Thesis (Ph.D.) - University of Queensland, 2005. / Includes bibliography.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-17T15:55:52Z No. of bitstreams: 1 faro_final.pdf: 19982397 bytes, checksum: 9dce53f5afd040c6e74278cf677ce010 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-17T15:55:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 faro_final.pdf: 19982397 bytes, checksum: 9dce53f5afd040c6e74278cf677ce010 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A castração parasitária pode ser entendida como qualquer alteração na função reprodutiva do molusco que seja decorrente da interferência das larvas dos trematódeos em desenvolvimento em seu interior, podendo levar a interrupção completa da atividade ovipositória ou apenas causar a sua redução. Neste trabalho, foi feito um estudo para observar a castração parasitária de Biomphalaria glabrata infectada com Schistosoma mansoni nos períodos pré-patente e patente. Foi estudado o efeito da infecção nos parâmetros relativos à fecundidade e fertilidade, taxa de crescimento e sobrevivência em um período de observação de 62 dias. Além disso, foram realizados estudos bioquímicos e histológicos neste mesmo período. A população de B. glabrata infectada com a linhagem BH do S. mansoni apresentou 50% de positividade e 100% de sobrevivência nos dois grupos analisados. O período pré-patente foi de 39 dias após a exposição aos miracídios. Foi observada pouca diferença no crescimento dos três grupos estudados (exposto que não eliminaram cercárias, controle e positivos que eliminaram cercárias). Moluscos expostos que não eliminaram cercárias e controle não apresentaram diferenças nos parâmetros estudados, porém os moluscos positivos (eliminando cercárias) apresentaram um decréscimo de fecundidade e fertilidade resultando em cessação da oviposição a partir de 55 dias. Quanto as alterações fisiológicas, foi observada uma oscilação dos níveis de glicose na hemolinfa com uma diminuição nos períodos onde ocorre maior mobilização energética por parte das larvas, assim como uma depleção de glicogênio na massa cefalopodal e glândula digestiva. A histopatologia mostrou que, aos 55 dias, o ovoteste apresenta uma atrofia considerável com o desaparecimento quase que total das células germinativas e o estroma de sustentação formando uma rede quase vazia. Quanto à glândula digestiva infectada aos 45 dias, evidenciou-se um foco de multiplicação parasitária com espocistos e cercárias, com o tecido da glândula bem preservada. O conteúdo dos grânulos de secreção da glândula de albúmen apresentou coloração pelo Alcian Blue (AB) pH 1,0 e 2,5 nos animais infectados, indicando a presença de carboidratos sulfatados e carboxilados. Desta forma, pode-se concluir a existência de castração parasitária em Biomphalaria glabrata infectada por S.mansoni no período patente da infecção, de forma direta e indireta. Quando a infecção foi realizada na fase adulta (maturidade sexual) observou-se a diminuição da fecundidade e fertilidade. / The parasitic castration can be understood as any change in the reproductive function of the snail which is due to interference of the larvae developing inside, leading to complete disruption of the egg laying activity or just its reduction. In this work, there was made a study to observe the parasite castration of Biomphalaria glabrata infected with Schistosoma mansoni in the pre-patent and patent phases. The effect of infection on parameters related to fecundity and fertility, growth rate and survival was studied in an observation period of 62 days. In addition, biochemical and histological features were studied in the same period. The population of B. glabrata infected with the BH strain of S. mansoni showed 50% positive and 100% survival in both groups. The prepatent period was 39 days after exposure to miracidia. We observed little difference in the growth of the three groups. Exposed snails without cercarial shedding and control group showed no differences in the parameters studied, the positive snails shedding showed a decrease in fecundity and fertility resulting in cessation of egg-laying from 55 days. The physiological changes, there was a fluctuation of glucose levels in the hemolymph with a decrease in periods where there is greater mobilization of energy by the larvae, as well as a depletion of glycogen in the cephalopodal mass and digestive gland. The histopathology showed that, at 55 days the ovotestis presented a considerable atrophy with almost complete disappearance of germ cells and supporting stroma forming a nearly empty net. The infected digestive gland at 45 days showed a focus of parasite multiplication and sporocysts with cercariae, with the gland tissue well preserved. The contents of the secretory granules of the albumen gland were stained with Alcian Blue (AB) pH 1.0 and 2.5 in infected animals, indicating the presence of sulfated and carboxylated carbohydrates. Thus, we can conclude the existence of parasitic castration in Biomphalaria glabrata infected S.mansoni the patent period of infection, directly and indirectly. When the infection was performed in adult phase (sexual maturity) a decrease in fecundity and fertility was observed.

