Kawasaki disease (KD) is an acute inflammatory disease characterized by persistent inflammation of the coronary arteries. KD is characterized by the release of cytokines such as tumor necrosis factor alpha (TNFα) and is thought to be initiated by a superantigen (SAg). The Lactobacillus casei cell wall extract model of KD demonstrates a critical requirement for TNFα and its receptor during pathogenesis, although the precise effect of TNFα is unknown. A persistent T cell infiltrate in the coronary artery disagrees with established fates of SAg activated cells, which undergo apoptosis. In this work, TNFα was found to promote the survival of SAg-reactive T cells. The results demonstrate that TNFα regulates B7.2 molecule expression on antigen presenting cells, and that TNFα indirectly promotes the survival of SEB-stimulated T cells by driving costimulation. These observations demonstrate how TNFα prevents T cell apoptosis and lend support to KD therapies which target TNFα and B7.

La polyarthrite rhumatoïde est une maladie auto-immune caractérisée par une inflammation chronique qui entraîne la destruction progressive des articulations et des os. Les dommages articulaires observés dans cette pathologie sont causés principalement par les ostéoclastes, des cellules spécialisées dans la résorption de la matrice osseuse. Ce processus de résorption dépend de la capacité à générer des ostéoclastes, de leur activité individuelle et de leur survie. De plus, certaines cytokines inflammatoires peuvent avoir un effet sur la différenciation et l'activité des ostéoclastes. Parmi celles-ci, on retrouve notamment le TNF-?, un médiateur pathologique majeur dans la polyarthrite rhumatoïde. En effet, celui-ci peut agir de façon directe sur la résorption osseuse en stimulant l'ostéoclastogénèse, ou de façon indirecte en augmentant l'expression du RANKL par les ostéoblastes. Subséquemment à ces découvertes, plusieurs agents anti-TNF-? ont été développés pour traiter la polyarthrite rhumatoïde. Ces agents s'avèrent être très efficaces pour réduire les dommages articulaires chez les patients atteints de la maladie. Cependant, leurs mécanismes exacts ainsi que leurs effets sur la biologie des ostéoclastes humains sont encore mal définis. Ainsi, l'objectif principal de cette étude est d'étudier l'effet d'une thérapie anti-TNF-? sur le nombre de précurseurs ostéoclastiques dans le sang périphérique de patients atteints de la polyarthrite rhumatoïde, sur le nombre d'ostéoclastes générés in vitro ainsi que leur activité avant et pendant le traitement avec l'adalimumab, un agent anti-TNF-?. Pour ce faire, 25 patients atteints de cette maladie et ayant reçu une prescription d'adalimumab ont été recrutés pour participer à trois visites consécutives, soit les visites d'inclusion (avant traitement) ainsi que les visites 3 mois et 6 mois après le début du traitement. Pour chaque visite, le nombre de précurseurs ostéoclastiques, le nombre d'ostéoclastes et la résorption osseuse générés in vitro ont été évalués. Les mêmes paramètres ont également été vérifiés pour les cellules incubées en présence d'adalimumab exogène. L'activité de la maladie et le statut fonctionnel du patient, mesurés respectivement avec le Disease Activity Score 28 et le Health Assessment Questionnaire ont été évalués à chaque visite de la présente étude. La collecte de ces données a permis de conclure que le traitement avec l'adalimumab pendant 6 mois n'a pas d'impact statistiquement significatif sur le nombre de précurseurs ostéoclastiques, l'ostéoclastogénèse et la résorption osseuse in vitro , même si nous pouvons observer une tendance vers une diminution pour les deux derniers paramètres. En ce qui concerne les résultats cliniques, l'adalimumab a un effet statistiquement significatif sur le score DAS28 et le questionnaire HAQ, tous deux ayant diminué 6 mois après l'initiation du traitement.

