Made available in DSpace on 2016-09-27T13:40:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-09-11. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:15Z : No. of bitstreams: 1 000868600.pdf: 2036190 bytes, checksum: 3872e6084fbe526a55b084da83826c3a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Doença de Crohn (DC) é uma variante das doenças inflamatórias intestinais que não tem uma causa definida, porém há o envolvimento de fatores ambientais e genéticos, entre eles a microbiota. Portadores da DC apresentam desequilíbrio na composição de espécies da microbiota intestinal, incluindo o aumento da Escherichia coli. A E. coli é uma bactéria versátil em sua relação com o hospedeiro, isto é, inclui cepas comensais e várias categorias patogênicas. Estas compreendem dois grupos: linhagens causadoras de infecções intestinais e linhagens causadoras de infecção extraintestinais. As E. coli isoladas de portadores da DC em geral pertencem ao segundo grupo, e uma das principais características apresentadas por estas bactérias é a interação com células epiteliais (aderência e invasão). Estudos feitos na década de 90 levaram a identificação de um novo patótipo de E. coli, capaz de aderir e invadir células epiteliais e ainda invadir e se replicar dentro de macrófagos, produzindo granulomas, característica histopatológica da DC. Este novo patótipo, chamado de Adherent and Invasive E. coli (AIEC), têm sido usada como referência na caracterização de E. coli isoladas a partir de portadores da DC. Neste trabalho, foi feito o estudo de caracterização fenotípica e genética de E. coli isoladas a partir de 9 portadores da DC e 5 pacientes controles, as quais foram submetidas a testes de adesão e invasão celular em células epiteliais, teste de formação de biofilme e identificação de filogrupos da coleção de referência de E. coli (EcoR). Dentre o conjunto de amostras bacterianas estudado, foi encontrada uma amostra isolada de uma paciente com DC que apresentou invasibilidade superior às demais, e foi intensivamente estudada, tendo-se verificado que ela apresenta um perfil de virulência distinto de AIEC. O genoma da amostra em questão foi sequenciado e anotado. Os resultados da caracterização... / FAPESP: 13/04475-3

Orientador: Antonio Fernando Pestana de Castro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T02:41:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nakazato_Gerson_M.pdf: 5854580 bytes, checksum: 31a33b6b3de0d29ee4c95df2ccfa7bb5 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Amostras de Escherichia coZi enteropatogênicas (EPEC) são uma das causas importantes de diarréia aguda em cães,. principalmente nos neonatos. Neste trabalho foram. Estudadas amostras fecais de 137 cães com diarréia e 34 cães normais, de várias faixa etárias e diferentes localidades do Estado de São Paulo. Através da técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), o gene eae foi encontrado em amostras de E. co/i isoladas de 22 cães, sendo 19 de cães com diarréia e 3 normais. Também através do teste de PCR, amostras de E. colí de 2 cães (com diarréia) apresentaram o gene bfpA. Nenhuma destas 22 amostras fecais, apresentou o plasmídio EAF, e genes que codificam enterotoxinas (ST e LT) ou citotoxinas (Stx e CNF). Utilizando iniciadores específicos, entre as 22 amostras fecais eae positivas, 7 amplificaram com iniciadores para intimina ß, 5para y, 1 para a, 1 para 8 e uma amostra para 13 e .., (colônias diferentes). Sete amostras não reagiram com nenhum destes iniciadores (não-tipáveis).Em relação a inserção de LEE ("Locus of Enterocyte Effacemenf') , através de PCR, algumas amostras apresentaram ÚlSerção de LEE em selC (amplificação da junção direita e esquerda do LEE com selC). Em outras LEEpode estar inserido em pheU (pheU inteITompido). E também, foi observado que E. coZi de 7 amostras fecais LEE estaria inserido em uma outra região do cromossomo ainda desconhecida (selC e pheU intacto). Utilizando cultura de células, foi verificado que a maioria das amostras aderiu em células HEp-2 (14 amostras) e HeLa (12 amostras), sendo que a adesão mais predominante foi do tipo localizada..like (LAL) (8 amostras em HEp.2 e 7 em HeLa). Para o teste de "Fluorescence Actin Staining" (F AS), 10 amostras eae positivas (que apresentaram adesão positiva em HEp-2) foram testadas. Em todas as amostras examinadas foram observados acÚIDulo de actina nos pontos de