Submitted by Ana Paula Macedo (ensino@ioc.fiocruz.br) on 2013-10-03T12:30:30Z No. of bitstreams: 1 Flávia Rachel Moreira Lamarão.pdf: 5085186 bytes, checksum: 2eec081eb56cb6c2a5e03f4e14d27b2f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-03T12:30:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Flávia Rachel Moreira Lamarão.pdf: 5085186 bytes, checksum: 2eec081eb56cb6c2a5e03f4e14d27b2f (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A esquistossomose é uma doença complexa no qual o parasita passa por um hospedeiro intermediário até finalmente chegar ao definitivo, em uma complexa interação. Algumas consequências são consideradas como o dano tecidual, fibrose variável, câncer e morte. Tais respostas dependem de características intrínsecas do parasita, do hospedeiro, e também da interação parasita-hospedeiro. O metabolismo do hospedeiro pode ser determinante no desfecho da doença. Neste estudo o papel do ferro à luz das interações moleculares, morfológicas e parasita-hospedeiro dessa doença complexa foi observado. Foi observado o papel do ferro utilizando camundongos infectados por S. mansoni tratados com suplemento de ferro (Iron Sulfate-IS) e quelante de ferro (Deferoxamina-DFO) observando-se os seguintes parâmetros: a sobrevivência dos animais, a saturação de transferrina, a análise de aglomeração gênica, análise individual de genes do metabolismo do ferro, fibrose, apoptose, ciclo celular, estresse oxidativo, reparo do DNA, a senescência celular e sobrevivência. Alterações morfológicas, volume de colágeno do granuloma e viabilidade do miracídio também foram acessados. Os camundongos infectados tratados com as drogas mostraram aumento da sobrevida quando comparados com os animais infectados. Já os genes reguladores de ferro e seu status foram acessados por PCR em tempo real e imuno-ensaio. Para uma análise mais detalhada, um agrupamento Bayesiano da expressão do gene foi realizado demonstrando o desequilíbrio de ferro em grupos tratados e infectados formado um cluster interessante no fígado, que não foi observado no intestino. De acordo com a análise de expressão gênica, o grupo tratado com DFO apresentou desorganização na formação do granuloma. Já os genes de estresse NDRG-1 e MMT, e de ciclo celular p53, p16 e p21 mostraram expressão gênica aumentada enquanto expressão TERT foi diminuída. O volume de colágeno no granuloma e viabilidade miracídio foi diminuído neste grupo. Nossos resultados sugerem que a esquistossomose é um modelo interessante para analisar a instabilidade genética, fibrose e interação parasita-hospedeiro dentro do qual o metabolismo do ferro desempenha um papel importante. O metabolismo desequilibrado nos animais tratados com DFO interferiu na sobrevivência animal e na modulação de proteção no hospedeiro. Análises complementares são necessárias para um profundo entendimento do papel do metabolismo do ferro, o que pode modificar as perspectivas terapêuticas desta doença. / Schistosomiasis is a complex disease where the parasite passes through an intermediate host to finally reach a definitive mammalian, in a complex interaction. Some consequences take into account tissue damage, variable fibrosis, cancer and death. Such responses depend on intrinsic characteristics of the parasite, host and also host-parasite interactions. Host metabolism can be determinant on disease outcome. The role of iron in the light of molecular, morphological and host-parasite interactions of this complex disease are observed. We analyzed the role of iron using S. mansoni infected mice treated with iron supplement (Iron Sulfate-IS) and iron chelator (Deferoxamine-DFO) and observed the following parameters: animal survival, transferrin saturation, gene cluster analysis, gene-by-gene analysis of iron metabolism, fibrosis, apoptosis, cell cycle, oxidative stress, DNA repair, cell senescence and survival. Morphological changes, granuloma collagen volume and miracidium viability were also accessed. Treated infected mice showed increased survival when compared to infected animals. Iron regulatory genes and status were accessed by real-time PCR and immunoassay. For detailed analysis, a Bayesian clustering of gene expression was performed demonstrating that iron imbalance in treated and infected groups formed an interesting cluster in the liver, which was not observed in intestine. According to gene expression analysis, the DFO treated group presented disorganization of granuloma formation. Stress genes (NDRG-1 and MMT), p53, p16 and p21 showed increased gene expression while TERT expression was decreased. The granuloma collagen volume and miracidium viability was decreased in this group. Our findings suggest schistosomiasis as an interesting model to analyze fibrosis, genetic instability and host-pathogen interaction in which iron metabolism plays an important role within. DFO imbalanced metabolism interfered in: animal survival, protective modulation for host in host-pathogen interaction. Major analyses are required to understand the role of iron metabolism, which holds therapeutic prospects, in this disease.

