O T. cruzi, é o agente causador da doença de Chagas. O estado redox NAD+/NADH intracelular é fundamental na manutenção do metabolismo celular. A GAPDH apresenta a função de proteção do telômero em mamíferos contra degradação, isto por causa de ligar se ao telômero. Aqui, mostramos que a GAPDH recombinante de T. cruzi (rTcGAPDH) interage com o DNA telomérico. A rTcGAPDH liga ao DNA de simples fita. Mostramos que a GAPDH liga ao DNA telomérico in vivo em células epimastigotas, onde a [NADH] é maior que [NAD+], mas a adição de NAD+ exógeno bloqueia esta interação. Corroborando a hipótese de que o equilíbrio NAD+/NADH determina a interação GAPDH-telômero, vimos que o tripomastigota tem maior [NAD+] intracelular que a [NADH] e a GAPDH não é capaz de ligar se ao DNA telomérico. Além disso, o NADH exógeno resgata a interação GAPDH-telómero nesta fase. É importante o equilíbrio NAD+/NADH desta interação em tripanosomas, sugerindo que a proteção do telômero do parasita pode ser regulada pelo estado metabólico das células. / The T. cruzi, is the causative agent of Chagas disease. The redox state of NAD+/NADH intracellular is critical in the maintenance of cellular metabolism. The GAPDH has the protection function of the telomere in mammals against degradation, because it is connecting to the telomere. Here we show the recombinant GAPDH of T. cruzi (rTcGAPDH) interacts with telomeric DNA. The rTcGAPDH binds to single-stranded DNA. We show GAPDH to bind to telomeric DNA in vivo epimastigotes cells, where [NADH] is greater than [NAD+], but the addition of exogenous NAD+ blocks this interaction. Corroborating the hypothesis that the NAD+/NADH balance determines the GAPDH-telomere interaction, we saw that the trypomastigote has higher [NAD+] that intracellular [NADH] and GAPDH is not able to connect to telomeric DNA. In addition, the exogenous NADH recovers the GAPDH-telomere interaction at this stage. It is important the NAD+/NADH balance this interaction in trypanosomes, suggesting that the protection of the telomere of the parasite can be regulated by the metabolic state of the cells.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-05-10T13:06:11Z No. of bitstreams: 1 moaralemos.pdf: 8011367 bytes, checksum: a17591543a2939766922aca9a545dc20 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-17T15:05:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 moaralemos.pdf: 8011367 bytes, checksum: a17591543a2939766922aca9a545dc20 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-17T15:05:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 moaralemos.pdf: 8011367 bytes, checksum: a17591543a2939766922aca9a545dc20 (MD5) Previous issue date: 2007-02-14 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente estudo teve como objetivo verificar a infecção por tripanossomas em anuros em regiões dos estados do Mato Grosso e Rio de Janeiro. Para tal, 20 espécies das famílias Bufonidae, Microhylidae, Hylidae e Leptodactylidae foram coletadas durante as atividades de resgate de fauna da Usina hidrelétrica do Guaporé, na divisa dos municípios Vale de São Domingos, Pontes e Lacerda, MT e no Município de Seropédica, Campus da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, RJ. Verificou-se a presença de tripanossomas em esfregaços sangüíneos e impressões de órgãos em 36,36% dos hospedeiros analisados de Osteocephalus sp., 50% de Leptodactylus chaquensis, 100% de Leptodactylus fuscus, 100% de Leptodactylus lineatus e 100% de Leptodactylus ocellatus. Foi verificado polimorfismo das espécies encontradas, separando-se Trypanosoma sp.1; Trypanosoma sp.2; Trypanosoma sp.3; Trypanosoma chattoni e Trypanosoma rotatorium (lato sensu). Destes o polimorfismo mais acentuado foi observado em Trypanosoma sp.3. Amostras de sangue da circulação periférica e visceral de Leptodactylus ocellatus foram incluídas em meio de bifásico constituído de Agar e sangue e fase líquida de LIBHIT-K. Foram obtidos isolados de Trypanosoma sp.3 de três dos quatro hospedeiros coletados. Tripanossomas foram observados 4 dias após inoculação, mantidos por 8 meses em cultura e retiradas amostras para análise da ultra-estrutura. Nas formas de cultura foram observadas epimastigotas, esferomastigotas e tripomastigotas. Divisão binária foi observada em epimastigotas e esferomastigotas; tripomastigotas não foram observadas em divisão. A análise da ultra-estrutura de Trypanosoma sp.3 confirmou sua