PINHEIRO, Sergimar Kennedy de Paiva. Ontogênese e mecanismo de secreção em coléteres de Morinda citrifolia L. (Rubiaceae). 2017. 46 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia de Recursos Naturais)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Coordenação PPGBiotec (ppgbiotec@ufc.br) on 2017-08-24T13:03:44Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_skppinheiro.pdf: 3301586 bytes, checksum: 11ae687ec67a0797b479bbd747ec3506 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-09-05T21:25:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_skppinheiro.pdf: 3301586 bytes, checksum: 11ae687ec67a0797b479bbd747ec3506 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-05T21:25:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_skppinheiro.pdf: 3301586 bytes, checksum: 11ae687ec67a0797b479bbd747ec3506 (MD5) Previous issue date: 2017 / Colleters are structures secretory present in more than 60 families of angiosperms, whose function is protect the leaf primordium against physical and chemical damages. The colleters develop from cells of the fundamental meristem and of the protoderm, for differentiation and cellular reorganization for the development of the mature structure. After cell differentiation the secretory process begins. The Secretion is a complex phenomenon of synthesis, separation and isolation substances, as well as release or extracellular elimination. In this context, the external periclinal wall plays a fundamental role in the passage of secretion into the external environment. The colleters have mixed origin, developing from the protoderm and the fundamental meristem. These structures are present on the adaxial side of the stipules and have a morphology of the standard type. During development, the colleters of Morinda citrifolia L. (Rubiaceae) go through four stages of development defined by structural and anatomical changes: Undifferentiated, pre-secretory, secretory and senescent. At the undifferentiated stage, the secretory structures studied are characterized by small protuberances at the base of the adaxial surface of the stipules. In the pre-secretory stage, the epidermis begins its differentiation. In the following stages, the colleters present axis central parenchymatic covered by epidermal cells in palisade. The secretion is abundant at the vegetative apex impregnating the leaf primordium and stipules. Thus, the objective of this work is describe the ontogenesis of the coléteres of Morinda citrifolia, as well as the secretion mechanism using scanning electron microscopy techniques, light field microscopy (including histochemical tests) and laser confocal microscopy for a better understanding of the secretory process. Samples were prepared according to usual techniques for microscopy. The histochemical tests evidenced the presence of mucilage and proteins in the secretion. Lipids were observed in the cuticle and cuticular extracts, however, neither starch nor phenol was evident. Were observed two mechanisms of secretion: Rupture of cuticle and passage of secretion through the cuticle. With the end of the secretory process, the coléter enters a senescent stage, being characterized by the wrinkling of the cuticle and color change. / Coléteres são estruturas secretoras presentes em mais de 60 famílias de angiospermas, cuja função é proteger o primórdio foliar contra danos físicos e químicos. Os coléteres tem origem mista e se desenvolvem a partir de células do meristema fundamental e da protoderme, pela diferenciação e reorganização celular para o desenvolvimento da estrutura madura. Após a diferenciação celular o processo secretor se inicia. A secreção é um fenômeno complexo de síntese, separação e isolamento substâncias, assim como liberação ou eliminação extracelular. Nesse contexto, a parede periclinal externa possui papel fundamental na passagem de secreção para o meio externo. Tais estruturas estão presentes na face adaxial das estípulas e possuem morfologia do tipo padrão. Durante o desenvolvimento, os coléteres de Morinda citrifolia L. (Rubiaceae) passam por quatro estágios de desenvolvimento definidos por mudanças estruturais e anatômicas: indiferenciado, pré-secretor, secretor e senescente. No estágio indiferenciado, as estruturas secretoras estudadas são caracterizadas por pequenas protuberâncias na base da superfície adaxial das estípulas. No estágio pré-secretor a epiderme inicia sua diferenciação. Nos estágios seguintes, os coléteres apresentam eixo central parenquimático revestido por células epidérmicas em paliçada. A secreção é abundante no ápice vegetativo impregnando o primórdio foliar e estípulas. Assim, o objetivo deste trabalho foi descrever a ontogênese dos coléteres de Morinda citrifolia, bem como o mecanismo de secreção utilizando técnicas de microscopia eletrônica de varredura, microscopia óptica de campo claro (incluindo testes histoquímicos) e microscopia confocal a laser visando um maior entendimento em relação ao processo secretor. As amostras foram preparadas de acordo com técnicas usuais para microscopia. Os testes histoquímicos evidenciaram a presença de mucilagem e proteínas na secreção. Lipídeos foram observados na cutícula e extratos cuticulares, contudo, não foi evidenciado amido nem fenol. Foram observados dois mecanismos de secreção: rompimento de cutícula e passagem da secreção através da cutícula. Com o fim do processo secretor, o coléter entra em estágio senescente, sendo caracterizado pelo enrugamento da cutícula e mudança de cor.

