Este proyecto consiste en el diseño de un Centro de Salud del Primer Nivel de Atención especializado en la rehabilitación integral de niños y adolescentes. Se basa en una arquitectura terapéutica con la que se diseña un establecimiento de salud generando espacios amplios y abiertos hacia jardines terapéuticos, integrando los espacios naturales y recreativos con las áreas de tratamiento. Se busca resolver la problemática de nuestra ciudad en la cual tenemos un déficit de centros de salud especializados en la rehabilitación pediátrica. El proyecto se ubica estratégicamente en el distrito de Los Olivos por la demanda en este sector de la población, y la falta de centros de salud de la zona. La población a servir son menores de 18 años con ciertas limitaciones, para que puedan desarrollarse y reintegrarse en la sociedad de manera adecuada. / The project consists of the design of a Pediatric Rehabilitation Center. It is based on a therapeutic architecture that is used in designing a healthcare building by creating wide and open spaces to the gardens thus contributing to the user’s rehabilitation.  It is intended to integrate the therapeutic gardens and natural areas of the project alongside the treatment areas with the objective to provide care for children and young people from an early age in order for them to develop and reintegrate themselves into society adequately. The project's location is in Los Olivos's district in the northern part of Lima due to the high demand of users and the lack of infrastructure in the area to help them. / Tesis

Objectius: determinar si la demora diagnòstica o terapèutica influeix en la supervivència o en l'estadi del càncer colorectal (CCR), identificar els factors que fan que es consulti al metge davant la presència de símptomes de CCR. Doble abordatge metodològic: revisió sistemàtica amb metaanàlisi i investigació qualitativa. Resultats: S'han identificat 40 publicacions sobre supervivència i 50 sobre estadi. S'exclogueren 14 i 13 estudis respectivament perquè utilitzaven mostres molt restrictives. Dels 26 de supervivència restants, a 20 no hi havia associació. El metaanàlisi de supervivència es va fer amb 8, RR: 0,92 (IC 95%: 0,87-0,97). Dels 38 estudis d'estadi, a 26 no hi havia associació. El metaanàlisi d'estadi es va fer amb 16, OR: 0,98 (IC 95%: 0,76-1,25). Quan s'examinaren colon i recte per separat, s'observaren associacions no significatives en sentit contrari. Els factors que fan que una persona amb símptomes de CCR consulti al metge estan relacionats amb el gènere. / Objetivos: Determinar si la demora diagnóstica o terapéutica influye en la supervivencia o en el estadio del cáncer colorectal (CCR) (objetivos 1 y 2), conocer la interpretación que las personas hacen ante los primeros síntomas de CCR, identificar los factores que desencadenan la consulta al médico y describir el proceso diagnóstico del CCR desde el punto de vista de las personas que lo padecen (objetivos 3, 4 y 5). Doble abordaje metodológico: revisió sistemàtica con metaanálisis (objetivos 1 y 2) y investigación cualitativa (objetivos 3, 4 y 5). Resultados: Se han identificado 40 publicaciones sobre demora y supervivencia y 50 sobre demora y estadio. Se han excluido 14 y 13 estudios por utilizar muestras excesivamente restringidas. De los 26 estudios de supervivencia restantes, en 20 no se observó asociación, en 4 la demora fue un factor protector de la supervivencia y en 2 un factor de riesgo. El metaanálisis de supervivència se pudo realizar con 8 estudios y se obtuvo un RR de 0,92 (IC 95%: 0,87-0,97). De los 38 estudios de estadio restantens, en 26 no se observó asociación, en 4 la demora fue un factor protector y en 7 un factor de riesgo. El metaanálisis de estadio se pudo hacer con 16 estudios y se obtuvo una OR de 0,98 (IC 95%: 0,76-1,25). Cuando se examinaron colon y recto por separado, se observaron asociaciones no significativas en sentido contrario. En definitiva, no parece existir asociación entre demora y supervivencia o demora y estadio en el CCR, pero es necesario estudiar más el tema considerando colon y recto por separado. Los primeros síntomas del CCR se atribuyen a procesos banales. El hecho de que la persona se encuentre bien hace que de poca importancia a los síntomas. Los factores que hacen que una persona con síntomas de CCR consulte al médico están relacionados con el género. Mientras que las mujeres cercanas son un desencadenante directo de consulta en los hombres, las mujeres no suelen mencionar su problema de salud a la familia hasta que no han consultado al médico. El tiempo de espera para la realización de una colonoscopia es vivido como largo.