singularidade por características morfológicas como glicosomos alongados. Este estudo faz o primeiro registro da infecção por tripanossomas em anuros do gênero Ostheocephalus e nas espécies Leptodactylus chaquensis, Leptodactylus fuscus, Leptodactylus lineatus e a ocorrência de T. chattoni em espécies do gênero Leptodactyllus e no Brasil. Registra-se ainda a utilização do meio LIBHIT-K como eficaz para manutenção de Trypanosoma sp.3 e o primeiro estudo sobre registro da ultra-estrutura de tripanossomas de anuros no Brasil. / The present research had as its main goal, checking the infection through trypanosomes in Anuran around Mato Grosso and Rio de Janeiro States. For that purpose 20 species from Bufonidae, Microhylidae, Hylidae and Leptodactylidae families were collected during the fauna rescue activities at Guapore Power Station the border of Vale de São Domingos, Pontes Lacerda, MT and in Seropédia County, at the Rural Federal University Campus in Rio de Janeiro, RJ. Trypanosomes were found in blood smears and organ impressions in 36,36% of the Osteocephalus sp. studied hosts, 50% of Leptodactylus chaquensis, 100% of Leptodactylus fuscus, 100% of Leptodactylus Lineatus and 100% of Leptodactylus ocellatus. Polimorfism was verified on the founded species, splitting into Trypanosoma sp.1, Trypanosoma sp.2, Trypanosoma chattoni, Trypanosoma rotatorium (lato sensu) and Trypanosoma sp.3 that exhibit high polymorphism. Periferal blood samples were inoculated through diphasic blood Agar and LIBHIT-K, liquid fase. Isolates of Trypanosoma sp.3 were obtained from three out of four collected hosts. Trypanosomes were observed 4 days after the inoculation, kept in cultures for 8 months and samples were taken for ultrastructural analysis. Epimastigotes, sphaeromastigotes and trypomastigotes were the culture forms founded. Binary fission was noticed in epimastigotes and in sphaeromastigotes only, trypomastigotes were not observed in reproduction. The ultrastructural analysis of Trypanosoma sp.3 confirmed its singularity through morphological characteristic such as elongated glicosomes. This research accomplishes its first record of the infection through trypanosomes in the Anuran Osteocephalus genre and in the species of Leptodactylus fuscus, Leptodactylus lineatus and the presence of T. chattoni in the Leptodactyllus species in Brazil. The usage of LIBHIT-K as an effective mean for Trypanosoma sp.3 maintenance and the first records of ultrastructure anuran trypanosomes in Brazil.

Orientador: Fernanda Ramos Gadelha / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T17:26:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_AlbaninAparecidaMielniczki_M.pdf: 4105701 bytes, checksum: cc9dfe550a8a18e449ecaa59da5d0970 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PD) e 6-fosfogluconato desidrogenase (6PGD) são enzimas relacionadas com os processos de proliferação e detoxificação celular. Neste trabalho a atividade/expressão da G6PD e atividade da 6PGD foram determinadas em duas cepas de Trypanossoma cruzi (Y e Tulahuen 2) que diferem quanto ao índice de proliferação e resistência ao estresse oxidativo. As dosagens da atividade enzimática foram feitas ao longo da curva de crescimento e após incubação das células em presença de peróxido de hidrogênio (H2O2). Nessas condições foram determinados também os níveis de rnRNA e expressão da proteína triparedoxina peroxidase (TcCPx), importante enzima do sistema de defesa antioxidante do parasita. Na cepa Y, menos resistente ao estresse oxidativo, a atividade da 6PGD não sofre grandes variações ao longo da curva de crescimento e, com exceção do primeiro dia de crescimento, supera a da G6PD. Na cepa Tulahuen 2, a atividade da 6PGD fica em tomo de 18 a 33% da G6PD (também com exceção do 1° dia). Ao longo da proliferação da cepa Y observou-se ainda que não existe um padrão comum entre os níveis de rnRNA da G6PD e TcCPx, nem entre a atividade enzimática da primeira e o conteúdo protéico da segunda. Na cepa Tulahuen 2 essas semelhanças existem, principalmente em termos de conteúdo total de rnRNA para as referidas enzimas. A expressão da G6PD nas células Y parece ser mais dependente de glicose do que na outra cepa, especialmente após os tratamentos com H2O2. Na cepa Tulahuen 2 o tratamento com H2O2 ocasiona variações tanto na expressão da G6PD quanto na expressão da T cCPx, desencadeando em ambas uma resposta