Made available in DSpace on 2012-05-07T14:43:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000049.pdf: 5536099 bytes, checksum: a3c810e6946e7b9de437e3149078ad55 (MD5) Previous issue date: 2008 / A identificação de moluscos infectados pelo Schistosoma mansoni é de grande interesse para a saúde pública, pois representa focos de transmissão da esquistossomose. As limitações da técnica padrão-ouro para o diagnóstico de infecções pré-patentes e em larga escala faz com que os métodos moleculares sejam vistos como possíveis alternativas através da detecção de DNA do S. mansoni em lotes de moluscos vetores. A detecção de seqüências específicas de DNA por reação em cadeia da polimerase (PCR) tem confirmado ser de extremo valor para a análise genética e diagnóstico de várias doenças patogênicas infecciosas. O principal objetivo desse trabalho é desenvolver e validar a detecção molecular da infecção por S. mansoni em lotes de moluscos vetores para a identificação de focos de transmissão. Os iniciadores foram desenhados para detectar especificamente DNA de S. mansnoni e amplificam gene na subunidade pequena do rRNA. Neste trabalho foi desenvolvido PCR quantitativa em tempo real (qPCR) e validada juntamente com ensaios de PCR, nested PCR (NPCR) e nested PCR em único tubo (STNPCR). Quando comparados as duas metodologias relacionadas ao padrão-ouro e abordagens moleculares os resultados confirmaram que a NPCR, STNPCR e a qPCR são significantemente mais sensíveis (p 0.05) que a PCR e que a técnica padrão-ouro. Significante relação foi observada entre os resultados da qPCR e a liberação de cercarias. As ferramentas moleculares desenvolvidas neste trabalho, se utilizadas em lotes de moluscos, podem ser consideradas alternativas e/ou complementares à técnica convencional para identificar focos de transmissão da esquistossomose

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-03-11T16:27:36Z No. of bitstreams: 1 Tese_LuizaFAndrade_CorreçaoPosDefesa.pdf: 6344948 bytes, checksum: 1de902ddabaee335003b09146eee2734 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-11T16:27:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_LuizaFAndrade_CorreçaoPosDefesa.pdf: 6344948 bytes, checksum: 1de902ddabaee335003b09146eee2734 (MD5) Previous issue date: 2012 / Apesar do praziquantel ser uma droga eficiente para o tratamento da esquistossomose, a prevalência da doença não mostrou redução significativa nos últimos anos e, até o momento, não existe uma alternativa eficaz para o tratamento dessa doença. Dessa forma, optamos por utilizar as poderosas ferramentas genômicas para identificar potenciais alvos para o desenvolvimento de um medicamento alternativo. Já que proteínas quinase eucarióticas (ePKs) são consideradas alvos para o desenvolvimento de drogas do ponto de vista médico e químico, e um número crescente de inibidores ePKs foram desenvolvidos e aprovados para o tratamento de diferentes doenças humanas, estas se tornaram o foco de estudo desse trabalho. As ePKs de S. mansoni, S. japonicum e S. haematobium foram identificadas nos proteomas preditos e classificadas em seus devidos grupos, famílias e subfamílias a partir de abordagens filogenéticas. Utilizando as informações dos ortólogos identificados, foi possível selecionar um grupo de ePKs com função predita essencial nesse parasito. A anotação funcional mostrou ainda que grande parte das ePKs selecionadas são ativadoras/efetoras da via de sinalização MAPK. Dessa forma, proteínas chave da via MAPK (SmRas, SmERK1, SmERK2, SmJNK e SmCaMK2), foram as escolhidas para validação experimental. Após redução significativa no nível de transcrito dos genes selecionados, nenhuma alteração fenotípica visível foi relatada em cultura de esquistossomulos. Contudo, o efeito da diminuição transcricional dos genes no desenvolvimento dos vermes diante do sistema imune do hospedeiro foi avaliado. Evidenciamos que proteínas MAPK JNK quando silenciada causa efeitos devastadores no tegumento de vermes adultos de S. mansoni que leva a morte dos mesmos. E, ePKs da subfamília ERK1 estão relacionadas com a produção de ovos, já que fêmeas com baixos níveis de transcritos SmERK1 e SmERK2 apresentam ovários pouco desenvolvidos e produção de ovos significativamente baixa. Além disso, foi comprovado que o fator de transcrição c-fos está diferencialmente expresso em parasitos silenciados para as proteínas MAPK SmJNK, SmCaMK2 e SmERK1/2. Dessa forma concluímos que o dado genômico, acoplado a ferramentas computacionais preditoras e abordagem experimental, compõem uma metodologia poderosa para o estudo dessa espécie. As proteínas MAPK, SmERK e SmJNK, são alvos de interesse para o desenvolvimento de drogas para tratamento da esquistossomose já que um inibidor contra essas proteínas provavelmente irá interromper o ciclo de vida de Schistosoma e impedir o progresso da doença. / Although praziquantel is an efficacious drug for schistosomiasis treatment, in recent years problems of resistance have arisen and alternatives don’t exist so far. To contribute to a solution, the important information of the recently sequenced genomes of these parasites was used to identify potential targets for