Made available in DSpace on 2016-08-29T15:34:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_9730_Dissertacao Estevão Barcelos. pdf.pdf: 1406331 bytes, checksum: 7e6b1b06aa09689055107d02d115cdf7 (MD5) Previous issue date: 2016-03-04 / As leishmanioses são doenças infecto-parasitárias causadas por protozoários do gênero Leishmania, e encontram-se distribuídas por 98 paises incluindo o Brasil, que possui uma grande importância epidemiológia e clínica, considerando o número de casos registrados. Embora os atuais tratamentos disponíveis sejam eficazes, importantes considerações acerca da toxicidade e alto custo têm sido levantados pela OMS, o que torna urgente a busca por novas drogas. O Resveratrol, um polifenol encontrado em diversas plantas, dentre elas uva, amendoim e eucalipto, tem sido amplamente pesquisado nas últimas décadas. Suas características farmacológicas e ações biológicas incluem: capacidade antiinflamatória; antitumoral; antioxidante; antiagregação plaquetária; fungicida; antiviral e antibacteriana. Além disso, o resveratrol já demonstrou ação anti-promastigotas e anti-amastigotas de Leishmania in vitro. O presente estudo objetivou avaliar os efeitos do tratamento oral com resveratrol contra a leishmaniose visceral murina. Camundongos BALB/c infectados com L. infantum chagasi foram tratados resveratrol (50mg/kg/dia) por via oral durante 10 dias. O tratamento com resveratrol não induziu toxicidez sistêmica, demonstrado pelas dosagens de transaminases (TGO, TGP) e creatinina. Além disso, o tratamento com resveratrol foi capaz de induzir redução no parasitismo do baço e fígado, quando comparado ao grupo não tratado, e compatíveis ao aumento do infiltrado linfocitário observado no fígado destes animais. A avaliação de citocinas mostrou redução significativa da produção de IL-4, IL-6 e IL-17, bem como o aumento de TNF-α e TGF-β no sobrenadante do fígado. Significante redução da produção de TNF-α e IL-10 foi observada nos sobrenadantes de macerado do baço de animais tratados com resveratrol. Este mesmo grupo apresentou uma significativa redução da apoptose de esplenócitos quando comparado com os controles experimentais. Juntos, nossos dados demonstraram pela primeira vez viabilidade da utilização do resveratrol como uma eficiente e segura droga anti-Leishmania, o que o torna um promissor candidato a utilização contra as leishmanioses humanas.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-10-23T19:57:05Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_ImunogenicidadeVacinaLBSapSal.pdf: 2635494 bytes, checksum: 1830fd9d23022df936dfb3d499086d6b (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-11-18T15:29:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_ImunogenicidadeVacinaLBSapSal.pdf: 2635494 bytes, checksum: 1830fd9d23022df936dfb3d499086d6b (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-18T15:29:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_ImunogenicidadeVacinaLBSapSal.pdf: 2635494 bytes, checksum: 1830fd9d23022df936dfb3d499086d6b (MD5) Previous issue date: 2010 / Leishmaniose visceral humana (LVH) e leishmaniose visceral canina (LVC) são as mais importantes doenças emergentes causadas por Leishmania (L.) chagasi com elevada prevalência nos países latino-americanos, principalmente no Brasil. Durante um século de investigação, depois da descoberta do agente etiológico da leishmaniose, poucos avanços têm ocorrido na pesquisa do tratamento e até mesmo de vacinas e as medidas de controle têm sido decepcionantes. O desenvolvimento de uma vacina protetora contra a LVC é uma abordagem alternativa para interromper o ciclo da LV doméstica. Considerando a importância das proteínas salivares de flebotomíneos sendo potentes imunógenos, obrigatoriamente co-depositados com o parasito de Leishmania durante a transmissão, a sua inclusão em uma vacina anti-Leishmania iria explorar a imunidade anti-saliva após uma picada de flebotomíneo infectado e preparar uma resposta imune protetora anti-Leishmania. Assim, neste trabalho foi investigada a imunogenicidade e efeito protetor da vacina LBSapSal em cães após o desafio. Vinte cães foram classificados em quatro grupos: i) controle (n = 5) receberam 1 mL de solução salina estéril 0,9%; ii) grupo Sal (n = 5) receberam extrato de glândula salivar (SGE), elaborado a partir de 5 ácinos das glândulas salivares de Lutzomyia longipalpis em 1 ml de solução salina estéril 0,9%; iii) Grupo LBSal (n = 5) receberam 600 μg de proteína de promastigotas de L. braziliensis mais SGE em 1 mL de solução salina estéril 0,9%, (iv) o grupo LBSapSal (n = 5 ) recebeu 600 μg de proteína de promastigotas de L. braziliensis e 1 mg de saponina em conjunto com a SGE em 1 mL de solução salina estéril 0,9%. O protocolo de imunização constou de três injeções subcutâneas em intervalos de 4 semanas. Posteriormente, os cães foram inoculados por via intradérmica com 1 × 107 promastigotas em fase estacionária de L. (L.) chagasi na presença de glândula salivar de L. longipalpis e acompanhado por um período de 435 dias após o desafio (435dpd). Análise da resposta imune humoral mostrou que antes e durante o acompanhamento longitudinal após o desafio, o grupo LBSapSal mostrou aumento dos níveis de IgG total, IgG1 e IgG2, sugerindo uma possível resposta imune mista (tipo I e II) após a vacinação. A investigação da resposta imune celular com base no perfil imunofenotípico de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) mostrou um aumento no número absoluto de linfócitos T CD5+ circulantes, refletida pela maior contagem de linfócitos T CD4+ e T CD8+, em 435dpc. Interessantemente, a vacina induziu um aumento de linfócitos T CD8+ circulantes durante todo o período após o desafio, possivelmente indicando o estabelecimento de imunidade protetora contra a infecção por Leishmania como tem sido sugerido previamente para a LVC. Consistente com essa hipótese, o grupo LBSapSal apresentou aumento da atividade linfoproliferativa in vitro sobre a estímulação antigênica com SLcA (antígeno solúvel L. chagasi) em 90 e 435 dpc, bem como aumento da freqüência (índice de estimulação) de linfócitos T CD5+ e CD8+ SLcA-específico em 435dpc. Estes resultados suportam a hipótese de que a indução de células T CD8+ podem desempenhar um papel de proteção no mecanismo de controle do parasitismo por Leishmania após a vacinação com LBSapSal, associado com a resposta imune antígeno-específica para antígenos do agente etiológico da LVC. A avaliação clínica sobre sinais sugestivos de LVC mostrou que todos os animais permaneceram assintomáticos durante todo o acompanhamento. O estudo da proteção realizado pela análise de amostras do aspirado de medula óssea através de abordagens parasitológicas (cultura em meio NNN / LIT e inquérito microscópico) e moleculares (PCR) de todos os grupos não revelou a presença de parasitas. Estes resultados mostraram que a via intradérmica de infecção experimental tem um curso longo para iniciar as manifestações clínicas e, assim, a detecção do parasita, e por isso necessitam de um período maior de acompanhamento, que poderão fornecer informações importantes que conduzirão a uma melhor compreensão sobre a imunogenicidade da vacina e sua eficácia. ____________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Human visceral leishmaniasis and canine visceral leishmaniasis (CVL) are the most important emerging diseases caused by Leishmania (L.) chagasi with high prevalence in Latin American countries mainly in Brazil. During a century of research after the discovery of the etiologic agent of leishmaniasis few advances have occurred in research on treatment and even vaccines and measures control have been disappointing. The development of a protective vaccine against CVL is an alternative approach for interrupting the VL domestic cycle. Considering the importance of sand fly salivary proteins are potent immunogens obligatorily co-deposited with Leishmania parasites during transmission, their inclusion in an anti-Leishmania vaccine would exploit anti-saliva immunity following an infective sand fly bite and set the stage for a protective anti-Leishmania immune response. Thus, in this work it was investigated the immunogenicity and protective effect of LBSapSal vaccination in dogs after challenge. Twenty mongrel dogs were categorized into four groups: i) control (n = 5) received 1 mL of sterile saline 0.9%; ii) Sal group (n = 5) received sand fly gland extract (SGE) prepared from 5 acini of salivary glands of Lutzomyia longipalpis in 1 mL of sterile saline 0.9%; iii) LBSal group (n = 5) received 600 μg of L. braziliensis promastigote protein plus SGE in 1 mL sterile 0.9% saline; (iv) the LBSapSal group (n = 5) received 600 μg of L. braziliensis promastigote protein plus 1 mg of saponin together with SGE in 1 mL sterile 0.9% saline. The immunization protocol consisted of three subcutaneous injections at intervals of 4 weeks. Afterwards, the dogs were intradermally infected with 1×107 late-log-phase promastigotes of L. (L.) chagasi in the presence of sand fly saliva of L. longipalpis and accompanied by a follow-up of 435 days post challenge (435dpc). Analysis of