Made available in DSpace on 2015-12-10T14:23:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:44Z : No. of bitstreams: 1 000851519.pdf: 1178190 bytes, checksum: 6da71571493874117e3f938393027381 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Escherichia coli diarreiogênica (ECD) representa uma das principais causas da diarreia infantil. Com base em seus mecanismos de virulência, podemos classificá-la em seis patotipos distintos: E. coli enteropatogênica (EPEC), E. coli enterotoxigênica (ETEC), E. coli enteroinvasora (EIEC), E. coli produtora da toxina Shiga (STEC), E. coli enteroagregativa (EAEC) e E. coli que adere difusamente (DAEC). O objetivo deste estudo foi investigar a prevalência de ECD, entre crianças diarreicas (Pacientes) e crianças saudáveis (Controles), menores de cinco anos de idade, na cidade de Botucatu/SP. Foram analisadas amostras de fezes de 200 crianças com diarreia, atendidas no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, entre os meses de Março de 2013 a Setembro de 2014, e 200 crianças saudáveis. Isolados de E. coli foram classificados nos distintos patotipos de ECD pela pesquisa de marcadores de virulência específicos através de PCR e, posteriormente, foram caracterizados quanto ao padrão de aderência em células HeLa e resistência à drogas antimicrobianas. Os isolados portadores do locus of enterocyte effacement (eae+) foram submetidos ao teste de FAS (Fluorescence Actin Staining), para avaliar a capacidade desses isolados em induzir a lesão attaching and effacing (AE). Ademais, os isolados de EPEC e STEC tiveram seu antígeno somático (O), e flagelar (H) determinados. ECD foi isolada de 18,0% das crianças diarreicas, e em 19,0% das crianças saudáveis, sendo que nenhum patotipo de ECD pode ser individualmente associado com a doença diarreica (P0,05). O patotipo EAEC foi o mais frequente, tendo sido detectado em igual proporção entre crianças diarreicas e saudáveis (10,0%). Dentre os isolados de EPEC, 16 provenientes das fezes de crianças com diarreia e 18 provenientes de crianças saudáveis, somente um foi capaz de aderir às células HeLa no padrão localizado (AL), sendo esse o único isolado classificado... / Diarrheagenic Escherichia coli (DEC) comprises a major cause of child hood diarrhea. Based on their virulence mechanisms, DEC can be classified into six distinct pathotypes: enteropathogenic E. coli (EPEC), enterotoxigenic E. coli (ETEC), enteroinvasive E. coli (EIEC), enteroaggregative E. coli (EAEC), enterohemorrhagic E. coli (EHEC) and diffusely adherent E. coli (DAEC). This study aims to investigate the prevalence of DEC among diarrheal children (patients) and healthy children (controls), up to five years of age in Botucatu/SP. We analyzed stool samples from 200 children with diarrhea attended at Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, between March/2013 and September/2014, and 200 healthy children. E. coli isolates were classified in different pathotypes by detection of virulence markers (by PCR) and then, characterized regarding its adherence pattern to HeLa cells and antimicrobial resistance drugs. Isolates carrying the locus of enterocyte effacement (eae+) were submitted to FAS test (Fluorescence Actin Staining), to evaluate the ability of these isolates to induce attaching and effacing lesion (AE). In addition, EPEC and STEC isolates, had their somatic (O) and flagellar (H) antigens determined. DEC was isolated from 18.0% of diarrheal children, and 19.0% of healthy children, and none of the DEC pathotypes could be individually associated with the diarrheal disease (P>0.05). EAEC was the most frequent DEC pathotype, being detected in equal proportion between patients and controls (10.0%). Among the EPEC isolates, 16 from patients and 18 from controls, only one was able to produce the localized adherence (LA) pattern to HeLa cells, being this isolate the only typical EPEC (tEPEC) identified in this study. The remains EPEC isolates were classified as aEPEC (atypical EPEC), and detected in 8.0 and 8.5% of the patients and controls, respectively. STEC and ETEC were detected in only one child from each studied ... / FAPESP: 2013/05170-1

