-18T18:28:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mortatti_ArnaldoLuis_D.pdf: 918873 bytes, checksum: 440db6a525f044a8293d5eae55ee837b (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A presente pesquisa examinou o efeito de 20 dias de treinamento e competição em variáveis endócrinas e da mucosa, além de ocorrências de infecção no trato respiratório superior (ITRS) ao longo do principal campeonato nacional de futebol na categoria sub- 19. Foram observados sintomas de ITRS em jovens jogadores do sexo masculino (n=12), durante o período de 20 dias em que jogaram sete partidas. Amostras de saliva foram coletadas nas manhãs dos jogos para análise de IgA e cortisol, enquanto que a escala de percepção subjetiva do esforço (PSE) foi observada ao final de cada jogo. Em comparação com o primeiro jogo, foi observado um aumento significativo de PSE nas partidas de 4 a 7 (p < 0.05). Os aumentos significativos de incidência de ITRS nos jogos 2 e 6 foram acompanhados por significativos aumentos dos níveis de IgA salivar (S-IgA). Também foram observadas correlações significativas (p < 0.05) entre a incidência de ITRS e a diminuição dos níveis de S-IgA no segundo (r = -0.60) e no sexto (r = -0.65) jogo. As concentrações de cortisol em repouso não mudaram ao longo do período experimental (p > 0.05). Os resultados do estudo sugerem que a diminuição da concentração salivar de IgA pode afetar a imunidade da mucosa, levando a uma maior incidência de ITRS. Tudo indica que o estresse fisiológico e psicológico impostos pela competição e pelo treinamento em um curto período de tempo são os fatores que mais contribuem para essas respostas. Dadas essas descobertas, o monitoramento de IgA salivar em repouso poderia ser um instrumento útil para prever as ocorrências de ITRS em jovens atletas em competições de curta duração / Abstract: The present study examined the effect of 20 days of training and competition, across the main under-19 Brazilian soccer championship, on mucosal and hormonal variables, as well as in upper respiratory tract infection (URTI) occurrences. Young male soccer players (n = 12) were observed for symptoms of URTI across a 20 day period in which seven competitive matches were played. Saliva samples were collected in the morning of each match and analyzed for IgA and cortisol. Ratings of perceived exertion after each match were also obtained. Compared to match 1, a significant increase in match RPE was observed in matches 4 to 7 (p < 0.05). The significant increases in URTI incidence at matches 2 and 6 were accompanied by significant decreases in salivary IgA (S-IgA) levels. Significant (p < 0.05) correlations were also seen between URTI incidence and the decrease in S-IgA levels in match 2 (r = 0.60) and match 6 (r = 0.65). Resting cortisol concentrations did not change across the experimental period (p > 0.05). The results of the present study suggest that decrements in salivary IgA concentration can affect mucosal immunity leading to greater incidence of UTRI. It seems that both the physiological and psychological stressors imposed by competition and training in the short timeframe are major contributing factors to these responses. Given these findings, the monitoring of resting salivary IgA would appear a useful approach for predicting URTI occurrences in young athletes during short-term competitions / Doutorado / Saude da Criança e do Adolescente / Doutor em Ciências da Saúde

A desnutrição protéico-energética (DPE) afeta mais de 1 bilhão de pessoas no mundo, principalmente crianças, idosos e pacientes hospitalizados. Ela provoca alterações metabólicas e hormonais, além de afetar o tecido hemopoético. O comprometimento da hemopoese provoca anemia e leucopenia, modificando a resposta imune inata e adquirida do organismo. Dessa forma, é comum a associação entre desnutrição e infecção, levando ao comprometimento do tratamento e aumento da morbidade e mortalidade de indivíduos hospitalizados. Após a recuperação nutricional, é relatada a reversão das alterações bioquímicas e hormonais, bem como das alterações na hemopoese e na resposta imune. Porém, muitos resultados são controversos, existindo dúvidas quanto à reversibilidade das alterações. Assim, nos propusemos a avaliar os efeitos da recuperação nutricional nos parâmetros bioquímicos, hormonais, hematológicos e imunológicos em modelo murino de desnutrição. Os animais desnutridos apresentaram perda de peso significativa, redução de proteínas