Os herpesvírus bovinos tipo 1 (BoHV-1) e tipo 5 (BoHV-5) e o vírus da diarreia viral bovina (BVDV), são causas importantes de prejuízos sanitários e econômicos na bovinocultura. Estes agentes têm sido eventualmente detectados em búfalos (Bubalus bubalis) embora o papel desses vírus na biologia dessa espécie seja ainda desconhecido. A produção de búfalos vem se desenvolvendo expressivamente no Brasil, onde esses animais são mantidos frequentemente próximos ou associados à criação de bovinos. Como parte inicial de um projeto mais amplo sobre infecções por BoHV-1, BoHV-5, BuHV-1 e BVDV em búfalos, o presente estudo objetivou analisar a presença de anticorpos neutralizantes e genomas virais em amostras de soros bubalinos coletados em rebanhos do Estado do Rio Grande do Sul. Foram examinados 339 soros de animais maiores de 12 meses, de ambos os sexos, de diferentes raças e tipo de exploração. Os animais não eram vacinados para quaisquer vírus de interesse na pesquisa e se apresentavam sem alterações clinicamente aparentes na ocasião da coleta. Para a detecção de anticorpos neutralizantes, as amostras de soro foram examinadas através do teste de soroneutralização (SN) frente a diferentes amostras de herpesvírus: BoHV-1.1 (amostra LA) , BoHV-5b (amostra A663) e BuHV-1 (amostra b6). Cento e oito destas amostras foram examinadas adicionalmente frente ao BoHV-1.1 (amostra EVI123/98) e BoHV-1.2a (amostra SV265/96), para permitir uma avaliação da sensibilidade da SN utilizando como vírus de desafio todas as variantes disponíveis de BoHV-1 e BoHV-5. A sensibilidade da SN foi menor quando considerados os resultados obtidos com cada um dos vírus separadamente. Quando os resultados positivos frente a amostra LA, SV265/96 e A663 foram somados, a prova se apresentou mais sensível. Apesar disso, a SN não permitiu a identificação dos vírus que efetivamente haviam infectado os animais, devido ao elevado grau de reatividade cruzada. Para a verificação da circulação de pestivírus, foram realizados testes de SN utilizando a amostra “Oregon C24V” de BVDV-1 como vírus de desafio. Das 176 amostras analisadas, 19 (10,8 %) apresentaram anticorpos neutralizantes reagentes com o vírus utilizado. Paralelamente, para a detecção de genomas de pestivírus, foi desenvolvida uma reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) capaz de detectar os três tipos conhecidos de BVDV (1, 2 e 3) e otimizada para o exame das amostras de soros bubalinos. Cinco amostras (2,8 %) continham genomas virais, sugerindo a ocorrência de prováveis infecções persistentes nos animais, semelhante ao que ocorre em bovinos. Os resultados obtidos evidenciam a circulação de herpesvírus e pestivírus nas populações bubalinas analisadas. Mais estudos são necessários para definir quais os agentes efetivamente causadores de infecções nesta espécie animal. / Bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1), 5 (BoHV-5) and bovine viral diarrhoea virus (BVDV) are major causes of sanitary and economic losses in cattle. These agents have been eventually detected in water buffaloes (Bubalus bubalis), although their role in host species biology is unknown. Buffalo production has had significant increase in Brazil, where these animals are often kept close to or in association with cattle. As part of a wider project on infections with BoHV-1, BoHV-5, BuHV-1 and BVDV in buffaloes, the present study aimed to examine the occurrence of neutralizing antibodies in buffaloes serum samples collected in farms from Rio Grande do Sul State. Three hundred and thirty nine serum samples were collected from animals with ages above 12 months, of both genders, of different races and under different management practices. The animals were not vaccinated for any virus studied in the present study and were all clinically healthy at the time of sample collection. For neutralizing antibodies detection, serum samples were tested in serum neutralization (SN) tests against different herpesviruses: BoHV-1.1 (strain LA), BoHV-5b (strain A663) e BuHV-1 (strain b6). One hundred and eight of theses samples were additionally examined with BoHV-1.1 (strain EVI123/98) and BoHV-1.2 (strain SV265/96), to compare SN sensitivity using all available