Made available in DSpace on 2014-07-28T18:09:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 114.pdf: 598002 bytes, checksum: 3c505a008627bfa98ab5aadf9fc1f388 (MD5) Previous issue date: 2007 / Made available in DSpace on 2014-12-22T16:56:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 114.pdf: 598002 bytes, checksum: 3c505a008627bfa98ab5aadf9fc1f388 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / Clorofenóis consistem de um grupo de 19 isômeros incluindo mono-, di-, tri- e tretraclorofenóis, e o pentaclorofenol (PCF). São substâncias orgânicas sintéticas obtidas em larga escala industrial e comercial. Muitos são utilizados como agrotóxicos, principalmente como fungicidas para preservação de madeira. A presença de clorofenóis em sistemas hídricos é de grande interesse, devido à variedade de fontes contaminantes e propriedades físico-químicas dessas substâncias. O processo de desinfecção da água para consumo humano por cloração em presença de substâncias fenólicas pode resultar na formação de clorofenóis. O 2,4,6- Triclorofenol (2,4,6-TCF) é o principal isômero formado através desse processo. Clorofenóis são especialmente tóxicos e potencialmente carcinogênicos. Muitos são considerados poluentes prioritários para serem monitorados em água pela União Européia e pela agência de proteção ambiental dos Estados Unidos. A Portaria n. 518/2004, norma de potabilidade vigente no Brasil, inclue dois clorofenóis: 2,4,6-TCF e PCF, e estabelece o valor máximo permitido de 200 ng/mL e 9 ng/mL, respectivamente. Este estudo teve por objetivo implementar e validar metodologias analíticas para determinação de clorofenóis em água para consumo humano, em níveis de concentração exigidos, utilizando técnica de Cromatografia à Gás acoplada ao Detector Seletivo de Massas (CG-DSM). Incluem-se outros congêneres, além dos contemplados na referida portaria, sabendo-se do potencial de contaminação e da toxicidade dos mesmos. Foi avaliada a qualidade da água de sistemas e soluções alternativas de abastecimento do Município do Rio de Janeiro. Dois métodos analíticos foram validados, os quais demonstraram serem adequados aos objetivos do estudo. Podem ser utilizados em rotinas de controle e ações de vigilância da qualidade da água para consumo humano. As substâncias investigadas incluem todos os isômeros tri- e tetraclorofenóis, e o pentaclorofenol. / Chlorophenols consist of a group of 19 different isomers which include mono-, di-, tri- and tetrachlorophenols, and pentachlorophenol (PCF). They are synthetic organic compounds, obtained on large industrial and commercial scales. Many of them are widely used as pesticides, mainly as fungicides for wood protection. The presence of chlorophenols in the aquatic environment is of great concern, due to their physical and chemical proprieties and the variety of contamination sources. Drinking water disinfection by chlorination treatments may form chlorophenols when phenolic compounds are already present in raw water. 2,4,6- Triclorofenol (2,4,6-TCF) is the main isomer formed through this process. According to the International Agency for Research on Cancer, Chlorophenols are classified as. possibly carcinogenic compounds (Group 2B). Therefore, most of them are considered high-priority pollutants in water by the European Union and the United States Environmental Protection Agency. Regulation Nº. 518/2004, the effective Brazilian potability norm, includes two chlorophenols: 2,4,6-TCF and PCF, and establish the maximum concentration acceptance of 200 ng/mL and 9 ng/mL, respectively. The objective of this study was to implement and validate analytical methods for the determination of chlorophenols in drinking water at levels of the concentration limits established in the potability norm. Two methods were validated for the determination of pentachlorophenol and all isomers of the tri- and tetrachlorophenols. Instrumental analysis has been done by gas chromatography and mass spectrometry. Both methods had shown to be suitable in the scope of the study, fast, easy to execute and not expensive. All studied analytes presented linear working range and correlation coefficients between 0,9988 and 0,9997. The recovery rates varied from 75 to 103%, and variation coefficients were all lower than 15%. After validation, water quality was evaluated in samples collected from common water supply systems and alternative solutions in the Municipality of Rio de Janeiro. 2,4,6-TCF residues were detected in 36% of the 28 analysed samples, varying from 0,008 to 0,238 ng/mL, and all other analytes were below quantitation limit. These results indicate that chlorophenols levels in the sampled drinking water supplies are well below the regulation limits. The validated methods had been shown to be suitable for application in quality control routines and surveillance action by public health authorities.

