O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos de três diluidores diferentes na criopreservação do sêmen bovino sobre a motilidade, hiperativação espermática, reação acrossomal, capacitação e peroxidação lipídica das membranas espermáticas. Foram realizadas seis colheitas de sêmen em intervalos quinzenais de dez touros zebuínos da raça Nelore. O sêmen in natura foi avaliado, dividido em três tratamentos: uma fração foi diluída em meio a base de gema de ovo (Botu-Bov® - diluidor 1), a segunda fração diluída em meio a base de lecitina de soja (Botu-Bov® - diluidor 2) e a terceira fração em meio AndroMed® (diluidor 3) também a base de lecitina de soja. Logo após as amostras foram submetidas à congelação. As avaliações do sêmen após descongelação consistiram na análise computadorizada das características de motilidade e nas análises pela citometria de fluxo quanto à reação acrossomal (PI/FITC-PSA/H33342); peroxidação lipídica (PI/C11-BODIPY581/591/H33342) e capacitação espermática através da estabilidade da membrana plasmática (Merocianina 540/Yo-Pro1/H33342). As variáveis foram submetidas à análise de variância e ao teste LSD para comparação das médias, ao nível de 5% de significância. O diluidor a base de gema de ovo preservou melhor a motilidade espermática, a população de células com integridade de membrana plasmática e acrossomo não reagido no sêmen bovino pós-descongelação que os diluidores a base de lecitina de soja. Os espermatozóides criopreservados com o diluidor a base de gema de ovo apresentou menor sub população de células hiperativas e com membrana plasmática desestabilizada quando comparados com os diluidores a base de lecitina de soja e o diluidor a base de gema de ovo possibilitou uma diminuição da peroxidação lipídica das membranas espermáticas / The objective of this experiment was evaluate the effects of three diferent extenders in bovine semen cryopreservation about motility, sperm hiperactivation, acrosome reaction, capacitation, and sperm membrane lipid peroxidation. It was made six collection of semen samples each 15 days of 10 Nelore bulls. Semen samples in natura was verify and divided in three treatments: The first one was extended in egg yolk base (Botu-Bov® Extender 1), second one was extended in soy lecithin base (Botu-Bov® Extender 2) and the third was extended in AndroMed® soy lecithin base too. After that, semen samples were submitted to freeze process. Semen evaluations after thawing were made with computer assisted sperm analysis (CASA) and flow citometry for acrosome reaction (PI/FITC-PSA/H33342), lipid peroxidation (PI/C11-BODIPY581/591/H33342) and sperm capacitation by plasma membrane stability (Merocianina 540/Yo-Pro1/H33342). Data obtained from experimental proceeding were submitted to variance analysis and LSD test to compare means with 5% of significance. Egg yolk base extender preserved better sperm motility, cell population with plasma membrane integrity and non-reacted acrosome in bovine semen after thawing than soy lecithin extenders. Cryopreserved sperm with egg yolk base extender displayed less subpopulation of hiperactivated cells, less destabilized plasma membrane and permitted a decrease of lipid peroxidation of membranes when it was compared with soy lecithin extender

O plasma seminal é o constituintes não celular do sêmen suíno e contém uma série de componentes orgânicos e inorgânico que desempenham ações variadas tanto no trato reprodutivo masculino como no feminino. No entanto, este fluido de constituição complexa, exerce ações ambiguas sobre os espermatozoides suínos, pois pode atuar ao mesmo tempo de forma benéfica ou deletéria sobre a viabilidade destas células. Nesse sentido, alguns estudos sugerem que este não é o melhor meio para a conservação de espermatozoides. Desta forma o objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos do plasma seminal sobre a integridade das membranas plasmática e acrossomal e o potencial de membrana mitocondrial do espermatozoide suíno armazenado sob refrigeração a 17°C por 72 horas. Para tanto, foram obtidos 4 ejaculados de 6 cachaços. Em seguida o sêmen in natura foi avaliado quanto às características da motilidade pelo sistema computadorizado de análise do sêmen, morfologia espermática por contraste de interferência diferencial e concentração espermática. Após essa primeira avaliação, os ejaculados foram acondicionados em tubos cônicos de 50 mL para serem divididos em três tratamentos, a saber: não centrifugado (NC), centrifugado e com o plasma seminal retirado pós-centrifugação (CS) e centrifugado resuspendido (CR). A força de centrifugação utilizada foi de 500xg por 10 minutos. Todos os tratamentos foram submetidos à diluição em meio BTS para que se obtenha uma concentração de 30 x 106 espermatozoides por mililitro (mL). Em seguida, as amostras permaneceram por 90 minutos em temperatura ambiente e protegidas da luz antes de serem armazenadas. As doses com os diferentes tratamentos foram acondicionadas à temperatura de 17°C e foram avaliadas nos intervalos 0 (90 min pós-diluição), 24, 48 e 72 horas para os seguintes parâmetros: características da motilidade (CASA), integridade das membranas plasmática e acrossomal, estabilidade da membrana plasmática e peroxidação das membranas espermáticas (citometria de fluxo). Os tratamentos foram submetidos à análise de variância (PROC GLM), empregando-se o programa SAS (1998). Quando o principal efeito foi significativo, as médias foram comparadas pelo teste de Tukey-kramer ao nível de 5% de significância. Os resultados do presente estudo mostram que a ausência do plasma seminal foi deletéria para algumas características de motilidade, o mesmo ocorreu para a integridade das membranas plasmática e acrossomal uma vez que houve diminuição na percentagem de celulás espermáticas com membrana plasmatica integra e acrossomo integro no tratamento sem plasma seminal. A peroxidação lipídica das membranas e a manutenção da estabilidade da membrana plasmática não foram influenciadas pelo tratamento. Assim, conclui-se que a presença do plasma seminal em doses inseminantes refrigeradas por 72 h é importante para a manutenção das características de motilidade e para a integridade das membranas plasmáticas e acrossomal / The present study aimed to evaluate the effects of seminal plasma, from the rich fraction of the ejaculate, on kinetics, plasma and acrosome membrane integrity, lipid peroxidation and