The present study was to evaluate the reproductive performance of broiler breeders fed different levels of protein and metabolizable energy treated with three different diets, varying amounts of metabolizable energy and crude protein. In one treatment, the heavy broiler breeders were fed a diet with 13.8% CP and 2750 Kcal / kg, 22 to 66 weeks of age. In treatment two, the roosters received the same ration provides for the females, being from 22 to 36 weeks of age containing 15% CP from 36 to 60 weeks, 15.2% CP and 60 to 66 weeks, 14% CP, all diets contained 2850 Kcal / kg. In treatment three, the breeding males fed a diet with15% CP and 2700 Kcal / kg from 22 to 66 weeks is old. The semen was collected from 16 rooster each treatment in three different ages of week, 34, 38, 43, 48 and 51 weeks. The semen collected was subjected to staining protocol with toluidine blue and subsequently evaluated by computer image analysis, with measurements of area, perimeter, homogeneity and intensity of compaction of chromatin in each head of spermatozoa. The roosters fed with high protein (15%) showed improve results in terms of compression and density of the heads of sperm chromatin. This same group had values of spermatozoa size smaller, which indicates minor morphological changes. It wasn t possible to correlate the onset and fertility with other data, as in this study there was no significant difference between treatments (p >0.05). Concerning the age of the rooster, regardless of the diet used, all treatments showed changes in chromatin compaction, and the roosters fed with 13.8% crude protein and 2750 Kcal / kg, showed greater changes in chromatin compaction. This can explain the decrease in fertility, usually observed in the field after this period, in flocks of broiler breeders. / O presente estudo teve como objetivo avaliar a morfometria e a compactação de cromatina em espermatozóides de reprodutores tratados com diferentes níveis de proteínas, e comparar as análises de compactação de cromatina com fertilidade e eclodibilidade, analisando a eficiência reprodutiva de galos reprodutores de corte. No tratamento um, os galos reprodutores pesados, foram alimentados com uma ração com 13,8% de Proteína Bruta (PB) e 2750 Kcal de EM/Kg, de 22 a 66 semanas de idade. No tratamento dois, os galos receberam a mesma ração fornecida para as fêmeas, sendo das 22 a 36 semanas de idade contendo 15% de PB, das 36 a 60 semanas, 15.2% de PB e das 60 a 66 semanas, 14% de PB, todas as dietas continham 2850 de Kcal de EM/Kg. No tratamento tres, os machos reprodutores foram alimentados com uma ração 15% de PB e 2700 Kcal de EM/Kg, de 22 a 66 semanas de idade. O sêmen de 16 galos foi coletado de cada tratamento, em três idades diferentes: 34, 38, 43, 48 e 51 semanas. O sêmen coletado foi submetido a protocolo de coloração com azul de toluidina, e posteriormente avaliado por análise de imagem computacional, com mensurações da área, perímetro, homogeneidade e intensidade da compactação da cromatina dentro de cada cabeça do espermatozóide. Os galos alimentados com elevado nível de proteína (15%) apresentaram melhores resultados em relação à compactação e a homogeneidade da cromatina das cabeças dos espermatozóides. Este mesmo grupo apresentou valores de tamanho de espermatozóides menores, o que indica menores alterações morfológicas. Não foi possível correlacionar a eclosão e fertilidade com os demais dados, pois neste estudo não houve diferença significativa entre os três tratamentos (p>0.05). Em relação à idade do galo reprodutor, independente da dieta utilizada, todos os tratamentos apresentaram alterações na compactação da cromatina, sendo que os galos alimentados com 13.8% de proteína bruta e 2750 Kcal de EM/Kg, apresentaram maiores alterações na compactação da cromatina. O que pode explicar a queda na fertilidade, geralmente observada no campo, após este período, em plantéis de matrizes pesadas. / Mestre em Ciências Veterinárias

Orientador: Wilma De Grava Kempinas / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T00:08:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Toledo_FabiolaChoquetade_M.pdf: 1000398 bytes, checksum: 9cf86bfc7f87dcc8b95868615ad606b2 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Nos últimos anos vem aumentando o reconhecimento mundial sobre a relevância da nutrição como pilar básico para o desenvolvimento econômico e social. Em países em desenvolvimento como o Brasil, por exemplo, a desnutrição é um problema sócio-econômico causado pela má alimentação e pela baixa renda. O nascimento de crianças com baixo peso é reconhecido como um importante problema de saúde pública, com efeitos devastadores no desenvolvimento, na sobrevivência e na saúde humana. Milhares de crianças têm seu crescimento retardado pela má nutrição, no entanto poucos trabalhos relacionam a desnutrição protéica materna e o desenvolvimento do sistema reprodutor. Dessa forma, o presente trabalho teve por objetivo avaliar o impacto da desnutrição protéica in utero sobre parâmetros morfofuncionais do trato reprodutivo masculino em diferentes fases do desenvolvimento sexual: pré-puberal, peripuberal e adulta, assim como sobre a instalação da puberdade em filhotes fêmeas, utilizando o rato como modelo experimental. Para tanto, foram obtidas ratas prenhes e divididas em dois grupos experimentais: grupo que recebeu ração padrão (n=12, grupo RP, 17% de proteína) e grupo que recebeu ração hipoprotéica (n=16, grupo RH, 6% de proteína) durante toda a prenhez. Durante a lactação os dois grupos experimentais receberam ração padrão. No 20º dia gestacional, 10 ratas (grupo RP n=4, grupo RH n=6) foram sacrificadas procedendo-se em seguida a laparotomia para avaliação da performance reprodutiva das progenitoras. As demais ratas prenhes (grupo RP n=8, grupo RH, n=10) foram mantidas para permitir o nascimento e amamentação dos filhotes. A restrição protéica