LEITE, Ismênia Osório. Estudo de fase I da vacina anticâncer HASUMI. 2004. 187 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2004. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-04-09T12:47:24Z No. of bitstreams: 1 2004_dis_ioleite.pdf: 2335872 bytes, checksum: cf6da64445814ea7a2a7403e82004bed (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-04-09T16:04:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2004_dis_ioleite.pdf: 2335872 bytes, checksum: cf6da64445814ea7a2a7403e82004bed (MD5) / Made available in DSpace on 2012-04-09T16:04:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2004_dis_ioleite.pdf: 2335872 bytes, checksum: cf6da64445814ea7a2a7403e82004bed (MD5) Previous issue date: 2004 / The Hasumi vaccine (VH) is an imune-stimulant mode by two preparations obtained from distinctive forms, it is an assisting in a pool of tumours antigens. The assisting is taken off from calf splens and the antigen, from different forms of tumor. The VH is a sterile uncoloured liquid, conditioned in 0,5mL glass ampoules, separately. The present research aimed to evaluate, throughout a Phase I study, the security of VH, as well as the comprehension of its action mechanism. The clinical experiment was conducted in 24 healthy volunteers in wich the VH was given subcutaneously every 5 days during 2 months, accomplishing an amount in wich the two first ones were given in the hospital. Before the first administration, all the voluteers did the Prick test, to evaluate the possibility of reacting to hipersensibility. After that they were submit to clinical and laboratorial evaluation (hemogram, biochemical, urine extract and parasitological excrements exams, sorology to B and C hepatitis, HIV, FAN, reumatoidic factor, C3, CD3, CD4, CD8, IgA, IgG, IgE, IgM, PSA, CEA, AFP and HCG-beta). The planning of the experiment also had the repetition of such exams after the 3th, 6th and the 12th doses, as well as in the after-study 30 days after the last dose. By hte and of the study, significant adverse events were not observed. Therefore, in the last dose and within the stabilished treatment period of this experiment, the VH was shown to be safe and with no toxity. / A Vacina Hasumi (VH) é um imuno estimulante constituído por duas preparações obtidas de formas distintas, sendo um adjuvante e um pool de antígenos tumorais. O adjuvante é retirado de células de baço de bezerros e o antígeno, de diversas formas de tumor. A VH é um líquido incolor estéril, acondicionado em ampolas de vidro, no volume de 0,5mL, separadamente. O presente trabalho objetivou avaliar, através de um Estudo de Fase I, a segurança da VH, bem como a compreensão do seu mecanismo de ação. O ensaio clínico foi conduzido em 24 voluntários sadios nos quais a VH foi administrada por via subcutânea a cada 5 dias durante 2 meses, perfazendo um total de 12 administrações, sendo as 2 primeiras em regime de internamento hospitalar. Antes da primeira administração, todos os voluntários realizaram o prick teste, para avaliar a possibilidade de reação de hipersensibilidade, após o que, foram submetidos a avaliações clínica e laboratorial (hemograma completo, bioquímica, sumário de urina, parasitológico de fezes, sorologia para hepatite B e C, HIV, FAN, fator reumatóide, C3, CD3, CD4, CD8, IgA, IgG, IgE, IgM, PSA, CEA, AFP, Beta HCG). O planejamento do experimento compreendeu também a repetição das avaliações após a 3a, 6a e a 12a doses e no pós-estudo, 30 dias após a última dose. Ao final do estudo não foram observados eventos adversos significantes. Portanto, na dose e no tempo de tratamento estabelecidos neste ensaio, a VH mostrou-se segura e não apresentou toxicidade.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:44:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006 / Introdução: Apesar da imunoterapia sublingual na asma ter sido oficialmente aceita como uma via alternativa à tradicional imunoterapia subcutânea, sua efetividade ainda é assunto de discussão. Objetivos: Avaliar a eficácia clínica e segurança da imunoterapia sublingual (ITSL) na asma através de uma revisão sistemática com metanálise usando a metodologia da Colaboração Cochrane. Forma utilizada na pesquisa: MEDLINE (1966-2005), EMBASE (1974-2005), LILACS (1982-2005) e Cochrane Library foram pesquisadas em qualquer língua usando os termos: 1- asthma or wheez*; 2- (immunother* or hyposen* or desen*) and (sublingual); 3- #1 and #2. Seleção dos estudos: Foram selecionados ensaios clínicos controlados randomizados sobre ITSL no tratamento da asma em adultos e crianças. De 119 citações, 25 estudos com 1706 pacientes foram incluídos nesta metanálise. Extração de dados: Dois autores independentemente selecionaram os títulos e resumos de cada citação. Para cada estudo, foi atribuído um escore de qualidade e os dados relativos aos desfechos de interesse foram extraídos: sintomas de asma, necessidade de uso de medicações, testes de função respiratória e broncoprovocação. Análise dos dados: De acordo com o método de qualidade Jadad 64% dos estudos foram classificados em escore 4 ou 5. A imunoterapia mostrou reduzir significativamente a gravidade da asma quando todos os parâmetros foram analisados de forma conjunta através de dados categóricos (risco relativo: 0.48; 95% intervalo de confiança: 0.40 a 0.57). Quando os resultados foram analisados através de dados contínuos usando-se a diferença da média ponderada houve melhora de apenas alguns desfechos. Também houve uma significativaheterogeneidade na maioria das análises, explicada em parte pela ampla variedade de sistemas de escores utilizados na aferição dos desfechos. Nenhuma reação adversa grave foi observada. Conclusões: Apesar da evidência encontrada não ter sido tão forte, esta metanálise sugere que a ITSL é benéfica