A perdiz (Rhynchotus rufescens) é um tinamídeo com amplos músculos peitorais muito apreciados por mercados especializados. No entanto, a produção em larga escala é inexpressiva, podendo ser melhorada através da inseminação artificial (IA). Sendo assim, o presente experimento teve como objetivos padronizar a coleta de sêmen, o teste hipo-osmótico, testar diferentes diluidores, tempos de refrigeração e doses inseminantes. Amostras seminais de 100 animais, pertencentes a FCAV/UNESP/Jaboticabal, foram empregadas na descrição do volume, pH, motilidade, vigor, concentração e alterações morfológicas. As coletas de sêmen foram realizadas em 2 ciclos. No primeiro ciclo foram realizadas a padronização da técnica de coleta de sêmen e a determinação do melhor meio hipo-osmótico, por meio de oito soluções. No segundo ciclo de coletas aplicou-se as técnicas já padronizadas; descreveu-se a motilidade e vigor espermático de amostras seminais diluídas em meios para sêmen de peru, TCM 199, TQC e solução fisiológica, refrigeradas por até 48h; além de terem sido realizadas IA em 128 fêmeas utilizando sêmen de 32 machos, os animais foram agrupados em quintetos (1 macho:4 fêmeas) no início do ciclo reprodutivo de 2004-2005. Metade dos quintetos foi mantida no sistema de monta natural e empregada como grupo controle (GC). A outra metade foi mantida em quintetos por apenas 2 meses. Em seguida, retirou-se os machos dos boxes das fêmeas, para formar os grupos inseminados (GI), cada um com uma dose inseminante de 10, 20, 30 ou 40x106sptz. No primeiro ciclo padronizou-se o método de coleta, no segundo empregou-se a técnica padronizada e os valores encontrados para a média e erro padrão da média de 231 amostras para volume, aspecto, motilidade, vigor, pH e concentração espermática foram: 23,59±1,30µ l; 1,81±0,03; 73,06±1,41%; 3,06±0,08; 8±0; 5,25±0,74x109sptz/ml; respectivamente. A motilidade correlacionou positivamente com a porcentagem média de células normais (r=0,4; p<0,0001) e negativamente com as porcentagens de defeitos totais e de cabeça solta (r=-0,4; p<0,0001). A porcentagem de caudas enroladas nas soluções hipo-osmóticas testadas variaram de 73,25±3,3 a 84,52±2,21%. A solução hipo-osmótica de 100mOsm demonstrou ser adequada e foi empregada em 81 amostras, resultando em 82,0±1,38% de espermatozóides com membrana íntegra, gerando uma correlação positiva (r=0,4; p<0,0002) entre esta variável e a motilidade. As amostras seminais diluídas em solução fisiológica não apresentaram motilidade e vigor após refrigeração, diferente das demais. As amostras refrigeradas por 24 e 48h em TCM 199 apresentaram melhores resultados de motilidade e vigor do que as que permaneceram no diluidor para sêmen de peru e TQC. Não foi possível observar diferenças estatísticas significantes entre os resultados da comparação dos índices reprodutivos entre GI e GC, porém os valores médios de ovos férteis obtidos no sistema de monta natural (2,22±0,29) foram menores do que os grupos inseminados com 30 (4,44±1,81) e 40x106sptz/dose inseminante (3,65±1,66). Os resultados do presente experimento permitiram concluir que é possível a coleta e avaliação de sêmen de perdizes para o posterior emprego de biotecnologias tais como a inseminação artificial, sendo que esta pode ser utilizada a curtíssimo prazo, com a finalidade de aumentar a produção e melhorar o manejo genético deste animal. / The partridge (Rhynchotus rufescens) belongs to the tinamidae family and possesses breast muscles which are quite appreciated in high cuisine However, there is an insignificant large scale production, which could be improved using the artificial insemination (AI). The present experiment aimed to standardize semen collection and the hipoosmotic swelling test and to test dilutors, refrigeration times and insemination doses in partridges. Semen samples of 100 animals, belonging to the FCAV/UNESP/Jaboticabal, were used to describe the volume, pH, motility, vigor, concentration and morphologic alterations. Semen collections were performed in 2 stages. The first stage consisted of standardizing the technique of semen collection and of verifying the most adequate hipoosmotic medium (8 different osmolarities). In the second stage, the standardized techniques were applied; motility and vigor were evaluated in samples diluted in turkey semen extender, TCM 199, TQC and physiologic saline solution, refrigerated until 48 hours. Still in the second stage, 128 females and 32 males were allocated in groups of 5 (1 male:4 females) in the beginning of 2004-2005 reproductive season. Half of the quintets were bred using natural service (control group - CG); the other half was kept as quintets for 2 months, after which males were removed and allocated in quartets with no physical contact with the females. The females of this group were then inseminated (inseminated group ? IG) with 10, 20, 30 e 40x106sptz/ insemination dose. In the first experimental stage, 231 samples were evaluated for volume, aspect, motility, vigor, pH e sperm concentration with values averaging 23.59±1.30µl, 1.81±0.03, 73.06±1.41%, 3.06±0.08; 8±0; 5.25±0.74x109sptz/ml, respectively. Motility was positively correlated with percentage of normal cells (r=0.4; p<0.0001) and negatively correlated with the percentages of total sperm defects (r=-0.4; p<0.0001) and detached head (r=-0.4; p<0.0001). Percentage of swollen tails in the hipoosmotic solutions ranged from 73.25±3.3 a 84.52±2.21%. The solution of 100mOsm was the most adequate, being used in 81 samples, which averaged 82.0±1.38% of sperm cells with intact membrane. A positive correlation (r=0.4; p<0.0002) was found between the percentage of cells with intact membrane and motility. Neither motility or vigor were observed in samples diluted in physiologic saline solution, different for the other tested solutions. After both 24 and 48 hours of refrigeration, TCM 199 showed the highest results of motility and vigor when compared to the turkey extender and the TQC. No differences on the general reproductive indexes were found between animals from IG or CG. However, mean values of fertile eggs from CG (2.22±0.29) were lower (p<0.05) than groups inseminated with 30 (4.44±1.81) and 40x106sptz/insemination dose (3.65±1.66). Results allowed to infer that the techniques of semen collection and evaluation in partridges standardized in the present experiment may be used in a short term period for reproductive technologies such as artificial insemination, which could increase the production and improve the genetic management of these animals.