provocou redução do peso placentário, aumento do consumo de ração das progenitoras durante o início da gestação e redução deste consumo no final da gestação e início da lactação. No entanto, esta variação no consumo de ração não foi suficiente para compensar o efeito da dieta hipoprotéica sobre o organismo materno e fetal, uma vez que o ganho de peso das progenitoras durante a gestação e o peso dos filhotes nas diferentes fases do desenvolvimento apresentaram redução significativa. Os filhotes fêmeas do grupo RH tiveram aumento da distância anogenital, sugerindo um processo de masculinização do fenótipo feminino. Nos filhotes de ambos os sexos a restrição protéica in utero provocou atraso no início da puberdade. Nos filhotes machos a restrição protéica provocou redução do peso testicular na fase pré-puberal e no adulto provocou danos em alguns parâmetros morfofuncionais do sistema reprodutivo reduzindo o peso do ducto deferente, o número de células de Sertoli, a motilidade espermática, a produção diária de espermatozóides e a reserva espermática na cauda do epidídimo. Os níveis séricos de testosterona foram reduzidos em 27% quando comparado ao grupo RP. Por outro lado, a incidência de espermatozóides com anormalidades morfológicas e retenção de gota citoplasmática aumentou. Assim, conclui-se que a restrição protéica in utero, nestas condições experimentais, provocou restrição de crescimento, comprometeu o desenvolvimento sexual, atrasando o início da puberdade e provocando danos espermáticos no adulto. / Abstract: In the past few years the worldwide recognition of the relevance of nutrition as a basis for social and economic development has been growing. In developing countries such as Brazil undernutrition is a socioeconomic problem caused by poor nutrition and low income. The birth of children with low birth weight is considered an important public health problem, with devastating effects on human development, survival and health. Although millions of children have their growth retarded due to poor nutrition, few works relate maternal proteic undernutrition to the development of the reproductive system. Thus, the objective of the present work was to evaluate the impact of in utero proteic undernutrition on morphofunctional endpoints in the male reproductive tract during the following phases of sexual development: prepubertal, peripubertal and adult, as well as on the installation of puberty in the female pups, utilizing the rat as the experimental model. For this, pregnant female rats were obtained and divided into two experimental groups: one treated with standard chow (SC, n=12, 17% protein) and the other treated with hypoproteic chow (HC, n=16, 6% protein) throughout gestation. During the lactation period the two groups received standard chow. On the 20th gestational day 10 rats (SC n=4, HC n=6) were sacrificed and laparotomy was performed to evaluate maternal reproductive performance. The remaining pregnant rats (SC n=8, HC n=10) were left to deliver and nurse the offspring. The proteic restriction provoked reduction in the placental weight, increase in the maternal chow consumption at the beginning of pregnancy and reduction at the end of pregnancy and beginning of lactation. However, this variation in the chow consumption was not sufficient to compensate for the hypoproteic effect on the maternal and fetal organisms, since the maternal weight gain over gestation and the weight of the pups in the different phases of the development were significantly reduced. The anogenital distance increased in the female pups of the HC group suggesting a process of masculinization of the female phenotype. In both sexes the in utero proteic restriction delayed pubertal installation. In the male offspring the proteic restriction caused reduction in the testicular weight at prepuberty and, at adulthood, damage to some of the morphofunctional endpoints of the reproductive system by reducing: the vas deferens weight, number of Sertoli cells, sperm motility, daily sperm production and sperm reserves in the epididymal cauda. Serum testosterone levels were lowered by 27% compared to the SC group. On the other hand, the incidence of sperm cells with morphological abnormalities and retention of the cytoplasmatic droplet increased. It was concluded that the proteic restriction in utero, in these experimental conditions, restricted growth, compromised the sexual development by delaying the beginning of puberty and leaded to damage in adulthood. / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O objetivo deste estudo foi verificar o efeito da adiÃÃo e da composiÃÃo do plasma seminal (PS) sobre as caracterÃsticas dos espermatozÃides epididimÃrios (EEP) de caprinos. Utilizaram-se oito machos caprinos para obtenÃÃo do PS, que foi obtido em coletas prÃvias e armazenado a -18o C atà que se procedessem a sua adiÃÃo aos EEP e as anÃlises bioquÃmicas. Os EEP foram obtidos da cauda do epidÃdimo pelo mÃtodo de castraÃÃo cirÃrgica. Do âpoolâ de EEP foram retiradas quatro alÃquotas de 100 μL, sendo que em duas delas foram adicionados 120 μL de PS e nas outras duas nÃo. Duas alÃquotas, uma com e outra sem PS, foram diluÃdas a uma concentraÃÃo de 200 x 106 sptz/ mL, no diluidor citrato-gema (CG) e no diluidor tris-gema (TG). As amostras foram avaliadas quanto ao vigor, à motilidade e à taxa de degradaÃÃo da motilidade (TDM) no seu estado fresco e pelo teste de termorresistÃncia lento, apÃs duas e 24 horas de conservaÃÃo. Para a determinaÃÃo dos nÃveis de frutose e de proteÃnas totais foram utilizados os kits especÃficos da In Vitro DiagnÃstico S/AÂ. A determinaÃÃo da atividade da fosfolipase A2 foi realizada pela tÃcnica do pH-stat. Para a anÃlise dos dados foi utilizado o programa estatÃstico SAS@. Os resultados demonstraram que a adiÃÃo de PS aos EEP diminuiu significativamente os parÃmetros seminais avaliados, exceto no diluidor TG quando os