totais, albumina, glicose, insulina e IGF-1, bem como aumento de glutamina plasmática, glutamina sintetase muscular e corticosterona. Houve redução dos parâmetros hepáticos e musculares, bem como alteração na sensibilidade à insulina, evidenciada pelos testes de OGTT e ITT. Todas as alterações descritas caracterizam o quadro de desnutrição. Após a recuperação nutricional, alguns parâmetros foram normalizados, mas as concentrações de glicose, insulina e IGF-1 permaneceram reduzidas. Da mesma forma, as alterações na concentração de DNA hepático e na sensibilidade à insulina permaneceram nos animais renutridos. A pancitopenia periférica e hipocelularidade da medula óssea e do baço observadas nos animais desnutridos foram revertidas após a renutrição. A avaliação de macrófagos peritoniais mostrou reversão parcial do comprometimento da capacidade e adesão e espraiamento, bem como da atividade fungicida nos animais renutridos. A produção de peróxido de hidrogênio continuou baixa após a recuperação nutricional, enquanto a produção de óxido nítrico voltou a aumentar. O comprometimento da produção de citocinas pró-inflamatórias decorrente da desnutrição não foi completamente revertido, visto que, em camundongos Swiss Webster, somente a produção de TNF-&#945; retornou ao normal, enquanto em camundongos C56BL/6J a produção de nenhuma citocina foi restabelecida. A avaliação da via de sinalização do fator de transcrição NFkB mostrou alteração na expressão de MyD88, TRAF-6, IkK&#946; e IkB&#945; em animais desnutridos. Após a recuperação nutricional, algumas dessas proteínas não retornaram ao normal. Os animais desnutridos também apresentaram comprometimento da ativação de NFkB, que não foi normalizada após a recuperação nutricional. Sendo assim, é possível afirmar que o retorno a uma dieta normoprotéica não é suficiente para reverter todas as alterações causadas pela desnutrição. / Protein-energy malnutrition (PEM) affects more than 1 billion people worldwide, mainly children, elderly and hospitalized patients. It causes metabolic and hormonal changes, besides affecting hematopoietic tissue. Impaired hematopoiesis causes anemia and leukopenia, modifying innate and acquired immune response of the organism. Thus, it is common the association between malnutrition and infection, leading to impaired treatment and increasing morbidity and mortality in hospitalized patients. After nutritional recovery, it is reported reversal of biochemical and hormonal changes, as well as, reversal of changes in hematopoiesis and immune response. However, many results are controversial, and there are doubts about the reversibility of the changes. Thus, we proposed to evaluate the effects of nutritional recovery biochemical, hormonal, haematological and immunological parameters in a murine model of malnutrition. The malnourished animals showed significant weight loss, reduction in total protein, albumin, glucose, insulin and IGF-1, as well as increased plasma glutamine, corticosterone and muscle glutamine synthetase. There was a reduction in muscle and liver parameters as well as change in insulin sensitivity, evidenced by the tests of OGTT and ITT. All modifications described characterize the malnutrition. After nutritional recovery, there was normalization of some parameters, but the concentrations of glucose, insulin and IGF-1 remained low. Likewise, changes in hepatic DNA concentration and insulin sensitivity remained in renourished animals. Peripheral pancytopenia and hypocellularity in bone marrow and spleen observed in malnourished animals were reversed after refeeding. The evaluation of peritoneal macrophages showed partial reversal of impairment of adhesion and spreading ability, as well as fungicidal activity in animals renourished. The hydrogen peroxide production remained low after nutritional recovery, while nitric oxide production increased again. Impaired production of proinflammatory cytokines due to malnutrition was not completely reversed, whereas in Swiss Webster mice, only the production of TNF-&#945; returned to normal, whereas in C56BL/6J mice no cytokine production was restored. The assessment of the signalling pathway of transcription factor NFkB showed alterations in the expression of MyD88, TRAF-6 IkK&#946; and IkB&#945; in malnourished animals. After nutritional recovery, some of these proteins didn\'t return to normal. Malnourished animals also showed impaired activation of NFkB, which wasn\'t normalized after nutritional recovery. Therefore, it is possible to say that the return to a normal diet is not enough to reverse all the changes caused by malnutrition.