Sabe-se que a principal causa da diminuição do desempenho reprodutivo de um touro é o estresse térmico levando conseqüentemente à degeneração testicular. Esta alteração patológica poderá ocorrer mesmo nos animais zebuínos. O objetivo deste experimento foi verificar os efeitos da disponibilidade de sombras na pastagem sobre as características reprodutivas de touros da raça Nelore. Foram utilizados 10 touros com idades de 26 ± 2 meses. Previamente ao início do experimento, os animais foram mantidos durante 30 dias em regime de colheita de sêmen a cada 15 dias para avaliação das características físicas e morfológicas. Então, logo após, os animais foram classificados segundo um índice que representou a soma dos valores das características espermáticas e distribuídos uniformemente em dois grupos ou tratamentos experimentais: Com Sombra (CS) e Sem Sombra (SS). No grupo CS, cinco (5) animais foram colocados em um piquete (2 hectares) com área de sombra, consistente em Sombrites de polietileno com 90% de retenção da luz solar, com 10 m2 de sombra por animal. No grupo SS, os outros cinco (5) animais permaneceram em outro piquete (2 hectares) porém, não tiveram acesso à área de sombra. Foram realizadas colheitas de sêmen de cada animal a cada 15 dias, durante quatro (4) meses, bem como, mensurações do perímetro escrotal e da consistência testicular. Logo após a colheita, o sêmen foi avaliado quanto ao volume, concentração, parâmetros de motilidade espermática por sistema computadorizado (CASA Computer Assisted Semen Analysis), alterações morfológicas por contraste de interferência diferencial (DIC), integridade das membranas plasmáticas, acrossomal e função mitocondrial por microscopia de epifluorescência. Os dados obtidos dos procedimentos experimentais foram analisados utilizando o programa estatístico Statistical Analysis System (SAS Institute Inc., 2004). Não foram observadas diferenças estatísticas significativas (P>0.05) em nenhuma das características reprodutivas estudadas quando touros da raça Nelore foram submetidos aos ambientes com ou sem sombra. / It is known that heat stress is the main cause that affects bulls reproductive performance, consequently leaded to testicular degeneration. This pathologic alteration can also occur in Bos Indicus cattle. The objective of this experiment was verify the shadow availability effect at pasture on reproductive characteristics in Nelore, a Bos Indicus bull. For this work, 10 bulls with ages of 20 ± 10 months were used. A month before the experiment started, semen samples were collected each 15 days for physical and morphological sperm evaluation. After this, animals were classified with a score according to the sperm characteristics values sum and then distributed in two groups: with Overshadow (CS) and without Overshadow (SS). In the group CS, 5 animals were kept in a picket (2 ha), with a 10 m2 shaded area per animal, consisted in a polyethylene filter with 90% solar light retention. In the group SS, the others 5 animals were placed in another picket (2 ha) with no access to shaded area. Semen collection, scrotal perimeter and testicular consistence measures ocurred every 15 days, for a 4 months period After collection, semen samples were submitted to following analysis: volume, sperm concentration, sperm motility by computer system (CASA - Computer Assisted Semen Analysis), morphological defects using differential interference contrast (DIC), plasmatic acrossomal membrane integrity and mitochondrial function by epifluorescence microscopy. Data obtained from experimental proceedings were analyzed by Statistical Analysis System program (SAS Institute Inc., 2004). It wasn´t find any statistical differences (P>0,05) in reproductive characteristics, when Nelore bulls were kept under envirormental conditions with or without overshadow.