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:24:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-11-28. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:30:40Z : No. of bitstreams: 1 000851921.pdf: 11886045 bytes, checksum: 1cf15c01de888d44bc38aeeab19c7d88 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O aumento de micoses invasivas e o desenvolvimento de mecanismos de resistência de algumas espécies de fungos, frente aos fármacos utilizados na terapia, têm sido preocupante. O tratamento antifúngico, geralmente é agressivo e o surgimento da resistência antifúngica acrescenta dificuldades adicionais no tratamento dessas infecções. Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii são os principais agentes etiológicos da criptococose, e afetam principalmente pacientes imunodeprimidos. Nesse trabalho foi realizada a caracterização morfológica e da virulência de três isolados clínicos de C. neoformans e dois isolados ambientais de C. gattii em Galleria mellonella, além da análise do nível de expressão dos genes MDR1 e AFR1 envolvidos no funcionamento de bomba de efluxo, através da quantificação relativa por PCR (polimerase chain reaction) em tempo real. Uma vez esses genes quantificados, esses isolados foram usados na prospecção de moléculas sintéticas para verificação da atividade inibitória dos genes selecionados, após o contato com as mesmas. Os isolados foram classificados como sensível (26S), sensibilidade intermediária (27I) e resistente (30R) da espécie neoformans e da espécie C. gattii, um foi resistente (118R) e outro sensível (CL), in vitro, a fluconazol. As moléculas selecionadas para os testes foram o ácido gálico e seus derivados sintéticos, e os melhores resultados observados foram obtidos a partir dos galatos de alquila G11, G12, G14, G15, G16 e G17, apresentando ótima atividade antifúngica contra os isolados testados, em especial os galatos G14, G16 e G17, obtendo ótima atividade antifúngica. O galato de n-dodecila (G16), foi selecionado para os demais testes apresentando atividade aditiva no teste de sinergismo, quando utilizado em associação com fluconazol, reduzindo os valores de CIM para o mesmo, o que mostra a possível... / The increase of invasive mycoses and the development of antifungal resistance by some fungi species have been worrying. The antifungal treatment is usually aggressive and inefficient, and the emergence of antifungal resistance increases the difficulties in treating these fungi infections.Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii are the main etiologic agents of cryptococcosis andespecially affect immunocompromised patients. In this work the Galleria mellonella, was used to perform the morphologic characterization as well as determine the virulence of three sequential clinical isolates of C. neoformansand twoisolates environmental of C. gattii. In addition, was held the analysis of genes expressions (MDR1, ERG11 and AFR1), that are involved in efflux pumps and ergosterol synthesis, by real time PCR (polimerase chain reaction) assay. After these characterizations the isolates were used in the prospecting of synthetic molecules to verify the inhibitory activity of selected genes. After incubation in vitro with fluconazole the C.neoformans isolates were classified as sensitive (26S), intermediate sensitivity (27I) and resistant (30R), and the C. gattiiisolates were resistant (118R) and the other sensitive (LC). The galic acid molecules and their synthetic derivatives were tests against C.neoformans and C. gattii isolates.The best results were obtained from alkyl gallates G11, G12, G14, G15, G16 and G17 which shows a great antifungal activity, especially G14, G16 e G17. The gallate n-dodecyl (G16), was select to others tests once presented additive activity in synergism test with fluconazole, decreasing the MIC values. The gene expression assay shows that both isolates expressed MDR1 and AFR1 (encoding efflux pumps), and the G16 was capable to inhibit these genes which makes this molecule promising for inhibiting efflux. With virulence assays using the G. mellonella was possible ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-27Bitstream added on 2014-06-13T18:26:13Z : No. of bitstreams: 1 alencar_jrcc_me_jabo.pdf: 452079 bytes, checksum: 64ef6d14a56bc4bdcb0ceb200761c268 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O isolamento geográfico de populações de uma mesma espécie de inseto pode resultar em alterações fisiológicas, originando populações com suscetibilidade diferente às diversas táticas de controle. Plutella xylostella, a traça-das-crucíferas é uma praga cosmopolita específica das Brassicaceaes, apresentando problemas de resistência à inseticidas químicos e biológicos. O objetivo deste trabalho foi determinar a influência da variabilidade populacional da traça-das-crucíferas na eficiência das táticas de controle com micro-organismos entomopatogênicos. Foram utilizados os métodos de sequenciamento do gene COI e ISSR-PCR para aferir a variabilidade populacional entre quatro populações da praga, e estudou-se a suscetibilidade delas às táticas de controle com o fungo entomopatogênico Beauveria bassiana (20 isolados), nematoides entomopatogênicos (quatro espécies) e bactérias simbiontes de nematoides entomopatogênicos (dez isolados), avaliando-se o consumo foliar, a multiplicação