Die vorliegende publikationsbasierte Dissertationsschrift erörtert auf der Basis experimenteller Untersuchungen im Tiermodell die Auswirkungen von Stress auf die Zytokinproduktion und depressionsähnliches Verhalten. Außerdem wird getestet, ob die Blockade des Zytokins Tumornekrosefaktor-α (TNF‑α) eine Möglichkeit zur antidepressiven Intervention darstellt. Einleitend werden die Zusammenhänge von Stress, Zytokinen und Depression referiert sowie das hypothetische Modell erläutert, das den publizierten Untersuchungen zugrunde liegt. Es wird hypothetisiert, dass Stress zur Erhöhung der Produktion proinflammatorischer Zytokine führt und dass die vermehrte Zytokinproduktion depressive Verhaltensweisen hervorruft. Aus dieser Annahme leitet sich die Möglichkeit ab, durch Blockade der Wirkung des proinflammatorischen Zytokins TNF‑α antidepressive Effekte zu erzielen. In den beiden Arbeiten „The impact of social isolation on immunological parameters in rats“ (Archives of Toxicology) und „Stress-induced cytokine changes in rats“ (European Cytokine Network) wurde der Einfluss von sozialer Isolation, chronischem, milden und akutem Stress auf die Zytokinproduktion untersucht. In diesen Untersuchungen führten die verschiedenen Stressarten zu einer Modulation der Produktion proinflammatorischer Zytokine. Die dritte Publikation „Antidepressant effects of TNF‑α blockade in an animal model of depression“ (Journal of Psychiatric Research) berichtet von einem Experiment, in dem untersucht wurde, ob der TNF‑α-Inhibitor Etanercept antidepressive Effekte aufweist. Tatsächlich zeigte sich unter Etanercept ein Rückgang des depressionsähnlichen Verhaltens im forced swim test (FST) analog zu Verhaltensänderungen durch das in Tierversuchen als Standard-Antidepressivum geltende Imipramin. Die Autoren schlussfolgern, dass das Zytokinsystem durch Stress moduliert wird und so in die pathophysiologische Entwicklung einer Depression involviert sein könnte. Zytokininhibitoren könnten eine neue Klasse der Antidepressiva bei Therapieresistenz werden, wenn sich die Ergebnisse dieser Tierversuche in Studien an Probanden und an Patienten replizieren lassen.

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Two types mechanisms that control gene expression involve cis-regulatory factors and trans-regulatory factors. Cis-acting regulatory RNAs include targeted messenger RNA (mRNA) specificity and AU-rich elements (AREs). AU-rich mRNAs are a subcategory of mRNAs that have AREs in their 3'-Untranslated Regions (UTRs). These ARE-genes have been observed to correlate with rapid mRNA decay patterns. They comprise approximately 12% of all transcripts and are known to encode for a group of proteins that have involvement in the inflammatory response. Trans-acting regulatory mechanisms are micro RNAs (miRNAs) in eukaryotes, and small RNAs (sRNA) in prokaryotes. Misregulation of these mechanisms can lead to many disease states if rapid mRNA decay does not occur, leading to tumorigenesis, and eventually, different types of cancer. In this project, the TNF-α ARE was studied in both serum-positive and quiescent G0 conditions in order to analyze whether the translation of the gene differed in any respect due to the binding of a known miRNA called miR-130a. Additionally, both serum-positive and one-day serum-starved quiescent G0 conditions were analyzed for eIF5B and FXR1 levels to analyze whether there was a correlation between the two proteins.

