A prolina é convertida em glutamato através de dois passos de oxidorredução. Primeiro, prolina é oxidada em D1-pirrolina-5-carboxilato (P5C) que é convertido em glutamato pela TcP5CDH. Neste trabalho demonstrou-se que a enzima TcP5CDH catalisa a oxidação irreversível de gGSA formando glutamato e NADH/NADPH. A TcP5CDH forma um hexâmero que interage com a membrana interna mitocondrial. Os elétrons a partir de NADH abastecem a cadeia transportadora de elétrons para a síntese de ATP. Além disso vimos que a TcP5CDH é regulada positivamente nos estágios infectivos do parasita e, quando esta é induzida pela inserção de uma cópia ectópica, os mutantes apresentam mudanças morfológicas e alterações na expressão da TcGP82. O DSF, reportado como inibidor de aldeído desidrogenasses, interfere na atividade da TcP5CDH, bem como exibiu um efeito tripanocida. Ensaios de RNAi para a TbP5CDH e a análise da expressão desta enzima nas formas do parasita presentes na mosca tsé-tsé também foram discutidos. Os nossos dados reforçam a relevância bioquímica da via prolina-glutamato em T. cruzi, e constituem as primeiras evidências sobre a ocorrência do metabolismo de P5C nessas espécies de tripanossomatídeos. / Proline is converted into glutamate through two oxidorreduction steps. First, prolina is oxidized into D1-pyrroline-5-carboxylate (P5C), which is further converted in glutamate by TcP5CDH. In this work we demonstrate that TcP5CDH catalyzes irreversibly the oxidation of gGSA rendering glutamate and NADH/NADPH. The TcP5CDH undergoes a hexameric conformation interacting with inner mitochondrial membranes. Electrons from NADH fed electron respiratory chain for ATP synthesis. Moreover, we show that TcP5CDH is up regulated in infective stages (M e T). When an additional copy of TcP5CDH was ectopically introduced into parasites, mutant cells exhibited morphological changes and alterations in TcGP82. O DSF, reported as inhibitor of aldehyde dehydrogenases, interferes with TcP5CDH, as well as exhibited a trypanocidal effect. RNAi silencing assays for TbP5CDH and developmental expression of this enzyme throughout main insect stages within tsetse fly were also addressed. Our data support biochemical relevance of proline-glutamate pathway in T. cruzi, and constitute first evidences regarding occurrence of P5C metabolism over these trypanosomatid species.

Óxido nítrico (NO) é um segundo mensageiro biosintetizado a partir de L-Arginina e envolvido em sinalização celular por diferentes mecanismos: ativação da produção de cGMP pela Guanilil Ciclase; regulação de enzimas pela interação com seus centros metálicos; ou pela S-nitrosilação de cisteína e nitração de tirosina, modificações pós-traducionais, capazes de modular a atividade de diversas proteínas. Neste trabalho buscou-se investigar se a interação de Trypanosoma cruzi, o agente etiológico da doença de Chagas, com a matriz extracelular (ECM) era capaz de modular a sinalização por NO em T. cruzi. Tripomastigotas de T. cruzi incubados com ECM apresentaram diminuição na atividade de NOS e menor produção de NO. Da mesma maneira, observou-se, por imunofluorescência indireta e imunoblotting, uma diminuição no padrão geral de S-nitrosilação e nitração de proteínas do parasita incubado com ECM. Além disto, os perfis de proteínas S-nitrosiladas e nitradas foram modificados, predominando a denitrosilação e denitração (de 40 para 22 proteínas nitradas após a adesão a ECM), embora em alguns casos tenha sido observado um aumento de nitração, como em proteínas de citoesqueleto (de 2,5% para 9,1% após adesão). O mesmo padrão foi observado em relação a proteínas nitradas, com diminuição de 48 para 20 proteínas após adesão a ECM e novamente com modificação no percentual de proteínas nitradas pertencentes a processos biológicos distintos, como proteínas relacionadas à síntese proteica (35,4% das proteínas nitradas no grupo controle e apenas 5,0% no grupo incubado com ECM). Apesar do perfil de denitração, algumas classes de proteínas têm aumento no número de alvos nitrados, como proteínas relacionadas a metabolismo (de 18,8% para 35,0%), além de alguns alvos específicos que têm aumento na nitração, como enolase. Em suma, os resultados sugerem que a sinalização intracelular por NO em tripomastigotas de T. cruzi é modulada durante a adesão do parasita a componentes da matrix extracelular, tanto através da via clássica de produção de óxido nítrico, quanto