the development of an alternative drug. Since eukaryotic protein kinases (ePKs) are good chemical and medical targets for drug development and an increasing number of ePK inhibitors have been approved for the treatment of different human disease, they have become the focus of this study. The ePKs were identified in the predicted proteomes of S. mansoni, S. japonicum and S. haematobium by Hidden Markov Model searches, the genes were classified in their group, family and subfamily by phylogeny approaches, and some ePKs were selected since they has essential function in the parasite. The functional annotation showed that the most selected ePKs are activators/effectors of MAPK signaling pathway, and key proteins of this pathway (SmRas, SmERK1, SmERK2, SmJNK, and SmCaMK2), were chosen for experimental validation. Gene silencing by RNA interference was used to elucidate the functional role of MAPK signaling pathways proteins in S. mansoni. After a significant reduction in the transcription level of the selected genes, no visible phenotypic changes were reported in schistosomula in culture. Therefore, mice were infected with the silenced schistosomulas and the development of adult worms was observed. It was showed that SmJNK has an important role in transformation and survival of the parasites as low number of adult worms was recovered and the tegument of survived worms was damaged. Moreover, SmERK1/SmERK2 was related to egg production, as mice infected with silenced schistosomulas, displayed significantly lower egg production and the recovered female worms had underdeveloped ovaries. Furthermore, it was showed that the c-fos transcription factor was overexpressed in parasites with low expression of SmERK1, SmJNK and SmCaMK2. We conclude that the genome contains valuable information and the functional annotation performed had an important role to improve the annotation of S. mansoni, S. haematobium and S. japonicum ePKs. Furthermore, MAPKs proteins, SmERK and SmJNK, are excellent targets for drug development as an inhibitor against these proteins will probably disrupt the life cycle of Schistosoma and prevent disease progression.

Made available in DSpace on 2015-06-12T13:55:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 428.pdf: 5454864 bytes, checksum: e796ffff377b56e109d6c62011da5b30 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / A esquistossomose é uma doença crônica que está vinculada particularmente às condições hidro-biológica dos criadouros dos caramujos. Em Pernambuco, nada se sabe sobre a situação atual da ecologia do Biomphalaria e da variabilidade genética de S. mansoni. Além disso, das implicações desses aspectos na definição da dinâmica de transmissão. O objetivo desta pesquisa foi: Analisar alguns aspectos da ecologia do Biomphalaria e da estrutura dos perfis genéticos de Schistosoma mansoni. Realizamos um estudo ecológico na escala regional e um estudo experimental na escala local (município de Goiana). Coletamos os moluscos em 14 municípios, tomamos nota das variáveis bióticas (espécies de moluscos e tipo de vegetação aquática) e abióticas (tipo de habitat e tipo de substrato). Analisamos os dados através da Análise de Correlação Canônica (ACC). O diagnostico da positividade do Biomphalaria foi feito através da técnica convencional e a Nested-PCR. Em Goiana, foram isoladas as cepas de S. mansoni e de Biomphalaria. Também, coletamos caramujos. Por último, isolamos os ciclos de S. mansoni dos casos para identificar os perfis genéticos de S. mansoni através do RAPDPCR. Usamos o Median Joining Network, para compreender a biogeografia evolutiva do parasito e a dinâmica de transmissão. Os ACC mostraram: 1) B. stramiena tem preferência por Nasturtium spp. e gramíneas, habitat semi- permantes, e os substratos argila, areia e pedra, e B. glabrata, por N. lotus, E. crassipes e P. estratioste, habitat temporais e o substrato barro; e 2) O gênero Biomphalaria esta separado tanto do ponto de vista geográfico como ecológico. As técnicas de diagnósticos mostraram que as duas espécies de Biomphalaria são responsáveis pelos focos do litoral. As interações parasito - molusco mais eficiente em Goiana é alopátrica. Identificamos uma variabilidade genética importante através dos primers usados. O MJN mostrou que a freqüência - dependência dos perfis genéticos é direcionada pela pressão de seleção do gênero Biomphalaria. Em conclusão o padrão geográfico dos perfis genéticos de S. mansoni presentes em Pernambuco depende dos níveis de compatibilidade do Biomphalaria. Em acréscimo, a existência de interconexão dos focos do ponto de vista geográfico e funcional explica o caráter focal e heterogêneo da transmissão da esquistossomose neste Estado

