OOTANI, Marcio Akio. Prospecção e atividade de actinobactérias de solo e de rizosfera de plantas da caatinga para controle do Colletotrichum musae (Berk. & M.A. Curtis) Arx. 2016. 99 f. Tese (Doutorado em Fitotecnia)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-07-12T21:10:08Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_maootani.pdf: 1564232 bytes, checksum: f47a9adf7ea8574b370e9638f8fa9a14 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-07-12T22:28:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_maootani.pdf: 1564232 bytes, checksum: f47a9adf7ea8574b370e9638f8fa9a14 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-12T22:28:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_maootani.pdf: 1564232 bytes, checksum: f47a9adf7ea8574b370e9638f8fa9a14 (MD5) Previous issue date: 2016 / Banana is one of the most consumed fruits in the country, economically important for Brazilian agriculture. However, production has been limited mainly by diseases in the field and post-harvest losses caused by fungi, including anthracnose, caused by Colletotrichum musae. The most recommended treatment for the control of this disease is the use of synthetic fungicides, which leave residues in the fruit and can lead to resistance of the pathogen. The use of antagonistic microorganisms and their metabolites may be a viable option for the control of the disease. Among these microorganisms the actinobacteria can be considered an alternative, due to the already known production of bioactive metabolites of the group. Studies on the antagonistic action of actinobacteria isolated from soil and rhizosphere of plants of the Caatinga biome are still scarce. This work aimed to prospect and isolate actinobacteria from the soil and the rhizospheric region of Caatinga plants, as well as to test the crude extract of bioactive isolates of these representatives of this group against C. musae, anthracnose agent in banana fruits. To obtain the actinobacteria isolates, the soil samples were submitted to pre-treatments with heat in comparison with the ambient temperatures, also with phenol in five concentrations. These tests were performed in different selective media, with four replicates. Subsequently, the effect of light on the number and diversity of actinobacterial colonies was evaluated. After this test it was concluded that the photoperiod increases the development of isolated actinobacteria colonies. As for the antagonism of the isolates obtained in relation to C. musae, metabolic activity was observed based on minimum inhibition concentration (MIC) and minimum fungicidal concentration (MFC). For the in vivo antagonism test against the banana anthracnose agent, crude extract of the actinobacteria isolates that were most active in the colony pairing test were tested, one of them being selected for its greater antagonism, it was then tested in different Concentrations and forms and time of application. It was concluded that the best concentration of the selected metabolite for the control of C. musae was 100 mg.ml-1, when applied to the surface of the fruit about 1 hour and 30 minutes before the pathogen. Therefore, of the more than 300 isolates obtained, only one had its metabolite effectively active in the antagonism to the target fungus, which is identified as Streptomyces showdoensis. / A banana é uma das frutas mais consumidas no país, economicamente importante para a agricultura brasileira. No entanto, a produção tem sido limitada principalmente por doenças no campo e perdas na pós-colheita causadas por fungos, incluindo antracnose, causada por Colletotrichum musae. O tratamento mais recomendado para o controle dessa doença é o emprego de fungicidas sintéticos, os quais deixam resíduos no fruto e podem levar à resistência do patógeno. A utilização de microrganismos antagonistas e seus metabólitos pode ser uma opção viável para o controle da doença. Entre estes microrganismos as actinobactérias podem ser consideradas uma alternativa, devido à já conhecida produção de metabólitos bioativos do grupo. Estudos sobre a ação antagonista de actinobactérias isoladas de solo e de rizosfera de plantas do bioma Caatinga ainda são escassos. Este trabalho teve como objetivo prospectar e isolar actinobactérias do solo e da região rizosférica de plantas da Caatinga, bem como testar o extrato bruto de isolados bioativos desses representantes desse grupo contra C. musae, agente da antracnose em frutos de banana. Para obtenção dos isolados de actinobactérias, as amostras de solo foram submetidas a pré-tratamentos com calor em comparação com as temperaturas ambientes, também com fenol em cinco concentrações. Estes testes foram realizados em diferentes meios seletivos, com quatro repetições. Posteriormente, avaliou-se o efeito da luz na obtenção do número e diversidade de colônias de actinobactérias. Depois deste teste concluiu-se que o fotoperíodo aumenta o desenvolvimento de colónias isoladas actinobactérias. Quanto ao antagonismo dos isolados obtidos em relação a C. musae, verificou-se atividade de metabólitos com base na concentração mínima de inibição (MIC) e concentração fungicida mínima (MFC). Para o teste de antagonismo in vivo contra o agente da antracnose da banana, extrato bruto dos isolados de actinobactérias que foram mais ativos no teste de pareamento de colônias foram testados, sendo um deles selecionado pelo seu maior antagonismo, este então, foi testado em diferentes concentrações e formas e tempo de aplicação. Concluiu-se que a melhor concentração do metabólito selecionado para o controle de C. musae foi 100 mg.ml-1, quando aplicado à superfície do fruto cerca de 1 hora e 30 minutos antes do agente patogênico. Portanto, dentre mais de 300 isolados obtidos, apenas um teve seu metabólito efetivamente ativo no antagonismo ao fungo alvo, sendo esse identificado como Streptomyces showdoensis.