A inseminação artificial em caninos representa uma atividade importante no manejo reprodutivo desta espécie. O uso de sêmen resfriado, preservado por um determinado espaço de tempo, com a conservação da viabilidade espermática torna-se indispensável. Para a preservação a 4ºC torna-se necessário o conhecimento de curvas de resfriamento mais adequadas para um determinado diluente a ser utilizado. No presente experimento foram utilizados 11 cães adultos, dos quais foram colhidos 5 ejaculados de cada e que após exame imediato avaliando aspecto, volume, motilidade, vigor, concentração, HOST (teste hiposmótico), IME (integridade de membrana) e formas patológicas, foram submetidos a diluição com tris-gema. Após a diluição os ejaculados foram novamente avaliados quanto à motilidade, vigor, HOST e IME. Foram iniciados dois procedimentos de refrigeração dos ejaculados fracionados, um a uma velocidade de -0,1ºC/minuto e outro a -0,3ºC/minuto. Vinte quatro e quarenta e oito horas após foram avaliados motilidade e vigor nas duas amostras. Os exames de HOST e IME foram realizados após quarenta e oito horas de resfriamento. Diferenças quanto à qualidade do sêmen dos diferentes cães foram encontradas. Quanto as diferentes velocidade de resfriamento não foram observadas diferenças. Foram constatadas diferenças na qualidade do sêmen recém diluído e após o resfriamento, porém a qualidade do sêmen se manteve inalterada entre vinte e quatro e quarenta e oito horas após o resfriamento. / The artificial insemination in canines represents an important activity in reproductive management of this species. The use of chilled semen, preserved for a determined amount of time, with conserved spermatic viability has become a necessity. For the preservation at 4o C it has become necessary to know the most adequate chilling curve for the chosen extender. In this experiment, 11 adult dogs were used, who each contributed 5 ejaculates which were immediately examined for volume, motility, vigor, concentration, HOST (hyposmotic test), IME (membrane integrity) and pathological forms, and then diluted with tris-egg yolk. The ejaculates were mixed with extender then evaluated for motility, vigor, HOST and IME. Two cooling procedures were started on the fractionate ejaculates, one at a velocity of -0.1oC per minute and the other at -0.3oC per minute. Twenty-four and fortyeight hours later the two samples were evaluated for motility and vigor. The HOST and IME exams were performed forty-eight hours after chilling. Differences in semen quality were found between the different dogs. There were no differences with the two cooling rates. Differences were found in semen quality right after dilution and after the colling process; however semen quality shows no difference between twenty-four and forty-eight hours after chilling.

Em todas as espécies de mamíferos estudadas, o gene PLCζ é responsável pelo aumento de cálcio no momento da fecundação do oócito. Recentemente, o gene WBP2NL, também esta sendo estudado por sua possível capacidade de iniciar a ativação de oócitos. O gene TNF-α é uma citocina pró-inflamatória que pode ser encontrada no plasma seminal, mas seu efeito na viabilidade espermática ainda não está claro. O objetivo desse trabalho foi investigar a expressão dos genes PLCζ, WPB2NL e TNF-α no espermatozoide e suas relações com a qualidade e fertilidade em equinos. Foram utilizados ejaculados de 40 garanhões da raça Crioula, de criatórios localizados próximos a Porto Alegre. A concentração espermática foi avaliada em câmara de Neubauer. As demais análises microscópicas foram realizadas através do Computer Assisted Sperm Analysis AndroVision. A análise da integridade física da membrana foi realizada utilizando-se sondas fluorescentes A integridade funcional da membrana plasmática foi avaliada por meio do teste hiposmótico. Para análise estatística foi utilizada correlação de Pearson, com nível de significância de P<0,05. Foi encontrada correlação positiva do gene PCLζ com integridade funcional da membrana plasmática (0,449), integridade física da membrana plasmática (0,438), taxa de prenhez (0,454), motilidade total (0,486), motilidade progressiva (0,413); correlação negativa com motilidade lenta (-0,427) e espermatozoides imóveis (-0,405). Não foram encontradas correlações dos genes WBP2NL e TNF-α. Concluí-se que a expressão do gene PCLζ no Espermatozoide equino pode ser utilizada com um marcador para a qualidade seminal e fertilidade do garanhão. / In all species of mammals studied, the PLCζ gene is a factor of calcium increase at the time of oocyte fertilization. Recently, the WBP2NL gene is also being studied for its potential ability to initiate oocyte activation during fertilization. The TNF-α is a pro-inflammatory cytokine found in seminal plasma but it effect on motility and viability sperm still unclear. The aim of this study was to verify the expression of PLCζ, WPB2NL and TNF-α genes in spermatozoa and their relationship with quality and fertility in horses. We used the ejaculates of 40 Crioulo stallions, were used from horse farms located near Porto Alegre. After semen collection, the ejaculate was diluted in a commercially available extender. Microscopic analysis of total and progressive motility was performed using a computer assisted sperm analysis system AndroVision. Membrane physical integrity was assessed by fluorescent probes and membrane functionality was analyzed by the hypo-osmotic test (HOST) Statistical analysis was performed using the Pearson correlation, with a significance level of P<0.05. A moderate positive correlation of the PCLζ gene was found with functional plasma membrane function (0.449), physical organization of the plasma membrane (0.438), conception rate (0.454), total motility (0.486), progressive motility (0.413) and negative correlation with slow motility (-0.427) and spermatozoa properties (-0.405). No correlation on WBP2NL and TNF-α genes were found, showing that those genes expression should not be used as a marker of seminal quality and fertility in stallions. It can be concluded that expression of the PCLζ gene on equine spermatozoa can be used as a marker for seminal quality and fertility in the stallion.