capacitation of extended liquid boar semen stored under refrigeration at 17° C for 72 hours. For this purpose, four ejaculates from each of six boars were used. Shortly after collection and raw semen evaluation, ejaculates were extended in BTS medium and then assigned to one of three treatments, as follows: non-washed seminal plasma (NWSP), washed-seminal plasma (WSP) centrifuged with own seminal plasma suspended (CWSSP). All treatments were evaluated for sperm motility parameters by the sperm class analyzer (SCA). Plasma and acrosome membrane integrity, lipid peroxidation and sperm capacitation were evaluated by flow cytometry at 0, 24, 48 and 72 hours post dilution. The mean percentage of sperm motility (total and progressive) were lower (p<0.05) in the WSP treatment. There was an increase (p<0.05) in the percentage of sperm with damaged acrosome and damage plasma membrane in the WSP treatment. Membrane lipid peroxidation did not differ (p>0.05) irrespective of treatment nor did sperm capacitation, which was similar (p>0.05) among treatments. Our results show that seminal plasma from the sperm rich fraction is important to maintain adequate structural and functional characteristics of extended liquid boar and should be present in seminal doses throughout the period of store

Sabe-se que a criopreservação do sêmen provoca uma perda significativa na qualidade espermática. Apesar de diversos estudos visando à melhora na qualidade do sêmen pós-descongelamento, é de consenso geral que a gema de ovo apresenta uma significante capacidade em evitar as crio-injúrias. No entanto, a grande variação na sua composição, assim como o risco potencial para a contaminação do diluidor, caso certos contaminantes estejam no produto in natura, são empecilhos para sua utilização para a exportação do sêmen, assim como sua utilização em humanos. Deste modo, estudos visando substituir a gema de ovo por produtos quimicamente definidos e de origem não-animal, são de extrema importância. Neste contexto, a lecitina da soja, por possuir uma fração de lipoproteína de baixa densidade semelhante à encontrada na gema de ovo, pode ser uma alternativa interessante. O presente estudo visa comparar diluidores a base de lecitina de soja e aqueles contendo gema de ovo utilizados rotineiramente para a refrigeração e criopreservação do sêmen canino. Para isto, foi utilizado o sêmen de 12 cães adultos, que foi refrigerado e criopreservado em diluidores a base de gema de ovo (OVO) e a base de lecitina de soja (LEC) em diferentes concentrações (0,01; 0,05 e 0,1%) e apresentações (FP40, 8160 e Solec F). O sêmen foi avaliado após refrigeração (2, 24, 48, 72, 96 e 120 horas; Experimento 1) e após criopreservação (pós refrigeração, pós glicerolização e pós descongelação; Experimento 2) através da análise convencional do sêmen (i.e., motilidade - CASA) e funcionais (i.e., integridade de membrana - eosina/nigrosina; integridade de acrossomo - Fast Green / Rosa Bengala; atividade mitocondrial - 3´3 Diaminobenzidina; fragmentação do DNA - SCSA; susceptibilidade ao estresse oxidativo - substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico). Os resultados do Experimento 1 indicaram que, semelhante ao ovo, todas as lecitinas na concentração 0,01% foram capazes de manter a motilidade em torno de 50% por até 72 horas. Após 96 horas, o diluidor Solec F apresentou melhor resultado em relação ao ovo na atividade mitocondrial, e após 120 horas a concentração 0,01%, apresentou maior motilidade do que o ovo (30,00 ± 10,69; 8,33 ± 1,84, respectivamente). No sêmen criopreservado (Experimento 2), as menores concentrações de lecitina apresentaram resultados semelhantes ao ovo tanto na motilidade quanto na atividade mitocondrial. Os resultados indicam que a lecitina pode ser uma boa alternativa à gema de ovo para a refrigeração e criopreservação do sêmen canino. / Semen cryopreservation, an essential step on biotechnologies applied to reproduction, is known to induce significant loss on sperm quality. Despite several studies aiming to improve post-thaw quality, it is generally agreed that egg yolk is the most effective in protecting sperm against cryo-injuries. However, the considerable variation on egg yolk composition as well as the potential risk of disseminating diseases when used in natura, are obstacles to semen exportation as well as the use in human. Therefore, studies aiming to substitute the egg yolk for chemically defined components or animal free products are extremely important. In this context, soy lecithin, which contains a fraction of low density lipoprotein, appears to be an interesting alternative. Thus, the present study aims to compare semen extenders containing soy lecithin or egg yolk on dog semen cryopreservation and refrigeration. Towards this aim, semen of 12 adult dogs were be refrigerated and cryopreserved in Tris-Fructose-Citric acid extenders with egg yolk (OVO) or soy lecithin (LEC; in different concentrations - 0,01; 0,05; 0,1% and presentations - FP40; 8160; Solec F). Semen was evaluated after chilling (2, 24, 48, 72, 96 and 120 hours; Experiment 1) and after cryopreservation (post refrigeration, post-glycerolization, and post-thaw; Experiment 2) for routine semen analysis (e.g., motility, CASA) and functional tests (e.g., membrane integrity - eosin/nigrosin; acrosome integrity - fast green/Bengal rose; mitochondrial activity - 3´3 diaminobenzidine; DNA fragmentation - SCSA; susceptibility to oxidative stress - thiobarbituric acid reactive substances). Results were statistically analyzed using the SAS System for Windows. Results of experiment 1 indicate that, similar to the egg yolk, all types of lecithin used in the 0.01% concentration, were able to maintain sperm motility around 50% for 72 h. After 96 h, the extender containing the lecithin Solec F showed better results regarding mitochondrial activity when compared to the egg yolk. Furthermore, after 120 h, the same extender with the 0.01% concentration, showed higher motility when compared to the egg yolk (30.00 ± 10.69 and 8.33 ± 1.84%, respectively). On the other hand, for the cryopreserved samples (Experiment 2), lower concentrations of lecithin showed similar results for mitochondrial activity and motility when compared to the egg yolk. Results found in the present study indicate that soy lecithin may be a good alternative to substitute the egg yolk for both refrigeration and cryopreservation of dog semen.