Made available in DSpace on 2014-07-28T18:09:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 115.pdf: 596563 bytes, checksum: bc33af86699e3b9a1900240528f55ec1 (MD5) Previous issue date: 2007 / Made available in DSpace on 2014-12-22T16:56:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 115.pdf: 596563 bytes, checksum: bc33af86699e3b9a1900240528f55ec1 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / O monitoramento de resíduos de agrotóxicos em alimentos é uma prática adotada pelos governos de diversos países, visando verificar o perfeito atendimento às normas sanitárias, que têm como objetivo proteger a saúde da população. Neste contexto, o governo brasileiro vem monitorando estes resíduos, de forma sistemática desde 2001. O Estado do Rio de Janeiro iniciou o monitoramento de resíduos de agrotóxicos em morangos produzidos na região serrana no ano de 2003, como resposta aos resultados nacionais divulgados pela ANVISA, onde esta cultura apresentou 46,03 por cento de insatisfação. De 2003 a 2005 foram coletadas 93 amostras, sendo que em 2003, 90,5 por cento apresentaram resultado insatisfatório, principalmente pelo uso de agrotóxicos não autorizados para a cultura. No ano de 2004, este índice caiu para 30,3 por cento e se manteve nesta casa no ano de 2005, com 33,33 por cento. Foi conduzido um estudo visando avaliar a exposição aos resíduos de agrotóxicos por meio da dieta, utilizando os valores da Ingestão Diária Teórica Máxima (IDTM), comparando com os valores estabelecidos de Ingestão Diária Aceitável (IDA) para o resíduo de cada substância estudada. Dos onze compostos quantificados nas análises laboratoriais no ano de 2004, nenhum ultrapassou a IDA. Captana foi o composto que apresentou o maior impacto, contribuindo com 35,12 por cento da IDA. Dos oito compostos analisados qualitativamente ou que apresentaram resultado inferior ao limite de quantificação do método, tendo sido usado o valor estabelecido do LMR para os cálculos, dois ultrapassaram o parâmetro toxicológico de segurança. O Dicofol apresentou resultado de199,33 por cento da IDA e o pirimifós metílico, de 102,12 por cento. Tais resultados devem servir de alerta às autoridades, para que sejam revistas as monografias destes compostos. / Governments of various countries have adopted the monitoring of pesticide residues in food in order to ensure full compliance with health standards, thus aiming to protect the population’s health. The Brazilian government has systematically monitored pesticide residues since 2001. The State of Rio de Janeiro began monitoring pesticide residues in strawberries grown in the Serrana (Mountainous) region of the State in the year 2003 as a response to the national results published by the Brazilian Health Surveillance Agency (ANVISA), in which this crop showed a 46.03% unsatisfactory test rate. From 2003 to 2005, 93 samples were tested, with a 90.5% unsatisfactory rate in 2003, mainly due to the use of pesticides that had not been authorized for use on strawberry. In the year 2004 the rate dropped to 30.3% and remained at basically the same level in 2005 (33.33%). A study was conduced to assess dietary exposure to pesticide residues by using theoretical maximum daily intake (TMDI) levels, comparing the acceptable daily intake (ADI) for residues of the various target substances. Of the eleven compounds quantified in the laboratory analyses in the year 2004, none exceeded the ADI. Captan was the compound with the heaviest impact, with 35.12% of the ADI. Of the eight compounds analyzed qualitatively or which presented results below the method’s quantification limit, having used the established maximum residue limits (MRLs) for the calculations, two exceeded the toxicological safety threshold. Dicofol showed 199.33% of the ADI and pirimiphos-methyl 102.12%. Such results should serve as a warning to authorities to review the monographs of these compounds. As for the residue levels, one can conclude that access to information on the chemical and toxicological properties of crop pesticides and the permits for their use, as well as the effective adoption of good agricultural practices in compliance with the necessary measures for proper handling and application of these compounds, are crucially important for supplying food to the population with the lowest possible levels of chemical contaminant residues.

Made available in DSpace on 2014-07-28T18:10:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 125.pdf: 2499208 bytes, checksum: 842ce0f6ce03412a6ce888b2a55c1319 (MD5) Previous issue date: 2007 / Made available in DSpace on 2014-12-22T16:56:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 125.pdf: 2499208 bytes, checksum: 842ce0f6ce03412a6ce888b2a55c1319 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / Certos ensaios toxicológicos utilizados no controle de qualidade de produtos têm sido questionados por grupos defensores do bem estar dos animais por levarem ao sacrifício e sofrimento injustificado de um número extraordinário de animais. Além de questões éticas, abusca por métodos alternativos é uma questão de grande relevância para os laboratórios oficiais de controle da qualidade. O método HET CAM (Hens Egg Test-Chorion Allantoic Membrane) vem sendo estudado como método alternativo ao teste de irritação ocular em coelhos. No entanto, estudos que busquem avaliar a relação entre os efeitos induzidos in vivo em outras mucosas (e.g. mucosa oral) e o HET CAM são ainda escassos. Neste sentido, o objetivo do presente estudo foi avaliar o potencial de irritação de dentifrícios de uso adulto, apreendidos por Secretarias Estaduais e/ou Municipais de Saúde, e de uso infantil, adquiridos comercialmente no Município do Rio de Janeiro; comparando os resultados obtidos em ensaio in vivo com aqueles obtidos no método HET CAM, abordando as vantagens e desvantagens de cada método. O teste in vivo de irritação da mucosa oral foi realizado em hamsters, conforme preconizado pela ISO 10.993 Parte 10. Dependendo do seu potencial irritante, um produto é classificado como nãoirritante(NI), minimamente irritante (IMin), irritante leve (IL), irritante máximo (IM) e irritante severo (IS). Para o teste in vitro, seguiu-se o método oficial de avaliação do potencial irritanteno ovo de galinha, tendo como princípio a observação dos efeitos irritantes quando em contato com a membrana córion-alantóide do ovo no décimo dia de incubação / Animal welfare groups