QUIDUTE, Ana Rosa Pinto. Expressão dos genes GNAS e BTG2 e de um painel de microRNAs em somatotrofinomas esporádicos com e sem mutação no gene GNAS. 2013. 138 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-03-11T13:16:20Z No. of bitstreams: 1 2013_tese_arpquidute.pdf: 3847087 bytes, checksum: e9928440696d538b7170d304639ee18e (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-03-11T13:17:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_tese_arpquidute.pdf: 3847087 bytes, checksum: e9928440696d538b7170d304639ee18e (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-11T13:17:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_tese_arpquidute.pdf: 3847087 bytes, checksum: e9928440696d538b7170d304639ee18e (MD5) Previous issue date: 2013 / Introduction: Mutations in GNAS and AIP genes are present in 35% and 3%, respectively, of the sporadic somatotropinomas. Recently, increased biological importance of microRNAs (miRNAs) has been observed in pituitary tumorigenesis. However, the molecular mechanisms involved in the pathogenesis of 60% of these tumors remain to be elucidated. Objectives: To identify the prevalence of mutations in GNAS and AIP genes in a series of sporadic somatotropinomas. Compare clinical, bioquimical parametrer at diagnosis as age, tumor size and theirs aggressiveness, pre-operative growth hormone (GH), prolactin (PRL) and insulin-like growth factor-I (IGF-1) levels and treatment responsiveness between somatotropinomas with (gsp+) and without (gsp-) GNAS mutation.To analyze the expression of GNAS and BTG2 genes and a panel of miRNAs between somatotrofinomas and normal pituitaries (NP) and the association between the expression of these genes and miRNAs with aggressiveness, as well as disease control with surgery or control with all adjuvant therapeutic approaches. Material and Methods: 26 patients with acromegaly. GH basal ≤2.5μg/L or nadir after OGTT ≤1μg/L and normal IGF-I matched for age and sex were used as diagnosis and for cure criteria after transsphenoidal surgery (TS). As control after somatostatin analogues (SA), we adopted the normalization of IGF-I matched for age and sex. Tumor size was evaluated by MRI/CT and the degree of invasiveness by Hardy score (I to IV).Tumor samples (26) were obtained during TS, processed for histopathology and stored at -70°C for molecular studies. NP (07) were obtained during autopsy. Total DNA and RNA were extracted by TRIzol®. Codons 201 and 227 of the GNAS gene and the whole AIP gene were sequenced. Relative expression of BTG2 and GNAS genes and miRNAs let-7a, miR-16a, miR-21, miR-141, miR-143, miR-15a, miR-145, miR-23a, miR-23b, and miR-24-2 was measured by qPCR (TaqMan probes) using 2-ΔΔCt method. Results: Frequencies of GNAS and AIP mutations were 35% and 3.8%, respectively. There was no difference between the mean age (39.0 ± 11.5 vs 43.6 ± 9.0 years, p=0.32), basal GH (62.4±128.1 vs 39.9 ± 48.3 μg/L; p=0.39), IGF-I (435.5 ± 230.8 vs. 556.9 ± 238.3; p=0.32) and PRL (25.7 ± 29.8 vs. 30.9 ± 32.8 ng/L, p=0.69) in plasma concentration, and tumor aggressiveness (p=1.00) between (gsp+) and (gsp-) groups. We observed that 80% (04/05) of gsp+ whereas 33% (02/06) of the gsp- achieved control (p=0.07) after SA therapy adjuvant to TS. When SA, dopamine agonists and/or external radiotherapy were associated 100% (05/05) of gsp+ group and 44% (04/09) of gsp- group (p=0.08) showed disease control.There was no difference in GNAS expression between somatotropinomas and NP (1.07 ± 0.55 vs 0.98 ± 0.28, p=0.97) as well as between somatotropinomasgsp+ and gsp- (1.04 ± 0.59 vs 1.10 ± 0.55, p=0.97, respectively). Hardy I/II tumors showed higher GNAS expression than Hardy III/IV (p=0.02), but there was no association between GNAS expression and disease control with surgery alone or associated with other adjuvant therapies. We observed hypoexpression of BTG2 and miR-16a and miR-141 in somatotropinomas compared with NP (-6.6 fold, p=0.002; -10.0 fold, p=0.01; and -50.0 fold, p=0.0003, respectively) with no difference between gsp+ and gsp- somatotropinomas. There was miR-21 overexpression in somatotropinomas compared with NP (20.2 ± 18.5 vs 2.5 ± 3.6; 10.2 fold, p=0.02), with no difference between gsp+ and gsp- somatotropinomas. However, miR-145 and miR-23b were more hipoexpressed in gsp+ compared to gsp- (-4.8fold, p=0.03 and-2.7 fold, p=0.02). There was no association between the expression of BTG2 and a panel of miRNAs with aggressiveness or disease control. Conclusion: In this series of assumed sporadic somatotopinomas, the frequencies of mutations in GNAS (35%) and AIP (3.8%) were similar to the literature. There were no differences in clinical and biochemical characteristics, aggressiveness, response to therapy, and GNAS expression in patients with gsp+ and gsp- somatotropinomas. Hypoexpression of BTG2, a tumor suppressor gene related to p53 and Rb signaling pathways, low expression of tumor suppressor miRNAs and high expression of oncomirs in somatotropinomas suggest a role in the somatotrophic tumorigenesis. / Introdução: Mutações nos genes GNAS e AIP estão presentes em 35% e 3%, respectivamente, dos somatotrofinomas esporádicos. Recentemente, observa-se importância biológica crescente dos microRNAs (miRNAs) na tumorigênese hipofisária. Entretanto, mecanismos moleculares envolvidos na patogênese de 60% desses tumores permanecem não elucidados. Objetivos: Identificar a prevalência de mutações nos genes GNAS e AIP em um grupo de somatotrofinomas esporádicos. Comparar parâmetros clínicos e bioquímicos ao diagnóstico como idade, tamanho tumoral e agressividade (escore Hardy), hormônio do crescimento (GH), prolactina (PRL) e Fator de Crescimento Insulin-Like I (IGF-1) e resposta as terapêuticas entre os grupos com (gsp+) e sem (gsp-) mutação