Orientador: Francisco Humberto de Abreu Maffei / Banca: Hamilton Almeida Rollo / Banca: Adilson F. Paschôa / Banca: Newton Key Hokama / Banca: Cyrillo C. Filho / Resumo: A trombose venosa profunda (TVP) caracteriza-se pela formação aguda de um trombo no interior das veias profundas. É uma doença de alta incidência e de grande importância clínica e epidemiológica devido à sua morbimortalidade, sendo atualmente, considerada multifatorial. São vários os fatores de risco genéticos e/ou adquiridos relacionados à TVP e a compreensão da interação destes, permite melhor entender esta doença, não só devido aos seus sintomas de fase aguda mas, principalmente, por sua complicação mais temida, a embolia pulmonar e, a longo prazo, a síndrome pós-trombótica (SPT), que apresenta importante morbidade, inclusive com repercussões sócio-econômicas. A avaliação a longo prazo, clínica e ultrassonográfica, de pacientes com diagnóstico de TVP, visando verificar a incidência e gravidade da SPT é necessária para a compreensão da evolução destes pacientes. Desconhecemos a existência de trabalhos em nosso meio, que avaliem a evolução tardia da TVP. Objetivo: Determinar a evolução a longo prazo de pacientes com TVP de membros, portadores de trombofilia e verificar se existem diferenças na evolução de pacientes trombofílicos e não trombofílicos. Método: Num estudo coorte retrospectivo foram avaliados os prontuários de 275 pacientes atendidos no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu-Unesp, dos quais foram identificados 60 pacientes trombofílicos, sendo possível contactar 40 deles para consulta, dos quais 39 pacientes aceitaram participar do estudo. Foram selecionados 25 pacientes com diagnóstico de TVP, não trombofílicos, pareados para sexo e idade, para comparação com o grupo trombofílico. Durante a consulta foi preenchido um protocolo que continha as seguintes variáveis: dados demográficos, profissão, antecedentes pessoais e antecedentes obstétricos (se mulher), antecedentes familiares com relação... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Deep vein thrombosis (DVT) is characterized by the acute formation of a thrombus in the interior of the deep veins. It is a disease of high incidence and great clinical and epidemiological importance due to its morbimortality, being presently considered multifactorial. The genetic and/or acquired risk factors related to DVT are various and understanding their interaction allows a better comprehension of this illness, due to both symptoms of the acute stage and, mainly, its most feared complication, the pulmonary embolism and, in long term, the post-thrombotic syndrome (PTS), which presents important morbidity, inclusively with social and economical repercussions. The long-term clinical and ultrasound evaluation of patients with DVT diagnosis, aiming to verify the incidence and seriousness of PTS, is necessary to understand the evolution of these patients. We are not aware of the existence of works in our area which evaluate the late evolution of DVT. Objective: To determine the long-term evolution of patients with DVT of limbs, carriers of thrombophilia, and verify the existence of differences in the evolution of thrombophilic and non-thrombophilic patients. Method: In a retrospective cohort study, the medical registers of 275 patients attended at the Clinics Hospital of the School of Medicine of the Paulista State University, in Botucatu, São Paulo, Brazil, were evaluated, from which 60 thrombophilic patients were identified. It was possible to contact 40 of them for appointment, from which 39 patients accepted to participate in the study. 25 non-thrombophilic patients, paired for sex and age, were selected with DVT diagnosis, for comparison with the thrombophilic group. During the appointment, a protocol was filled in, containing the following variables: demographic data, occupation, personal antecedents and obstetric antecedents (if woman), familiar antecedents concerning thrombosis... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Francisco Humberto de Abreu Maffei / Banca: Hamilton de Almeida Rollo / Banca: José Roberto Fioretto / Banca: Fausto Miranda Junior / Banca: Jorge David Aivazoglou Carneiro / Resumo: A importância do estudo da trombose venosa profunda (TVP) em crianças e adolescentes reside no impacto desta doença sobre a qualidade de vida desta população, tendo em vista sua longa expectativa de vida e a morbidade associada ao tromboembolismo venoso. Com o passar dos anos, a síndrome pós-trombótica e a recorrência podem deixar sequelas que vão desde dor crônica nos membros, edema e até úlceras de difícil cicatrização. A TVP em crianças está sendo melhor estudada nos últimos anos. Até então, seu diagnóstico e tratamento eram baseados em experiências individuais, pequenas séries de casos ou extrapolados das recomendações para adultos. Realizamos a presente revisão para melhor compreensão da epidemiologia, fisiopatologia, etiologia, diagnóstico, tratamento desta doença / Abstract: The study of deep vein thrombosis (DVT) in children and adolescents assesses the important impact of this disease on the quality of life of this population considering its long life expectancy and morbidity associated to venous thromboembolism. Within the years, the pos-thrombotic syndrome and recurrence can cause sequelae including chronic lower limb pain, edema and even hard cicatrization ulcer. Recently, DVT in children has been studied more appropriately. Previously, its diagnosis and treatment were based on individual experience, some serial cases or comparisons with recommendations to the adult treatments. This present study has been presented to better comprehend the epidemiology, physiopathology, etiology, diagnosis, treatment and prophylaxis of the deep vein thrombosis / Doutor