animais foram agrupados em funÃÃo da concentraÃÃo de proteÃnas totais do PS. AlÃm disso, o TG, quando utilizado para conservar os EEP adicionados de PS de baixa concentraÃÃo de frutose (540 mg/dL) preservou melhor as caracterÃsticas seminais avaliadas. Concluiu-se que a concentraÃÃo inicial de frutose no PS influenciou positivamente a qualidade de conservaÃÃo dos espermatozÃides epididimÃrios; jà a de proteÃnas totais afetou apenas a conservaÃÃo no CG e a intensidade de atividade da fosfolipase A2 nÃo interferiu na conservaÃÃo a 5 ÂC dos espermatozÃides epididimÃrios de caprinos / The objective of this study was to verify the effect of the addition and of the composition of the seminal plasma (SP) on the characteristics of the epididymal spermatozoa (ES) of goat. Eight goat males were used for obtaining of the biological material so that, the SP it was obtained in previous collections and stored at -18 oC until that proceeded to the addition to ES and the biochemical analyses. ES were obtained of the tail of the epididymal by the method of surgical castration. Four sample of 100 μL were removed from the "pool" of ES, and in two of them 120 μL were added of SP. Two sample, one with and other without SP, were diluted in a concentration of 200 x 106 sptz /mL, in the extender citrate-yolk (CY) and in the extender tris-yolk (TY). The samples were evaluated the vigor, motility and motility degradation rate (TDM) in fresh state and for the test of slow thermoresistence, after two and 24 hours of conservation. For the determination of fructose levels and total proteins were used specific kits of In Vitro DiagnÃstico S/AÂ. The determination of activity of the phospholipase A2 was realized by the technique of the pH-stat. For the analysis of the data was used the statistical program SAS@. The results demonstrated that the addition of SP to ES reduced seminal parameters significantly, except in the extender TY when the animals were to grouped in function of concentration of total proteins of SP. Besides, the TY, when used to conserve the ES added of SP with low fructose concentration (540 mg/dL) preserved the seminal characteristics better. It follows that the initial concentration of fructose in the seminal plasma influenced the quality of conservation of the epididymal spermatozoa; as for the total proteins just affected the conservation in the citrate-yolk and the intensity of activity of the phospholipase A2 did not interfere in the conservation at 5 ÂC of the epididymal spermatozoa of goat

Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2017-12-13T18:53:37Z No. of bitstreams: 2 Tese - Natalia do Carmo Silva - 2017.pdf: 2078936 bytes, checksum: a9911e8e1a6da63e31e4fb86a1dbf785 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-12-14T10:19:33Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Natalia do Carmo Silva - 2017.pdf: 2078936 bytes, checksum: a9911e8e1a6da63e31e4fb86a1dbf785 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-14T10:19:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Natalia do Carmo Silva - 2017.pdf: 2078936 bytes, checksum: a9911e8e1a6da63e31e4fb86a1dbf785 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-12-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The objective of this study was to evaluate the addition of antioxidants in different cryopreservation diluents on bovine semen quality after thawing and the in vitro production of embryos. First, the effects of adding different concentrations of glutathione (1.5 and 2.5 mM) and melatonin (0.5 and 1.0 mM) in egg yolk semen cryopreservation diluents (Bovimix®) and soy lecithin (Andromed®) were evaluated. The results showed that the addition of the antioxidant glutathione did not improve the maintenance of sperm characteristics of bovine semen. Melatonin had a negative effect on the spermatic parameters evaluated. The diluent Andromed® obtained better parameters of spermatic kinetics when compared with the diluent Bovimix®. However, in relation to the membrane integrity analyzes of the Bovimix® diluent showed better performance in the maintenance of these parameters. The effect of the cryopreservation diluents and the addition of glutathione in the vitro production of bovine embryos (PIVE) was then evaluated. The rate of cleavage, blastocyst rate and hatching were evaluated eight and nine days after IVF, as well as the correlation between sperm characteristics and PIVE. The diluent Andromed® provided a better cleavage rate, with no effect of the addition of glutathione in it. However, the addition of 2.5 mM glutathione in the Bovimix® diluent improved the cleavage rate. There was a significant correlation of high and low magnitude between some sperm characteristics with the rate of cleavage. It was concluded that glutathione did not improve sperm viability. Melatonin worsened the maintenance of sperm characteristics. Andromed® diluent was more efficient in the in vitro production of bovine embryos with no glutathione effect observed in this diluent. The addition of 2.5 mM glutathione in the egg yolk Bovimix® diluent gave a higher cleavage rate. In vitro evaluation of semen quality is not the best method to predict the fertilizer potential of the same in PIVE, because only significant low to moderate magnitude correlations were observed between some parameters of semen quality and fertilization rate. / Objetivou-se avaliar a adição de antioxidantes em diferentes diluentes de criopreservação sobre a qualidade do sêmen bovino pós-descongelação e a produção in vitro de embriões. Primeiramente, avaliou-se os efeitos da adição de diferentes concentrações de glutationa (1,5 e 2,5 mM) e melatonina (0,5 e 1,0 mM) em diluentes de criopreservação de sêmen à base de gema de ovo (Bovimix®) e lecitina de soja (Andromed®). Os resultados demonstraram que a adição do antioxidante glutationa não melhorou a manutenção das características