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:28:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1137_1.pdf: 1321687 bytes, checksum: 253b31bf70dd4ec1654c3742e9f3bb37 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A resposta imune inata em processos infecciosos é conhecida por sofrer alterações em decorrência de estados de desnutrição. Assim, o objetivo deste estudo foi de comparar a cinética da produção de óxido nítrico (ON) e a viabilidade de macrófagos alveolares (MA), após infecção celular in vitro, com Staphylococcus aureus meticilina-sensível (MSSA), e meticilina-resistente (MRSA) entre grupos de ratos nutridos (N) ou submetidos à desnutrição neonatal (D). Ratos machos Wistar (n=45) foram divididos em dois grupos distintos, de acordo com a dieta utilizada: N (ratos amamentados por mães submetidas à dieta com 17% de caseína) e D (ratos amamentados por mães submetidas à dieta nutricionalmente deficiente com 8% de caseína). Após o período de amamentação, os animais foram submetidos a um longo período de reposição nutricional, com Labina. Os MA foram coletados através da técnica do lavado broncoalveolar, após traqueostomia. O isolamento dos MA foi realizado por adesão em placas, sendo distribuídos na proporção de 106 células/mL de RPMI. Após o isolamento dos MA, foram estabelecidos quatro sistemas: controle negativo (CN), contendo apenas MA; controle positivo (CP), MA mais 10&#956;L de LPS (lipopolissacarídeo); MSSA, MA mais 100&#956;L de suspensão bacteriana (ATCC 29213) (densidade óptica de 0.15, equivalente a 10-6 CFUmL-1) e MRSA, MA mais 100&#956;L de suspensão bacteriana (ATCC 33591). As placas foram incubadas à 37ºC, com atmosfera úmida e 5% de CO2. A cada duas horas, num total de 24 horas de incubação, foram retirados 100&#956;L do sobrenadante das culturas. A quantificação do ON baseou-se na reação de Griess, através da determinação da concentração de nitritos. A leitura foi realizada em leitor de ELISA, filtro-550nm. A viabilidade dos MA foi analisada após 24 horas de incubação dos sistemas, e avaliada pela redução mitocondrial do 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5- brometo de difenil tetrazólico (MTT) à formazam. A quantificação do formazam solubilizado foi realizada em leitor de ELISA com filtro de 570nm. Utilizou-se teste t- Student e Mann-Whitney, admitindo-se p<0,05. A desnutrição acarretou diminuição do crescimento ponderal dos animais, da liberação de ON nos sobrenadantes das culturas e da viabilidade dos macrófagos. Houve menor produção de ON no MRSA quando comparado com MSSA, entretanto, a partir das 12h, não foi detectada diferença entre os sistemas, permanecendo até 24h. Ao avaliar a viabilidade dos macrófagos entre os sistemas, ocorreu maior redução no MRSA do grupo desnutrido. Pode-se concluir que o modelo de desnutrição neonatal adotado promoveu alteração na função das células fagocitárias, comprometendo o estresse nitrosativo e a viabilidade dos macrófagos alveolares. Além disto, há evidências de diferenças no mecanismo de evasão do sistema imune entre as cepas MSSA e MRSA

Orientador: Elisabeth Criscuolo Urbinati / Resumo: A presente tese de Doutorado compreende dois experimentos e é apresentado em quatro capítulos. No primeiro, apresentamos uma introdução geral sobre o tema da tese e no último as considerações finais. Os capítulos que compõem o restante da tese foram escritos como artigos científicos. No primeiro experimento, capítulo 2, foi avaliada a resposta imune inata, de estresse e metabólica de juvenis de pacu alimentados com diferentes concentrações de extrato de Aloe vera (0,0%; 0,5%; 1,0% e 2,0%), durante 7 dias. Depois da alimentação, os peixes foram inoculados através de injeção intraperitoneal (IP) de Aeromonas hydrophila inativada. Os peixes foram amostrados antes, 3h, 6 h e 24 h após o desafio. Os resultados mostraram que todas as concentrações de A. vera reduziram os níveis basais de cortisol e que, 3 h após a inoculação bactéria, os menores valores de cortisol foram observados nos peixes alimentados com 1,0% do extrato. Após 7 dias de alimentação, em condição basal, a A. vera promoveu os valores mais elevados de atividade respiratória dos leucócitos circulantes (ARL) nos peixes alimentados com 0,5% e 1,0% do extrato da planta. Os níveis séricos de lisozima aumentaram seis horas após a inoculação bacteriana em peixes