no tratamento da asma. Ainda mais, ela é uma alternativa segura à imunoterapia injetável. Mais ensaios clínicos controlados randomizados com estandardização dos escores de sintomas e medicações são necessários para contribuir com este assunto. / Context: Although sublingual immunotherapy has officially been accepted as a viable alternative for asthma treatment, it is still a matter for discussion. Objective: To evaluate the clinical efficacy and safety of sublingual immunotherapy (SLIT) in asthma through a systematic review with meta-analysis. Data Sources: MEDLINE (1966-2005), EMBASE (1974-2005), LILACS (1982-2005) and the Cochrane Library were searched in any language using the terms: 1- asthma or wheez*; 2- (immunother* or hyposen* or desen*) and (sublingual); 3- #1 and #2. Study Selection: Randomized controlled clinical trials on SLIT in asthma treatment for adults and children were selected. From 119 citations, 25 studies with 1706 patients were included in this meta-analysis. Data Extraction: Two authors independently screened the titles and abstracts of each citation. For each report, quality scores were assigned and data were extracted in relation to the outcomes analyzed: asthmatic symptoms, use of asthma medications, lung function and bronchial provocation. Data analysis: According to the Jadad quality method, 64% of the studies were assigned scores of 4 or 5. Immunotherapy was seen to significantly reduce asthma severity when parameters compositions were all analyzed by categorical outcomes (relative risk: 0.48; 95% confidence interval: 0.40 to 0.57). When continuous outcomes were analyzed using standardized mean differences, there was improvement in only some outcomes. However, there was significant heterogeneity in most cases, explained in part by the wide variety of scoring systems used. No severe reactions were observed. Conclusions: Even though the evidence found was not very strong, this meta-analysis suggests that SLIT is beneficial for asthma treatment. Moreover, it is a safe alternative to the subcutaneous route. More randomized controlled clinical trials with standardization of symptom scores and medications are needed in order to contribute further to this subject. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Ruthléa Nascimento (ruthlea@bce.unb.br) on 2008-10-22T15:47:58Z No. of bitstreams: 1 2008_AliceMeloRibeiro.pdf: 765803 bytes, checksum: 64d83181d608218897c1293017932928 (MD5) / Approved for entry into archive by Georgia Fernandes(georgia@bce.unb.br) on 2008-11-17T13:35:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_AliceMeloRibeiro.pdf: 765803 bytes, checksum: 64d83181d608218897c1293017932928 (MD5) / Made available in DSpace on 2008-11-17T13:35:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_AliceMeloRibeiro.pdf: 765803 bytes, checksum: 64d83181d608218897c1293017932928 (MD5) / As proteínas de choque térmico (HSPs) são reconhecidas como importantes moléculas na modulação do sistema imunológico e são altamente conservadas entre os diferentes organismos. A vacina DNA-hsp65 de Mycobacterium leprae demonstrou efeitos profiláticos e imunoterapêuticos contra diversas doenças como, por exemplo, tuberculose, artrite e leishmaniose. Neste trabalho, avaliamos a eficácia e o potencial imunomodulador na imunização e no tratamento de camundongos infectados experimentalmente com o fungo patogênico Paracoccidioides brasiliensis, o agente etiológico da Paracoccidioidomicose, a mais importante micose endêmica na América Latina. A vacina DNA-hsp65 conferiu proteção aos animais contra o P. brasiliensis em ensaios de imunização ou de tratamento como indicado por: redução significativa no pulmonar fúngica carga (UFCs); diminuição da perda da função pulmonar e na presença de colágeno em granulomas (revelada por análises histológicas do tecido pulmonar); reestabelecimento proliferativo das células de baço; perfil de resposta imunológica de padrão Th1 com níveis elevados de IL-12, IFN - g, TNF-α e IGg2a e baixos níveis de IL-4, IL-10 e IgG1. Esses dados, em conjunto, indicam que, em BALB/c, tanto a imunização como o tratamento com a vacina DNA-hsp65 conferem proteção no curso da Paracoccidioidomicose. Nossos resultados abrem novas perspectivas sobre a prevenção e tratamento para outras micoses sistêmicas. _____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Heat shock proteins (HSPs) are recognized as important molecules in the modulation of the immune system and are highly conserved among different organisms. The DNA-hsp65 vaccine from Mycobacterium leprae (M. leprae) has been shown to have prophylactic and immunotherapeutic effects against various diseases, for instance, tuberculosis, arthritis and leishmaniasis. In this work, we evaluated the effectiveness and immunomodulatory potential of the DNA-hsp65 immunization and treatment in model BALB/c mice infected with Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis), the etiological agent of Paracoccidioidomycosis, the most important endemic mycosis in Latin America. The DNA-hsp65 vaccine conferred protection against this pathogen for both, the prophylactic and therapeutic assays, as indicated by: a significant reduction in pulmonary fungal burden (CFUs); a decrease in pulmonary function loss and in the presence of collagen in granulomas (revealed by histological analyses of the pulmonary tissue); the reestablishment of spleen cells proliferation; the Th1 pattern immune response with higher levels of IL-12, IFN- γ, TNF- and IGg2a and lower levels of IL-4, IL-10 and IgG1. Together, these findings indicate that, in mice, the immunization and treatment with the DNA-hsp65 vaccine protect mice against Paracoccidioidomycosis. Our results open new perspectives on prevention and treatment of other systemic mycoses.