A forma atual da organização local dos serviços de saúde motiva o desenvolvimento de estudos que explicitem a busca de cuidados terapêuticos, permitindo, assim, pensar a organização e funcionamento da rede de serviços de saúde com mais dinamismo, à qual as pessoas possam optar, ou outras formas de cuidado, que melhor resolvam seus problemas de saúde. A temática do presente estudo visa a estabelecer relações entre a rede de serviços de saúde disponíveis e as práticas e trajetórias terapêuticas de pacientes portadores de câncer,em um Município da região Noroeste do Estado do Rio Grande do Sul. O presente estudo tem por objetivo conhecer e caracterizar essa rede, bem como a utilização de serviços e as trajetórias e práticas terapêuticas dos usuários portadores de câncer, no Município referido. É um estudo exploratório, descritivo, de abordagem qualitativa, com uso de entrevistas a 13 sujeitos cadastrados na Liga Feminina de Combate ao Câncer do Município. As entrevistas identificaram problemas em relação ao modelo de atenção e de gestão da saúde, revelados pelas dificuldades que os sujeitos apresentam em suas trajetórias terapêuticas, com vários caminhos traçados para encontrar o tratamento adequado. Desta forma, também foram muitas as práticas terapêuticas procuradas pelos sujeitos, devido às dificuldades de atendimento na rede de assistência à saúde do Município. Os resultados apontaram para a necessidade de problematizar junto aos gestores, trabalhadores de saúde, prestadores de serviço e instâncias de controle social do Sistema Único de Saúde, a oferta de serviços de saúde tanto no âmbito municipal, quanto regional. Para a efetivação de um atendimento integral, é importante que os serviços de saúde se organizem para atender às necessidades definidas pelos sujeitos, no sentido de minimizar as assimetrias no atendimento à atenção oncológica, como também a outras especialidades. / The current configuration of the health services organization, is reason for the development of studies that specify the search for therapeutic care, thus allowing thinking over the organization and operation of the health services network in a more dynamic way so that people may choose health services or other care alternatives that best solve their health problems. The theme of this study aims at establishing a relationship between the available network of health services and the therapy practices and trajectories of patients with cancer in the municipality, state of Rio Grande do Sul. This study has therefore the objective of learning and characterizing the available network of health services, the utilization of services and the therapy trajectories and practices of users with cancer in the studied municipality. It is an exploratory, descriptive study of qualitative approach with the application of interviews with 13 subjects enrolled in the Feminine League for Coping Cancer in the municipality. The interviews demonstrate problems regarding the model of health care and management, revealed by the difficulties that the subjects present over their therapy trajectories with several ways to be traced in order to find the proper treatment. The subjects also searched for several therapy practices due to the care difficulties in the local health care network. The results point out to the need of raising the problem of the offer of health services both in the municipal and in the regional range with the management staff, health workers, services professionals and sectors of social control of the SUS. In order to perform an integral care, it is important that the health services get organized in order to meet the health needs as defined by the subjects in the sense of minimizing the asymmetries in the attendance of oncological care as well as of other specialties. / La forma actual de la organización de los servicios de salud, motiva el desarrollo de estudios que expliciten la búsqueda de cuidados terapéuticos, permitiendo así pensar la organización y el funcionamiento de la red de servicios de salud con más dinamismo, en la cual las personas puedan optar por servicios de salud o otras formas de cuidado, que mejor resuelvan sus problemas de salud. La temática del presente estudio visa, establecer una relación entre la red de servicios de salud disponibles y las prácticas y trayectorias terapéuticas de pacientes portadores de cáncer en la municipalidad, provincia de Rio Grande do Sul. El presente estudio tiene, el objetivo de conocer y caracterizar la red de servicios de salud disponible, la utilización de servicios y las trayectorias y prácticas terapéuticas de usuarios portadores de cáncer en aquella municipalidad. Es un estudio exploratorio, descriptivo de abordaje cualitativo, con aplicación de entrevistas a 13 sujetos registrados en la Liga Femenina de Combate al Cáncer de la Municipalidad. Las entrevistas demuestran problemas con relación al modelo de atención y de gestión de la salud, revelados por las dificultades que los sujetos presentan en sus trayectorias terapéuticas con varios caminos trazados para encontrar el tratamiento adecuado. De esta forma, también fueron varias las prácticas terapéuticas buscadas por los sujetos debido a las dificultades de atención en la red de asistencia a la salud de la municipalidad. Los resultados apuntan para la necesidad de tratar el problema junto a los gestores, trabajadores de salud, prestadores de servicio e instancias de control social del SUS, la oferta de servicios de salud tanto en el ámbito municipal como en el regional. Para los efectos de una atención integral, es importante que los servicios de salud se organicen para atender las necesidades en salud definidas por los sujetos en el sentido de minimizar las asimetrías en la atención oncológica, como también en otras especialidades.