criticize some toxicological assays, applied in the quality control of products, because of the unjustified suffering of an extraordinary number of animals. Apart from the ethical reasons, the search for alternative methods is a matter of great relevance to the official quality control laboratories. The method HET-CAM (Hens Egg Test-Chorion Allantonic Membrane) is under study as an alternative for the eye irritation test, which is normally performed in rabbits. Studies that intend to evaluate the correlation between the effects induced in vivo in other mucosa (for example oral mucosa) and the HET-CAM, however, are scarce. In this logic, the main goal of the present study was to evaluate the irritation potential of adult’s toothpaste, confiscated by the Secretary of Health from Rio de Janeiro State and/or City, and of commercially available infant’s toothpaste, comparing the results obtained in vivo with the ones obtained with the HET-CAM method. The advantages and disadvantages of both methods were also considered. The oral mucosa irritation test in vivo was performed in hamsters, as established by ISO 10.993-Part 10. The products were classified, according to the irritability potential, as follows: not irritant (NI), minimally irritant (IMin), slightly irritant (IL), maximally irritant (IM) and severely irritant (IS). Concerning the in vitro test, the official method for the evaluation of the irritant potential for application of products on the chorion allantonic membrane of hen eggs was performed and the principle followed was that only eggs at the tenth incubation day were used for the application of substances and observation of effects. In the HET-CAM method, two autonomous analysts tested the products pure (100%) and 10% (triplets) diluted, in independent assays. This test allows the following classification: NI, IL, IM and IS. Twenty products were analyzed, 10 products for adults and the other 10 for infants. In the in vivo method, all products for adults were considered irritants. Within the infant’s products, 60% were considered not irritant or minimally irritant, whereas all the rest were classified as slightly irritant. Except for one adult product, all the other toothpastes studied in this monograph presented a pH level within the security range recommended by the international norm ISO11.609. Concerning HET-CAM, there was no disagreement between the two analysts for the final classification of the products 10% diluted. For the analyses of the pure products, however, divergence on the classification established by the two analysts was observed. The study of the correlation between the values of the scores obtained in vivo and in vitro showed that the irritation index obtained in hamsters associated better with the HET-CAM method performed with the diluted products when compared to the results obtained for the pure products. With the purpose of evaluating the grade of predictability of the in vitro test in comparison to the animal model, a cut-off was established for differentiation between products with low irritancy potential (Ii ≤4,99) and the ones with irritant potential (Ii ≥5,00). Parameters like precision (85%), sensibility (100%) and specificity (50%) were determined. Our study allow us to conclude that, although a satisfying correlation between the results obtained in vitro with the oral mucosa irritation test in hamsters was observed, there is a tendency of overestimation of the results with the HET-CAM method. It is, therefore, recommended that products classified as positive with the HET-CAM might be submitted to further investigation using other in vitro assays (such as citotoxicity, RBC, isolated eye etc) in order to confirm the label of irritant

Made available in DSpace on 2014-07-28T18:09:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 107.pdf: 2520157 bytes, checksum: 93334c0f181c08b7be000b7a1441e401 (MD5) Previous issue date: 2008 / Made available in DSpace on 2014-12-22T16:56:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 107.pdf: 2520157 bytes, checksum: 93334c0f181c08b7be000b7a1441e401 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / A quantidade de bacilos viáveis presentes na vacina BCG é um importante requisito de qualidade deste produto, pois permite avaliar a consistência de produção. A contagem de colônias em meio sólido é o método oficial recomendado pela Organização Mundial da Saúde e pela Farmacopéia Brasileira para a determinação da viabilidade do BCG. A difícil dispersão do BCG e seu crescimento lento conferem limitações ao método oficial, como a variabilidade dos resultados, a baixa reprodutibilidade e o prolongado tempo de análise. Este trabalho avaliou a aplicabilidade da técnica de redução do sal de tetrazol XTT como método alternativo para a determinação do número de viáveis em vacinas produzidas com o BCG Moreau-RJ. Foi demonstrada a linearidade das técnicas de redução do XTT realizadas com base em Kairo et al. (1999) e em Argüelles et al (2005) em 3, 24 e 48 horas de incubação. Os ajustes lineares foram obtidos pela técnica de redução do XTT a 1 mg/mL baseada em Kairo et al. (1999), com coeficiente de determinação (RP2P=0,99), em conformidade com a Resolução N. 899/2003 da ANVISA referente à validação de métodos bioanalíticos. O melhor ajuste abrangeu as concentrações de vacina de 2,0 a 16,0 x 10P6 PUFC/mL após 24 e 48 horas de incubação a 37C. Nestas condições de ensaio os números de viáveis obtidos preliminarmente para cinco lotes de vacina BCG intradérmica empregados na rotina de imunização do país e para três amostras da vacina de referência BRABCG003 foram fortemente correlacionados (r=0,96) àqueles fornecidos pelo método tradicional de cultivo em meio de Lowenstein-Jensen. Com base nos valores de referência preconizados pela Farmacopéia Brasileira, observou-se 100 por cento de concordância na interpretação final dos resultados fornecidos pelos dois métodos para os cinco lotes de vacina avaliados. / The number of culturable particles in the BCG vaccine is an important requirement of quality control, therefore it allows to evaluate the production consistency. The colony counting on solid medium is the official method recommended by the World Health Organization and by the Brazilian Pharmacopeia to determine the viability of the BCG on final lots. The nature of the organism (difficult dispersion and slow growth) confers inter-laboratory variation of results and time