As purinas extracelulares ATP e adenosina têm sido extensivamente estudadas em diferentes modelos e tipos celulares na modulação de várias respostas fisiológicas e patológicas. No entanto, a inosina extracelular, produto da degradação da adenosina pela Adenosina Deaminase (ADA), foi considerada por muito tempo um simples metabólito inativo. Recentemente, diversos trabalho têm demonstrado que este nucleosídeo possui importante papel na regulação de inúmeros processos. As células de Sertóli são as células somáticas dos túbulos seminíferos, e possuem fundamental importância na espermatogênese. Estas células, expressam diferentes purinoreceptores, estando estes envolvidos na regulação de diversas funções destas células relacionadas ao controle do desenvolvimento das células germinativas. No testículo, o TNF-α é produzido pelas espermátides redondas e pelos macrófagos ativados presentes no espaço intersticial. As células de Sertóli expressam os dois receptores descritos para TNF-α, TNF-RI (p55) e TNF-RII (p75), e diversos trabalhos tem descrito a modulação de diferentes funções destas células por esta citocina, incluindo a modulação da produção de NO e da fosforilação das MAPKs. Recentemente, foi descrita a modulação purinérgica da sinalização por TNF-α, bem como, a atividade ATPásica do receptor TNF-R1. Assim, nesta dissertação, foi estudado o efeito do TNF-α nos níveis das purinas extracelulares, além da possível participação purinérgica na sinalização desta citocina, em células de Sertóli em cultura. O tratamento destas células com TNF-α leva a um rápido aumento (5minutos) da concentração extracelular da inosina, que se prolonga até seis horas de incubação, sem alterar a concentração dos demais nucleotídeos e seus metabólitos. A inosina modula a produção de NO e a fosforilação das MAPKs ERK½ e p38 em células de Sertóli em cultura, aparentemente, através de diferentes mecanismos, sendo o primeiro efeito independente do receptor para adenosina A1 e o segundo efeito dependente da ativação deste receptor. Além disso, a inosina extracelular está envolvida na modulação da produção de NO e da fosforilação da MAPK ERK½ em células de Sertóli em cultura pelo TNF-α. A inibição do acúmulo de inosina estimulado pelo TNF-α através da incubação com um inibidor da adenosina deaminase cancela o aumento da produção de NO estimulada por esta citocina. Além disso, o bloqueio do receptor para adenosina A1 por antagonistas específicos impede o aumento na fosforilação da ERK½ estimulada por esta citocina. Assim, nesta dissertação, é descrito um papel intermediário da inosina extracelular na sinalização do TNF-α em células de Sertóli em cultura.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-17T17:22:34Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Maria das Graças de Oliveira Brito.pdf: 956170 bytes, checksum: e5dfa4d2a845741fe78f494dc079422b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-17T17:22:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Maria das Graças de Oliveira Brito.pdf: 956170 bytes, checksum: e5dfa4d2a845741fe78f494dc079422b (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq;) Bolsa de Estudo da Capes; Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Doenças Tropicais (CNPq/MCT). / Introdução: A leishmaniose cutânea (LC) é uma endemia em expansão. Tem-se mostrado que a resposta imune inflamatória é fundamental na gênese das ulcerações: (1) Intenso infiltrado inflamatório na lesão, com poucos parasitas, (2) produção elevada de IFN- e TNF- in situ, (3) correlação direta entre quantidade de linfócitos ativados e tamanho da úlcera, (4) tratamento com antimonial na fase pré-ulcerativa não impede o aparecimento da úlcera. Estes dados sustentam a necessidade de se associar ao tratamento específico, medicamentos que modulem a resposta imune. A pentoxifilina surge como potencial terapêutico por inibir a produção de TNF- , citocina pró-inflamatória. Objetivo: Avaliar em um ensaio clínico controlado de fase III a influência da pentoxifilina associada ao antimonial na resposta imune em pacientes com leishmaniose cutânea. Metodologia: Ensaio clínico randomizado, duplo-cego, placebo controlado de 17 pacientes com LC atendidos no