do entomopatógeno no hospedeiro e estudando os aspectos biológicos em busca de efeitos subletais. . Foram selecionados seis isolados de B. bassiana e as quatro espécies de nematoides, pois foram as mais virulentas à praga. As populações são distintas devido sua variabilidade e isso resulta em diferenças no desenvolvimento de insetos que sobrevivem a aplicação dos entomopatógenos, inclusive na virulência de Steinernema brazilense sobre a população de Jaboticabal. Foi constatada também a redução de consumo foliar nos tratamentos com os entomopatógenos / The geographical isolation of same species populations can result in physiological changes, resulting in populations with different susceptibility to various control tactics. Plutella xylostella, is a specific pest of Brassicaceaes widely spread around the globe, presenting problems with chemical and biological insecticides resistance. The aim of this study was to determine the influence of Diamondback moth populational variability in the efficiency of control tactics with entomopathogenic microorganisms. The methods used were sequencing of the COI gene and ISSR-PCR to measure the population variability among four populations of the pest, and the study of their susceptibility to tactics control with the entomopathogenic fungus B. bassiana (twenty strains), entomopathogenic nematodes (four species) and symbiotic bacteria of entomopathogenic nematodes (ten strains), evaluating leaf consumption, the multiplication of the pathogen in the host and studying the biological aspects in search of sub lethal effects. Six isolates of B. bassiana and four species of nematodes were selected, as were the more virulent to the pest. The populations are distinct because due the genetic, variability and and that results in differences in the development of insects that survive the entomopathogens application, including the virulence of Steinernema brazilense on the population of Jaboticabal. It was also found to reduce leaf consumption in the emtomopathogens treatments

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-19Bitstream added on 2014-06-13T19:43:15Z : No. of bitstreams: 1 tansini_a_dr_arafcf.pdf: 666076 bytes, checksum: 4a336ba4a2f0d99a602646cc539929be (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A infecção por Y. pseudotuberculosis é uma causa de doenças intestinais e extraintestinais. A resolução da infecção está relacionada à ativação de células Th1, entretanto, pouco se conhece sobre a influência de outras subpopulações de linfócitos T, como Th17 e Treg, na regulação dessa infecção. Células dendríticas são capazes de orientar a resposta imune adaptativa através da produção de citocinas e apresentação de antígenos às células T, tornando essas células essenciais na ativação e diferenciação de linfócitos T. Desse modo, o presente trabalho avaliou o papel de distintas subpopulações de linfócitos T e a influência de células dendríticas no desenvolvimento da resposta imune contra a infecção por Y. pseudotuberculosis. Para tanto, foram avaliadas as subpopulações de linfócitos T CD4+, CD8+ e Foxp3+, presentes durante a infecção por Y. pseudotuberculosis e amostras bacterianas mutantes para fatores de virulência Yops, bem como a expressão de citocinas intracelulares (IL-2, IL-4, IL-10, IL-17, IFN-γ, TNF-α e TGF-β) por estas células. O papel de linfócitos Treg e Th17 no controle da bactéria foi analisado por meio de ensaio de depleção de células CD25+ e neutralização de IL-17. Além disso, a influência de células dendríticas na modulação da resposta imune contra Y. pseudotuberculosis foi estudada através da determinação da produção de citocinas (IL-6, IL-12, IL-10, IL-23, TNF-α e TGF-β) e co-cultivo com linfócitos T obtidos de animais imunizados com antígenos de Y. pseudotuberculosis. Os resultados mostraram redução na produção de citocinas pró-inflamatórias por células dendríticas infectadas com a amostra bacteriana portadora do plasmídeo de virulência, em ambas as linhagens de camundongos estudadas... / Y. pseudotuberculosis infection is a cause of intestinal and extraintestinal diseases. Infection resolution is related to the activation of Th1 cells, however, little is known about the influence of other T cells subsets, like Th17 and Treg, in the control of this infection. Dendritic cells are capable of directing the adaptive immune response by producing cytokines and presenting antigens to T cells, making them essential to T lymphocytes activation and differentiation. Thus, this study evaluated the role of different T lymphocytes subsets and the influence of dendritic cells on the development of the immune response against Y. pseudotuberculosis infection. Here, we evaluated the T cells subsets CD4+, CD8+ and Foxp3+, present during