consuming characteristics to the current test. The present work evaluated the applicability of the reduction of the salt of tetrazol XTT as an alternative method to determine the number of viable units in vaccines produced with the BCG Moreau-RJ. The method was linear by the techniques of reduction of the XTT based on Kairo et. (1999) and on Argüelles (2005) after 3, 24 and 48 hours of incubation. The linear adjustment was obtained by assays of reduction of XTT at 1 mg/mL based on Kairo et al. (1999), with coefficient of determination (RP2P=0,99) required by the Resolution N° 899/2003 / ANVISA concernem to the validation of bioanalitical assays. Optimal calibration curves enclosed vaccine concentrations from 2,0 x 10P6 Pto 16,0 x 10P6 PCFU/mL after 24 and 48 hours of incubation at 37 °C. With these conditions the numbers of viable units obtained from five lots of intradermal vaccines used in the brazilian routine of immunization and from three samples of the reference vaccine BRABCG003 had been strongly correlated (r=0,96) to those provided by the current method of culture in Lowenstein-Jensen. Thus, we observed 100% of agreement between the final interpretations of the two methods of analysis considering the range of values referred by the Brazilian Pharmacopeia to BCG vaccine. Therefore, beyond the strong correlation with the official method, the reduction length of assay from 4 weeks to 48 hours, the relative low cost and the easiness of execution represent strong incentives to the validation of the reduction of XTT as an alternative method to replace the counting of colonies in Lowenstein-Jensen.

Made available in DSpace on 2015-02-20T12:56:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 73.pdf: 645663 bytes, checksum: 1fdb98e2621023f13d0c6a16004b1cbd (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / A segurança e a eficácia da imunoterapia antienvenenamento ofídico estão intimamente relacionadas à pureza e a uma cuidadosa determinação da potência do soro (atividade biológica). A metodologia atualmente utilizada apresenta importantes limitações, as quais este trabalho objetiva contribuir. A mesma é adotada como oficial pela Farmacopéia Brasileira, tendo sido preconizada em 1996 pela Portaria nº 174/MS. Observações preliminares deste estudo identificaram, principalmente, um alto índice de invalidação de ensaios e uma baixa repetibilidade e reprodutibilidade, representado por diferenças significativas no ensaio de potência nos resultados obtidos pelo INCQS e pelos laboratórios produtores, enfatizando a necessidade de aperfeiçoar a metodologia analítica para a determinação da potência do soro antibotrópico. De acordo com as recomendações do Workshop on the Standardization and Control of Antivenoms , coordenado pela Quality Assurance and Safety of Biologicals Unit da OMS em 2001, o estabelecimento de venenos e antivenenos de referência é essencial para a padronização destes ensaios e para permitir a comparação lote a lote, assim como a comparação entre laboratórios. Neste trabalho, apresentamos os resultados de um estudo interlaboratorial para o estabelecimento de veneno e antiveneno botrópico de referência, visando o aperfeiçoamento do controle da qualidade dos soros antibotrópicos, com ênfase na metodologia analítica para a determinação da potência, com a participação de todos os laboratórios brasileiros produtores de soro antibotrópico. Este estudo foi realizado em duas etapas. A primeira compreendeu a reavaliação da potência do lote nº 05 do Veneno Botrópico de Referência BRA/BOT/05, a avaliação da potência do candidato a Soro Antibotrópico de Referência Nacional BRA/ANTIBOT/01, e a avaliação da aplicabilidade de um controle da dose desafio de veneno referente a cinco vezes o valor de dose letal média (5 DL50). / A segurança e a eficácia da imunoterapia antienvenenamento ofídico estão intimamente relacionadas à pureza e a uma cuidadosa determinação da potência do soro (atividade biológica). A metodologia atualmente utilizada apresenta importantes limitações, as quais este trabalho objetiva contribuir. A mesma é adotada como oficial pela Farmacopéia Brasileira, tendo sido preconizada em 1996 pela Portaria nº 174/MS. Observações preliminares deste estudo identificaram, principalmente, um alto índice de invalidação de ensaios e uma baixa repetibilidade e reprodutibilidade, representado por diferenças significativas no ensaio de potência nos resultados obtidos pelo INCQS e pelos laboratórios produtores, enfatizando a necessidade de aperfeiçoar a metodologia analítica para a determinação da potência do soro antibotrópico. De acordo com as recomendações do “Workshop on the Standardization and Control of Antivenoms”, coordenado pela “Quality Assurance and Safety of Biologicals Unit” da OMS em 2001, o estabelecimento de venenos e antivenenos de referência é essencial para a padronização destes ensaios e para permitir a comparação lote a lote, assim como a comparação entre laboratórios. Neste trabalho, apresentamos os resultados de um estudo interlaboratorial para o estabelecimento de veneno e antiveneno botrópico de referência, visando o aperfeiçoamento do controle da qualidade dos soros antibotrópicos, com ênfase na metodologia analítica para a determinação da potência, com a participação de todos os laboratórios brasileiros produtores de soro antibotrópico. Este estudo foi realizado em duas etapas. A primeira compreendeu a reavaliação da potência do lote nº 05 do Veneno Botrópico de Referência BRA/BOT/05, a avaliação da potência do candidato a Soro Antibotrópico de Referência Nacional BRA/ANTIBOT/01, e a avaliação da aplicabilidade de um controle da dose desafio de veneno referente a cinco vezes o valor de dose letal média (5 DL50). A segunda etapa compreenderá a comparação da metodologia de determinação da potência do Soro Antibotrópico pela determinação da Dose Efetiva Média – DE50 (Potência Absoluta) com a metodologia da Potência Relativa frente ao Soro Antibotrópico de Referência, através da determinação da potência de amostras codificadas. Esta monografia, entretanto irá tratar apenas do estabelecimento do veneno e antiveneno de referência. Os resultados obtidos permitiram a avaliação das precisões intraensaios, interensaios e interlaboratorial, a freqüência de ensaios inválidos assim como as diferentes interpretações dos laboratórios, INCQS e produtores nacionais à monografia do Soro Antibotrópico da Farmacopéia Brasileira.

