A permeabilidade através do epitélio intestinal tem se tornado um importante aspecto a ser determinado nas avaliações biofarmacotécnicas envolvendo fármacos e medicamentos. A técnica mais empregada para essa determinação in vitro é aquela que utiliza a cultura de células Caco-2. Entretanto, ainda são discutíveis as condições para a realização desses experimentos, uma vez que a padronização das mesmas é fator fundamental para a confiabilidade dos resultados. Nesta tese, foram avaliadas as condições para realização dos estudos de permeabilidade através de membranas de células Caco-2 para a rifampicina, principal fármaco utilizado no tratamento da tuberculose. Para tanto, foram investigados fatores tais como a citotoxicidade da rifampicina em diferentes concentrações, a influência da concentração do fármaco sobre a permeabilidade, do pH de realização dos experimentos e da presença de proteínas do muco intestinal, além da influência de proteínas plasmáticas. Foi também investigado o potencial indutor da rifampicina sobre a expressão da glicoproteína-P (Pgp) e seu impacto na permeabilidade da própria rifampicina. Os estudos foram desenvolvidos utilizando membranas de células Caco-2 provenientes da American Type Culture Collection (ATCC) cultivadas em placas Transwel®, a quantificação da fração permeada foi por cromatografia líquida de alta eficiência com métodos validados. A análise da indução da expressão da Pgp foi realizada por PCR-RT. Demonstrou-se que as concentrações da rifampicina (10,0; 25,0 e 50,0 µg/mL) não ocasionaram danos às células Caco-2 no estudo de citotoxicidade pela técnica que emprega o sal do brometo de 3-(4,5-dimetil-2-tiazoli)-2,5-difenil-2H-tetrazólio (MTT). As concentrações de rifampicina (5,0; 10,0 e 25,0 µg/mL) não resultaram em valores estatisticamente diferentes de permeabilidade aparente (Papp) em células Caco-2 nas condições do estudo. A rifampicina apresentou valor de Papp significativamente maior em pH 6,8 dentre os valores de pH avaliados (5,8 ; 6,8; 7,4). A presença de muco simulado e de soro fetal bovino não resultou em valores de permeabilidade significativamente distintos do resultado obtido sem a sua adição ao experimento. A expressão da Pgp em células Caco-2 é induzida pela adição da rifampicina (10µg/mL), ocasionando diminuição da sua permeabilidade por mecanismo de efluxo. Pelos resultados de permeabilidade obtidos em todas as condições avaliadas, a rifampicina pode ser considerada um fármaco de alta permeabilidade de acordo com o Sistema de Classificação Biofarmacêutica. / The permeability through the intestinal epithelium has become an important aspect to be determined in evaluations involving drugs and pharmaceutical products. The most common technique for this determination in vitro is one that uses the culture of Caco-2 cells. Nevertheless, the conditions for carrying out such experiments are still questionable, since the standardization of them is essential to the reliability of the results. In this thesis, we evaluate the conditions for the studies of permeability of rifampicin through membranes of Caco-2 cells, the main drug used in the treatment of tuberculosis. To this end, we examined factors such as cytotoxicity of rifampicin at different concentrations, the influence of drug concentration on the permeability, as well as the pH of the experiments, the presence of proteins of intestinal mucus, and the influence of plasma proteins. It was also investigated the potential of rifampicin on the expression of P-glycoprotein (Pgp) and its impact on the permeability of rifampicin itself. The studies were developed using membranes of Caco-2 cells from American Type Culture Collection (ATCC) grown on plates Transwel®, and the quantification of the fraction of drug permeated was obtained by high performance liquid chromatography with validated methods. The analysis of induction of expression of Pgp was performed by RT-PCR. It was demonstrated that the concentrations of rifampicin (10,0; 25,0 and 50,0 µg/mL) did not cause damage to Caco-2 cells in the study of the cytotoxicity technique that uses a bromide salt of 3 - (4,5-dimethyl-2 - thiazol) -2,5-diphenyl-2H-tetrazolium (MTT). The concentrations of rifampicin (5,0; 10,0 and 25,0 &#181g/mL) did not result in statistically different values of apparent permeability (Papp) in Caco-2 cells under the conditions of the study. Rifampicin showed a value of Papp significantly higher at pH 6.8 in comparison with other measured pH values (5,8 and 7,4). The presence of mucus simulated and fetal calf serum did not result in permeability values significantly different from the result obtained without its addition to the experiment. The expression of P-gp in Caco-2 cells is induced by the addition of rifampicin (10 µg/ml), decreasing its permeability by efflux mechanism. Taking into account the results of permeability obtained in all conditions, the rifampicin can be considered a high permeability drug according to the biopharmaceutical classification system.