CARNEIRO, Teiliane Rodrigues. Avaliação da reação em cadeia da polimerase (PCR) em amostras de fezes para diagnóstico da esquistossomose em região de baixa endemicidade no Estado do Ceará. 2011. 93 f. Dissertaçao (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-01-03T13:52:47Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_trcarneiro.pdf: 4385109 bytes, checksum: c39e82aaa5b6180628484047cdc7c5a8 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-02T16:32:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_trcarneiro.pdf: 4385109 bytes, checksum: c39e82aaa5b6180628484047cdc7c5a8 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-02T16:32:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_trcarneiro.pdf: 4385109 bytes, checksum: c39e82aaa5b6180628484047cdc7c5a8 (MD5) Previous issue date: 2011 / Schistosomiasis is still a public health problem in Brazil. The infection is widespread in southeast and northeast. The laboratorial diagnosis of schistosome infection has been based on direct coproscopic examination and by indirect methods for detection of antigen, antibodies and specific DNA fragments that are associated with Schistosoma mansoni infection. The aim of the present study was to evaluate polymerase chain reaction (PCR) designed for detection of Schistosoma mansoni DNA in individuals from a low endemic area in Ceará state. The study was conducted in the Planalto do Cajueiro, Maranguape, Ceará, Brazil. In the laboratory performed the ELISA for detection of IgG antibodies against adult worms antigen of S. mansoni, and stool examinations (Kato-Katz, Lutz, Saline gradient and Helmintex® methods), considering the results obtained, for distribution of 56 stool samples selected among the 125 examined, in the following groups: Group I - ELISA reactive / Others parasites (+ ), Group II- ELISA reactive / Others parasites (-), Group III- ELISA non reactive / Others parasites (+), Group IV- ELISA non reactive / Others parasites (-), Group V- ELISA reactive / Coproscopic examination S. mansoni (+).The PCR was carried out according to a protocol described by Pontes et al.(2002) . Group I, 02 of 10 samples were positive in PCR; Group II, 04 of 10 samples were positive by PCR and in Group III, 01 of 07 samples were positive in PCR. Among the 10 samples of Group IV, 01 was positive in PCR and Group V, 13 of 19 samples were positive in PCR. Among the 39 individuals who showed reactivity by ELISA, 06 samples were positive in coproscopic examination and PCR was reactive in 19 samples. Comparing the results in Group V, with the Kato-Katz, this method detected 06 individuals, while PCR detected 13 individuals were positive. By comparing the PCR of Saline gradient, it is observed that the Saline gradient detected 09 individuals, while PCR detected 11. When comparing PCR to Helmintex®, we found that the Helmintex® detected 10, while PCR detected 08 samples. We conclude that PCR is an important tool to improve the sensitivity in detecting S. mansoni infection in low endemic areas. We emphasize that is very important associate the exams in order to achieve the real diagnosis of the disease. / A esquistossomose ainda é um problema de saúde pública no Brasil, amplamente disseminada nas regiões sudeste e nordeste. O diagnóstico laboratorial dessa doença é realizado principalmente através de métodos diretos que detectam os ovos nas fezes, através da microscopia e por métodos indiretos, que se baseiam na determinação e identificação de antígenos, anticorpos e fragmentos específicos de DNA que estão associados à infecção por Schistosoma mansoni. Nesse estudo, objetivamos avaliar a reação em cadeia da polimerase (PCR) para diagnóstico da esquistossomose mansoni, em indivíduos da localidade de Planalto do Cajueiro, uma área de baixa endemicidade, em Maranguape- Ceará. Realizamos o método de ELISA, para detecção de anticorpos IgG contra antígenos de verme adulto de S. mansoni, e a coproscopia, pelos métodos de Kato-Katz e de Lutz, para detecção de ovos de S. mansoni e de outros parasitos. Diante dos resultados obtidos nesses métodos, selecionamos 56 amostras de fezes, dentre as 125 analisadas, que compuseram os seguintes grupos: Grupo I - ELISA reativo/Outros parasitos (+) ; Grupo II- ELISA reativo/Outros parasitos (-); Grupo III- ELISA não reativo/ Outros parasitos (+) ; Grupo IV-ELISA não reativo/Outros parasitos (-); Grupo V- ELISA Reativo/Coproscopia para S. mansoni (+). Os parâmetros da PCR seguiram o protocolo de Pontes et al., 2002. Do Grupo I, 02 das 10 amostras foram positivas na PCR; do Grupo II, 04 das 10 amostras foram positivas na PCR e no Grupo III, 01 das 07 amostras foi positiva no PCR. Dentre as 10 amostras do Grupo IV, 01 amostra foi positiva no PCR e no Grupo V, 13 das 19 amostras foram positivas no PCR. Dos 39 indivíduos que apresentavam reatividade pelo ELISA, o exame parasitológico, realizado pela técnica de rotina, método de Kato-Katz, foi positivo em 06 amostras e a PCR em 19 amostras. Ao comparar os resultados obtidos no Grupo V, com o método de Kato-Katz, observa-se que este detectou 06 indivíduos, enquanto PCR detectou 13. Ao compararmos PCR ao método do Gradiente Salínico, observa-se que o Gradiente Salínico detectou 09 indivíduos, enquanto PCR detectou 11. Ao compararmos PCR ao Helmintex®, verificamos que o Helmintex® detectou 10, enquanto PCR detectou 08 amostras. Diante disso, concluímos que a PCR é mais uma ferramenta importante para melhorar a sensibilidade na detecção do parasito nas fezes, sendo indispensável à associação dos vários métodos disponíveis, com intuito de alcançar o diagnóstico real da doença.