Orientador: Anaglória Pontes / Banca: Antonio Alberto Nogueira / Banca: Edilberto de Araújo Filho / Resumo: A infertilidade é definida pela inabilidade de engravidar após 12 meses ou mais de coito regular não protegido. O uso de polivitamínico e polimineral parece influenciar na qualidade seminal. Dados da literatura sobre o uso oral isolado ou combinado desses micronutrientes na melhoria dos parâmetros seminais e eventual fertilidade são controversos e escassos. Analisar os parâmetros seminais de indivíduos inférteis em uso de polivitamínico e polimineral e compará-los com indivíduos normais, comprovadamente férteis sem uso destas substâncias. Foram analisados os parâmetros Seminais de 57 casais inférteis acompanhados no ambulatório de esterilidade do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, no período de 2003 a 2007. Nos indivíduos inférteis a análise seminal foi realizada antes e com 90 dias de micronutrientes por via oral os quais foram comparados com 50 indivíduos saudáveis comprovadamente férteis sem uso destas substâncias. A avaliação do sêmen foi feita de acordo com os critérios da Organização Mundial de Saúde - OMS (1999) e morfologia de Kruger et al. (1986). A análise estatística foi feita utilizando os testes t de Student, Mann-Whitney e Wilcoxon, considerando um nível de significância de 5%. Os indivíduos inférteis e os comprovadamente férteis apresentaram similaridade quanto a idade (31,0±5,6 versus 30,3±6,5) (p=0,55) e ao tabagismo (29,8% versus 22,0) (p=0,36). Nos indivíduos inférteis, o uso desses micronutrientes aumentou significativamente a morfologia tanto pelos critérios estabelecidos pela OMS (18,3±9,6 para 22,6±11,8) (p=0,006) e por Kruger (6,9±4,1 para 9,1±5,2) (p=0,002). Verificou-se que os homens inférteis antes do uso de micronutrientes quando comparados aos férteis apresentavam significantemente uma menor concentração de espermatozóides/ml (68,0[37,8;101,2]... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Infertility is defined as the inability to become pregnant after 12 months or more of regular unprotected intercourse. The use of multivitamin/multimineral supplements seems to influence semen quality. Data on the isolated or combined use of these micronutrients to improve semen parameters and eventual fertility are controversial and scarce. To assess semen parameters in infertile individuals using multivitamin and multimineral supplements in comparison with healthy proven fertile individuals not using these substances. Semen parameters were evaluated in 57 infertile couples followed up in the Sterility Outpatient Clinic of Botucatu Medical School between 2003 and 2007. Semen analysis was performed before and after 90 days of oral micronutrient use in infertile individuals that were compared with 50 healthy proven fertile individuals not using these substances. Semen was evaluated according to the recommendations of the World Health Organization- WHO (1999) and the criteria described by Kruger et al. (1986). Statistical analysis was carried out using Student's t test and the tests of Mann-Whitney and Wilcoxon with significance set at 5%. Infertile and proven fertile individuals showed similar age (31.0±5.6 versus 30.3±6.5) (p=0.55) and smoking status (29.8% versus 22.0) (p=0.36). In infertile individuals, the use of micronutrients significantly improved morphology according to the criteria of WHO (18.3±9.6 to 22.6±11.8) (p=0.006) and Kruger (6.9±4.1 to 9.1±5.2) (p=0.002). Before micronutrient use, infertile individuals compared with fertile males showed lower spermatozoa/ml concentration (68.0[37.8;101.2] versus 96.5[49.0;144.2]) and vitality (85,4±9,2 versus 89.6±6.9) and higher leukocyte count (600.0 [300.0;121.5] versus 350.0[100.0;675.0]). In infertile individuals using multivitamin and multimineral supplements, semen parameters... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

OBJETIVO: Comparar dois meios de congelamento para sêmen: o comercialmente disponível Meio de Congelamento TEST Yolk Buffer-Irvine Scientific - USA (TYB) e o crioprotetor sintético suplementado com fosfatidilcolina (PC) e antioxidante L-acetil-carnitina (ANTIOXPC - delineado pela Invitra Tecnologia de Reprodução Assistida - Brasil) em relação a motilidade progressiva (PR) e índice de fragmentação do DNA (IFD) em amostras de sêmen obtidas de homens com parâmetros seminais alterados. DESENHO: Ensaio clínico de nãoinferioridade. MATERIAIS E MÉTODOS: Foram incluídas amostras de sêmen com parâmetros seminais alterados (astenozoospermia) de 58 voluntários no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo. As amostras de sêmen foram submetidas à análise antes e após a criopreservação. A motilidade dos espermatozoides foi avaliada pelo espermograma e a fragmentação do DNA espermático foi analisada pela técnica transferase-mediated dUTP nick-end labelling (TUNEL). Antes da criopreservação, todas as amostras de sêmen foram divididas e randomizadas para receber os crioprotetores TYB ou ANTIOX-PC, congelados no período mínimo de 30 dias e descongelados. Uma análise exploratória dos dados foi realizada através de medidas de posição central e dispersão. O teste t pareado foi usado para comparar os grupos. Comparações entre os dois meios, ANTIOX-PC e TYB, e sêmen fresco foram realizadas através de contrastes ortogonais, utilizando o modelo de regressão linear de efeitos mistos. Este modelo foi implementado no programa SAS 9.3 considerando o PROC MIXED. RESULTADOS: A motilidade PR (P = 0,78) e o IFD (P = 0,06) não foram diferentes quando comparados os meios ANTIOX-PC (12,40 ± 11,49 e 13,33 ± 10,54) e o TYB (12,09 ± 11,11 e15,83 ± 11,04), respectivamente. Esses dados mostraram que o crioprotetor sintético delineado não foi inferior na proteção dos espermatozoides comparado com o meio TYB. Além disso, o ANTIOX-PC reteve