variants of BoHV-1 and BoHV-5 as challenge viruses. The SN sensitivity was lower when results obtained with each virus were considered separately. Sensitivity was maximum when the positive results against strain LA, SV265/96 and A663 were added. Despite this, the SN did not allow the identification of the virus which had actually infected animals, in view of the high degree of antibody cross-reactivity. In order to assess the circulation of pestiviruses, SN tests were carried out using the sample "Oregon C24V" of BVDV-1 as challenge virus. Out of the 176 analyzed samples, 19 (10.8 %) presented neutralizing antibodies to pestivirus. At the same time, for the detection of genomes of pestiviruses, was developed a quantitative polymerase chain reaction (qPCR) able to detect the three known types of BVDV (1, 2 and 3) and optimized for examining bubaline sera. Five samples (2.8 %) contained viral genomes, suggesting the occurrence of persistent infections in animals, analogous to what occurs in cattle. The results obtained confirm circulation of herpesvírus and pestiviruses in examined buffalo populations. Further studies are needed to define which of these viruses effectively infect this animal species.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A Floresta Tropical Atlântica apresenta uma enorme biodiversidade, e está atualmente sujeita a inúmeras pressões como a perda de área pela intensa ocupação humana, agricultura, pecuária, urbanização e industrialização. Esses impactos têm provocado desmatamento e fragmentação florestal, processos que interferem na manutenção das populações animais, inclusive afetando os ciclos silvestres de parasitas e microorganismos. Didelphis aurita é um marsupial da Mata Atlântica com alta capacidade adaptativa a ambientes perturbados. Esta espécie onívora é tolerante à fragmentação florestal, podendo sobreviver em ambientes silvestres, rurais, suburbanos e urbanos, tendo importância na conexão dos ciclos silvestres e urbanos de diversos agentes. Este trabalho teve por objetivo descrever aspectos hematológicos, bioquímicos e de hemoparasitas em Didelphis aurita de duas áreas da Serra dos Órgãos/ RJ, uma área fragmentada e outra de mata contínua. Entre julho de 2011 e fevereiro de 2012 foram capturados 61 animais que tiveram amostras de sangue avaliadas. Os resultados expressos como média desvio padrão foram: Volume Globular 38,66 % ( 4,97); Hemácias 5,40 ( 0,75) x106/mm3; Hemoglobina 12,78 ( 1,68) g/dL; VGM 71,69 ( 3,56) fl; CHGM 33,01 ( 0,63) %; Plaquetas 514,70 ( 323,10) x 103/mm3; Leucócitos 19.678,52 ( 10.152,26)/mm3; Basófilos 0,59 ( 0,72) %; Eosinófilos 13,79 ( 6,94)%; Bastonetes 0,77 ( 2,04) %; Segmentados 41,12 ( 13,95) %; Linfócitos 41,97 ( 12,97) %; Monócitos 1,75 ( 1,51)%. Para parâmetros bioquímicos encontramos os seguintes resultados: Proteínas totais 8,50 ( 1,68); albumina 3,03 ( 0,69); globulina 5,44 ( 1,66); uréia 83,57 ( 20,11); creatinina 0,44 ( 0,13); ALT 85,01 ( 65,65); AST 314,55 ( 130,58); FA 420,38 ( 371,89); GGT 19,40 ( 8,51). Os parâmetros hematócrito, hemoglobina, hematimetria, ALT, AST e FA foram maiores nos machos do que nas fêmeas. Adultos apresentaram valores de proteína plasmática total, leucócitos, hematócrito, hemoglobina, hematimetria, albumina, proteínas totais, creatinina e GGT maiores do que jovens, e o inverso ocorreu para plaquetas, globulina e FA. Animais do Fragmento apresentaram valores de massa corporal e albumina menores do que os do Garrafão, e o inverso ocorreu para GGT e globulina. Babesiasp. ocorreu em 26,6% da população, sendo mais freqüente em adultos. Estes resultados são os primeiros parâmetros de referência para Didelphis aurita na Serra dos Órgãos, contribuindo para o estudo desta espécie. / The Atlantic Forest is characterized by a high species diversity and endemism. This ecosystem is under human-induced threats for decades, loosing area to agriculture, pastures and urban areas.These threats have lead to habitat destruction and fragmentation, disturbing ecological processes and affecting the enzootic cycle of diseases. Didelphis aurita is an Atlantic Forest marsupial with synanthropic habit, capable of survive in disturbed and fragmented environments, including