Y. pseudotuberculosis infection and mutant samples bacterial virulence factors, and also the intracellular expression of cytokines (IL-2, IL-4, IL-10, IL-17, IFN-γ, TNF-α and TGF-β) by these cells. The role of Th17 and Treg cells in controlling the bacteria was analyzed by tests of depleted CD25+ cells and IL-17 neutralization. Furthermore, the influence of dendritic cells in modulating the immune response against Y. pseudotuberculosis was studied by determining the cytokine production (IL-6, IL-12, IL-10, IL-23, TNF-α and TGF-β) and co-culture with lymphocytes from animals immunized with Y. pseudotuberculosis antigens. The results showed a reduction in proinflammatory cytokines production by dendritic cells infected with bacteria carrying the bacterial virulence plasmid, in both mice strains studied... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-26Bitstream added on 2015-04-09T12:47:49Z : No. of bitstreams: 1 000817299.pdf: 639613 bytes, checksum: 3a27811ced1e1d8bc5861bd392515794 (MD5) / Embora Escherichia coli não seja um microrganismo natural do trato intestinal de peixes, sabe-se que a microbiota desses animais está diretamente relacionada à qualidade microbiológica da água em que vivem. Para avaliar a frequência de Escherichia coli shigatoxigênica (STEC) e enteropatogênica (EPEC), foram coletadas um total de 472 amostras de fezes e musculatura de peixes da espécie Oreochromis niloticus (tilápia), bem como da água em que viviam. Nos animais provenientes de pisciculturas, somente uma estirpe STEC (0,2%) foi isolada, e esta apresentou resistência a diversos antimicrobianos das classes das quinolonas, tetraciclinas, aminoglicosídeos e anfenicóis, enquanto em peixes de vida livre, seis estirpes (6%) foram isoladas, sendo cinco STEC e uma EPECa. Todas as STEC foram classificadas como patogênicas pelo grupamento filogenético e a EPECa, comensal. Além disso, foram detectados os genes de virulência astA, ehxA, saa, efa1, paa e lpfAO113 e os sorogrupos O55, O39, O116, H14, H18 e H36. Em relação às variantes da toxina Stx2, foi observada a rara combinação dos subtipos stx2a, stx2c e stx2d em um mesmo isolado. De acordo com a análise de similaridade genética, os isolados são bastante heterogêneos e apresentaram origem clonal diversificada. Os resultados desse estudo evidenciaram que os peixes têm o potencial de transmissão de E. coli diarreiogênicas para o ser humano, e também o possível uso indiscriminado de antimicrobianos na criação intensiva desses animais / Although Escherichia coli is not an organism typically found in the fish gut, the microbiota of these animals is directly related to the quality of water in which they live. To evaluate the frequency of shigatoxigenic (STEC) and enteropathogenic (EPEC) Escherichia coli, a total of 472 fish fecal and muscle samples were collected (Oreochromis niloticus, called tilapia), as well as the water in which the fish lived. In animals from fish farms, only one STEC strain (0.2%) was isolated, and showed resistant to several antimicrobial of the quinolone, tetracycline, aminoglycoside and amphenicol classes. In wild fish, six isolates (6%) were obtained, five STEC and one aEPEC. All STEC were classified as pathogenic by phylogenetic grouping, and aEPEC was commensal. In addition, astA, ehxA, saa, efa1, paa, lpfAO113 virulence genes, and O55, O39, O116, H14, H18 and H36 serogroups were detected. Regarding Stx2 toxin variants, an unusual combination of stx2a, stx2c and stx2d subtypes was observed. According to the analysis of genetic similarity, the isolates are heterogeneous and showed a diversified clonal origin. The results of this study demonstrated that fish have the potential to transmit diarrheagenic E. coli to humans, as well as the possible indiscriminate use of antimicrobials in the intensive farming of these animals

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:33:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-01-29. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:48:18Z : No. of bitstreams: 1 000831958_20160129.pdf: 141405 bytes, checksum: a56af035cf777e68b39f9624adee2a7e (MD5) Bitstreams deleted on 2016-01-29T12:35:59Z: 000831958_20160129.