Embora pacientes em terapia dupla antiplaquetária, composta de aspirina e um antagonista do receptor purinérgico P2Y12, tenham melhor prognóstico, eles ainda sofrem eventos trombóticos. Frequentemente, relaciona-se o nível de inibição plaquetária destes pacientes à ineficácia do tratamento. A reatividade plaquetária destes pacientes é uma função do nível do bloqueio do receptor P2Y12 e dos níveis de óxido nítrico e prostaciclina, importantes mediadores endoteliais, os quais agem em sinergia tripla aumentando o nível dos nucleotídeos cíclicos intraplaquetários mantendo a plaqueta em estado quiescente. Pacientes com disfunção endotelial têm menor disponibilidade destes mediadores e, consequentemente, menor inibição plaquetária in vivo. Propõe-se uma nova estratégia terapêutica composta de um inibidor do receptor purinérgico P2Y12, um ativador da enzima guanilato ciclase e um inibidor da fosfodiesterase, visando aumento dos nucleotídeos cíclicos, resultando em um forte efeito antiplaquetário localizado e tendo aplicação direta à pacientes com disfunção endotelial. / Disorders on the cardiovascular (CV) system are responsible for 31% of deaths worldwide. When inappropriately activated, platelets can cause myocardial infarction and stroke. Dual anti-platelet therapy (DAPT), composed of acetylsalicylic acid and a P2Y12 receptor blocker (clopidogrel, prasugrel, etc) is recommended for the prevention of recurrent CV events. Whilst DAPT is associated with an improvement in patient outcomes, thrombotic events do still occur. Platelet reactivity of patients under DAPT is a function of the level of P2Y12 receptor blockade and the levels of nitric oxide (NO) and prostacyclin (PGI2), two important endothelium-derived autacoids. Therefore, a new antithrombotic therapy is proposed using soluble guanylate cyclase (sGC) allosteric modulators independent of NO and phosphodiesterase (PDE) inhibitors. Based on the results observed, the combination of a sGC activator and a PDE inhibitor given at low doses, in the presence of P2Y12 receptor blocker, could produce enhanced and localized platelet inhibition.

Orientador: Cláudio Chrysóstomo Werneck / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T09:01:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Machado_Denise_M.pdf: 1404386 bytes, checksum: e811cae8e94f35d5b473fe2881261fd8 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Nos últimos anos, o principal objetivo de nosso laboratório é esclarecer a participação da GlicoProteína Associada a Microfibrila-1 (MAGP-1) na formação de trombos no modelo de trombose arterial fotoquímica. Dados indicam que a MAGP-1 não interage diretamente com as plaquetas, importante componente na trombose arterial, mas que, provavelmente, a MAGP-1 esteja interagindo com uma molécula que tenha participação neste processo. Neste sentido, a interação da MAGP-1 com moléculas importantes na formação do trombo foi estudada. A MAGP-1 tem a capacidade de interagir com o fator de von Willebrand, bem como com fibrinogênio e fibronectina. Além disto, foi verificado que a injeção da MAGP-1 recombinante em camundongos deficientes em MAGP-1 é capaz de reestabelecer o tempo normal de formação de trombos nestes animais. Considerando a ausência da MAGP-1 e seu efeito na formação de trombos, foi questionado se a morfologia dos trombos obtidos em camundongos deficientes em MAGP-1 era diferente dos trombos obtidos em camundongos selvagens. Dados iniciais sugeriam que os trombos de camundongos deficientes em MAGP-1 apresentavam ultraestrutura diferente, onde um número maior de plaquetas apresentavam aparentemente, os seus grânulos e corpos densos intactos, sugerindo uma ativação ineficiente na ausência de MAGP-1. No presente trabalho, além de análise ultraestrutural mais detalhada, foram feitos estudos para determinar qual a região da MAGP-1 é responsável pela atividade trombogênica. Neste sentido, proteínas mutadas, truncadas e peptídeos derivados da MAGP-1 foram obtidos e então injetados nos camundongos selvagens e deficientes em MAGP-1. Como resultados, pudemos observar que os trombos dos camundongos selvagens bem como dos camundongos deficientes em MAGP-1 apresentam basicamente a mesma morfologia, levando em consideração as técnicas utilizadas, microscopia eletrônica de transmissão e varredura. Em relação ao mapeamento dos domínios, quando utilizada a molécula inteira, seja de camundongo, seja