adesão da bactéria às células, portanto sendo consideradas como positivas no teste de FAS. As amos1ras eae positivas apresentaram uma grande variabilidade em relação a sorotipagem. Os soro grupos encontrados foram: 04, 011, 015, 025, 055,088,098,0111,0119,0125,0142,0156,0157,0167,0174 e ONT. Os sorotipos 01l1:H25, 0119:H2, 055:H7 e O142:H6, isolados neste trabalho, também são encontrados em amostras de EPEC de origem humana. Analisando estes dados foi constatada a presença de amostras EPEC em cães com diarréia e normais (conhecidas como "Dog" EPEC - DEPEC). Levando-se em conta que os fatores de virulência encontrados nestas amos1ras são muito semelhante as das EPEC humanas, e verificando-se a sorotipagem de algumas amostras, estes cães poderiam servir como possível fonte de infecção para o homem e vice-versa. A presente pesquisa é original e inédita nas Américas com exceção do Canadá constituindo-se em todos os seus aspectos a primeira constatação no Brasil da ocorrência de amostras DEPEC e suas respectivas características, incluindo a pesquisa dos genes eae, bfpA, plasmídio EAF, sub-tipos de intiminas, inserção do LEE e genes que codificam a pordução de enterotoxinas (8Ta, 8Th, LT-I e LT-II) ou citotoxinas (Stx, CNF) / Abstract: Strains of Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) are an important cause of acute diarrhea in dogs, mainly in puppies.10 this report 137 feces samples from dogs with diarrhea and.34 normal ones from different ages and regions of the State of São Paulo, were examined By Polymerase Chain Reaction (PCR), the eae gene was found in strains of E. coli from 22 dogs. Nineteen were from dogs with diarrhea and 3 from normal animals. As detected by PCR, strains of E. coli from 2 dogs (with diarrhea) harbored the bfpA gene, and none presented the EAF plasmid. Genes that encode for enterotoxins (S1 and L T) or cytotoxins (Stx and CNF) were not found in any strains, as detected by PCR. Using specific, among 22 eoe positive strains of stools, 7 were also positive for ß intimin, 5 for y, 1 for a?, 1 for a, 1 for ß and y (different colonies) types. Seven of the stra.ins showed no amplified fragments with any of the specific primers for the studied sub-types of intimin. With regard to the sites of insertion of the LEE (Locus of Enterocyte Effacement), as studied by PCR, some strains had the LEE inserted in selC (amplification of right and left junction of LEE with selC). Others strains may have the LEE inserted in pheU (pheU interrupted) and ao equal number of strains had the LEE inserted in a other sire yet unknown (intact selC and pheU). Using cells cultures, it was verified that most strains adhered to HEp-2 cells (14 strains) and to HeLa (12 strains). The most predominant adherence pattern was the localized-like (LAL) (8 strains for HEp-2 and 7 strains for HeLa). In the Fluorescence Actin Staining (F AS) test, 10 eae positive strains and positive for the adherence to HEp-2 were tested. All strains showed accumulation. of actin under the site of adherence of the bacteria to the HEp-2 ce1ls. Thus these strains were considered F AS positive. Positives eae strains showed a wide diversity oí serotypes. Serogroups were found: 04, 011, O15,025, 055, 088_ 098,. 0111, 0119, 0125, 0142, 0156, 0157, 0167, 0174 e ONT. The 0111:H25, 0119:H2, 055:H7 and 0142:H6 serotypes, isolated in this research, are also found among strains of EPEC from humans. These results confirmed the presence of EPEC in dogs with diarrhea and normal dogs (Dog EPEC - DEPEC). As to the virulence factors found in these strains, they were very similar to human EPEC, and an account of these serotypes it is suggested that dogs may play a possible role on the transmission of EPEC infection to humans and vice-versa. These data are original and have not been published yet in North and South America with the exception of Canada. The report of DEPEC strains and their respective characteristics , including search of the eae gene, bfpA, EAF plasmid, intimins sub-types, as well as the insertion of the LEE and the genes that encode for the production of enterotoxins (STa, STb_ LT-I and LT-lI) or cytotoxins (Stx and CNF) are in our opinion the most outstanding ones / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Domingos da Silva Leite / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T14:01:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Duarte_Arlete_M.pdf: 3000936 bytes, checksum: c7eaab16a96a70b56f591557220c9a53 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Não informado / Abstract: Not informed. / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientadores : Domingos da Silva Leite, Wanderley Dias da Silveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T21:11:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hollanda_LucianaMariade_M.pdf: 6442851 bytes, checksum: 7f384f41f8462cf129d4c025d990fe59 (MD5) Previous issue date: 2001 / Mestrado