espermáticas do sêmen bovino. A melatonina reduziu a qualidade das características espermáticas avaliadas. O diluente Andromed® obteve melhores variáveis de cinética espermática quando comparado com o diluente Bovimix®. No entanto, com relação às análises de integridade de membrana o diluente Bovimix® demonstrou melhor desempenho na manutenção dessas variáveis. Posteriormente, avaliou-se o efeito dos diluentes de criopreservação e a adição de glutationa sobre a produção in vitro de embriões bovinos (PIVE). Avaliou-se a taxa de clivagem, taxa de blastocisto e eclosão oito e nove dias após a fertilização (FIV), assim como a correlação entre as características espermáticas e as taxas de desenvolvimento embrionário. O diluente Andromed® proporcionou melhor taxa de clivagem, sem a necessidade da adição de glutationa no mesmo. Entretanto, a adição de 2,5 mM de glutationa no diluente Bovimix® melhorou a taxa de clivagem. Houve correlação significativa de alta e baixa magnitude entre algumas características espermáticas com a taxa de clivagem. Conclui-se que a glutationa não melhorou a viabilidade espermática. A melatonina reduziu a manutenção das características espermáticas. O diluente Andromed® foi mais eficiente na produção in vitro de embriões bovinos não sendo observado efeito da glutationa neste diluente. A adição de glutationa na concentração de 2,5 mM no diluente Bovimix®, à base de gema de ovo, proporcionou maior taxa de clivagem. A avaliação in vitro da qualidade do sêmen não é o melhor método para predizer o potencial fertilizante do mesmo na PIVE, pois só foram observadas correlações significativas de baixa a moderada magnitude entre algumas características de qualidade do sêmen e a taxa de fertilização.

O sucesso da fecundação e da sustentação do desenvolvimento embrionário subseqüente é dependente de atributos espermáticos relacionados à qualidade seminal. A produção in vitro de embriões em bovinos é uma ferramenta fundamental para a aceleração do ganho genético do rebanho, porém o uso comercial depende diretamente da melhoria do sistema de produções in vitrode embriões a um baixo custo. Técnicas que proporcionem melhoria da qualidade seminal possibilitando um incremento na produção in vitro de embriões e ainda a um baixo custo possuem apelo econômico. O laser de baixa potência emite ondas eletromagnéticas com efeitos biológicos. Este efeito é dependente dos parâmetros de irradiação e do tipo celular alvo. Trabalhos avaliando o laser de baixa potência em amostras seminais sugerem que seja utilizado para melhorar os atributos espermáticos e, conseqüentemente, a produção in vitro de embriões. Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito do laser de baixa potência sobre a viabilidade espermática e averiguar o efeito desta estimulação na produção in vitro de embriões bovinos. Para isso, amostras comerciais de sêmen criopreservado foram descongeladas e submetidas à irradiação com laser He-NE. No experimento 1 foram testadas as potências de 0; 5; 7,5 e 10mW, por 5 ou 10 minutos de tratamento. As amostras de sêmen foram avaliadas imediatamente após a irradiação e após 30 minutos de incubação. Foram verificadas possíveis interações duplas (Potência*Duração do Tratamento, Potência*Tempo e Duração do Tratamento*Tempo) e tripla (Potência*Duração do Tratamento*Tempo). No experimento 2 foi avaliado o efeito da melhor combinação potência X duração dos tratamentos utilizados no Experimento 1, para irradiar o sêmen utilizado para a produção in vitro de embriões. O laser de baixa potência apresentou efeito sobre diversos atributos relacionados à viabilidade espermática. Este efeito foi dependente da potência e da duração do tratamento. Nas condições experimentais, a potência de 5mW com duração de 10 minutos de aplicação sugere efeitos positivos no aumento na viabilidade espermática. No entanto, o tratamento de espermatozóides nesta potência e duração do tratamento, não apresenta incremento nas taxas de produção nem na qualidade embrionária. / Success of fertilization and the maintenance of subsequent embryo development rely on sperm attributes related to seminal quality. The in vitro production of bovine embryos is an essential tool for genetic gain in the herd. However, its commercial use directly depends on improvement of the production system at a low cost. Inexpensive techniques which provide an increase of seminal quality, allowing the increment of in vitro production of embryos are of great interest to cattle breeding. Low-power laser emits electromagnetic waves with biological effects. These effects are dependent of irradiation parameters and target cell type. Studies with seminal samples irradiated by low potency laser suggest its use to improve several sperm features and, therefore, in vitro production of embryos. This study aimed to evaluate the effect of low potency laser on sperm viability and fertilization ability of irradiated sperm. Briefly, in Experiment 1, samples of frozen/thawed commercial semen were subjected to He-NE laser irradiation. Laser potencies of 0, 5, 7.5 or 10mW were tested for 5 or 10 min of treatment. Samples were evaluated immediately and 30 min after irradiation. Double (Potency*Treatment length, Potency*Time and Treatment length*Time) and triple interactions (Potency*Treatment length*Time) were assessed. Afterwards, in Experiment 2, the effect of the best combination of potency and exposure length on in vitro production of embryos was verified. Low potency laser affected several semen attributes related to sperm viability. This effect was dependent on laser potency and the length of treatment. In the experimental conditions tested in this study, 5mW potency combined to 10 min of exposure had appeared to have positive effect of increasing sperm viability. However, 5mW potency laser for 10 min sperm irradiation did not improve in vitro embryo production rates and bovine embryo quality.