bovina, o tempo normal de oclusão foi reestabelecido. A injeção da forma truncada da região carboxiterminal foi suficiente para obter este mesmo resultado que está principalmente relacionado a um peptídeo também determinado. O mecanismo pelo qual este peptídeo atua normalizando o tempo de oclusão normal ainda não é conhecido e será objeto de estudos futuros / Abstract: In the last years, the main purpose of our laboratory has been to clarify the participation of the Microfibril-Associated GlycoProtein-1 (MAGP-1) in forming thrombus in photochemically-induced artery thrombosis model. It was considered that MAGP-1 does not interact directly with platelets, important component in artery thrombosis and probably MAGP-1 is interacting with a molecule which has participation in this process. In this sense, the interaction of the MAGP-1 with important molecules in the thrombus formation was studied. The MAGP-1 has the ability to interact with von Willebrand factor, as well as with fibrinogen and fibronectin. In addition, it was verified that the injection of recombinant MAGP-1 in MAGP-1-deficient mice was able to restores normal time of thrombus formation in these animals. Considering the MAGP-1 absence and its effect on the thrombi formation, it was questioned whether thrombi morphology obtained from MAGP-1-deficient mice was different from thrombi obtained from wild-type mice. Initial data suggested that the thrombi from MAGP-1-deficient mice had different structure, where platelets apparently showed their intact granules and dense bodies, suggesting an inefficient activation in the MAGP-1 absence. In this work, besides the ultra-structural analysis, more detailed studies have been made to determine which region of the MAGP-1 is responsible for the thrombogenic activity. In this sense, truncated proteins, mutated proteins and peptides, were obtained and then injected into MAGP-1-deficient mice to verify their activities. As result, we noticed that the thrombi have similar structure taking into consideration used techniques, scanning electron microscopy and transmission electron microscopy. Furthermore, in relation to MAGP-1 mapping domains studies when we inject recombinant full-length molecule either mice or bovine, the normal time occlusion was restored. The injection of carboxy-terminal region was enough to get this same result what is mainly related to an also determined peptide. Mechanisms involved in this process are unknown and will be our aim in the future studies / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Joyce Maria Anichino-Baizzacchi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-17T00:05:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alessio_AlineMorandi_D.pdf: 8973520 bytes, checksum: 3a7a6ff893220f5bdd3d1d52da276f91 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: As células endoteliais participam da hemostasia com efeitos pró e antitrombóticos, que podem ser estimulados por uma lesão endotelial. A presença de células endoteliais na circulação pode ser considerada um novo marcador de integridade vascular, como já descrito em várias patologias tais como: doenças cardiovasculares, doenças infecciosas, doenças imunes, transplantes, anemia falciforme. Os objetivos do nosso estudo foram: padronizar a identificação e quantificação das células endoteliais circulantes (CECs) e das células endoteliais progenitoras (CEPs) em um grupo de pacientes com trombose venosa profunda (TVP) ao diagnóstico (aguda, 1ª coleta) e após no mínimo 6 meses (2ª coleta), em um grupo de TVP crônica e em um grupo controle; padronizar um modelo animal de TVP induzida por lesão endotelial para avaliar as CECs e CEPs no sangue periférico e no trombo venoso. O grupo de TVP aguda foi composto por 9 pacientes [F: 7; M: 2; 45 anos (26 - 54 anos)], sendo recrutados 6 indivíduos para uma 2ª coleta [F: 5; M: 1; 47,5 anos (27 - 55 anos)], no grupo de TVP crônica foram incluídos 10 pacientes [F: 6; M: 4; 44,5 anos (28 - 56 anos)] e no grupo controle 11 voluntários [F: 9; M: 2; 29 anos (21 - 52 anos)]. A identificação das CECs e CEPs no sangue periférico foi realizada por citometria de fluxo. No modelo animal, a TVP foi induzida por lesão endotelial com uma solução de FeCl3 a 15%. Após a indução da TVP as CECs e CEPs foram avaliadas no sangue periférico nos tempos: 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 24 horas, 48 horas e 72 horas. O trombo venoso formado na veia cava inferior (VCI) foi avaliado pela coloração de Verhoff van Gienson e a presença de CECs e CEPs por imunofluorescência. Houve uma diferença estatística no número das CECs (P=0.001, CD31+CD144+CD45dimCD133-; P<0.001, CD31+CD146+CD45dimCD133-; P=0.002, CD31+VEGFR2+CD45dimCD133-) entre os grupos estudados, com um aumento importante nos pacientes com TVP aguda. Os grupos de TVP crônica e TVP 2ª coleta mostraram um aumento significativo de CECs em relação aos controles. Não houve diferença estatística no número das CEPs (CD34+VEGFR2+CD45dimCD133-) entre os grupos estudados, porém observou-se um aumento no grupo de TVP aguda. No modelo animal, a oclusão total da