alimentados com 1,0% e 2,0% de A. vera. O sistema complemento foi ativado nos peixes que receberam 1% de extrato da planta em todas as amostragens após a inoculação da bactéria. A alimentação por 7 dias com 1,0% de Aloe vera aumentou os níveis lipídicos no fígado e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This Doctoral thesis comprises two experiments and is presented in four chapters. In the first, we present a general introduction on the topic of the thesis and in the last, the final considerations. The chapters that make up the rest of the thesis were written as scientific articles. In the first experiment, chapter 2, the innate, stress and metabolic responses of pacu juveniles fed different concentrations of Aloe vera extract (0.0%; 0.5%; 1.0% and 2.0%) were evaluated, for 7 days. After feeding, the fish were inoculated by intraperitoneal (IP) injection of inactivated Aeromonas hydrophila. The fish were sampled before, 3h, 6h and 24h after the challenge. The results showed that all concentrations of A. vera reduced baseline levels of cortisol and that, 3 h after bacterial inoculation, the lowest values of cortisol were observed in fish fed 1.0% of the extract. After 7 days of feeding, in basal condition, A. vera promoted the highest values of respiratory activity of circulating leukocytes (ARL) in fish fed with 0.5% and 1.0% of the plant extract. Serum lysozyme levels increased six hours after bacterial inoculation in fish fed 1.0% and 2.0% A. vera. The complement system was activated in fish that received 1% of plant extract in all samples after inoculation of the bacteria. Feeding for 7 days with 1.0% Aloe vera increased lipid levels in the liver and muscle. The second experiment, chapter 3, evaluated the inclusion of A. vera in the diet (0.0%; 0.5%; 1.0% and 2.0%) for a... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Bowdichia virgilioides Kunth, popularly known as "sucupira preta", is used in folk regional medicine to combat inflammation, autoimmune diseases and healing. There are only few scientific studies dealing with its biological activity, especially in regards to the immune system, making it a potential target of scientific research. The aim of this study was to evaluate in vivo the action of the aqueous extract of Bowdichia virgilioides-derived stem bark (EaBv) in cellular and humoral responses. Swiss male mices were used (4-6 weeks), which were administered EaBv orally for 7 consecutive days. Initially using the template of zymosan A showed that treatment with EaBv increased phagocytic capacity of resident peritoneal macrophages. On the peripheral blood leukocytes count, it was observed a decrease in the number of total leukocytes in animals treated with EaBv and this reduction was observed when the differential number of neutrophils counts was performed. However, the increased number of lymphocytes in peripheral blood of animals after treatment. It has been found by the hemagglutination assay EaBv was able to decrease the production of antibodies. The extract stimulated proliferation of lymphocytes which have been obtained from lymph nodes after 7 days of treatment. Also, interfered with the effect of ConA on T lymphocyte proliferation and acted negatively on the action of LPS on the proliferation of B lymphocytes. Furthermore, flow cytometric, it was observed that the EaBv increased expression of TNF-&#945; by T lymphocytes and IL-10 by B lymphocytes. However, expression of TNF-&#945; by B lymphocytes has been modulated negatively by the extract. Together, these results suggest that aqueous extract of Bowdichia virgilioides-derived stem bark possesses a complexe immune activity, acting on the cellular and humoral immune responses. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Bowdichia virgilioides Kunth, popularmente conhecida como sucupira-preta , é espécie utilizada na medicina popular regional no combate a inflamação, doenças auto-imunes e cicatrizante. Ainda são escassos os estudos que tratam da sua atividade biológica, principalmente em relação ao sistema imunológico, o que a torna um alvo em potencial de investigações científicas. O objetivo desse trabalho foi avaliar in vivo a ação do extrato aquoso da casca do caule da Bowdichia virgilioides (EaBv) na resposta imunológica celular e humoral. Foram utilizados camundongos Swiss (4-6 semanas) machos, aos quais foi administrado por via oral o EaBv durante 7 dias consecutivos. Inicialmente, utilizando o modelo de zimosan A