Verschiedene ELISA zur Erkennung von Stx1 und Stx2 in Rinderkotproben wurden auf ihrer Anwendbarkeit hin verglichen. Der ELISA nach RICHTER et al. (1997) unter Anwendung von Hydatidenflüssigkeiten von Echinococcus granulosus als Beschichtungssubstanz und monoklonalen Antikörper als Bindungsmolekül stellte sich als die praktikabelste Lösung im Vergleich mit dem ELISA mit monoklonalen Antikörpern (RANDALL et al., 1997) und einem ELISA mit kommerziellem Gb3 heraus. Der ELISA nach RICHTER et al. (1997) wurde gegen den klassischen Vero-Zell- Neutralisationstest validiert. Zu diesem Zweck wurden 100 E. coli-Feldisolate mit beiden Tests ausgewertet. Die zur Quantifizierung von Ergebnissen angewendete Coulter-Methode (Ermittlung der Überlebensraten der Vero-Zellen mit Hilfe des Z2-Partikelzählers) erwies sich als geeignet, während zwei Färbungsmethoden (KV- und MTT-Färbungsmethode) aufgrund von Einstellungsproblemen bei der spektralfotometrischen Messungen nicht zu auswertbaren Ergebnissen geführt hatten. Die Ergebnisse des ELISA und des Vero-Zell-Neutralisationstest wurden in einer „Two- Graphic Receiver-Operating Characteristic“ (TG-ROC)-Analyse verglichen. Die Indexwerte 0,020 und 0,040 wurden als „cut-off“ für den Stx1- bzw. Stx2-ELISA anhand dieser Analyse 79 festgelegt. Die geschätze Sensitivität und Spezifität für den Stx1-ELISA betrugen 100% (pu = 100%; po = 100%), für den Stx2-ELISA betrug die Sensitivität 100% (pu = 100%; po = 100%) und die Spezifität 94% (pu = 88,4%; po = 99,7%). Nach diesen Ergebnissen ist der ELISA ein geeigneter Test und kann den Vero-Zell-Neutralisationstest ersetzen. Der validierte ELISA wurde in einem Feldversuch parallel mit der MK1/MK2-PCR (KARCH und MEYER, 1989) eingesetzt. In einem Zeitraum vom 15.01.97 bis 31.12.99 wurden 1030 Rinderkotproben mit beiden Tests auf das Vorkommen von STEC untersucht. Die PCR wies stx-Gene bei 500 (49%) der Proben nach. Der ELISA wies nur 307 (30%) Stx-positive nach. Bei 264 positiven und 487 negativen Ergebnissen stimmten die Resultate zu 751 Proben (73%) überein. Der berechnete Kappa-Wert war 0,452. Der Kappa-Wert spricht für eine mäßige Übereinstimmung beider Tests. Diesen Ergebnissen nach sollte die PCR als „pre-screening“-Test favorisiert werden, obwohl eine Kombination beider Tests zum Stx-Nachweis am besten geeignet wäre.