A forma atual da organização local dos serviços de saúde motiva o desenvolvimento de estudos que explicitem a busca de cuidados terapêuticos, permitindo, assim, pensar a organização e funcionamento da rede de serviços de saúde com mais dinamismo, à qual as pessoas possam optar, ou outras formas de cuidado, que melhor resolvam seus problemas de saúde. A temática do presente estudo visa a estabelecer relações entre a rede de serviços de saúde disponíveis e as práticas e trajetórias terapêuticas de pacientes portadores de câncer,em um Município da região Noroeste do Estado do Rio Grande do Sul. O presente estudo tem por objetivo conhecer e caracterizar essa rede, bem como a utilização de serviços e as trajetórias e práticas terapêuticas dos usuários portadores de câncer, no Município referido. É um estudo exploratório, descritivo, de abordagem qualitativa, com uso de entrevistas a 13 sujeitos cadastrados na Liga Feminina de Combate ao Câncer do Município. As entrevistas identificaram problemas em relação ao modelo de atenção e de gestão da saúde, revelados pelas dificuldades que os sujeitos apresentam em suas trajetórias terapêuticas, com vários caminhos traçados para encontrar o tratamento adequado. Desta forma, também foram muitas as práticas terapêuticas procuradas pelos sujeitos, devido às dificuldades de atendimento na rede de assistência à saúde do Município. Os resultados apontaram para a necessidade de problematizar junto aos gestores, trabalhadores de saúde, prestadores de serviço e instâncias de controle social do Sistema Único de Saúde, a oferta de serviços de saúde tanto no âmbito municipal, quanto regional. Para a efetivação de um atendimento integral, é importante que os serviços de saúde se organizem para atender às necessidades definidas pelos sujeitos, no sentido de minimizar as assimetrias no atendimento à atenção oncológica, como também a outras especialidades. / The current configuration of the health services organization, is reason for the development of studies that specify the search for therapeutic care, thus allowing thinking over the organization and operation of the health services network in a more dynamic way so that people may choose health services or other care alternatives that best solve their health problems. The theme of this study aims at establishing a relationship between the available network of health services and the therapy practices and trajectories of patients with cancer in the municipality, state of Rio Grande do Sul. This study has therefore the objective of learning and characterizing the available network of health services, the utilization of services and the therapy trajectories and practices of users with cancer in the studied municipality. It is an exploratory, descriptive study of qualitative approach with the application of interviews with 13 subjects enrolled in the Feminine League for Coping Cancer in the municipality. The interviews demonstrate problems regarding the model of health care and management, revealed by the difficulties that the subjects present over their therapy trajectories with several ways to be traced in order to find the proper treatment. The subjects also searched for several therapy practices due to the care difficulties in the local health care network. The results point out to the need of raising the problem of the offer of health services both in the municipal and in the regional range with the management staff, health workers, services professionals and sectors of social control of the SUS. In order to perform an integral care, it is important that the health services get organized in order to meet the health needs as defined by the subjects in the sense of minimizing the asymmetries in the attendance of oncological care as well as of other specialties. / La forma actual de la organización de los servicios de salud, motiva el desarrollo de estudios que expliciten la búsqueda de cuidados terapéuticos, permitiendo así pensar la organización y el funcionamiento de la red de servicios de salud con más dinamismo, en la cual las personas puedan optar por servicios de salud o otras formas de cuidado, que mejor resuelvan sus problemas de salud. La temática del presente estudio visa, establecer una relación entre la red de servicios de salud disponibles y las prácticas y trayectorias terapéuticas de pacientes portadores de cáncer en la municipalidad, provincia de Rio Grande do Sul. El presente estudio tiene, el objetivo de conocer y caracterizar la red de servicios de salud disponible, la utilización de servicios y las trayectorias y prácticas terapéuticas de usuarios portadores de cáncer en aquella municipalidad. Es un estudio exploratorio, descriptivo de abordaje cualitativo, con aplicación de entrevistas a 13 sujetos registrados en la Liga Femenina de Combate al Cáncer de la Municipalidad. Las entrevistas demuestran problemas con relación al modelo de atención y de gestión de la salud, revelados por las dificultades que los sujetos presentan en sus trayectorias terapéuticas con varios caminos trazados para encontrar el tratamiento adecuado. De esta forma, también fueron varias las prácticas terapéuticas buscadas por los sujetos debido a las dificultades de atención en la red de asistencia a la salud de la municipalidad. Los resultados apuntan para la necesidad de tratar el problema junto a los gestores, trabajadores de salud, prestadores de servicio e instancias de control social del SUS, la oferta de servicios de salud tanto en el ámbito municipal como en el regional. Para los efectos de una atención integral, es importante que los servicios de salud se organicen para atender las necesidades en salud definidas por los sujetos en el sentido de minimizar las asimetrías en la atención oncológica, como también en otras especialidades.