no GNAS. Analisar a expressão dos genes GNAS e BTG2 e miRNAs entre somatotrofinomas e hipófises normais (HN) e a associação entre a expressão com agressividade, a resposta à cirurgia e a todas as terapêuticas adjuvantes disponíveis. Material e Métodos: 26 pacientes com diagnóstico de acromegalia. Tamanho tumoral foi avaliado por RNM/CT e o grau de invasibilidade pelo escore de Hardy (I a IV). GH basal ≤2.5μg/L ou nadir de GH após o GTT≤1μg/L e IGF-1 normal para idade e sexo foram utilizados como critério de cura após cirurgia transesfenoidal (CTE). Como controle com o análogo da somatostatina (AS), adotamos a normalização dos níveis de IGF-1 para idade e sexo. As amostras tumorais (n=26) foram obtidas durante a CTE, realizado histopatológico e armazenadas a -70 °C, para estudos moleculares. HN (07) foram obtidas durante autópsias. RNA e DNA total foram extraídos pelo TRIzol®. Os códons 201 e 227 do gene GNAS e o AIP completo foram sequenciados. Expressão relativa dos genes GNAS e BTG2 e dos miRNAs let-7a, miR-16a, miR-21, miR-141, miR-143, miR-15a, miR-145, miR-23a, miR-23b e miR-24-2 foi avaliada por qPCR (sondas TaqMan), pelo método 2-ΔΔCt. Resultados: A frequência de mutações no GNAS foi de 35% e no AIP 3,8%. Não houve diferença entre as médias de idade (39,0±11,5 vs 43,6±9,0 anos; p=0,32), nas concentrações plasmáticas basais de GH (62,4±128,1 vs 39,9±48,3µg/L; p=0,39), IGF-1 (435,5±230,8 vs 556,9± 238,3 %ULNR; p=0,32), PRL (25,7±29,8 vs 30,9±32,8 ng/L; p=0,69) e agressividade tumoral entre os gsp+ e gsp-(p=1,00). Ao analisar o uso do AS como terapêutica adjuvante à CTE, observamos que 04/05 (80%) dos indivíduos com somatotrofinoma gsp+ obtiveram controle da doença, enquanto que no grupo gsp- 02/06 (33%) obtiveram controle (p=0,08). Quando associamos ao AS, os agonistas dopaminérgicos e/ou radioterapia externa, observamos que 05/05 (100%) dos pacientes gsp+ tiveram critério de controle da doença, contra (04/09) 44% no grupo gsp- (p=0,09). Não houve diferença na expressão de GNAS entre os somatotrofinomas e as HN (1,07±0,55 vs 0,98±0,28; p=0,97), e entre os gsp+ e gsp- (1,04±0,59 vs 1,10±0,55; p=0,97, respectivamente). Os tumores Hardy I / II apresentaram maior expressão do GNAS do que os tumores classificados como III / IV (p=0,02). Não houve associação entre a expressão do GNAS e o controle da doença com cirurgia isolada ou com o uso de todas as terapêuticas adjuvantes. Observamos hipoexpressão do BTG2 e dos miR-16a e miR-141 em somatotrofinomas quando foram comparados com as HN (p=0,002, fold=-6,63; p=0,01, fold=-10,00; p=0,0003, fold=-50,00, respectivamente) sem diferenças entre os gsp+ e gsp-. Houve hiperexpressão do miR-21 (p=0,02;fold=10,18) em somatotrofinomas (20,16±18,48) quando comparado com as HN (2,52 ±3,56), sem diferença entre os gsp + e gsp-. Não houve diferença na expressão entre os grupos gsp+ e gsp- para os miRNAs let-7a, miR-21, miR-143, miR-15a, miR-23a e miR-24-2. Entretanto, miR-145 e miR-23b foram mais hipoexpressos no grupo gsp+ quando comparados ao gsp- (p=0,03, fold=-4,83 e p=0,02, fold=-2,77, respectivamente). Não houve associação entre a expressão do BTG2 e o painel de miRNAs com agressividade e com o controle da doença. Conclusão: Na presente série de somatotrofinomas, assumidos como esporádicos, a frequência de mutações nos genes GNAS (35%) e AIP (3,8%) foram semelhantes aos relatados na literatura. Não houve diferenças nas características clínicas e bioquímicas, agressividade, resposta às terapêuticas, e na expressão diferencial do GNAS entre os pacientes com tumores gsp+ e gsp-. Hipoexpressão de BTG2 (gene supressor tumoral relacionado às vias de sinalização do p53 e do Rb), baixa expressão de miRNAs (supressores tumorais) e alta expressão de oncomirs em somatotrofinomas sugerem um papel desses na tumorigênese somatotrófica.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-22Bitstream added on 2014-06-13T20:33:37Z : No. of bitstreams: 1 mattos_ccb_me_sjrp.pdf: 1833064 bytes, checksum: 9ddfdfa24b297a8db2f0d8e4747e5c43 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O Toxoplasma gondii infecta os seres humanos dentre outras vias, pelo trato gastrintestinal, um local onde se dá a expressão do perfil de glicoconjugados ABH sob controle da enzima a-2-L-Fucosiltransferase (FUTII) codificada pelo gene FUT2 (19q13.3). A presença da FUTII define o status secretor positivo, o qual é relacionado aos fenótipos eritrocitários ABO. Diante da importância epidemiológica e clínica da infecção pelo T. gondii, o objetivo desse trabalho foi testar a hipótese de que o perfil de glicoconjugados ABH expresso no trato gastrintestinal está associado à infecção por esse parasito. Foram selecionadas 367 gestantes atendidas no Ambulatório de Gestação de Alto Risco do Hospital de Base da Fundação Faculdade Regional de Medicina de São José do Rio Preto. Duas amostras de sangue, uma sem e outra com anticoagulante foram coletadas. A fenotipagem eritrocitária ABO e a detecção dos anticorpos anti-T. gondii foram realizadas pelo método hemaglutinação. A identificação do status secretor foi feita pelo método PCR-RFLP. As diferenças nas freqüências do status secretor positivo e negativo e dos fenótipos eritrocitários ABO, isoladamente ou em conjunto, não foram estatisticamente significantes na presença e na ausência desses anticorpos (p=0,26). Esses resultados sugerem que o perfil de glicoconjugados ABH expressos no trato gastrintestinal sob controle do gene FUT2 não está associado à presença de anticorpos anti-T. gondii. / Toxoplasma gondii infects humans in several manners including by the gastrointestinal tract where the a-2-L-Fucosiltransferase (FUTII) coded by FUT2 (19q13.3) controls the expression of the ABH glycoconjugates profile. Presence of FUTII defines the positive secretor status