O objetivo do presente estudo é descrever as características físicas, químicas, morfológicas e funcionais do sêmen do tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla) em cativeiro. Estes resultados representam um dos primeiros requisitos para o conhecimento das características seminais da espécie, visando, em médio prazo, a aplicação de técnicas de reprodução assistida e a formação de bancos de germoplasma. Treze animais foram submetidos à colheita de sêmen em zoológicos no estado de São Paulo Brasil. O método para colheita de sêmen foi a eletroejaculação, semelhante ao realizado em várias espécies silvestres e domésticas, resultando em onze amostras colhidas de nove indivíduos (69,23%). Os testes convencionais indicaram um volume médio de 1,30 ± 0,58 ml, a motilidade média de 33,18 ± 20,14%, o vigor médio de 2,30 ± 0,65, a concentração média de 129,41 ±114,3 x 106 / cm3, o pH médio de 7,44 ± 0,60. A avaliação morfológica apresentou média de defeitos totais de 64,53 ± 19,97%, defeitos maiores 53,77 ± 33,22% e defeitos menores 10,75 ± 6,23%. Nos testes funcionais, a avaliação da integridade da membrana acrossomal mostrou uma média de 16,3 ± 9,3% de danificadas. A avaliação da integridade da membrana plasmática mostrou uma média de 18,9 ± 12,2% de danificadas. A avaliação da atividade mitocondrial revelou as seguintes médias: Classe I = 66,4 ± 19,0%; Classe II = 18,7 ± 9,1%; Classe III = 8,0 ± 6,3%; Classe IV = 3,9 ± 3,1% e Classe V = 3,0 ± 2,9%. A avaliação da fragmentação de cromatina resultou em uma média de 13,21 ± 9,13%. Conclusão: foi demonstrada a aplicabilidade da eletroejaculação na colheita de sêmen de tamanduás-bandeira. Os testes possibilitaram uma análise detalhada das características seminais da espécie, aspectos estes ainda inéditos na literatura mundial. Houve grande variação nos resultados obtidos, refletindo diferenças das condições de manejo e de idade entre os indivíduos e, possivelmente um baixo número amostral estudado. Novos estudos devem ser realizados em animais de vida livre. / The purpose of the present study was to describe the physical, chemical, morphological, and functional features of semen collected from Giant Anteaters (Myrmecophaga tridactyla) raised in captivitya first step toward the feasibility of assisted reproduction techniques and germplasm banks for this species in the mid-term future. Electroejaculation, a method currently applied to a number of wild and domestic species, was performed in 13 animals housed in zoos located in the state of São Paulo, Brazil, yielding 11 samples from 9 animals (69.23%). The following mean values were obtained: volume, 1.30 ± 0.58 mL; motility, 33.18 ± 20.14%; vigor, 2.30 ± 0.65; concentration, 129.41 ± 114.3 x 106 cm-3; pH, 7.44 ± 0.60. Major and minor defects accounted for 53.77 ± 33.22% and 10.75 ± 6.23% of the total, respectively (mean total defect rate, 64.53 ± 19.97%). Damage was found in 16.3 ± 9.3% of acrosomal membranes and 18.9 ± 12.2% of plasma membranes. Mitochondrial activity, categorized as Classes I through V, was 66.4 ± 19.0%, 18.7 ± 9.1%, 8.0 ± 6.3%, 3.9 ± 3.1%, and 3.0 ± 2.9%, respectively. Chromatin fragmentation rate was 13.21 ± 9.13%. Conclusion: The study demonstrated the feasibility of applying electroejaculation to Giant Anteaters for semen collection, allowing for a detailed description of semen features previously unreported for this species. The large variation found in the results reflects differences in management conditions, age range, and possibly the small number of sampled animals, thus warranting further studies with free-ranging specimens.