As interações que ocorrem entre as bactérias e amebas podem dar-se através de relações mútuas, onde ambos os organismos se beneficiam da associação ou parasitárias em que um organismo se beneficia em detrimento do outro. A convivência de vários microrganismos que compartilham o mesmo ambiente pode produzir alterações seja no crescimento dos organismos, nos padrões de adaptação, na morfologia, no seu desenvolvimento, ou até mesmo na sua capacidade para sintetizar proteínas e metabólitos secundários. Neste estudo, é avaliada a interação entre Acanthamoeba polyphaga e Streptomyces sp. através de cocultivo, com objetivo de obter extratos brutos com ação antimicrobiana. No cocultivo, as amebas inviabilizaram na presença da bactéria. Após contato com as amebas houve alteração morfológica em Streptomyces sp. em todos os tempos de incubação, com produção de hifas, diferente do controle que permaneceu na fase de esporos. A partir do cocultivo foi possível obter extrato bruto em 50 dias, sendo avaliados em diferentes tempos de incubação (1º, 7º, 14º, 21º e 28º dias), contra bactérias multirresistentes como Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa, mostrando atividade antimicrobiana, tanto no cocultivo quanto no controle. Com análise estatística foi possível verificar que os extratos produzidos em 24 horas (1º) apresentaram maior atividade, especialmente contra P. aeruginosa. Os extratos produzidos pelo cocultivo e controle se comportaram diferentemente um do outro, porém as diferenças não foram estatisticamente significativas. Em relação à biomassa produzida, foi observado maior volume de biomassa no cocultivo, do que no controle, indicando que o contato entre os dois microrganismos favoreceu a produção de massa celular, porém não houve diferença significativa, somente quando comparado entre dias. Estes resultados mostram que há interação entre Acanthamoeba e Streptomyces uma vez que, a bactéria se beneficiou da ameba auxiliando no seu desenvolvimento. Esta interação entre os microrganismos pode ser importante na modulação da produção de substâncias de ação antimicrobiana, fato que ainda necessita investigação. / The interactions that occur between bacteria and amoebas can give through mutual relations, where both organisms benefit from the association or parasitic in which one organism benefits at the expense of the other. The coexistence of various microorganisms share the same environment can produce alterations in the growth of the organisms is, patterns of adaptation in morphology, development, or even in their ability to synthesize proteins and secondary metabolites. This study evaluates the interaction between Acanthamoeba polyphaga and Streptomyces sp. through cocultivation, in order to obtain crude extracts with antimicrobial action. In cocultivation, amoebas made it impossible in the presence of the bacteria. After contact with amoebae were morphological changes in Streptomyces sp. All incubation times with hyphae production, different control spores this remained in phase. From the cocultivation it was possible to obtain crude extract in 50 days, being evaluated in different incubation times (1º, 7º, 14º, 21º and 28º days), against multiresistant bacteria such as Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa, showing antimicrobial activity in both the cocultivation and in control. With statistical analysis found that the extracts in 24 hours (1º) showed greater activity, especially against P. aeruginosa. The extracts produced by the coculture and control behaved differently from one another, but the differences were not statistically significant. Regarding the biomass produced, there was a higher volume of biomass in cocultivation, than in the control, indicating that the contact between the two organisms favored the cell mass production, but there was no significant difference only when compared between days. These results show that there is interaction between Acanthamoeba and Streptomyces since the bacteria benefited amoeba assisting in their development. This interaction between microorganisms may be important in modulating the production of antimicrobial substances, a fact that still requires investigation.