por modificações pós-traducionais induzidas por NO. / Nitric oxide (NO) is a second messenger biosynthesized from L-Arginine and involved in cell signaling by different mechanisms: activation of cGMP production by guanilyl cyclase; regulation of enzymes by interaction with their metallic centers; or by S-nitrosylation of cysteine and nitration of tyrosine, posttranslational modifications capable of modulating the activity of several proteins. In this work, we sought to investigate whether the interaction between extracellular matrix (ECM) and Trypanosoma cruzi, the etiological agent of Chagas\' disease, was capable of modulating NO signaling in the parasite. Trypomastigotes incubated with ECM presented a decrease in NOS activity and NO production. Accordingly, a decrease in S-nitrosylation and tyrosine nitration of proteins from ECM-incubated parasites was also observed, as evidenced by indirect immunofluorescence and immunoblotting. In addition, S-nitrosylated and tyrosine nitrated proteins profiles were modified in ECM-incubated parasites, with an enhancement in protein denytrosylation and denitration. A decrease from 40 to 22 of S-nitrosylated proteins was detected after parasite adhesion to ECM, more evident in some protein groups (as for example 52.5% hypothetical proteins modified in the control group against 36.4% after adhesion). On the other hand, an increase of S-nitrosylation was detected in other groups of proteins, such as cytoskeleton proteins (from 2.5% of total S-nitrosylated proteins to 9.1% after adhesion). The same general pattern was observed in relation to tyrosine-nitrated proteins, with a decrease in the number of modified proteins from 48 to 20 after incubation with ECM, exemplified by those related to protein synthesis, with a contribution of 35.4% in the control group versus 5.0% after treatment with ECM. Despite this general denitration profile, some protein classes have an increase in nitration, such as metabolic proteins (from 18.8% to 35.0%), in addition to some specific targets, such as enolase. Taken together, the results suggest that NO signaling is modulated during adhesion of T. cruzi to components of the extracellular matrix, probably by the classical nitric oxide pathway and by NO-induced post translational modifications.

Benznidazol (BZ), fármaco utilizado para o tratamento da doença de Chagas, apresenta eficácia limitada na fase crônica da doença. Falhas terapêuticas foram atribuídas majoritariamente a diferenças na suscetibilidade a BZ entre as cepas do T. cruzi. Resultados prévios de nosso grupo indicam que o gene de um transportador ABC da subfamília G, TcABCG1, encontra-se super-expresso em cepas resistentes a BZ. Transportadores ABCG foram associados a resistência a drogas em vários organismos. O objetivo central do presente estudo foi caracterizar o gene TcABCG1 em cepas de diferentes linhagens e cuja suscetibilidade a BZ foi definida. A sequência do gene TcABCG1 (1.998 pb) de 14 cepas foi determinada. Observamos algumas variações de aminoácidos na proteína ABC entre as cepas. Análises genealógicas de TcABCG1 definiram quatro clados (TcI, TcII, TcIII e Tcbat). Os dois haplótipos das cepas híbridas TcV e TcVI agruparam com os clados TcII e TcIII. Dados de imunofluorescência indireta em epimastigotas indicam que TcABCG1 está localizado em vesículas intracelulares. / Benznidazole (BZ), drug employed for Chagas disease treatment, has limited efficacy in the chronic phase of the disease. Treatment failures have been attributed mostly to differences in BZ susceptibility among T. cruzi strains. Previous data from our group indicate that one ABC transporter gene of the G subfamily, named TcABCG1, is overexpressed in BZ-resistant strains. ABCG transporters have been associated to drug resistance in several organisms. The central goal of the present study was to characterize TcABCG1 gene in strains belonging to different lineages and of defined BZ susceptibility. TcABCG1 gene sequence (1,998 bp) of 14 strains was determined. Few amino acid substitutions were detected in the ABC transporter protein among the strains. Genealogic analyses of TcABCG1 showed four distinct clades (TcI, TcII, TcIII and Tcbat). The two haplotypes of TcV and TcVI hybrid strains clustered with TcII and TcIII clades. Indirect immunofluorescence analysis in epimastigote forms indicated that TcABCG1 is localized to intracellular vesicles.