which is associated to ABO erythrocytic phenotypes. Due to the epidemiological and clinical importance of T. gondii infection, the aim of this work was to test the hypothesis that the ABH glycoconjugate profile expressed in the gastrointestinal tract is associated to infections by this parasite. A total of 367 pregnant women from the High-Risk Pregnancy Clinical of the University Hospital de Base in São José do Rio Preto were enrolled in this study. Two blood samples were drawn with only one mixed with anticoagulant. The ABO erythrocytic phenotyping and detection of anti-T. gondii antibodies were achieved by the hemagglutination method. Identification of the secretor status was by the PCR-RFLP method. Differences in the positive and negative secretor status and ABO erythrocytic phenotypes, either in isolation or in association, were not statistically significant in respect to the presence or absence of these antibodies (p-value =0.26). These results suggest that the ABH glycoconjugate profile expressed in the gastrointestinal tract under control of the FUT2 gene is not associated to anti-T. gondii antibodies.

The colleters of Apocynaceae are glands related to different types of protection of vegetative and floral meristems through the production of mucilage or a mixture of many different compounds. Although several anatomical papers have shown histological and histochemical aspects of colleters of the family, almost nothing is known about the secretory process of the cells of this gland. In this paper we studied two types of colleters that occur in the family: what produces exclusively mucilaginous secretion and what produces mucilage and lipophilic compounds, being analyzed in two species for each type of colleter. The secretory epidermis of the colleters of Allamanda schottii and Blepharodon bicuspidatum presents a large amount of dictiosomes and endoplasmic reticulum, a dispersed vacuoma composed of small vacuoles with fibrilar osmiophilic material, leucoplasts with large amount of starch and few thylakoids, as well as large mitochondria. The mode of secretion release is granulocrine and the exudate crosses the cuticle without breaking it by projections of pectin reaching the surface. The secretory cells of the colleters of Mandevilla splendens and Peplonia axillaris have completely different ultrastructure and secretion from those of Allamanda schottii and B. bicuspidatum. Plastids and mitochondria are observed, as well as a profusion of dictiosomes and their vesicles in association with the rough endoplasmic reticulum near the cell membrane. The secretion is mainly observed in the cisterns and vesicles of the trans face of the dictiosomes, indicating the production of a great amount of mucilage. The mechanism of secretion release is also granulocrine, but the secretion is temporarily accumulated in a large periplasmic space before crossing the cell wall and the cuticle. Two distinct patterns of secretion production and release were found in the colleters of Apocynaceae that are related to the composition of the secretion and not to the group to which the species analyzed belong. Although the colleters in the family are histologically similar, the present paper demonstrates a metabolic and subcellular variability until then unknown to the group / Os coléteres de Apocynaceae são glândulas relacionadas a diferentes tipos de proteção de meristemas vegetativos e florais através da produção de mucilagem ou uma mistura de muitos compostos distintos. Apesar de vários trabalhos anatômicos terem demonstrado aspectos histológicos e histoquímicos de coléteres da família, não se sabe quase nada sobre o processo secretor das células desta glândula. Neste trabalho estudamos dois tipos de coléteres que ocorrem na família: o que produz secreção exclusivamente mucilaginosa e o que produz mucilagem e compostos lipofílicos, sendo analisada em duas espécies para cada tipo de coléter. A epiderme secretora dos coléteres de Allamanda schottii e Blepharodon bicuspidatum apresenta grande quantidade de dictiossomos e retículo endoplasmático, um vacuoma disperso composto por pequenos vacúolos com material osmiofílico fibrilar, leucoplastos com grande quantidade de amido e poucos tilacóides, além de mitocôndrias grandes. O modo de liberação da secreção é granulócrino e o exsudato atravessa a cutícula sem rompê-la por meio de projeções de pectina que alcançam a superfície. As células secretoras dos coléteres de Mandevilla splendens e Peplonia axillaris possuem ultraestrutura e secreção e completamente distintos dos de Allamanda schotti e B. bicuspidatum. Observam-se plastídeos e mitocôndrias, além de uma profusão de dictiossomos e de suas vesículas em associação ao retículo endoplasmático rugoso próximo à membrana plasmática. A secreção é principalmente observada nas cisternas e vesículas da face trans dos dictiossomos, indicando a produção de grande quantidade de mucilagem. O mecanismo de liberação da secreção também é granulócrino, mas a secreção é temporariamente acumulada em um amplo espaço periplasmático, antes de atravessar a parede celular e a cutícula. Dois padrões distintos de produção e liberação da secreção foram encontrados nos coléteres de Apocynaceae que estão relacionados à composição da secreção e não ao grupo ao qual as espécies analisadas pertencem. Embora os coléteres na família sejam histologicamente semelhantes, o presente trabalho demonstra uma variabilidade metabólica e subcelular até então desconhecida para o grupo