Orientador: Aparecida Machado de Moraes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T14:55:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Velho_PauloEduardoNevesFerreira_D.pdf: 2446406 bytes, checksum: e4ccb38baf8e0f3a32785ac7193d12f9 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: As bartoneloses humanas são um grupo de doenças cuja patogênese é pouco conhecida. A Bartonella henselae é uma das mais estudadas bactérias deste gênero. Ainda assim, pouco se sabe sobre sua virulência e sua relação com o hospedeiro. O objetivo deste estudo foi observar se passagens desses microorganismos in vivo determinariam alterações ultra-estruturais nas mesmas. Para isso foram selecionados camundongos isogênicos fêmeas, de 4 a 7 semanas de vida, que foram inoculados com cepa padrão de B. henselae (I). Estas foram recuperadas inicialmente de animais geneticamente imunodeficientes (II) e então inoculadas em imunocompetentes. Colônias de bactérias obtidas desta última passagem (III) foram comparadas com colônias I e II à microscopia eletrônica de transmissão. Perda de fímbrias e abundante formação de blebs foram as alterações morfológicas mais encontradas nas colônias III. Também, no sexto dia após as inoculações, os animais foram sacrificados e as principais alterações histológicas encontradas foram proliferação endotelial, observada nos animais imunodeficientes, e reação granulomatosa incipiente, observada em um dos camundongos imunocompetentes inoculados. Estes achados são concordantes com aqueles observados clínica e histologicamente nas doenças humanas causadas por bactérias deste gênero. São discutidos, também, outros achados ultra-estruturais e da microscopia de luz do fígado e do baço dos camundongos, além das observações bacteriológicas e do exame direto do sangue dos camundongos. Este estudo demonstrou que passagens in vivo da B. henselae induziram-na a alterações morfológicas. Estas alterações poderiam explicar a maior virulência das bactérias das colônias III, sugerida pelos resultados encontrados. A maioria destes achados não foi previamente descrita, assim, novos estudos sobre a patogênese da infecção pelas bartonelas deverão considerar as informações ora apresentadas / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Domigos da Silva Leite / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T21:44:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Valadares_GeorgioFreesz_M.pdf: 6286632 bytes, checksum: 750787e549d06747aefb2b4788eebbfc (MD5) Previous issue date: 2000 / Mestrado

La enfermedad celíaca (EC) es una enteropatía de carácter autoinmune en la que intervienen factores genéticos y ambientales. Es la enfermedad crónica intestinal más frecuente, y aunque puede presentarse a cualquier edad y con una gran variedad de síntomas, los casos típicos suelen manifestarse durante la infancia y cursar con síntomas gastrointestinales. En individuos genéticamente susceptibles a desarrollar la enfermedad la ingesta del gluten de la dieta causa una inflamación crónica en el intestino delgado que conduce a pérdidas en la integridad y la función de la mucosa intestinal. Los cambios histológicos que se generan en la mucosa de los enfermos celíacos pueden provocar la atrofia de las microvellosidades intestinales lo que conlleva malabsorción de nutrientes y manifestaciones intestinales y/o extraintestinales. El único tratamiento que existe para los celíacos es una dieta estricta exenta de gluten durante toda la vida. El mantenimiento de esta recomendación dietética es complejo debido a la presencia de gluten en la mayoría de los alimentos elaborados, de modo que los pacientes siguen expuestos al gluten y algunos continúan teniendo sintomatología, principalmente gastrointestinal, y mayores riesgos de salud. Como consecuencia se han abierto diversas líneas de investigación con el fin de desarrollar terapias complementarias y/o