Submitted by Rosana Moreira (rosanapsm@outlook.com) on 2018-11-16T12:47:04Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ConcentracoesPlasmaticasRifampicina.pdf: 1841274 bytes, checksum: ab21c5520666f9061107c16e7a3c4652 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2019-01-30T14:08:15Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ConcentracoesPlasmaticasRifampicina.pdf: 1841274 bytes, checksum: ab21c5520666f9061107c16e7a3c4652 (MD5) / Made available in DSpace on 2019-01-30T14:08:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ConcentracoesPlasmaticasRifampicina.pdf: 1841274 bytes, checksum: ab21c5520666f9061107c16e7a3c4652 (MD5) Previous issue date: 2017-12-01 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A tuberculose é uma doença infectocontagiosa considerada ainda um importante problema de saúde pública mundial. O Brasil é um dos 22 países do mundo responsáveis por 80% dos casos da doença, e as maiores taxas de incidência são observadas nas regiões norte, sudeste e nordeste. O esquema de tratamento padrão é composto por rifampicina, isoniazida, pirazinamida e etambutol. O desfecho clinico está associado as concentrações sanguíneas destes fármacos após uso de doses terapêuticas, entretanto, apesar da elevada ocorrência da doença do Brasil, as concentrações destes fármacos não foram avaliadas nestes pacientes, que é relevante principalmente para rifampicina, dada a elevada variabilidade de concentrações em fluídos biológicos após terapêuticas. Portanto, realizou-se estudo prospectivo de casos objetivando determinar as concentrações de rifampicina por cromatografia líquida de alta eficiência em pacientes com tuberculose ativa tratados na cidade de Belém. Foram incluídos no estudo 50 pacientes, entretanto, houve perda de seguimento clínico laboratorial de 20 pacientes (40%), cujo principal motivo foi o abandono de tratamento. Os aspectos sociais e demográficos dos demais aponta maior ocorrência da doença no sexo masculino, baixa escolaridade, residentes na região metropolitana de Belém e na faixa etária produtiva. As concentrações de rifampicina nas duas fases de tratamento variaram de 0,6μg/ml a 0,73μg/ml. Não houve diferença significativa nas concentrações sanguíneas do fármaco entre as fases de tratamento, contudo os níveis de rifampicina foram significativamente superiores em mulheres. / Tuberculosis is an infectious-contagious disease that is still considered a major public health problem worldwide. Brazil is one of the 22 countries in the world responsible for 80% of the cases of the disease, and the highest incidence rates are observed in the North, Southeast and Northeast regions. The standard treatment regimen is composed of rifampicin, isoniazid, pyrazinamide and ethambutol. The clinical outcome is associated with the blood concentrations of these drugs after the use of therapeutic doses, however, despite the high incidence of the Brazilian disease, the concentrations of these drugs have not been evaluated in these patients, which is relevant mainly for rifampicin, given the high variability of concentrations in biological fluids after therapy. Therefore, a prospective case study was carried out to determine the concentrations of rifampicin by high performance liquid chromatography in patients with active tuberculosis treated in the city of Belém. Fifty patients were included in the study, however, there was a loss of clinical follow-up of 20 patients (40%), whose main reason was the abandonment of treatment. The social and demographic aspects of the others indicate a higher occurrence of the disease in males, low education, residents in the metropolitan area of Belém and in the productive age group. Rifampicin concentrations in the two treatment phases ranged from 0.6 μg / ml to 0.73 μg / ml. There was no significant difference in blood drug concentrations between treatment phases, however, rifampicin levels were significantly higher in women.

Orientador: Fabio Furlan Ferreira / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Nanociências e Materiais Avançados, 2013

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:26:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 2.pdf: 3729000 bytes, checksum: 78661b59dc7c742033ca6ce5a153cc47 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Fármacos/Farmanguinhos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / O crescimento do número de casos de tuberculose no Brasil fez com que o Governo Federal desenvolvesse uma política nacional de controle da tuberculose que possibilitasse melhorar e prolongar a qualidade de vida dos indivíduos infectados. Esta política inclui, entre várias outras iniciativas, o aumento na adesão de pacientes com um tratamento terapêutico adequado utilizando Formulações de Doses Fixas Combinadas (FDC), contendo os fármacos aos quais o bacilo de Koch é mais sensível. Um dos pontos críticos para o desenvolvimento de tuberculostáticos é o desenvolvimento de metodologias analíticas para seu controle que sejam viáveis, eficazes e robustas, uma vez que a rifampicina um dos insumos farmacêuticos ativos (IFAs) da associação apresenta características peculiares como a sua baixa estabilidade em solução, o que pode levar à formação de muitos produtos de degradação. O presente estudo tem por objetivo otimizar e validar uma metodologia analítica que seja adequada à rotina de um laboratório de controle de qualidade para a determinação dos fármacos isoniazida e rifampicina (ambos IFAs da formulação) e suas substâncias relacionadas, associados em comprimidos de dose fixa combinada para serem utilizados no tratamento dos casos da tuberculose e serem distribuídos pelo Sistema Único de Saúde. Para tanto, foi otimizada e validada uma metodologia analítica utilizando a técnica de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) capaz de determinar não só o teor dos insumos farmacêuticos ativos (IFAs) presentes na formulação, mas também de quantificar as suas substâncias relacionadas. Um estudo de estabilidade de longa e acelerada durações também foi conduzido e a metodologia analítica otimizada e validada