A forma atual da organização local dos serviços de saúde motiva o desenvolvimento de estudos que explicitem a busca de cuidados terapêuticos, permitindo, assim, pensar a organização e funcionamento da rede de serviços de saúde com mais dinamismo, à qual as pessoas possam optar, ou outras formas de cuidado, que melhor resolvam seus problemas de saúde. A temática do presente estudo visa a estabelecer relações entre a rede de serviços de saúde disponíveis e as práticas e trajetórias terapêuticas de pacientes portadores de câncer,em um Município da região Noroeste do Estado do Rio Grande do Sul. O presente estudo tem por objetivo conhecer e caracterizar essa rede, bem como a utilização de serviços e as trajetórias e práticas terapêuticas dos usuários portadores de câncer, no Município referido. É um estudo exploratório, descritivo, de abordagem qualitativa, com uso de entrevistas a 13 sujeitos cadastrados na Liga Feminina de Combate ao Câncer do Município. As entrevistas identificaram problemas em relação ao modelo de atenção e de gestão da saúde, revelados pelas dificuldades que os sujeitos apresentam em suas trajetórias terapêuticas, com vários caminhos traçados para encontrar o tratamento adequado. Desta forma, também foram muitas as práticas terapêuticas procuradas pelos sujeitos, devido às dificuldades de atendimento na rede de assistência à saúde do Município. Os resultados apontaram para a necessidade de problematizar junto aos gestores, trabalhadores de saúde, prestadores de serviço e instâncias de controle social do Sistema Único de Saúde, a oferta de serviços de saúde tanto no âmbito municipal, quanto regional. Para a efetivação de um atendimento integral, é importante que os serviços de saúde se organizem para atender às necessidades definidas pelos sujeitos, no sentido de minimizar as assimetrias no atendimento à atenção oncológica, como também a outras especialidades. / The current configuration of the health services organization, is reason for the development of studies that specify the search for therapeutic care, thus allowing thinking over the organization and operation of the health services network in a more dynamic way so that people may choose health services or other care alternatives that best solve their health problems. The theme of this study aims at establishing a relationship between the available network of health services and the therapy practices and trajectories of patients with cancer in the municipality, state of Rio Grande do Sul. This study has therefore the objective of learning and characterizing the available network of health services, the utilization of services and the therapy trajectories and practices of users with cancer in the studied municipality. It is an exploratory, descriptive study of qualitative approach with the application of interviews with 13 subjects enrolled in the Feminine League for Coping Cancer in the municipality. The interviews demonstrate problems regarding the model of health care and management, revealed by the difficulties that the subjects present over their therapy trajectories with several ways to be traced in order to find the proper treatment. The subjects also searched for several therapy practices due to the care difficulties in the local health care network. The results point out to the need of raising the problem of the offer of health services both in the municipal and in the regional range with the management staff, health workers, services professionals and sectors of social control of the SUS. In order to perform an integral care, it is important that the health services get organized in order to meet the health needs as defined by the subjects in the sense of minimizing the asymmetries in the attendance of oncological care as well as of other specialties. / La forma actual de la organización de los servicios de salud, motiva el desarrollo de estudios que expliciten la búsqueda de cuidados terapéuticos, permitiendo así pensar la organización y el funcionamiento de la red de servicios de salud con más dinamismo, en la cual las personas puedan optar por servicios de salud o otras formas de cuidado, que mejor resuelvan sus problemas de salud. La temática del presente estudio visa, establecer una relación entre la red de servicios de salud disponibles y las prácticas y trayectorias terapéuticas de pacientes portadores de cáncer en la municipalidad, provincia de Rio Grande do Sul. El presente estudio tiene, el objetivo de conocer y caracterizar la red de servicios de salud disponible, la utilización de servicios y las trayectorias y prácticas terapéuticas de usuarios portadores de cáncer en aquella municipalidad. Es un estudio exploratorio, descriptivo de abordaje cualitativo, con aplicación de entrevistas a 13 sujetos registrados en la Liga Femenina de Combate al Cáncer de la Municipalidad. Las entrevistas demuestran problemas con relación al modelo de atención y de gestión de la salud, revelados por las dificultades que los sujetos presentan en sus trayectorias terapéuticas con varios caminos trazados para encontrar el tratamiento adecuado. De esta forma, también fueron varias las prácticas terapéuticas buscadas por los sujetos debido a las dificultades de atención en la red de asistencia a la salud de la municipalidad. Los resultados apuntan para la necesidad de tratar el problema junto a los gestores, trabajadores de salud, prestadores de servicio e instancias de control social del SUS, la oferta de servicios de salud tanto en el ámbito municipal como en el regional. Para los efectos de una atención integral, es importante que los servicios de salud se organicen para atender las necesidades en salud definidas por los sujetos en el sentido de minimizar las asimetrías en la atención oncológica, como también en otras especialidades.