alternativas a la dieta sin gluten. Además del gluten y las características genéticas de los individuos, en el desarrollo de la EC intervienen otros factores como el tipo de lactancia o la incidencia de infecciones durante la infancia. Estos factores que pueden influir en la microbiota intestinal y en el desarrollo del sistema inmunitario. En los últimos años se ha demostrado que los pacientes celíacos presentan alteraciones en su microbiota intestinal en comparación con sujetos sanos. El objetivo de esta tesis ha sido avanzar en la caracterización de las alteraciones de la composición de la microbiota intestinal asociadas de forma primaria o secundaria a la EC, y establecer la posible función de los grupos microbianos relevantes en la patogénesis de la enfermedad. El estudio de las funciones de componentes específicos de la microbiota en la patogénesis y el riesgo de sufrir la enfermedad podrían permitir el posterior desarrollo de estrategias de intervención nutricional basadas en probióticos y/o prebióticos para mejorar el estado de salud de estos pacientes o reducir el riesgo de padecer la enfermedad. En el primer capítulo (estudios 1 y 2) se analizaron las poblaciones bacterianas fecales y duodenales de niños con EC y se compararon con las de controles mediante la utilización de la técnica de electroforesis en gel con gradiente desnaturalizante (DGGE). Mediante el uso de esta técnica se detectaron cambios en la diversidad y composición de las poblaciones bacterianas entre los grupos de individuos en estudiados. El siguiente capítulo se basó en la caracterización de algunos de los grupos bacterianos relevantes en la EC, bien por las diferencias detectadas a nivel cuantitativo respecto a controles o bien por su posible acción como patógenos oportunistas, mediante el uso de técnicas dependientes de cultivo. Se aislaron representantes de las poblaciones fecales de enterobacterias, estafilococos y bacteroides de individuos celíacos y controles y se identificaron a nivel de especie. Las especies dominantes se caracterizaron con el fin de determinar la presencia/ausencia de factores de virulencia. En estos estudios (estudios 3, 4 y 5) se observó que los individuos celíacos mostraban una mayor abundancia de las especies Escherichia coli, Staphylococcus epidermidis y Bacteroides fragilis que los controles, y en general estas especies presentaban mayor cantidad de genes que codifican factores de virulencia que los clones aislados del grupo control. Además se aislaron e identificaron bacterias cultivables asociadas a la mucosa duodenal de pacientes celíacos y controles con el fin de establecer posibles diferencias. En este estudio (estudios 6) se observó que los pacientes con EC presentaban una menor abundancia de miembros de la familia Streptococcaceae y una mayor abundancia de miembros de las familias Enterobacteriaceae y Staphylococcaceae, y en particular de Klebsiella oxytoca, S. epidermidis y Staphylococcus pasteuri. El último capítulo (estudio 7) se planteó con el fin de caracterizar el proceso de colonización intestinal de especies de Bacteroides en recién nacidos con riesgo de desarrollar la EC y determinar su relación con factores ambientales y genéticos. Para ello se monitorizó por DGGE las poblaciones de bacteroides de recién nacidos sanos con riesgo genético a desarrollar la EC. Los resultados determinaron que el genotipo de los recién nacidos sanos puede influir en los patrones de colonización de las poblaciones de Bacteroides y por lo tanto en el riesgo a desarrollar la enfermedad. / Sánchez Sánchez, E. (2013). Caracterización molecular de la microbiota de individuos celíacos [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/32059

Objetivo general de la tesis: Caracterización biológica y molecular de genes involucrados en la virulencia de baculovirus y utilización de los mismos para el mejoramiento genético de virus de importancia agronómica en nuestro país. Objetivos particulares: • Evaluación de la interacción de los virus de EpapGV y AgMNPV en mezclas virales aplicadas sobre larvas de Anticarsia gemmatalis y Epinotia aporema. • Identificación, clonado, secuenciación y estudio funcional de genes de EpapGV relacionados con la virulencia y con posible actividad potenciadora de la infección. • Generación de virus recombinantes (rAcMNPV y AgMNPV) que expresen genes candidatos para el mejoramiento genético de su eficacia insecticida.