A identificação do momento mais apropriado para realizar a inseminação artificial em tempo fixo (IATF) utilizando sêmen sexado pode aumentar a prenhez por inseminação (P/IA) e aumentar a utilização do sêmen sexado em fazendas de corte. Este trabalho teve por objetivo avaliar o melhor intervalo entre a inseminação e a ovulação na P/IA de vacas Nelore lactantes submetidas ao protocolo de IATF utilizando sêmen sexado. Um total de 339 vacas Nelore apresentando 30 a 60 dias pós-parto da fazenda experimental da APTA, em Colina-SP foram utilizadas. No início do tratamento as fêmeas receberam um dispositivo intravaginal contendo 1g de progesterona (Sincrogest®,Ourofino Saúde Animal) e a aplicação i.m de 2mg de BE (Sincrodiol®, Ourofino). Após oito dias, o dispositivo foi removido e aplicados via i.m 0,25 mg de cloprostenol sódico (Sincrocio® , Ourofino) e 300UI de eCG (Folligon® , Intervet-Schering Plough). As vacas foram homogeneamente distribuídas para receberem IATF com sêmen sexado de um único touro da raça Angus (2.1milhões de espermatozóides por dose) às 36, 48 e 60 horas após a retirada dos dispositivos. O intervalo entre as inseminações e ovulações foi determinado e as análises realizadas comparando a taxa de prenhez entre os intervalos. Exames ultrassonográficos (7.5MHz, CTS-3300V, SIUI, China) foram realizados duas vezes ao dia, a partir da retirada do implante até 96 horas após e aos 30 pós IA para realização do diagnóstico de gestação. A P/IA foi definida como o número de fêmeas prenhes divididas pelo número de fêmeas inseminadas em cada intervalo. Os dados encontrados foram analisados usando o programa estatístico SAS. A taxa de ovulação após o protocolo foi de 92.0 % (312/339), o diâmetro do folículo ovulatório de 14,7 ± 2,3 mm e o intervalo entre retirada do dispositivo e ovulação de 71.8 ± 7.7 horas [48 horas (6.73%; 21/312), 60 horas (0.64%; 2/312), 72 horas (80.77%; 252/312), 84 horas (11.22%; 35/312), e 96 horas (0.64%; 2/312)]. A P/IA aumentou conforme se atrasou o momento da inseminação: 36 horas (5,8%; 5/86)c, 48 horas (20.8%; 27/130)b e 60 horas (30.9%; 38/123)a. A P/IA foi maior quando as inseminações foram realizadas próximas ao momento da ovulação (0 a 12 horas antes da ovulação = 37,9 %; 35/95) do que as realizadas entre 12,1 a 24 horas (19,4%; 21/108; P = 0,05) ou com mais de 24 horas (5,8%; 5/87; P = 0,0001) antes da ovulação sincronizada. Vacas recentemente ovuladas tiveram P/IA semelhante às realizadas próximo ao momento da ovulação (36,4%; 8/22; P = 0,95). Concluiu-se que a P/IA utilizando sêmen sexado é aumentada quando as inseminações são realizadas próximas a ovulação sincronizada. No experimento 2, de ressincronização, foram avaliadas, as taxas de serviço, concepção e prenhez em vacas previamente sincronizadas e inseminadas em tempo fixo. Foram formados dois grupos: observação de estro e IATF, utilizando na IA sêmen sexado e convencional. Os resultados para os grupos observação de estro e IATF foram, respectivamente: taxa de serviço [(63,5% (61/96); 100% (88/88)], taxa de concepção [(41% (25/61); 11,4% (10/88)], taxa de prenhez [(26% (25/96); 11,4% (10/88)]. Os resultados para os grupos observação de estro e IATF de acordo com o tipo de sêmen utilizado foram, respectivamente: sêmen convencional taxa de concepção [(43,3% (13/30); 14,9% (7/47))]; taxa de prenhez [(27,49% (13/61); 14,9% (7/47))]; sêmen sexado taxa de concepção [(38,7% (12/31); 7,3% (3/41))]; taxa de prenhez [(24,57% (12/61); 7,3% (3/41))]. / The identification of most appropriate moment to perform the timed artificial insemination (TAI) using sex-sorted semen following synchronization protocol can be important to improve the fertility of sex-sorted semen and increase the use sexed semen technology in commercial beef farms. The aim of this study was evaluated the better interval to perform the TAI relative to synchronized ovulation in suckled cows. A total of 339 suckled multiparous Nelore cows from an experimental farm (APTA), in Colina-SP, were evaluated in this study. The protocol started between 30 and 60 days post-partum. Cows received one synchronization protocol using an intravaginal device containing 1.0g of progesterone (Sincrogest®, Ouro Fino) plus an i.m. injection of 2.0mg of EB (Sincrodiol®, Ouro Fino). Eight days later, the device was removed and 0.25mg i.m. injection of cloprostenol sodium (Sincrocio®, Ouro Fino) and 300IU of eCG (Folligon®, Intervet-Shering Plough) were administered. Cows were homogenously assigned to receive TAI using sex-sorted semen from a single sire (2.1 millions of sperm cell per straw) at 36, 48 or 60 hours after device removal. The TAI to ovulation interval of synchronized cows was determined and the analysis was performed to compare the pregnancy for TAI performed at various intervals before ovulation using 12 hours time intervals. Ovarian ultrasonographic examinations (CTS-3300V, SIUI, China) were performed twice daily from day of the device removal to 96 hours afterwards, to evaluate ovarian follicular dynamics and interval from device removal to ovulation. All females were examined for pregnancy 30 days after AI. The data were analyzed using the SAS program.Incidence of ovulation after the estrous synchronization protocol was 92.0 % (312/339). Diameter of ovulatory follicle was 14.7 ± 2.3 mm and the interval between the P4 device removal and synchronized ovulation occurrence was 71.8 ± 7.7 hours. The distribution of the synchronized ovulation relative to the device removal was: 48 hours (6.73%; 21/312), 60 hours (0.64%; 2/312), 72 hours (80.77%; 252/312), 84 hours (11.22%; 35/312), and 96 hours (0.64%; 2/312). The pregnancy per artificial insemination (P/AI) was increased (P <0.001) when the TAI was delayed 36 hours (5.8%; 5/86)c, 48 hours (20.8%; 27/130)b and 60 hours (30.9%; 38/123)a. Higher P/AI was achieved on TAI performed closer to ovulation (0 to 12 hours before ovulation = 37.9 %; 35/95) than TAI performed on 12.1 to 24 hours (19.4%; 21/108; P = 0.05) or > 24 hours (5.8%; 5/87; P = 0.0001) before the synchronized ovulation. Recently ovulated cows had P/AI similar to those performed around the time of ovulation (36,4%; 8/22). In conclusion, P/AI is increased when the TAI using sex-sorted is performed closer to synchronized ovulation in suckled Nelore cows. In experiment 2, resynchronization, were assessed the service rates, conception and pregnancy in cows previously synchronized and timed AI. Two groups were formed: estrous detection and TAI, using in AI, sexed and unsexed semen. The results for groups of estrus detection and TAI were, respectively, service rate [(63.5% (61/96) 100% (88/88)], conception rate [(41% (25/61), 11.4% (10/88))], pregnancy rate [(26% (25/96), 11.4% (10/88))]. The results for groups of estrus detection and TAI according the type of semen used were: conventional semen conception rate [(43.3% (13/30), 14.9% (7 / 47))] ; pregnancy rate [(27.49% (13/61), 14.9% (7 / 47))]; sexed semen conception rate [(38.7% (12/31) 7.3% (3 / 41))]; pregnancy rate [(24.57% (12/ 61), 7.3% (3 / 41))].