possivelmente regulada ao nível pós-transcricional. A alta atividade da G6PD na cepa Tulahuen 2, bem como a capacidade da mesma de responder ao estímulo por H2O2 na ausência de glicose e de forma simultânea com a TcCPx, são fatores que devem contribuir tanto para a maior resistência ao estresse oxidativo quanto para o maior nível de proliferação que estas células apresentam em relação às células da cepa Y / Abstract: Glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) and 6-phosphogluconate dehydrogenase (6PCJD) are enzyrnes related to cell proliferation and to detoxification processes. In this work, the activity/expression of CJ6PD and 6PCJD activity were determined in two strains of Trypanosoma cruzi (Y and Tulahuen 2) that differ in the proliferation index and resistance to oxidative stress. Enzymatic activity was assayed throughout the growth curve and after incubation with hydrogen peroxide (H2O2). It was also established under the same condition, rnRNA levels and protein expression of tryparedoxin peroxidase (TcCPX), an important enzyrne of the parasite antioxidant defense system. 6PCJD activity in Y strain, less resistance to oxidative stress, remained amost constant throughout the growth curve and except for the first day of growth, was higher than G6PD. In the Tulahuen 2 strain, 6PCJD activity was 18-33% of CJ6PD activity (except for the first day). For Y strain there was neither a common pattern between CJ6PD and TcCPx mRNA levels, nor between J6PD activity and TcCPx protein levels. In the Tulahuen 2 strain these similarities exist, mainly at the rnRNA content of these enzymes. CJ6PD expression in Y strain appears to be more glucose-dependent than the other strain, especially after H2O2 incubation. In Tulahuen 2 strain, H2O2 treatment lead to variations in CJ6PD and TcCPx expression, regulated probably at the post transcriptional level. The high CJ6PD activity in the Tulahuen 2 strain and the ability of these cells to respond to H2O2 in the absence of glucose simultaeously with TcCPx can contribute to the higher resistance to oxidative stress and also to the higher proliferation index observed in these ce1ls when compared to the other strain / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Julia Keiko Sakurada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-24T17:50:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alves_DelmaPegolo_M.pdf: 2384507 bytes, checksum: c51a6c07f4248e1558d20662c49bc7f1 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Experimentos realizados por ASSIS (1997), com camundongos scm mostraram que, a susceptibilidade desse animal ao Trypanosoma cruzi, era revertida através da repopulação com as células esplênicas da linhagem congênica BALB/c, e que os anticorpos anti- T cruzi transferidos passivamente, controlavam apenas a parasitemia, demonstrando a importância desse modelo experimental, nos estudos das funções dos linfócitos isoladamente na infecção pelo Trypanosoma cruzi. No presente trabalho procuramos investigar, nos camundongos scm o mecanismo de indução da resistência ao parasita, utilizando-se o método de repopulação com os linfócitos T e de suas subpopulações, com o sentido de elucidar o papel dos linfócitos T e de ambas subpopulações, na regulação da infecção. Os resultados revelaram que, a susceptibilidade dos camundongos scm à infeçcão pelo Trypanosoma cruzi não está correlacionada com a inibição da produção de IFN-y e de NO, apontando a participação dos macrófagos e das células NK na fase inicial da infecção. A análise do papel dos linfócitos B e T na fase aguda da infecção provaram que, apenas os linfócitos T foram efetivos, na indução da resistência à infecção. Os estudos realizados com as subpopulações de linfócitos T evideciaram que, os linfócitos T CD4+ controlam a parasitemia com maior eficiência do que os linfócitos T CD8+. Quanto a evolução dos parasitas circulantes, as duas subpopulações apresentaram cinéticas e mecanismos distintos de controle intracelular do parasita. A eficiência no controle da infecção foi observada, quando as duas subpopulações foram associadas. A estimulação "in vitro" das células esplênicas com o Trypanosoma cruzi, demonstrou que os linfócitos T CD4+ apresentaram resposta proliferativa, enquanto que os linfócitos T CD8+ não foram estimulados. No 14° dia após a infecção, houve inibição da resposta proliferativa dos linfócitos T CD4+ e resposta