the humoral immune response showed that before and during the longitudinal follow-up after the challenge, the LBSapSal group showed increased levels of total IgG, IgG1 and IgG2, suggesting a possible mixed immune response (type I and II) after vaccination. The investigation of the cellular immune response based on the immunophenotypic profile of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) showed an augment absolute number of circulating CD5+ T lymphocytes, reflected by higher counts of T CD4+ and T CD8+ lymphocytes, in 435dpc. Interestingly, the vaccine induced an increase circulating T CD8+ lymphocytes throughout the period after challenge, possibly indicating the establishment of protective immunity against Leishmania infection as has been suggested previously for CVL. Consistent with this hypothesis, the LBSapSal group exhibited increased lymphoproliferative activity upon in vitro antigenic stimuli with SLcA (soluble L. chagasi antigen) in 90 and 435 dpc as well as increased frequency (stimulation index) of SLcA-specific CD5+ and CD8+ T-lymphocytes in 435dpc. These results support the hypothesis that induction of CD8+ T-cells may play a protective role in the mechanism of control of parasitism by Leishmania after LBSapSal treatment associated with the antigen-specific immune response to antigens from the etiological agent of CVL. The clinical evaluation regarding suggestive signs of CVL showed that all animals remained asymptomatic during the all follow-up. The protection study performed by analysis in aspirates of bone marrow samples through parasitological (culture in NNN/LIT medium and microscopical investigation) and molecular approaches (PCR) of all groups did not reveal the presence of parasites. These results showed that the intradermal route of experimental infection has a long course to start the clinical manifestations and therefore the detection of the parasite, and so needing a longer period of follow-up, that may provide important information that will lead to a better understanding on vaccine immunogenicity and efficacy.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto / Submitted by Maurílio Figueiredo (maurilioafigueiredo@yahoo.com.br) on 2015-01-08T18:45:27Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAtividadeLeishmanicida.pdf: 1777763 bytes, checksum: 1347cc7fa324c78fad571d41feebe9c9 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-01-16T15:45:54Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAtividadeLeishmanicida.pdf: 1777763 bytes, checksum: 1347cc7fa324c78fad571d41feebe9c9 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-16T15:57:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAtividadeLeishmanicida.pdf: 1777763 bytes, checksum: 1347cc7fa324c78fad571d41feebe9c9 (MD5) Previous issue date: 2014 / A leishmaniose é uma classe de doenças crônico debilitantes, endêmica em áreas tropicais e subtropicais. Os medicamentos disponíveis atualmente para o tratamento desta doença apresentam alta toxicidade e complicados regimes posológicos. O uso de polímeros como nanocarreadores para a administração de fármacos traz novas possibilidades à terapêutica e tem como objetivo reduzir os efeitos colaterais, diminuir o número de doses e prolongar os intervalos entre as administrações. Neste trabalho, foram desenvolvidas e avaliadas formulações de Pluronic® F-127 (F127) para veicular anfotericina B (AnB) no tratamento da leishmaniose visceral murina. Resultados demonstraram que as formulações de F127 são formadas por micelas/partículas de tamanho entre 100-150 nm e que o sistema micelar que as constitui não apenas estabilizou a AnB pelo período de 360 dias, como também liberou o fármaco da formulação no estado gel de forma controlada. Camundongos BALB/c foram inoculados com 1 x 107 promastigotas de L. infantum por via endovenosa e tratados por via subcutânea com as formulações de F127 contendo 150 e 300 μg/mL de AnB, após seis semanas da infecção. Observou-se redução significativa na carga parasitária do fígado e baço dos animais tratados com F127 + AnB 150μg/mL, porém o mesmo não ocorreu na medula óssea. No entanto, a formulação contendo 300μg/mL de AnB não exerceu nenhum efeito significativo sobre a carga parasitária de nenhum desses órgãos, assim como a AnB livre. As análises bioquímicas mostraram que os grupos tratados com as formulações de F127 contendo AnB não apresentaram efeito nefrotóxico ou hepatotóxico. Os resultados deste trabalho mostram que a solução de F127 a 16% + AnB 150μg/mL administradas por via subcutânea podem representar uma alternativa