Submitted by Maurílio Figueiredo (maurilioafigueiredo@yahoo.com.br) on 2013-03-13T23:06:32Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_CaracterizaçãoMolecularInicial.PDF: 9043527 bytes, checksum: ec8797c765bb1bf67e3b219963d610be (MD5) / Approved for entry into archive by Neide Nativa (neide@sisbin.ufop.br) on 2013-03-18T18:23:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_CaracterizaçãoMolecularInicial.PDF: 9043527 bytes, checksum: ec8797c765bb1bf67e3b219963d610be (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-18T18:23:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_CaracterizaçãoMolecularInicial.PDF: 9043527 bytes, checksum: ec8797c765bb1bf67e3b219963d610be (MD5) Previous issue date: 2010 / O sucesso da parasitemia por Schistosoma mansoni apresenta uma relação direta com a adaptação do parasito a diferentes ambientes e hospedeiros durante um ciclo biológico completo. Um dos mecanismos que estão envolvidos na adaptação do parasito é a expressão estágio específica de um conjunto de genes que são expressos de maneira coordenada, cujo controle pode ser tanto a nível transcricional como traducional. Um bom exemplo destes mecanismos de regulação da expressão gênica estágio-específico é a transição de cercária a esquistossômulo onde a diferenciação e as mudanças morfológicas e bioquímicas acontecem independente de síntese protéica. Vaults são ribonucleoproteínas com 13MDa, altamente conservadas entre eucariotos inferiores e superiores e compostas por um conjunto de três proteínas: Major Vault Protein (MVP), Vault (PolyADP-Ribose) Polymerase (VPARP) e Telomerase-associated Protein (TEP1), além de um pequeno RNA não traduzido. Em células de mamíferos, o papel biológico de Vaults está associado ao fenótipo de resistência a múltiplas drogas, ao transporte núcleo-citoplásmico e a vias de transdução de sinal. Até o momento a função exata deste complexo é desconhecida. A análise genômica comparada mostrou que organismos modelos como Caenorhabditis elegans e Drosophila melanogaster não possuem genes codificadores para os constituintes de Vaults, homólogos ao de mamíferos. Entretanto, estas mesmas análises mostraram a existência de genes relacionados à Vaults em S. mansoni. Estas observações levantaram várias questões, dentre elas o envolvimento de Vaults nos mecanismos de adaptação do parasito no hospedeiro mamífero. Desta forma, o objetivo geral desse trabalho foi realizar a caracterização molecular inicial dos constituintes de Vaults em S. mansoni. Através de ferramentas de bioinformática, os possíveis componentes protéicos de Vaults foram recuperados do banco de dados e utilizados na identificação, por homologia, de suas ortólogas em organismos superiores e inferiores, seguida pela análise dos dados recuperados. Os resultados sugerem que os componentes SmMVP e SmTEP-1 são conservados e que a SmVPARP e os vRNAs de S. mansoni permanecem por serem identificados. Os níveis de expressão dos componentes de Vaults foram quantificados utilizando PCR convencional e confirmados por qRTPCR utilizando RNA total de verme adulto, ovos, cercária e esquistossômulos mecanicamente transformados (EMT) com 3,5 horas, 1, 2, 3, 5 e 7 dias de cultivo in vitro. Os resultados sugerem uma expressão equivalente em todos os estágios evolutivos analisados. Para avaliar se os níveis equivalentes dos transcritos para a SmMVP iriam refletir nos níveis protéicos, foram realizados experimentos de western blot. Os resultados sugerem níveis equivalentes da MVP corroborando com os resultados da analise da expressão gênica ao nível da transcrição. Em conjunto, os resultados sugerem que o complexo Vault pode estar envolvido na regulação de processos celulares relacionados ao sucesso do parasitismo tanto durante a rota de peregrinação como na manutenção da infecção no hospedeiro mamífero. __________________________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The success of parasitemia by Schistosoma mansoni has a direct relation to the parasite adaptation to different environments and hosts during a complete life cycle. One of the mechanisms that are involved in the adaptation of the parasite is a stage-specific expression of a set of genes that are expressed in a coordinated manner, which can be controlled both the transcriptional and translational levels. A good example of mechanisms for stage-specific gene expression control is the cercariae-schistosomula transition in where the differentiation and morphological and biochemical changes occur independent of protein synthesis. Vaults are a 13MDa ribonucleoproteins, highly conserved between lower and higher eukaryotes and consist of a set of three proteins: Major Vault Protein (MVP), Vault (PolyADP ribose) polymerase (VPARP) and Telomerase-associated protein (TEP1), and a small untranslated RNA. In mammalian cell, the biological role of Vaults is associated with the phenotype of multidrug resistance, nuclearcytoplasmic transport and signal transduction