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-29T12:36:36Z : No. of bitstreams: 1 000831958.pdf: 462812 bytes, checksum: 2070c5ce1422e2b78e58a79e3c1e4034 (MD5) / Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) é uma categoria de E. coli de interesse em saúde pública, pois é responsável por causar diarréia, principalmente em crianças de países em desenvolvimento. Um total de 68 estirpes EPEC isoladas de humanos e animais (búfalos, ovinos e suínos) foram analisadas para marcadores de virulência e submetidos à sorotipagem, subtipagem do gene eae e similaridade clonal por eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE). Os resultados da PCR demonstraram que seis isolados de humanos possuíam o gene bfp (EPEC típica), enquanto que 62 estirpes possuíam apenas o gene eae (EPEC atípica). Essas estirpes de EPEC pertenciam a 39 sorotipos (O: H) incluindo sorotipos clássicos de EPEC que estão relacionados a doenças em humanos, como O26:H11, O128:H2 e outros sorotipos relacionados a pessoas com diarreia, como O8:H16 e O76:H7. Seis tipos de intimina foram detectados entre as 68 estirpes de EPEC. São elas a 1, 2, 1, , e . A análise do PFGE, após a digestão Xbal, foi realizada nas 68 estirpes de EPEC. Os isolados se mostraram heterogêneos no PFGE e apresentaram 55 perfis diferentes. Quanto a filogenia, a maioria das estirpes de EPEC foram classificadas dentro do grupo B1. Além disso, algumas estirpes foram classificadas no grupo D, que são constituídos por estirpes de E. coli que podem causar infecções extra-intestinais. A presença de tipos de EPEC potencialmente patogênicas para humanos e EPEC isoladas de animais com características genéticas e fenotípicas em comum indica que a transmissão de agentes zoonoticos pode ocorrer. Portanto, o papel destes animais como reservatórios de EPEC deve ser considerado nas investigações de surtos de diarreia / Escherichia coli (EPEC) is a category of E. coli in interest in public health, as it is responsible for causing diarrhea, especially in children in developing countries. A total of 68 strains of EPEC isolated from humans and animals (buffalo, sheep and pigs) were analyzed for virulence markers, serotyping, subtyping of the eae gene and similarity clonal by electrophoresis in pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). The PCR results showed that six human isolates had the bfp gene (typical EPEC), and 62 strains only had the eae gene (atypical EPEC). These strains belonged to 39 EPEC O: H serotypes including classical EPEC that are related to diseases in humans, such as O26: H11, O128: H2 and other serotypes that were related to people with diarrhea, as O8: H16 and O76:H7. Six types of intimin were detected among the 68 strains of EPEC, and 1, 2, 1, , and . The PFGE analysis, after XbaI digestion was performed on 68 strains of EPEC. The isolates were shown in heterogeneous PFGE and had 55 different profiles. Regarding the Phylogeny most strains of EPEC were classified into the group B1. Furthermore, some strains have been classified in group D, which consist of the E. coli strains that cause extra-intestinal infections. The presence of potentially pathogenic for humans types of EPEC and EPEC strains isolated from animals that may indicate disease transmission between animals and humans can occur and have an impact on public health. Furthermore, the role of these animals as EPEC carriers should be considered in outbreak investigations diarrhea. Keywords: EPEC, virulence genes, PFGE, zoonosis

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-19Bitstream added on 2014-08-13T17:59:55Z : No. of bitstreams: 1 000768735.pdf: 1378869 bytes, checksum: 208d6f9ea0a8b866c4aaf52ade9bcdc9 (MD5) / Staphylococcus aureus se destaca por sua patogenicidade e alta frequência, permitindo que este agente seja capaz de produzir doenças tanto em indivíduos sadios quanto em imunocomprometidos por sua fácil disseminação. O objetivo deste trabalho foi caracterizar a distribuição de clones de S. aureus sensíveis e resistentes à meticilina (MSSA/MRSA) em 50 isolados provenientes de pacientes com infecções de pele da Seção de Dermatologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina (FMB) de Botucatu, 50 isolados de idosos de Instituições de Longa Permanência (ILP) de Bauru e 50 isolados provenientes de detentos do Centro de Ressocialização (CR) de Avaré. Os isolados de S. aureus foram submetidos à técnica de E-test para determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM). Para determinação do perfil de virulência e resistência à oxacilina nos 150 isolados de S. aureus foram realizadas reações em cadeia da polimerase (PCR) para a detecção dos genes mecA, cassete cromossômico estafilocócio mec (SCCmec), genes codificadores das enterotoxinas (sea, seb e sec-1), toxinas esfoliativas A e B (eta e etb), toxina 1 da síndrome do choque tóxico (tst), leucocidina de Panton-Valentine (lukS-PV e lukF-PV), hemolisinas alfa e delta (hla e hld) e biofilme (icaA e icaD). O perfil clonal dos isolados MSSA e MRSA foi caracterizado por Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE), e os clones de MRSA foram submetidos a tipagem molecular por Multilocus Sequence Typing (MLST) e spa typing. Os resultados revelaram maior prevalência de MRSA nas instituições de longa permanência, além de apresentarem CIM90 64μg/mL