urban areas. The aim of this study was to describe haemoparasites, hematologic and serum chemistry aspects of D. aurita in Serra dos Órgãos/ RJ, comparing two areas, a conserved forest and a fragmented landscape. Between July 2011 and February 2012 61 specimens were studied. Results are given as mean standard deviation, as follows: Packed cell volume 38,66 % ( 4,97); erythrocytes 5,40 ( 0,75)x106/mm3; hemoglobin 12,78 ( 1,68) g/dL; MCV 71,69 ( 3,56) fl; MCHC 33,01 ( 0,63) %; Platelets 514,70 ( 323,10) x 103/mm3; Leukocytes 19.678,52 ( 10.152,26)/mm3; basophils 0,59 ( 0,72) %; eosinophils 13,79 ( 6,94)%; band neutrophils 0,77 ( 2,04) %; neutrophils 41,12 ( 13,95) %; lymphocytes 41,97 ( 12,97) %; monocytes 1,75 ( 1,51)%. The serum chemistry values were: total protein8,50 ( 1,68); albumin 3,03 ( 0,69); globulin 5,44 ( 1,66); BUN 83,57 ( 20,11); creatinine 0,44 ( 0,13); ALT 85,01 ( 65,65); AST 314,55 ( 130,58); AP 420,38 ( 371,89); GGT 19,40 ( 8,51). Packed cell volume, hemoglobin, erythrocytes, ALT, AST and AP were higher in males than in females. Adults have higher values of total plasmatic protein, leukocytes, packed cell volume, hemoglobin, erythrocytes, albumin, total protein and GGT than young animals. The Young have higher platelets, globulin and AP. Animals from the fragmented area present lower body mass and lower levels of albumin than those from the conserved Forest. The opposite occurred for GGT and globulin. Babesia sp. were found in 26.6% of specimens, more frequently in adults. These results are the very first reportof hematologic and serum chemistry values for D. aurita in Serra dos Órgãos.

Magister Scientiae - MSc (Biotechnology) / Breast cancer is regarded as the most common form of cancer in women and it comprises of approximately 23 % of female cancers, while affecting women at any age range. For oestrogen receptor positive patients, tamoxifen is used as a prescribed medication for breast cancer therapy. However, tamoxifen in its natural form is not active to achieve the required treatment and prevention of breast cells proliferation. Since tamoxifen is a prodrug, it need to be converted into its active form, endoxifen, for which it is achieved by the action of the cytochrome P450 enzymes. Cytochrome P450 2D6 (CYP2D6) is a member of cytochrome P450 enzymes for which are superfamily of heme enzymes characterised by their ability to catalyse the oxidative reactions of compounds, including the pathway of tamoxifen metabolism. However, due to polymorphism that lead to inactive phenotypes of CYP2D6 in this gene, there is a challenge of diagnosing if a patient can metabolise tamoxifen or not. The current diagnostic tool, Amplichip CYP450, for CYP2D6 is based on genotypes, and it lead to uncertainness as to whether the presence of functionalCYP2D6 alleles of CYP2D6 may lead to coding of active protein, thus leading to wrong treatment measures and overdose of tamoxifen. Electrochemical techniques have provided reliable, simple, quick, and sensitive methods for the determination of drug metabolism by enzymes. Therefore, it is important to develop a CYP2D6 phenotype-based sensor to detect and tell whether a particular individual can metabolise the drug or not.

The base for rearing healthy calves is a high level of passive immunity, which protects calves in a challenging period after birth. In examined herd of the Holstein cows was evaluated the influence of selected factors on the level of passive immunization in 57 calves, expressed as total protein content in calf blood serum. The selected factors were: the quality of colostrum, the time of first intake of colostrum after birth, the weight and sex of calves. The proper level of passive immunization was found only in 33 (57, 9%) calves in the studied breed. Insufficient immunization resulted in a high mortality which reached rate of 10% in 2017. The level of the passive immunization was most affected by the quality of colostrum (P < 0, 001) and the time of first drinking after birth (P < 0, 0230). The other observed factors (calf weight and gender) were not statistically significant. Adequate care for the youngest age category is crucial and influences the profitability of the breed.