Made available in DSpace on 2015-02-20T12:56:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 94.pdf: 738482 bytes, checksum: 667de0856e030e189a750c7b2df0e974 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / O gênero Enterococcus inclui aproximadamente 30 espécies, algumas das quais muito freqüentemente envolvidas com alimentos e ambientes relacionados, e cuja diferenciação com identificação precisa torna-se muitas vezes problemático, quando estas questões baseiam-se apenas em características fenotípicas que, mesmo assim, permitem separar estes microrganismos em cinco grupos fisiologicamente diferentes. A dificuldade para categorizar inequivocamente as espécies dos enterococos com base somente nas características bioquímicas pode estar relacionado com uma heterogeneidade bastante alta dos aspectos fenotípicos, independentemente da origem dos isolados, devendo ainda ser considerado o fato de haver bastante similaridade das exigências nutricionais entre os enterococos e outras bactérias ácido lácticas. Por estas razões as técnicas moleculares tornaram-se um importante instrumento para caracterização destes microrganismos. Dentre estas, aquelas que se baseiam no uso do 16S rRNA como molécula alvo têm sido consideradas como excelentes opções com propósitos de identificação. A técnica PCR/RFLP fundamenta-se em uma metodologia baseada na amplificação por PCR e nos perfis de restrição obtidos após o uso de enzimas selecionadas com base na sua habilidade de revelar polimorfismo nos fragmentos de DNA ou RNA analisados. Este trabalho tem como objetivo implantar a técnica da PCR/RFLP com as enzimas DdeI, HaeIII e HinfI associada a alguns testes bioquímicos para uma identificação de Enterococcus spp. isolados de amostras de queijo Minas tipo frescal. / O gênero Enterococcus inclui aproximadamente 30 espécies, algumas das quais muito freqüentemente envolvidas com alimentos e ambientes relacionados, e cuja diferenciação com identificação precisa torna-se muitas vezes problemático, quando estas questões baseiam-se apenas em características fenotípicas que, mesmo assim, permitem separar estes microrganismos em cinco grupos fisiologicamente diferentes. A dificuldade para categorizar inequivocamente as espécies dos enterococos com base somente nas características bioquímicas pode estar relacionado com uma heterogeneidade bastante alta dos aspectos fenotípicos, independentemente da origem dos isolados, devendo ainda ser considerado o fato de haver bastante similaridade das exigências nutricionais entre os enterococos e outras bactérias ácido lácticas. Por estas razões as técnicas moleculares tornaram-se um importante instrumento para caracterização destes microrganismos. Dentre estas, aquelas que se baseiam no uso do 16S rRNA como molécula alvo têm sido consideradas como excelentes opções com propósitos de identificação. A técnica PCR/RFLP fundamenta-se em uma metodologia baseada na amplificação por PCR e nos perfis de restrição obtidos após o uso de enzimas selecionadas com base na sua habilidade de revelar polimorfismo nos fragmentos de DNA ou RNA analisados. Este trabalho tem como objetivo implantar a técnica da PCR/RFLP com as enzimas DdeI, HaeIII e HinfI associada a alguns testes bioquímicos para uma identificação de Enterococcus spp. isolados de amostras de queijo Minas tipo frescal. Vinte e uma espécies de referência do gênero Enterococcus foram utilizadas para o estabelecimento dos perfis de restrição. Cinquenta e quatro isolados de leite e frango que apresentaram perfis fenotípicos típicos, atípicos e alguns sem identificação quanto à espécie estocados em nosso laboratório foram utilizados para testar a técnica desenvolvida e 21 isolados provenientes do queijo Minas tipo frescal foram utilizados para confirmar a utilidade da técnica. Ao utilizarmos a técnica PCR/RFLP obtivemos 5 perfis de restrição diferentes e, quando associados alguns testes bioquímicos, foi possível obter uma identificação rápida e precisa da maioria das espécies de Enterococcus.