terapêutica eficaz na redução da carga parasitária em diferentes órgãos alvo da leishmaniose visceral. Com a possibilidade do uso de vias de administração menos invasivas e redução dos efeitos colaterais, o presente trabalho lança uma luz sobre novas alternativas de tratamento da leishmaniose visceral __________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Leishmaniasis is a chronic debilitating class of diseases, and it is endemic in topical and subtropical areas. The medication available for the treatment of this disease resent high toxicity and very complex dosing regimens. The use of polymers as nanocarriers for drug delivery brings new possibilities to therapy and aims to reduce side effects, reduce the number of doses and prolong the intervals between administrations. In this paper, were developed and evaluated formulations of Pluronic® F-127 (F127) to deliver amphotericin B (AmB) in the treatment of murine visceral leishmaniasis. Results showed that F127 formulations are formed by micelles / particles of size between 100-150 nm and the and that micellar system that constitute it not only stabilized AmB for the period of 360- day, but also released the drug formulation in the gel state in a controlled manner. BALB/c mice were inoculated with 1 x 107 promastigotes of L. infantum intravenously and treated subcutaneously with F127 formulations containing 150 and 300 μg / ml of AmB after six weeks of the infection. A significant reduction in parasite load of the liver and spleen of animals treated with AmB F127 + 150μg/mL, however, this did not occur in the bone marrow. However, the formulation containing 300μg / ml AmB had no significant effect on the parasite load of any of these organs, as well as free AmB. Biochemical analyzes showed that the groups treated with F127 formulations containing AmB did not present any nephrotoxicity or hepatotoxicity effects. The results of this paper shows that F127 at 16% solution + AmB at 150μg/ml administered subcutaneously can represent an effective therapeutic option in the reduction of the parasitic load on different target organs of visceral leishmaniasis. With the possibility of using less invasive routes of administration and reduction of side effects, this study sheds light on new alternatives for treatment of visceral leishmaniasis.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2015-10-14T21:05:26Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 20592 bytes, checksum: 0c9b9c579af4cbbcf785ca803bd18d4b (MD5) DISSERTAÇÃO_AnáliseProteômicaComparativa.pdf: 1930862 bytes, checksum: 8b9ca5313718b5e5a2d966f239ed40c1 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-10-29T18:49:47Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 20592 bytes, checksum: 0c9b9c579af4cbbcf785ca803bd18d4b (MD5) DISSERTAÇÃO_AnáliseProteômicaComparativa.pdf: 1930862 bytes, checksum: 8b9ca5313718b5e5a2d966f239ed40c1 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-29T18:49:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 20592 bytes, checksum: 0c9b9c579af4cbbcf785ca803bd18d4b (MD5) DISSERTAÇÃO_AnáliseProteômicaComparativa.pdf: 1930862 bytes, checksum: 8b9ca5313718b5e5a2d966f239ed40c1 (MD5) Previous issue date: 2014 / A leishmaniose é uma doença endêmica em vários países, com incidência anual de 2 milhões de casos. A forma visceral da doença é a mais severa e a falta de tratamento pode levar o indivíduo à morte. Está bem estabelecido que a desnutrição (DPC) constitui fator de risco para a progressão clínica da leishmaniose visceral (LV), porém, pouco se conhece sobre os mecanismos bioquímicos envolvidos tanto na biologia do parasito quanto na resposta do hospedeiro na ocorrência simultânea de DPC e LV. Assim, o presente trabalho teve como foco a análise do perfil proteômico de Leishmania (Leishmania) infantum após a passagem pelo modelo murino de desnutrição proteica. Camundongos do grupo teste receberam dieta contendo 3% de proteína, enquanto os do grupo controle receberam dieta normal, contendo 14%. Após 8 semanas do início da dieta, confirmou-se a desnutrição dos animais do grupo teste a partir dos parâmetros peso corporal e dosagem sérica de proteína total e albumina. Os camundongos de cada grupo foram infectados com promastigotas de L. infantum, na mesma dose, e, posteriormente, os parasitos foram recuperados do fígado e baço na 2a semana (fase aguda) e na 15a semana (fase crônica) pós-infecção. Após a 15ª semana de infecção crônica, parasitos recuperados de animais de ambos os grupos exibiram curva de crescimento diferencial in vitro, sugerindo