Orientador: Márcia Regina Brochetto Braga / Banca: Camila Andrea de Oliveira / Banca: Lucilene Delazari dos Santos / Resumo: Polybia paulista é uma vespa pertencente à ordem Hymenoptera muito comum no Sudeste do Brasil, especialmente no Estado de São Paulo. Os venenos destes insetos são constituídos por aminas, peptídeos, proteínas de alta massa molecular, sendo estas na sua maioria, enzimas. As fosfolipases são as enzimas de maior abundância entre os alérgenos de veneno dos Hymenoptera sociais, constituindo-se também no alérgeno de maior importância. A sequência completa de 985 pb do cDNA da fosfolipase A1 do veneno da vespa P. paulista foi determinada a partir da clonagem. A proteína deduzida por tradução apresentou 302 resíduos de aminoácidos, PI e MW teóricos de 9,1 e 33 kDa respectivamente. Por meio de ferramentas de bioinformática foi possível identificar o sítio ativo entre os resíduos 131 a 140 (10 aminoácidos) e inferir que se trata de uma proteína da super família das esterases lipases. O cDNA completo foi clonado em vetor de expressão pET-28a em cepas de Escherichia coli BL21-DE3. A PLA1-Rec com cauda de 6x Histidinas no N- terminal foi expressa na forma insolúvel em corpúsculos de inclusão por meio da indução com 1mM de IPTG à 20°C por 6 horas. A purificação foi realizada por cromatografia de afinidade em resina agarose-Ni+2 sob condições desnaturantes na presença de 8 M de uréia e a proteína eluida com tampão gradiente decrescente de pH. As análises de Western blotting revelaram a especificidade dos anticorpos policlonais produzidos em camundongos contra a fração eletroforética de PLA1 natural quando testados com o veneno bruto da própria vespa e com a PLA1- Rec de P. paulista. Além disto, estes anticorpos apresentaram imunoreatividade cruzada com o veneno bruto de outras vespas sociais testadas neste trabalho. Outras proteínas detectadas na membrana de nitrocelulose evidenciaram o reconhecimento dos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Polybia paulista is a wasp that belongs to the Hymenoptera order very common in southeastern Brazil, especially in São Paulo. The venoms of these insects are composed of amines, peptides, high weight molecular proteins, which are mainly enzymes. The phospholipase enzymes are the most abundant among the allergens of social Hymenoptera venom, and they are also the most important allergen. The complete sequence of 985 bp of phospholipase A1 cDNA from P. paulista venom was determined by cloning. The protein inferred by translation had 302 amino acid residues, PI and theoretical MW of 9.1 and 33 kDa respectively. By means of bioinformatics tools, it was possible to identify the active site between residues 131 to 140 (10 amino acids) and infer that it is a protein that belongs to esterases lipases super family. The complete cDNA was cloned into pET-28a expression vector in strains of BL21-DE3 Escherichia coli. The Rec-PLA1 with 6x histidine tail at the N-terminal was expressed in insoluble form in inclusion corpuscles by induction with 1mM IPTG at 20 ° C for 6 hours. The purification was performed by affinity chromatography on agarose-Ni+2 resin under denaturing conditions in the presence of 8 M urea and the protein eluted with decreasing pH gradient buffer. The Western blotting analyses revealed the specificity of polyclonal antibodies produced in mice against the electrophoretic fraction of natural PLA1 when tested with the crude venom of the wasp itself and with the PLA1- Rec of P. paulista. Besides these antibodies presented cross-immunoreactivity with the crude venom of other social wasps tested in this work. Other proteins detected in the nitrocellulose membrane showed the recognition of antibodies to other isoforms of phospholipase already described in the literature. Obtaining the recombinant form of... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-23Bitstream added on 2014-06-13T18:09:00Z : No. of bitstreams: 1 pereira_fdc_me_rcla.pdf: 1421119 bytes, checksum: 8743dede24fc8cac2d9cc226ac3e63d9 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Polybia paulista é uma vespa pertencente à ordem Hymenoptera muito comum no Sudeste do Brasil, especialmente no Estado de São Paulo. Os venenos destes insetos são constituídos por aminas, peptídeos, proteínas de alta massa molecular, sendo estas na sua maioria, enzimas. As fosfolipases são as enzimas de maior abundância entre os alérgenos de veneno dos Hymenoptera sociais, constituindo-se também no alérgeno de maior importância. A sequência completa de 985 pb do cDNA da fosfolipase A1 do veneno da vespa P. paulista foi determinada a partir da clonagem. A proteína deduzida por tradução apresentou 302 resíduos de aminoácidos, PI e MW teóricos de 9,1 e 33 kDa respectivamente. Por meio de ferramentas de bioinformática foi possível identificar o sítio ativo entre os resíduos 131 a 140 (10 aminoácidos) e inferir que se trata de uma proteína da super família das esterases lipases. O cDNA completo foi clonado em vetor de expressão pET-28a em cepas de Escherichia coli BL21–DE3. A PLA1-Rec com cauda de 6x Histidinas no N- terminal foi expressa na forma insolúvel em corpúsculos de inclusão