A endometriose é uma doença caracterizada pelo crescimento de tecido endometrial ectópico histologicamente similar ao do endométrio eutópico. Dentre sua sintomatologia, encontra-se relatos de infertilidade a qual está relacionada à diminuição da receptividade endometrial e a resistência à progesterona, importante hormônio envolvido no estabelecimento desse processo e na manutenção da gestação. A etiologia da endometriose não é bem conhecida, mas estudos sugerem que essa desordem possa estar ligada a mecanismos epigenéticos de regulação da expressão genica, tais como a metilação do DNA. A receptividade endometrial à progesterona é mediada por receptores (PR-A e PR-B) a qual parece estar suprimida nessas pacientes, possivelmente por diminuição ou inatividade destes receptores, o que poderia ser um mecanismo envolvido na infertilidade associada à endometriose. Estudos de metilação no gene codificante das isoformas A e B do receptor de progesterona (PGR) mostram que o exon 1 da isoforma PR-B encontra-se hipermetilado e tem sua expressão silenciada em pacientes portadoras da doença. Entretanto ainda não foi avaliado o perfil de metilação deste gene em mulheres inférteis com a doença, o que poderia estar envolvido na infertilidade apresentada por essas pacientes. O objetivo desde estudo foi avaliar o padrão de metilação do gene PGR em endométrio eutópico de mulheres com infertilidade relacionada à endometriose e controles inférteis, durante a fase secretora. 10 Foram realizadas biópsias endometriais de 23 pacientes, divididas em dois grupos: 12 mulheres inférteis sem endometriose (Controle infértil) e 11 mulheres inférteis com endometriose (Endometriose). Todos os endométrios coletados foram confirmados na fase secretora do ciclo através de análise histológica clássica segundo os critérios de Noyes. O DNA genômico foi extraído com o QIAamp DNA Mini Kit e modificado utilizando o EpiTec Bissulfite Kit. O padrão de metilação das isoformas PR-A e PR-B foi avaliado pela técnica HRM (High Resolution Melting) A análise de metilação da isoforma PR-A mostrou que a região analisada encontra-se hipometilada, em que a porcentagem de metilaçao encontrada foi 0% em ambos os grupos com e sem endometriose. No entanto, no grupo com endometriose, a isoforma PR-B mostrou-se parcialmente metilada na maioria das pacientes com porcentagem de metilaçao de 50% (n=8), somente uma paciente apresentou 80% de metilacão na isoforma B. Para o grupo sem endometriose a isoforma PR-B mostrou-se hipometilada (0%). A hipometilação da isoforma PR-A sugere que este gene encontrar-se na sua forma ativa, sem alterações em sua expressão. No entanto, a hipermetilação da isoforma PR-B nas mulheres com endometriose pode estar relacionada com o silenciamento gênico ou redução da sua expressão, sugerindo que a baixa resposta à progesterona nas mulheres com endometriose pode estar diretamente ligada à redução do número de seus receptores nessas pacientes / Endometriosis is a disease characterized by ectopic growth of endometrial tissue histologically similar to the eutopic endometrium. Among this symptoms, is infertility accounts which is related to decreased endometrial receptivity and resistance to progesterone, important hormone involved in the establishment of this process and the maintenance of pregnancy. The etiology of endometriosis is not well known, but studies suggest that this disorder can be linked to epigenetic mechanisms of regulation of gene expression such as DNA methylation. The endometrial responsiveness to progesterone is mediated by receptors (PR-A and PR-B) which seem to be suppressed in these patients, possibly reducing or inactivity of these receptors, which could be a mechanism involved in the infertility associated with endometriosis. Studies in methylation of the gene encoding the A and B isoforms of progesterone receptor (PGR) showed that exon 1 of the PR-B isoform is hypermethylated and silenced have its expression in patients with the disease. However it has not been rated the methylation profile of this gene in infertile women with the disease, which could be involved in the infertility presented by these patients. The goal from study was to evaluate the methylation pattern of the PGR gene in eutopic endometrium of women with infertility related to endometriosis and infertile controls during the secretory phase. Endometrial biopsies were performed on 12 23 patients, divided into two groups: 12 infertile women without endometriosis (infertile Control) and 11 infertile women with endometriosis (Endometriosis). All endometrium collected were confirmed in the secretory phase of the cycle by classical histological analysis according to the criteria of Noyes. Genomic DNA was extracted with the QIAamp DNA Mini Kit and using the modified EpiTec Bissulfite Kit. The methylation pattern of PR-A and PR-B isoforms was assessed by HRM technique (Melting High Resolution) Methylation analysis of PR isoform The analyzed showed that the region is hipometilada, wherein the percentage of methylation was found 0% in both the groups with and without endometriosis. However, in the group with endometriosis, the PR-B isoform showed partially methylated in most patients with methylation percentage of 50% (n = 8), only one patient showed methylation in 80% of isoform B. In the group without endometriosis the PR-B isoform was shown hipometilada (0%). The hypomethylation of PR-A isoform suggests that this gene be in its active form, without change in his expression. However, hypermethylation of the PR-B isoform in women with endometriosis may be associated with gene silencing or reducing the expression, suggesting that the low response to progesterone in women with endometriosis can be directly linked to the reduction of its receptors in these patients