taxas mais altas de motilidade total43,36 ± 26,77) do que o TYB (34,79 ± 22,86; P <0,0001) e reduziu significativamente as taxas de espermatozoides imóveis (56,64 ± 26,77; P <0,0001) em relação ao TYB (65.00 ± 23.00).CONCLUSÃO: O meio ANTIOX-PC não pode ser considerado menos efetivo que o TYB em relação à motilidade PR e ao IFD. Parâmetros cinéticos observados em espermatozoides pósdescongelamento do diluente ANTIOX-PC demonstraram o impacto positivo do tratamento com fosfolipídios/antioxidantes na criotolerância espermática humana na ausência de aditivos animais. / OBJECTIVE: To compare two sperm freezing media: commercially available Freezing Medium TEST Yolk Buffer-Irvine Scientific - USA (TYB) and a synthetic cryoprotectant supplemented with phosphatidylcholine (PC) and antioxidante L-acetyl-carnitine (ANTIOXPC - designed by Invitra Assisted Reproduction Technology - Brazil) in relation to progressive motility and sperm DNA fragmentation index (DFI) in sêmen samples obtained from men with altered seminal parameters. DESIGN: Non-inferiority clinical trial. MATERIALS AND METHODS: Were included semen samples with altered seminal parameters (asthenospermia) from 58 volunteers at the Clinical Hospital of Ribeirao Preto Medical School, University of São Paulo. Semen samples were subjected to analysis both before and after cryopreservation. The sperm motility was evaluated by the spermogram and the sperm DNA fragmentation was analyzed by the transferase-mediated dUTP nick-end labeling technique (TUNEL). Before cryopreservation, all semen samples were divided and randomized to receive the cryoprotectants TYB or ANTIOX-PC, frozen and thawed after 30 days. An exploratory data analysis was carried out through measures of central position and dispersion. The paired t-test was used to compare the groups. Comparisons between the two media ANTIOX-PC and TYB, and fresh semen were performed through orthogonal contrasts using the mixed effects linear regression model. This model was implemented in the SAS 9.3 program considering PROC MIXED. RESULTS: Progressive motility (P = 0.78) and DFI (P = 0.06) were not different when comparing ANTIOX-PC (12.40 ± 11.49; and 13,33 ± 10.54) and TYB (12.09 ± 11.11 and 15.83 ± 11.04), respectively. These data showed that the synthetic cryoprotectant designed was not inferior in sperm protection compared to the TYB medium. In addition, ANTIOX-PC retained higher rates of overall motility (43.36 ± 26.77)than TYB (34.79 ± 22.86; P<0,0001) and significantly reduced the immotile sperm rates (56.64 ± 26.77; P<0,0001) when compared with TYB (65.00 ± 23.00). CONCLUSION: ANTIOX-PC medium can not be considered less effective than TYB relative to progressive motility and IFD. Kinetic parameters observed in post-thaw sperm from ANTIOX-PC extender demonstrated the positive impact of the phospholipid/antioxidant treatment on human sperm cryotolerance in the absence of animal aditives.

O sêmen eqüino é muito utilizado na forma refrigerada, porém, para alguns garanhões, a longevidade espermática é baixa. Durante a refrigeração o espermatozóide pode ser afetado por vários fatores, que podem causar a perda da integridade da membrana plasmática, danos no acrossomo e disfunções mitocondriais, resultando em perda irreversível de motilidade e capacidade fecundante. A composição e concentração do plasma seminal podem causar efeitos deletérios ao espermatozóide, sendo a centrifugação do sêmen uma alternativa para minimizar estes efeitos. Este experimento foi realizado para verificar o efeito da centrifugação nas características de movimento, integridade e peroxidação lipídica das membranas do espermatozóide eqüino refrigerado a 5°C por até 72h. Foram realizadas cinco colheitas de sêmen de quatro garanhões. O sêmen foi avaliado quanto ao volume e concentração, e em seguida dividido em dois tratamentos, sem centrifugação (S) e centrifugado (C) (300g/10min). Ambos foram diluídos na concentração final de 30 x106 eptz/mL em diluidor a base de leite desnatado e então refrigerados. Foram analisadas as características do movimento espermático (CASA), morfologia espermática (DIC), integridade das membranas plasmática e acrossomal (PI/FITC-PSA), potencial de membrana mitocondrial (JC-1) e peroxidação lipídica das membranas (C11-BODIPY581/591), sendo estas três últimas análises por citometria de fluxo. As análises foram realizadas no tempo 0 e 24, 48 e 72 horas após a refrigeração. O delineamento experimental foi em blocos generalizados adicionado do fator medidas repetidas no tempo. Os dados foram analisados pelo programa SAS, submetidos à análise de variância e às interações determinadas pelo teste de Greenhouse-Geisser ao nível de 5% de significância. O espermatozóide do sêmen centrifugado apresentou valores médios maiores de motilidade total e progressiva, ALH, STR e LIN (P<0,05), porém os valores das velocidades e BCF foram menores (P<0,05). Houve efeito do tempo nas características de movimento espermático (P<0,05), exceto para STR. Não houve efeito da centrifugação e nem do tempo quanto às características morfológicas dos espermatozóides refrigerados, esta só diferiu entre os garanhões (P<0,05). Por sua vez, a integridade das membranas plasmática e acrossomal e o potencial de membrana mitocondrial espermáticas foram maiores nos sêmen centrifugado (P<0,05) e suas porcentagens decresceram com o tempo (P<0,05). A peroxidação lipídica da membrana do espermatozóide refrigerado aumentou somente nas primeiras 24h (P<0,05) e não foi influenciada pela centrifugação. Conclui-se que a centrifugação e a retirada do plasma seminal melhoram a qualidade do sêmen refrigerado eqüino, principalmente em garanhões com baixa longevidade, sendo esta influenciada pelas características iniciais da morfologia espermática. Ainda, tempo de refrigeração induz a um declínio