por meio da indução com 1mM de IPTG à 20°C por 6 horas. A purificação foi realizada por cromatografia de afinidade em resina agarose-Ni+2 sob condições desnaturantes na presença de 8 M de uréia e a proteína eluida com tampão gradiente decrescente de pH. As análises de Western blotting revelaram a especificidade dos anticorpos policlonais produzidos em camundongos contra a fração eletroforética de PLA1 natural quando testados com o veneno bruto da própria vespa e com a PLA1- Rec de P. paulista. Além disto, estes anticorpos apresentaram imunoreatividade cruzada com o veneno bruto de outras vespas sociais testadas neste trabalho. Outras proteínas detectadas na membrana de nitrocelulose evidenciaram o reconhecimento dos... / Polybia paulista is a wasp that belongs to the Hymenoptera order very common in southeastern Brazil, especially in São Paulo. The venoms of these insects are composed of amines, peptides, high weight molecular proteins, which are mainly enzymes. The phospholipase enzymes are the most abundant among the allergens of social Hymenoptera venom, and they are also the most important allergen. The complete sequence of 985 bp of phospholipase A1 cDNA from P. paulista venom was determined by cloning. The protein inferred by translation had 302 amino acid residues, PI and theoretical MW of 9.1 and 33 kDa respectively. By means of bioinformatics tools, it was possible to identify the active site between residues 131 to 140 (10 amino acids) and infer that it is a protein that belongs to esterases lipases super family. The complete cDNA was cloned into pET-28a expression vector in strains of BL21-DE3 Escherichia coli. The Rec-PLA1 with 6x histidine tail at the N-terminal was expressed in insoluble form in inclusion corpuscles by induction with 1mM IPTG at 20 ° C for 6 hours. The purification was performed by affinity chromatography on agarose-Ni+2 resin under denaturing conditions in the presence of 8 M urea and the protein eluted with decreasing pH gradient buffer. The Western blotting analyses revealed the specificity of polyclonal antibodies produced in mice against the electrophoretic fraction of natural PLA1 when tested with the crude venom of the wasp itself and with the PLA1- Rec of P. paulista. Besides these antibodies presented cross-immunoreactivity with the crude venom of other social wasps tested in this work. Other proteins detected in the nitrocellulose membrane showed the recognition of antibodies to other isoforms of phospholipase already described in the literature. Obtaining the recombinant form of... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Selma Giorgio / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-29T02:26:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barao_SandraCristina_M.pdf: 8260414 bytes, checksum: 7031af0c856aceaf69b2b015a15b8ea6 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A capacidade imunoestimulatória dos ribonucleosídeos sintéticos com substituições nas posições 7 e/ou 8 foi comprovada em experimentos in vitro e tratamentos experimentais. Diante da evidência de que os parasitas do gênero Leishmania infectam macrófagos, possuindo um complexo mecanismo de escape e, não raro, os tratamentos convencionais são ineficientes, o objetivo deste trabalho foi testar a possibilidade da utilização do ribonucleosídeo 8-Bromo-Guanosina (8BrGuo) no tratamento da leishmaniose utilizando o modelo murino. Testes in vitro comprovaram que este composto ativa macrófagos murinos infectados com formas amastigotas de Leishmania (L.) amazonensis, diminuindo a infecção em cerca de 70%. Também foram realizados experimentos in vitro com o objetivo de avaliar o mecanismo de ação deste composto na ativação de macrófagos e destruição dos parasitas. Foi analisada a produção de nitrito, um subproduto do óxido nítrico, composto com capacidade oxidativa e tóxica a microrganismos. Para os testes in vivo, com camundongos de linhagem isogênica CBA/J, utilizamos diferentes vias de inoculação e apresentação de 8BrGuo, sendo que o processo mais eficiente e menos agressivo foi o intraperitoneal e a melhor resposta foi em solução utilizando Tween 80® como adjuvante. Paralelamente, investigamos as dosagens de 8BrGuo, sendo que algumas mostraram resultados estatisticamente significativos relacionados à diminuição da infecção. Observamos que o composto mostrou toxicidade nas doses mais elevadas. Mas análises histológicas mostraram que o composto 8BrGuo não provocou alterações teciduais hepáticas e renais 24 horas após o tratamento, nem após 60 dias. Testes bioquímicos de enzimas sangüíneas (transaminase glutâmico pirúvica e transaminase glutâmico oxaloacética), creatinina e hemograma completo mostraram-se normais quando comparados a animais controles. Podemos afirmar, inicialmente, que existe a possibilidade de tratamento da leishmaniose com a 8BrGuo. Contudo ainda há necessidade de maiores avaliações deste composto quanto aos comportamentos farmacocinéticos e farmacodinâmico / Abstract: Immunostimulatory ability of nucleosides substituted in either C8 or C8 and N7 positions has been tested in experimental in vitro treatments. Species belonging to the Leishmania genus