para oxacilina e CIM90 > 256 μg/mL para clindamicina. Das 150 amostras de S.aureus ... / Staphylococcus aureus is distinguished by its high pathogenicity and frequency, allowing that this agent is capable of producing diseases in both healthy individuals and immunocompromised due to its easy dissemination. The aim of this work was to characterize the distribution of clones of S. aureus sensitive and resistant (MSSA/MRSA) in 50 isolates from patients with skin infections of Section of Dermatology of the University Hospital of the Botucatu Medical School Hospital of the (FMB), 50 isolates of elderly residents of nursing homes of Bauru and 50 isolates from inmates of Detention Center of Avare. The isolates of S. aureus were subjected to the technique of E-test for determination of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). To determine the virulence profile and oxacillin resistance in 150 isolates of S. aureus was used Polymerase Chain Reaction (PCR) for the detection of mecA gene, staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec), genes encoding enterotoxins (sea, seb and sec-1), exfoliative toxins A and B (eta e etb), toxic shock syndrome toxin 1 (tst), Panton-Valentine leukocidin (lukS-PV and lukF-PV), alpha and delta hemolysin (hla and hld) and biofilm (icaA and icaD). The clonal profile of MRSA and MSSA isolates were characterized by Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE), and MRSA clones were subjected to molecular typing Multilocus Sequence Typing (MLST) and spa typing. The results revealed a higher prevalence of MRSA in institutional settings, besides having MIC90 64μg/mL for oxacillin and MIC90 > 256 mg/mL for clindamycin. Of the 150 samples of S. aureus studied, 20 (13.3%) were mecA carriers, being detected seven isolates harboring SCCmec type IV nine carrying the SCCmec type II, only one isolate carrying the SCCmec type I and 3 isolates were not typed by the protocol used. Among the virulence factors, enterotoxin A was the most prevalent in all sources. Is important to note, 10% of isolates from Center Resocialization ...

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-25Bitstream added on 2014-11-10T11:58:06Z : No. of bitstreams: 1 000788226.pdf: 1131808 bytes, checksum: 28d833162bb9319534cd3abb7cdc566f (MD5) / Staphylococcus aureus apresenta vários mecanismos de evasão contra o sistema imune humano, muitos deles carreados por elementos móveis permitindo a transferência horizontal de genes entre as cepas, como ocorre com o Cluster de Imuno Evasão (IEC), sendo um micro-organismo com grande capacidade de evasão e desenvolvimento de doenças, que podem variar de intoxicações alimentares até a morte por bacteremia em pessoas imuno-comprometidas, crianças e idosos. S.aureus é colonizador frequente da pele e membranas mucosas e pode facilmente se infiltrar na cadeia de alimentos, possuindo alta transmissibilidade entre pessoas, animais e alimentos, podendo ser um problema levando em conta sua capacidade de evasão, adaptação e evolução. Por esses motivos, o objetivo do trabalho foi caracterizar cepas de S. aureus, isoladas de mãos e nariz de manipuladores de alimentos, quanto à presença do IEC e à tipagem molecular por spa-typing. Foram utilizadas 35 cepas de S.aureus, nas quais foram encontrados os clusters tipo A, B, D e F, presentes em 10 isolados (28,5%). Foram encontrados 15 spa-types diferentes, sendo os mais prevalentes t127 e t002, além de um spa-type descrito pela primeira vez neste trabalho, registrado como t13335. As cepas de MSSA podem ser fontes de genes que contribuem para a virulência de S. aureus meticilina resistentes. Uma vez que a frequencia do IEC parece ser alta em S. aures isolados de seres humanos e baixa em cepas isoladas de animais, pode ser que tenha ocorrido contaminação dos manipuladores, através de alimentos de origem animal / Staphylococcus aureus has various evasion mechanisms againt human innate immunity, many of them are carried by mobile elements enabling horizontal transfer of genes between strains, as with Immune Evasion Cluster (IEC) having great capacity for evasion and disease development which may vary from food poisoning to death for bacteremia when related to immuno compromised people, children and elderly. S. aureus is a frequent colonizer of skin and mucous membranes and can easily enter in food chain having hight transmissibility between people, animals and food which may be a problem when we think of evasion, adaptation ability and evolution. For these reasons the aim of this work was characterize S.aureus strains, isolated from hands and nare of food handlers, as to presence of IEC and molecular typing using spa-typing technique. We used 35 S. aureus strains and found the cluster types A, B, D e F, present in 10 isolates (28,5%). We found 15 different spa-types, being the most prevalent t127 and t002, besides a new spa-type described for the first time in this work, registered as t13335. The MSSA strains can be source of genes that contribute to meticillin resistant S. aureus virulence. Since frequency of IEC seems to be high in S. aures from human being and low is animal strains, may have occurred contamination of food handlers by foods of animal origin