Made available in DSpace on 2015-02-20T12:56:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 83.pdf: 256885 bytes, checksum: 4b5cf6cf47570e788eabf552e485d5ef (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / Uma das medidas adotadas para prevenção da disseminação dos microorganismos em hospitais é a utilização de saneantes para a desinfecção de artigos médicos, mobiliário, pisos, paredes de ambientes hospitalares. Este trabalho teve como objetivos a identificação e o estudo dos Relatórios Técnicos dos saneantes com ação antimicrobiana, de uso hospitalar, que obtiveram registros nos anos de 2004 e 2005. Verificou-se o atendimento às exigências legais e a qualidade das informações para o cumprimento das ações analíticas sanitárias pelos laboratórios que compõe o Sistema Nacional de Vigilância Sanitária. Para realização deste estudo foi elaborada uma ficha de coleta de dados, composta de itens contemplados nas legislações e outros necessários para realização de análises físico-químicas na avaliação do risco sanitário. O estudo dos relatórios desta categoria de produtos permitiu conhecer as formulações mais recentemente registradas, identificando, principalmente, os princípios ativos utilizados, a existência ou não de dados importantes para a realização das análises, além da identificação das substâncias cujas metodologias analíticas precisarão ser desenvolvidas pelo Setor de Saneantes do Departamento de Química. Os dados obtidos poderão ser empregados para a melhoria na elaboração dos relatórios técnicos apresentados pelo fabricante quando do registro dos produtos. / Uma das medidas adotadas para prevenção da disseminação dos microorganismos em hospitais é a utilização de saneantes para a desinfecção de artigos médicos, mobiliário, pisos, paredes de ambientes hospitalares. Este trabalho teve como objetivos a identificação e o estudo dos Relatórios Técnicos dos saneantes com ação antimicrobiana, de uso hospitalar, que obtiveram registros nos anos de 2004 e 2005. Verificou-se o atendimento às exigências legais e a qualidade das informações para o cumprimento das ações analíticas sanitárias pelos laboratórios que compõe o Sistema Nacional de Vigilância Sanitária. Para realização deste estudo foi elaborada uma ficha de coleta de dados, composta de itens contemplados nas legislações e outros necessários para realização de análises físico-químicas na avaliação do risco sanitário. O estudo dos relatórios desta categoria de produtos permitiu conhecer as formulações mais recentemente registradas, identificando, principalmente, os princípios ativos utilizados, a existência ou não de dados importantes para a realização das análises, além da identificação das substâncias cujas metodologias analíticas precisarão ser desenvolvidas pelo Setor de Saneantes do Departamento de Química. Os dados obtidos poderão ser empregados para a melhoria na elaboração dos relatórios técnicos apresentados pelo fabricante quando do registro dos produtos.

Made available in DSpace on 2015-02-27T17:39:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 45.pdf: 1382627 bytes, checksum: 825bdcaf635b617488f01f38eaba1085 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / O Ensaio do linfonodo local murino (LLNA) foi desenvolvido como uma alternativa aos testes de Buhler e Maximização. Esse teste é utilizado com o objetivo de discriminar substâncias capazes de induzir dermatite de contato e tem como desfecho a quantificação celular nos linfonodos auriculares de camundongos. Esse ensaio embora recomendado por agências internacionais envolvidas no desenvolvimento de metodologias alternativas (ICCVAM e ECVAM), ainda necessita de aprimoramento, isso porque o desfecho de proliferação se mostrou falho principalmente quando substâncias de ação sensibilizante fraca ou moderada foram o alvo da investigação. Neste contexto, o presente estudo teve como objetivo a padronização do método LLNA alternativo, através da quantificação de proliferação celular utilizando um reagente não radioativo (BrdU). Além disso, possíveis diferenças nos padrões de subpopulações linfocitárias entre camundongos tratados com substâncias irritantes e sensibilizantes foram também investigadas, com o objetivo de buscar um aprimoramento do teste. Para tal fim, os animais foram tratados com os sensibilizantes dinitroclorobenzeno (DNCB) e parafenilenidiamina (PPD) e os irritantes lauril sulfato de sódio (LSS) e tritonX-100 (TX-100), por 3 dias consecutivos no dorso de ambas as orelhas. As subpopulações foram analisadas por citometria de fluxo e por imunofluorescência. A citocina TNF-α no soro desses animais e possíveis alterações patológicas nas orelhas dos animais foram também analisadas. Os resultados obtidos demonstraram um aumento no número de células nos linfonodos de animais tratados com sensibilizantes e irritantes, quando comparados com os controles, porém um aumento da proliferação celular medida por BrdU foi observado apenas para os grupos tratados com as substâncias sensibilizantes... / O Ensaio do linfonodo local murino (LLNA) foi desenvolvido como uma alternativa aos testes de Buhler e Maximização. Esse teste é utilizado com o objetivo de discriminar substâncias capazes de induzir dermatite de contato e tem como desfecho a quantificação celular nos linfonodos auriculares de camundongos. Esse ensaio embora recomendado por agências internacionais envolvidas no desenvolvimento de metodologias alternativas (ICCVAM e ECVAM), ainda necessita de aprimoramento, isso porque o desfecho de proliferação se mostrou falho principalmente quando substâncias de ação sensibilizante fraca ou moderada foram o alvo da investigação. Neste contexto, o presente estudo teve como objetivo a padronização do método LLNA alternativo, através da quantificação