da qualidade seminal. E, por fim, a peroxidação lipídica da membrana do espermatozóide parece não ser a principal causa de alterações da integridade das membranas e do potencial de membrana mitocondrial durante a refrigeração do sêmen eqüino. / Equine cooled semen is frequently used, although the longevity for some stallions is low. During the cooling process the spermatozoon can be affected by several factors that can cause loss of plasma membrane integrity, acrosomal damage and mitochondrial dysfunctions, resulting in irreversible loss of motility and fertilizing capacity. The composition and concentration of seminal plasma could cause harmful effects to the sperm, being semen centrifugation an alternative to minimize these effects. This experiment was designed to verify the effects of the centrifugation in motion characteristics, membranes integrity and lipid peroxidation of cooled equine sperm to 5°C until 72 hours. Five ejaculates from four stallions were collected. The semen was evaluated for volume and concentration, then split in two treatments, no centrifugation (N) and with centrifugation (W) (300g/10min). Both were diluted in the final concentration 30 x106 spermatozoa/mL in a skin milk extender and then cooled. The following analyses were performed: the sperm motion characteristics (CASA), morphology (DIC), plasma and acrosomal membranes integrity (PI/FITC-PSA), mitochondrial membrane potential (JC-1) and membrane lipid peroxidation (C11-BODIPY581/591), the last three analyses were assessed in flow citometry. The analyses were performed in time 0 and 24, 48 and 72 hours after cooling. The experimental design was random blocks with repeated-measures. The data were analyzed by the SAS program, submitted to analysis of variance and the interactions by the test of Greenhouse-Geisser at the level of 5% of significance. The values were larger in W semen for total and progressive motility, ALH, STR and LIN (P<0,05), however the values of the three types of speed and BCF were smaller (P<0,05). There was effect of time in the motion characteristics of sperm (P<0,05), except for STR. There was not any effect of centrifugation and time for the morphologic characteristics of cooled spermatozoa, that only differed among stallions (P<0,05). On the other hand, the sperm integrity of plasma and acrosomal membranes and the potential of mitochondrial membrane were larger in W semen (P<0,05) and their percentages decreased within time (P<0,05). The membrane lipidic peroxidation of the cooled sperm only increased in the first 24 hours (P<0,05) and it was not influenced by centrifugation. In conclusion, the centrifugation and withdrawal of the seminal plasma improve semen quality of the cooled equine sperm, mainly in stallions with low longevity, which is influenced by the initials characteristics of sperm morphology. Moreover, time of cooling induces a decline of seminal quality. Finally, the membrane lipidic peroxidation of the cooled sperm seems not to be the main cause of alterations in the sperm integrity of plasma and acrosomal membranes and the potential of mitochondrial membrane during the cooling of equine semen.

A perdiz (Rhynchotus rufescens) é um tinamídeo com amplos músculos peitorais muito apreciados por mercados especializados. No entanto, a produção em larga escala é inexpressiva, podendo ser melhorada através da inseminação artificial (IA). Sendo assim, o presente experimento teve como objetivos padronizar a coleta de sêmen, o teste hipo-osmótico, testar diferentes diluidores, tempos de refrigeração e doses inseminantes. Amostras seminais de 100 animais, pertencentes a FCAV/UNESP/Jaboticabal, foram empregadas na descrição do volume, pH, motilidade, vigor, concentração e alterações morfológicas. As coletas de sêmen foram realizadas em 2 ciclos. No primeiro ciclo foram realizadas a padronização da técnica de coleta de sêmen e a determinação do melhor meio hipo-osmótico, por meio de oito soluções. No segundo ciclo de coletas aplicou-se as técnicas já padronizadas; descreveu-se a motilidade e vigor espermático de amostras seminais diluídas em meios para sêmen de peru, TCM 199, TQC e solução fisiológica, refrigeradas por até 48h; além de terem sido realizadas IA em 128 fêmeas utilizando sêmen de 32 machos, os animais foram agrupados em quintetos (1 macho:4 fêmeas) no início do ciclo reprodutivo de 2004-2005. Metade dos quintetos foi mantida no sistema de monta natural e empregada como grupo controle (GC). A outra metade foi mantida em quintetos por apenas 2 meses. Em seguida, retirou-se os machos dos boxes das fêmeas, para formar os grupos inseminados (GI), cada um com uma dose inseminante de 10, 20, 30 ou 40x106sptz. No primeiro ciclo padronizou-se o método de coleta, no segundo empregou-se a técnica padronizada e os valores encontrados para a média e erro padrão da média de 231 amostras para volume, aspecto, motilidade, vigor, pH e concentração espermática foram: 23,59&plusmn;1,30&micro; l; 1,81&plusmn;0,03; 73,06&plusmn;1,41%; 3,06&plusmn;0,08; 8&plusmn;0; 5,25&plusmn;0,74x109sptz/ml; respectivamente. A motilidade correlacionou positivamente com a porcentagem média de células normais (r=0,4; p&lt;0,0001) e negativamente com as porcentagens de defeitos totais e de cabeça solta (r=-0,4; p&lt;0,0001). A porcentagem de caudas enroladas nas soluções hipo-osmóticas testadas variaram de 73,25&plusmn;3,3 a 84,52&plusmn;2,21%. A solução hipo-osmótica de 100mOsm demonstrou ser adequada e foi empregada em 81 amostras, resultando em 82,0&plusmn;1,38% de espermatozóides com membrana íntegra, gerando uma correlação positiva (r=0,4; p&lt;0,0002) entre esta variável e a motilidade. As amostras seminais diluídas em solução fisiológica não apresentaram motilidade e vigor após refrigeração, diferente das demais. As amostras refrigeradas por 24 e 48h em