parasitize macrophages displaying complex immune mechanism of escape, and treatments of leishmaniasis is often inefficients. The aim of this project was to test the 8BromoGuanosine (8BrGuo) in the treatment of cutaneous leishmaniasis in a murine model. The first tests confirmed that 8BrGuo ativated murine macrophages infected with Leishmania (L.) amazonensis amastigotes in vitro leading to 70% of infection reduction. In order to study the action mechanism of 8BrGuo in the parasite destruction inside the macrophages, another in vitro experiments were carried out, such as the production of nitrite, a subproduct of niric oxide, a powerful oxidative and toxic compound for microrganisms. These results encourage us to continue the investigations with 8BrGuo and isogenic mice CBA/J were for in vivo tests. Different administration routes of 8BrGuo were evaluated and the intraperitoneal route showed to be the most efficient and less agressive to the animals tested. Treatment with 8BrGuo and Tween® as na adjuvant led to statistically significant decrease of L. (L.) amazonensis lesions. Although the drug presented animal toxicity at high doses, at concentrations of 8BrGuo used in the present work it was not observed tissue damages in liverand kidney from treated CBNJ mice. Our results suggest that 8BrGuo induced a therapeutic effect during the leishmaniasis infection in murine model. Future studies concerning time assimilition, half time, elimination, and degradation of 8BrGuo will provide additional clues for the function and potential use of this compound as a therapeutic agent against leishmaniasis / Mestrado / Mestre em Parasitologia

Made available in DSpace on 2016-04-15T13:03:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 gentil_vasconcelos_ioc_dout_2015.pdf: 3238898 bytes, checksum: 4b0a8f2422705d1ca8dfa7ae9a2ca1da (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A produção de anticorpos em aves imunizadas seguida da extração desses anticorpos da gema dos ovos (IgY), tem atraído o interesse da comunidade científica, como pode ser demonstrado pelo aumento significativo da literatura sobre a IgY. Esta abordagem, que é apropriada à produção em larga escala, oferece inúmeras vantagens, tais como, baixo custo e alta eficiência da técnica, em vista do extraordinário rendimento de IgY em somente uma ave (20-40 g IgY por ano), e é mais adequada ao conceito bioético quando trata-se da manutenção e do manejo das aves. Destaca-se que a tecnologia da IgY oferece novas possibilidades de aplicação em imunoterapia e métodos de diagnóstico, tanto para aplicação humana quanto veterinária, incluindo estratégias de tratamento de doenças intestinais graves em crianças, particularmente em países pobres. Neste presente estudo, objetivou-se avaliar a eficiência terapêutica da IgY utilizando macacos cynomolgus (Macaca fascicularis) jovens desafiados com o rotavírus do grupo A (RVA) humano, a maior causa de morbidade e mortalidade de crianças em todo o mundo, especialmente em países em desenvolvimento. Para esta proposta, anticorpos IgY específicos contra o RVA foram produzidos em aves, purificados por polietileno glicol, caracterizados por eletroforese em gel de poliacrilamida, western blotting e um teste de neutralização em cultura de células (MA-104). Este experimento preliminar rendeu uma suspensão altamente concentrada de IgY específica anti-rotavírus (IgY anti-RVA) (média de 37 mg/mL) O macaco cynomolgus foi estabelecido como modelo de infecção experimental após uma única administração de suspensão de rotavírus humano (3,1x106 FFU/mL) por sonda gástrica. Os animais foram acompanhados durante onze dias, sendo observadas as manifestações clínicas, cargas virais sérica e fecal, hematologia e dosagem de eletrólitos séricos. O principal sinal clínico (observado em dois dos sete animais inoculados) foi diarreia associada com diminuição dos níveis séricos de potássio durante três dias, seguido de recuperação. O RNA viral foi detectado nas fezes e no soro dos animais infectados, além de partículas infecciosas encontradas nas fezes, sugerindo replicação viral. Na imunoterapia experimental, os macacos foram inoculados com RVA humano (3,1x107 FFU/mL), desafiados com a suspensão de IgY anti-RVA obtida previamente, e foram monitorados durante cinco dias pelos parâmetros observados no experimento anterior. A eficiência terapêutica da imunoterapia com IgY foi confirmada pela ausência de episódios de diarreia, que é reconhecida como \201Cpadrão ouro\201D para eficácia clínica, apesar do RNA viral ter sido detectado nas fezes de 11 de 12 animais inoculados com o RVA. A duração da detecção do RNA foi reduzida em dois dos três grupos de animais tratados com IgY, quando comparado ao grupo controle positivo. Em um animal que foi tratado com IgY pelas vias oral e intravenosa, não foi detectado genoma viral nas fezes. Como conclusão, a aplicação de anticorpos IgY anti-RVA específicos produzidos em aves, apresenta eficácia no tratamento de gastroenterite aguda causada pelo rotavírus do grupo A humano Nossos resultados também confirmam que macacos cynomolgus podem ser considerados hospedeiros suscetíveis à infecção com RVA