A ritmicidade biológica pode ser entendida como a expressão cíclica de um fenômeno biológico. Marcadores fisiológicos como a melatonina e a corticosterona estão sob a influência dos relógios endógenos e respondem a diferentes variações de intensidades de luz podendo estar envolvidos com alterações de comportamento. Vários relatos têm documentado aumento em suas concentrações na presença de situações estressantes. Esta dissertação teve como objetivo avaliar o efeito do padrão temporal sobre parâmetros comportamentais e bioquímicos na resposta ao estresse por restrição em ratos. Utilizou-se ratos Wistar machos com 70 dias (150-180g), divididos em 4 grupos por Zeitgebers (ZT): 0, 6, 12 e 18, subdividindo em: controle, imediatamente, 6 e 24 horas após uma sessão de estresse por restrição. Para a avaliação comportamental utilizou-se os aparatos de campo aberto (CA) e de Labirinto em Cruz Elevado (LCE). Foram analisados os níveis séricos de: corticosterona, melatonina, glicose e das atividades das enzimas NTPDases e 5’nucleotidases. Os dados foram expressos em Média+EPM, e analisados utilizando o teste ANOVA de uma via/SNK, P<0.05. As respostas comportamentais avaliadas no LCE mostraram um padrão temporal do número de PHD e NPHD, e no tempo gasto nos braços abertos e fechados. Os dados do CA apresentaram padrão temporal apenas no número de bolos fecais. A exposição ao estresse por restrição foi capaz de romper o padrão rítmico observado nos comportamentos avaliados no LCE e CA. Quanto aos biomarcadores sistêmicos observou-se que imediatamente após estresse há uma perda do padrão temporal dos níveis de corticosterona e 6 h após o estresse há um atraso de fase de ZT0 para ZT18, enquanto que 24 horas após o estresse os níveis retornam ao padrão temporal normal; imediatamente após o estresse houve uma supressão do pico normal de melatonina (ZT18), apresentando o pico pela manhã (ZT0); 6 e 24 horas após o estresse ocorreu uma perda de padrão temporal. Os níveis de glicose tiveram o maior pico em ZT18 similar à melatonina. Observou-se uma inversão do padrão rítmico associado a uma diminuição no ZT18 que permaneceu até 6 horas após nos níveis de glicose, imediatamente após o estresse, sendo que o padrão temporal retornou 24 horas após o estresse. Quanto à atividade enzimática, observou-se que o estresse agudo provoca uma diminuição na atividade das enzimas nucleotidases dependente do período do dia em que o animal é exposto ao estresse, e esse efeito parece persistir por pelo menos 24 horas. Os resultados dessa dissertação demonstram que o horário do dia o qual o experimento é realizado altera parâmetros bioquímicos e comportamentais influenciando os resultados obtidos, o que pode ser um confundidor na interpretação dos resultados. / The biological rhythm can be understood as an expression of a cyclic biological phenomenon. Physiological markers such as melatonin and corticosterone are under the influence of endogenous clocks and respond to different variations of light intensities may be involved in behavioral changes. Several reports have documented an increase in their concentrations in the presence of stressful situations. This work aimed to evaluate the effect of the temporal pattern of behavioral and biochemical parameters in response to stress by restraint in rats. We used male Wistar rats with 70 days (150-180g) were divided into four groups by Zeitgebers (ZT) 0, 6, 12 and 18, subdivided into: control, immediately, 6 and 24 hours after a session of stress restriction. For the behavioral assessment, we used the open field apparatus (OF) and Plus Maze (PM). We analyzed the serum levels: corticosterone, melatonin, glucose and activity of the enzymes NTPDase and 5'nucleotidase. Data were expressed as Mean + SEM, and analyzed using one-way ANOVA/SNK, P <0.05. Behavioral responses measured in the PM showed a temporal pattern in the number of PHD and NPHD, and time spent in open arms and closed. Data from OF showed only temporal pattern in the number of dung pats. Exposure to restraint stress was able to break the rhythm pattern observed in the behaviors evaluated in the PM and OF. In relation the systemic biomarkers was observed immediately after stress there is a loss of temporal pattern of corticosterone levels and 6 h after stress there is a phase delay of ZT0 to ZT18, whereas 24 hours after stress levels return to standard time normal; immediately after the stress showed a suppression of normal melatonin peak (ZT18), with the peak in the morning (ZT0), 6 and 24 hours after stress was a loss of temporal pattern. Glucose levels had the highest peak at ZT18 similar to melatonin. Observed a reversal of the rhythmic pattern associated with a decrease in ZT18, held until 6 hours after glucose levels immediately after stress, and the temporal pattern returned 24 hours after stress. In enzymatic activity, we observed that acute stress causes a decrease in activity of enzymes dependent nucleotidases time of day at which the animal is exposed to stress, and this effect seems to persist for at least 24 hours. The results of this dissertation show that the time of day which the experiment is performed biochemical and behavioral changes influencing the results, which may be a confounder in the interpretation of results.