TCM 199 apresentaram melhores resultados de motilidade e vigor do que as que permaneceram no diluidor para sêmen de peru e TQC. Não foi possível observar diferenças estatísticas significantes entre os resultados da comparação dos índices reprodutivos entre GI e GC, porém os valores médios de ovos férteis obtidos no sistema de monta natural (2,22&plusmn;0,29) foram menores do que os grupos inseminados com 30 (4,44&plusmn;1,81) e 40x106sptz/dose inseminante (3,65&plusmn;1,66). Os resultados do presente experimento permitiram concluir que é possível a coleta e avaliação de sêmen de perdizes para o posterior emprego de biotecnologias tais como a inseminação artificial, sendo que esta pode ser utilizada a curtíssimo prazo, com a finalidade de aumentar a produção e melhorar o manejo genético deste animal. / The partridge (Rhynchotus rufescens) belongs to the tinamidae family and possesses breast muscles which are quite appreciated in high cuisine However, there is an insignificant large scale production, which could be improved using the artificial insemination (AI). The present experiment aimed to standardize semen collection and the hipoosmotic swelling test and to test dilutors, refrigeration times and insemination doses in partridges. Semen samples of 100 animals, belonging to the FCAV/UNESP/Jaboticabal, were used to describe the volume, pH, motility, vigor, concentration and morphologic alterations. Semen collections were performed in 2 stages. The first stage consisted of standardizing the technique of semen collection and of verifying the most adequate hipoosmotic medium (8 different osmolarities). In the second stage, the standardized techniques were applied; motility and vigor were evaluated in samples diluted in turkey semen extender, TCM 199, TQC and physiologic saline solution, refrigerated until 48 hours. Still in the second stage, 128 females and 32 males were allocated in groups of 5 (1 male:4 females) in the beginning of 2004-2005 reproductive season. Half of the quintets were bred using natural service (control group - CG); the other half was kept as quintets for 2 months, after which males were removed and allocated in quartets with no physical contact with the females. The females of this group were then inseminated (inseminated group ? IG) with 10, 20, 30 e 40x106sptz/ insemination dose. In the first experimental stage, 231 samples were evaluated for volume, aspect, motility, vigor, pH e sperm concentration with values averaging 23.59&plusmn;1.30&micro;l, 1.81&plusmn;0.03, 73.06&plusmn;1.41%, 3.06&plusmn;0.08; 8&plusmn;0; 5.25&plusmn;0.74x109sptz/ml, respectively. Motility was positively correlated with percentage of normal cells (r=0.4; p&lt;0.0001) and negatively correlated with the percentages of total sperm defects (r=-0.4; p&lt;0.0001) and detached head (r=-0.4; p&lt;0.0001). Percentage of swollen tails in the hipoosmotic solutions ranged from 73.25&plusmn;3.3 a 84.52&plusmn;2.21%. The solution of 100mOsm was the most adequate, being used in 81 samples, which averaged 82.0&plusmn;1.38% of sperm cells with intact membrane. A positive correlation (r=0.4; p&lt;0.0002) was found between the percentage of cells with intact membrane and motility. Neither motility or vigor were observed in samples diluted in physiologic saline solution, different for the other tested solutions. After both 24 and 48 hours of refrigeration, TCM 199 showed the highest results of motility and vigor when compared to the turkey extender and the TQC. No differences on the general reproductive indexes were found between animals from IG or CG. However, mean values of fertile eggs from CG (2.22&plusmn;0.29) were lower (p&lt;0.05) than groups inseminated with 30 (4.44&plusmn;1.81) and 40x106sptz/insemination dose (3.65&plusmn;1.66). Results allowed to infer that the techniques of semen collection and evaluation in partridges standardized in the present experiment may be used in a short term period for reproductive technologies such as artificial insemination, which could increase the production and improve the genetic management of these animals.

A criopreservação de sêmen é de fundamental importância para a expansão das técnicas reprodutivas como a inseminação artificial, a transferência de embriões e a fecundação in vitro, entretanto é responsável pelo estresse oxidativo da célula espermática. Para incrementar a sobrevivência celular após a congelação, a membrana plasmática deve ter adequada fluidez que é garantida pelos ácidos graxos poliinsaturados e suporte de defesa antioxidante para proteger contra a peroxidação lipídica. No intuito de tornar os espermatozoides mais resistentes à criopreservação, 48 touros da raça Nelore foram confinados (três animais por baia) e designados a quatro tratamentos de acordo com a adição de gordura protegida da degradação ruminal e/ou antioxidantes à dieta. Aos primeiros 30 dias, todos os touros receberam a mesma dieta de adaptação (bagaço de cana, polpa cítrica, farelo de glúten de milho, ureia e sal mineral). Posteriormente, durante 75 dias, a mesma dieta foi oferecida, diferindo na adição de: G) Gordura protegida da degradação ruminal (rica em ácido linoleico, Megalac-E®, 1,5% na MS; n = 12); A) antioxidante (fonte de vitamina C e selênio, EconomasE®, 3g/cabeça/dia; n = 12; GA), Megalac-E® e EconomasE® (n = 12) ou C) controle (n = 12). Colheitas e congelação de sêmen foram realizadas ao 0, 15, 30, 45, 55, 65 e 75 dias. Os dados foram analisados como medidas repetidas pelo Glimmix do SAS. O peso corporal e o perímetro escrotal não diferiram entre os tratamentos (P = 0,37). A atividade da glutationa peroxidase no plasma sanguíneo e seminal foi maior para as dietas contendo antioxidantes, especialmente aos 75 dias. O volume, turbilhonamento, vigor, porcentagem de cabeças aglutinadas do sêmen fresco, foram similares