O gênero Streptomyces é conhecido por produzir uma ampla variedade de moléculas bioativas como antimicrobianos, enzimas, agentes antitumorais, antivirais, promotores de crescimento, entre outros. Pesquisas com este grupo de microrganismos têm sido realizadas há mais de 60 anos, no entanto, estudos recentes demonstram que este grupo representa uma fonte inesgotável de novas moléculas bioativas. Neste trabalho, foi avaliada a atividade antimicrobiana de 25 isolados de Streptomyces. Para tanto foram empregados 53 microgansimos teste, incluindo bactérias Gram positivas, Gram negativas, leveduras e fungos filamentosos. A atividade antimicrobiana foi determinada pela técnica da dupla camada. Os isolados que apresentaram melhor atividade antimicrobiana foram cultivados em cultura submersa, sob diferentes condições de cultivo (meio de cultivo, tempo e temperatura). Dos 25 isolados 80 % apresentaram atividade antimicrobiana, destes 80% apresentaram atividade antibacteriana e 45% atividade antifúngica. Dos isolados que apresentaram atividade antimicrobiana 40% apresentaram um amplo espectro, inibiram mais de dez microrganismos teste. Duas linhagens identificadas como Streptomyces sp 1S e Streptomyces sp. 50 foram selecioandos para estudos de produção e caracterização. Streptomyces 1S inibiu 46 microrganismos teste e o isolado 50 foi ativo especialmente contra Enterococcus multiresistentes. A caracterização morfológica, bioquímica e a análise da seqüência parcial da região 16S do rDNA, demonstram a grande diversidade deste grupo de microrganismos e auxiliaram na identificação em nível de gênero. As melhores condições para a produção de metabólitos bioactivos, bem como a caracterização destes isolados são reportados no presente estudo. Foi observado que as condições ambientais e do substrato são fundamentais na produção de metabólitos secundários especialmente antimicrobianos. / Streptomyces genus are well- know due to its high capacity to produce innumerous bioactive metabolites such as, enzymes, antitumour agents, immunomodifying agents, vitamins, growth promoters, and antibiotic compounds among others. Research with this group of microorganisms has been realized since de sixties. However, more recent research has shown that this group still is a very important resource of new secondary metabolites, especially antibiotics. In this work the antimicrobial activity of 25 Streptomyces strain, was evaluated against 53 test microorganisms including Gram positive and negative bacteria, filamentous fungi and yeasts with clinical and agricultural interest. The antimicrobial activity in the first screening was realized using the double layer method. The strains that showed potential results in the first screening were grown on submerge culture in different growth conditions of temperature, culture media and time of growth. From the 25 Streptomyces isolates tested 80% showed antimicrobial activity, out of that 80% presented antibacterial activity and 45% antifungal activity. Out, from the isolates that showed antibacterial activity 40% presented a wide spectrum of activity, inhibiting more than 10 microorganisms. Two strains were selected for further studies, Streptomyces sp. 1S and Strepomyces sp. 50. Isolate 1S was chosen because it was able, in the antimicrobial screening, to inhibit 46 test microorganisms. Isolate 50 showed especial activities against multiresistent Enterococcus sp. This two isolates were submitted to morphological and biochemical characterization and the analysis of partial 16S rDNA sequence was done. The results confirmed the high diversity of this genus, and with the results obtained only the genus was possible to be confirmed. The best growth conditions for metabolites production and the characterization of the isolates are described in this work. It has been observed that the environmental conditions are extremely important for the production of secondary metabolites, especially antibiotics.