foi usada para avaliação dos comprimidos, mostrando sua capacidade de detectar o esperado decaimento do teor dos IFAs e o aumento no teor de suas substâncias relacionadas. Posteriormente, houve a transferência do método para a técnica de cromatografia líquida de ultraeficiência (CLUE), visando uma análise cromatográfica em tempo mais curto e uma maior sensibilidade do método. Essa metodologia utilizando a técnica de CLUE também foi validada. / As the number of tuberculosis (TB) cases in Brazil is rising, the brazilian Government implemented a national policy for TB control that would enable to improve and endure the quality of life in infected individuals. This policy includes, among many actions, the increase of the patient’s adhesion by a therapeutic treatment using suitable formulations of Fixed Dose Combination (FDC) including drugs to which M. tuberculosis is more sensitive. One critical point for FDC formulation development is the establishment of viable, effective and robust analytical methods for its quality control, since rifampicin – one of the formulation’s active pharmaceutical ingredient (API) – has particular characteristics such as its low stability in aqueous solution, which can lead to formation of many degradation products. This study aims to optimize and validate an analytical methodology for the determination of isoniazid and rifampicin (both APIs in the formulation) and their related substances en tablets with fixed dose. This medicines will be distributed by the national health system for the treatment of tuberculosis patients. Therefore, an analytical method was optimized and validated using the technique of high performance liquid chromatography (HPLC) that can evaluate not only the dosage of APIs in the formulation, but also to determine their related substances. A stability study of accelerated and long durations was also conducted and the optimized analytical method was used to evaluate the tablet, showing its ability to detect the expected reduction of API dosage and the increase in the amount of its related products. Later, an upgrade of the optimized and validated method to ultra-high performance liquid chromatography (UPLC) was succefully performed, with the reduced chromatographic analysis time and increased sensitivity. This UPLC methodology has also been validated.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-04-25T23:51:26Z No. of bitstreams: 1 RenatoFerreiraDeAlmeidaJunior_DISSERT.pdf: 1495100 bytes, checksum: f007a8b773603ddf1cf491e66172e839 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-04-28T20:17:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 RenatoFerreiraDeAlmeidaJunior_DISSERT.pdf: 1495100 bytes, checksum: f007a8b773603ddf1cf491e66172e839 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-28T20:17:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RenatoFerreiraDeAlmeidaJunior_DISSERT.pdf: 1495100 bytes, checksum: f007a8b773603ddf1cf491e66172e839 (MD5) Previous issue date: 2015-03-16 / Os v?rus dengue pertence ? fam?lia Flaviviridae e ao g?nero Flavivirus, sendo composto por 4 sorotipos antigenicamente distintos, s?o considerados os arbov?rus mais importantes no mundo por causar altas taxas de morbidade e mortalidade em regi?es tropicais e subtropicais do planeta, colocando em risco at? 3,6 bilh?es de pessoas em mais de 100 pa?ses. Por ser uma doen?a com amplo espectro cl?nico e por n?o possuir vacina ou tratamento eficaz, o estudo de poss?veis antivirais que visam diminuir a viremia do paciente ? de suma import?ncia, j? que este ? um dos fatores que pode levar a febre hemorr?gica da dengue e a s?ndrome do choque da dengue que s?o as formas grave da doen?a. No presente estudo foi avaliado o potencial antiviral do extrato da folhada planta Caesalpinia echinata contra o v?rus dengue-2 (DENV-2) em cultura de c?lulas C6/36 e Vero e a a??o antiviral da Rifampicina em c?lulas Vero. A escolha da Caesalpinia echinata se deve ao fato de que j? foi observada sua a??o antiinflamat?ria e antimal?rica, al?m de n?o ter sido encontrado nenhum trabalho que tenha avaliado seu potencial de a??o frente a v?rus. A Rifampicina foi escolhida por demonstrado a??o antiviral, principalmente contra os poxvirus, por?m poucos s?os os relatos da utiliza??o deste f?rmaco contra v?rus de RNA. O resultado foi obtido atrav?s da quantifica??o da carga viral pela t?cnica da qRT-PCR em Tempo Real. As c?lulas infectadas por DENV-2 foram submetidas ao tratamento pelo per?odo de 7 dias em diferentes concentra??es do extrato da planta Caesalpinia echinataque variou entre 0,68 a 0,0068mg/mL. N?o foi poss?vel observar neste estudo, evid?ncias de inibi??o significativa da replica??o do v?rus DENV-2 em ambas as culturas celulares. ARifampicina foi utilizada em diferentes condi??es de tratamento, no qual foi avaliado ao longo de 72 horas a carga viral produzida nas c?lulas Vero.Nas condi??es de tratamento p?s-infec??o e no ensaio virucida o f?rmaco apresentou atividade antiviral, reduzindo a taxa de replica??o em 100 vezes em rela??o ao controle. De acordo com os nossos resultados conclui-se que a Rifampicina mostrou-se eficaz no combate a infec??o do DENV-2 em cultura de c?lulas Vero. / The dengue virus belongs to the Flaviviridae family and the Flavivirus genus, consisting of four serotypes antigenically distinct, are considered the most important arbovirus in the world to cause high rates of morbidity and mortality in tropical and subtropical regions of the world, threatening to 3, 6 billion people in over 100 countries. Because it is a disease with a wide clinical spectrum and has no vaccine or effective treatment, the study of possible antiviral drugs aimed at reducing viremia of patients is of paramount importance, since this is one of the factors which can lead to dengue hemorrhagic fever and dengue shock syndrome that are severe forms of the disease. In the present study we evaluated the antiviral potential of the leaf extract of the plant Caesalpinia echinata against dengue-2 virus (DENV-2) in cultured C6/36 and Vero cells and the antiviral action of Rifampicin on Vero cells. The choice of Caesalpinia echinata is due to the fact that has been observed its action anti-inflammatory and antimalarial , and not have been found no study evaluated its antiviral effect. Rifampin was chosen was chosen for demonstrated antiviral action, especially against poxviruses, but few sane reports usage of this drug against RNA viruses. The result was obtained by quantifying the viral load bythe technique of Real-time qRT-PCR. Cells infected with DENV-2 were subjected to treatment for 7 days in different concentrations of plant extract Caesalpinia echinata (0.68 - 0,0068mg / ml). As a result, we could not observe a inhibition significant of virus replication in both cell cultures. The Rifampicin was used for different treatment condition,which were evaluated over 72 hours the amount of viral load produced in Vero cells, In the conditions treatment and the test virucidal theantiviral activity, which is capable of reducing the rate of 100X replication as compared to control. According to our results we can conclude that Rifampicin was effective in action against to infection DENV-2 in Vero cell culture.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-03-21T12:35:07Z No. of bitstreams: 1 KellySivocySampaioTeixeira_TESE.pdf: 2385798 bytes, checksum: ad5dc195f2ccb1f7300d4f04dc565b8f (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-03-23T13:54:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 KellySivocySampaioTeixeira_TESE.pdf: 2385798 bytes, checksum: ad5dc195f2ccb1f7300d4f04dc565b8f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-23T13:54:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 KellySivocySampaioTeixeira_TESE.pdf: 2385798 bytes, checksum: ad5dc195f2ccb1f7300d4f04dc565b8f (MD5) Previous issue date: 2017-03-29 / O Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / A Organiza??o Mundial de Sa?de (OMS) sugere que o tratamento da tuberculose (TB) seja realizado atrav?s da terapia que consiste na associa??o de quatro f?rmacos: rifampicina, isoniazida, pirazinamida e etambutol. Com isso o tratamento ? melhor aceito tendo uma maior ades?o do paciente ? terapia prescrita. Levando-se em considera??o que a metodologia utilizada para o doseamento de um f?rmaco na presen?a de excipientes e outros f?rmacos ? a cromatografia l?quida de alta efici?ncia (CLAE) que ? sabidamente trabalhosa, de alto custo e destrutiva, foi proposta desse trabalho o desenvolvimento e valida??o de um modelo de calibra??o multivariada em associa??o com a t?cnica de espectroscopia no infravermelho pr?ximo (NIR) para determina??o simult?nea de rifampicina, isoniazida, pirazinamida e etambutol que fosse mais simples, r?pida, de baixo custo, n?o destrutiva e que n?o utilizasse solventes org?nicos, contribuindo assim com o meio ambiente. Sendo, portanto, ferramenta de otimiza??o para o controle de qualidade deste medicamento. Nesse trabalho foi utilizado o m?todo por NIR ? PLS (regress?o de m?nimos quadrados parciais) onde as misturas dos quatro f?rmacos foram realizadas com base no planejamento experimental do tipo composto central elaborado pelo programa Statistica 13 (StatSoft Inc.). Essas misturas foram lidas na faixa de 10.000 a 4.000 cm-1 utilizando um espectrofot?metro Infravermelho (IRPrestige-21 - Shimadzu) com resolu??o de 4 cm-1, 20 varreduras, temperatura e umidade controladas. As an?lises envolvendo CLAE foram realizadas em um cromat?grafo (Hitachi ? Elite Ultra), equipado com coluna C18 (15 cm x 4,6 mm ? ACE-5) e (25 cm x 4,6 mm ? Luna - Phenomenex) e detector UV (matriz de diodo), utilizando o m?todo de refer?ncia descrito na farmacopeia internacional 15? edi??o. Ao final, todos os dados foram tratados por ferramentas computacionais de an?lise multivariada, utilizando PLS atrav?s do programa pirouette 3.11 (Infometrix, Inc.). As sele??es de vari?veis foram realizadas pelo programa QSAR modeling. Foi realizada valida??o cruzada pelo m?todo leave-one-out e estimativa de figuras de m?rito como linearidade, precis?o e exatid?o foram demonstradas nos quatro modelos propostos. Na avalia??o das amostras comerciais pelos modelos de calibra??o multivariada em associa??o com a espectroscopia no infravermelho pr?ximo (NIR) desenvolvidos foram capazes de determinar simultaneamente os quatro f?rmacos, apresentando dados estatisticamente equivalentes aos obtidos por CLAE. / The World Health Organization (WHO) suggests that treatment of tuberculosis (TB) should be done through a combination of four drugs: rifampicin, isoniazid, pyrazinamide and ethambutol. With this the treatment is better accepted having a greater adhesion of the patient to the prescribed therapy. Taking into account that the methodology used for the determination of a drug in the presence of excipients and other drugs is high-performance liquid chromatography (HPLC), which is known to be laborious, expensive and destructive. Validation of a multivariate calibration model in association with the near infrared spectroscopy (NIR) technique for the simultaneous determination of rifampicin, isoniazid, pyrazinamide and ethambutol that was simpler, faster, low cost, non destructive and did not use organic solventes, thus contributing to the environment. Therefore, it is an optimization tool for the quality control of this medicine. In this work, the NIR - PLS (partial least squares regression) method was used where the mixtures of the four drugs were performed based on the experimental design of the central composite type elaborated by the program Statistica 13 (StatSoft Inc.). These mixtures were read in the 10,000 to 4,000 cm-1 range using an infrared (IRPrestige-21 - Shimadzu) spectrophotometer with 4 cm-1 resolution, 20 sweeps, controlled temperature and humidity. The analyzes involving HPLC were performed in a chromatograph (Hitachi - Elite Ultra) equipped with a C18 column (15 cm x 4.6 mm - ACE - 5) and (25 cm x 4.6 mm - Luna - Phenomenex) and UV detector (Diode array) using the reference method described in the International Pharmacopoeia 15th Edition. At the end, all data were treated by computational tools of multivariate analysis, using PLS through the program pirouette 3.11 (Infometrix, Inc.). The selections of variables were performed by the QSAR modeling program. Cross-validation was performed by the leave-one-out method and estimation of merit figures such as linearity, precision and accuracy were demonstrated in the four proposed models. In the evaluation of the commercial samples by the multivariate calibration models in association with the near infrared spectroscopy (NIR), they were able to simultaneously determine the four drugs, presenting data statistically equivalent to those obtained by HPLC.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-03-17T19:34:43Z No. of bitstreams: 1 SaidGoncalvesDaCruzFonseca_TESE.pdf: 3943199 bytes, checksum: b6604feae27ec3db3b6955b193bae174 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-03-18T00:21:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 SaidGoncalvesDaCruzFonseca_TESE.pdf: 3943199 bytes, checksum: b6604feae27ec3db3b6955b193bae174 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-18T00:21:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SaidGoncalvesDaCruzFonseca_TESE.pdf: 3943199 bytes, checksum: b6604feae27ec3db3b6955b193bae174 (MD5) Previous issue date: 2015-12-07 / A disponibilidade de formula??o pedi?trica para tratamento de tuberculose ? uma realidade para os pa?ses da ?sia e da ?frica, mas ainda n?o ocorre em outros pa?ses que apresentam consider?vel incid?ncia dessa enfermidade. Considerando a situa??o da necessidade global por medicamentos para uso em pediatria e especificamente por este tipo de produto para o tratamento da tuberculose, cuja associa??o de ativos representa um grande desafio, esse trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de formula??es orais contendo rifampicina, isoniazida e pirazinamida em dose fixa combinada para uso em pediatria. Iniciouse com a caracteriza??o f?sico-qu?mica dos insumos ativos (identifica??o por IV, UV e CLAE, determina??o do teor por CLAE e UV, densidade aparente e ?ngulo de repouso). Em seguida foi realizada a avalia??o da compatibilidade t?rmica dos insumos ativos com diferentes excipientes (DSC e TG); o desenvolvimento de ve?culo voltado para o emprego como carreador de f?rmacos para uso oral em pediatria com o m?nimo de componentes, em baixas concentra??es, selecionando-os dentre os insumos considerados seguros para crian?as (avaliando viscosidade, pH, palatabilidade, estabilidade f?sica e microbiol?gica). Foi desenvolvida e validada metodologia anal?tica espectrofotom?trica para uso no doseamento e perfil de dissolu??o concomitante dos tr?s f?rmacos nos produtos desenvolvidos, al?m de estudos de pr?-formula??o atrav?s da densidade aparente e ?ngulo de repouso dos f?rmacos isolados e das suas misturas com aerosil, granula??o com diferentes pol?meros e seu efeito na libera??o da rifampicina, estabilidade da rifampicina em fun??o do pH, revestimento e microencapsula??o da rifampicina com quitosana, at? finalmente o desenvolvimento das formula??es s?lidas orais sob a forma de p? para reconstitui??o e comprimido dispers?vel contendo dose fixa combinada dos f?rmacos supra-citados. Foram avaliados a viscosidade, pH, teor dos f?rmacos e estabilidade das prepara??es reconstitu?das, bem como peso m?dio, dureza, tempo de desintegra??o, perfil de dissolu??o e friabilidade dos comprimidos. O m?todo de Ozawa foi empregado em estudos cin?ticos de DSC para estimar o fator de frequ?ncia, a energia de ativa??o e a ordem das rea??es que levam ? degrada??o das formas farmac?uticas s?lidas. As duas formas farmac?uticas s?lidas quando dispersas em ?gua, resultaram em suspens?o pseudo-pl?stica f?cil de ser manuseada, medida e administrada, e que podem ser utilizadas por at? 12 horas ap?s a reconstitui??o. / The availability of pediatric formulation for treating tuberculosis is a reality for the countries of Asia and Africa, but not in other countries that have considerable incidence of this disease. Considering the situation of the global need for medicines for pediatric use and specifically for this type of product for the treatment of tuberculosis, whose drugs association represents a major challenge, this study aimed to develop oral formulations containing rifampicin, isoniazid and pyrazinamide in fixed-dose combination for pediatric use. It began with the physico-chemical characterization of active ingredients (identification by IR, UV and HPLC, determination of content by HPLC and UV, bulk density and angle of repose). It then carried the evaluation of thermal compatibility of active ingredients with different excipients (DSC and TG); the vehicle development for use as a carrier of oral drugs in children with minimal components, at low concentrations, selecting them from the inputs considered safe for children (evaluating viscosity, pH, palatability, physical and microbiological stability). It was developed and validated spectrophotometric analytical methodology for use in the assay and dissolution profile of three drugs in the developed products, in addition to pre-formulation studies by apparent density and angle of repose of the individual drugs and their mixtures with aerosil, granulation with different polymers and their effect on the release of rifampicin, rifampicin stability in function of pH, coating and microencapsulation of rifampicin with chitosan, and finally the development of solid oral formulations in the form of powder for reconstitution and dispersible tablet containing a fixed-dose combination of rifampicin, isoniazid and pyrazinamide. We evaluated the viscosity, pH, content of drug and stability of the reconstituted preparations, as well as average weight, hardness, disintegration time, dissolution profile and friability of the tablets. The Ozawa method was used for DSC studies kinetic to estimate the frequency factor, the activation energy and the order of reactions that lead to degradation of solid dosage forms. The two solid dosage forms when dispersed in water, resulting in pseudo-plastic suspension easy to be handled, measured and administered, and can be used for up to 12 hours after reconstitution.

A permeabilidade através do epitélio intestinal tem se tornado um importante aspecto a ser determinado nas avaliações biofarmacotécnicas envolvendo fármacos e medicamentos. A técnica mais empregada para essa determinação in vitro é aquela que utiliza a cultura de células Caco-2. Entretanto, ainda são discutíveis as condições para a realização desses experimentos, uma vez que a padronização das mesmas é fator fundamental para a confiabilidade dos resultados. Nesta tese, foram avaliadas as condições para realização dos estudos de permeabilidade através de membranas de células Caco-2 para a rifampicina, principal fármaco utilizado no tratamento da tuberculose. Para tanto, foram investigados fatores tais como a citotoxicidade da rifampicina em diferentes concentrações, a influência da concentração do fármaco sobre a permeabilidade, do pH de realização dos experimentos e da presença de proteínas do muco intestinal, além da influência de proteínas plasmáticas. Foi também investigado o potencial indutor da rifampicina sobre a expressão da glicoproteína-P (Pgp) e seu impacto na permeabilidade da própria rifampicina. Os estudos foram desenvolvidos utilizando membranas de células Caco-2 provenientes da American Type Culture Collection (ATCC) cultivadas em placas Transwel®, a quantificação da fração permeada foi por cromatografia líquida de alta eficiência com métodos validados. A análise da indução da expressão da Pgp foi realizada por PCR-RT. Demonstrou-se que as concentrações da rifampicina (10,0; 25,0 e 50,0 µg/mL) não ocasionaram danos às células Caco-2 no estudo de citotoxicidade pela técnica que emprega o sal do brometo de 3-(4,5-dimetil-2-tiazoli)-2,5-difenil-2H-tetrazólio (MTT). As concentrações de rifampicina (5,0; 10,0 e 25,0 µg/mL) não resultaram em valores estatisticamente diferentes de permeabilidade aparente (Papp) em células Caco-2 nas condições do estudo. A rifampicina apresentou valor de Papp significativamente maior em pH 6,8 dentre os valores de pH avaliados (5,8 ; 6,8; 7,4). A presença de muco simulado e de soro fetal bovino não resultou em valores de permeabilidade significativamente distintos do resultado obtido sem a sua adição ao experimento. A expressão da Pgp em células Caco-2 é induzida pela adição da rifampicina (10µg/mL), ocasionando diminuição da sua permeabilidade por mecanismo de efluxo. Pelos resultados de permeabilidade obtidos em todas as condições avaliadas, a rifampicina pode ser considerada um fármaco de alta permeabilidade de acordo com o Sistema de Classificação Biofarmacêutica. / The permeability through the intestinal epithelium has become an important aspect to be determined in evaluations involving drugs and pharmaceutical products. The most common technique for this determination in vitro is one that uses the culture of Caco-2 cells. Nevertheless, the conditions for carrying out such experiments are still questionable, since the standardization of them is essential to the reliability of the results. In this thesis, we evaluate the conditions for the studies of permeability of rifampicin through membranes of Caco-2 cells, the main drug used in the treatment of tuberculosis. To this end, we examined factors such as cytotoxicity of rifampicin at different concentrations, the influence of drug concentration on the permeability, as well as the pH of the experiments, the presence of proteins of intestinal mucus, and the influence of plasma proteins. It was also investigated the potential of rifampicin on the expression of P-glycoprotein (Pgp) and its impact on the permeability of rifampicin itself. The studies were developed using membranes of Caco-2 cells from American Type Culture Collection (ATCC) grown on plates Transwel®, and the quantification of the fraction of drug permeated was obtained by high performance liquid chromatography with validated methods. The analysis of induction of expression of Pgp was performed by RT-PCR. It was demonstrated that the concentrations of rifampicin (10,0; 25,0 and 50,0 µg/mL) did not cause damage to Caco-2 cells in the study of the cytotoxicity technique that uses a bromide salt of 3 - (4,5-dimethyl-2 - thiazol) -2,5-diphenyl-2H-tetrazolium (MTT). The concentrations of rifampicin (5,0; 10,0 and 25,0 &#181g/mL) did not result in statistically different values of apparent permeability (Papp) in Caco-2 cells under the conditions of the study. Rifampicin showed a value of Papp significantly higher at pH 6.8 in comparison with other measured pH values (5,8 and 7,4). The presence of mucus simulated and fetal calf serum did not result in permeability values significantly different from the result obtained without its addition to the experiment. The expression of P-gp in Caco-2 cells is induced by the addition of rifampicin (10 µg/ml), decreasing its permeability by efflux mechanism. Taking into account the results of permeability obtained in all conditions, the rifampicin can be considered a high permeability drug according to the biopharmaceutical classification system.