Helicobacter pylori infects and persistently colonizes the stomach, which results in gastritis and in some individuals peptic ulcer disease or gastric cancer. Adherence of H. pylori to the epithelium is an important factor for development of disease. Attachment is mediated by the adhesins BabA and SabA that binds the ABO/Leb blood group antigens and sialylated glycoconjugates respectively.  High-affinity attachment could be anticipated to be of disadvantage for H. pylori because epithelial cells have a fast turnover rate and the dislocated and shed epithelial cells would carry attached bacteria to the acidic gastric juice in the lumen. However, here we describe that H. pylori manage to adapt to this innate clearance mechanism by unique acid regulatory binding properties of its adhesins. We propose that pH regulated binding properties enable bacteria to detachment from host cells for chemotactic guided motility and successful return to the more neutral epithelium for a fresh restart of the infectious cycle. By comparison of BabA from different stomach loci we identified amino acid key position for acid regulated binding activity. Previous studies found lower prevalence of Leb-binding among H. pylori isolates from southern Europe compared to Sweden. Here we tested if the reduced prevalence of Leb-binding could be explained by a novel binding mode; in among Spanish strains, we identified S812 that demonstrates preference for multivalent binding to ABO antigens in glycolipids; we found that 812 BabA had drifted in its preferred binding epitope away from the consensus a1,2fucosylation and towards the blood group A and B derivatives. Such epitope drift might in particular optimize binding to ABO antigens in densely packed lipid rafts. In parallel, we studied the influence of BabA for disease progression by an inventory of gastric biopsies. BabA correlated both with the oncoprotein CagA, the VacAs1 toxin and, in addition, to severe disease progression. We further correlate BabA expression with positive secretor phenotype and stronger adhesion of H. pylori in vitro. For functional adherence studies in vitro, we constructed a recombinant Leb-expressing cell lineage that supports BabA mediated H. pylori attachment.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-14Bitstream added on 2014-06-13T18:41:52Z : No. of bitstreams: 1 gradella_dbt_dr_arafcf.pdf: 829637 bytes, checksum: 74edb2781966504a41ee8812b6fadbf0 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A expressão de antígenos ABH e Lewis tem sido associada com o desenvolvimento e prognóstico do câncer, diferenciação tumoral e metástase. Considerando que o carcinoma ductal invasivo (CADI) de mama apresenta múltiplas alterações, o objetivo deste estudo foi avaliar se o polimorfismo dos genes ABO, Lewis e Secretor, bem como a fenotipagem ABO podem estar associados ao câncer de mama e com parâmetros anatomoclínicos do tumor. Foram avaliadas 76 mulheres portadoras de CADI e 78 mulheres doadoras de sangue para a fenotipagem/genotipagem ABO e genotipagem Lewis e Secretor. Fenotipagem foi realizada por método de hemaglutinação, a genotipagem ABO por PCR seguida de restrição enzimática e a genotipagem dos grupos Lewis e Secretor por PCR alelo específico (PCR-AE). A genotipagem foi realizada considerando o polimorfismo dos genes em um único nucleotídeo, sendo que para o gene Lewis nas posições 59, 1067, 202 e 314, para o gene Secretor na posição 428 e para o gene ABO nas posições 261 (alelo O1), 526 (alelos O2 e B) e 703 (alelo B). Os genótipos Lewis foram classificados em Lewis positivo (tipo selvagem ou com duas/três mutações) e Lewis negativo (duas a quatro mutações). O genótipo secretor foi classificado em Secretor (selvagem ou com a mutação em heterozigose) e Não-secretor (homozigoto mutante). Nenhuma associação foi encontrada entre as pacientes com câncer de mama e o fenótipo (P=0,9323) e genótipo (P=0,9356) ABO. Mulheres com genótipo Lewis negativo foram associadas com CADI (P=0,0126), mas não foram associadas com os parâmetros anatomoclínicos (tamanho tumor, estadiamento TNM e metástase em linfonodos axilares). Genótipo Não-secretor foi associado com metástase em linfonodos axilares (P=0,0149). Em conclusão, os genótipos Lewis e Secretor podem ser úteis para predizer, respectivamente suscetibilidade e metástase em linfonodos axilares. / ABH and Lewis antigens expression have been associated with cancer development, prognosis, tumor differentiation and metastasis. Considering that invasive ductal breast carcinoma (IDC) present multiple molecular alterations, the aim of the present study was evaluated if the polymorphism of ABO, Lewis and secretor genes, as well as ABO phenotyping could be associated to breast cancer and anatomoclinical parameters of the tumor. In 76 women with IDC and 78 health women blood donors, ABO phenotyping/genotyping, Lewis and Secretor genotyping were evaluated. Phenotyping was performed by hemmaglutination method and genotyping by Polymerase Chain Reaction with Sequence-Specific Primers (PCR-SSP). ABO, Lewis and Secretor were classified by individual single nucleotide polymorphism (SNP) at sites 59, 1067, 202 and 314 of the Lewis gene, 428 of the Secretor gene and 261 (O1 allele), 526 (O2 and B allele) and 703 (B allele). Lewis genotype was classified in Lewis positive (wild-type or two/three SNPs) or Lewis negative (two to four different SNPs). The Secretor genotype was classified in Secretor (wild type or SNP in heterozygoses) and Non-secretor (SNP in homozygoses). No association was found between patients with breast cancer and ABO antigen expression (P=0.9323) and genotypes (P=0.9356). Lewis negative was associated with IDC (P=0.0126), but were not associated with anatomoclinical parameters (tumor size, TNM staging and axillary lymph nodes metastasis). Non-secretor genotype was associated with axilary lymph nodes metastasis (P=0.0149). In conclusion, the Lewis and Secretor genotyping could be useful to predict, respectively, of breast cancer susceptibility and axillary lymph nodes metastasis.