[ES] La biogénesis ribosomal es uno de los procesos más complejos, esenciales y costosos energéticamente de la célula eucariota. La formación de las subunidades ribosomales en levaduras comienza en el nucléolo con la transcripción del ARNr. En este proceso se requiere la participación de más de doscientos factores de ensamblaje y ARNs pequeños nucleolares (snoARNs) que no formarán parte del ribosoma maduro aunque son necesarios para un apropiado procesamiento del ARNr y organización estructural de las subunidades ribosomales. Los estudios estructurales de los estadios de maduración de la subunidad 60S han permitido la identificación de algunas interacciones funcionales entre los distintos factores de ensamblaje. Entre ellos se encuentran las proteínas Nop7, Erb1 e Ytm1 que forman un heterotrímero discreto denominado subcomplejo Nop7 en levaduras, o complejo PeBoW en mamíferos, compuesto por los ortólogos Pes1, Bop1 y WDR12, respectivamente. Este complejo puede detectarse de forma aislada de las partículas prerribosomales. La formación de este heterotrímero es esencial para el ensamblaje de la subunidad 60S ya que garantizan la correcta maduración del extremo 5' del ARNr 5,8S facilitando así su asociación con el ARNr 25S, aunque se desconoce en detalle el papel exacto en la biogénesis ribosomal. En este trabajo se ha realizado un análisis de las interacciones entre los componentes del PeBoW así como una aproximación a la resolución estructural del complejo en solución. Usando una combinación de técnicas biofísicas, nuestros resultados indican que la conformación estructural que adopta el complejo PeBoW en el nucleoplasma es diferente a la descrita en el contexto prerribosomal. Además, se han identificado posibles funciones que podría estar ejerciendo el complejo PeBoW o bien las distintas proteínas del complejo de forma aislada fuera del prerribosoma. Asimismo se conoce que la biogénesis ribosomal es un mecanismo altamente regulado y estrechamente relacionado con crecimiento y proliferación celular. La imperiosa necesidad de síntesis de ribosomas y proteínas que tiene una célula tumoral convierte a este proceso en un punto débil de la misma. Por esta razón, hay un gran interés para estudiar la biogénesis ribosomal como diana terapéutica contra el cáncer. Se ha observado que la paralización de esta vía es capaz de promover la activación no genotóxica del supresor tumoral p53, a diferencia de los efectos indeseados que provocan las terapias convencionales contra el cáncer. Como primer paso hacia el desarrollo de herramientas inhibidoras de la biogénesis del ribosoma, hemos utilizado la información cristalográfica que poseíamos del complejo de Chaetomium thermophilum entre los factores de ensamblaje Erb1 e Ytm1 para realizar una selección guiada por la estructura de péptidos de interferencia. Los péptidos de interferencia han sido analizados in vitro para determinar su capacidad de interacción utilizando técnicas biofísicas. Además, se han generado péptidos de interferencia con la secuencia humana de Erb1/Ytm1 para evaluar sus efectos en cultivo de células de cáncer de colon HCT-116. Nuestros resultados indican que el estrés ribosómico se puede inducir en diferentes etapas del proceso de maduración al dirigirse a las interacciones proteína-proteína, elevándolas como una alternativa al uso de inhibidores de la ARN pol I. / [CA] La biogènesi ribosomal és un dels processos més complexos, essencials i costosos energèticament de la cèl·lula eucariota. La formació de les subunitats ribosomals en llevats comença en el nuclèol amb la transcripció de l'ARNr. En aquest procés es requereix la participació de més de dos-cents factors d'assemblatge i ARNs xicotets nucleolars (snoARNs) que no formaran part del ribosoma madur encara que són necessaris per a un apropiat processament de l'ARNr i organització estructural de les subunitats ribosomals. Els estudis estructurals dels estadis de maduració de la subunitat 60S han permès la identificació d'algunes interaccions funcionals entre els diferents factors d'assemblatge. Entre ells es troben les proteïnes Nop7, Erb1 i Ytm1 que formen un heterotrímer discret denominat subcomplex Nop7 en llevats, o complex PeBoW en mamífers, compost pels ortòlegs Pes1, Bop1 i WDR12, respectivament. Aquest complex pot detectar-se de forma aïllada de les partícules prerribosomals. La formació d'aquest heterotrímer és essencial per a l'assemblatge de la subunitat 60S ja que garanteix la correcta maduració de l'extrem 5' de l'ARNr 5,8S facilitant així la seua associació amb l'ARNr 25S, encara que es desconeix detalladament el paper exacte en la biogènesi ribosomal. En aquest treball s'ha realitzat una anàlisi de les interaccions entre els components del PeBoW així com una aproximació a la resolució estructural del complex en solució. Utilitzant una combinació de tècniques biofísiques, els nostres resultats indiquen que la conformació estructural que adopta el complex PeBoW en el nucleoplasma és diferent a la descrita en el context prerribosomal. A més, s'han identificat possibles funcions que podria estar exercint el complex PeBoW o bé les diferents proteïnes del complex de forma aïllada fora del prerribosoma. Així mateix es coneix que la biogènesi ribosomal és un mecanisme altament regulat i estretament relacionat amb creixement i proliferació cel·lular. La imperiosa necessitat de síntesi de ribosomes i proteïnes que té una cèl·lula tumoral converteix a aquest procés és un punt feble d'aquesta. Per aquesta raó, hi ha un gran interès per a estudiar la biogènesi ribosomal com a diana terapèutica contra el càncer. S'ha observat que la paralització d'aquesta via és capaç de promoure l'activació no genotòxica del supressor tumoral p53, a diferència dels efectes indesitjats que provoquen les teràpies convencionals contra el càncer. Com a primer pas cap al desenvolupament d'eines inhibidores de la biogènesi del ribosoma, hem utilitzat la informació cristal·logràfica que posseíem del complex de Chaetomium thermophilum entre els factors d'assemblatge Erb1 i Ytm1 per a realitzar una selecció guiada per l'estructura de pèptids d'interferència. Els pèptids d'interferència han sigut analitzats in vitro per a determinar la seua capacitat d'interacció utilitzant tècniques biofísiques. Així mateix, s'han generat pèptids d'interferència amb la seqüència humana de Erb1/Ytm1 per a avaluar els seus efectes en cultiu de cèl·lules de càncer de còlon HCT-116. Els nostres resultats indiquen que l'estrès ribosòmic es pot induir en diferents etapes del procés de maduració en dirigir-se a les interaccions proteïna-proteïna, elevant-les com una alternativa a l'ús d'inhibidors de l'ARN pol I. / [EN] Ribosomal biogenesis is a complex, essential and one of the most energy-costing process in eukaryotic cells. The assembling of the ribosomal subunits, in yeast, starts with the RNA transcription inside the nucleolus. This process requires the participation of more than two hundred assembly factors and small nucleolar RNAs (snoRNAs) that will not be part of the mature ribosome, however, they are still necessary to perform the appropriate rRNA processing and structural management. The structural studies on the maturation stages of the 60S subunit have shown functional interactions between different assembling factors. In this group, we find Nop7, Erb1 and Ytm1, that both form a discrete heterotrimer called Nop7 subcomplex in yeast, or PeBoW in mammalian, composed by the respective orthologues Pes1, Bop1 and WDR12. This complex can be found isolated from the pre-ribosomal particles. The presence of this complex is crucial to the 60S subunit assembling, once it ensures the correct maturation of the 5' tip of the rRNA 5,8S, supporting the association with the 25S rRNA. Yet, the details of the PeBoW complex roll in ribosomal biogenesis remain unknown. Hereafter, there are some analysis of interaction assays between the PeBoW component proteins, as well as an approach to structural of the complex in solution. Using different biophysical techniques, the results suggest that PeBoW complex adopts a different conformation in the nucleoplasm than the described in the pre-ribosomal context. Furthermore, it hints some other functions of the PeBoW complex, or the isolated component proteins out of the pre-ribosome path. Besides that, the ribosomal biogenesis is a highly regulated process and strictly related with cellular growth and proliferation. The mandatory demand of ribosome and protein synthesis of tumoral cells make this process a weak point of it. This is the reason why ribosomal biogenesis as cancer treatment target is a point of great interest. According to some studies, it is expected that the interruption of this pathway can lead the non-genotoxic activation of the tumor suppressor p53, unlike other conventional cancer therapies. As a first step to development of ribosomal biogenesis inhibiting tools, the structural information of Erb1 and Ytm1 in Chaetomium thermophilum complex, was taken to design structure-guided interfering peptides. Using biophysical techniques, the interfering peptides were evaluated in vitro to determine their interaction ability. Then, human-sequenced Erb1/Ytm1 interfering peptides were designed to look over the effects on colon cancer cells HCT-116. The results indicate that the ribosomal stress can be induced in different stages of the maturation process, by approaching protein-protein interactions, planting it as an alternative to RNA pol I inhibitors. / Este trabajo ha sido realizado con el apoyo económico de los proyectos de investigación enumerados a continuación: SAF2015-67077-R, SAF2017-89901-R y PROMETEO/2018/0 Durante el periodo de realización de esta tesis, la autora, Lidia Orea Ordóñez, ha sido beneficiaria de una subvención para la contratación de personal investigador de carácter predoctoral denominada “Ayudas para la contratación de personal investigador de carácter predoctoral”, (ACIF) (ACIF/2016/103), otorgada por la Generalitat Valenciana, Conselleria de Innovación, Universidades, Ciencia y Sociedad Digital, concedida en la convocatoria 2016. / Orea Ordóñez, L. (2022). Estructura y función del complejo PeBoW como modelo en el desarrollo de posibles herramientas terapéuticas [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/182347

[ES] Los tumores malignos del cerebro y del sistema nervioso central representan el 21% de los tumores en niños y son la segunda causa principal de muerte por cáncer pediátrico después de la leucemia. Los gliomas de alto grado siguen siendo incurables y poseen altas tasas de mortalidad: una supervivencia a cinco años del 4,7 % para pacientes con glioblastoma multiforme (GBM) y menos de un año en pacientes con glioma pontino intrínseco difuso (DIPG). Los bajos niveles de penetración del fármaco a través de la barrera hematoencefálica y la baja tasa de supervivencia asociada resaltan en la necesidad de nuevas propuestas de tratamiento para esta necesidad clínica no cubierta. La administración intranasal ofrece un enfoque no invasivo prometedor que elude el metabolismo hepato-gastrointestinal y la barrera hematoencefálica, constituyendo una ruta directa de la nariz al cerebro. Los poliglutamatos (PGA) representan excelentes candidatos para la administración de agentes terapéuticos en el cerebro debido a su biodegradabilidad y multivalencia, lo que permite la unión covalente de fármacos y grupos directores que puedan contribuir a cruzar las diferentes barreras biológicas existentes desde la nariz hasta el cerebro. La conjugación covalente del agente terapéutico a la cadena polimérica ofrece una estabilidad prolongada en la circulación sanguínea y un mayor control sobre la liberación del fármaco en el microambiente tumoral. Esta tesis se centra en el diseño racional y desarrollo de nuevos conjugados PGA-fármaco y una plataforma intranasal segura y eficiente para la administración dirigida y la liberación del fármaco en el cerebro como tratamiento del glioma pediátrico. Se desarrolló una familia de conjugados de poliglutamatos que incorporan palbociclib, un inhibidor de CDK, utilizando diferentes espaciadores sensibles a estímulos, así como diferente carga de fármacos. Estudiamos el efecto de la carga y conjugación de un fármaco sobre la conformación en solución de PGAs lineales y en forma de estrella. Con dispersión de rayos X de ángulo pequeño y dicroísmo circular, demostramos la evolución del conjugado polipeptídico al aumentar la carga de fármaco. Además, establecimos el vínculo entre la conformación de los conjugados y su actividad biológica en células GBM y DIPG derivadas de pacientes. Nuestros hallazgos ilustran la necesidad de una comprensión profunda de las propiedades fisicoquímicas de los nanosistemas estudiados que pueden ayudar a predecir su resultado biológico. Para el cribado rápido y la validación de la formulación intranasal, establecimos con éxito una plataforma de detección ex vivo basada en células de difusión verticales de Franz con mucosa nasal de oveja. Varios sistemas basados en PGA lineal y en forma de estrella modificadas con diferentes ligandos (incluyendo el ácido docosahexaenoico, ácido hialurónico (HA), odorranalectina), así como sistemas entrecruzados del PGA en forma de estrella y la mezcla física con un HA entrecruzado (HA-CP®). A continuación, se realizó estudios de biodistribución mediante administración intranasal de los candidatos seleccionados, seguidos de la cuantificación ex vivo con la técnica IVIS y el ensayo de fluorescencia estándar después de la homogeneización de órganos y los estudios histológicos del cerebro. Los datos obtenidos mostraron claramente la presencia de las diferentes plataformas en el cerebro e, su internalización en células del bulbo olfativo y una buena difusión en el cerebro a través de diferentes áreas, llegando incluso a detectarse en el hipocampo. Los candidatos seleccionados se han escalado y en la actualidad su evaluación biológica en un modelo in vivo está en curso. En conclusión, se ha diseñado, desarrollado y validado diferentes plataformas basadas en PGA capaces de llegar al cerebro a través de la administración intranasal, constituyendo una base prometedora para el tratamiento de múltiples trastornos relacionados con el cerebro. / [CA] Els tumors malignes del cervell i del sistema nerviós central representen el 21% dels tumors en nens i són la segona causa principal de mort per càncer pediàtric després de la leucèmia. Els gliomes d'alt grau que continuen sent incurables amb taxes de mortalitat altes: una supervivència a cinc anys del 4,7 % per a pacients amb glioblastoma multiforme (GBM) i menys d'un any en pacients amb glioma pontí intrínsec difús (DIPG). Els nivells baixos de penetració del fàrmac a través de la barrera hematoencefàlica i la baixa taxa de supervivència associada ressalten en la necessitat de noves propostes de tractament per a una necessitat clínica no satisfeta. L'administració intranasal ofereix un enfocament no invasiu prometedor que eludeix el metabolisme hepatogastrointestinal i la barrera hematoencefàlica, cosa que permet l'administració directa del nas al cervell. Els poliglutamats (PGA) representen excel·lents candidats per a l'administració al cervell a causa de la seva biodegradabilitat i multivalència, la qual cosa dóna suport a la introducció covalent de fàrmacs i grups objectiu i pot facilitar la transició del nas al cervell. La conjugació covalent de l'agent terapèutic a la cadena polimèrica ofereix una estabilitat prolongada en la circulació sanguínia i un major control sobre l'alliberament del fàrmac al microambient tumoral. Aquesta tesi se centra en el desenvolupament de nous conjugats PGA-fàrmac dissenyats racionalment i una plataforma intranasal segura i eficient per a l'administració dirigida i l'alliberament del fàrmac al cervell com a tractament del glioma pediàtric. Es va desenvolupar una família de conjugats de poliglutamat que incorporen l'inhibidor de CDK palbociclib, utilitzant diferents enllaçadors sensibles a estímuls i nivells variables de càrrega de fàrmacs. Estudiem l'efecte del fàrmac hidrofòbic conjugat sobre la conformació en solució de PGA lineals i en forma d'estrella. Amb dispersió de raigs X d'angle petit i dicroisme circular, demostrem l'evolució del sistema conjugat en augmentar la càrrega de fàrmac. A més, establim el vincle entre la conformació dels conjugats i la seva activitat biològica provada en cèl·lules GBM i DIPG