pathways. To date, the exact function of this complex is unknown. The comparative genomic analysis showed that model organisms like Caenorhabditis elegans and Drosophila melanogaster does not possess genes coding for Vaults constituents, homologues to the mammalian. However, the same analysis showed the existence of related Vaults genes in S. mansoni. These observations raised several questions, among them the involvement of Vaults in the mechanisms of parasite adaptation in its mammalian host. Thus, the general objective of this work was the initial molecular characterization of the Vaults constituents in S. mansoni. Through bioinformatics tools, the putative Vaults protein components were recovered from database and used by search to identification of this orthologues in higher and lower organisms, followed by analysis of data retrieved. The results suggest that Vaults components SmMVP and SmTEP-1 are conserved and, for another hand SmVPARP and S. mansoni vRNA remain to be identified. The expression levels of the Vaults components were quantified using PCR and confirmed by qRT-PCR using total RNA from adult worms, eggs, cercariae and mechanically transformed schistosomula (MTS) at 3.5 hours, 1, 2, 3, 5 and 7 days of in vitro cultivation. The results suggest an equivalent expression in all developmental stages analyzed. To analyze whether equivalent levels of transcripts from SmMVP can be reflect on the protein levels, we performed western blot experiments. The results suggest equivalent levels of MVP corroborating the results of gene expression at transcriptional levels. Taken together, the results suggest that the Vault complex may be involved in cellular processes that are related to the success of parasitism during both peregrination as a maintenance of the infection in the vertebrate host.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-11Bitstream added on 2014-06-13T19:41:18Z : No. of bitstreams: 1 souza_alr_dr_arafcf.pdf: 596518 bytes, checksum: d996f6cfa9e5617222527d2ebbe8cff2 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O praziquantel (PZQ) é o fármaco de escolha para o tratamento da esquistossomose, sendo ativo contra todas as espécies de Schistosoma. Devido à sua baixa solubilidade em água e o risco de resistência ou tolerância do parasita a este fármaco, é importante desenvolver alternativas terapêuticas que possam aumentar sua eficácia e melhorar sua biodisponibilidade. As nanopartículas lipídicas sólidas (SLN) combinam as vantagens de diferentes carreadores coloidais tais como emulsões, lipossomas e nanopartículas poliméricas, e também evitam algumas das suas desvantagens em relação à estabilidade e dificuldade de produção em larga escala. Assim, o objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento e caracterização de SLN contendo PZQ (SLN-PZQ) a fim de melhorar as propriedades biofarmacêuticas deste fármaco. O ácido esteárico foi selecionado como fase lipídica para o desenvolvimento das SLN devido à capacidade de solubilização do PZQ e baixo custo. As SLN foram preparadas por um método modificado de microemulsão óleoem- água sob homogeneização a alta velocidade de cisalhamento utilizando Poloxamer 188 como tensoativo. O diâmetro médio e potencial zeta das SLN-PZQ foram 505,6 nm ± 27,2 nm e -34,0 mV ± 1,1 mV, respectivamente. As nanopartículas foram observadas por microscopia eletrônica de varredura revelando a presença de partículas esféricas. Os resultados obtidos por calorimetria exploratória diferencial indicam que as SLN se apresentam no estado sólido e o fármaco está molecularmente disperso na matriz lipídica. A eficiência de encapsulação e capacidade de carga do PZQ determinadas por cromatografia líquida de alta eficiência foram 99,06 % ± 0,3 % e 17,48 % ± 0,05 %, respectivamente. A formação das SLN foi confirmada por espalhamento de raio-X a baixo ângulo revelando a presença de uma estrutura lamelar com efetiva incorporação do PZQ nas partículas / Praziquantel (PZQ) is a drug of choice for the treatment of schistosomiasis, being active against all species of Schistosoma. Due to its low water solubility and risk of parasite resistance or tolerance to this drug, it is would be useful to develop therapeutical alternatives that can increase its efficacy and improve the bioavailability. Solid lipid nanoparticles (SLN) combine the advantages of different colloidal carriers such as emulsions, liposomes, and polymeric nanoparticles, and also avoid some of their disadvantages in relation to the stability and difficulty of large scale production. Thus, the aim of this research was the development and characterization of PZQ-loaded SLN (SLN-PZQ) to improve the biopharmaceuticals properties of this drug. The stearic acid was selected as lipid phase to development of SLN due to solubilization capacity of the PZQ and low cost. The SLN were prepared by a modified oil-in-water microemulsion method under high-shear homogenization using Poloxamer 188 as surfactant. The mean