Durante a injeção intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) seleciona-se um espermatozoide móvel e morfologicamente normal para injeção em ovócito maduro. Evidências recentes indicam que mesmo espermatozoides aparentemente normais podem ocultar defeitos em nível molecular. O principal objetivo deste trabalho foi a descrição de um novo método capaz de selecionar espermatozoides maduros a partir de amostras não processadas em procedimento de ICSI. Em um estudo comparativo e prospectivo testou-se uma gota estendida modificada. A \"gota estendida com mecanismo contracorrente\" - GEMC foi montada em uma placa de ICSI padrão a partir de seis gotas de meio de cultivo (10 ?L). O posicionamento e união precisa das gotas deram origem a dois reservatórios e um canal, resultando em um fluxo de líquido através do canal. A adição de uma solução de PVP (polivinilpirrolidona) gerou um gradiente de viscosidade no final do circuito. Amostras seminais foram obtidas de 40 pacientes inférteis. Cada amostra seminal foi dividida em 4 alíquotas: uma alíquota para o processamento por centrifugação em gradiente de densidade (CGD), uma alíquota para a GEMC utilizando amostras não processadas, uma alíquota para a GEMC utilizando amostras processadas e uma alíquota para controle. Nos grupos GEMC uma média de 200 espermatozoides foram consecutivamente coletados, sem seleção, no reservatório de captura utilizando-se uma micropipeta de injeção como no procedimento convencional de ICSI. A morfologia espermática foi avaliada e demonstrou melhora, comparando-se com os controles, em todos os tratamentos utilizados. A imaturidade da cromatina foi avaliada utilizando-se o teste do azul de anilina. Em relação à imaturidade, 100% dos homens obtiveram melhores resultados tanto após o preparo por CGD quanto utilizando o método GEMC. Isto se refletiu em uma redução das formas imaturas de 28.65 ± 8.97% no sêmen fresco para 17.29 ± 7.72% após processamento por CGD (P < 0.01). Uma redução ainda maior nas formas imaturas foi obtida após o método GEMC quando comparado com o processamento por CGD: 0.89 ± 1.31% (P < 0.01) utilizando-se sêmen fresco e 1.05 ± 1.63% (P < 0.01) utilizando-se amostras processadas. Um novo método unindo seleção e captura de espermatozoides em um mesmo procedimento de ICSI foi descrito e testado. O método GEMC seleciona espermatozoides de forma fácil e permite o uso direto de amostras não processadas em procedimentos de ICSI. Este método seleciona espermatozoides maduros com mais eficiência do que o processamento por CGD. Novos estudos são necessários para se analisar o impacto do método nas taxas de fertilização, desenvolvimento embrionário, gravidez, implantação e abortamento / During intracytoplasmic sperm injection (ICSI) a motile spermatozoon with normal morphology is visually selected for insemination of an oocyte. Recent evidence indicates that even though the sperm appears morphologically normal, a possibility of defects at the molecular level still exists. The main objective of this work was to describe a novel approach capable of selecting mature spermatozoa from unprocessed semen sample in a one-step ICSI procedure. A modified extended drop was tested in a prospective comparative study. The \"Gota Estendida com Mecanismo Contracorrente - GEMC\" (Positive Rheotaxis Extended Drop - PRED) was assembled on a standard ICSI dish and consisted of six culture medium droplets (10 ?L). The precise merging of the drops created two reservoirs and a channel therefore the fluid flew through the channel. The addition of a PVP solution created a viscosity gradient in the final sector of the circuit. Semen samples were taken from 40 subfertile men. Each semen sample was divided into four aliquots: one aliquot for density gradient centrifugation (DGC), one aliquot for GEMC using fresh semen, one aliquot for GEMC using processed semen and one aliquot for the control. In GEMC a mean of 200 spermatozoa were collected consecutively, without selection, from the outlet reservoir with an injecting pipette as for conventional ICSI procedure. Sperm morphology was assessed and resulted in improvement compared to controls in all treatments. Chromatin immaturity was assessed using aniline blue assay. Regarding to chromatin immaturity, 100% of men had better results after DGC preparation and GEMC approach. This was reflected in a mean reduction from 28.65 ± 8.97% uncondensed chromatin in the native ejaculates to 17.29 ± 7.72% in DGC processed semen (P < 0.01). An even greater reduction was achieved after GEMC approach showing a mean of 0.89 ± 1.31% uncondensed chromatin compared to DGC processed sample (P < 0.01). A novel one-step ICSI approach joining sperm selection and recovery was developed and tested. This GEMC approach can select sperm easily and permits the direct use of native semen in ICSI. This approach can select sperm with lower chromatin immaturity than DGC method. Further studies need to access its relation to fertilization, embryo development, pregnancy, implantation and miscarriage rates