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-05-10T11:56:06Z No. of bitstreams: 1 adrianaferreirafaria.pdf: 20849316 bytes, checksum: 511836cab839ebb39105bd682c987241 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-17T15:04:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 adrianaferreirafaria.pdf: 20849316 bytes, checksum: 511836cab839ebb39105bd682c987241 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-17T15:04:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 adrianaferreirafaria.pdf: 20849316 bytes, checksum: 511836cab839ebb39105bd682c987241 (MD5) Previous issue date: 2010-08-13 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo principal da tese em questão foi o desenvolvimento, otimização e validação de metodologias analíticas para análise de formulações farmacêuticas utilizadas no tratamento da tuberculose, as quais contêm como princípio ativo etambutol (ETB), isoniazida (ISO), rifampicina (RIF) e pirazinamida (PIR), isolados ou em associação. Inicialmente, duas metodologias analíticas para análise de ETB em comprimidos foram desenvolvidas: a primeira permitiu a análise simultânea de ETB e da impureza 2-amino-1-butanol por eletroforese capilar de zona (CZE) utilizando um eletrólito de corrida contendo 60,0 mmol L-1 de tampão ácido acético/acetato de sódio e 5,0 mmol L-1 de Cu2+, polaridade normal (+25 kV) e detecção UV em 262 nm. A segunda foi realizada por espectrofotometria com diluição dos padrões e amostras em 5,0 mmol L-1 de tampão ácido acético/acetato de sódio e 0,5 mmol L-1 de Cu2+ e detecção UV em 262 nm. A formação do complexo CuETB foi necessária em ambas as metodologias desenvolvidas, uma vez que ETB apresenta baixa absortividade molar. Algumas figuras de mérito, tais como, linearidade, repetitividade, exatidão, limite de detecção e limite de quantificação foram avaliadas para as duas metodologias. Os dois métodos foram comparados e não apresentaram diferenças significativas no intervalo de 95% usando o teste t não pareado com variância agrupada. Em um segundo momento, um novo método para análise simultânea de dose fixa combinada (DFC), contendo ETB, ISO, RIF e PIR por CZE com detecção UV foi desenvolvido, otimizado e validado. A condição experimental consistiu em um eletrólito contendo 50,0 mmol L-1 de tampão ácido acético/acetato de sódio e 12,5 mmol L-1 de Cu2+ e polaridade normal (+22 kV). Essa metodologia foi aplicada com sucesso na análise de 2-DFC (ISO e PIR) em comprimidos e 4-DFC (ETB, ISO, RIF e PIR) em sache. Finalmente, uma metodologia por CZE utilizando detecção UV para a análise simultânea de ISO, suas impurezas e produtos de degradação, como o ácido isonicotínico, isonicotinato de etila, 4-cianopiridina e isonicotinamida foi otimizada. A condição experimental consistiu em um eletrólito contendo 50,0 mmol L-1 de tampão ácido acético/acetato de sódio e 12,5 mmol L-1 de Cu2+, polaridade normal (+20 kV) e detecção UV em 270 nm. É importante ressaltar que planejamentos de experimentos, tais como, planejamento fatorial completo 32 e Box-Behnken 33 foram utilizados como ferramenta auxiliar no desenvolvimento e otimização das metodologias analíticas (CZE e espectofotométrica) e na avaliação da robustez para a análise de 4-DFC. / The main focus of this thesis was the development, optimization and validation of analytical methodologies for analysis of pharmaceutical preparations used for tuberculosis treatment, which contain as active ingredients, ethambutol (ETB), isoniazid (ISO), rifampicin (RIF) and pyrazinamide (PYR) isolated or in association. Two analytical methodologies for ETB analysis in tablets were developed initially: the first one took into account the capillary zone electrophoresis (CZE) approach for simultaneous analysis of ETB and its impurity 2-amino-1-butanol using an electrolyte consisting of 60.0 mmol L-1 of acetic acid/acetate buffer, 5.0 mmol L-1 of Cu2+, under normal polarity (+25 kV) and UV detection at 262 nm. The second one was performed by spectrophotometry using 5.0 mmol L-1 of acetic acid/acetate buffer and 0.5 mmol L-1 of Cu2+ for standards and sample dilutions under UV detection at 262 nm. The CuETB complex was necessary for the two methodologies, since ETB presents low molar absorptivity. Some merit figures such as linearity, repeatability, accuracy, limit of detection and limit of quantification were evaluated for both methodologies. These methodologies were compared and they did not present significant differences at the 95% confidence level using the parametric independent sample t test. In a second phase a novel method for the simultaneous analysis of fixed dose combination (FDC) containing ETB, ISO, RIF and PYR by CZE under UV detection was developed, optimized and validated. The experimental condition optimized consisted of an electrolyte containing 50.0 mmol L-1 of acetic acid/acetate buffer and 12.5 mmol L-1 of Cu2+ under normal polarity (+22 kV). This methodology was successfully applied to the analysis of 2-FDC (ISO and PYR) in tablet samples and 4-FDC (ETB, ISO, RIF and PYR) in a sachet sample. Finally, a CZE methodology using UV detection for simultaneous analysis of ISO, its impurities and degradation products such as isonicotinic acid, ethyl isonicotinate, 4-cyanopyridine and isonicotinamide was ptimized. The optimized experimental condition consisted of an electrolyte containing 50.0 mmol L-1 of acetic acid/acetate buffer and 12.5 mmol L-1 of Cu2+ under normal polarity (+20 kV) and UV detection at 270 nm. It is important to stress that design of experiment such as 32 full factorial design and 33 Box-Behnken design were used as auxiliary tools in the development and optimization of the analytical methodologies (CZE and spectrophotemetric) and robustness evaluation for 4-FDC analysis.