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-11-07Bitstream added on 2014-06-13T20:01:48Z : No. of bitstreams: 1 proenca_lm_dr_jabo.pdf: 902738 bytes, checksum: 24e7df923f783deb867689e53ad7c409 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Os Psittaciformes representam uma das ordens de aves mais comumente criadas como animais de companhia. A identificação de doenças em aves de companhia pode respresentar um desafio diagnóstico. A carência de dados a respeito de perfis normais para psitacídeos, como hemograma e perfil bioquímico sérico, são notórias no país. Pesquisas dessa natureza podem contribuir no diagnóstico e prognóstico de importantes doenças de aves criadas em cativeiro e de vida livre, dentre elas a clamidiose, zoonose de alta prevalência e com diagnóstico definitivo relativamente difícil, devido à complexa fisiopatogenia da infecção causada por Chlamydophila psittaci. Este estudo objetivou a realização do hemograma e o perfil bioquímico, inclusive as concentrações de imunoglobulinas e de proteínas de fase aguda, pela técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio - SDS-PAGE, de papagaios-verdadeiro (Amazona aestiva) e araras-canindé (Ara ararauna), de cativeiro, clinicamente saudáveis e o proteinograma em SDS-PAGE de papagaios-verdadeiro e araras-canindé de cativeiro positivos ou negativos para Chlamydophila psittaci. Os valores hematológicos, incluindo o hemograma e bioquímica sérica, foram determinados para ambas as espécies, demonstrando estar entre os intervalos de referência para as mesmas. O proteinograma sérico em SDS-PAGE permitiu a detecção de até 33 proteínas no traçado eletroforético de papagaios-verdadeiro sadios, e até 29 proteínas no traçado eletroforético de araras-canindé sadias. O proteinograma permitiu visualizar diferenças biologicamente importantes nas concentrações das proteínas de fase aguda e imunoglobulinas de papagaios-verdadeiro e araras-canindé positivos e negativos para C. psittaci, principalmente quanto a evidência da proteína de peso molecular 21 kDa, presente somente em papagaios-verdadeiro positivos... / Psittaciformes represent one of the most common orders of birds bred as pets. Disease identification in birds can represent a diagnostic challenge. The lack of data about normal ranges for psittacines, like hemogram and serum biochemistry are notorious in this country. Research regarding this subject can contribute to the diagnosis and prognosis of important diseases in captive and free-range birds. One of these diseases is clamidiosis, a zoonotic disease with high prevalence and with definitive diagnosis relatively difficult, because of the complex fisiopatogeny of the infection caused by Chlamydophila psittaci. The objective of this study was to determine the hemogram and serum biochemistry, including serum acute phase proteins and imunoglobulins using sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), of clinically healthy, adult, captive blue fronted amazon parrots (Amazona aestiva) and blue and gold macaws (Ara ararauna) and the SDS-PAGE proteinograma of blue fronted amazon parrots and blue and gold macaws testing positive and negative for clamidiosis. The hematological values, including hemogram and serum biochemistry, were determined for both species, showing to be between the normal reference ranges. The SDS-PAGE proteinogram allowed visualization of up to 33 proteins of healthy blue fronted amazon and up to 29 proteins of healthy blue and gold macaws. The proteinogram allowed visualization of important biological differences in the concentrations of acute phase proteins and imunoglobulins of blue fronted amazon parrots and blue and gold macaws, testing positive and negative for clamidiosis. Present only in parrots positive for clamidiosis was the molecular weight 21 kDa protein

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-01-30Bitstream added on 2014-06-13T19:41:09Z : No. of bitstreams: 1 capua_mlb_dr_jabo.pdf: 641370 bytes, checksum: 71b19a28f172b3515a32ed7c27977d96 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Dezoito cães com diagnóstico citopatológico e/ou histopatológico de linfoma foram avaliados quanto às alterações clínicas e clinico-patológicas. Os animais foram submetidos ao protocolo quimioterápico de Madison-Wisconsin e avaliados clinicamente a cada sessão de quimioterapia quanto à sua resposta ao tratamento. Cinqüenta por cento dos cães apresentaram a forma multicêntrica da doença e 33% a forma cutânea. A manifestação clínica mais comum foi a linfadenomegalia superficial, acompanhada dos sinais sistêmicos de hiporexia, apatia e perda de peso. As principais alterações hematólogicas foram anemia normocítica