VCI foi verificada entre 15 minutos e 1 hora. Após 24 horas ocorreu uma diminuição progressiva da área do trombo formado [85,4% (24h); 65,4% (48h); 51,3% (72h)], e não foram observadas CECs e CEPs no mesmo. No sangue periférico, no tempo de 48 horas houve um aumento importante de CECs e CEPs quando comparado com os outros tempos estudados (P=0.001, Sca1-VEGFR2+CD45dim; P=0.004, CD34-VEGFR2+CD45dim; P<0.001,Sca1+VEGFR2+CD45dim; P<0.001, CD34+VEGFR2+CD45dim). Os resultados observados em camundongos e humanos sugerem que as CEPs podem ser recrutadas da medula óssea para a circulação, participando do processo de reparo endotelial. O aumento de CECs na fase em que se inicia o processo de recanalização no modelo animal, sugere que apesar da lesão endotelial inicial, as mesmas somente são liberadas quando o fluxo começa a ser restabelecido. Neste estudo concluímos que as CECs podem constituir um marcador de dano vascular. / Abstract: Endothelial cells participate in hemostasia and have pro and anti -thrombotic effects which can be stimulated by an endothelial lesion. The presence of endothelial cells in circulation can be considered a novel marker of vascular integrity, as described in several pathologies, such as: cardiovascular disease, infectious disease, immune diseases, transplants, and sickle cell anemia. The aims of our study were to: standardize the identification and quantification of circulating endothelial cells (CECs) and progenitor endothelial cells (EPCs) in a group of patients with Deep Vein Thrombosis (DVT) at diagnosis (acute, 1st collection) and after a minimum of six months (2nd collection), in a group with chronic DVT and in a control group; standardize an animal model with DVT induced by endothelial lesion in order to evaluate CECs and EPCs in peripheral blood and in venous thrombosis. The group of DVT was composed of 9 patients [F: 7; M: 2; 45 years old (y.o.) (26 - 54 y.o.)], of which six individuals were recruited for the 2nd collection [F: 5; M: 1; 47.5 y.o. (27 - 55 y.o.)]; in the chronic DVT group 10 patients were included [F: 6; M: 4; 44.5 y.o. (28 - 56 y.o.)]; and in the control group 11 volunteers were included [F: 9; M: 2; 29 y.o. (21 - 52 y.o.)]. The identification of CECs and EPCs in peripheral blood was carried out by flow cytometry. DVT was induced in the animal model by endothelial lesion using a FeCl3 solution at 15%. After DVT induction, CECs and EPCs were evaluated in peripheral blood at: 15 minutes, 30 minutes, 45 minutes, 1 hour, 24 hours, 48 hours and 72 hours. The venous thrombus formed in the inferior cava vein (ICV) was evaluated using Verhoff van Gienson stain and the presence of CECs and EPCs was evaluated using immunofluorescence. There was a statistical difference in the number of CECs (P=0.001, CD31+CD144+CD45dimCD133-; P<0.001, CD31+CD146+CD45dimCD133-; P=0.002, CD31+VEGFR2+CD45dimCD133-) between the groups studied, with a significant increase in acute DVT patients. The chronic DVT and 2nd collection DVT groups demonstrated a significant increase in CECs in relation to the controls. There was no statistical difference in the number of EPCs (CD34+VEGFR2+CD45dimCD133-) among the groups studied, however an increase in the acute DVT group was observed. In the animal model, total ICV occlusion was observed between 15 minutes and 1 hour. After 24 hours a progressive decrease in the area of the formed thrombus occurred [85.4% (24h); 65.4% (48h); 51.3% (72h)], and no CECs or CEPs were observed. After 48hours, there was a significant increase in CECs and EPCs in peripheral blood when compared to other periods studied (P=0.001, Sca1-VEGFR2+ CD45dim; P=0.004, CD34-VEGFR2+CD45dim; P<0.001, Sca1+VEGFR2+CD45dim; P<0.001, CD34+VEGFR2+CD45dim). The results observed in mice and human beings suggest that EPCs can be recruited to circulation from the bone marrow, participating in a process of endothelial repair. The increase of CECs during the phase when the re-channeling process begins in the animal model, suggests that despite the initial endothelial lesion, CECs are liberated when the flow is reestablished. In the present study we concluded that CECs can represent a vascular damage marker. / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Ciências

Orientador: Nelci Fenalti Hoehr, Joyce M. Anichino-Baizzacchi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T11:11:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alessio_AlineMorandi_M.pdf: 5240817 bytes, checksum: f759b9c995ffcb5198175f672d2a40aa (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: o estrógeno atua na hemostasia promovendo efeitos pró e antitrombóticos, sua ação ocorre através de sua ligação a receptores nucleares específicos, denominados receptores 'alfa' e 'beta' do estrógeno (RE). A presença de polimorfismos nos genes que codificam o RE poderia modular a resposta do estrógeno, assim como a transcrição de genes e conseqüentemente a expressão. Existem fatores de risco adquiridos para a trombose venosa profunda (TVP) que estão associados a alterações do nível de estrógeno como: gravidez, puerpério, uso de anticoncepcional