posto de saúde de Corte de Pedra (BA). Todos confirmados por PCR ou cultura. Incluídos pacientes apresentado de 1 a 3 lesões ulceradas com 1 a 3 meses de evolução, entre 18 e 65 anos. Todos foram tratados com antimonial pentavalente (Sbv) (20mg/Kg/dia por via intravenosa) associado com placebo ou pentoxifilina (400mg - 3 vezes ao dia) por 20 dias. A cura foi definida por critério clínico: cicatrização total das lesões 60 dias após término do tratamento. As concentrações de TNF- , CCL-3, CXCL-9 e CXCL-10 foram determinadas em sobrenadantes de culturas de células mononucleares estimulada com antígeno de Leishmania pela técnica de Elisa. Resultados: Falha terapêutica foi observada em 14% dos pacientes tratados com a associação e em 45% do grupo controle (p = 0,05) . Os valores de TNF- ,CCL-3, CXCL-9 e CXCL-10 foram mensurados antes e quinze dias (D15) após início de tratamento. Em ambos os grupos houve diminuição de CCL- 3 e TNF- e aumento dos níveis de CXCL-9 e CXCL-10 no D15. No entanto, a queda dos níveis de TNF- foi maior no grupo da pentoxifilina (p = 0,004). Conclusão: Associação com a pentoxifilina aumentou a taxa de cura da LC, associado a inibição na produção de TNF- a. / Salvador

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-10-03T12:12:48Z No. of bitstreams: 1 THIAGO JOSÉ FIGUEIRA RAMOS.pdf: 1733228 bytes, checksum: c1606fa7a4e1569d3cc660ae62c32331 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-03T12:12:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 THIAGO JOSÉ FIGUEIRA RAMOS.pdf: 1733228 bytes, checksum: c1606fa7a4e1569d3cc660ae62c32331 (MD5) Previous issue date: 2012-10-10 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A silicose é uma doença ocupacional causada pela inalação de sílica em sua forma livre e cristalina. A inflamação e fibrose pulmonar constituem as principais características da patologia, que envolve uma variedade de mediadores inflamatórios, como o TNF-α, um mediador de ações amplas e que exerce seus efeitos em um grande número de tipos celulares. LASSBio-468 é um análogo da talidomida já descrito como capaz de modular a produção de TNF-α e inibir o choque endotóxico e artrite reumatóide em modelos animais. Neste estudo, nós investigamos o potencial efeito do LASSBio-468 em modelo de silicose experimental em camundongos. Animais Swiss-webster machos (18 – 20g) foram instilados intranasalmente com uma suspensão de sílica (10 mg/50 μL) e veículo (salina). O tratamento consistiu na administração por via oral de LASSBio-468 (12,5 – 100 mg/kg) e talidomida (50 mg/Kg) durante 7 dias consecutivos, do vigésimo primeiro ao vigésimo oitavo dia após a instilação de sílica. Foram analisadas a função pulmonar (resistência e elastância) e hiperreatividade das vias aéreas à aerolização de metacolina (3 – 27 mg/mL), através de pletismógrafo invasivo de corpo inteiro (Finepoint, Buxco System), além de análises morfológicas e morfométricas do tecido pulmonar. A produção de colágeno tecidual foi acessada pelo método de sircol, enquanto que a quantificação de citocinas/quimiocinas foi realizada pelo ensaio de ELISA. A técnica de imunohistoquímica permitiu a identificação da população de miofibroblastos no pulmão. Através de uma digestão mecânica e enzimática do tecido pulmonar, obtivemos uma cultura primária de miofibroblastos que, assim como macrófagos alveolares AMJ2C11 e células epiteliais A549, foram pré-tratados com diferentes concentrações de LASSBio-468 e talidomida, estimulados com IL-13 ou sílica e avaliados quanto a proliferação celular, viabilidade e produção de mediadores inflamatórios in vitro. Demonstramos que animais silicóticos apresentaram níveis basais elevados de resistência pulmonar e elastância, bem como hiperreatividade frente à aerolização de metacolina. Resposta inflamatória tecidual, extensiva deposição de colágeno, formação de granuloma e produção de quimiocinas (KC and MCP-1) e citocinas (TNF- αand TGF-β) também foram detectadas em pulmões de animais silicóticos, assim como o aumento do número de miofibroblastos no tecido. O tratamento com LASSBio-468 reduziu o comprometimento da função pulmonar e hiperreatividade, formação de granulomas, expressão de miofibroblastos e deposição de colágeno no tecido pulmonar de animais doentes. Miofibroblastos oriundos de animais silicóticos apresentaram basal de proliferação superior, sendo responsivos também ao estímulo mitogênico da IL-13, que foi atenuado frente ao pré-tratamento com LASSBio-468. A estimulação de macrófagos alveolares e células epiteliais com sílica promoveu a liberação de TNF-α e IL-8, respectivamente, sendo o LASSBio-468 capaz de inibir de forma significativa esta produção. Em conjunto, nossos resultados mostraram que o tratamento com LASSBio-468 foi capaz de reduzir de forma curativa o comprometimento da função pulmonar e resposta granulomatosa, através de ações sobre células específicas, indicando que o composto em questão parece constituir uma promissora ferramenta para o tratamento de doenças pulmonares fibróticas crônicas como a silicose. / Silicosis, one of the oldest occupational diseases in the world, is a consequence of long-term exposure to inhaled dust containing silica in its free and crystalline form. Lung interstitial inflammation and fibrosis are the main features of the disease, involving a wide range of chemical mediators such as TNF-α. This is a pleiotropic molecule which exerts its effects on many cell types. LASSBio-468 is a thalidomide analogue which modulates TNF-α production and inhibits endotoxic shock and arthritis in animal models. In this study we investigated the effect of LASSBio-468 on experimental silicosis in mice. Anesthetized male Swiss-Webster mice (18-20g) received intranasal (i.n.) instillation of silica (10 mg/50 μL) and vehicle (saline). Treatment consisted of oral administration of the LASSBio-468 (12,5 - 100 mg/kg) and thalidomide (50 mg/Kg) during 7 consecutive days, from day 21 to 28 post-silica. The analyses included lung function (resistance and elastance) and airways hyperreactivity to aerosolized metacholine (3 -27 mg/mL) measured by whole body invasive plestimography (Finepoint, Buxco System). Morphological and morphometrical analyses included classical dyes such as Hematoxylin-Eosin and Picrus-Sirius. Collagen content and cytokine/chemokine generation were quantified by Sircol technique and ELISA, respectively. Immunohistochemistry was employed to identify the lung myofibroblastic population. Primary murine myofibroblasts cells were obtained after a mechanical and enzymatic digestion of the lung from saline and silicotic mice. Myofibroblasts, AMJ2C11 alveolar macrophages and A549 epithelial cells were pre-treated with LASSBio-468 and Thalidomide, stimulated with IL-13 or silica and evaluated thought proliferation, viability and production of inflammatory mediators in vitro. We showed that silicotic mice exhibited increased basal levels of lung resistance and elastance as well as airways hyperreactivity to methacholineaerosolization. Tissue inflammatory response, extensive collagen deposition, granuloma formation and chemokine (KC and MCP-1)/cytokine (TNF-α and TGF-β) generation were also detected in the silicotic lungs, as well as an increasing of myofibroblasts expression in the lung. Administration of LASSBio- 468 into silicotic mice reduced the decline lung function and airways hyperreactivity, myofibroblasts numbers, tissue collagen deposition and granulomatous area. The generation of cytokines and chemokines was also suppressed by the drug. The primary lung myofibroblasts obtained from silicotic mice showed a superior basal proliferation and IL-13, a pro-fibrotic cytokine, stimulated the (3H) incorporation in vitro, which was diminished by the treatment with LASSBio-468. Stimulation of alveolar macrophages and epithelial cells by silica in vitro increased the release of TNF-α and IL-8, respectively, and LASSBio-468 was able to reduce these inflammatory mediators production. The compound modulated key cells functions without decline in cell death. Altogether our findings show that the treatment of silicotic mice with LASSBio-468 reduced curatively the decline in lung function and granulomatous response, throught actions on myofibroblasts, macrophages and epithelial cells, indicating that this compound constitutes a promising tool for the treatment of chronic fibrotic pulmonary diseases such as silicosis.

LOPES, T.A. Influência da Artrite Encefalite Caprina sobre a expressão de RNAm para GDF-9, BMP-15 e BMPR-IB em folículos ovarianos e ativação in vitro de folículos primordiais em meio suplementado com fitohemaglutinina e EGF. 2014. 101 f. Dissertação (MESTRADO EM BIOTECNOLOGIA) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2014. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-01T13:34:45Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_tdalopes.pdf: 1351150 bytes, checksum: 65ee09c841d91119c1eb7a31b1f26ee5 (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-10-03T14:50:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_tdalopes.pdf: 1351150 bytes, checksum: 65ee09c841d91119c1eb7a31b1f26ee5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-03T14:50:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_tdalopes.pdf: 1351150 bytes, checksum: 65ee09c841d91119c1eb7a31b1f26ee5 (MD5) Previous issue date: 2014 / This study aims to investigate the effects of caprine arthritis encephalitis (CAE) on the expression of BMP-15, BMPR-IB and GDF-9 in ovarian follicles, as well as the effects of phytohemagglutinin (PHA) and EGF on the survival and activation of primordial follicles, and on expression of mRNA for TNF-α and its receptors in cultured goat ovarian tissue. The levels of BMP-15, BMPR-IB and GDF-9 in primordial/primary and secondary follicles, as well as in COCs and follicular walls from antral follicles were evacuated by real-time PCR (experiment 1). Ovarian tissues were cultured for six days in α-MEM+ alone or supplemented with EGF (100μg/mL), PHA (10μg/mL) or both (experiment 2). Before and after culture, ovarian fragments were processed for morphological analysis or stored to evaluate the expression of mRNA for TNFα and its receptors. The results showed that the expression of BMP-15 and GDF-9 in primordial/primary follicles from infected goats was significantly higher than in health animals, but the expression of GDF-9 in secondary follicles from infected goats was significantly lower. Additionally, the expression of mRNA for BMP-15 in follicular wall of antral follicles from infected goats was significantly higher than in healthy goats. After culturing ovarian fragments in all tested media, reduced percentages of primordial follicles, and increased of developing follicles was observed when compared to uncultured control. Furthermore, there was a significant increase in follicular diameter after culture in medium supplemented with EGF. Ovarian tissue from infected goats cultured in medium supplemented with PHA had primordial follicles with higher diameters than those from healthy animals. An increase in the levels of mRNAs for TNF-α was observed after culturing ovarian tissue in presence of both EGF and PHA in healthy animals, but this same treatment promoted a reduction of mRNAs for TNF-α and and increase of TNFR-II transcripts in infected animals. In conclusion, CAE influences the expression of mRNA for BMP-15 and GDF-9 in goat ovarian follicles and PHA and EGF differentially regulate the expression of TNFα and TNFR-II in cultured ovarian tissue. / O objetivo deste trabalho foi investigar os efeitos da artrite encefalite caprina (CAE) sobre a expressão de BMP-15, BMPR-IB e GDF-9 em folículos ovarianos, bem como os efeitos de fitohemaglutinina (PHA) e EGF na sobrevivência e ativação de folículos primordiais, e na expressão de genes para o sistema de TNF-α no tecido ovariano cultivado caprino. Os níveis de BMP-15, BMPR-IB e GDF-9 em folículos primordiais/primários e secundários, bem como em CCOs e parede folicular de folículos antrais foram avaliados por PCR em tempo real (experimento 1). Para os estudos in vitro, fragmentos de tecido ovariano foram cultivados por seis dias em α-MEM sozinho ou suplementado com EGF (100ug), PHA (10μg/mL) ou ambos (experimento 2). Antes e depois do cultivo, o tecido ovariano foi processado para análise morfológica ou armazenado para avaliar a expressão de RNAm para TNF-α e seus receptores. Os resultados mostraram que a expressão