proliferativa dos linfócitos T CD8+. Essas células estimuladas foram capazes de produzir IFN-y. Esses resultados indicam que, os linfócitos T CD4+ foram ativados policlonalmente, enquanto os linfócitos T CD8+ foram ativados especificamente. As citocinas liberadas pelas células T CD4+ são importantes na regulação da função efetora dos linfócitos T CD8+ e dos macrófagos, sugerindo ainda que os linfócitos T CD8+ inibem a ativação policlonal dos linfócitos T CD4+ / Mestrado / Imunologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Humberto de Araujo Rangel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T08:16:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_MarcosGarcia_M.pdf: 1468128 bytes, checksum: 509b553e635606c76700ca3af2c9578d (MD5) Previous issue date: 1977 / Resumo: A atividade proteinásica de uma fração solúvel, rotulada como FS, obtida a partir de lisados da forma epimastigota de T. cruzi foi investigada em diferentes pH, utilizando diferentes tampões e o método de Anson modificado. A atividade proteolítica em pH 7,0 foi particularmente investigada utilizando-se diferentes substratos protéicos. A caracterização da proteinase neutra foi tentada utilizando-se os métodos de detecção de atividade proteolítica em gel de agarose, após eletroforese, imunoeletroforese simples e imunoeletroforese cruzada. Os resultados obtidos mostram que: 1. A FS exibe atividade proteolítica em uma ampla faixa de pH (entre 1,0 e 9,0), ocorrendo picos de atividade na zona ácida (pH 2,6 a 3,6), na zona alcalina (pH 8,5) e a zona neutra. 2. A atividade proteinásica da zona neutra apresentou um ótimo de atividade em pH 7,0, quando se utilizou tampão fosfato e homoglobina bovina ou humana como substratos. Um mesmo Km foi encontrado para as duas hemoglobinas que quando testadas frente a diferentes concentrações de FS, obteve-se uma relação praticamente linear entre dose e efeito quando os valores de 'delta¿DO se situam entre 0 e 0,500. 3. A proteinase neutra é capaz de agir sobre SNC, SAB, SAH e GGH, não alterando contudo o motivo antigênico desses substratos... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Affonso Luiz Ferreira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T17:13:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fiorani_SegundoAmarilleSalezzi_D.pdf: 4734795 bytes, checksum: a10f162df7c121c90dbec10ac5a65bf0 (MD5) Previous issue date: 1973 / Sem resumo. / Doutorado / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Leonilda Maria Barbosa Santos / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T11:31:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_ElaineConceicaode_D.pdf: 5667671 bytes, checksum: a1c02eeb806719b6a0052e2669d63e8a (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A doença de Chagas é causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, acredita-se que a intensa resposta linfoproliferativa observada na fase aguda da doença é responsável pelo aparecimento de clones de linfócitos auto-reativos, na fase crônica. Vários estudos têm demonstrado a reação cruzada entre os antígenos derivados do parasita e os componentes do hospedeiro. Estes estudos são mais freqüentes nos modelos experimentais ou em pacientes portadores de cardiomiopatias. Pouco se conhece, no entanto, sobre a resposta auto-imune dirigida contra o sistema nervoso periférico, que pode resultar clinicamente, nas manifestações gastrintestinais da doença de Chagas (síndrome dos mega). No presente estudo demonstramos a presença de linfócitos auto-reativos e autoanticorpos contra componentes do sistema nervoso periférico, no sangue de pacientes com síndrome dos Mega, decorrente da doença de Chagas. Conseguimos identificar uma região da molécula de MBP, seqüência de 1-30, sugerindo que a proteína básica de mielina seria o alvo da resposta imune dirigida contra o sistema nervoso periférico nestes pacientes / Abstract: Most reports of autoimmune response during infection with the parasite Trypanosoma cruzi have dealt with the cardiomyopathic forro of Chagas' disease, but there is another, less common, gastrointestinal forro, which is studied here. Chronically infected patients with a severe gastrointestinal forro of Chagas' disease present increased antibody production and proliferative responses to peripheral myelin components, such as myelin basic protein and peripheral nerve structures. T lymphocytes preferentially recognize a region on the myelin basic protein (MBP) molecule (1-30), which suggests that the MBP is a potential target on the peripheral nerve for autoimmune reactions in patients with gastrointestinallesions resulting ITomChagas' disease / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-03-05T13:07:24Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Ana Daura de Oliveira.pdf: 2468552 bytes, checksum: 2605b0bea660696439facad88ef6f4fa (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-05T13:07:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Ana Daura de Oliveira.pdf: 2468552 bytes, checksum: 2605b0bea660696439facad88ef6f4fa (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / FACEPE (Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia de Pernambuco) / A doença de Chagas, causada pelo Trypanosoma cruzi, é uma infecção que causa aproximadamente 12 mil mortes a cada ano. O T. cruzi é susceptível às tiossemicarbazonas, e isso faz com que esta classe de compostos seja muito atraente para o desenvolvimento de drogas. Nesse trabalho é apresentado o planejamento estrutural, síntese e avaliação anti-T. cruzi de novas ariloxitiossemicarbazonas 9a-x. Para o planejamento dessa série foi utilizada a técnica de homologação, introduzindo-se um grupo espaçador entre o aril e a tiossemicarbazona. Os compostos foram obtidos em duas etapas, sendo a primeira a obtenção de ariloxicetonas 7a-x e a segunda, a condensação dessas com a tiossemicarbazida, obtendo assim as ariloxitiossemicarbazonas 9a-x. Variando os substituintes ligados ao anel aril, observou-se substituintes que mantêm ou aumentam a atividade anti-T. cruzi em comparação com o derivado não substituído. Com poucas exceções, os substituintes hidrofóbicos ligados ao anel fenil reforçaram a atividade, tal como bromo, fenil e fenóxi. Especificamente, foram identificadas tiossemicarbazonas que inibem a proliferação epimastigota e são tóxicas para tripomastigotas metacíclicas, sem afetar a viabilidade de esplenócitos de ratos, e mais importante, com uma potência semelhante ou superior ao benznidazol e o nifurtimox. As tiossemicarbazonas mais potentes foram avaliadas em culturas de células para inibir a atividade da cruzaína, contudo nenhuma inibição destas enzimas foi observada, sugerindo que os compostos funcionam por meio de outro mecanismo. Em conclusão, o design estrutural da série de ariloxitiossemicarbazonas sintetizadas 9a-x levou à identificação de novos potentes agentes anti-T. cruzi, tais como os compostos 9h, 9r e 9t, os quais inibiram muito a proliferação de epimastigotas e foram seletivamente tóxicas para tripomastigotas. Mecanisticamente esses compostos não inibem a cruzaína, mas induzem a morte das células T. cruzi por um processo necrótico.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En el presente trabajo se analizó el desarrollo de la infección con 2000 trypomastigotes sanguíneos de las cepas Munantá, San Antonio y Tulahuén de Trypanosoma cruzi , en ratones de la cepa ACA. Los resultados mostraron que el 100 % de los animales infectados fueron altamente susceptibles a la infección con las cepas San Antonio y Tulahuén, muriendo todos los ratones alrededor de las tres semanas post-infección. El grupo de ratones infectados con la cepa Munantá se comportaron como resistentes, sobreviviendo el 90 % de los animales infectados. A pesar de lo anterior, este grupo de ratones presentó los más altos niveles de parasitemia y la cepa San Antonio los niveles más bajos. Se realizó un estudio histopatológico de tejido cardíaco de los animales infectados. Los resultados mostraron que sólo en animales infectados con la cepa Tulahuén se observa correlación entre nivel de parasitemia, daño tisular, infección celular y muerte. La infección con la cepa San Antonio mostró gran cantidad de parásitos intracelulares y daño tisular pero con una baja parasitemia y de corta duración. Por el contrario, los ratones infectados con la cepa Munantá mostraron altos niveles de parasitemia, pero en los tejidos se encontró una escasa cantidad de pseudoquistes. Es probable que el lugar de multiplicación de esta cepa de parásito sea un tejido distinto al corazón. Estos resultados apoyan la idea que los niveles de parasitemia alcanzados durante una infección con T. cruzi , no siempre se correlacionan con la susceptibilidad o resistencia, al menos en el modelo murino

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