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-22Bitstream added on 2014-11-10T11:58:26Z : No. of bitstreams: 1 000747680_20150920.pdf: 1466507 bytes, checksum: cb29b6ba55c009106980d77e8d233fc2 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-09-21T13:18:53Z: 000747680_20150920.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-21T13:19:50Z : No. of bitstreams: 1 000747680.pdf: 2678639 bytes, checksum: e24657234d93469753d524eb03f006fd (MD5) / Estudos recentes apontam para elevação da incidência e da gravidade das infecções por Staphylococcus aureus. Esse fato é agravado pela ampla disseminação de isolados de Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (MRSA) nos hospitais, além de sua recente introdução na comunidade. A colonização nasal de indivíduos assintomáticos é o principal fator responsável pela persistência e disseminação de S. aureus nas populações humanas. Assim sendo, inquéritos de carreamento nasal são importantes para estimar a “carga” (burden) de S. aureus como um todo e de MRSA na comunidade. Além disso, a compreensão da relação bactéria-hospedeiro e dos fatores de virulência envolvidos se faz necessária para o combate às infecções que colocam em risco a vida da população em geral. O presente trabalho teve como objetivo investigar a distribuição de clones de Staphylococcus aureus e MRSA na população da área urbana de Botucatu, SP, identificando a prevalência dos determinantes de virulência junto aos fatores de risco associados em isolados obtidos da nasofaringe de indivíduos hígidos do município. Um total de 223 amostras de S. aureus isoladas de secreções nasais foi submetido a testes de susceptibilidade antimicrobiana à oxacilina e cefoxitina através da técnica de discodifusão. O método de E-test foi empregado para determinar a Concentração Inibitória Miníma (CIM) em amostras resistentes. Em seguida, foram realizadas reações de PCR para a detecção dos genes mecA, genes codificadores de fatores de virulência das enterotoxinas (sea, seb e sec) e toxina associada à síndrome do choque tóxico (tst); toxinas esfoliativas A e B (eta, etb), leucocidina de Panton-Valentine (lukS-PV e lukF-PV), hemolisinas alfa e delta (hla e hld); e biofilme (icaA e icaD). A tipagem molecular para a determinação dos clusters foi realizada pela técnica de PFGE. Para avaliar os fatores ... / Recent findings show an increase on the incidence and severity of Staphylococcus aureus infection. This fact is worsened by the wide dissemination of the methicillin-resistant S. aureus (MRSA) isolates in hospitals and its recent introduction in the community settings. The nasal colonization in asymptomatic individuals remains the main factor responsible for the persistence and dissemination of S. aureus in the human population. Thereby, nasal carriage surveys are an important tool in order to estimate the total S. aureus burden and the MRSA in the community. Besides, understanding the bacterial-host relationship and the virulence factors involved is necessary in order to manage the infections that jeopardize the population’s health. The present study aims at investigating the clonal distribution of S. aureus and MRSA strains in an urban population area in Botucatu, SP, identifying both the prevalence of the virulence determinants together to the associated risk factors in samples obtained from the nasopharynx of healthy individuals from Botucatu. A total of 223 S. aureus samples isolated from nasal secretions were submitted to the antimicrobial susceptibility tests through the disk-difusion method with oxacillin and cefoxitin disks. The E-test method with oxacillin was applied in order to obtain the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) among oxacillin disk resistant samples. Afterwards, PCR (Polimerase Chain Reaction) was carried out for the detection of the mecA gene and of the following virulence genes: enterotoxins (sea, seb and sec), toxic shock syndrome toxin (tst), exfoliative toxin A and B (eta, etb), Panton-Valentine Leukocidin (lukS-PV and lukF-PV), alphaand delta-hemolysins (hla and hld), and biofilms (icaA and icaD). The PFGE molecular typing was employed in order to determine the prevalent clusters. The univariate and multivariate linear regression was carried out so that the risk factors ...