INTRODUÇÃO: A Região Metropolitana de São Paulo é a mais populosa do Brasil. A grande frota veicular contribui para uma maior concentração de poluentes atmosféricos. Diversos poluentes podem interferir na fertilidade humana, alterando os principais parâmetros seminais. Este estudo teve como objetivo avaliar a influência dos níveis atuais de poluição atmosférica de origem veicular nos parâmetros seminais em controladores de tráfego. MÉTODOS: Foram realizadas anamnese e avaliação clínica urológica (volume testicular, presença de varicocele, criptorquidia, má formações) em 62 controladores de tráfego da CET (grupo exposto) e 210 homens comprovadamente férteis do grupo de pré-vasectomia do ambulatório da urologia do HC-FMUSP (grupo controle). Os parâmetros seminais avaliados foram concentração, motilidade (quantitativa e qualitativa), morfologia pelos critérios da OMS e critério estrito de Kruger, teste para detecção de leucócitos e testes de função espermática, CK, ROS e anticorpo anti-espermatozóide. Parâmetros hormonais também foram avaliados. Avaliação de exposição à poluição foi realizada através da dispersão de poluentes registrado pela Cetesb, gerada pelo software SURFER 8.0. RESULTADOS: Os controladores de tráfego apresentaram volume testicular maior em relação ao grupo pré-vasectomia (p<0,001). Quanto aos níveis de Estradiol (p=0,119), LH (p=0,644), FSH (p=0,140) e Testosterona total (p=0,365), ambos os grupos apresentaram valores dentro da normalidade. A concentração espermática apresentou-se homogênea nos grupos (p= 0,395); os controladores de tráfego apresentaram média de 124,9 x 106/ml e os pré-vasectomia 110,1 x 106/ml. Os controladores de tráfego apresentaram motilidade quantitativa (total) reduzida (60%) em relação aos prévasectomia (65%) (p= 0,047). A motilidade qualitativa (progressiva) também se apresentou diminuída no grupo exposto (p<0,001). As morfologias espermáticas tanto pelo critério da OMS (grupo exposto = 12%; grupo controle = 20%), quanto pelo critério estrito de Kruger (grupo exposto = 3%; grupo controle = 6%) estavam significativamente diminuídas no grupo exposto em relação ao controle (p<0,001). O marcador de maturidade Creatina Quinase apresentou-se dentro da normalidade em ambos os grupos, porém maior no grupo controle (p<0,001). Anticorpos anti-espermatozóides estavam elevados nos dois grupos, porém não foi significativo (p=0,382). Radicais livres de oxigênio apresentaram-se em altas concentrações nos dois grupos, porém não foi significativo (p=0,141). CONCLUSÕES: A análise dos dados obtidos nessa pesquisa sugere que a poluição atmosférica exerce uma influência negativa sobre os parâmetros seminais motilidade e morfologia. Causa elevação dos níveis de ROS em todos os indivíduos, indicando perda da função espermática. Ainda demonstrou-se a elevação em todos os indivíduos dos níveis de anticorpos anti-espermatozóides, sugerindo que os poluentes teriam transposto a barreira hemato-testicular. O volume testicular do grupo exposto à poluição veicular apresentar-se maior em relação ao volume testicular do grupo controle nos leva a supor que isto se deva a uma reação inflamatória aos agentes poluidores. Apesar da diferença significativa na concentração de poluentes entre os grupos, uma correlação direta com parâmetros seminais não pôde ser demonstrada / Metropolitan Region of Sao Paulo is the most populous of Brazil. The huge number of vehicles contributes for a higher concentration of air pollutants. Various pollutants can interfere in human fertility, altering the main seminal parameters. The aim of this study was to evaluate the influence of air pollution of vehicular origin on seminal parameters of traffic controllers. Clinical history and urological evaluation (testicular volume, presence of varicocele, cryptorchidism, bad formations) were carried out in 62 traffic controllers (exposed group) and 210 proven fertile men from the pre-vasectomy group of urologic clinic at Hospital of Clinics University of Sao Paulo (control group). Seminal parameters evaluated were concentration, motility (quantitative and qualitative), morphology by WHO´s criteria and Kruger´s strict criteria, test for detection of leukocytes and tests of sperm function, CK, ROS and antisperm antibody. Hormonal parameters also were evaluated. Exposition to air pollution was analyzed through the dispersion of pollutants recorded by Cetesb, generated in the software SURFER 8.0. Traffic controllers presented bigger testicular volume than prevasectomy group (p<0,001). Hormonal levels were at normal range in both groups; Estradiol (p=0,119), LH (p=0,644), FSH (p=0,140) and Total Testosterone (p=0,365). Sperm concentration was homogeneous in both groups (p= 0,395); traffic controllers presented mean of 124.9x106/ml and pre vasectomy group 110.1x106/ml. The exposed group presented quantitative (total) motility (60%) diminished than control group (65%) (p=0,047). The qualitative (progressive) motility was also diminished in the exposed group (p <0,001). The sperm morphologies as by WHO´s criteria (exposed group = 12%; control group = 20%), as by Kruger´s strict criteria (exposed group = 3%; control group = 6%) were significantly diminished in the exposed group (p<0,001). The sperm maturity marker Creatine Kinase was at normal range at both groups, but higher in the control one (p<0,001). Antisperm antibodies was elevated in both groups, however it was not significant (p=0,382). ROS presented higher concentrations in both groups, however it was not significant (p=0,141). The facts presented in this study suggest that air pollution exercises negative effects on the seminal parameters motility and morphology. It causes elevation of ROS levels in all individuals, indicating loss of sperm function. It also showed, elevation of antisperm antibodies levels, suggesting that pollutants would have transposed the blood-testis barrier. The testicular volume in the exposed group was higher than the testicular volume of the control group; we can suppose that it must occur due to an inflammatory reaction against the polluting agents. Although the significant difference in pollutants concentrations between groups, no direct correlation to seminal parameters could be demonstrated