de BMP-15 e GDF-9 em folículos primordiais/primários de cabras infectadas foram significativamente maiores do que em animais saudáveis, mas a expressão de GDF-9 em folículos secundários de cabras infectadas foi significativamente menor. Além disso, a expressão de RNAm para BMP-15 na parede folicular de folículos antrais de cabras infectadas foi significativamente maior do que em cabras saudáveis. Após o cultivo dos fragmentos ovarianos em todos os meios testados, observou-se a redução nos percentuais de folículos primordiais, e aumento de folículos em desenvolvimento quando comparado ao grupo controle não cultivado. Além disso, houve um aumento significativo no diâmetro folicular após cultivo em meio suplementado com EGF. Após o cultivo de tecido ovariano de cabras infectadas em meio suplementado com PHA, os folículos primordiais apresentavam diâmetros maiores do que os de animais saudáveis. Além disso, observou-se um aumento nos níveis de RNAm para TNF-α após cultivo de tecido ovariano na presença de ambos EGF e PHA em animais saudáveis, mas este mesmo tratamento proporcionou uma redução de RNAm para TNF-α e aumento dos transcritos de TNFR-II em animais infectados. Pode-se concluir que a CAE influencia a expressão de RNAm para BMP-15 e GDF-9 em folículos ovarianos caprinos e a PHA e o EGF diferencialmente regulam a expressão de TNF-α e TNFR-II em tecidos ovarianos.

As purinas extracelulares ATP e adenosina têm sido extensivamente estudadas em diferentes modelos e tipos celulares na modulação de várias respostas fisiológicas e patológicas. No entanto, a inosina extracelular, produto da degradação da adenosina pela Adenosina Deaminase (ADA), foi considerada por muito tempo um simples metabólito inativo. Recentemente, diversos trabalho têm demonstrado que este nucleosídeo possui importante papel na regulação de inúmeros processos. As células de Sertóli são as células somáticas dos túbulos seminíferos, e possuem fundamental importância na espermatogênese. Estas células, expressam diferentes purinoreceptores, estando estes envolvidos na regulação de diversas funções destas células relacionadas ao controle do desenvolvimento das células germinativas. No testículo, o TNF-α é produzido pelas espermátides redondas e pelos macrófagos ativados presentes no espaço intersticial. As células de Sertóli expressam os dois receptores descritos para TNF-α, TNF-RI (p55) e TNF-RII (p75), e diversos trabalhos tem descrito a modulação de diferentes funções destas células por esta citocina, incluindo a modulação da produção de NO e da fosforilação das MAPKs. Recentemente, foi descrita a modulação purinérgica da sinalização por TNF-α, bem como, a atividade ATPásica do receptor TNF-R1. Assim, nesta dissertação, foi estudado o efeito do TNF-α nos níveis das purinas extracelulares, além da possível participação purinérgica na sinalização desta citocina, em células de Sertóli em cultura. O tratamento destas células com TNF-α leva a um rápido aumento (5minutos) da concentração extracelular da inosina, que se prolonga até seis horas de incubação, sem alterar a concentração dos demais nucleotídeos e seus metabólitos. A inosina modula a produção de NO e a fosforilação das MAPKs ERK½ e p38 em células de Sertóli em cultura, aparentemente, através de diferentes mecanismos, sendo o primeiro efeito independente do receptor para adenosina A1 e o segundo efeito dependente da ativação deste receptor. Além disso, a inosina extracelular está envolvida na modulação da produção de NO e da fosforilação da MAPK ERK½ em células de Sertóli em cultura pelo TNF-α. A inibição do acúmulo de inosina estimulado pelo TNF-α através da incubação com um inibidor da adenosina deaminase cancela o aumento da produção de NO estimulada por esta citocina. Além disso, o bloqueio do receptor para adenosina A1 por antagonistas específicos impede o aumento na fosforilação da ERK½ estimulada por esta citocina. Assim, nesta dissertação, é descrito um papel intermediário da inosina extracelular na sinalização do TNF-α em células de Sertóli em cultura.