Os esteróides gonadais exercem importantes influências no direcionamento da resposta imune do hospedeiro frente à infecção. Alterações decorrentes de sua ausência ou reposição podem significar em uma evolução distinta de determinada parasitose. Existe também uma relação entre a produção de melatonina e o ritmo de atividade do sistema imune. A resposta imune depende de uma interação entre inúmeros hormônios que irão agir sinergicamente com distintas células imunes. O objetivo desse trabalho foi investigar o efeito dos hormônios sexuais masculinos, através da orquiectomia, e da administração oral de melatonina sobre a resposta imune de ratos Wistar machos infectados com a cepa Y de Trypanosoma cruzi, durante a fase aguda da doença de Chagas experimental. Inúmeros parâmetros foram avaliados, entre eles: parasitemia, histologia cardíaca, peso dos animais e órgãos, linfoproliferação de timócitos e esplenócitos, quantificação de macrófagos, dosagem de óxido nítrico, citometria de fluxo para avaliação das populações de CD3+CD4+ e CD3+CD8+; e ensaios imunológicos como IFN-gama, IL-2, IL-6, IL-12, IL-10. Observou-se em todos os parâmetros analisados a ação sinérgica da melatonina e da orquiectomia sobre o sistema imune, favorecendo uma resposta positiva contra o parasita na fase aguda da infecção. Dessa forma, concluiu-se que a melatonina e a redução dos hormônios sexuais masculinos exerceram um papel imunoestimulador importante, que se refletiu em uma resposta mais efetiva do hospedeiro durante a infecção experimental. / Gonadal steroids exert important influence in the host immune response during infection. Changes resulting from the absence or replacement of these hormones may represent a distinct evolution of a particular parasite. There is also a relationship between melatonin production and the rhythmic activity of the immune system. The immune response depends on the interaction of many hormones that will act synergistically with other immune cells. The objective of this research was to evaluate the effect of male sex hormones through orchiectomy, and oral administration of melatonin on the immune response of male Wistar rats infected with the Y strain of Trypanosoma cruzi, during the acute phase of experimental Chagasdisease. Several parameters were evaluated among them: quantification of blood parasites, heart histology, body weight of animals and organs, lymphoproliferation of thymocytes and splenocytes, quantification of peritoneal macrophages, nitric oxide concentration, alterations in CD3+CD4+ and CD3+CD8+ lymphocyte populations by flow cytometry and immunological assays, as IFN-gama, IL-2, IL-6, IL-12, IL-10. It was observed in all parameters examined the synergistic action of melatonin and orchiectomy on the immune system, promoting a positive response against the parasite in the acute phase of infection. Thus, it was concluded that melatonin and the absence of male sex hormones exerted an important immunostimulating role, which reflected a more effective hosts response during the experimental infection.

Nos bancos de dados de T. cruzi há cerca de 3.750 ESTs de amastigotas e tripomastigotas, seqüenciadas a partir das extremidades 5\' ou 3\' de clones de cDNA. A metodologia ORESTES (Open Reading Frame Expressed Sequence Tags) possibilita obter seqüências transcritas parciais derivadas majoritariamente da porção central dos mRNAs, favorecendo a descoberta de novos genes. Neste trabalho, caracterizamos ORESTES de formas infectantes amastigotas e tripomastigotas da cepa humana VL10 (ATVL). A metodologia foi padronizada com formas epimastigotas da cepa CL Brener (ECL), monitorando-se nas preparações de mRNA a contaminação por DNA e a integridade dos transcritos. Populações de cDNA foram obtidas utilizando-se diferentes iniciadores aleatórios. O mesmo iniciador foi empregado nas etapas de RT e PCR, realizada em condições de baixa estringência. Obtivemos 776 e 1522 ORESTES de ECL e ATVL, respectivamente. Após análise com o programa PHRED, aceitaram-se 745 ORESTES de ECL e 1476 de ATVL. As ORESTES apresentaram um tamanho médio de 680 pb e um conteúdo de G+C de 53%. O agrupamento com CAP3 gerou 463 agrupamentos de ECL (360 singletons e 103 contigs) e 454 de ATVL (337 singletons e 117 contigs). A anotação foi feita utilizando-se o programa BLAST contra o banco nr do NCBI. Na biblioteca de ATVL observamos um número elevado de seqüências de RNA ribossômico (27%), amplificadas preferencialmente por dois iniciadores. Para ECL, a contaminação por rRNA foi de 3,6%. Para cerca de 50% das ORESTES de ATVL (n= 729) foi encontrada similaridade em bancos de dados de proteínas. Destas, 316 apresentaram similaridade com proteínas putativas conhecidas e 413 foram anotadas como proteínas hipotéticas e hipotéticas conservadas. Para 87 ORESTES de ATVL (5,9%) não foi observada nenhuma similaridade. 