particle size and zeta potential to PZQ-loaded SLN were 505.6 nm ± 27.2 nm and -34.0 mV ± 1.1 mV, respectively. The nanoparticles were observed by scanning electron microscopy (SEM) revealing the presence of spherical particles. The results obtained by differential scanning calorimetry indicate that the SLN are presented in the solid state and the drug is molecularly dispersed in the lipid matrix. The entrapment efficiency and loading capacity of PZQ determined by high performance liquid chromatography were 99.06 % ± 0.3 % and 17.48 % ± 0.05 %, respectively. The SLN formation was confirmed by small angle X-ray scattering revealing the presence of a lipid lamellar structure with effective incorporation of the PZQ into particles. The stability of PZQloaded SLN stored at room temperature and at 4 ºC was investigated concerning particle size, zeta potential and entrapment efficiency

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-29Bitstream added on 2014-08-13T17:59:53Z : No. of bitstreams: 1 000770166.pdf: 4471991 bytes, checksum: d06f7bf044c47db0420eecb64e0086d9 (MD5) / A esquistossomose é uma das principais doenças parasitárias nos trópicos e subtrópicos, causada pelo Schistosoma mansoni. Uma alternativa para o tratamento desta doença é a quimioterapia, especialmente com praziquantel (PZQ), o qual é altamente permeável, porém apresenta baixa solubilidade em água, o que interfere na sua biodisponibilidade. Muitas estratégias utilizam polímeros no desenvolvimento de sistemas de liberação de fármacos com intuito de modificar as propriedades farmacotécnicas e biofarmacêuticas. Dentre elas, destacam-se os hidrogéis de dextrano, que apresenta várias propriedades vantajosas, algumas delas são: baixa toxicidade, biocompatibilidade e biodegradabilidade. Em trabalho anterior, foram desenvolvidos hidrogéis de dextrano 70 (DEX-70) e 148kDa (DEX-148) contendo praziquantel por um método simples, econômico, de fácil execução, sem a utilização de reticulantes químicos, o que gerou perfis de liberação diferentes do fármaco incorporado, graças a capacidade de intumescimento dos hidrogéis formados com cada um dos polímeros. Com base no observado neste trabalho avaliamos a utilização de blendas, que pode apresentar uma vantagem tecnológica importante, desenvolvendo novos materiais com propriedades diferentes, sem perder suas características e agregando suas propriedades vantajosas que podem ser usadas no desenvolvimento de sistemas de liberação, para a modulação das propriedades farmacotécnicas e biofarmacêuticas, de forma a desenvolver uma nova plataforma tecnológica em termos de Sistemas de liberação de fármacos. Os hidrogéis foram caracterizados, empregando o RMN-H1, o qual constatou um interação entre dextrano e praziquantel no hidrogel 1:1:1 (PZQ:DEX-70:DEX-148). A difração de Raios-X, juntamente com o DSC, mostrou que parte do fármaco está disperso na matriz polimérica na forma de cristalitos, ajudando a melhorar sua solubilidade, como comprovado pelo estudo de ... / Schistosomiasis is a major parasitic diseases in the tropics and subtropics, caused by Schistosoma mansoni. An alternative treatment for this condition is chemotherapy, especially with praziquantel (PZQ), which is highly permeable, but has a very low solubility in water, which interferes with its bioavailability. Many strategies have been use polymers in the development of systems for controlled drug release in order to modify pharmacotechnical and biopharmaceutical properties. Amongst them, highlight the dextran hydrogels, which present various advantageous properties, some of them are: low toxicity, biocompatibility and biodegradability. In previous studies, dextran 70 (DEX-70) and 148kDa (DEX-148) hydrogels containing praziquantel had been developed by a simple, economical, of easy execution, without the use of chemical crosslinking, which generated different release profiles of drug incorporated, due swelling capacity of the hydrogels formed from each one of polymers. Based on observed in this study, the utilization of blends, which can present a major technological advantage by developing new materials with different properties, without losing its characteristics and adding their advantageous properties that can be used in the development of delivery systems, was evaluated, to provide a modulation of its pharmacotechnical and biopharmaceutical propertiesin order to develop a new technological platform in terms of systems for drug delivery. Hidrogels were characterized, employing 1H-NMR, which found an interaction between dextran and praziquantel into 1:1:1 (PZQ:DEX-70:DEX-148) hydrogel. The X-ray diffraction along with DSC showed that part of drug is dispersed in the polymer matrix in the form of crystallites, helping to improve its solubility, as evidenced by solubility studies. In in vivo studies, the sample 1:2:1 and 1:2:2, were the ones that were more effective. Finally, it was found that preparation of dextran blends containing ...