entre os grupos. Entretanto, dietas contendo gordura reduziram o número total de espermatozoides (P = 0,07) e a porcentagem de espermatozoides normais (P = 0,09). A peroxidação lipídica e a cinética espermática do sêmen descongelado foram similares entre as dietas experimentais. Por outro lado, dietas não contendo gordura aumentaram a porcentagem de espermatozoides com membrana plasmática (MP) íntegra e membrana acrossomal (MA) não reagida (62,2 ± 2,87 vs 53,3 ± 2,87%; P < 0,05). Além disso, dietas sem antioxidantes provocaram aumento no número de células espermáticas com MP lesada e MA reagida. Aos 65 dias de suplementação, espermatozoides de touros alimentados com dietas com gordura apresentaram maior estabilidade da MP, em relação aos outros tratamentos (60,4 ± 2,62 vs 52,7 ± 2,62%; P = 0,05), porém, aumentou o número de espermatozoides mortos (P = 0,10). O potencial mitocondrial espermático não foi afetado pelos tratamentos. Conclui-se que, apesar da viabilidade espermática pré-congelação não ter sido afetada pelas dietas experimentais, efeito benéfico aos espermatozoides após criopreservação foi encontrado quando suplementou-se touros com dietas contendo antioxidantes, em relação a dietas contendo gordura. / Cryopreservation of semen is of fundamental importance to the expansion of reproductive techniques such as artificial insemination, embryo transfer and in vitro fertilization, however, it is responsible for the oxidative stress of the sperm cell. To enhance cell survival after freezing, the plasma membrane has to have sufficient fluidity that is guaranteed by polyunsaturated fatty acids and antioxidant defense to protect against lipid peroxidation. In order to make the sperm more resistant to cryopreservation, 48 Nelore bulls were confined (three animals per pen) and assigned to four treatments according to the addition of rumen protected fat and/or antioxidants to the diet. During 30 days, all bulls were fed the same adaptation diet (sugar cane bagasse, citrus pulp, corn gluten meal, urea and mineral salt). Thereafter, for 75 days, the same diet was offered, differing in the addition of: F) fat protected from rumen degradation (rich in linoleic acid; Megalac-E®, 1.5% DM, n = 12); A) Antioxidant (a source of vitamin C and selenium, EconomasE®, 3g/head/day, n = 12); FA) Megalac-E® and EconomasE ® (n = 12); or C) control group (n = 12). Semen collection and freezing were performed seven times: 0, 15, 30, 45, 55, 65 and 75 days of offering experimental diet period. Data were analyzed by repeated measures of GLIMMIX of SAS. Body weight and scrotal circumference did not differ between treatments (P = 0.37). The glutathione peroxidase activity in blood and seminal plasma was higher for diets containing antioxidants, especially at 75 days. The volume, mass motility, vigor, numbers of agglutinated spermatozoa in fresh semen were similar between groups. However, fat-containing diets reduced the total number of sperm (P = 0.07) and the percentage of normal spermatozoa (P = 0.09). Lipid peroxidation and the kinetics of thawed sperm were similar among diets. Moreover, diets not containing fat increased the percentage of intact sperm plasma membrane (PM) and unreacted acrosomal membrane (62.2 ± 2.87 vs 53.3 ± 2.87%, P < 0.05). In addition, diets without antioxidants caused an increase in the number of sperm cells with damaged PM and with Induction of sperm acrosome reaction. After 65 days of supplementation, sperm of bulls fed diets with fat had higher stability of the PM, compared to other treatments (60.4 ± 2.62 vs. 52.7 ± 2.62%, P = 0.05), however there was an increase the number of dead sperm (P = 0.10). The mitochondrial potential of spermatozoa was not affected by treatments. It is concluded that despite tha fact that the pre-freezing sperm viability was not affected by the experimental diets, beneficial effect to the sperm cells after cryopreservation was found when bulls were supplemented with diets containing antioxidants, compared to diets containing fat.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-27Bitstream added on 2014-08-13T18:00:58Z : No. of bitstreams: 1 000749634.pdf: 556463 bytes, checksum: 887244a6f2bad0d8cc60a78100ae6e39 (MD5) / O objetivo do presente estudo foi comparar a viabilidade e fertilidade do sêmen refrigerado bovino diluído em meio diluidor comercial Botu Bov® com e sem crioprotetor glicerol a 5°C por 24 horas em sistema passivo de refrigeração Botu Flex® e comparados com amostras congeladas. Foram realizadas analises dos padrões de cinética espermática pelo CASA e viabilidade celular pela Citometria de Fluxo. Para o teste de fertilidade foram utilizados pool de 3 touros da raça Nelore, com idade média de 30 meses em programas de IATF. Os ejaculados foram divididos em 3 grupos experimentais de acordo com o meio diluidor, sendo Grupo (BB c/ crio), diluidor Botu Bov® com 7% de glicerol à 5°C/24horas; Grupo (BB s/ crio) diluidor Botu Bov® sem glicerol à 5°C/24horas; Grupo (BB) sêmen congelado com Botu Bov® com 7% de glicerol. Para o teste de fertilidade foram inseminadas 762 vacas da raça Nelore (Bos taurus indicius) em programas de IATF de forma randomizada: sendo 278 para (BB c/ crio), 268 para (BB s/ crio) e 216 para (BB). Os índices de concepção foram de 51%a,44%ab e 41%b respectivamente para (BB c/ crio), (BB s/ crio) e (BB) (p< 0,05). A partir dos resultados alcançados pode-se concluir que houve uma melhor preservação espermática das amostras mantida sob refrigeração com crioprotetor glicerol à 5°C/24horas, quando comparado com a amostra congelada. Esses resultados promovem a perspectiva da maximização de touros da fazenda utilizados em monta natural e animais geneticamente superiores que não apresentam índices de congelabilidade satisfatórios serem utilizados como doadores de sêmen em programas de IATF