maior atividade proliferativa de promastigotas isolados de camundongos desnutridos. O estado nutricional também influenciou significativamente no aumento da carga parasitária total do fígado em animais desnutridos. A técnica 2D-PAGE comparativa, para os extratos de L. infantum recuperados dos dois grupos, revelou perfis eletroforéticos similares com poucos spots únicos de cada extrato. No entanto, promastigotas recuperados de animais em fase crônica da LV e submetidos à desnutrição apresentaram aumento de expressão para proteínas envolvidas com biossíntese proteica. A resposta imune humoral dos animais, frente a antígenos solúveis do parasito, também foi avaliada pela técnica de Western blotting. Essa abordagem imunoproteômica revelou padrões de reatividade distintos para os soros de animais de ambos os grupos. De particular importância, o soro de camundongos desnutridos quando empregado na mesma diluição do soro de camundongos normonutridos, não reconhece proteínas da família das HSP’s e chaperoninas, as quais têm sido descritas como altamente imunogênicas em diversos estudos. Coletivamente, os resultados obtidos demonstraram que a DPC altera o perfil proteômico de L. infantum, compromete o estabelecimento de uma resposta humoral eficaz contra proteínas do parasito e está associada ao aumento de carga parasitária no hospedeiro vertebrado. ____________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Leishmaniasis is an endemic disease in many countries with approximately 2 million cases reported annually. The visceral form of the disease is the most severe, and the lack of treatment can lead to death. It has been established that undernutrition constitutes a risk factor for the progression of visceral leishmaniasis (VL). However, little is known about the biochemical mechanisms involved in parasite´s biology as well as in the host response when undernutrition and VL occur simultaneously. In this context, the present investigation intended to evaluate the proteomic profile of Leishmania (Leishmania) infantum promastigotes after passage in mice previously maintained under protein restriction. Mice belonging to the test group received a diet containing 3% protein whilst those from the control were fed a 14% protein diet. After 8 weeks, protein undernutrition was confirmed for test-group animals by monitoring body weight and serum levels of total protein and albumin. Mice from both groups were then inoculated with L. infantum promastigotes, at the same dose, and parasites recovered from liver and spleen on the 2nd (acute phase) and 15th (chronic phase) weeks post-infection. Promastigotes from mice under chronic phase VL exhibited a differential growth curve in vitro, suggesting an increased proliferative activity for parasites isolated from animals of the test group. The nutritional status also significantly increased parasite burden in the liver of test-group animals. A comparative 2D-PAGE technique, using protein extracts of L. infantum promastigotes isolated from both groups, revealed similar electrophoretic profiles with few unique spots assigned to each extract. Nevertheless, promastigotes recovered from animals under chronic phase VL and submitted to protein restriction displayed increased expression of molecules involved with protein biosynthesis. The reactivity of whole serum IgG against parasite soluble antigens was also evaluated using the Western blotting technique. This immunoproteomic approach revealed distinct reactivity patterns associated with the sera of animals belonging to the two groups. Of particular importance, sera from test-group animals, when used in the same dilution as sera from control-group animals, did not recognize HSP´s and chaperones which have been described as highly immunogenic in various studies. Collectively, our results demonstrated that protein undernutrition alters the proteomic profile of L. infantum, compromises the establishment of an efficient humoral response against promastigote antigens and is associated to increased parasite burden in the vertebrate host.