Orientador: Christiane Pienna Soares / Banca: Lilian Maria de Castilho / Banca: Luiz Carlos de Mattos / Banca: João Lauro Viana de Camargo / Banca: Haroldo Wilson Moreira / Resumo: A expressão de antígenos ABH e Lewis tem sido associada com o desenvolvimento e prognóstico do câncer, diferenciação tumoral e metástase. Considerando que o carcinoma ductal invasivo (CADI) de mama apresenta múltiplas alterações, o objetivo deste estudo foi avaliar se o polimorfismo dos genes ABO, Lewis e Secretor, bem como a fenotipagem ABO podem estar associados ao câncer de mama e com parâmetros anatomoclínicos do tumor. Foram avaliadas 76 mulheres portadoras de CADI e 78 mulheres doadoras de sangue para a fenotipagem/genotipagem ABO e genotipagem Lewis e Secretor. Fenotipagem foi realizada por método de hemaglutinação, a genotipagem ABO por PCR seguida de restrição enzimática e a genotipagem dos grupos Lewis e Secretor por PCR alelo específico (PCR-AE). A genotipagem foi realizada considerando o polimorfismo dos genes em um único nucleotídeo, sendo que para o gene Lewis nas posições 59, 1067, 202 e 314, para o gene Secretor na posição 428 e para o gene ABO nas posições 261 (alelo O1), 526 (alelos O2 e B) e 703 (alelo B). Os genótipos Lewis foram classificados em Lewis positivo (tipo selvagem ou com duas/três mutações) e Lewis negativo (duas a quatro mutações). O genótipo secretor foi classificado em Secretor (selvagem ou com a mutação em heterozigose) e Não-secretor (homozigoto mutante). Nenhuma associação foi encontrada entre as pacientes com câncer de mama e o fenótipo (P=0,9323) e genótipo (P=0,9356) ABO. Mulheres com genótipo Lewis negativo foram associadas com CADI (P=0,0126), mas não foram associadas com os parâmetros anatomoclínicos (tamanho tumor, estadiamento TNM e metástase em linfonodos axilares). Genótipo Não-secretor foi associado com metástase em linfonodos axilares (P=0,0149). Em conclusão, os genótipos Lewis e Secretor podem ser úteis para predizer, respectivamente suscetibilidade e metástase em linfonodos axilares. / Abstract: ABH and Lewis antigens expression have been associated with cancer development, prognosis, tumor differentiation and metastasis. Considering that invasive ductal breast carcinoma (IDC) present multiple molecular alterations, the aim of the present study was evaluated if the polymorphism of ABO, Lewis and secretor genes, as well as ABO phenotyping could be associated to breast cancer and anatomoclinical parameters of the tumor. In 76 women with IDC and 78 health women blood donors, ABO phenotyping/genotyping, Lewis and Secretor genotyping were evaluated. Phenotyping was performed by hemmaglutination method and genotyping by Polymerase Chain Reaction with Sequence-Specific Primers (PCR-SSP). ABO, Lewis and Secretor were classified by individual single nucleotide polymorphism (SNP) at sites 59, 1067, 202 and 314 of the Lewis gene, 428 of the Secretor gene and 261 (O1 allele), 526 (O2 and B allele) and 703 (B allele). Lewis genotype was classified in Lewis positive (wild-type or two/three SNPs) or Lewis negative (two to four different SNPs). The Secretor genotype was classified in Secretor (wild type or SNP in heterozygoses) and Non-secretor (SNP in homozygoses). No association was found between patients with breast cancer and ABO antigen expression (P=0.9323) and genotypes (P=0.9356). Lewis negative was associated with IDC (P=0.0126), but were not associated with anatomoclinical parameters (tumor size, TNM staging and axillary lymph nodes metastasis). Non-secretor genotype was associated with axilary lymph nodes metastasis (P=0.0149). In conclusion, the Lewis and Secretor genotyping could be useful to predict, respectively, of breast cancer susceptibility and axillary lymph nodes metastasis. / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-22Bitstream added on 2014-06-13T20:10:20Z : No. of bitstreams: 1 hebling_lmgf_me_rcla.pdf: 3712259 bytes, checksum: bcf13a7d84572a6f7c4bcf78a1fda878 (MD5) / Este estudo abordou os efeitos de extratos de glândulas salivares de fêmeas de Rhipicephalus sanguineus com 2, 4 e 6 dias de alimentação (EGS2-EGS6) em coelhos New Zealand White virgens de infestação inoculados três vezes a intervalos de 21 dias. Os animais inoculados foram desafiados com carrapatos R. sanguineus, para verificar a influência dos extratos sobre a resposta imune-inflamatória dos hospedeiros. Foram estudadas as alterações histopatológicas na pele dos hospedeiros na região da lesão de fixação dos carrapatos, os parâmetros alimentar e reprodutivo das fêmeas obtidas da infestação desafio, bem como suas glândulas salivares aos 2, 4 e 6 dias de alimentação. Para obtenção dos extratos glandulares utilizou-se 55 fêmeas (110 glândulas salivares) com 2 dias de alimentação, 36 (72 glândulas) com 4 dias e 25 (50 glândulas) com 6 dias, de onde obteve-se os extratos: EGS2, a partir de glândulas salivares de fêmeas com 2 