normocrômica, trombocitopenia e leucocitose, associadas às síndromes paraneoplásicas. Elevações nas atividades séricas de lactato desidrogenase foram observadas em 58% dos cães e a hiperproteinemia ocorreu em 38% dos animais, sendo atribuída principalmente ao aumento de globulinas séricas. Vinte e sete por cento dos animais atingiram remissão completa da doença e 33% atingiram sobrevida de seis meses. Houve correlação positiva entre o valor do hematócrito e o tempo de sobrevida para os cães que morreram, entretanto, o mesmo não foi observado para o valor de lactato desidrogenase. Sugere-se a ocorrência da síndrome da lise tumoral aguda para sete animais dado o intervalo de tempo observado entre a quimioterapia e o óbito e o avançado estágio da doença. A ausência de resposta às tentativas de reindução da remissão, observada em quatro cães, pode estar relacionada com o fenômeno de resistência tumoral aos agentes quimioterápicos. / Clinical and laboratorial evaluation were performed in eighteen dogs with cytopathological and/or histopathological lymphoma diagnosis. Animals underwent the Madison-Wisconsin chemotherapy protocol and were evaluated clinically at each session performed weekly. The multicentric and cutaneous forms of the disease were observed in 50% and 33% of the dogs, respectively. The most common clinical sign was superficial lymphadenomegaly, combined to systemic signs of hyporexia, apathy and weight loss. The main hematological changes were anemia, thrombocytopenia and leukocytosis, associated with paraneoplastic syndromes. Elevated serum activity of lactate dehydrogenase was observed in 58% of the dogs and hyperproteinemia in 38%, attributed to serum globulin increase. Complete remission was achieved in 27% of the animals and the six-month survival rate was 33%. There was a positive correlation between the hematocrit and survival time in dogs that died, however, there was no correlation between lactate dehydrogenase and survival time. The time interval between chemotherapy and death and the advanced stage of the disease in seven animals suggest the occurrence of acute tumor lysis syndrome. The absence of response to attempts of remission reinduction in four animals may be related to the drug tumoral resistance effect.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-11Bitstream added on 2014-06-13T19:45:10Z : No. of bitstreams: 1 barbosa_cp_dr_jabo.pdf: 277709 bytes, checksum: bb4ed336bed6a785faaefe8d1318a305 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A produção in vitro (PIV) de embriões em bovinos tem se estabelecido a cada dia como uma biotecnologia de uso frequente, devido à rapidez na multiplicação de produtos oriundos de fêmeas de alto valor genético. Este trabalho comparou a produção de ovários com e sem corpo lúteo (CL) de vacas Nelore, em relação à quantidade e qualidade de ovócitos recuperados, embriões produzidos, taxas de prenhez e proporção dos sexos após a PIV. Foram realizadas aspirações foliculares dos dois ovários em 250 seções, igualmente distribuídas em cinco grupos, sendo G1=fêmeas gestantes; G2=não gestantes, com CL e submetidas à tratamento hormonal com progestágeno+BE+PGF2µ; G3=não gestantes, sem CL e com o mesmo tratamento de G2; G4=não gestantes, com presença de CL e sem tratamento; G5=não gestantes, sem presença de CL e sem tratamento. Os resultados foram avaliados pela Análise de Variância (ANOVA) e aplicado o Teste de Tukey para comparação entre médias, a 5% de significância, pelo programa SISVAR. Já para comparação de proporção de sexos dentro e entre os grupos, foi utilizado o teste de comparação múltipla de proporções. O G4 produziu maior média de ovócitos totais aspirados que G2 e G3. Comparando os três grupos que apresentavam CL (G1, G2, G4), o G4 foi superior a G1 e G2 em ovócitos totais, no ovário com e sem CL. Em ovócitos viáveis, G2 foi superior a G1 no ovário com CL. Os ovários com CL produziram mais embriões do que os sem CL. As vacas gestantes produziram melhor nos ovários sem CL, com mais ovócitos viáveis (p<0,05) e iguais em embriões (p>0,05), em relação ao ovário com CL. As taxas de prenhez e proporção dos sexos foram semelhantes entre os grupos (p>0,05). A concentração de P4 foi diferente entre os grupos, mas não influenciou as variáveis analisadas. A utilização do tratamento hormonal não melhorou os resultados de nenhuma... / The in vitro production (IVP) bovine embryos has been established each day as a frequent use of biotechnology because of the speed of the multiplication products from females of high genetic value. This study compared the production of ovaries with and without corpus luteum (CL) of cows in relation to quantity and quality of oocytes aspirated, embryos obtained, pregnancy rates and sex ratio after the IVP. Follicular aspirations were performed on both ovaries in 250 sections, equally divided into five groups: G1 = pregnant, G2 = not pregnant, with CL and submitted to hormonal therapy with progestin+BE+PGF2µ; G3 = not pregnant, without CL and with the same treatment of G2; G4 = not pregnant, with the presence of CL and no treatment; G5 = not pregnant, without the presence of CL and no treatment. The statistical analysis was performed with analysis of variance (ANOVA) and the Tukey Test was applied to compare means at 5% significance level, by SISVAR program. To the comparison of sex ratio within and between groups was used the multiple comparison test of proportions. The G4 has produced higher mean total aspirated oocytes that G2 and G3. Comparing the three groups that had CL (G1, G2, G4), G4 was higher than G1 and G2 in total oocytes in ovaries with and without CL. G2 was superior to G1, on viable oocytes from ovary with CL. Ovaries with CL produced more embryos than those without CL. The ovaries without CL produced better in pregnant cows in despite of viable oocytes (p<0.05) and similar embryo production (p>0.05), when compared with ovaries presenting CL. Pregnancy rates and sex ratio were similar between groups (p>0.05). The P4 concentration was different between groups, but did not influence any variable. The use of hormonal treatment did not improve the results of any variable. The choice of donor for PIV is independent of hormone treatment or presence of CL

Les interactions protéine-ligand interviennent dans de nombreux processus biochimiques et permettent notamment à certaines protéines sanguines d’assurer leur rôle de transport. Parmi ces protéines figurent notamment l’albumine, protéine la plus abondante du plasma, ou l’apolipoprotéine A1 (ApoA1), majoritaire au sein des lipoprotéines de haute densité (HDL). Dans un contexte diabétique, la glycation des protéines induit des modifications structurales affectant ainsi leur potentiel d’interaction.Le premier objectif de ce travail de thèse visait à déterminer l’impact de la glycation de l’albumine sur sa liaison au liraglutide, un médicament de plus en plus utilisé dans le traitement du diabète de type 2. Ensuite, la seconde partie de ce travail a consisté en la production d’une ApoA1 humaine recombinante fonctionnelle afin d’étudier ses propriétés d’interaction, sous forme libre ou associée aux phospholipides. La technique RMN (résonance magnétique nucléaire) a été utilisée sur les protéines préalablement marquées au fluor (pour le liraglutide) ou aux isotopes stables 13C/15N (pour l’ApoA1). La titration microcalorimétrique isotherme (ITC), méthode complémentaire à la RMN a été appliquée pour l’étude des interactions avec l’avantage de ne nécessiter aucun marquage. Différentes stratégies de clonage ont été explorées pour la surexpression de l’ApoA1 en bactérie Clearcoli.Les résultats obtenus démontrent une altération de l’affinité de l’albumine pour le liraglutide in vitro et in vivo, dépendante du degré de glycation. Ces résultats, enrichis d’une analyse lipidomique et peptidique, permettent d’expliquer les observations cliniques concernant la baisse de l’efficacité de médicaments liant l’albumine chez les patients ayant un diabète mal contrôlé. Concernant l’ApoA1, le choix de l’étiquette de fusion reste à optimiser, mais sa surexpression de manière soluble et abondante a été obtenue pour l’ApoA1 marquée et non marquée. / Protein-ligand interactions are involved in many biochemical processes. They are notably implicated in the role of transporter proteins in blood. Albumin, the most abundant plasma protein, and apolipoprotein A1 (ApoA1), which is the main component of high-density lipoprotein (HDL) belong to this class of proteins. In the context of diabetes, proteins are altered by glycation which leads to structural modifications and potentially affect their interactions.The first objective of this work was to determine the impact of albumin glycation on its binding to liraglutide, a drug increasingly used in the treatment of type 2 diabetes. Then, the second part of this work involved the production of recombinant functional human ApoA1 in order to study its interaction properties, in its lipid-free form or associated with phospholipids. The NMR (nuclear magnetic resonance) technique has been used on proteins previously labeled with fluorine (for liraglutide) or stable 13C/15N isotopes (for ApoA1). In addition, isothermal titration microcalorimetry (ITC), has been applied to the study of interactions with the advantage of not requiring any labeling. Various cloning strategies have been explored for the overexpression of ApoA1 in Clearcoli bacteria.The results demonstrate an alteration of the affinity of albumin for liraglutide in vitro and in vivo, depending on the degree of glycation. These results, supported by a lipidomic and peptide analysis, explain clinical observations concerning the decrease of efficacy of albumin-binding drugs in patients with poorly controlled diabetes. Regarding ApoA1, the choice of the fusion tag remains to be optimized, but both labeled and unlabeled ApoA1 were successfully overexpressed at high yields in a soluble form.