628 ORESTES de ECL (84%) apresentaram similaridade com proteínas depositadas em bancos públicos, ao passo que nenhuma similaridade foi encontrada para 18 cDNAs (2,4%). Ensaios de Southern blot confirmaram a presença de 4 ORESTES no match analisadas nos genomas das duas cepas. Não puderam ser atribuídas a processos biológicos conhecidos 39% e 68% das seqüências dos contigs de ECL e ATVL, respectivamente. Nos processos de Proteólise e Peptidólise, estão incluídas 11% das ORESTES de ECL e 0,3% das ORESTES de ATVL. Outras diferenças funcionais putativas foram observadas. A abundância diferencial dos transcritos de algumas ORESTES foi analisada por northern blot nos estágios evolutivos das cepas. Southern blot do contig ATVL95 originou um padrão de hibridização com múltiplas bandas, característico de seqüências repetitivas. Este contig corresponde ao transcrito do DNA satélite de 195 pb (195 SAT), uma seqüência repetitiva que perfaz cerca de 10% do genoma de T. cruzi e cuja transcrição é controversa na literatura. A transcrição do 195 SAT foi comprovada por experimentos de + northern blot e por RT-PCR. Transcritos de 195 SAT foram detectados nas frações de RNA de poliA+ e poliA-. Esses transcritos não conteriam a seqüência SL, presente nos mRNAs de tripanossomatídios. e poliA Utilizando oligonucleotídios complementares às duas fitas de 195 SAT concluímos que ambas são transcritas. Embora esteja claro que 195 SAT é transcrito, sua função biológica permanece desconhecida. / In T. cruzi databases, aproximately 3.750 ESTs of amastigotes and trypomastigotes, sequenced from the 3´ or 5´ ends cDNA clones can be found in T. cruzi databases. The ORESTES (Open Reading Frame Expressed Sequence Tags) methodology generates partial transcribed sequences derived mainly from the central portions of mRNAs, favoring the discovery of new genes. In this work, we have characterized ORESTES sequences from the infective amastigote and trypomastigote forms of the human strain VL10 (ATVL). The methodology was standardized with epimastigotes of the CL Brener strain (ECL), monitoring in the mRNA population DNA contamination and the integrity of the transcripts. cDNA populations were obtained using different arbitrarily selected, nondegenerate primers. The same primer was used in the RT and PCR steps, performed under low-stringency conditions. We obtained 776 and 1522 ORESTES of ECL and ATVL, respectively. After analysis with PHRED program, 745 ORESTES of ECL and 1476 of ATVL were accepted for further characterization. ORESTES showed a medium size of 680 bp and a G+C content of 53%. Clustering with CAP3 generated 463 unique sequences of ECL (360 singletons and 103 contigs) and 454 of ATVL (337 singletons and 117 contigs). The annotation was made with BLAST program against the NCBI nr database. In the ATVL library we observed an elevated number of ribosomal RNA sequences (27%), amplified mainly by two primers. In the ECL library, rRNA contamination was about 3.6%. Approximately 50% of the ATVL sequences (n= 729) were found in protein databases. From these, 316 showed similarity with putative known proteins and 413 were annotated as hypothetical proteins and hypothetical conserved proteins. No hit was observed for 87 ORESTES of ATVL (5.9%). 628 ORESTES of ECL (84%) showed similarity with proteins in public databases, while for 18 cDNAs (2.4%) no similarity was found. Southern blot assays confirmed the presence of four no match analyzed ORESTES in the genomes of the two strains. No known biological process could be assigned to 39% and 68% of the sequences of ECL and ATVL contigs, respectively. In Proteolysis and Peptidolysis processes 11% and 0.3% of ECL and ATVL ORESTES were allocated, respectively. Additional putative functional differences were observed. The differential abundance of transcripts of some ORESTES was analyzed by northern blot assays in the developmental stages of the strains. Southern blot of the contig ATVL95 originated a hybridization pattern with multiple bands, characteristic of repetitive sequences. This contig corresponds to the transcript of the 195 bp satellite DNA (195 SAT), a repetitive sequence that accounts for 10% of the T. cruzi genome and whose transcription is controversial in the literature. The transcription of the 195 SAT was evidenced by northern blot and RT-PCR experiments. Transcripts of 195 SAT were detected in polyA+ and poly- RNA fractions. These transcripts apparently do not contain the SL sequence, present in trypanosomatid mRNAs. By using oligonucleotides complementary to the two strands of 195 SAT, we concluded that both strands are transcribed. Although it is clear that 195 SAT is transcribed, its biological function remains unknown.