oral (ACO) e a terapia de reposição hormonal. Os objetivos deste estudo foram de associar polimorfismos nos genes dos RE 'alfa' e 'beta' em controles e mulheres e homens com TVP e avaliar a influência deles na atividade da proteína C (PC), proteína S (PS), antitrombina e concentração de fibrinogênio. Nas mulheres sob o uso de ACO, o genótipo AA do polimorfismo G1730A e, nas mulheres grávidas, os genótipos AA e GA do polimorfismo G1082A, ambos no gene do RE-~, podem ter um efeito protetor para o risco de TVP. Porém, o genótipo GG do polimorfismo G1730A tem uma influência no aumento da atividade da PS nas mulheres do grupo controle total e nas mulheres sob o uso de ACO; e os genótipos AA e AG do polimorfismo A351G no gene do RE-'alfa' , e o genótipo GG do polimorfismo G1082A tem um efeito no aumento da concentração de fibrinogênio nas mulheres grávidas. Contudo, a mutação G20210A no gene da protrombina, o fator V de Leiden e os polimorfismos do RE- foram fatores preditores de trombose venosa. Apesar da miscigenação brasileira, a PC apresentou diminuída em mulheres AITo-descendente. Nossos resultados sugerem que polimorfismos no gene dos RE-'beta' têm uma influência maior no risco para TVP. A contribuição deste trabalho é de grande importância, pois nenhum estudo associou o risco de TVP com os polimorfismos dos RE-'beta' / Abstract: Estrogen acts in haemostasis promoting pro and antithrombotic effects. Its action occurs through linking the specific nuclear receptors called 'alfa' and 'beta' estrogen receptor (ER). Polymorphisms in the genes that codify the ER a and ~could modulate estrogen response, as well as gene transcription and expression. There are acquired risk factors for deep venous thrombosis (DVT) that can alter the estrogen levels. These factors are oral contraceptives (OC), hormonal replacement therapy, pregnancy, and puerperium. The objectives of this study were to associate the polymorphisms in the genes of the a and ~ER in controls, women and rnen with DVT, and to evaluate the influence of these polyrnorphisms in protein C, protein S (PS), in antithrombin activity and fibrinogen concentration. Women under OC use with the AA genotype ofthe G1730A polyrnorphism, and pregnant women with the AA and GA genotypes of the G1082A polymorphism, both in the ER-~ gene, could have a protective effect for DVT risk. However, GG genotype of the G1730A polymorphisrn has an influence in the increase of the PS activity in women of the total control group and women under OC use; and the AA and AG genotypes of the A351G polymorphism in the ER-a gene, and the GG genotype of the G1O82A polymorphism have an effect in the increase of the fibrinogen leveI in pregnant women. However, the G20210A rnutation in the prothrombin gene, the Leiden V factor and the polymorphisms in the ER-'alfa' gene were predictor factors of venous thrombosis. Despite Brazilian miscegenation, PC activity was lower in Afro-descendent women. Our results suggest that the polymorphisrns in the ER-'beta' gene have a higher influence for DVT risk. The contribution of this study is of great importance, as no study has associated DVT risk with the ER polymorphisms yet / Mestrado / Patologia Clinica / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Ana Terezinha Guillaumon / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T00:25:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paschoa_AdilsonFerraz_D.pdf: 1209751 bytes, checksum: 841d1a79e90d1ef1c6bb14b58b807236 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O tromboembolismo venoso (TEV) afeta de 1 a 3 indivíduos por mil habitantes/ano. O conhecimento atual das trombofilias permite a associação com cerca de 40% dos casos de TEV. Há controvérsias quanto ao valor da pesquisa laboratorial de trombofilia para o benefício dos doentes com tromboembolismo venoso. Procuraram-se as variáveis preditivas para a pesquisa positiva de trombofilia e avaliar o impacto desses resultados nas decisões clínicas. Foram avaliados 84 doentes consecutivos com TEV confirmado por métodos de imagem no período entre janeiro de 2001 e novembro de 2003. Após o período previsto de anticoagulação definido por critérios clínicos, os doentes foram submetidos à pesquisa das principais causas de trombofilia. Os resultados laboratoriais permitiram a dois examinadores independentes reavaliar caso-a-caso a indicação de ¿mudança de conduta¿, caracterizada pela interferência no tempo de profilaxia secundária ou ¿atenção especial¿ para medidas de maior vigilância diante de situações de risco ou para a extensão da pesquisa aos familiares assintomáticos. A trombofilia foi encontrada em 35 dos 84 casos (41,66%), sendo que em 27 (32,12%) havia uma causa genética. O fator V Leiden foi a alteração mais freqüente (15,47%), seguida do conjunto de deficiência dos anticoagulantes naturais (11,9%). Não houve diferença significativa da freqüência de trombofilia relacionada à faixa etária nem diferença de idade de aparecimento do primeiro evento trombótico entre doentes trombofílicos e não trombofílicos. Houve significância estatística para ocorrência de trombofilia