Orientador: Maria Lucia Gonsales da Costa Araujo / Banca: Sandra Regina Pombeiro Sponchiado / Banca: Carlos Osamu Hokka / Resumo: O ácido clavulânico (AC) é um composto β-lactâmico que, apesar de não ter atividade antibiótica significativa, é um potente inibidor de β-lactamases produzidas por bactérias resistentes a antibióticos β-lactâmicos. O efeito sinérgico do AC com penicilinas e cefalosporinas resulta no bloqueio do sítio ativo de β-lactamases e, assim, protege aqueles antibióticos conferindo-lhes um maior espectro de ação. O AC é produzido industrialmente por linhagens de Streptomyces clavuligerus em meios contendo fontes de N provenientes de matérias primas vegetais de baixo custo que rendem altas concentrações de produto. Porém, estes complexos protéicos, assim como estimulam o crescimento e a produção, também podem conter componentes desconhecidos que afetam negativamente o processo. Neste contexto, a utilização de meios sintéticos contendo aminoácidos (AA) pode ser uma boa alternativa. A maioria dos AA é bem assimilada por S. clavuligerus mas apenas alguns favorecem a produção de AC. Asn e Pro, por exemplo, favorecem o crescimento celular, enquanto Orn e Arg são precursores do AC e estimulam sua síntese. Desta forma, meios contendo aminoácidos como fontes de N podem apresentar vantagens significativas, pois, além de direcionar o processo de produção de AC, resultam em caldos mais homogêneos e menos viscosos que promovem melhorias na transferência de massa e calor, nas condições de monitoramento e controle, bem como nos processos de separação, recuperação e purificação do produto. No presente trabalho, utilizou-se a metodologia de planejamento fatorial de experimentos 22, com replicatas do ponto central, para otimizar empiricamente a proporção molar entre glicerol e Orn do meio suplementar sintético de processo contínuo intermitente em frascos agitados agitados (250 rpm, 28ºC). A etapa contínua era iniciada após 48 h de batelada...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The clavulanic acid (CA) is a β - lactam compound that despite not having significant bioactivity, is a potent inhibitor of β - lactamases produced by bacteria resistant to β - lactam antibiotics. The synergistic effect of CA with penicillins and cephalosporins results in blockade of the active site of β - lactamases and protects those antibiotics by giving them a greater spectrum of action. The CA is industrially produced by strains of Streptomyces clavuligerus in media containing N source of low-cost vegetable raw materials that yield high concentrations of the product. However these complex media, as well as stimulates growth and the production, may also contain unknown components that affect negatively the process. Then the use of synthetic media containing amino acid (AA) may be a good alternative. Most of AA is well metabolized by S. clavuligerus but only some of them induce the production of CA. Asn and Pro, for example, promote cell growth, while Orn and Arg are precursors of CA and stimulate its synthesis. Thus media containing amino acids may be significantly advantageous because, in addition to provide a direction for the process, result in more homogeneous and less viscous broths that promote improvements in heat and mass transfer, monitoring and controlling of the process, as well as in the processes of separation, recovery and purification of the product. In this work, the factorial design 22 of experiments methodology was used to optimize empirically the molar ratio between glycerol and Orn of the synthetic supplementary medium of an intermittent continuous process in shaken flasks (250rpm, 28ºC). The continuous process started after 48 h of batch process in a medium containing glycerol as limiting substrate, proteic extract from soybean (Soytone) as the main source of N and salts (pH 6,8 ± 0,2). Sampling and medium supplementation were accomplished every 24 h,...(Complete abstract, click electronic access below) / Mestre

As interações que ocorrem entre as bactérias e amebas podem dar-se através de relações mútuas, onde ambos os organismos se beneficiam da associação ou parasitárias em que um organismo se beneficia em detrimento do outro. A convivência de vários microrganismos que compartilham o mesmo ambiente pode produzir alterações seja no crescimento dos organismos, nos padrões de adaptação, na morfologia, no seu desenvolvimento, ou até mesmo na sua capacidade para sintetizar proteínas e metabólitos secundários. Neste estudo, é avaliada a interação entre Acanthamoeba polyphaga e Streptomyces sp. através de cocultivo, com objetivo de obter extratos brutos com ação antimicrobiana. No cocultivo, as amebas inviabilizaram na presença da bactéria. Após contato com as amebas houve alteração morfológica em Streptomyces sp. em todos os tempos de incubação, com produção de hifas, diferente do controle que permaneceu na fase de esporos. A partir do cocultivo foi possível obter extrato bruto em 50 dias, sendo avaliados em diferentes tempos de incubação (1º, 7º, 14º, 21º e 28º dias), contra bactérias multirresistentes como Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa, mostrando atividade antimicrobiana, tanto no cocultivo quanto no controle. Com análise estatística foi possível verificar que os extratos produzidos em 24 horas (1º) apresentaram maior atividade, especialmente contra P. aeruginosa. Os extratos produzidos pelo cocultivo e controle se comportaram diferentemente um do outro, porém as diferenças não foram estatisticamente significativas. Em relação à biomassa produzida, foi observado maior volume de biomassa no cocultivo, do que no controle, indicando que o contato entre os dois microrganismos favoreceu a produção de massa celular, porém não houve diferença significativa, somente quando comparado entre dias. Estes resultados mostram que há interação entre Acanthamoeba e Streptomyces uma vez que, a bactéria se beneficiou da ameba auxiliando no seu desenvolvimento. Esta interação entre os microrganismos pode ser importante na modulação da produção de substâncias de