O treinamento concorrente de força e endurance têm sido amplamente investigado em diversas populações. Contudo, poucos estudos compararam seus efeitos com o treino de força e endurance isolados em indivíduos idosos. Sendo assim, o objetivo desse estudo foi investigar os efeitos do treinamento concorrente na força e ativação muscular, capacidade de endurance e concentrações hormonais em homens idosos. Vinte e três homens saudáveis (65 ± 4 anos) foram divididos em 3 grupos: treino concorrente (GC, n=8), treino de força (GF, n=8) e treino aeróbio (GA, n=7). Cada grupo treinou 3 vezes por semana durante 12 semanas o treinamento de força, aeróbio ou ambos tipos de treinamento na mesma sessão. Antes e após o período de treino, os indivíduos foram avaliados em parâmetros relacionados à força muscular, ativação muscular isométrica e dinâmica, capacidade de endurance e concentrações hormonais. Houve aumento na força muscular dinâmica de membros inferiores em todos os grupos (P<0,05), sendo que o aumento percentual foi maior em GF (67%) do que GC (41%) e esse maior que em GA (25%) (ambos P<0,01). Somente GF e GC aumentaram a força de membros superiores (P<0,01). Houve aumento significativo na força isométrica e ativação muscular máxima somente em GF (P<0,05), bem como diminuição na ativação muscular submáxima isométrica para uma mesma carga em GF após o treinamento (P <0,05) nos músculos avaliados. Além disso, somente GC e GA aumentaram a capacidade de endurance (P<0,05), sem nenhuma diferença entre esses grupos, sendo que GC e GA diminuíram a atividade muscular dinâmica no reto femoral para uma mesma carga após o treinamento. Ainda, houve diminuição significativa na testosterona livre em GA (P<0,05). Os presentes resultados sugerem que os diferentes tipos de treinamento resultaram em diferentes adaptações em variáveis de performance, bem como parâmetros neuromusculares e endócrinos em indivíduos idosos. O efeito de interferência observado no treino concorrente pode estar relacionado com prejuízo nas adaptações neurais. / Concurrent strength and endurance training have been widely investigated in many populations. However, few studies have compared its effects with strength and endurance training separately. Thus, the aim of the present study was to investigate the effects of concurrent training on muscle strength and activation, endurance capacity and hormonal concentrations in elderly men. Twenty-three healthy men (65 ± 4 years) were matched in 3 groups: concurrent (CG, n=8), strength (SG, n=8) or aerobic training group (AG, n=7). Each one trained 3 times a week during 12 weeks strength, aerobic in cycle ergometer or both in the same session. Before and after training period, subjects were evaluated in parameters related to muscle strength, dynamic and isometric muscle activation, endurance capacity and serum hormones. There were significant increases on lower-body strength in all groups (P<0.05), with higher increases in SG (67%) than CG (41%) and both higher than AG (25%) (both P<0.01). Only SG and CG increased the upper-body strength (P<0.01). There were significantly increases in isometric strength and maximal muscle activation only in SG (P<0.05), as decreases in isometric submaximal muscle activation to the same load in SG (P <0.05) after training in the muscles evaluated. Indeed, only CG and AG have increases endurance capacity (P<0.05), with no differences between these groups, and both CG and AG decreased the dynamic muscle activation in rectus femoris to the same power after training. In addition, there were significant decreases on free testosterone in AG after training. The present results suggested that the different types of training resulting in different adaptations in performance variables, as like as neuromuscular and endocrine parameters in elderly subjects. The interference effect observed to concurrent training could be related with impairment of neural adaptations.