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Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Neosporosis is a parasitic disease of wide distribution and great importance to the cattle industry, mainly due to its associated reproductive losses. The life cycle of Neospora caninum typified by the tree know infectious stages: tachyzoites, tissue cysts with bradyzoites, and oocysts. Transmission routes can be horizontal and/or vertical. The vertical transmission or transplacentally is the most frequent form of infection, and an important form of maintain the agent in herds. With aim of to determine the occurrence of anti-Neospora caninum antibodies in serum samples of 260 bovine fetuses, collected in a slaughter in the municipality of Santa Maria, in Rio Grande do Sul, Brazil. For detection antibodies anti-N. caninum indirect fluorescent antibody test was used and immunoglobulin G and M were detected, using a cut-off 1:25. Of the 260 serum samples tested, 15% (39/260) were positive for the presence of anti-N. caninum. Of these, in 38 the presence of IgG where detected (97.4%) and in six IgM were present (10.3%). Five samples (15.4%) tested were positive for both IgG and IgM. The results reaffirming the ability of N. caninum in determine fetal infection. The results presented on the first chapter indicated that the search of IgM anti-N. caninum is of very limited help in the detection of the transplacental infection in cattle. In second chapter, was evaluated the susceptibility to infection by N. caninum in different cell cultures, for the purpose of observe the ability in vitro multiplication this agent. For this, eight cell cultures were tested, among the cell cultures tested, four presented good susceptibility to agent: cell lines VERO (yield of 21.2 tachyzoites/cell) and MA-104 (17.1); primary bovine testicle (16.3) and lung cells (13.6). Primary bovine kidney (8.2 tachyzoites/cell), MDBK (5.1) and RK-13 cell lines (0.4) presented moderate to low sensitivity. No viable tachyzoites were detected in the culture of MDCK cells. These results demonstrate that MA-104 cells present adequate susceptibility to N. caninum compared to VERO cells, which have been largely used to multiply the parasite in vitro. Due to the easy manipulation, quick multiplication and relatively low nutritional equirements, these results indicate that MA-104 cells are adequate for multiplication of N. caninum in vitro. / A neosporose é uma doença parasitária de ampla distribuição e com grande importância para a bovinocultura, principalmente pelas perdas reprodutivas que determina. O ciclo do Neospora caninum caracteriza-se por apresentar três estágios infecciosos: os taquizoítos, os cistos teciduais contendo bradizoítos e os oocistos. Suas rotas de transmissão podem ser horizontal e/ou vertical. A infecção vertical ou transplacentária é a forma mais freqüente de infecção, sendo uma importante forma de manutenção do agente nos rebanhos. Com o objetivo de determinar a ocorrência de anticorpos anti-N. caninum em fetos bovinos, foram coletadas 260 amostras de soro em abatedouro localizado no município de Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brasil. Para detecção de anticorpos anti-N. caninum, utilizou-se a técnica de imunofluorescência indireta com a presença de imunoglobulinas G e M (IgG e IgM), sendo analisada com ponto de corte de 1:25. Do número total de amostras testadas, 15% (39/260) foram positivas para anticorpos anti-N. caninum. Destas, em 38 (97,4%) foi detectada a presença de IgG anti-N. caninum e em seis (15,4%) de IgM. Em cinco amostras (12,8%) detectaram-se ambos, IgG e IgM. Os resultados reafirmam a capacidade do N. caninum determinar infecção fetal. Os resultados obtidos no primeiro capítulo desta dissertação permitiram demonstrar que a pesquisa de IgM foi de limitada importância na detecção da infecção via transplacentária em soro fetal bovino. No segundo capítulo, foi avaliada a susceptibilidade à infecção pelo N. caninum em diferentes cultivos celulares, com a finalidade de observar a capacidade de multiplicação deste agente in vitro. Para isto, foram testados oito cultivos, sendo que quatro apresentaram boa susceptibilidade a multiplicação pelo N. caninum: células VERO (produção de 21,2 taquizoítos/célula), MA-104 (17,1), cultivo primário de testículo (16,3) e pulmão bovino (13,6). O cultivo primário de rim bovino (8,2), células MDBK (5,1) e RK-13 (0,4) apresentaram baixa sensibilidade, enquanto células MDCK não produziram taquizoítos viáveis. Os resultados obtidos demonstram que as células MA-104 apresentaram susceptibilidade semelhante a das células VERO linhagem tradicionalmente utilizada para o cultivo deste protozoário. Pela facilidade de cultivo e rápida multiplicação, menor exigência nutricional e produção de taquizoítos em níveis semelhantes às células VERO, as células MA-104 demonstraram ser adequadas para a manutenção e multiplicação do N. caninum in vitro.