O selênio exerce função marcante na qualidade do sêmen, atuando no desenvolvimento da peça intermediária, no desenvolvimento das células de Sertoli, e, como componente das selenoproteínas, principalmente a glutationa peroxidase. O selênio é utilizado comumente nas dietas animais como selenito de sódio (inorgânica) e as fontes orgânicas têm revelado diferenciada biodiponibilidade, sendo importantes para aumentar o aproveitamento pelos animais e reduzir o impacto ambiental. Assim, o experimento averiguou os efeitos do selênio orgânico nas características seminais no sêmen in natura e refrigerado a 18&ordm;C por três dias. Foram utilizados 12 cachaços divididos em três tratamentos: CONTROLE dieta formulada utilizando fonte inorgânica (0,30 ppm de selenito de sódio, n=4), INORGÂNICO dieta formulada utilizando fonte inorgânica (0,50 ppm de selenito de sódio, n=4) e ORGÂNICO - dieta formulada utilizando fonte orgânica (0,50 ppm de selênio- Sel-PlexTM, Alltech, Inc., n=4). As análises do sêmen consistiram da avaliação computadorizada da motilidade (CASA), e análises por citometria de fluxo da integridade das membranas plasmática e acrossomal, potencial de membrana mitocondrial, peroxidação lipídica, atividade da fosfolipídio hidroperóxido glutationa peroxidase. Associado a estas análises avaliou-se a concentração de selênio no plasma sangüíneo e seminal. Os dados foram submetidos à análise de variância, empregando-se o programa SAS (1999). As hipóteses testadas foram consideradas significativas quando p&lt;0,05. Na análise do sêmen in natura constatou-se que a concentração espermática, o número total de células e o número de doses foram influenciados positivamente pelo tratamento orgânico, assim como os percentuais de células normais. Os percentuais de defeitos de cabeça, peça intermediária e gota proximal foram menores nos animais suplementados com selênio levedura, contudo os defeitos de cauda do espermatozóide foram mais elevados. O defeito de colo do espermatozóide também foi reduzido pela suplementação de selênio. Porém, as integridades de membranas acrossomal e plasmática, potencial mitocondrial e peroxidação das membranas espermáticas, bem como as características de motilidade não melhoraram com a utilização de selênio levedura. A concentração de selênio no plasma sangüíneo e seminal foram maiores no grupo orgânico em comparação aos demais, assim como a atividade da enzima PHGPx. Em relação ao sêmen refrigerado averiguou-se que as integridades de membranas acrossomal e plasmática, potencial de membrana mitocondrial e peroxidação de membrana não foram influenciadas pela suplementação com selênio orgânico. Em contrapartida, as características de motilidade apresentaram diferenças significativas favoráveis ao tratamento orgânico, bem como o percentual de células normais e os defeitos de cabeça e gota proximal. O grupo orgânico apresentou maior percentual de defeitos de cauda comparativamente aos demais e a suplementação de selênio, independente da fonte reduziu os percentuais de defeitos de peça intermediária. A atividade da enzima PHGPx também foi influenciada positivamente pelo tratamento orgânico. Baseado nos resultados, efeitos positivos da suplementação de selênio orgânico (0,50 ppm) na dieta foram observados em algumas características espermáticas no sêmen in natura e refrigerado de cachaços. / The selenium plays a remarkable role on semen quality by acting in the development of middle piece, in the development of Sertoli cells and also as a component of selenoproteins, primarily of glutathione peroxidase. The selenium is usually utilized on animal diets as sodium selenite (inorganic). Organic sources have revealed a differentiated bioavailability, becoming important allies to enhance its use by the animals and reducing environmental impact. Therefore, this experiment evaluated the effects of organic selenium on seminal characteristics on raw and stored semen at 18&ordm;C for three days. Twelve boars were divided into three experimental groups: CONTROL inorganic sourced diet (0.30 ppm sodium selenite, n=4), INORGANIC inorganic sourced diet (0.50 ppm sodium selenite, n=4) and ORGANIC organic sourced diet (0.50 ppm selenium- Sel-PlexTM, Alltech, Inc., n=4). Semen analysis consisted of computerized assessment of motility (CASA) and flow cytometric analysis of plasmatic and acrosomal membranes integrity, mitochondrial membrane potential, lipidic peroxidation and phospholipid hidroperoxide glutatione peroxidase activity. Moreover, the blood and seminal plasma concentrations of selenium were evaluated. Data was submitted analysis of variance (SAS, 1999). Hypothesis tested were considered significant when p<0.05. In natura semen analysis showed that spermatic concentration, total cell number, number of doses and percentage of normal cells were positively influenced by organic treatment. Percentages of head and middle piece defects and proximal cytoplasmic droplets were decreased on animals supplemented with yeast selenium; however percentages of tail defects were increased in these animals. Neck defects were reduced by selenium supplementation. Acrosomal and plasmatic membrane integrity, mitochondrial membrane potential and spermatic membrane peroxidation, as well as motility characteristics were not enhanced with the use of yeast selenium. Selenium concentration on blood and seminal plasma were higher on organic group, similarly to PHGPx activity. Stored semen analysis showed that acrosomal and plasmatic membranes integrity, mitochondrial membrane potential and membrane peroxidation were not influenced by organic selenium supplementation. Nonetheless, motility characteristics were maintained normal with significant differences on behalf of organic treatment, likewise the percentage of normal cells, head defects and proximal droplets. The organic group presented higher percentage of tail defects when compared to the others and supplementation with selenium, independently from the source, reduced the percentages of middle piece defects. PHGPx activity was also positively influenced by organic treatment. Based on results, positives effects of dietary organic selenium supplementation (0.5 ppm) were observed on some spermatic characteristics of raw and stored boar semen.