de proliferação celular utilizando um reagente não radioativo (BrdU). Além disso, possíveis diferenças nos padrões de subpopulações linfocitárias entre camundongos tratados com substâncias irritantes e sensibilizantes foram também investigadas, com o objetivo de buscar um aprimoramento do teste. Para tal fim, os animais foram tratados com os sensibilizantes dinitroclorobenzeno (DNCB) e parafenilenidiamina (PPD) e os irritantes lauril sulfato de sódio (LSS) e tritonX-100 (TX-100), por 3 dias consecutivos no dorso de ambas as orelhas. As subpopulações foram analisadas por citometria de fluxo e por imunofluorescência. A citocina TNF-α no soro desses animais e possíveis alterações patológicas nas orelhas dos animais foram também analisadas. Os resultados obtidos demonstraram um aumento no número de células nos linfonodos de animais tratados com sensibilizantes e irritantes, quando comparados com os controles, porém um aumento da proliferação celular medida por BrdU foi observado apenas para os grupos tratados com as substâncias sensibilizantes. Além disso, o número absoluto das subpopulações de células CD4+, CD8+ e B B220+ foi maior para os grupos tratados com os sensibilizantes. Um aumento nas subpopulações CD4+CD25+ e CD4+CD69+ foi observado principalmente para substâncias sensibilizantes. Uma quantidade de TNF-α 4 vezes maior foi encontrada no soro dos animais tratados com os sensibilizantes, quando comparados aos grupos tratados com o controle. Nenhuma diferença foi vista nos estudos histopatológicos das orelhas dos animais. Com os resultados obtidos foi possível concluir que: a padronização do LLNA foi possível; o CD25 foi o mais promissor dentre os estudados na tentativa de avaliar uma alternativa ao desfecho de proliferação; a subpopulação de células CD8+ parece ter uma função prioritária na DCA; a citocina TNF-α poderia ser uma forte candidata para identificação de substâncias sensibilizantes e a histopatologia de animais não parecer uma boa alternativa.

Made available in DSpace on 2015-02-27T17:39:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 55.pdf: 1161666 bytes, checksum: 3ce55ce3ee2bf0d0668d0a96bd60e27c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / A família dos interferons (IFNs) compreende um grupo de citocinas secretadas por todas as células nucleadas presentes em mamíferos, conhecidas pelas suas atividades antivirais, antiproliferativas e imunomoduladoras. Com o advento da tecnologia de DNA recombinante, tornou-se possível a produção e o isolamento de grandes quantidades de IFNs, os quais vêm sendo utilizados clinicamente no tratamento de diversas enfermidades, como a hepatite C. Ao mesmo tempo, tem ocorrido uma crescente demanda no controle da qualidade destes biofármacos. Neste trabalho, estudamos a atividade biológica do IFN alfa-2b em linhagem de células Hep-2C para aplicação em ensaios de potência. Foi padronizado um ensaio antiviral para determinação de potência do IFN alfa-2b utilizando a combinação Hep-2C/vírus Mengo, no entanto vimos que a atividade antiproliferativa causada pelo IFN alfa-2b em células Hep-2C impacta negativamente na análise final dos dados. Ao considerar a via de transdução intracelular estimulada pelos IFNs, vimos mediante citometria de fluxo, que em células Hep-2C existe dose-dependência entre a ocorrência de intermediários fosforilados (pSTAT1) e a dose de IFN alfa-2b (entre 35,25 e 1000 UI/ml) empregada na estimulação destas células. Em seu conjunto, mostramos nesta tese que o ensaio de redução do efeito citopático viral para determinação da potência do IFN alfa-2b utilizando a combinação Hep-2C/vírus Mengo é informativo, porém vários aspectos devem ser considerados para minimizar prejuízos na análise final de dados. Ainda, sugerimos que a aplicação da citometria de fluxo na determinação de intermediários fosforilados em células Hep-2C seja bastante promissor no desenvolvimento de novos ensaios biológicos para a determinação de potência relativa do IFN alfa-2b. / A família dos interferons (IFNs) compreende um grupo de citocinas secretadas por todas as células nucleadas presentes em mamíferos, conhecidas pelas suas atividades antivirais, antiproliferativas e imunomoduladoras. Com o advento da tecnologia de DNA recombinante, tornou-se possível a produção e o isolamento de grandes quantidades de IFNs, os quais vêm sendo utilizados clinicamente no tratamento de diversas enfermidades, como a hepatite C. Ao mesmo tempo, tem ocorrido uma crescente demanda no controle da qualidade destes biofármacos. Neste trabalho, estudamos a atividade biológica do IFN alfa-2b em linhagem de células Hep-2C para aplicação em ensaios de potência. Foi padronizado um ensaio antiviral para determinação de potência do IFN alfa-2b utilizando a combinação Hep-2C/vírus Mengo, no entanto vimos que a atividade antiproliferativa causada pelo IFN alfa-2b em células Hep-2C impacta negativamente na análise final dos dados. Ao considerar a via de transdução intracelular estimulada pelos IFNs, vimos mediante citometria de fluxo, que em células Hep-2C existe dose-dependência entre a ocorrência de intermediários fosforilados (pSTAT1) e a dose de IFN alfa-2b (entre 35,25 e 1000 UI/ml) empregada na estimulação destas células. Em seu conjunto, mostramos nesta tese que o ensaio de redução do efeito citopático viral para determinação da potência do IFN alfa-2b utilizando a combinação Hep-2C/vírus Mengo é informativo, porém vários aspectos devem ser considerados para minimizar prejuízos na análise final de dados. Ainda, sugerimos que a aplicação da citometria de fluxo na determinação de intermediários fosforilados em células Hep-2C seja bastante promissor no desenvolvimento de novos ensaios biológicos para a determinação de potência relativa do IFN alfa-2b.

Made available in DSpace on 2015-02-27T17:39:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 23.pdf: 1389389 bytes, checksum: 79ab5a32cd4a782ac19d9bd08bfa4066 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / Os interferons (INFs) são proteínas produzidas por células animais em resposta a infecções virais. Essas substâncias possuem vários efeitos farmacológicos, incluindo antiviral, antitumoral e imunomodulatório. Com o advento da tecnologia do DNA recombinante, vários interferons passaram a ser produzidos e comercializados como Biofármacos. O mais importante é o α2b, que é uma das bases do tratamento das hepatites virais. A única norma oficial que regulamenta a produção de INF-α2b é a Farmacopéia Européia, sendo que restringe-se a matéria prima. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver um protocolo para caracterizar a estrutura molecular do INF-α2b em formulações farmacêuticas por espectrometria de massa do tipo MALDI-TOF. Para a análise por MALDI-TOF foi necessário inicialmente desenvolver um método de cromatografia líquida para promover a separação entre o INF-α2b constituinte ativo e minoritário e o soro albumina humana, também componente presente nas formulações farmacêuticas. Primeiramente foi desenvolvido um procedimento baseado em imunoafinidade e cromatografia de gel filtração. As amostras preparadas dessa forma apresentaram homogeneidade protéica por eletroforese, sendo analisadas por dicroísmo circular e fluorescência, o que demonstrou ter ocorrido degradação da estrutura tridimensional. Adicionalmente, essas amostras não geraram espectros de massa. Foi desenvolvido então outro método de separação cromatográfica, baseado em fase reversa, obtendo-se amostras com homogeneidade protéica, revelada por eletroforese. / Os interferons (INFs) são proteínas produzidas por células animais em resposta a infecções virais. Essas substâncias possuem vários efeitos farmacológicos, incluindo antiviral, antitumoral e imunomodulatório. Com o advento da tecnologia do DNA recombinante, vários interferons passaram a ser produzidos e comercializados como Biofármacos. O mais importante é o α2b, que é uma das bases do tratamento das hepatites virais. A única norma oficial que regulamenta a produção de INF-α2b é a Farmacopéia Européia, sendo que restringe-se a matéria prima. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver um protocolo para caracterizar a estrutura molecular do INF-α2b em formulações farmacêuticas por espectrometria de massa do tipo MALDI-TOF. Para a análise por MALDI-TOF foi necessário inicialmente desenvolver um método de cromatografia líquida para promover a separação entre o INF-α2b constituinte ativo e minoritário e o soro albumina humana, também componente presente nas formulações farmacêuticas. Primeiramente foi desenvolvido um procedimento baseado em imunoafinidade e cromatografia de gel filtração. As amostras preparadas dessa forma apresentaram homogeneidade protéica por eletroforese, sendo analisadas por dicroísmo circular e fluorescência, o que demonstrou ter ocorrido degradação da estrutura tridimensional. Adicionalmente, essas amostras não geraram espectros de massa. Foi desenvolvido então outro método de separação cromatográfica, baseado em fase reversa, obtendo-se amostras com homogeneidade protéica, revelada por eletroforese. As amostras em solução foram submetidas à digestão com tripsina, levadas ao espectrômetro de massa MALDI-TOF, onde seus fragmentos trípticos foram identificados segundo a correlação entre os resultados encontrados a partir das amostras e do padrão de INF-α2 da Farmacopéia Européia submetido aos mesmos procedimentos. As coberturas de seqüência atingida no padrão foram de 72,7 % e para as amostras de 45,5 %. No produto comercial foi identificada uma ponte disulfeto. Esse trabalho fornece dados importantes que subsidiam o estabelecimento de um protocolo para a análise de INF-α2b em produto final, que poderia substituir o mapa de peptídeos tradicional por cromatografia líquida, com a vantagem de resultar em um maior número de informações sobre a estrutura molecular do biofármaco, importante para a ação farmacológica. Portanto, implementar o controle de qualidade e caracterização estrutural com a introdução de metodologias analíticas sensíveis de maneira que tenhamos informação acerca da segurança, qualidade e eficácia do biofármaco para o devido suporte para as ações de Vigilância Sanitária.