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-07-07T12:01:34Z No. of bitstreams: 1 camilamansomusso.pdf: 1354117 bytes, checksum: 80a41e3ea9a118d4e53ddb41bbbd54e6 (MD5) / Rejected by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br), reason: on 2017-07-07T12:39:38Z (GMT) / Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-08-11T13:30:26Z No. of bitstreams: 1 camilamansomusso.pdf: 1354117 bytes, checksum: 80a41e3ea9a118d4e53ddb41bbbd54e6 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-08-14T17:08:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 camilamansomusso.pdf: 1354117 bytes, checksum: 80a41e3ea9a118d4e53ddb41bbbd54e6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-14T17:08:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 camilamansomusso.pdf: 1354117 bytes, checksum: 80a41e3ea9a118d4e53ddb41bbbd54e6 (MD5) Previous issue date: 2014-02-24 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / É crescente o número de usuários de telefonia móvel. Em 2013, o número total de telefones móveis habilitados no mundo atingiu 6,8 bilhões. Uma queda nas taxas de fertilidade tem sido notada em todo o mundo; embora existam muitas razões para o declínio dessas taxas, um dos principais motivos é a infertilidade masculina. Existe uma preocupação crescente no meio científico com os efeitos da exposição à radiação eletromagnética de radiofrequência (RF-EMR) emitida por telefones celulares em relação à fertilidade em homens. Este estudo teve como objetivo avaliar a qualidade dos espermatozoides de ratos Wistar, após exposição do animal à RF-EMR. Ratos Wistar machos (Rattus notvegicus , com 90 dias de idade e 280 ± 20 g de massa corporal, foram expostos à radiofrequência emitida por telefones celulares (1,8 GHz) por períodos de 3 e 10 noites. As amostras de secreção epididimária foram extraídas da cauda do epidídimo dos animais. Foi realizado o ensaio TUNEL para a marcação dos espermatozoides com DNA fragmentado e estes foram quantificados por citometria de fluxo e a concentração de espermatozoides, morfologia e mortalidade foram também avaliadas. As amostras dos animais de ambos os grupos expostos, 3 e 10 noites, apresentaram um aumento da mortalidade e uma diminuição da concentração de espermatozoides, além de um aumento da incidência de fragmentação do DNA, o que é um indicativo de apoptose. Não houve diferença significativa entre os grupos na porcentagem de espermatozoides morfologicamente normais e anormais. Diante dos resultados do presente estudo, especulamos que a RF-EMR emitida por telefones móveis afeta negativamente a qualidade do sêmen e pode prejudicar a fertilidade masculina. / The mobile communication system has grown over the years. The total number of mobile phone subscriptions reached 6.8 billion in 2013. Decreasing fecundity and fertility in men have led to growing concern about the hazardous effects of exposure to radiofrequency electromagnetic radiation (RF-EMR) on reproductive organs. This study aimed to analyze the sperm quality of rats after whole-body RF-EMR exposure. Male Wistar rats, 90 days old, were exposed to radiofrequency emitted by mobile phones (1.8 GHz) for periods of 3 and 10 nights. Apoptosis was tested using TUNEL assay, sperm morphology and mortality were assessed by Shorr and Eosin stain methods respectively, and the cell count was performed. Both exposed groups showed significantly increased mortality and reduced sperm concentration along with significant increase in the apoptosis incidence compared to the respective control groups. Given the results, we speculate that RF-EMR exposure negatively affects semen quality and may impair male fertility.

Orientador: Luis Guillermo Bahamondes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T05:07:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hermanny_Alexia_D.pdf: 843759 bytes, checksum: 4b2ff42ff4ef1f995e85e5f8b86bf7f2 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: O mecanismo de ação do levonorgestrel (LNG) na anticoncepção de emergência (AE) ainda não está totalmente esclarecido e seu efeito nas funções espermáticas também não está explicado. Os objetivos deste trabalho foram avaliar se o LNG, em dose igual à observada após a ingestão oral para AE, poderia afetar espermatozoides expostos in vitro à tuba uterina humana e realizar uma revisão bibliográfica sobre o efeito do LNG nas diferentes funções espermáticas. Foram realizados 15 experimentos. As tubas uterinas foram removidas através de mini-laparotomias e foram perfundidas com uma suspensão contendo 1x106 espermatozoides móveis, com e sem LNG. A tuba correspondente ao lado onde o folículo dominante estava presente recebeu a suspensão com LNG em pacientes alternados. Após um período de incubação de 4 horas, o istmo e a ampola de cada tuba foram separados. Cada segmento foi lavado separadamente e o material obtido foi avaliado quanto ao número de espermatozoides móveis recuperados, número de espermatozoides aderidos ao epitélio tubário e taxa de reação acrossômica (RA). A presença do LNG não afetou significativamente o número de espermatozoides móveis recuperados do istmo e da ampola, e não afetou o número de espermatozoides aderidos ao epitélio tubário. O LNG também não influenciou a taxa de RA. Diferenças significativas também não foram observadas quando o lado ovulatório foi considerado. A revisão bibliográfica realizada deixou evidente que existem poucos estudos que analisam a influência do LNG como AE sobre as funções espermáticas, apesar de este ser um possível mecanismo de ação. Além disso, os estudos revisados utilizam diferentes métodos de avaliação e os resultados são, muitas vezes, contraditórios. De acordo com os resultados observados na literatura, quando o LNG é usado na AE, provavelmente não atinge concentração plasmática suficiente para ser reconhecido pelos receptores de progesterona (P). Resultados positivos só foram observados quando a dose de LNG utilizada nos experimentos foi comparável ao sistema intrauterino liberador de LNG (SIU-LNG), ou seja, muito maior que a utilizada na AE. O LNG, em dose similar à observada no plasma após a ingestão oral para AE, não afetou o número, a aderência ao epitélio tubário, a distribuição e a taxa de RA de espermatozoides na tuba uterina humana, in vitro. De acordo com os resultados observados na literatura, se o LNG, na concentração utilizada para AE, afeta ou não a função espermática ainda não está claro, e mais estudos são necessários / Abstract: The mechanism of action of levonorgestrel (LNG) as emergency contraception (EC) is still under debate and the effect upon sperm function is partially explained. The aim of this study was to assess if LNG in a similar dose to those observed in serum after oral intake for EC could affect the spermatozoa when exposed in vitro to human tubes and also to give an overview of the effect of LNG as EC on several sperm functions. Fifteen mini-laparotomies were performed, the ovulatory side was recorded and both tubes were removed and perfused with a suspension of 1x106 of motile spermatozoa, one with LNG and the other without it. After an incubation period of 4hours the tubes were cut to separate the isthmus and the ampulla. Each segment was flushed and the material was evaluated regarding the motile sperm number, the number of spermatozoa adhering to the oviductal epithelium and acrosome reaction (AR) rate. The addition of LNG did not significantly affect the number of recovered spermatozoa neither at the isthmus nor at the ampulla or the number of recovered spermatozoa adhered at the human tubal epithelium. Additionally, LNG did not influence the rate of AR. There were no significant differences even when the ovulatory side was taken into account. The present review showed that there are few studies which focus on the influence of LNG as EC upon sperm functions; albeit it is a plausible mechanism of action. Additionally, the different studies used different methods of evaluation and the results were in many cases contradictories. According to the results observed at the literature, when LNG is used as EC, it is probable that the drug does not achieved sufficient serum concentrations in order to be recognized by the progesterone (P) receptors. Positive results only were observed when the dose of LNG used in the experiments was much higher (comparable to the LNG-IUS) than the proposed for EC. LNG in a similar dose to that observed in serum after oral intake for EC did not affect the number, the adhesion to tubal epithelium, distribution, and AR rate of spermatozoa at the human Fallopian tubes in vitro. According to the results observed at the literature, if the LNG in doses used for EC, affects sperm function or not, it is still uncertain and warrants further studies / Doutorado / Fisiopatologia Ginecológica / Doutor em Ciências da Saúde

Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2016-09-23T13:21:50Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_fernanda_santos.pdf: 546934 bytes, checksum: 93c3d8b5c22732ee2c5eb72d5be87606 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2016-09-23T16:04:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_fernanda_santos.pdf: 546934 bytes, checksum: 93c3d8b5c22732ee2c5eb72d5be87606 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-23T16:04:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_fernanda_santos.pdf: 546934 bytes, checksum: 93c3d8b5c22732ee2c5eb72d5be87606 (MD5) Previous issue date: 2014-07-02 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / O resfriamento seminal tem como intuito o prolongamento da viabilidade espermática e capacidade fecundante pela redução no metabolismo energético dos espermatozoides, proporcionando período hábil para transporte do sêmen do garanhão até a égua. O processo de resfriamento pode resultar em alterações ultraestruturais, bioquímicas e funcionais na célula espermática. O objetivo deste experimento foi avaliar o efeito do extrato de própolis verde adicionado ao diluente para resfriamento de sêmen equino a 5ºC. Para isso, foram coletados 4 ejaculados de 5 garanhões da raça Crioula e Quarto de Milha (n=20). Estes ejaculados foram submetidos aos seguintes tratamentos: controle (diluente a base de leite desnatado) e grupos com adição de extrato de própolis verde em diferentes concentrações (2,5μl/mL; 5μl/mL; 7,5μl/mL; 10μl/mL). As análises espermáticas incluíram motilidade, funcionalidade mitocondrial, integridade de membrana plasmática, DNA e acrossoma, sendo utilizados ejaculados contendo ≥70% de células íntegras ás 0h. As avaliações foram realizadas ás 0; 30; 60; 120; 180; 240; 300; 360 e 1440 minutos durante o resfriamento a 5ºC. Os parâmetros seminais diminuíram de acordo com o aumento do tempo em resfriamento em todos tratamentos (P<0,05). A motilidade espermática atingiu 0% em 360 minutos nos tratamentos com própolis. A adição de extrato de própolis verde ao diluente de resfriamento seminal manteve as características estruturais da célula espermática equina, no entanto prejudicou as caraterísticas funcionais. / Seminal cooling aims to prolong spermatic lifespan and fertilizing capacity due to reduction in energy metabolism of spermatozoa, providing enough period for transportation from the stallion to the mare. Cooling process can result in ultraestructural, biochemical and functional alterations to spermatozoa. The aim of this study was to evaluate the effect of green propolis hydroalcoholic extract (GPHE) added into equine semen extender and stored at 5ºC. For that, semen was collected from five stallions (Crioulo and Quarter horse) in four opportunities (n=20). These ejaculates were submitted to the following treatments: control group (skim milk glucose semen extender) and groups with the addition of green propolis extract in different concentrations (2,5μl/mL; 5μl/mL; 7,5μl/mL; 10μl/mL). Seminal analyses included motility, mitochondrial functionality, integrity of plasma membrane, DNA and acrossome, being used ejaculates with ≥70% of intact cells. Evaluation was performed at 0; 30; 60; 120; 180; 240; 300; 360 and 1440 minutes during cooled storage at 5ºC. Seminal parameters declined according to storage time in all treatments (P<0.05). Sperm motility reached 0% in 360 minutes in the groups with propolis. The addition of green propolis extract into the semen extender maintained structural characteristics of stallion sperm cell, however it was detrimental no functional characteristics.