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-09-14Bitstream added on 2014-06-13T20:56:02Z : No. of bitstreams: 1 penha_ta_me_jabo.pdf: 999907 bytes, checksum: 65a051d69be1b9f6360131e9bb8dadf6 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Leishmaniose Visceral (LV) é uma zoonose de distribuição mundial. No Brasil foi descrita em várias regiões, mas na região sudeste vem ocorrendo de forma significativa desde 1998, na região de Araçatuba, SP. O cão é o principal reservatório doméstico do protozoário Leishmania chagasi e a principal fonte de contaminação para o homem. A resposta imune do hospedeiro canino frente ao parasito é variável e por este fato, os cães apresentam sinais clínicos acentuados ou ausência destes. Os animais que apresentam maior carga parasitária e sinais clínicos mais severos são considerados susceptíveis à infecção pelo parasito. Este padrão está associado ao perfil de citocinas produzidas, ou seja, na predominância de citocinas Th1 são resistentes ou Th2 susceptíveis. No entanto existem muitas variações neste padrão de resposta, ou seja, muitos animais apresentam a produção de citocinas Th1 e Th2, sugerindo um desequilíbrio na proporção de citocinas pró e antiinflamatórias, que favorecem a multiplicação e sobrevivência dos parasitos. Este desequilíbrio tem influência direta sobre a ativação de macrófagos e sobre sua capacidade microbicida e de apresentação antigênica, levando a uma anergia de linfócitos T e a manutenção e cronicidade da infecção. As quimiocinas são citocinas com potente atividade quimiotática sobre leucócitos. Na LV existem estudos no homem e em modelos experimentais, mas no cão apenas um estudo avalia o seu papel no baço. Existe muita controvérsia sobre o seu verdadeiro papel na LV, pois descreve-se tanto a sua ação próinflamatória quanto a sua ação deletéria, que favorece o parasito. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar o papel das quimiocinas MIP-1a e MCP-1 no baço e fígado de 30 cães... / Visceral Leishmaniasis (VL) is a zoonosis of worldwide distribution. In Brazil has been described in several regions, but has been occurring in the Southeast significantly since 1998 in Araçatuba, SP. The dog is the main domestic reservoir of Leishmania chagasi and the main source of contamination for humans. The canine host immune response against the parasite is variable. Dogs have severe intensity or absence of clinical symptoms. Animals that have a higher parasite load and clinical signs are considered more susceptible to infection by the parasite. This pattern is associated with the profile of cytokines produced, in the predominance of Th1 they are resistant or in the predominance of Th2 they are susceptible. However there are many variations on this response pattern, many animals have the production of Th1 and Th2 cytokines, suggesting an imbalance in the proportion of pro and anti-inflammatory cytokines, which favor the multiplication and survival of parasites. This imbalance has a direct influence on the activation of macrophages and their microbicidal activity and antigen presentation, leading to anergy of T lymphocytes and the maintenance and chronicity of infection. Chemokines are cytokines with potent chemotactic activity on leukocytes. In the VL are studies in humans and experimental models, but the dog only one study assessing its role in the spleen. There is much controversy over its true role in VL, because it describes both its pro-inflammatory action and its deleterious effects, which favors the parasite. Therefore, the aim of this study was to evaluate the role of chemokines MIP-1α and MCP-1 in the spleen and liver of 30 dogs naturally infected with Leishmania spp. and compare the findings with the parasite load of each organ. For this purpose, samples of liver and spleen were analyzed... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-06-20Bitstream added on 2014-06-13T18:07:44Z : No. of bitstreams: 1 troncarelli_mz_me_botfmvz.pdf: 617296 bytes, checksum: 0bb02025e5f4c289eb247fa956c3898c (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Devido à proximidade filogenética entre Leishmania spp. e Trypanosoma cruzi (T. cruzi), podem ocorrer reações cruzadas e resultados falso-positivos à sorologia. O objetivo do presente estudo foi contribuir com o diagnóstico elucidativo da leishmaniose e da tripanossomíase caninas, utilizando a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), o exame parasitológico direto e a pesquisa de DNA, tanto de Leishmania spp., quanto de T.cruzi, pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) em amostras de fígado e baço. Para tanto, foram utilizados 100 cães eutanasiados no Centro de Controle de Zoonoses da cidade de Bauru-SP, onde a leishmaniose visceral é endêmica, e 100 cães eutanasiados no canil municipal da cidade de Botucatu-SP, área indene. Sessenta e cinco amostras de soros dos cães de Bauru foram positivas pela RIFI para Leishmania spp. e 40 foram positivas para T.cruzi, enquanto que todas as 100 amostras de cães de Botucatu foram negativas pela RIFI para leishmaniose e