nos doentes com tromboflebite superficial, recorrência e na associação com fatores de risco não cirúrgicos. A ¿mudança de conduta¿ foi atribuída a 6 dos 84 doentes (7,14%), estatisticamente significativa para aqueles com recorrência em relação aos que tiveram apenas um episódio de TEV. A ¿atenção especial¿ foi atribuída a 34 dos 84 casos (40,47%).A tromboflebite superficial de aparecimento espontâneo, a ocorrência de TEV relacionada a causas não cirúrgicas e a recorrência foram os principais achados preditivos de trombofilia. A ¿mudança de conduta¿ aplicou-se a uma pequena porcentagem de doentes, e refletiu predominantemente a confirmação da necessidade de prolongamento da profilaxia secundária. A ¿atenção especial¿ diante de situações de risco e a extensão da profilaxia primária a familiares de primeiro grau assintomáticos expostos a situações de risco parecem-nos a melhor indicação para a pesquisa laboratorial da trombofilia. Palavras-chave: trombofilia, fator V Leiden, mutação G20210A, proteína S, proteína C, antitrombina, hiperhomocisteinemia, anticorpos antifosfolípides, tromboembolismo venoso / Abstract: The venous thromboembolism (VTE) affects 1 to 3 individuals per a thousand habitants/year. Nowadays its possible to associated VTE with a cause of thrombophilia in about 40% of patients. There are some inconclusive points about the real benefit of the laboratorial investigation on thrombophilia for patients with VTE. We tried to identify the variables that point to the positive test results and the impact of these results on clinical decisions.The screening for the more common causes of thrombophilia was applied to 84 consecutive patients with VTE confirmed by image examination between January 2001 and November 2003. After test results, two independent observers evaluated, in a case by case basis, the indication of a ¿change on prophylaxis¿, in order to modify the period of anticoagulant intake (secondary prophylaxis), or ¿special attention¿ when considering to have a higher medical surveillance before risk situations or for the extension of the research to the first degree asymptomatic relatives.Thrombophilia was found in 41.66% (35/84), and in 32.12% (27/84) it involved agenetic cause. The factor V Leiden was the more prevalent alteration, identified in 15.47% of the cases, followed by the natural anticoagulants disfunction (11.9%). There was no significative difference of thrombophilia frequency between ages, nor a difference of age in the onset of the first thrombotic event between thrombophilic and non-thrombophilic patients. There was a higher prevalence of thrombophilia in patients with superficial thrombophlebitis of spontaneous onset, in cases of recurrence and when associated with non-surgical predisponent factors. The ¿change on prophylaxis¿ resulted in 7.14% (6/84), and there was statistically significance for patients with recurrent episodes when compared to patients with just one. The ¿special attention¿ was applied in 40.47% (34/84). Spontaneous superficial thrombophlebitis, occurrence of VTE related to nonsurgical causes and recurrence, were the main findings which suggested thrombophilia. The ¿change of prophylaxis¿ was applied to a small percentage of patients. The ¿special attention¿ for risk situations and the extension of the primary prophylaxis to the asymptomatic family members seem to be the best indication for the laboratorial research on thrombophilia. Key words: thrombophilia, factor V Leiden, G20210A mutation, protein C, protein S, antithrombin, hyperhomocysteinaemia, antiphospholipids antibodies, venous thromboembolism / Doutorado / Cirurgia / Doutor em Cirurgia

Orientador: Joyce Annichino-Bizzacchi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T01:42:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bittar_LuisFernando_M.pdf: 1309049 bytes, checksum: 8d7bbcbc4a659300d128bc58336cbb88 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Níveis elevados de fator VIII (FVIII) são um fator de risco independente e prevalente para trombose venosa profunda (TVP), e tem influência do FvW. A ADAMTS13 é responsável pela modulação do tamanho molecular do FvW, clivando os multímeros de altíssimo peso molecular. Alterações moleculares no gene da ADAMTS13 têm correlação com sua atividade. Neste estudo avaliamos a prevalência do polimorfismo A4751G no gene do FvW (região de ligação com a ADAMTS13), os polimorfismos C1797T e C1852G e a mutação C4006T no gene da ADAMTS13 em 435 pacientes com TVP (156M/279F; idade mediana=37) e 580 controles (170M/410F, idade mediana=35). Investigamos a relação entre os genótipos e a dosagem de FVIII e FvW no plasma e o risco de TVP. A dosagem de FVIII:C foi realizada por método coagulométrico de um estágio, e as dosagens de FVIII:Ag e FvW:Ag por método imunoenzimático. As alterações moleculares foram determinadas por PCR e digestão com enzimas específicas, ou SSCP e sequenciamento para confirmação. Pacientes com TVP mostraram níveis significantemente aumentados de FVIII:C (203.7 UI/dl vs. 127 UI/dl; p<0.001), FVIII:Ag (109.6 UI/dl vs. 82.4 UI/dl; p<0.001) e FvW:Ag (154.2 UI/dl vs. 108 UI/dl; p<0.001) quando comparados com o grupo controle. Não houve diferença significativa entre os grupos na prevalência das alterações moleculares estudadas. Os indivíduos com genótipo AG (FvW A4751G) apresentavam níveis significativamente reduzidos de FVIII:C (p=0.04). Embora também tenha demonstrado uma discreta associação com níveis diminuídos de FvW:Ag, esta não foi estatisticamente significativa (p= 0.07). Os indivíduos com genótipo CG (ADAMTS13 C1852G) apresentavam níveis significativamente aumentados de FVIII:Ag (p=0.05) e FvW:Ag (p= 0.01). Apesar da relação com diminuição do FVIII o polimorfismo A4751G não mostrou um efeito protetor para TVP. O polimorfismo ADAMTS13 C1852G está associado à diminuição desta metaloprotease, e sua associação com níveis aumentados de FVIII:Ag e FvW:Ag neste estudo favorece essa hipótese. / Abstract: Elevated levels of factor VIII (FVIII) are a prevalent and independent risk factor for deep venous thrombosis (DVT), and are affected by von Willebrand factor (vWF) levels. ADAMTS13 is responsible for the modulation of the molecular size of vWF, cleaving the ultra large multimers. Mutations and polymorphisms in the ADAMTS13 gene are related with its activity. This study evaluated the prevalence of polymorphism A4751G in the vWF gene, polymorphisms C1797T, C1852G and the mutation C4006T in the ADAMTS13 gene in 435 patients with DVT and 580 healthy controls. Subsequently, we investigated the relationship between the genotypes and plasma levels of FVIII and vWF and DVT risk. FVIII:C was measured by a one-stage clotting method, and FVIII:Ag and vWF:Ag were measured by chromogenic method. The molecular changes were determined by restriction endonucleases or single strand conformation polymorphism followed by sequencing. Statistical test:U Mann-Whitney, = 0.05. Patients with DVT had higher plasma levels of FVIII:C (mean 203,7 UI/dl vs. 127 UI/dl; p<0.001), FVIII:Ag (mean 109,6 UI/dl vs. 82,4 UI/dl; p<0.001) and vWF:Ag (154,2 UI/dl vs. 108 UI/dl; p<0.001) when compared to controls. We observed no statistical difference in the prevalence of all molecular changes studied between patients and controls. A4751G heterozygotes had significantly reduced levels of FVIII:C (p=0,04). Althought there was a slight association with reduced levels of vWF: Ag, this association was not statistically significant (p= 0,07). C1852G heterozygotes had significantly elevated levels of FVIII:Ag (p=0.05) and vWF:Ag (p= 0,01). Despite the relative decline of FVIII:C with the A4751G polymorphism there was no protective effect for DVT. The C1852G polymorphism is associated with a reduction of ADAMTS13, and its association with increased levels of FVIII: Ag and vWF: Ag observed in this study supports this hypothesis. / Mestrado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Mestre em Fisiopatologia Médica

Orientador: Cristina Pontes Vicente / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T21:32:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Godoy_JulianaAparecidaPretode_M.pdf: 1738296 bytes, checksum: 42d22e3271b69962a476983e12e359ed (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O dermatan sulfato (DS) é um glicosaminoglicano que pode atuar como um agente antitrombótico, anticoagulante e anti-inflamatório. A aterosclerose é uma doença que acomete os vasos sanguíneos através da formação exacerbada de placas de gordura, interrompendo o fluxo de sangue. A intervenção cirúrgica mais utilizada nesses casos é a angioplastia, entretanto, esse procedimento pode ocasionar uma lesão ao endotélio, onde células e proteínas inflamatórias são recrutadas ao local da lesão, promovendo a migração e proliferação das células musculares lisas ocasionando a reestenose (neointima) do vaso acometido. A recuperação do endotélio, momentos após a lesão, seria uma alternativa terapêutica com o objetivo de se evitar a formação de neointima. Essa recuperação poderia ser feita pelas células progenitoras endoteliais (EPC), existentes na população de células mononucleares (MNC), da medula óssea. Neste estudo, testamos o efeito do DS na inflamação, trombose, formação de neointima e migração de MNC em camundongos selvagens (C57BL06), testamos também o efeito do DS em conjunto com a administração de MNC na formação de neointima em camundongos selvagens, deficientes da proteína cofator II da heparina (HCII-/-) e deficientes em apolipoproteína E (ApoE-/-). Todos os animais analisados passaram por um procedimento cirúrgico na artéria carótida comum esquerda, mimetizando a lesão causada por angioplastia em humanos. Analisamos a formação de trombo, a presença de células inflamatórias e de P-selectina nos animais 1 ou 3 dias após a lesão arterial; a formação de neointima foi analisada 21 após a injúria arterial. Observamos uma inibição da trombose, diminuição de células CD45+ e da expressão de P-selectina no local da lesão nos animais selvagens tratados com DS. Foi observado, também, que nos animais selvagens que receberam MNCs ou MNCs + DS, a formação de neointima foi inibida. Nos animais selvagens tratados com MNC + DS, houve