dias de alimentação; EGS4 com 4 dias, e, EGS6 com 6 dias. Os resultados revelaram que os diferentes extratos glandulares estimularam o desenvolvimento de resposta imuneinflamatória na pele dos hospedeiros comprometendo os processos alimentar e reprodutivo das fêmeas dos carrapatos. Os hospedeiros do grupo GT (EGS4) mostraram a formação de um intenso e precoce infiltrado de células inflamatórias sinalizando que este foi o extrato mais eficaz no desenvolvimento da resposta imune-inflamatória local. Por outro lado, a resposta dos hospedeiros do grupo GT (EGS6) à infestação foi mais tardia e com menor ocorrência desse infiltrado. Já o processo inflamatório local nos hospedeiros do GT (EGS2) foi o menos intenso. O teste de desafio mostrou médias para os parâmetros alimentar e reprodutivo das fêmeas oriundas da infestação desafio que não foram significativamente diferentes, com exceção do peso médio de ingurgitamento das fêmeas... / This study addressed the effects of salivary glands extracts of Rhipicephalus sanguineus females with 2, 4 and 6 days of feeding (EGS2-EGS6) in New Zealand White rabbits naive inoculated three times at intervals of 21 days. The inoculated animals were challenged with R. sanguineus ticks to verify the influence of extracts on the host’s immune-inflammatory response. Changes in the hosts’ skin at the feeding lesion, feeding and reproductive parameters as well salivary glands with 2, 4 and 6 days of feeding of females obtained from the challenge infestation were studied. To obtain the glandular extracts, we used 55 females (110 salivary glands) with 2 days of feeding, 36 (72 glands) with 4 days and 25 (50 glands) with 6 days, which were obtained the extracts: EGS2, from salivary glands of females with two days of feeding; EGS4 with 4 days and EGS6 with 6 days. The results revealed that the different glandular extracts stimulated the development of immune-inflammatory response in the hosts’ skin compromising the feeding and reproductive processes of the female ticks. The hosts of the TG group (EGS4) showed the formation of an early and intense infiltration of inflammatory cells, indicating that this extract was more effective in developing the local inflammatory-immune response. On the other hand, the response of the TG group hosts (EGS6) to the infestation was delayed and with lower incidence of this infiltrate. The local inflammatory process in the GT hosts (EGS2) was the less intense. The challenge test showed averages for feeding and reproductive parameters of females from infestation challenge that were not significantly different, with the exception of the engorgement average weight of females from TG group (EGS6). However, it was considered that these differences occurred because of the responses developed by the hosts, since the histopathology of the skin... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Chaylane Marques (chaylane.marques@ufpe.br) on 2015-03-13T18:21:58Z No. of bitstreams: 2 Dissertação_AnaKatarina.pdf: 740763 bytes, checksum: a6ee01d8d797eb74e4589e4cde8d19ed (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T18:21:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação_AnaKatarina.pdf: 740763 bytes, checksum: a6ee01d8d797eb74e4589e4cde8d19ed (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-08 / CNPQ; CAPES / O aumento na concentração de IgA Secretora em secreções externas é uma importante ferramenta de diagnóstico para infecções que acometem as mucosas. O uso de metodologia de imunoquimiluminescência para realizar tal diagnóstico permite uma maior sensibilidade que os métodos espectrofotométricos tradicionalmente utilizados. Neste trabalho, um ensaio Dotimunoquimiluminescente (Dot-CLIA) foi proposto para a determinação de IgA Secretora. Os anticorpos anti-IgAS e anti-IgG-peroxidase foram previamente conjugados com éster de acridina (AE). Dot-ELISA e Dot-CLIA foram então realizadas aplicando amostras de IgAS em discos de membranas de nitrocelulose (0,45 μm de diâmetro de poro) e foi medida a atividade da peroxidase e a quimiluminescência (expressa em unidade relativa de luz; URL), respectivamente. O complexo ternário formado por IgAS/anti- IgAS-AE/anti-IgG-peroxidase- AE e o controle (PBS em substituição a IgAS) forneceram valores de 302.255 ± 28.736 RLU e 8.247 ± 3.479 RLU, respectivamente. Dot-ELISA simultaneamente realizada forneceu cor marrom pelo complexo ternário e ausência de cor foi observada para o controle. A relação entre RLU versus quantidade de IgAS utilizando o método proposto mostrou uma curva hiperbólica. O leite materno sem lipídios e caseína purificado por HPLC apresentou três picos de proteína e os que correspondiam a IgAS e ao componente secretor livre apresentaram valores de cerca de 50.000 RLU e 30.000 RLU, respectivamente. Portanto, pode-se concluir que o ensaio Dot-CLIA é capaz de avaliar quantitativamente e especificamente IgAS em fluidos biológicos.