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-06-28T21:56:04Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_MonitoramentoReacoesAdversas.pdf: 742370 bytes, checksum: 6667fc62896e732678806682bf64cf14 (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-06-29T12:17:09Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_MonitoramentoReacoesAdversas.pdf: 742370 bytes, checksum: 6667fc62896e732678806682bf64cf14 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-29T12:17:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_MonitoramentoReacoesAdversas.pdf: 742370 bytes, checksum: 6667fc62896e732678806682bf64cf14 (MD5) Previous issue date: 2016-05-22 / A Tuberculose é uma doença infectocontagiosa que, apesar dos recursos terapêuticos e profiláticos eficazes, é um dos mais graves problemas de saúde pública mundial. Em 2014, foram registrados 67.966 casos novos da doença no Brasil, com maior taxa de incidência nos estados do Amazonas, Rio de Janeiro, Acre, Pernambuco, Mato Grosso e Pará. Três fatores contribuem para continuidade da tuberculose no Brasil: a pandemia de HIV, o desenvolvimento de cepas multirresistentes e a falha da vacina BCG. A falta de adesão ao tratamento é um dos principais motivos que levam a disseminação da resistência. Com o intuito de reduzir este problema e minimizar as reações adversas, a OMS, em 2006, recomendou um novo esquema terapêutico: 2RHZE (Fase intensiva) e 4RH (Fase de manutenção), o qual foi adotado pelo Brasil em 2010. Porém, a ocorrência de reações adversas que requeiram a interrupção do tratamento não foi estimada com o novo esquema terapêutico, o que justifica a realização deste estudo que objetivou analisar a ocorrência de reações adversas em sujeitos com tuberculose em uso do novo esquema terapêutico de tratamento (Izoniazida, Rifampicina, Etambutol, Pirazinamida). Um estudo longitudinal prospectivo envolvendo 57 sujeitos com diagnóstico clínico, laboratorial e radiológico de tuberculose. As provas de função renal (ureia e creatinina) e hepática (AST, ALT, fosfatase alcalina, bilirrubinas e gama GT) foram realizadas a cada mês do tratamento. No estudo, a doença acometeu mais indivíduos do sexo masculino, com baixa escolaridade, que faziam uso de tabaco e álcool e independente da faixa etária. Houve elevação dos valores de uréia nos dois últimos meses de tratamento, porém a creatinina mostrou-se normal durante o tratamento. Em relação à avaliação da função hepática, foram observadas flutuações nos parâmetros bioquímicos analisados, contudo se mantiveram no intervalo de normalidade. Destaca-se que um sujeito desenvolveu quadro de doença colestática, a qual regrediu com a interrupção do tratamento. O diagnóstico precoce, somado ao tratamento imediato, possibilita ao paciente um resultado eficaz no combate à tuberculose, uma vez que mantém os parâmetros bioquímicos sem grandes alterações, permitindo uma melhor adesão e melhora do quadro clínico do paciente. / Tuberculosis is an infectious disease that despite the effective prophylactic and therapeutic resources is one of the most serious problems of global public health. In 2014, there were 67,966 new cases of the disease in Brazil, with the highest incidence rate in the states of Amazonas, Rio de Janeiro, Acre, Pernambuco, Mato Grosso and Pará. Three factors contribute to continuity of tuberculosis in Brazil: the HIV pandemic the development of multiresistant strains and failure of BCG. The lack of adherence to treatment is one of the main reasons the spread of resistance. In order to reduce this problem and minimize adverse reactions, WHO in 2006 recommended a new regimen: 2RHZE (intensive phase) and 4R (maintenance phase), which was adopted by Brazil in 2010. However, adverse reactions requiring discontinuation of treatment has not been estimated with the new regimen, which justifies this study aimed to analyze the occurrence of adverse events in subjects with tuberculosis in the use of new treatment regimen (Isoniazid, Rifampin, Ethambutol, Pyrazinamide). A prospective longitudinal study of 57 subjects with clinical diagnosis, laboratory and radiological tuberculosis. The renal function tests (urea and creatinine) and liver (AST, ALT, alkaline phosphatase, bilirubin and gamma GT) were performed every month of treatment. In the study, Disease affected more males with low education, who used tobacco and alcohol and regardless of age. There were increasing urea values in the last two months of treatment, but creatinine was normal during treatment. Regarding the assessment of liver function, fluctuations were observed in biochemical parameters analyzed, but remained in the normal range. It is noteworthy that a subject has developed framework of cholestatic liver disease, which resolved upon discontinuation of treatment. Early diagnosis, coupled with immediate treatment enables the patient an effective outcome in the fight against tuberculosis, as it keeps the biochemical parameters without major changes, allowing for a better adherence and clinical improvement of the patient.