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / En Chile y el mundo, el aumento de la prevalencia de Salmonella enterica serotipo Enteritidis en enfermedades transmitidas por alimentos (ETAs), ha generado gran preocupación sanitaria y económica. La principal fuente de infección para el ser humano es el consumo de productos avícolas, aunque también se ha sugerido el rol de aves silvestres en la transmisión directa del agente, hacia personas y aves comerciales. El objetivo de este trabajo, fue determinar la diversidad fenotípica ligada a virulencia de cepas de S. Enteritidis, aislada desde aves comerciales, aves acuáticas y seres humanos en Chile y observar su asociación a estos hospederos. Los fenotipos de virulencia testeados in vitro fueron la supervivencia en acidez (pH3), en estrés oxidativo (H2O2/NaNO2) y hambruna. Bajo acidez, se observó diferencias significativas (p≤ 0,05) entre cepas a los 30min de ensayo. En estrés oxidativo (H2O2/NaNO2), se determinó diferencias (p≤ 0,05) entre cepas a los 30min y 3h respectivamente. Finalmente, bajo hambruna se observó diferencias (p≤ 0,05) entre cepas y entre hospederos en todos los días de medición (días 10, 20, 30 y 40). En conclusión, existe diversidad fenotípica ligada a virulencia entre cepas de S. Enteritidis y en el caso de hambruna, se evidenció que la diversidad también se asocia al hospedero de origen, lo que sugiere procesos de adaptación de la bacteria a condiciones específicas frente a la falta de nutrientes en cada uno de ellos o en el ambiente en que viven / Proyecto FONDECYT DE INICIACIÓN 11110398

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Campylobacter es un patógeno entérico, Gram negativo altamente diseminada en el medio ambiente provocando en el humano la campylobacteriosis, que es una de las enfermedades gastrointestinales más frecuente a nivel mundial. Las especies involucradas son C. jejuni y C. coli. Se considera el consumo de carne de ave la principal fuente de contagio. Para determinar su prevalencia en cepas aisladas desde carne de ave (n=40), heces de ave (n=40) y deposiciones pacientes humanos infectados (n=20), se escogieron once genes que determinan mecanismos de virulencia cómo flaA, cadF, racR y dnaJ relacionados con adherencia y colonización, virB11, ciaB y pldA relacionados con la invasión celular y los genes cdtA, cdtB y cdtC relacionados con la expresión de citotóxinas y el gen wlaN relacionado con el síndrome de Guillian Barré (GBS). Tanto flaA como cadF obtuvieron la mayor prevalencia en C. jejuni con 79,7%, mientras la menor la obtuvo virb11 con 7,6%. La determinación de su distribución en distintas fuentes permitirá conocer la situación del país y contribuir a la creación de métodos de prevención de esta enfermedad / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 11110200 y Proyecto FIV 2011