uma maior migração de MNC para o local da lesão. Nos animais HCII-/-, não houve inibição da formação da neointima em nenhum dos dois grupos (tratados com MNC e tratados com MNC + DS). Nos camundongos ApoE-/- a injeção de MNC mesmo em conjunto com o tratamento com DS não foi capaz de inibir a proliferação de neointima; houve melhora apenas quando se administrou o DS isoladamente. Com isso, concluímos que o DS participa da inibição dos processos trombótico e inflamatório, na sua fase inicial, após injúria arterial e promove também a migração de um número maior de MNCs para o local da lesão nos animais selvagens; nos animais ApoE-/-, o DS inibiu a resposta inflamatória inicial e a formação de neointima apenas quando administrado isoladamente, tendo seu efeito anulado quando este foi injetado conjuntamente com as MNC. Este dado sugere que o processo inflamatório local, o estágio de formação das placas de ateroma, o elevado índice de colesterol e os triglicerídeos circulantes podem influenciar no efeito do DS e na capacidade de recuperação do endotélio mediada pela MNCs injetadas nos camundongos ApoE-/-. / Abstract: Dermatan sulfate (DS) is a glycosaminoglycan that can act as an antithrombotic, anticoagulant and anti-inflammatory agent. Atherosclerosis is a disease that affects the blood vessels by an exacerbated fat plaques formation, blocking the blood flow. The most used surgical operation, in these cases, is the angioplasty; however, this procedure can cause a lesion to the endothelium, where inflammatory cells and proteins are recruited to the lesion site, promoting smooth muscle cells migration and proliferation, provoking restenosis (neointima) of the attempted vessel. The endothelium recovery, some time after lesion, would be a therapeutic strategy by preventing the neointima formation. This recovery could be done by the endothelial progenitor cells (EPC), present in mononuclear cells (MNC) population, from bone marrow. In this study, we devise the DS effect on inflammation, thrombosis, neointima formation and MNC migration in wild-type mice (C57BL06); we also devise DS effect together with MNC administration on neointima formation in wild-type mice, heparin cofactor II deficient mice (HCII-/-) and apolipoprotein E deficient mice (ApoE-/-). All analyzed animals suffered surgical operation in left common carotid artery, that mimics the lesion caused by angioplasty in humans. We analyzed thrombus formation, inflammatory cells presence and P-selectin in animals 1 and 3 days after lesion; neointima formation was analyzed 21 days after arterial injury. We observed a thrombus inhibition, decreased CD45+ cells and P-selectin expression at the lesion site in wild-type animals treated with DS. It was also observed in wild-type animals that received MNC or MNC + DS, the neointima formation was inhibited. In wild-type animals treated with MNC + DS, there were a higher MNC migration to the lesion site. In HCII-/- animals, there was not an inhibition in neointima formation in any of the two groups (treated with MNC or treated with MNC + DS). In ApoE-/- mice, the MNC injection even in DS presence, was not able to inhibit neointima proliferation; there was an improvement only when DS was administered alone. It follows that DS participate on thrombotic and inflammatory process inhibition, in the initial stages, after arterial injury and it also promote a higher MNC migration to the lesion site in wild-type animals; in ApoE-/- animals, DS inhibited the initial inflammatory response and neointima formation only when administered alone; its effect was null when it was injected together with MNC. This date suggest that local inflammatory process, atheroma plaque state, elevated cholesterol and triglyceride rates can influence on DS effect and on the capacity of endothelium recovery mediated by injected MNC in ApoE-/- mice. / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Joyce Maria Annichino-Bizzacchi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T06:35:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Araujo_GrazielaSilveira_M.pdf: 2289744 bytes, checksum: 6cde67a2a95fde59c04e1240833b9c41 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Em uma parcela de pacientes com quadro clínico hemorrágico ou trombótico, nenhum diagnóstico etiológico é estabelecido. Os pacientes com doença hemorrágica, muitas vezes importante, podem apresentar todos os exames de triagem e dosagem específica de fatores da coagulação dentro dos valores da normalidade. OBS.: O resumo na integra poderá ser visualizado no link ou texto completo da tese digital / Abstract: In a parcel of patients with hemorrhagic or thrombotic clinical picture, none etiologic diagnosis is established. The patients with hemorrhagic desorder, many times important, can present all inside the screening tests and specific dosage of factors of the coagulation of the values of normality. Note: the complete abstract is avaiable with the link or full eletronic digital theses or dissertations / Mestrado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Mestre em Fisiopatologia Médica