demonstrou-se que o tratamento com EaBv aumentou a capacidade fagocítica de macrófagos peritoneais residentes. Na contagem de leucócitos do sangue periférico, observou-se uma diminuição no número de leucócitos totais nos animais tratados com EaBv e esta diminuição foi evidenciada no número de neutrófilos quando realizada a contagem diferencial. No entanto, o número de linfócitos aumentou no sangue periférico dos animais após o tratamento. Verificou-se pelo ensaio de hemaglutinação que o EaBv foi capaz de diminuir a produção de anticorpos. O extrato estimulou a proliferação dos linfócitos totais que foram obtidos dos linfonodos mesentéricos após os 7 dias de tratamento. Além disso, interferiu na ação da concanavalina A sobre a proliferação de linfócitos T, e agiu negativamente na ação do lipopolissacarídeo sobre a proliferação de linfócitos B. Ainda, por citometria de fluxo, observou-se que o EaBv aumentou a expressão das citocinas TNF-&#945; nos linfócitos T e IL-10 nos linfócitos B. Entretanto, a expressão de TNF-&#945; pelos linfócitos B foi modulado negativamente pelo extrato. Em conjunto, os resultados sugerem que o extrato aquoso da casca do caule Bowdichia virgilioides possui uma atividade imunológica complexa, agindo sobre as respostas imunes celular e humoral.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-18Bitstream added on 2014-06-13T19:30:23Z : No. of bitstreams: 1 gomes_aad_me_jabo.pdf: 566624 bytes, checksum: 460e92b269ccf96c5bd806ac86bfd00f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A leishmaniose visceral pode ser incluída como uma das causas de miopatia inflamatória em cães, entretanto, pouco se sabe sobre a patogênese da doença no sistema muscular, sendo incriminada muitas vezes apenas à natureza catabólica da enfermidade. O objetivo deste estudo foi avaliar, por meio de imunoistoquímica, a presença de formas amastigotas de Leishmania sp, linfócitos T (CD3+), macrófagos e IgG nos músculos tríceps braquial, extensor carpo radial, bíceps femoral e gastrocnêmio de 23 cães naturalmente acometidos por leishmaniose visceral. Dentre os 92 músculos avaliados,11 (12%) apresentaram marcação antigênica para formas amastigotas de Leishmania sp, 35 (38,1%) para linfócitos T (CD3+), 29 (31,5%) para macrófagos e 14 (12%) para IgG. Os resultados obtidos permitiram concluir que em cães com leishmaniose visceral apresentam imunomarcação para formas amastigotas de Leishmania sp., linfócitos T CD3+, macrófagos e IgG, sugerindo a participação direta do parasito e de uma resposta imune celular e humoral na fisiopatogenia da lesão muscular. / Visceral leishmaniasis may be included as a cause of inflammatory myophathy in dogs, however, little is known about the pathogenesis of the disease in the muscular system, which is frequently associated with the catabolic nature of the illness. The purpose of this study was investigate, through immunohistochemistry, the presence of amastigote forms of Leishmania sp, T lymphocytes (CD3+), macrophages and IgG in the muscle triceps brachial, extensor carpi radialis, biceps femoris and gastrocnemius of 23 dogs with visceral leishmaniasis. Among 92 evaluated muscles, 11 (12%) presented antigenic marking for amastigote forms of Leishmania sp., 35 (38,1%) for T lymphocites (CD3+), 29 (31,5%) for macrophages and 14 (12%) for IgG. The results of the present experiment led to the conclusion that in dogs with visceral leishmaniasis there may be a straight participation of the parasite and of cellular and humoral immune response in the ethiopatogeny of the muscular injury.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Giardia duodenalis is one of the main causative agents of diarrhea worldwide, being transmitted by oral-fecal route. Giardiasis is usually self-limiting in immunocompetent individuals, indicating the presence of effective host defense mechanisms. The objective of that study was to determine the prepatent period and to evaluate the kinetics of elimination of cysts and the immune response humoral systemic (IgA, IgG1, IgG2a, IgM, IgE) and intestinal secretory (IgA) in gerbils (Meriones unguiculatus) inoculated, experimentally, with different doses of trophozoites of Giardia duodenalis, in the primary infection, reinfection, immunosuppression and reinfection/immunosuppression. We used 48 animals, 6-8 weeks old, distributed in 5 groups inoculated with different doses of trophozoites of G. duodenalis (101, 102, 103, 104 and 105) and a group control. Coproparasitology exams