A importância de aminoácidos em tripanossomatídeos vai além da síntese de aminoácidos, envolvendo processos tais como a diferenciação, osmorregulação e metabolismo energético. A disponibilidade dos aminoácidos envolvidos nestas funções depende, entre outras coisas, de seu transporte na célula. Aqui, caracterizamos o transporte de glutamato e GABA do parasita protozoário humano Trypanosoma cruzi. No transporte de glutamato dados cinéticos amostram um único sistema saturável com uma Km de 0.30 mM e uma velocidade máxima de 98.34 pmoles min-1 per 2 x 107 células para epimastigotas é 20 pmoles min-1 per 2 x 107 células para trypomastigotas, e uma Vmax de 84.45 pmoles/min/20x106 células com uma Km de 0.4 mM para o sistema de transporte de GABA. O transporte não apresentou alterações em condições de jejum de até 3 horas. Aspartato, alanina, glutamina, asparagina, metionina, oxaloacetato é alfa-cetoglutarato competiram com o substrato em concentrações dez vezes em excesso na incorporação de glutamato. Interessantemente, o transporte de glutamato aumentou fortemente na presença de GABA. O transporte de glutamato foi fortemente dependente do pH, mas não de concentrações de Na+ e K+ no meio extracelular, e o transporte de GABA foi fortemente dependente de K+. Estes dados foram consistentes com uma sensibilidade do sistema de transporte a um ionóforo (FCCP), sugerindo que o transporte é levado por um gradiente de concentração de H+ na membrana plasmática nos dois sistemas de transporte. O transporte de glutamato e GABA aumentou linearmente com a temperatura na faixa de 15 a 40o C. / The role of amino acids in trypanosomatids goes beyond protein synthesis, involving processes such as differentiation, osmoregulation and energy metabolism. The availability of the amino acids involved in those functions depends, among other things, on their transport into the cell. Here we characterize a glutamate transporter and GABA transport from the human protozoan parasite Trypanosoma cruzi. In the glutamate transport, data kinetics show a single saturable system with a Km of 0.30 mM and a maximum velocity of 98.34 pmoles min-1 per 2 x 107 cells for epimastigotes and 20 pmoles min-1 per 2 x 107 cells for trypomastigotes, and, a Vmax de 84.45 pmoles/min/20x106 cells and a Km of 0.4 mM for GABA transport system. Transport was not affected by parasite nutrient starvation for up to 3h in the two transport system. Aspartate, alanine, glutamine, asparagine, methionine, oxaloacetate and alpha-ketoglutarate competed with the substrate in 10-fold excess concentrations in the glutamate incorporation. Interestingly, the glutamate transport was strongly increased in the presence of GABA. Glutamate uptake was strongly dependent on pH, but not on Na+ or K+ concentrations in the extracellular medium, and the GABA transport was strongly dependent of K+. These data were consistent with the sensitivity of the system to the H+ ionophore carbonyl cyanide p-trifluoromethoxyphenylhydrazone, suggesting that transport is driven by H+ concentration gradient across the cytoplasm membrane in two transport systems. The glutamate and GABA transport increased linearly with temperature in a range from 15 to 40 degrees C.