Ce travail apporte une contribution au développement de la stratégie PAT pour les procédés de culture de cellules animales. Il propose l'amélioration de la compréhension et de la maîtrise de la culture de cellules Vero, dédiées à la production de vaccins viraux, et cultivées sur microporteurs dans un milieu sans sérum. Une première partie a permis de cribler les effets de certains groupes de composés du milieu de culture par le suivi de la croissance en microplaques. Puis, des études cinétiques et métaboliques plus approfondies, réalisées en spinners, ont montré que le métabolisme carboné des cellules Vero est saturé par l'accumulation intracellulaire de pyruvate et qu’il est peu orienté vers la croissance. Alors que le renouvellement du milieu ou l'ajout ponctuel de glutamine amélioraient la croissance cellulaire sans ré-équilibrer le métabolisme, la substitution du glucose et de la glutamine a permis de réduire l’apoptose et d'améliorer les performances métaboliques et de croissance. Par ailleurs, les spectroscopies diélectrique et proche-infrarouge ont été évaluées pour le contrôle en-ligne du procédé, en prenant en compte les particularités des cellules adhérentes. Nous avons montré leur capacité à évaluer les concentrations de cellules, de composés du milieu, et à détecter l'apoptose. Enfin, les principales améliorations par substitution de la glutamine ont été appliquées en bioréacteurs, à la production d'un vaccin prototype contre la dengue, dans des conditions proches de celles d'un procédé industriel. Ceci a permis de limiter les renouvellements de milieu pendant l’expansion cellulaire, sans compromettre la production de particules virales infectieuses / This work contributes to the development of the PAT strategy for animal cell culture processes. The aim of this study was to improve the understanding and the control of Vero cell culture, dedicated to the production of viral vaccines, and grown on microcarriers in serum-free medium. An initial study was performed to screen the effects of certain groups of compounds of the culture medium, by the cell growth monitoring in microplates. Then, kinetic and metabolic studies conducted in spinners flasks allowed to go further and to show that the Vero cell metabolism is saturated through the pyruvate intracellular accumulation and that it is not oriented toward growth. While media renewal or punctual addition of glutamine improve the cell growth without improving the metabolism balance, the substitution of glucose and glutamine allowed to reduce apoptosis and to improve growth and metabolic performances.Furthermore, dielectric and near-infrared spectroscopies have been evaluated for the in-line process monitoring, taking into account the particularities of adherent cells. We have demonstrated their ability to quantify cell concentrations, medium component concentrations, and to detect apoptosis. Finally, major improvements by substitution of glutamine have been applied to bioreactor culture to produce a dengue vaccine prototype, with culture conditions close to industrial process. In these cases, medium renewal during the cell expansion was removed without compromising the production of infectious viral particles

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-19T10:20:09Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Diego de Souza Avendano - 2016.pdf: 2770544 bytes, checksum: 621a0eef262e3cc91e4fab9e3a64f74a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-19T10:21:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Diego de Souza Avendano - 2016.pdf: 2770544 bytes, checksum: 621a0eef262e3cc91e4fab9e3a64f74a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-19T10:21:18Z (GMT). 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First, he will replace the combinatorial model underlying the natural language that prevailed in the Tractatus by a conception which he describes as a system of propositions (Satzsysteme), in which language would be considered as a complex system of autonomous propositional calculi. This change make possible preserves the thesis that all necessity is a logical necessity, however, it will be necessary to abandon the referential conception of meaning and the logical independence of elementary propositions. Thus, our proposal in this dissertation is to establish all aspects of the Tractarian philosophy that precede and sustain the proposal of language as correspondence, emphasizing that the abandonment shall result in changes such as: 1) a word has its meaning only in the context of its propositional system; 2) the meaning of any word is the totality of the rules governing its use in this system; 3) The meaning of a proposition is the method of its verification. Finally, in order to understand the context of these changes, it seems to be the case, that in one hand, we need to establish the essence and general form of the proposition in the Tractatus, and thereby elucidate some aspects of what are the essential traits of language and the world; On the other, to establish the limits and the scope of analysis, so we can understand its mutation outlined in accordance with the new criterion of sense – the rules – since what counts as the object of analysis will not be determined by a general form, but displayed by a “possible calculus”. / Em minha dissertação buscarei esboçar o percurso pelo qual o conceito de regra “surge” no pensamento de Wittgenstein. Irei considerar que a origem da abordagem do conceito de “regra” encontra-se no rápido desenvolvimento do pensamento do autor entre 1929 – 1934. Nesta época, seu problema imediato era remediar o erro das considerações Tractarianas acerca da necessidade lógica apresentado por Ramsey. Para corrigir este erro, Wittgenstein introduz duas inovações com as quais ele acredita poder resolver o problema e, ainda, preservar a rígida demarcação tractariana entre verdade lógica e verdade empírica. Primeiro, ele irá substituir o modelo único de cálculo subjacente à linguagem natural que imperava no Tractatus por uma concepção que ele descrever como sistema de proposições (Satzsysteme), no qual a linguagem seria vista como um complexo emaranhado de sistemas proposicionais autônomos, cada qual constituindo um espaço lógico distinto. Desta maneira, ele preserva a tese de que toda necessidade é uma necessidade lógica, contudo, será preciso abandonar a concepção referencial de significado e a independência lógica das proposições elementares. Assim, nossa proposta nesta dissertação é estabelecer todos os aspectos da filosofia do Tractatus que antecedem e fundamentam a proposta da linguagem enquanto correspondência, enfatizando que o abandono desta última resulta em mudanças como: 1) uma palavra só tem significado no contexto do seu sistema proposicional; 2) o significado de uma palavra qualquer é a totalidade das regras que governam seu uso neste sistema; 3) o sentido de uma proposição é o método de sua verificação. Por fim, para que possamos compreender o contexto dessas mudanças, parece ser o caso de, por um lado, estabelecer a essência e a forma geral da proposição no Tractatus e, com isso, elucidar alguns aspectos do que, segundo o autor, são traços essências da linguagem e do mundo; por outro, estabelecer os limites do âmbito da análise, para que possamos compreender a sua mutação esboçada em conformidade com o novo critério do sentido, as regras, pois o que conta como objeto de análise será menos determinado por uma forma geral e mais exibido por um “cálculo” possível.

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Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-03-27T14:08:53Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AvaliacaoInVitro.pdf: 1012726 bytes, checksum: c0d0718db22f5099036b8f129b782f93 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-04-06T14:17:32Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AvaliacaoInVitro.pdf: 1012726 bytes, checksum: c0d0718db22f5099036b8f129b782f93 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-06T14:17:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AvaliacaoInVitro.pdf: 1012726 bytes, checksum: c0d0718db22f5099036b8f129b782f93 (MD5) Previous issue date: 2016-10-27 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A dipirona sódica ou metamizol sodium, pertencente à família das pirazolonas, é um dos compostos anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs) mais utilizados, inclusive no Brasil, principalmente devido a sua comercialização ser de baixo custo financeiro. Porém, em determinados países a venda deste medicamento é proibida devido a relatos de casos graves de agranulocitose em decorrência do seu uso. Apesar de sua ampla utilização, estudos demonstrando efeitos genotóxicos e citotóxicos da dipirona em células de mamíferos são escassos. Portanto, o presente trabalho pretende avaliar a viabilidade celular, os efeitos genotóxicos, os efeitos citotóxicos (indução de apoptose e necrose) e a produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) em linhagem VERO (linhagem renal de macaco verde africano) expostas a dipirona. Nossos resultados demonstraram uma redução significativa na viabilidade das células expostas a dipirona pelo ensaio MTT. Um aumento significativo no índice de dano avaliado pelo teste do cometa também foi observado, indicando o potencial genotóxico da droga. No que diz respeito aos efeitos citotóxicos da dipirona, observou-se um aumento significativo no número de células apoptóticas utilizando-se corantes fluorescentes tanto em 24 quanto em 48 h de tratamento com a droga. Nossos resultados também mostraram que não houve indução significativa na geração de ROS pela droga por meio da técnica do DCFH-DA. Desta forma, demonstrou-se em nosso trabalho, que a dipirona é uma droga genotóxica e citotóxica em linhagem VERO, nas condições avaliadas. / The dipyrone or metamizole belongs to the family of the pyrazolones. It is one of the nonsteroidal anti-inflammatory compounds (NSAIs) most used, Brazil included, mainly due to its low financial cost. However, in some countries the sale of dipyrone is prohibited due to reported severe cases of agranulocytosis as a result of its use. Despite its high usage, studies showing genotoxic and cytotoxic effects of dipyrone in mammalian cells are scarce. Therefore, in the present study we will assess cell viability, genotoxic effects, cytotoxic effects (by apoptosis and necrosis induction) and the induction of reactive oxygen species (ROS) in VERO cells (a cell line obtained from red kidney of green monkey) exposed to dipyrone. Our results showed a significant reduction in viability of cells exposed to dipyrone by the MTT assay. A significant increase in damage index evaluated by comet assay was also observed, which indicate its genotoxic effects. In which concerns the cytotoxic effects of dipyrone, we observed a significant increase in the number of apoptotic cells using fluorescent dyes after 24h and 48 h of treatment with the drug. Ours results also showed that there was no significant difference in the induction of ROS generation after treatment of the cells with the drug assessed by the DCFH-DA technique. Thus, our work showed that dipyrone is both a genotoxic and cytotoxic drug to VERO cells in the assessed conditions.

À la fin du Moyen Âge, la noblesse est en pleine restructuration en Castille. La chevalerie, qui lui était jusqu'alors intimement liée, commence à s'ouvrir à de nouveaux venus dans le cadre des guerres de reconquête tandis que les rois Trastamare s'entourent d'une nouvelle catégorie sociale, les letrados, qu'ils ennoblissent fréquemment afin d'asseoir durablement leur pouvoir. La vieille noblesse de lignage se retrouve alors dépossédée de ses prérogatives auprès de la couronne.Dans ce contexte régi par les lois alphonsines des Partidas et par les théories du droit du juriste italien Bartole, le XVe siècle castillan est le théâtre de nombreuses guerres civiles, qui voient s'affronter les partisans des souverains et de leurs favoris de noblesse récente, et les défenseurs de la vieille noblesse. Le conflit entre la noblesse " qui se mérite " et la noblesse " qui s'hérite " n'a pas lieu que sur les champs de bataille. À chaque recrudescence du conflit, de nombreux nobles prennent la plume afin de défendre leur position en proposant un discours théorique sur la noblesse. Le camp des partisans de la noblesse de mérite défend ainsi une représentation de la noblesse fondée sur le mérite propre et les services rendus au roi. De leur côté, les défenseurs de la noblesse de lignage proposent une vision de plus en plus exclusive de la noblesse au cours du siècle. Leur dernier représentant, Ferrán Mexía, met ainsi en place dans son Nobiliario Vero publié en 1492, une nouvelle théorie basée non plus sur le lignage mais sur le sang, à l'origine du verrouillage de la noblesse au XVIe siècle.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-04-25T23:51:26Z No. of bitstreams: 1 RenatoFerreiraDeAlmeidaJunior_DISSERT.pdf: 1495100 bytes, checksum: f007a8b773603ddf1cf491e66172e839 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-04-28T20:17:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 RenatoFerreiraDeAlmeidaJunior_DISSERT.pdf: 1495100 bytes, checksum: f007a8b773603ddf1cf491e66172e839 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-28T20:17:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RenatoFerreiraDeAlmeidaJunior_DISSERT.pdf: 1495100 bytes, checksum: f007a8b773603ddf1cf491e66172e839 (MD5) Previous issue date: 2015-03-16 / Os v?rus dengue pertence ? fam?lia Flaviviridae e ao g?nero Flavivirus, sendo composto por 4 sorotipos antigenicamente distintos, s?o considerados os arbov?rus mais importantes no mundo por causar altas taxas de morbidade e mortalidade em regi?es tropicais e subtropicais do planeta, colocando em risco at? 3,6 bilh?es de pessoas em mais de 100 pa?ses. Por ser uma doen?a com amplo espectro cl?nico e por n?o possuir vacina ou tratamento eficaz, o estudo de poss?veis antivirais que visam diminuir a viremia do paciente ? de suma import?ncia, j? que este ? um dos fatores que pode levar a febre hemorr?gica da dengue e a s?ndrome do choque da dengue que s?o as formas grave da doen?a. No presente estudo foi avaliado o potencial antiviral do extrato da folhada planta Caesalpinia echinata contra o v?rus dengue-2 (DENV-2) em cultura de c?lulas C6/36 e Vero e a a??o antiviral da Rifampicina em c?lulas Vero. A escolha da Caesalpinia echinata se deve ao fato de que j? foi observada sua a??o antiinflamat?ria e antimal?rica, al?m de n?o ter sido encontrado nenhum trabalho que tenha avaliado seu potencial de a??o frente a v?rus. A Rifampicina foi escolhida por demonstrado a??o antiviral, principalmente contra os poxvirus, por?m poucos s?os os relatos da utiliza??o deste f?rmaco contra v?rus de RNA. O resultado foi obtido atrav?s da quantifica??o da carga viral pela t?cnica da qRT-PCR em Tempo Real. As c?lulas infectadas por DENV-2 foram submetidas ao tratamento pelo per?odo de 7 dias em diferentes concentra??es do extrato da planta Caesalpinia echinataque variou entre 0,68 a 0,0068mg/mL. N?o foi poss?vel observar neste estudo, evid?ncias de inibi??o significativa da replica??o do v?rus DENV-2 em ambas as culturas celulares. ARifampicina foi utilizada em diferentes condi??es de tratamento, no qual foi avaliado ao longo de 72 horas a carga viral produzida nas c?lulas Vero.Nas condi??es de tratamento p?s-infec??o e no ensaio virucida o f?rmaco apresentou atividade antiviral, reduzindo a taxa de replica??o em 100 vezes em rela??o ao controle. De acordo com os nossos resultados conclui-se que a Rifampicina mostrou-se eficaz no combate a infec??o do DENV-2 em cultura de c?lulas Vero. / The dengue virus belongs to the Flaviviridae family and the Flavivirus genus, consisting of four serotypes antigenically distinct, are considered the most important arbovirus in the world to cause high rates of morbidity and mortality in tropical and subtropical regions of the world, threatening to 3, 6 billion people in over 100 countries. Because it is a disease with a wide clinical spectrum and has no vaccine or effective treatment, the study of possible antiviral drugs aimed at reducing viremia of patients is of paramount importance, since this is one of the factors which can lead to dengue hemorrhagic fever and dengue shock syndrome that are severe forms of the disease. In the present study we evaluated the antiviral potential of the leaf extract of the plant Caesalpinia echinata against dengue-2 virus (DENV-2) in cultured C6/36 and Vero cells and the antiviral action of Rifampicin on Vero cells. The choice of Caesalpinia echinata is due to the fact that has been observed its action anti-inflammatory and antimalarial , and not have been found no study evaluated its antiviral effect. Rifampin was chosen was chosen for demonstrated antiviral action, especially against poxviruses, but few sane reports usage of this drug against RNA viruses. The result was obtained by quantifying the viral load bythe technique of Real-time qRT-PCR. Cells infected with DENV-2 were subjected to treatment for 7 days in different concentrations of plant extract Caesalpinia echinata (0.68 - 0,0068mg / ml). As a result, we could not observe a inhibition significant of virus replication in both cell cultures. The Rifampicin was used for different treatment condition,which were evaluated over 72 hours the amount of viral load produced in Vero cells, In the conditions treatment and the test virucidal theantiviral activity, which is capable of reducing the rate of 100X replication as compared to control. According to our results we can conclude that Rifampicin was effective in action against to infection DENV-2 in Vero cell culture.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-04-25T23:51:26Z No. of bitstreams: 1 TabataLoiseCunhaLima_DISSERT.pdf: 1403767 bytes, checksum: 7424c70f286f04743b45ac7531e6829b (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-04-28T20:23:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TabataLoiseCunhaLima_DISSERT.pdf: 1403767 bytes, checksum: 7424c70f286f04743b45ac7531e6829b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-28T20:23:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TabataLoiseCunhaLima_DISSERT.pdf: 1403767 bytes, checksum: 7424c70f286f04743b45ac7531e6829b (MD5) Previous issue date: 2015-03-13 / A dengue ? uma doen?a de notifica??o compuls?ria e cerca de 50 a 100 milh?es de casos s?o registrados anualmente. Possui amplo espectro cl?nico e ? transmitida ao homem atrav?s da picada dos mosquitos do g?nero Aedes, tendo como principal vetor a esp?cie Aedes aegypti. O agente etiol?gico da doen?a ? o v?rus dengue (DENV) pertencente ao g?nero Flavivirus, fam?lia Flaviviridae e s?o conhecidos quatro sorotipos antigenicamente distintos (DENV-1, DENV-2, DENV-3 e DENV-4). Atualmente o tratamento da dengue ? apenas de suporte, feito atrav?s de intensa hidrata??o. Ainda n?o existe uma vacina comprovadamente eficaz ou tratamento espec?fico, o estudo de poss?veis antivirais que possam diminuir a viremia no paciente ? de alt?ssima relev?ncia, uma vez que a carga viral ? um dos fatores associado ao aparecimento das formas graves da doen?a (febre hemorr?gica da dengue e s?ndrome do choque da dengue). No presente estudo n?s avaliamos o potencial antiviral de extratos brutos obtidos a partir das folhas das plantas do Nordeste brasileiro Annona muricata (graviola) e Spondias mombin (caj?) contra o DENV-2 em cultura de c?lulas C6/36 e Vero. A avalia??o da a??o dos extratos brutos foi feita por meio da quantifica??o da carga viral atrav?s da PCR em Tempo Real (qRT-PCR) e pela t?cnica de contagem de unidades formadoras de placa (PFU). As concentra??es dos extratos de ambas as plantas utilizadas foram: 0,01, 0,1 e 1mg/mL. As culturas de c?lulas infectadas foram submetidas ao tratamento com os extratos durante os per?odos de 24-168h horas (7 dias). C?lulas Vero tratadas com o extrato da S. mombin n?o apresentaram redu??o na carga viral. Em contrapartida, quando estas c?lulas foram tratadas com o extrato da A. muricata, uma hora ap?s infec??o, observou-se uma redu??o significativa na carga viral nas primeiras horas (24h), quando comparadas com as c?lulas n?o tratadas utilizadas como controle positivo. Ao serem tratadas em intervalos de 24 horas apresentaram uma redu??o na carga viral nos dias subsequentes (at? o s?timo dia). N?o foi observada redu??o na carga viral em c?lulas C6/36 tratadas com ambos os extratos. De acordo com os nossos resultados, o extrato da planta A. muricata possui potencial antiviral promissor contra a infec??o pelo DENV-2 em cultura de c?lulas Vero. / Dengue is a reportable disease and about 50 to 100 million cases are reported annually. It has a wide clinical spectrum and is transmitted to humans through the bite of Aedes mosquitos, the main vector the Aedes aegypti species. The causative agent of disease is dengue virus (DENV) belonging to the genus Flavivirus, family Flaviviridae and are known four antigenically distinct serotypes (DENV-1, DENV-2, DENV-3 and DENV-4). Currently the treatment of dengue is supportive, made by intense hydration. Although there is no proven effective vaccine or specific treatment, the study of potential antiviral drugs that can reduce viremia in patients is very high importance, since the viral load is one of the factors associated with the development of severe forms of the disease (hemorrhagic fever dengue and dengue shock syndrome). In the present study we evaluated the antiviral potential of crude extracts obtained from the leaves of plants in Northeastern Brazil Annona muricata (soursop) and Spondias mombin (caja) against DENV-2 in cultured C6/36 and Vero. The evaluation of the activity of the crude extracts was performed by the quantification of viral load by RT-PCR (qRT-PCR) and counting technique of plaque forming units (PFU). The concentrations of extracts of both plants used were 0.01, 0.1 and 1 mg/mL. The infected cell cultures were subjected to treatment with the extracts during periods of 24-168h hours (7 days). Vero cells treated with the S. mombin extract showed no reduction in viral load. In contrast, when these cells were treated with the extract of A. muricata, one hour after infection, significant reductions in viral load in the first hour was observed (24 h) when compared to untreated cells used as positive control. When they are treated at 24 hour intervals showed a reduction in viral load in subsequent days (until day). There was no reduction in viral load in C6/36 cells treated with both extracts. According to our results, the plant extract has antiviral A. muricata promising potential against infection by DENV-2 in Vero cell culture.