humano, e apontam para a necessidade de controle sanitário da rotavirose humana em colônias de criação de macacos cynomolgus. Esses resultados preliminares sugerem um papel promissor da imunoterapia passiva utilizando IgY anti-RVA em infecção experimental com o rotavírus do grupo A humano. No entanto, um enfoque direto na patogênese da infecção no trato entérico fornecerá informações adicionais para confirmar a eficácia do tratamento com a IgY / The production of antibodies in chickens and the extraction of specific antibody suspensions from egg yolk (IgY) are increasingly attracting the interest of the scientific community, as demonstrated by the significant growth of the IgY literature. This approach, which is suitable to a large - scal e production, offers several advantages such as the low cost and high efficiency of the technique, in view of the extraordinary yield of IgY by a one hen (20 g – 40 g IgY per year), and its suitability to a more bioethical manner for hen keeping. Of note, the IgY - technology offers new possibilities for application in human and veterinary diagnostics and therapeutics, including strategies for the treatment of severe intestinal diseases in children, particularly in poor countries. In this study, we aimed to e valuate the therapeutic efficacy of the IgY by using young cynomolgus monkeys ( Macaca fascicularis ) challenged with human rotavirus group A (RVA), a major cause of morbidity and mortality in children worldwide, especially in developing countries. For this purpose, specific IgY antibodies against RVA were produced in hens, purified by polyethylene glycol, characterized by polyacrylamide gel electrophoresis, western blotting and a neutralization assay in a cell culture system (MA - 104). This preliminary experi ment has yielded a high concentrated suspension of anti - rotavirus specific IgY (anti - RVA IgY) (average 37 mg/ml). The cynomolgus experimental infection model was established after a single administration of a human rotavirus suspension (3.1x10 6 FFU/ml) by oral gavage. The confined animals were followed during a period of eleven days, observed for clinical signs, measurement of serum and faecal viral load, and evaluation of hematology and serum electrolytes. The main clinical sign (observed in two of the sev en inoculated monkeys) was diarrhea associated with a decrease in serum potassium during three days, followed by recovery. Viral RNA was detected in both serum and faeces of the infected animals, thus suggesting viral replication. In cynomolgus experimenta l immunotherapy, the monkeys were inoculated with human RVA (3.1x10 7 FFU/ml), challenged with the anti - RVA IgY suspension previously obtained, and monitored during five days by using the same clinical and biochemical parameters, as previously established. The therapeutic efficacy of the immunotherapy with IgY was confirmed by the absence of episodes of diarrhea, which is recognized as the "gold standard" for clinical efficacy, although viral RNA had been detected in faeces of all but one of the inoculated m onkeys. The duration of RNA detection was shortened in two of the three groups of animals treated with IgY, when compared to the positive control. One animal, which was orally and intravenously treated with the anti - RVA IgY, had no RNA detected in faeces. In conclusion, the application of specific anti - RVA IgY antibodies, produced in hens, presents efficacy in the treatment of acute gastroenteritis caused by human rotavirus group A. Our results also confirm that cynomolgus monkeys can be considered suscepti ble hosts to infection with human RVA, and pointed to the necessity of sanitary control of human rotavirus disease in the breeding colonies of cynomolgus monkeys. Our preliminary results suggest the promising role of passive immunotherapy using anti - RVA Ig Y in experimental infection with human rotavirus group A. However, a direct approach to the pathogenesis of enteric tract infection will provide additional data to confirm the effectiveness of the IgY treatment.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-07Bitstream added on 2014-06-13T19:01:33Z : No. of bitstreams: 1 joao_cf_dr_jabo.pdf: 1122575 bytes, checksum: 9ae3af7c9b6ed043db7419a9794af8db (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A mastectomia é o procedimento terapêutico mais frequentemente empregado para tratar tumores mamários de cadelas e o sucesso depende do estádio do tumor no momento da intervenção. Estudos em modelos animais mostram que as proteínas de choque térmico (HSP) têm a capacidade de induzir imunidade inata tumor-específica e resulta na regressão do tumor. Sendo assim, este estudo teve como objetivos avaliar a eficácia do imunomodulador DNA-HSP65+proteína-HSP65 no tratamento de cadelas com tumores mamários malignos, seu potencial imunoestimulatório e investigar o aparecimento de efeitos adversos. Fizeram parte do experimento 21 cadelas com tumores mamários malignos. Destas 13 foram tratadas com o imunoterápico e oito submetidas a mastectomia da cadeia mamaria afetada. As cadelas (n= 13) receberam até três aplicações do imunomodulador, via intratumoral, no tumor de maior