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-05-25Bitstream added on 2014-12-02T11:21:18Z : No. of bitstreams: 1 000792203.pdf: 666866 bytes, checksum: 2777008a28025b2358c1aa9fc11307d9 (MD5) / Plutella xylostella (Linnaeus, 1758) (Lepidoptera: Plutellidae), a traça-das-crucíferas, é um dos principais insetos-praga de crucíferas (Brassicaceae) no Brasil e em todo o mundo. Embora possa ser controlada tanto com inseticidas sintéticos como biológicos, populações de P. xylostella podem ser selecionadas rapidamente para a resistência a vários inseticidas químicos ou biológicos. Além disso, diferentes populações de P. xylostella podem surgir devido ao isolamento geográfico, resultando em isolamento reprodutivo e em populações fisiologicamente distintas, com diferentes sensibilidades a várias táticas de controle. Tal variação requer sistemas de gestão adaptados às populações em particular. Os bioinseticidas mais comuns utilizados para controlar P. xylostella baseiam-se na bactéria entomopatogênica Bacillus thuringiensis (Bacillaceae) (Bt). Apesar de muitos estudos focarem a ação do Bt em diversas pragas agrícolas, como P. xylostella, por exemplo, muitas dúvidas ainda persistem particularmente quanto aos seus efeitos subletais, mecanismo de ação e toxicidade das proteínas Bt. Assim, o objetivo desta pesquisa foi analisar a virulência e os efeitos subletais de proteínas Cry, bem como investigar fatores que afetam a suscetibilidade de insetos ao Bt (níveis de proteína, bactérias do intestino médio e mutações no gene ABCC2) em cinco populações brasileiras e uma da Inglaterra de P. xylostella. Foram realizados bioensaios de suscetibilidade com 5 populações brasileiras (PC, PA, Px, SBT e Bt) e uma da Inglaterra (UK) de P.xylostella e as proteínas Cry1Ac, Cry2Aa e Cry1IE de B. thuringiensis, estimando-se a virulência e avaliando os efeitos subletais das toxinas. Como as toxinas Cry2Aa e Cry1IE não causaram mortalidade nas lagartas de todas as populações, os testes foram realizados apenas com Cry1AC. Também foram conduzidos experimentos enzimáticos e ... / Plutella xylostella (Linnaeus , 1758) (Lepidoptera: Plutellidae), diamonback moth, is a major insect pest of crucifers (Brassicaceae) in Brazil and worldwide. Although it can be controlled with synthetic insecticides such as biological products, populations of P. xylostella can be quickly selected for resistance to several chemical or biological insecticides. In addition, different populations of P. xylostella may arise due to geographic isolation, resulting in reproductive isolation and physiologically distinct populations with different sensitivities to various control tactics. This variation requires management systems tailored to particular populations. The most common insecticides used to control P. xylostella based on entomopathogenic bacterium Bacillus thuringiensis (Bacillaceae) (Bt). Although many studies focus on the action way of Bt to several agricultural pests such as P. xylostella, for example, many doubts still persist particularly regarding their sublethal effects, mechanism of action and toxicity of Bt proteins. The objective of this research was to analyze the virulence and sublethal effects of Cry proteins, as well investigate factors affecting the susceptibility of Diamondback to Bt (protein level, the midgut bacteria and mutations in the ABCC2 gene) in five Brazilian populations and one population from England. Susceptibility bioassays with 5 Brazilian populations (PC, PA, PX, SBT and Bt) and one from England (UK) of P. xylostella and Cry1Ac, Cry2Aa, and Cry1IE Bt toxins were performed by estimating its virulence and sublethal effects. How Cry2Aa Cry1IE toxins did not cause larvae mortality for all populations, tests were performed just with Cry1Ac. Enzymatic and molecular experiments with the larvae guts were also performed to investigate the factors that affecting the susceptibility of insects to toxins produced by Bt. In those bioassays were analyzed total protein, the ...