were carried out, daily, using the method of fluctuation in zinc sulfate 33%, to determine the prepatent period and the kinetics of elimination of cysts. Weekly, blood collections for retro-orbital puncture were performed and samples of feces were processed for obtaining of faecal extracts. In the 45th day after inoculation, the animals of each group were redistributed in 4 subgroups and submitted to the reinfection, immunosuppression or reinfection/immunosuppression. It was verified that all the gerbils inoculated with different trophozoites doses were susceptible to the primary infection, with prepatent period between 9 and 13 days. The reinfected animals didn't eliminate cysts and the immunosuppressed or reinfected/immunosuppressed again they presented recrudescence of the infection. The production of antibodies was induced by the parasite, although the systemics antibodies just reflect the stimulation of the immune response for G. duodenalis, since they don't act in the elimination of the parasite. In the reinfection it was observed fast production of both serum and secretory antibodies and the immunossuppressed animals they presented smaller levels of responsible antibodies for the control of the infection. Fecal IgA showed increase in the titles in the period in that absence of cysts was verified in the feces, could be correlated with the control of the giardiasis in this experimental model. / Giardia duodenalis é um dos principais agentes causadores de diarréia em todo o mundo, sendo transmitido por via oro-fecal. A giardíase é, usualmente, auto-limitante em indivíduos imunocompetentes, indicando a presença de mecanismos efetivos de defesa do hospedeiro. O objetivo desse estudo foi determinar o período pré-patente e avaliar a cinética de eliminação de cistos e a resposta imune humoral sistêmica (IgA, IgG1, IgG2a, IgM, IgE) e secretora intestinal (IgA) em gerbils (Meriones unguiculatus) inoculados, experimentalmente, com diferentes doses de trofozoítos de Giardia duodenalis, na infecção primária, reinfecção, imunossupressão e reinfecção/imunossupressão. Foram utilizados 48 animais, com idade entre 6 e 8 semanas, distribuídos em 5 grupos inoculados com diferentes doses de trofozoítos de G. duodenalis (101, 102, 103, 104 e 105) e um grupo controle. Exames coproparasitológicos foram realizados, diariamente, utilizando método de flutuação em sulfato de zinco a 33%, para determinar o período pré-patente e a cinética de eliminação de cistos. Semanalmente, coletas sanguíneas por punção retro-orbital foram realizadas e amostras de fezes foram processadas para obtenção de extratos fecais. No 45º dia após inoculação, os animais de cada grupo foram redistribuídos em 4 subgrupos e submetidos à reinfecção, imunossupressão ou reinfecção/imunossupressão. Verificou-se que todos os gerbils inoculados com diferentes doses de trofozoítos mostraram-se susceptíveis à infecção primária, com período pré-patente entre 9 e 13 dias. Os animais reinfectados não voltaram a eliminar cistos e os imunossuprimidos ou reinfectados/imunossuprimidos apresentaram recrudescência da infecção. A produção de anticorpos foi induzida pelo parasito, embora os sistêmicos apenas reflitam a estimulação da resposta imune por G. duodenalis, já que não atuam na eliminação do parasito. Na reinfecção foi observada rápida produção de anticorpos séricos e secretores e os animais imunossuprimidos apresentaram baixos níveis de anticorpos responsáveis pelo controle da infecção. A IgA fecal mostrou aumento nos títulos no período em que se verificou ausência de cistos nas fezes, podendo estar correlacionada com o controle da giardíase neste modelo experimental. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A leishmaniose visceral ou calazar é uma doença negligenciada, fatal que afeta a população pobre nos países em desenvolvimento. Há falha no controle da transmissão da doença devido à demora no diagnóstico, tratamento e toxicidade das drogas utilizadas, necessitando de novas estratégias. Dentre as estratégias seria de extrema importância o desenvolvimento de uma vacina a fim de minimizar a frequência dos casos e eliminar a doença. Nesse estudo, avaliamos a resposta imune celular a 10 antígenos recombinantes (SMT, CPB, NH, A2, KMP11, VIZ92, NS, A2MAT, 8NSA e NSA) bem assim ao antígeno solúvel de Leishmania (SLA), dosando as seguintes citocinas: IL-1ß, IL-12p70, IFN-γ, IL-6, IL-10, IL-27, TNF-α. Células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de 37 indivíduos: LV ativa, LV curado, DTH+ e controles sadios foi estimulado com os antígenos acima por 72 horas a 37ºC/5% de CO2. Ressaltamos que não houve alteração significativa de outras citocinas, além do INF-γ, TNF-α e IL-10, em resposta aos demais antígenos recombinantes não destacados nos resultados deste estudo. Assim, observamos concentração elevada de INF-γ e/ou TNF-α acompanhados de resposta ao IL-10 em indivíduos mais protegidos em resposta ao estímulo dos antígenos: CPB, VIZ92 e 8NSA; destacamos que em relação ao antígeno CPB tem-se concentração significativa de INF-γ no grupo DTH+ se comparado ao grupo LV ativa e correlação direta entre as concentrações de INF-γ e TNF-α entre estes dois grupos. Sugerimos que os antígenos CPB, VIZ92 e 8NSA possam estar associados à indução de resposta protetora e ser promissores para utilização em imunoterapia e imunoprofilaxia. / A leishmaniose visceral ou calazar é uma doença negligenciada, fatal que afeta a população pobre nos países em desenvolvimento. Há falha no controle da transmissão da doença devido à demora no diagnóstico, tratamento e toxicidade das drogas utilizadas, necessitando de novas estratégias. Dentre as estratégias seria de extrema importância o desenvolvimento de uma vacina a fim de minimizar a frequência dos casos e eliminar a doença. Nesse estudo, avaliamos a resposta imune celular a 10 antígenos recombinantes (SMT, CPB, NH, A2, KMP11, VIZ92, NS, A2MAT, 8NSA e NSA) bem assim ao antígeno solúvel de Leishmania (SLA), dosando as seguintes citocinas: IL-1ß, IL-12p70, IFN-γ, IL-6, IL-10, IL-27, TNF-α. Células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de 37 indivíduos: LV ativa, LV curado, DTH+ e controles sadios foi estimulado com os antígenos acima por 72 horas a 37ºC/5% de CO2. Ressaltamos que não houve alteração significativa de outras citocinas, além do INF-γ, TNF-α e IL-10, em resposta aos demais antígenos recombinantes não destacados nos resultados deste estudo. Assim, observamos concentração elevada de INF-γ e/ou TNF-α acompanhados de resposta ao IL-10 em indivíduos mais protegidos em resposta ao estímulo dos antígenos: CPB, VIZ92 e 8NSA; destacamos que em relação ao antígeno CPB tem-se concentração significativa de INF-γ no grupo DTH+ se comparado ao grupo LV ativa e correlação direta entre as concentrações de INF-γ e TNF-α entre estes dois grupos. Sugerimos que os antígenos CPB, VIZ92 e 8NSA possam estar associados à indução de resposta protetora e ser promissores para utilização em imunoterapia e imunoprofilaxia.

As células dendríticas (DCs) são células do sistema imune inato que são especializadas na instrução de repostas imunes adaptativas No baço murinho, as DCs convencionais podem ser classificadas em CD8&#945;+ DEC205+ e CD8&#945;- DCIR2+. Anticorpos monoclonais (mAbs) &#945;DEC205 e &#945;DCIR2 (33D1) conjugados a proteínas antigênicas e são utilizados como estratégia de direcionamento de antígenos para as DCs CD8&#945;+ e CD8&#945;-. Foi utilizado o antígeno quimérico MSP119PADRE conjugado aos mAbs &#945;DEC205 e &#945;DCIR2 e o Poly I:C como adjuvante. A montagem da resposta celular e humoral foi analisada 3, 4, 5 e 6 dias após primeira e a segunda As DCS CD8&#945;- são especializadas na instrução de células TFH. Porém, num segundo dose de mAbs há a instrução de uma resposta Th2/Th17. E, o direcionamento de antígenos para DCS CD8&#945;+ induz uma resposta Th1, indicando que essas células são especializadas na instrução desse perfil de resposta auxiliar. Apesar disso, na segunda imunização há a diferenciação de células TFH. / As dendritic cells (DC) are innate immune cells that are specialized to prime adaptive immune cells. In the murine spleen, conventional DCs can be classified into CD8&#945;+ DEC205+ and CD8&#945;-DCIR2+. Monoclonal antibodies (mAbs) &#945;DEC205 and &#945;DCIR2 (33D1) conjugated to antigenic proteins have benn used as antigen targeting strategy to CD8&#945;+ and CD8&#945;- DCs. MSP119PADRE chimeric antigen conjugated to mAbs &#945;DEC205 and &#945;DCIR2 and Poly I: C as adjuvant was used. The assembly of the cellular and humoral response was analyzed 3, 4, 5 and 6 days after the first and second doses of imnunization. DCs CD8&#945;- are specialized in the instruction of TFH cells. However, there is an a promotion of Th1 response by CD8&#945;+, indicating that these cells are specialized in the instruction of the helper response profile. Nevertheless, in the second immunization there is a differentiation of TFH cells.