ação antimicrobiana, fato que ainda necessita investigação. / The interactions that occur between bacteria and amoebas can give through mutual relations, where both organisms benefit from the association or parasitic in which one organism benefits at the expense of the other. The coexistence of various microorganisms share the same environment can produce alterations in the growth of the organisms is, patterns of adaptation in morphology, development, or even in their ability to synthesize proteins and secondary metabolites. This study evaluates the interaction between Acanthamoeba polyphaga and Streptomyces sp. through cocultivation, in order to obtain crude extracts with antimicrobial action. In cocultivation, amoebas made it impossible in the presence of the bacteria. After contact with amoebae were morphological changes in Streptomyces sp. All incubation times with hyphae production, different control spores this remained in phase. From the cocultivation it was possible to obtain crude extract in 50 days, being evaluated in different incubation times (1º, 7º, 14º, 21º and 28º days), against multiresistant bacteria such as Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa, showing antimicrobial activity in both the cocultivation and in control. With statistical analysis found that the extracts in 24 hours (1º) showed greater activity, especially against P. aeruginosa. The extracts produced by the coculture and control behaved differently from one another, but the differences were not statistically significant. Regarding the biomass produced, there was a higher volume of biomass in cocultivation, than in the control, indicating that the contact between the two organisms favored the cell mass production, but there was no significant difference only when compared between days. These results show that there is interaction between Acanthamoeba and Streptomyces since the bacteria benefited amoeba assisting in their development. This interaction between microorganisms may be important in modulating the production of antimicrobial substances, a fact that still requires investigation.

O gênero Streptomyces é conhecido por produzir uma ampla variedade de moléculas bioativas como antimicrobianos, enzimas, agentes antitumorais, antivirais, promotores de crescimento, entre outros. Pesquisas com este grupo de microrganismos têm sido realizadas há mais de 60 anos, no entanto, estudos recentes demonstram que este grupo representa uma fonte inesgotável de novas moléculas bioativas. Neste trabalho, foi avaliada a atividade antimicrobiana de 25 isolados de Streptomyces. Para tanto foram empregados 53 microgansimos teste, incluindo bactérias Gram positivas, Gram negativas, leveduras e fungos filamentosos. A atividade antimicrobiana foi determinada pela técnica da dupla camada. Os isolados que apresentaram melhor atividade antimicrobiana foram cultivados em cultura submersa, sob diferentes condições de cultivo (meio de cultivo, tempo e temperatura). Dos 25 isolados 80 % apresentaram atividade antimicrobiana, destes 80% apresentaram atividade antibacteriana e 45% atividade antifúngica. Dos isolados que apresentaram atividade antimicrobiana 40% apresentaram um amplo espectro, inibiram mais de dez microrganismos teste. Duas linhagens identificadas como Streptomyces sp 1S e Streptomyces sp. 50 foram selecioandos para estudos de produção e caracterização. Streptomyces 1S inibiu 46 microrganismos teste e o isolado 50 foi ativo especialmente contra Enterococcus multiresistentes. A caracterização morfológica, bioquímica e a análise da seqüência parcial da região 16S do rDNA, demonstram a grande diversidade deste grupo de microrganismos e auxiliaram na identificação em nível de gênero. As melhores condições para a produção de metabólitos bioactivos, bem como a caracterização destes isolados são reportados no presente estudo. Foi observado que as condições ambientais e do substrato são fundamentais na produção de metabólitos secundários especialmente antimicrobianos. / Streptomyces genus are well- know due to its high capacity to produce innumerous bioactive metabolites such as, enzymes, antitumour agents, immunomodifying agents, vitamins, growth promoters, and antibiotic compounds among others. Research with this group of microorganisms has been realized since de sixties. However, more recent research has shown that this group still is a very important resource of new secondary metabolites, especially antibiotics. In this work the antimicrobial activity of 25 Streptomyces strain, was evaluated against 53 test microorganisms including Gram positive and negative bacteria, filamentous fungi and yeasts with clinical and agricultural interest. The antimicrobial activity in the first screening was realized using the double layer method. The strains that showed potential results in the first screening were grown on submerge culture in different growth conditions of temperature, culture media and time of growth. From the 25 Streptomyces isolates tested 80% showed antimicrobial activity, out of that 80% presented antibacterial activity and 45% antifungal activity. Out, from the isolates that showed antibacterial activity 40% presented a wide spectrum of activity, inhibiting more than 10 microorganisms. Two strains were selected for further studies, Streptomyces sp. 1S and Strepomyces sp. 50. Isolate 1S was chosen because it was able, in the antimicrobial screening, to inhibit 46 test microorganisms. Isolate 50 showed especial activities against multiresistent Enterococcus sp. This two isolates were submitted to morphological and biochemical characterization and the analysis of partial 16S rDNA sequence was done. The results confirmed the high diversity of this genus, and with the results obtained only the genus was possible to be confirmed. The best growth conditions for metabolites production and the characterization of the isolates are described in this work. It has been observed that the environmental conditions are extremely important for the production of secondary metabolites, especially antibiotics.

Submitted by Eduardo Barros de Almeida Silva (eduardo.philippe@ufpe.br) on 2015-04-17T14:55:28Z No. of bitstreams: 2 Tese Marcia Barros.pdf: 1283620 bytes, checksum: ed0fe52c5eaa09259dbd804494f1aa4e (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T14:55:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese Marcia Barros.pdf: 1283620 bytes, checksum: ed0fe52c5eaa09259dbd804494f1aa4e (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2011-08-05 / CAPES / Colagenases são enzimas proteolíticas de grande interesse industrial. O custo desta enzima purificada é muito elevado, gerando a necessidade da busca de métodos alternativos de produção. O trabalho objetivou selecionar uma cepa do gênero Streptomyces produtora de colagenase extracelular, determinar as melhores condições de cultivo para a produção da enzima pela cepa selecionada, realizar a caracterização bioquímica parcial das colagenases produzidas e a purificação parcial das colagenases através do sistema de duas fases aquosa (SDFA) PEG/fosfato. As cepas foram submetidas ao cultivo líquido sob condições controladas, analisando a capacidade de degradar gelatina e azocol, para a escolha do melhor produtor de colagenase. Em seguida foi realizado um planejamento experimental completo 24 para a seleção das melhores condições de produção, onde pH, temperatura, velocidade de agitação orbital e concentração do substrato foram estudados. Foi realizada a seguir a caracterização bioquímica da enzima e a purificação parcial das colagenases através do SDFA PEG/fosfato. Dois planejamentos experimentais completos (24 e 22) foram usados para escolher as variáveis significativas para o processo de extração, sendo o pH, a massa molar do PEG, concentração de PEG e concentração de fosfato as variáveis independentes investigadas. O primeiro SDFA foi composto por, PEG com massa molar de 1500, 4000 e 8000 g / mol com concentrações de 12,5, 15,0 e 17,5% (w / w), fosfato de concentrações de 10,0, 12,5 e 15,0% (w / w) e pH (6,0, 7,0 e 8,0). O segundo planejamento foi composto por, PEG com massa molar de 4000, 8000 e 10.000 g / mol com concentrações de 12,5% (w / w), fosfato de concentrações de 10,0% (w / w) e pH (6,0, 7,0 e 8,0). As respostas avaliadas foram: fator de purificação, coeficiente de partição e rendimento em atividade da enzima. Dentre as cepas de Streptomyces estudadas, mais de 97% foram capazes de degradar a gelatina e de utilizar o azocol como substrato, porém, o Streptomyces sp. DPUA1559 foi considerado o melhor produtor da colagenase. A máxima produção da enzima foi obtida após 72 h de fermentação, com atividade colagenolítica de 21,13 U/ml. Através do estudo de produção utilizando planejamento fatorial foi possível obter um valor da atividade colagenolítica de 39,13 U/ml e definir as melhores condições de cultivo (100 rpm, pH 6,0 e 1,5% de gelatina a 28°C). A colagenase apresentou pH ótimo 8,0 e estabilidade na faixa de pH 7,4 a 9,5 durante 5h. Foram observados dois picos de temperatura ótima que foram em 37°C e 50°C, indicando a presença de mais de uma enzima as quais foram estáveis na faixa de 25 a 70°C durante 5h. As colagenases encontradas foram identificadas como serino e aspártico proteases. O zimograma demonstrou várias bandas com atividade proteolítica: 108, 64, 57, 48, 45 e 43kDa. Os melhores resultados obtidos a partir do SDFA foram (coeficiente de partição 0,36, o rendimento de atividade de 167,2% e fator de purificação de 2,53) foram obtidos com o sistema PEG 8000, pH 8,0, c oncentração de PEG 12,5% (m / m) e concentração de fosfato de 10,0% (m / m ). Os resultados demonstram o potencial do uso de Streptomyces sp. DPUA1559 como produtores de colagenases e que o SDFA foi seletivo para extração de colagenases.

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:26:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2159_1.pdf: 8141989 bytes, checksum: ed80122d2531dbee37ca2bf1663d7763 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Objetivou-se a pesquisa de espécies do gênero Streptomyces isolados de mesorregiões da Paraíba produtores de metabólitos bioativos com atividade farmacológica, avaliando os níveis de toxicidade dos extratos e sua composição química. 49 espécies do gênero Streptomyces foram isolados a partir de 68 amostras de solo em leito dos principais rios nas diferentes mesoregiões do Estado da Paraíba-Brasil. Os Streptomyces foram obtidos através da suspensão da amostra de solo em solução salina (0,89%) e estriada em placa de Petri. A identificação foi realizada através de análises macromorfológicas, micromorfológicas e testes fisiológicos. A triagem antimicrobiana foi determinada através da técnica em blocos de agar, e os extratos secos etanólicos preparados a partir das espécies que evidenciaram os melhores resultados, respectivamente cepas SP1 e SP3. A avaliação do antagonismo foi realizada através das técnicas de difusão com discos em meio sólido, microdiluição e determinação da curva de morte microbiana. Os ensaios de atividade antiinflamatória, antitumoral e toxicidade aguda foram realizados segundo literatura específica, utilizando modelos animais previamente aprovados em comitê. A caracterização química foi feita através de ensaios cromatográficos e de espectroscopia. Os resultados caracterizam um potencial antimicrobiano dos extratos sp- 1 e sp-3 frente às espécies de leveduras do gênero Candida spp., gênero Aspergillus sp., gênero Trichophyton sp e amostras de Staphylococcus spp de origem clínica e de coleção. A inibição tumoral foi observada em ambos os extratos frente ao tumor Sarcoma 180 com redução em até 73% do peso da massa tumoral. Não foi evidenciada nenhuma ação antiinflamatória dos extratos sp-1 e sp-3. Os extratos apresentaram efeitos estimulantes do SNC nas primeiras horas e depressores na continuidade do teste de toxicidade aguda, não evidenciando mortes, sendo assim, não sendo possível caracterizar a dose letal para cada extrato. A caracterização química revelou a partir do extrato sp-1, a reunião de 13 frações, onde após recristalização foi evidenciado o composto sp-1/09. Além deste outras frações encontram-se em fase de purificação para a elucidação. Tornar-se oportuno e compensador a realização de novas coletas de solo das mais diversas regiões paraibanas revelando o estudo dos Streptomyces spp. como uma importante fonte biotecnológica para a obtenção de novos compostos bioativos

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:29:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2152_1.pdf: 961505 bytes, checksum: 26d85508cf7925585f4303ac19a413e7 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Streptomyces endofíticos de plantas medicinais vem contribuindo de maneira significativa como uma fonte promissora para descoberta de novos metabólitos bioativos. Este trabalho teve como objetivo selecionar o melhor meio de cultura e tempo de produção de metabólitos secundários bioativos, visando seu isolamento. Foram utilizados na fermentação cinco diferentes meios de cultura, que através do teste de difusão em disco para Bacillus subtilis ATCC 6633 mostraram boa atividade antimicrobiana. A massa celular foi extraída com solventes polares, sendo o extrato etanólico o que apresentou maior halo de inibição, quando comparado aos extratos dos líquidos metabólicos. O extrato etanólico foi submetido à coluna cromatográfica de sílica gel, seguida da purificação da fração ativa por cromatografia em placas preparativas, originando quatro novas frações, das quais apenas a fração A4 apresentou halo de inibição para bactérias Gram-positivas. Desta fração foi determinada a CMI e o melhor resultado obtido foi para Micrococcus luteus ATCC 2225 <12,5 &#956;g/mL. O espectro infravermelho desta fração mostrou a presença de grupos característicos de anima primária alifática, grupos alquila e cetona

Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2017-12-26T18:53:01Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Tese Dra Katrine Escher fevereiro 09-02-17.pdf: 3895718 bytes, checksum: fdab644d3e63c0380843a0e0c9077840 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-26T18:53:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Tese Dra Katrine Escher fevereiro 09-02-17.pdf: 3895718 bytes, checksum: fdab644d3e63c0380843a0e0c9077840 (MD5) Previous issue date: 2016-05-04 / CAPES / As Actinobactérias são representantes de um grupo extremamente diverso de bactérias Grampositivas filamentosas com alto conteúdo de citosina e guanina (G+C) no seu DNA que pertencem à ordem Actinomycetales. Seu metabolismo é extremamente rico e, frequentemente acompanhado pela produção de metabólitos secundários de extrema diversidade química e ação biológica, especialmente antimicrobiana. No presente trabalho foram isoladas actinoboactérias presente na rizosfera de Aniba parviflora Syn A. fragans e avaliado a atividade antimicrobiana do extrato bruto obtido a partir da fermentação submersa em meio M1 e MPE. O potencial antimicrobiano foi avaliado em duas etapas sendo a primeira, por meio da técnica de bloco de gelose frente a micro-organismos de interesse clínico e ambiental, e na segunda etapa, foi realizado a fermentação submersa nos Meio para produção de euromicina (MPE) e MPE modificado (M1), sob agitação contínua por 168h para obtenção dos metabólitos secundários. O líquido fermentado foi testado a cada 24h para avaliação da sua bioatividade pelo método de difusão em disco. Os metabólitos bioativos foram extraídos com os solventes hexano, clorofórmio e acetato de etila a partir do líquido metabólico em pH 2.0, pH 6,5 e pH 9.0. Posteriormente foi determinada a concentração mínima inibitória (CMI) do extrato mais ativo através da técnica de microdiluição em caldo, e também foi realizada a caracterização química preliminar por cromatografia em camada delgada (CCD). Todas as 11 linhagens isoladas foram identificadas através de análise micromorfológica e a partir do RNAr 16S como pertencentes ao gênero Streptomyces. Os isolados MPO4, MPO9, MPO10 e MPO11 não foram selecionadas para obtenção dos metabólitos secundários, pois não apresentaram efeito antagônico contra os micro-organismos teste. Os metabólitos antimicrobianos foram produzidos a partir de 24h da fermentação apresentando halos de inibição variável entre as linhagens. O extrato de hexano obtido em meio M1 apresentou ação fungicida para C. albicans a 78,1 μg/mL e C. krusei a 312,5 μg/mL. Na prospecção química foram identificados metabólitos secundários da classe das xantinas, compostos fenólicos, triterpenos e esteroides, derivados antracênicos e cumarinas. / Actinobacteria are representative of an extremely diverse group of filamentous gram-positive bacteria with high content of guanine and cytosine (G + C) in its DNA belonging to the order Actinomycetales. Your metabolism is extremely rich and often accompanied by the production of secondary metabolites of extreme chemical and biological diversity action, especially antimicrobial. In the present study were isolated actinomycetes present in the rhizosphere of Aniba parviflora Syn A. fragrans and evaluated the antimicrobial activity of the crude extract obtained from the submerged fermentation on medium for euromicin production (MPE) and MPE modifed. The antimicrobial potential was assessed in two stages,with the first through the technique of agar block against micro-organisms from clinical and environmental interest, and second stage, the submerged fermentation was carried out in medium M1 and MPE in continuous agitation for 168 h to obtain the secondary metabolites. The fermented liquid was tested every 24 hours to evaluate their bioactivity by disk diffusion method. Bioactive metabolites were extracted with the solvents hexane, chloroform and ethyl acetate from metabolic liquid at pH 2.0, pH 6.5 and pH 9.0. Posteriously been determined the minimum inhibitory concentration (MIC) of most active extract by the broth microdilution technique, and it was also performed preliminary chemical characterization by thin layer chromatography (TLC). Of the 11 strains isolated, 10 were identified through micromorphological analysis and RNAr16S as belonging to the genus Streptomyces . Strain MPO4, MPO9, MPO10 and MPO11 were not selected for obtaining metabolites because they didn’t have antagonistic effect against test microorganisms. The antimicrobial metabolites were produced at the fermentation 24h with variable sitting inhibition halos between the strains. The hexane extract obtained in medium M1 showed fungicidal action for Candida albicans to 78.1 mg / mL and Candida krusei to 312.5 mg / mL. In chemical prospecting of secondary metabolites have been identified xanthine, phenolic compounds, triterpenes and steroids, antracênicos derivatives and coumarins.