Anuros há muito tempo são conhecidos como portadores de tripanossomas em todo o mundo. Esses tripanossomas são transmitidos por sanguessugas e insetos hematófagos. Nenhum levantamento foi feito na América do Sul. A taxonomia tradicional resulta em identificações não confiáveis desses tripanossomas, a diversidade genética foi pouco investigada e o a filogenético é pouco conhecida. Neste estudo mostramos grande prevalência e marcada diversidade molecular e morfológica entre tripanossomas de várias espécies de anuros da Amazônia, Floresta Atlântica e Pantanal. O relacionamento filogenético inferido entre tripanossomas do Brasil, América do Norte, Europa e África revelou 5 clados de isolados de anuros. Um deles contem isolados de anuros e flebotomíneos, sugerindo que esses insetos possam ser vetores de tripanossomas de anuros. Em geral, os dados mostraram certo grau de associação entre clados de isolados e filogeografia de anuros e sugeriram que trocas de hospedeiros e adaptação ecológica desempenharam um papel importante na história evolutiva desses tripanossomas. / Amphibians of the order Anura have long been known to be infected with trypanosomes worldwide, infecting frogs and toads and transmitted by leeches and insects. No surveys were carried out in South American anurans. Traditional taxonomy renders unreliable identification of these trypanosomes, genetic diversity was poorly investigated and phylogenetic relationships are far from be understood. In this study, we showed high prevalence and marked morphological and molecular diversity among trypanosomes from several species from Amazonia, Atlantic Forest and Pantanal. Phylogenetic relationships inferred among trypanosomes from Brazil, North America, Europe and Africa disclosed 5 major clades of anuran isolates. One clade contains anuran and sand fly isolates, suggesting that these insects can be vectors of anuran trypanosomes. In general, data showed a certain degree of association between clades of isolates and anuran phylogeography and suggested that host switching and ecological fitting also play a role in the evolutionary history of these trypanosomes.

Forma epimastigotas de T. cruzi são aglutinadas especificamente por baixas concentrações de concanavalina A. A aglutinação é linear com o tempo até aproximadamente10 minutos, para um número de células maior que 1 x 108 células/ml. Nessas condições a aglutinação é dependente da concentração de con A. As formas tripomastigotas sanguícolas e matecíclicas não são aglutináveis por con A. O complexo glicoproteico isolado de formas epimastigotas de T. cruzi por tratramentofenólico de extrato celular, apresenta na sua composição ácida siálico, glicosamina, galactose, glicose e manose, além de xilose em algumas frações. Os aminoácidos constituintes são principalmente lisina, ácido aspártico (e/ou asparagina), alanina, treonina, ácido glutâmico (e/ou glutamina). serina, prolina e glicina. Esse complexo pode ser separado em três componentes em colunas de DEAE-celulose. Dois desses componentes, selecionados para estudo, inibem a reação de aglutinação por con A das formas epimastigotas, assim como a fração não cromatografada. Essas frações isoladas fornecem quatro componentes glicoproteicos por eletroforese em gel de poliacrilamida na presença de SDS. / Epimastigote forms of T. cruzi are agglutinated by low con A concentrations. The agglutinabillity is linear up to 10 minutes. Under these conditions the agglutination is dependent on the con A concentration providing the cell density is 108/ml or higher. The blood forms and culture trypomastigotes are not agglutinated by con A. A glycoprotein complex was isolated from epimastigote forms of T. cruzi by aqueous phenol extraction. This complex is composed by sialic acid, glucosamine, galactose, glucose, mannose and xylose. The latter appears only in some fractions of the complex. The amino acids found are lysine, aspartic acid (and/or asparagine), alanine, threonine, glutamic acid (and/or glutamine), serine, proline and glycine. The glycoproteins render three components in DEAE-cellulose columns (peaks 1, 2 and 3). The peaks 2 and 3 are able to inhibit the agglutination of epimastigotes by con A. These fractions are separated in four glycoprotein components by polyacrylamide gel electrophoresis in the presence of SDS.