derivades de pacients. Les nostres troballes van il·lustrar la necessitat d'una comprensió profunda de les propietats fisicoquímiques dels nanosistemes estudiats que poden ajudar a predir-ne el resultat biològic. Per a la detecció ràpida de la formulació intranasal basada en els portadors de PGA, vam establir amb èxit una plataforma de detecció ex vivo basada en cèl·lules de difusió verticals de Franz amb mucosa d'ovella. Diversos sistemes basats en PGA lineal i en forma d'estrella amb fraccions conjugades (inclòs l'àcid docosahexaenoic, àcid hialurònic (HA), odorranalectina), així com partícules reticulades (a través de cicloaddició azida-alquí o enllaços disulfur) i la barreja física amb un HA es van provar els polímers creuats (HA-CP®). Els estudis de biodistribució després de l'administració intranasal es van fer en candidats seleccionats, seguits de la quantificació ex vivo amb la tècnica IVIS i l'assaig de fluorescència estàndard després de l'homogeneïtzació d'òrgans i els estudis histològics del cervell. Les dades obtingudes van mostrar clarament el transport del nas al cervell, la internalització cel·lular dels conjugats al bulb olfactiu i, el que és més interessant, una bona difusió del cervell a través de diferents àrees, arribant fins i tot a l'hipocamp. Els sistemes seleccionats es van ampliar i la preparació per a l'avaluació biològica en un model in vivo està en curs. En general, vam ser capaços de dissenyar, desenvolupar i validar diferents plataformes basades en PGA capaces d'arribar al cervell mitjançant l'administració intranasal, la qual cosa podria ser la base per al tractament de múltiples trastorns relacionats amb el cervell. / [EN] Malignant brain and central nervous system tumors account for ~21% of tumors in children and represent the second leading cause of pediatric cancer deaths after leukemia. Standard chemotherapy allows a ~95% five-year survival rate for patients with low-grade gliomas. Unfortunately, high-grade gliomas remain generally incurable and suffer from high mortality rates - a 4.7% five-year survival for glioblastoma multiform (GBM) patients and less than one year in patients with diffuse intrinsic pontine glioma (DIPG). Low levels of drug delivery through the blood-brain barrier (BBB) and the associated poor survival rate highlight the necessity for novel treatment approaches for an unmet clinical need. Intranasal administration offers a promising non-invasive approach that circumvents hepato-gastrointestinal metabolism and the BBB, thereby enabling direct nose-to-brain delivery. Polyglutamates (PGAs), represent excellent candidates for brain delivery due to their biodegradability and multivalency, which supports the covalent introduction of drugs and targeting moieties to facilitate the nose-to-brain transition. Covalent conjugation of therapeutic agents to the polymeric main chain offers prolonged stability in the blood circulation and increased control over the drug release in the tumor microenvironment if adequately designed considering endogenous triggers, including acidic pH, an increased reductive environment, or the overexpression of specific proteases. This thesis focuses on developing novel, rationally-designed PGA-drug conjugates as a safe and efficient intranasal platform for targeted delivery and drug release in the brain as a pediatric glioma treatment. We developed a family of PGA-drug conjugates incorporating the CDK inhibitor palbociclib that employed different stimuli-responsive linkers and varying drug loading levels and studied the effect of drug loading on the solution conformation of linear and star-shaped PGAs. We demonstrated system evolution upon increased drug loading with SAXS and CD. Moreover, we established a link between conjugate conformation and their biological activity, as evaluated in patient-derived GBM and DIPG cells. Our findings illustrated the necessity of a deep understanding of the physico-chemical properties of studied nanosystems that can aid in predicting their biological outcome. For the development of an intranasal formulation, we successfully established an ex vivo screening platform based on vertical Franz diffusion cells with sheep mucosa. We evaluated several systems based on linear and star-shaped PGA with conjugated moieties (including docosahexaenoic acid, hyaluronic acid, odorranalectin), crosslinked particles (via azide-alkyne cycloaddition or disulfide bonds), and physical mixtures with a hyaluronic acid cross polymer (HA-CP®). After intranasal administration with selected candidates, we performed biodistribution studies, followed by ex vivo quantification with the IVIS spectrum in vivo imaging system and fluorescent assays after organ homogenization and brain histological studies. The obtained data demonstrated nose-to-brain transportation, internalization of conjugates in the olfactory bulb and robust diffusion through different brain areas, even reaching the hippocampus. We also scaled up selected systems and preparations for biological evaluation in an in vivo model that is currently ongoing. Overall, we were able to design, develop, and validate different PGA-based platforms capable of arriving at the brain via intranasal, which might be the base for the treatment of multiple brain-related disorders. / Melnyk, T. (2024). Drug Dellivery to the Brain Using Polymer Therapeutics as an Intranasal Platform for Pediatric Glioblastoma Treatment [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/203498