volume, com intervalo médio de 15 dias. O potencial imunoestimulatório do imunomodulador foi investigado através da citometria de fluxo pela comparação do numero de células natural killer ativadas, células B e T, CD4 e CD8, monócitos, monócitos ativados, macrófagos e células dendríticas; da proliferação espontânea de células mononucleares e da produção de anticorpos anti-HSP65 pelo teste ELISA antes do tratamento e 15 dias após o termino do mesmo. Seis cadelas (46,1%) apresentaram regressão em pelo menos um dos tumores da cadeia mamária, e uma (7,7%) no tumor que recebeu a aplicação do imunoterápico. Quando se consideram todas as mamas acometidas por tumores (n= 40), nove (22,5%) apresentaram regressão tumoral, 19 (47,5%) progressão e 12 (30%) se mantiveram estáveis. Três cadelas vieram a óbito durante o experimento; uma mastectomizada e duas tratadas com o imunoterápico. O imunoterapico não... / Mastectomy is a therapeutic procedure most often used to treat breast tumors in bitches and success depends on the tumor stage at the time of intervention. Studies in animal models show that the heat shock proteins (HSP) have the ability to induce tumorspecific innate immunity and results in tumor regression. Thus, this study aimed to evaluate the efficacy of immunomodulatory DNA-HSP65 + HSP65 protein in the treatment of dogs with malignant mammary tumors, and investigate its potential immunostimulatory the appearance of adverse effects. The experiment consisted of 21 dogs with malignant mammary tumors Of these 13 were treated with immunotherapy undergo mastectomy and eight of the affected mammary chain. Female dogs (n = 13) received three applications of the immunomodulator, intratumoral, in the greater volume tumor, with a mean interval of 15 days between applications. The potential immunostimulatory was investigated by flow cytometry by comparing the number of activated natural killer cells, T and B cells, CD4 and CD8 lymphocytes, monocytes, activated monocytes, macrophages and dendritic cells, the proliferation of mononuclear cells and spontaneous production anti-HSP65 antibody by ELISA before treatment and 15 days after the end. Six dogs (46.1%) had regression at least in one tumor of the mammary chain, and one dog (7.7%) in the tumor that received intratumoral application. When you consider all breast tumors (n = 40), nine (22.5%) had tumor regression, 19 (47.5%) progression and 12 (30%) remained stable. Three dogs died during the experiment, one after mastectomy and two after immunotherapy. The immunotherapy did not cause significant systemic immune stimulation. There was an increase of anti- HSP65 after treatment and the proliferation of leukocytes, although... (Complete abstract click electronic access below)

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biología Celular Programa de Pós-graduação em Biología Molecular, 2013. / Submitted by Flávia Renata Santos Gasparotto (flavia.gasparotto@gmail.com) on 2014-08-20T15:15:22Z No. of bitstreams: 1 2013_Thaina de Almeida Lima.pdf: 3712308 bytes, checksum: 37656dfe6751626b9aa10a3be5dfb69d (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-08-21T14:05:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_Thaina de Almeida Lima.pdf: 3712308 bytes, checksum: 37656dfe6751626b9aa10a3be5dfb69d (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-21T14:05:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_Thaina de Almeida Lima.pdf: 3712308 bytes, checksum: 37656dfe6751626b9aa10a3be5dfb69d (MD5) / O câncer é classificado como uma doença crônica degenerativa, com evolução prolongada e progressiva se não sofrer interferência em alguma de suas fases, e configura-se como um grande problema de saúde pública tanto nos países desenvolvidos como nos países em desenvolvimento. A relação entre câncer e o sistema imune começou a ser explorada no começo do século XX na Alemanha, quando foi sugerido que os carcinomas poderiam ser suprimidos pelo sistema imune. Antígenos do tipo câncer/testis (ACTs) são uma classe única de antígenos que ocorrem naturalmente em alguns tecidos imunoprivilegiados e em células carcinogênicas; dentre eles, pode-se destacar NY-ESO-1, um ACT associado a diversos tipos de malignidades que é capaz de desencadear resposta imune tanto celular quanto humoral, o que o tornou um dos candidatos mais promissores ao desenvolvimento de estratégias imunoterapêuticas. A produção de NY-ESO-1, em sua forma integral e em grandes quantidades, é imprescindível para a aquisição de maiores informações acerca de seu modo de ação e subsequente exploração de seu potencial, e o desenvolvimento de sistemas de produção heteróloga estáveis e seguros são fundamentais. Este trabalho propôs a utilização de tabaco e soja como biofábricas para o acúmulo deste importante antígeno em sua forma integral e completamente livre de fusões e tags de purificação, a fim de oferecer uma alternativa estável, segura para uso em humanos e de custo mais baixo. Dentre os sistemas utilizados, apenas a expressão em sementes de soja apresentou expressão e acúmulo da proteína-alvo, chegando a um nível de expressão médio de 0,079% de NY-ESO-1, tornando este trabalho pioneiro não apenas por ser o primeiro a utilizar plantas como sistema de expressão, mas também por evitar a expressão associada a proteínas de fusão e tags de purificação, comumente utilizadas como estratégia para a expressão deste importante antígeno. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cancer is classified as a chronic degenerative disease with prolonged and progressive evolution if not interfered in any of its phases; it is characterized as a large public health problem both in developed and in non-developed countries. The relationship between cancer and the immune system began to be explored in the early 20th century in Germany when it was suggested that carcinomas could be suppressed by the immune system. Antigens cancer / testis ( ACTs ) are a unique class of naturally occurring antigens in some immune-privilged tissues and cancer cells. Among them, we can highlight NY-ESO-1, an ACT associated with various types of malignancies which is capable to trigger both cellular and humoral immune response, becoming one of the most promising candidates for the development of immunotherapeutic strategies. The large scale production of NY-ESO-1 in its native form is essential to acquire more information about its mode of action and subsequent exploitation of its full potential, and the development of stable and secure heterologous production systems are fundamental. This work proposes the use of tobacco and soybean seeds as bio¬factories for the accumulation of this important antigen in its integral form, completely free of protein fusion and purification tags, aiming to offer an alternative treatment that is stable, low cost and safe for humans. Among the systems elected only soybean seeds presented expression and accumulation of the target protein, reaching an average expression level of 0.079 %, which can be considered promising as the heterologous expression of NY-ESO-1 is in most cases dependent on fusion proteins and purification tags, and usually presents low success in eukaryotic systems.

Orientador: Wagner José Fávaro / Resumo: A baixa eficácia dos tratamentos e as altas taxas de recorrência do câncer de bexiga não músculo invasivo (CBNMI) podem estar relacionadas aos baixos efeitos das terapias atuais sobre os mecanismos de reparo tecidual, espécies reativas de oxigênio (EROS) e angiogênese e, dentre essas terapias, a mais eficaz é a imunoterapia com BCG (Bacillus Calmette-Guerin) que, entretanto, ocasiona efeitos colaterais de intensidades variadas. Desta forma, o desenvolvimento de novas moléculas ou o melhoramento de fármacos já existentes que reduzam o número de instilações intravesicais, as taxas de recorrência e progressão tumoral e os efeitos colaterais é muito relevante. Diante deste cenário destaca-se o imunomodulador P-MAPA abrindo uma nova perspectiva para o combate de alguns tipos de cânceres, incluindo o CBNMI. Assim, os objetivos principais deste estudo foram caracterizar e comparar os efeitos histopatológicos e moleculares do imunomodulador P-MAPA, estabilizado com quitosana e pluronic com a imunoterapia com BCG no tratamento da progressão do CBNMI induzido em ratos. Para tal, o P-MAPA foi nanonizado utilizando a quitosana e o pluronic como estabilizante nas formulações. A caracterização das formulações se deu por técnicas microscópicas, diâmetro e carga superficial, análises térmicas e de raio X. Para a avaliação da atividade antitumoral do P-MAPA estabilizado comparada com BCG utilizou-se 35 ratas da linhagem Fischer 344. Desses animais, 30 foram submetidos a indução química do CBN... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The low effectiveness of treatments and high recurrence rates of bladder cancer noninvasive muscle (CBNMI) may be related to low effects of current therapies on the mechanisms of tissue repair, oxigen reactive species (EROS) and angiogenesis, and among these therapies, the most effective is immunotherapy with BCG (Bacillus Calmette-Guerin) which, however, causes sides effects of varying intensities. Thus, the development of new molecules or improving existing drugs that reduce the number of intravesical instillations, recurrence rates and tumor progression and side effects is very important. This scenario highlights the P-MAPA immunomodulator opening a new perspective to fight some types of cancers, including CBNMI. Thus, the aims of this study were to characterize and compare the histopathologic and molecular effects of immunomodulator P-MAPA, stabilized with chitosan and pluronic with immunotherapy with BCG in the treatment of progression of CBNMI induced in rats. To this end, the P-MAPA was nanosized using chitosan and pluronic as a stabilizer in the formulations. Characterisation of the formulations are given by microscopic techniques, diameter, surface charge, thermal analysis and X-ray. To evaluate the antitumor activity of P-MAPA stabilized compared with BCG was used 35 female Fisher-344 rats. Of these animals, 30 underwent chemical induction CBNMI by intravesical instillation of 1.5 mg / kg of N-methyl-N-Nitrosourea (MNU), and the other 5 animals were considered Group... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor