Submitted by Fabíola Silva (fabiola.silva@famerp.br) on 2017-08-03T11:44:01Z No. of bitstreams: 1 ceylamariaodecastro_tese.pdf: 1353174 bytes, checksum: 1308d049511e8f07c8b5a5d1f5aa3df6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-03T11:44:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ceylamariaodecastro_tese.pdf: 1353174 bytes, checksum: 1308d049511e8f07c8b5a5d1f5aa3df6 (MD5) Previous issue date: 2015-09-03 / This study aimed at assessing the extracellular metabolic profile of Vero cells infected by Mayaro virus. In this metabolomic study, the use of nuclear magnetic resonance associated to multivariate analytical methods, devices of standard recognition, showed metabolic variations which can be attributed to the effect of Mayaro virus infection. Vero cells were infected and incubated for 2, 6 and 12 hour periods. Differentiated variations in the levels of several metabolites such as amino acids, organic acids, guanidine compound, monoamine, carbohydrates and fatty acids have occurred in each period. These organic compounds are metabolites involved in the glycolysis pathway, tricarboxylic acid cycle, pentose phosphate pathway, and the oxidation pathway of fatty acids (via the β-oxidation). This study demonstrates footprinting analysis representing the effect of the virus action on the Vero cell metabolism, furthermore, these analyzes point out the intracellular metabolic state, improving the knowledge of the microorganism influence on cellular metabolism. / O presente estudo tem como objetivo avaliar o perfil metabólico extracelular de células Vero infectadas pelo vírus Mayaro. Neste estudo metabolômico o uso da ressonância magnética nuclear combinado a métodos analíticos multivariados, ferramentas de reconhecimento padrão que demonstraram variações metabólicas que podem ser atribuídas ao efeito da infecção do vírus Mayaro. As células Vero foram infectadas e incubadas em períodos de 2, 6 e 12 horas. Em cada período ocorrem variações diferenciadas nos níveis de vários metabólitos, como aminoácidos, ácidos orgânicos, composto de guanidina, monoamina, carboidratos e ácidos graxos. Esses compostos orgânicos são metabólitos envolvidos na via da glicólise, ciclo do ácido tricarboxílico, via das pentoses-fosfato, e via da oxidação dos ácidos graxos (via da β-oxidação). Este estudo demonstra footprinting analysis que representa o efeito da ação do vírus no metabolismo da célula Vero, além disso, essas análises indicaram o estado metabólico intracelular, e contribuem para o conhecimento da influência do microorganismo no metabolismo celular.

Orientador: Tomomasa Yano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-11T07:05:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kota_DanielJiro_M.pdf: 555074 bytes, checksum: 910a5d4735f12d01edac8766de74e9c5 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A bactéria Enterobacter cloacae tem se destacado como importante agente de infecção hospitalar, muitas vezes levando ao óbito de pacientes imunodeprimidos. Estudando as propriedades de virulência desta bactéria em nosso laboratório, foi detectado que 18% das amostras estudadas demonstraram atividade citotóxica sobre células Vero. A citotoxina, de peso molecular de 100 KDa, foi purificada da amostra com maior atividade citotóxica (118.9) por cromatografia de troca iônica e exclusão molecular, não mostrou atividade letal em camundongos e não causou acúmulo de fluido em intestino de camundongos recém-nascidos. Além disso, não apresentou atividade leucotóxica. Quanto à sua propriedade hemolítica, constatou-se que a toxina purificada apresentou atividade hemolítica sobre eritrócitos de coelho, carneiro e boi, sendo não hemolítica sobre eritrócitos humanos, com presença ou ausência de ~mercaptoetanol. O mecanismo de ação desta toxina parece estar relacionado com o comprometimento da mitocôndria, o que ativaria a via apoptótica e a lise da membrana das células Vero. Quand~ aquecida por 100°C por 30 minutos, esta perdeu toda sua atividade citotóxica, demonstrando ser termolábil. Apesar da similaridade em sua citotoxicidade sobre as células Vero com os efeitos causados por verotoxinas, os genes STX (Shiga-Toxin) 1 e 2 e VT (Verotoxin)1 e 2, característicos de verotoxinas, não foram amplificados pela PCR / Abstract: The bacterium Enterobacter cloacae has been recognized as an important infectious agent in hospitaIs, sometimes leading patients to obit. Studying its virulence properties in our laboratory, 18% of the strains were characterized as cytotoxic against Vero cells. The cytotoxin was purified from the most cytotoxic strain (118.9) by means ionic exchange and molecular exclusion chromatography techniques respectively, increasing its relative activity in 62.5%. The purified toxin did not display either lethal activity nor did it cause fluid accumulation in neonatal mice intestine. Furthermore, no leukotoxic activity was detected and regarding its hemolytic activity, the purified toxin showed hemolytic activity against rabbit, bovine and sheep erythrocytes, but not against human erythrocytes, with or without beta-mercaptoethanol. The toxicity mechanism seems to be associated with a failure in the mitochondria's function, which would activate the apoptotic pathway and membrane lyses. When heated for 100°C for 30 minutes, the toxin lost completely its cytotoxicity. Despite the fact that the toxin displayed similar effects in Vero cells compared to verotoxins, PCR did not amplified the STXl and -2 and VTl and 2 genes, found in verotoxin expressing strains / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

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Submitted by Etelvina Domingos (etelvina.domingos@ufpe.br) on 2015-04-08T19:09:06Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO RAISA QUEIROZ CATUNDA.pdf: 1302963 bytes, checksum: 19093f5f0f4d3fbf5a39dcf14f6805a1 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T19:09:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO RAISA QUEIROZ CATUNDA.pdf: 1302963 bytes, checksum: 19093f5f0f4d3fbf5a39dcf14f6805a1 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / O objetivo deste estudo foi avaliar, in vitro, a citotoxicidade de três adesivos dentinários (Adper Single Bond 2 -SB, Sistema Adesivo Silorano-SAS e Single Bond Universal -SBU) em células Vero, após diferentes tempos de contato. Métodos: As células foram cultivadas a uma concentração de 2x105 células/ml por 24h e crescidas até formar uma monocamada subconfluente. As células Vero foram expostas a 25μl de extratos obtidos da imersão dos adesivos em meio de cultura (DMEM) por 24h, 48h e 72h, imediatamente após a polimerização. DMEM fresco foi utilizado como controle negativo e o metabolismo celular foi avaliado pelo método MTT [3-(4,5- Di-metiltiazol-2-il)-2,5- brometo difenil- tetrazolio)]. Os dados foram comparados estatisticamente através do teste ANOVA. Resultados: Os valores percentuais de viabilidade variaram de 94,2% em 72h (SBU) até 109,6% em 48h (SB). A média percentual de viabilidade após a exposição aos extrados de SB, SAS e SBU foram 103,2%, 100,63% e 97,43%, respectivamente. Não houve uma diferença significativa entre os grupos experimentais e o controle negativo (p= 0,342). Conclusões: Todos os adesivos testados neste estudo apresentaram nenhuma citotoxicidade à células Vero in vitro.

Orientador: Edir Nepomuceno da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-20T03:20:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_VeraLuciaNobregada_M.pdf: 4366240 bytes, checksum: 7ae22a2a3b6005fac0c55950cf6ffdf5 (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: Esta pesquisa teve por objetivo estudar a patogenicidade de cepas de L. monocytogenes cultivadas a 4, 22 e 37°C em células Vero, macrófagos e embriões de galinha. Foram utilizados dois grupos de cepas: um isolado de listeriose humana e outro isolado de alimentos, tendo sido incluído uma cepa padrão patogênica "Scott A" e uma cepa de L. innocua, avirulenta. Primeiramente, determinamos algumas características morfológicas, bioquímicas e sorológicas das cepas. Todas apresentaram as características próprias da espécie, sendo que as amostras isoladas de casos clínicos humanos eram pertencentes ao sorotipo 4b. As que foram isoladas de alimentos eram pertencentes ao sorotipo 1/2a e 1/2b. Em outra fase estudamos a cinética de invasão e multiplicação de L. monocytogenes em cultivo de células Vero e macrófagos e o efeito da temperatura de cultivo da bactéria neste processo. Em macrófagos, a invasão e multiplicação foi mais efetiva do que em células Vero, e dependente do tempo após a inoculação e temperatura de cultivo das cepas. As cepas clínicas apresentaram maior capacidade de multiplicação a 4 e 37°C do que as isoladas de alimentos. A cepa 132 procedente de alimento foi mais invasiva em macrófagos do que as outras duas da mesma origem. A inoculação de L monocytogenes em células Vero não serviu para diferenciar as cepas clínicas das alimentares, nem mostrou diferença entre cepas cultivadas em diferentes temperaturas. Na última etapa da pesquisa, determinamos a dose letal 50% (DL50) para embriões de galinha. Embriões de galinha serviram como bom modelo para o estudo da patogenicidade de cepas cultivadas e mantidas em diferentes temperaturas. Cepas cultivadas e mantidas a 4°C se mostraram mais patogênicas do que cepas cultivadas e mantidas em temperaturas mais elevadas / Abstract: We studied pathogenicity of L. monocytogenes strains grown at 4, 22 and 37°C on Vero cells, macrophages and chicken embryos. Two groups of strains were used: one isolated from human listeriosis and another isolated from food, including one standard pathogenic "Scott A" strain and one avirulent L. innocua For all strains, it was established morphologically, some biochemical characteristics and serogrouping. All have shown its own species characteristics. Samples isolated from human listeriosis belonged to serovar 4b and the ones isolated from food belonged to serovar 1/2a and 1/2b. The kinetics of invasion and multiplication at L. monocytogenes on Vero and macrophage cell cultures and the effect of the growth temperature on the bacteria in this process was studied. With macrophages, the invasion and multiplication were more effective than with Vero cells, and was dependant on inoculation time and cultivation temperature of the strains. The clinical strains showed a better ability for multiplication at 4 and 37°C than the ones isolated from food. One strain from food was more invasive for macrophages than the other two ones from the same origin. The inoculation of L. monocytogenes on Vero cells was not useful to differentiate the clinical from the food strains. One did not even show any difference between strains growth at different temperatures. The lethal dose 50% (LD50)for chicken embryos was established for all strains and its appear a good model to the study pathogenicity of cultured strains kept at different temperatures. Strains cultured and kept at 4°C showed more pathogenicity than the ones cultured and kept at higher temperatures / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

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Cultivos de células VERO em microcarregadores porosos de celulose (Cytopore) e porosos de gelatina (Cultispher G) com rendimento celular três vezes maior, foram obtidos em relação às culturas em microcarregadores sólidos de DEAE-dextran (Cytodex tipo 1). No Cytopore e Cultispher G atingimos 1.265 e 1.103 células/microcarregador, respectivamente e no Cytodex 1, 256 células/microcarregador. A concentração celular nos suportes porosos Cytopore aumentou 43 vezes o número de células iniciais, 37,5 vezes no Cultispher G e 17 vezes no Cytodex 1. As culturas de células VERO nos microcarregadores porosos foram utilizadas com êxito para a replicação do vírus rábico (PV/VERO), quando infectadas com MOI de 0,05. Títulos de 104,8 FFD50/mL determinados pelo método de inibição de focos fluorescentes (RFFIT) foram obtidos 96 horas após a infecção. Estudos de microscopia óptica e eletrônica de varredura e transmissão para análise da estrutura destes suportes, mostraram boa colonização celular e a eficiência da replicação viral. A padronização de metodologia para cultura e infecção viral de células VERO nos microcarregadores porosos indica a utilidade destes suportes para produção de antígenos e vacinas virais e a potencialidade do sistema para a obtenção de produtos biotecnológicos em geral. / Cultures of VERO cell on porous cellulose-coated microcarriers (Cytopore) and on porous gelatin-coated (Cultispher G) with a cellular yield 3 times higher, was obtained in relation to DEAE-dextran solid microcarriers (Cytodex type 1). In the cultures on Cytopore and Cultispher G we obtained 1.265 and 1.103 cells/microcarrier, respectively and 256 cells/microcarrier on Cytodex 1. The cell concentration for the Cytopore porous suports increased 43 times from the initial cell number, 37,5 times for the Cultispher G and 17 times for the Cytodex 1. The VERO cell cultures on porous microcarriers were efficiently used for the replication of the rabies virus (PV/VERO), when infected with 0,05 MOI. Titers of 104,8 FFD50/mL determined by the fluorescent focus inhibition method (RFFIT) were obtained 96 hours post-infection. Studies on light microscopy and scanning and transmission eletronic microscopy carried out to analyse the suports structure, showed a good cell population and efficiency of virus infection. The standardization of a methodology for culture and virus infection of VERO cells on porous microcarriers indicate the usefulness of these porous supports to the antigens and viral vaccines production and the potenciality of this system for the attainment of biotechnological products.

Cultivos de células VERO em microcarregadores porosos de celulose (Cytopore) e porosos de gelatina (Cultispher G) com rendimento celular três vezes maior, foram obtidos em relação às culturas em microcarregadores sólidos de DEAE-dextran (Cytodex tipo 1). No Cytopore e Cultispher G atingimos 1.265 e 1.103 células/microcarregador, respectivamente e no Cytodex 1, 256 células/microcarregador. A concentração celular nos suportes porosos Cytopore aumentou 43 vezes o número de células iniciais, 37,5 vezes no Cultispher G e 17 vezes no Cytodex 1. As culturas de células VERO nos microcarregadores porosos foram utilizadas com êxito para a replicação do vírus rábico (PV/VERO), quando infectadas com MOI de 0,05. Títulos de 104,8 FFD50/mL determinados pelo método de inibição de focos fluorescentes (RFFIT) foram obtidos 96 horas após a infecção. Estudos de microscopia óptica e eletrônica de varredura e transmissão para análise da estrutura destes suportes, mostraram boa colonização celular e a eficiência da replicação viral. A padronização de metodologia para cultura e infecção viral de células VERO nos microcarregadores porosos indica a utilidade destes suportes para produção de antígenos e vacinas virais e a potencialidade do sistema para a obtenção de produtos biotecnológicos em geral. / Cultures of VERO cell on porous cellulose-coated microcarriers (Cytopore) and on porous gelatin-coated (Cultispher G) with a cellular yield 3 times higher, was obtained in relation to DEAE-dextran solid microcarriers (Cytodex type 1). In the cultures on Cytopore and Cultispher G we obtained 1.265 and 1.103 cells/microcarrier, respectively and 256 cells/microcarrier on Cytodex 1. The cell concentration for the Cytopore porous suports increased 43 times from the initial cell number, 37,5 times for the Cultispher G and 17 times for the Cytodex 1. The VERO cell cultures on porous microcarriers were efficiently used for the replication of the rabies virus (PV/VERO), when infected with 0,05 MOI. Titers of 104,8 FFD50/mL determined by the fluorescent focus inhibition method (RFFIT) were obtained 96 hours post-infection. Studies on light microscopy and scanning and transmission eletronic microscopy carried out to analyse the suports structure, showed a good cell population and efficiency of virus infection. The standardization of a methodology for culture and virus infection of VERO cells on porous microcarriers indicate the usefulness of these porous supports to the antigens and viral vaccines production and the potenciality of this system for the attainment of biotechnological products.

Orientador: Selma Candelaria Genari / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T19:22:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Goncalves_EstelaMaria_D.pdf: 4512893 bytes, checksum: 36b5b4604b23f405a7254a71f5971cd4 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A cisplatina é um agente antineoplásico utilizado no tratamento quimioterápico de tumores como os de testículo, de ovário e de bexiga urinária. Contudo, estudos indicam que a cisplatina apresenta potencial mutagênico, genotóxico e tumorigênico tanto in vitro como in vivo. Após tratamento com 50 µg/ml de cisplatina durante 24 h, células Vero apresentaram alterações comportamentais e morfológicas associadas à transformação celular in vitro. Modificações morfológicas foram investigadas com utilização de imunocitoquímica (fibronectina), microscopia eletrônica de varredura e coloração faloidina-fluoresceína (actina). O estudo proliferativo foi realizado a partir de curvas de crescimento e o padrão de adesão celular foi obtido através de testes de adesão. Características citogenéticas foram avaliadas em células Vero e V79 tratadas com cisplatina, através da determinação dos números modais de cromossomos, das freqüências de poliploidia e dos índices mitóticos. Células Vero controles apresentaram crescimento em monocamadas, enquanto que células Vero transformadas cresceram em múltiplas camadas, formando grumos ou agregados celulares. A proliferação celular e as características morfológicas e de adesão das células Vero transformadas foram acentuadamente diferentes das células controles. Células Vero transformadas e células V79 tratadas com cisplatina apresentaram alterações nos números de cromossomos além de aumento nos índices mitóticos e nas freqüências de poliploidia. Os resultados obtidos indicam que as alterações morfológicas, de crescimento e de adesão observadas em células Vero e as alterações citogenéticas, observadas em células Vero e em células V79, provavelmente relacionam-se com a transformação celular in vitro induzida pelo tratamento com cisplatina. Estas células Vero transformadas apresentam características associadas ao crescimento neoplásico, podendo ser utilizadas como modelo de estudo de células tumorais in vitro / Abstract: Cisplatin is an antineoplastic agent used to treat solid malignancies, such as testicular, ovarian and bladder tumors. However, both in vitro and in vivo, cisplatin has been shown to be mutagenic, genotoxic and tumorigenic. Maintained in culture, Vero cells presented behavioral and morphological alterations associated with cellular transformation in vitro, after treatment with 50 µg/ml of cisplatin during 24 h. The morphological alterations were investigated using immunocytochemistry (fibronectin), scanning electron microscopy and the actin cytoskeleton was labeling with fluorescein isothiocyanate-phalloidin. The study of proliferation was obtained from the growth curve and the adhesion pattern was obtained from the adhesion assay. In Vero and V79 cells treated with cisplatin, cytogenetical characteristics were obtained by modal chromosome numbers, polyploidy frequencies and mitotic index determinations. Control Vero cells presented growth in a monolayer, while the transformed cells grew in multilayers forming cellular aggregates. The cellular proliferation, adhesion pattern and morphological characteristics of the transformed Vero cells were very different from the control ones. Transformed Vero cells and cisplatin-treated V79 cells presented altered chromosome numbers. Polyploidy frequencies and mitotic indexes were also enhanced in these cells. The results indicate that morphological, growth and adhesion changes observed in Vero cells and cytogenetical alterations, observed in Vero and V79 cells, probably resulted from cellular transformation in vitro induced by cisplatin treatment. These transformed Vero cells presented characteristics associated with neoplastic growth, and can be used as a model for tumor cells studies in vitro / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

El presente trabajo de tesis tuvo como objetivo titular anticuerpos neutralizantes contra una cepa endémica del virus Chikungunya que circula en la costa norte peruana. Para desarrollar esta investigación, se empleó la prueba de neutralización por reducción en placas (PRNT), la cual se realizó en el Instituto Nacional de Salud (INS)– Laboratorio de Aislamiento y Cultivo Celular perteneciente al área de Metaxénicas Virales. La justificación de la investigación se basa en la necesidad de comprobar que los anticuerpos detectados por la prueba de ELISA son neutralizantes y logran inhibir la dispersión del CHIKV en el cuerpo humano. Además, la prueba es necesaria para evaluar drogas antivirales y futuras vacunas que lleguen al Perú. El diseño metodológico utilizado fue analítico y experimental. La cepa y las muestras fueron proporcionadas por el INS y provinieron del departamento de Tumbes. Las muestras positivas fueron previamente diagnosticadas con ELISA utilizando IgM e IgG y las muestras negativas fueron de individuos sanos sin contacto previo con arbovirus. La prueba de PRNT se realizó en 24 horas usando la línea celular VERO CCL-81 en monocapa. La valoración de la prueba se realizó al 50% de neutralización. Se obtuvo como resultado títulos de anticuerpos en el rango de 1/8 y 1/16. Ésta variación responde a una relación inversa con el inicio de los días de síntomas. Por lo tanto, se concluye que la población de la costa norte del Perú sí está desarrollando anticuerpos neutralizantes para contrarrestar el virus Chikungunya endémico en la región.The present thesis aims to titrate neutralizing antibodies against an endemic strain of the Chikungunya virus that circulates in the northern coast of Peru. In order to develop this research, the plaque reduction neutralization test (PRNT) has been used, which has been carried out at the National Institutes of Health (INS) - Isolation and Cell Culture Laboratory belonging to the Viral Metaxenics area. The justification of the investigation is based on the need to verify that the antibodies detected by the ELISA test are neutralizing and manage to inhibit the dispersion of CHIKV in the human body. In addition, the test is necessary to evaluate antiviral drugs and future vaccines that arrive in Peru. The methodological design used was analytical and experimental. The strain and samples were provided by the INS. The strain is endemic to the department of Tumbes. The positive samples were previously diagnosed with ELISA using IgM and IgG and the negative samples were from individuals that had not had contact with any arbovirus. The PRNT test was performed in 24 hours using the VERO CCL-81 cell line in monolayer. The titration of the test was performed at 50% neutralization. Antibody titres were obtained in the range of 1/8 and 1/16. This variation responds to an inverse relationship with the onset of symptom days. Therefore, it is concluded that the population of the northern coast of Peru is developing neutralizing antibodies to counteract the endemic Chikungunya virus in the region.