A doença de Chagas representa um importante problema para a Saúde Publica na América Latina, onde o tratamento é limitado principalmente na fase crônica. Mesmo controlando a replicação parasitária, a completa eliminação do parasita e a cura da doença não são observadas de forma consistente. A ativação do eixo adrenal-hipotálamo-hipófise possui um papel importante na supressão do sistema imune. Neste trabalho foram observados os efeitos do estresse repetitivo em ratos Wistar infectados com a cepa Y de Trypanosoma cruzi durante as fases aguda e crônica da doença experimental, através da exposição dos animais a vapores de éter por um minuto duas vezes ao dia. O estresse repetitivo provocou aumento do número de parasitas e a administração de DHEA reduziu significantemente a parasitemia durante a fase aguda. A resposta TH-1 foi mais vigorosa em animais submetidos à terapia com DHEA mesmo quando submetidos ao estresse repetitivo. Assim TNF-, IFN-, IL-2, NO e linfoproliferação mostraram concentrações mais elevadas quando comparadas aos animais não submetidos à terapia. A resposta TH-2 nos grupos sem suplementação com DHEA, IL-4 e IL-10 apresentaram valores reduzidos nos animais infectados e estressados submetidos à terapia com DHEA. A concentração de corticosterona mostrou-se elevada para animais estressados e infectados em relação aos animais submetidos a terapia com DHEA. A histopatologia apresentou redução no número de neurônios nas fases aguda e crônica para os animais estressados e infectados, os mesmos apresentaram desorganização tecidual cardíaca com aumento do número de ninhos de amastigotas e moderado processo inflamatório por células mononucleares. Estes resultados sugerem que o estresse repetitivo pode ser considerado como ii fator importante durante o desenvolvimento da doença de Chagas experimental, aumentando sua patogênese através de distúrbios do sistema imune do hospedeiro. / Chagas disease represents an important public health problem in Latin American, where the treatment is limited especially to chronic phase, besides the harmful side effects. Although controlling the parasite replication, the complete elimination of the etiologic agent still was not observed. Activation of the hypothalamuspituitaryadrenal axis plays a major role in the suppression of the immune system. We have investigated the effects of repetitive stress on Wistar rats infected with the Y strain of Trypanosoma cruzi during the acute and chronic phases of the experimental disease by the exposure to ether vapor for one minute twice a day. Repetitive stress resulted in an elevated number of circulating parasites and DHEA administration reduced significantly blood parasites during the acute phase. Several immunological parameters were evaluated. TH-1 response was more vigorous in animals submitted to DHEA therapy even those which underwent repetitive stress. So, TNF-, IFN-, IL-2, NO and lymphoproliferation displayed enhanced concentrations as compared to unsupplied animals. The TH-2 immune response in groups without DHEA supplementation, showed reduce values for IL-4 and IL-10 in groups infected and stressed submitted to DHEA therapy. Enhanced corticosterone concentration was a observed for infected and stressed animals. DHEA triggered reduced levels of corticosterone. The histopathology revealed that stressed animals showed a reduction in the number of neurons. Histological sections of heart smears from infected and stressed animals displayed deep tissue disorganization, increased parasite burdens and moderate diffused mononuclear inflammatory process. These results suggest that repetitive stress could be considered an iv important factor during development of experimental Chagas disease, enhancing pathogenesis through disturbance of the hosts immune system.

Os genes de Prolina racemase (PRACs) são enzimas intracelulares ou secretadas de T. cruzi (TcPRAC); essas enzimas estão envolvidas no metabolismo, diferenciação e virulência. Os genes PRAC foram identificados e caracterizados molecularmente em isolados representantes de toda a diversidade interespecífica de T. cruzi, T. cruzi marinkellei, T. dionisii, T. erneyi, T. rangeli, T. conorhini e T. lewisi. Além dessas espécies de tripanossomas restritas a mamíferos; homólogos de PRAC foram encontrados em tripanossomas de cobra (T. serpentis), crocodilo (T. grayi) e anuro (T. sp. 339). Análises filogenéticas e de sintenia entre homólogos de PRAC suportaram uma historia evolutiva totalmente congruente com as relações evolutivas previamente descritas dentro do gênero Trypanosoma. / Proline racemaces (PRACs) are intracellular or secreted enzymes of Trypanosoma cruzi (TcPRAC), implicated in metabolism, differentiation, virulence and the induction of nonspecific polyclonal B-lymphocyte in the host. We identified and molecularly characterized PRAC genes from isolates representing all intra-specific diversity (TcI-TcVI and Tcbat), T. cruzi marinkellei, T. dionisii, T. erneyi, T. rangeli (isolates of lineages A-E), T. conorhini, and T. lewisi. In addition to these trypanosome species restricted to mammals, PRAC homologs were found in trypanosomes from snake (T. serpentis), crocodile (T. grayi) and anuran (T. sp 339). Phylogenetic and synteny analysis of PRAC homologs supported an evolutionary history totally congruent with the evolutionary relationships within the genus Trypanosoma.