O objetivo do presente estudo foi avaliar a aptidão reprodutiva de cães da raça Golden Retriever afetados pela distrofia muscular. Realizou-se avaliações andrológicas em 11 cães com idades entre 10 meses e 4 anos. Destes, 7 eram afetados pela distrofia muscular e 4 sadios, utilizados como controle. Todos foram submetidos a exame clinico, análise seminal e ultra-sonografia dos órgãos reprodutores. Analisou-se também a morfologia dos testículos e seus respectivos funículos espermáticos dos cães que foram a óbito. Detectou-se as seguintes alterações nos cães afetados pela distrofia: atrofia muscular, andar rígido, pneumonia por aspiração, fragilidade do diafragma com projeção do estomago para a cavidade torácica, megaesôfago e cardiomiopatia dilatada. Em relação aos órgãos genitais dois dos cães apresentaram criptorquidismo bilateral. Os resultados das análises seminais mostraram que os cães afetados pela distrofia possuem maior quantidade de defeitos espermáticos maiores e totais. Nas avaliações ultra-sonográficas não foram identificadas diferenças entre os cães afetados pela distrofia quando comparados com cães sadios. As análises histopatológicas evidenciaram alterações morfológicas nos testículos e músculos cremáster de cães afetados pela doença. Os testículos apresentaram degeneração testicular e o músculo cremáster retração de fibras musculares com hialinizacao dos miócitos. Conclui-se então que a distrofia muscular em cães da raça Golden Retriever pode comprometer sua aptidão reprodutiva. / The aim of the present research was to evaluate the reproductive condition of Golden Retriever dogs affected by muscular dystrophy. Breeding soundness examination was performed in 11 male dogs aged between 10 months and 4 years. Seven of this total were affected by muscular dystrophy and 4 healthy dogs that served as control. All dogs were submitted to a through physical exam, seminal evaluation and ultrasound of the reproductive tract. Testicle and spermatic cord morphology of post-mortem dogs were also examined. The following alterations were observed for the affected dogs: muscular atrophy, stiff walk, aspiration pneumonia, diaphragmatic fragility with stomach projection to the torax, megaesophagus e dilated cardiomyopathy. In relation to the genital tract, two dogs presented with bilateral cryptorchidism. Semen evaluation revealed high percentage of major and total sperm defects in affected dogs. Ultrasonographic exams were similar among healthy and affected dogs. Histophatology of the testicle and cremaster muscle revealed morphologic alterations in affected dogs represented by degeneration and muscular retraction with miocyte hyalinization, respectively. In conclusion, affected Golden Retriever dogs have their reproductive performance compromised by the muscular dystrophy.

OBJETIVO: Comparar dois meios de congelamento para sêmen: o comercialmente disponível Meio de Congelamento TEST Yolk Buffer-Irvine Scientific - USA (TYB) e o crioprotetor sintético suplementado com fosfatidilcolina (PC) e antioxidante L-acetil-carnitina (ANTIOXPC - delineado pela Invitra Tecnologia de Reprodução Assistida - Brasil) em relação a motilidade progressiva (PR) e índice de fragmentação do DNA (IFD) em amostras de sêmen obtidas de homens com parâmetros seminais alterados. DESENHO: Ensaio clínico de nãoinferioridade. MATERIAIS E MÉTODOS: Foram incluídas amostras de sêmen com parâmetros seminais alterados (astenozoospermia) de 58 voluntários no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo. As amostras de sêmen foram submetidas à análise antes e após a criopreservação. A motilidade dos espermatozoides foi avaliada pelo espermograma e a fragmentação do DNA espermático foi analisada pela técnica transferase-mediated dUTP nick-end labelling (TUNEL). Antes da criopreservação, todas as amostras de sêmen foram divididas e randomizadas para receber os crioprotetores TYB ou ANTIOX-PC, congelados no período mínimo de 30 dias e descongelados. Uma análise exploratória dos dados foi realizada através de medidas de posição central e dispersão. O teste t pareado foi usado para comparar os grupos. Comparações entre os dois meios, ANTIOX-PC e TYB, e sêmen fresco foram realizadas através de contrastes ortogonais, utilizando o modelo de regressão linear de efeitos mistos. Este modelo foi implementado no programa SAS 9.3 considerando o PROC MIXED. RESULTADOS: A motilidade PR (P = 0,78) e o IFD (P = 0,06) não foram diferentes quando comparados os meios ANTIOX-PC (12,40 ± 11,49 e 13,33 ± 10,54) e o TYB (12,09 ± 11,11 e15,83 ± 11,04), respectivamente. Esses dados mostraram que o crioprotetor sintético delineado não foi inferior na proteção dos espermatozoides comparado com o meio TYB. Além disso, o ANTIOX-PC reteve taxas mais altas de motilidade total43,36 ± 26,77) do que o TYB (34,79 ± 22,86; P <0,0001) e reduziu significativamente as taxas de espermatozoides imóveis (56,64 ± 26,77; P <0,0001) em relação ao TYB (65.00 ± 23.00).CONCLUSÃO: O meio ANTIOX-PC não pode ser considerado menos efetivo que o TYB em relação à motilidade PR e ao IFD. Parâmetros cinéticos observados em espermatozoides pósdescongelamento do diluente ANTIOX-PC demonstraram o impacto positivo do tratamento com fosfolipídios/antioxidantes na criotolerância espermática humana na ausência de aditivos animais. / OBJECTIVE: To compare two sperm freezing media: commercially available Freezing Medium TEST Yolk Buffer-Irvine Scientific - USA (TYB) and a synthetic cryoprotectant supplemented with phosphatidylcholine (PC) and antioxidante L-acetyl-carnitine (ANTIOXPC - designed by Invitra Assisted Reproduction Technology - Brazil) in relation to progressive motility and sperm DNA fragmentation index (DFI) in sêmen samples obtained from men with altered seminal parameters. DESIGN: Non-inferiority clinical trial. MATERIALS AND METHODS: Were included semen samples with altered seminal parameters (asthenospermia) from 58 volunteers at the Clinical Hospital of Ribeirao Preto Medical School, University of São Paulo. Semen samples were subjected to analysis both before and after cryopreservation. The sperm motility was evaluated by the spermogram and the sperm DNA fragmentation was analyzed by the transferase-mediated dUTP nick-end labeling technique (TUNEL). Before cryopreservation, all semen samples were divided and randomized to receive the cryoprotectants TYB or ANTIOX-PC, frozen and thawed after 30 days. An exploratory data analysis was carried out through measures of central position and dispersion. The paired t-test was used to compare the groups. Comparisons between the two media ANTIOX-PC and TYB, and fresh semen were performed through orthogonal contrasts using the mixed effects linear regression model. This model was implemented in the SAS 9.3 program considering PROC MIXED. RESULTS: Progressive motility (P = 0.78) and DFI (P = 0.06) were not different when comparing ANTIOX-PC (12.40 ± 11.49; and 13,33 ± 10.54) and TYB (12.09 ± 11.11 and 15.83 ± 11.04), respectively. These data showed that the synthetic cryoprotectant designed was not inferior in sperm protection compared to the TYB medium. In addition, ANTIOX-PC retained higher rates of overall motility (43.36 ± 26.77)than TYB (34.79 ± 22.86; P<0,0001) and significantly reduced the immotile sperm rates (56.64 ± 26.77; P<0,0001) when compared with TYB (65.00 ± 23.00). CONCLUSION: ANTIOX-PC medium can not be considered less effective than TYB relative to progressive motility and IFD. Kinetic parameters observed in post-thaw sperm from ANTIOX-PC extender demonstrated the positive impact of the phospholipid/antioxidant treatment on human sperm cryotolerance in the absence of animal aditives.

Orientador: Luís Guilherme de Oliveira / Banca: Rejane Schaefer / Banca: Samir Issa Samara / Banca: Danielle Gava / Banca: Hélio José Montassier / Resumo: O gênero Pestivirus é composto por agentes geneticamente distintos, responsáveis por infecções em suínos, bovinos, ovinos, caprinos e outros animais domésticos e silvestres. O atypical porcine pestivirus (APPV), é um pestivirus geneticamente atípico recentemente identificado e associado a casos de tremor congênito (CT) em leitões recém-nascidos em quatro continentes, sugerindo uma distribuição mundial do APPV. Assim, os objetivos deste estudo foram: 1) detectar a presença do APPV em sêmen, líquidos prepuciais e swabs prepuciais de cachaços adultos por reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa quantitativa (qRT-PCR), 2) caracterizar geneticamente um subgrupo de amostras positivas de sêmen para melhor entender a ecologia do APPV em cachaços comerciais e o risco potencial de transmissão do APPV via sêmen, 3) investigar a presença do APPV em leitões com CT no Brasil e (4) caracterizar geneticamente um subconjunto de amostras do APPV oriundas de leitões. Um total de 597 amostras de sêmen, fluido prepucial e swabs prepuciais cada amostra representando um cachaço diferente foram obtidas de quatro granjas comerciais (sêmen) localizadas em três estados diferentes nos Estados Unidos e 13 leitões com CT de quatro granjas em dois estados do Brasil foram amostrados. RNA viral foi detectado por qRT-PCR em 15,08% das amostras (90/597), sendo o maior percentual 23,81% de positivo em swabs prepuciais (5/21) seguido de 22,81% no fluído prepucial (26/114) e de 12,91% no sêmen (59... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The genus Pestivirus is composed of genetically distinct viruses, responsible for infections in swine, cattle, sheep, goats and other domestic and wild animals. The atypical porcine pestivirus (APPV) is a genetically atypical pestivirus recently identified and associated with cases of congenital tremor (CT) in newborn piglets from four continents, suggesting a worldwide distribution of the APPV. Accordingly, the objectives of this study were to 1) detect the presence of APPV in semen, preputial fluids and preputial swabs from adult boars by quantitative reverse transcription PCR (qRT-PCR), 2) genetically characterize a subset of positive semen samples to better understand the ecology of APPV in commercial boar studs and the potential risk of transmission of APPV via semen, 3) investigate the presence of APPV in piglets with CT in Brazil and (4) genetically characterize a subset of APPV samples from CT-piglets. A total of 597 samples of semen, preputial fluid and preputial swabs each samples representing a different boar were obtained from four commercial boar studs located in three different states in the United States and 13 CT-piglets from four farms in two different states in Brazil were sampled. Viral RNA was detected by qRT-PCR in 90 samples (15.08%; 90/597), with the greatest per cent positive from preputial swabs (23.81%; 5/21) followed by preputial fluid (22.81%; 26/114) and semen (12.91%; 59/457). Based on phylogenetic analysis of the APPV Npro gene, different viral strains can be on the same farm at the same and different times. Viral RNA was detected by qRT-PCR in the cerebellum or cerebellum and spinal cord in the 100% of the piglets with CT, and APPV was not detected in any tissue sample from clinically non-affected piglets. A subset of positive samples was selected for sequencing of part of the NS3 gene. Phylogenetic analysis rev... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A criopreservação de sêmen é de fundamental importância para a expansão das técnicas reprodutivas como a inseminação artificial, a transferência de embriões e a fecundação in vitro, entretanto é responsável pelo estresse oxidativo da célula espermática. Para incrementar a sobrevivência celular após a congelação, a membrana plasmática deve ter adequada fluidez que é garantida pelos ácidos graxos poliinsaturados e suporte de defesa antioxidante para proteger contra a peroxidação lipídica. No intuito de tornar os espermatozoides mais resistentes à criopreservação, 48 touros da raça Nelore foram confinados (três animais por baia) e designados a quatro tratamentos de acordo com a adição de gordura protegida da degradação ruminal e/ou antioxidantes à dieta. Aos primeiros 30 dias, todos os touros receberam a mesma dieta de adaptação (bagaço de cana, polpa cítrica, farelo de glúten de milho, ureia e sal mineral). Posteriormente, durante 75 dias, a mesma dieta foi oferecida, diferindo na adição de: G) Gordura protegida da degradação ruminal (rica em ácido linoleico, Megalac-E®, 1,5% na MS; n = 12); A) antioxidante (fonte de vitamina C e selênio, EconomasE®, 3g/cabeça/dia; n = 12; GA), Megalac-E® e EconomasE® (n = 12) ou C) controle (n = 12). Colheitas e congelação de sêmen foram realizadas ao 0, 15, 30, 45, 55, 65 e 75 dias. Os dados foram analisados como medidas repetidas pelo Glimmix do SAS. O peso corporal e o perímetro escrotal não diferiram entre os tratamentos (P = 0,37). A atividade da glutationa peroxidase no plasma sanguíneo e seminal foi maior para as dietas contendo antioxidantes, especialmente aos 75 dias. O volume, turbilhonamento, vigor, porcentagem de cabeças aglutinadas do sêmen fresco, foram similares entre os grupos. Entretanto, dietas contendo gordura reduziram o número total de espermatozoides (P = 0,07) e a porcentagem de espermatozoides normais (P = 0,09). A peroxidação lipídica e a cinética espermática do sêmen descongelado foram similares entre as dietas experimentais. Por outro lado, dietas não contendo gordura aumentaram a porcentagem de espermatozoides com membrana plasmática (MP) íntegra e membrana acrossomal (MA) não reagida (62,2 ± 2,87 vs 53,3 ± 2,87%; P < 0,05). Além disso, dietas sem antioxidantes provocaram aumento no número de células espermáticas com MP lesada e MA reagida. Aos 65 dias de suplementação, espermatozoides de touros alimentados com dietas com gordura apresentaram maior estabilidade da MP, em relação aos outros tratamentos (60,4 ± 2,62 vs 52,7 ± 2,62%; P = 0,05), porém, aumentou o número de espermatozoides mortos (P = 0,10). O potencial mitocondrial espermático não foi afetado pelos tratamentos. Conclui-se que, apesar da viabilidade espermática pré-congelação não ter sido afetada pelas dietas experimentais, efeito benéfico aos espermatozoides após criopreservação foi encontrado quando suplementou-se touros com dietas contendo antioxidantes, em relação a dietas contendo gordura. / Cryopreservation of semen is of fundamental importance to the expansion of reproductive techniques such as artificial insemination, embryo transfer and in vitro fertilization, however, it is responsible for the oxidative stress of the sperm cell. To enhance cell survival after freezing, the plasma membrane has to have sufficient fluidity that is guaranteed by polyunsaturated fatty acids and antioxidant defense to protect against lipid peroxidation. In order to make the sperm more resistant to cryopreservation, 48 Nelore bulls were confined (three animals per pen) and assigned to four treatments according to the addition of rumen protected fat and/or antioxidants to the diet. During 30 days, all bulls were fed the same adaptation diet (sugar cane bagasse, citrus pulp, corn gluten meal, urea and mineral salt). Thereafter, for 75 days, the same diet was offered, differing in the addition of: F) fat protected from rumen degradation (rich in linoleic acid; Megalac-E®, 1.5% DM, n = 12); A) Antioxidant (a source of vitamin C and selenium, EconomasE®, 3g/head/day, n = 12); FA) Megalac-E® and EconomasE ® (n = 12); or C) control group (n = 12). Semen collection and freezing were performed seven times: 0, 15, 30, 45, 55, 65 and 75 days of offering experimental diet period. Data were analyzed by repeated measures of GLIMMIX of SAS. Body weight and scrotal circumference did not differ between treatments (P = 0.37). The glutathione peroxidase activity in blood and seminal plasma was higher for diets containing antioxidants, especially at 75 days. The volume, mass motility, vigor, numbers of agglutinated spermatozoa in fresh semen were similar between groups. However, fat-containing diets reduced the total number of sperm (P = 0.07) and the percentage of normal spermatozoa (P = 0.09). Lipid peroxidation and the kinetics of thawed sperm were similar among diets. Moreover, diets not containing fat increased the percentage of intact sperm plasma membrane (PM) and unreacted acrosomal membrane (62.2 ± 2.87 vs 53.3 ± 2.87%, P < 0.05). In addition, diets without antioxidants caused an increase in the number of sperm cells with damaged PM and with Induction of sperm acrosome reaction. After 65 days of supplementation, sperm of bulls fed diets with fat had higher stability of the PM, compared to other treatments (60.4 ± 2.62 vs. 52.7 ± 2.62%, P = 0.05), however there was an increase the number of dead sperm (P = 0.10). The mitochondrial potential of spermatozoa was not affected by treatments. It is concluded that despite tha fact that the pre-freezing sperm viability was not affected by the experimental diets, beneficial effect to the sperm cells after cryopreservation was found when bulls were supplemented with diets containing antioxidants, compared to diets containing fat.