somente quatro amostras foram positivas para T. cruzi. Do total de 200 soros testados, 33 (16,5%) apresentaram resultado positivo à sorologia para ambos parasitos. Em 30 amostras de fígado e/ou de baço dos 33 cães que apresentavam anticorpos contra Leishmania spp. e T.cruzi, tanto o exame parasitológico direto como a PCR para Leishmania spp. resultaram positivos, indicando a verdadeira infecção por este parasito. Nenhuma amostra de fígado e baço dos 200 cães de Bauru e Botucatu foi positiva pela PCR para T. cruzi. Estes resultados reforçam a ocorrência de reações cruzadas entre Leishmania spp. e T. cruzi pela RIFI, bem como a necessidade da realização do exame parasitológico direto e/ou da PCR para o diagnóstico elucidativo da leishmaniose e das tripanossomíases caninas. / Due Leishmania spp. and Trypanosoma cruzi (T. cruzi) phylogenetical closely, some serological cross-reactions and false-positives results can occur. The objective of this study was to contribute with the elucidative canine leishmaniasis and trypanossomiasis’ diagnosis, using Indirect Immunofluorescence (IIF) serologic test, direct parasitological exam and Leishmania spp. and T.cruzi DNA investigation by Polimerase Chain Reaction (PCR) in liver and spleen samples. For this purpose, it were used 100 culled dogs of Zoonosis Control Center in Bauru-SP where Visceral Leishmaniasis (VL) is endemic, and 100 culled dogs of the municipality kennel in Botucatu-SP where VL is non-endemic. Sixty-five (65%) serum samples of dogs from Bauru were positive by IFI for Leishmania spp. and 40 (40%) were positive for T. cruzi. All serum samples (100%) of dogs from Botucatu were negative by IFI for leishmaniasis and only 4 samples were positive for T. cruzi. Of a total of 200 tested serum samples, 33 (16.5%) showed serologic positive results for both parasites. In 30 liver and/or spleen samples of 33 dogs that presented antibodies anti-Leishmania spp. and anti-T.cruzi, both direct parasitological exam and PCR for Leishmania spp. resulted positive, indicating the true dog’s infection by this parasite. No liver and spleen samples of 200 dogs from Bauru and Botucatu were positive by PCR for T. cruzi. These results reinforce the occurrence of antibodies cross reactions for Leishmania spp. and T. cruzi by IFI, and also confirm the necessity of a parasitological exam and/or a PCR test for the canine leishmaniasis and trypanosomiasis elucidative diagnosis.

Orientador: Valéria Marçal Felix de Lima / Banca: Hélio José Montassier / Banca: Mirela Tinucci Costa / Banca: Cáris Maronis Nunes / Banca: Vânia Luiza Deperon Bonato Martins / Resumo: O presente estudo investiga in vitro a ação leishmanicida do imunomodulador fosfolinoleato-palmitoleato de magnésio e amônio proteico (PMAPA) e sua ação citotóxica em células mononucleares, e in vivo seu efeito imunomodulador em cães naturalmente infectados por Leishmania spp. Para avaliar a viabilidade celular após a ação do P-MAPA utilizou-se o ensaio colorimétrico com (3 - (4,5-dimetil-2-il) -2,5-difenil tetrazolium brometo (MTT), onde células mononucleares derivadas de sangue periférico foram cultivadas com diferentes concentrações de P- MAPA; 0, 50, 100 e 200 μg/mL em ambiente úmido a 37°C, com 5% de CO2 por 72 horas. A ação leishmanicida do imunomodulador foi avaliada pelo mesmo método utilizando-se a forma promastigosta de Leishmania (L.) chagasi. Para avaliar a ação terapêutica do PMAPA, vinte cães sem raça definida, com sintomas clínicos compatíveis com leishmaniose e positivos na detecção de anticorpos anti-leishmania pelo método ELISA, foram tratados. Dez cães receberam 15 doses do imunomodulador (2,0 mg/kg), por via intramuscular, e dez receberam solução fisiológica como placebo. Os grupos foram acompanhados para observação da remissão de sinais clínicos, no grupo tratado e controle foram colhidas amostras de pele antes e após a administração do imunomodulador para quantificação da carga parasitária, ao final do tratamento amostras de sangue periférico foram utilizadas para o isolamento de mononucleares e investigação do perfil linfocitário do tipo T e produção das citocinas IL-10, IFN-gama e IL-2 em sobrenadante de cultura celular. A quantificação da carga parasitária nas amostras de pele foi realizada pelo método da PCR em tempo real. O perfil linfocitário do tipo T foi realizado por citometria de fluxo, e a quantificação das citocinas em sobrenadante de cultura... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study investigates the in vitro leishmanicidal action of the immunomodulator-phospholinoleate palmitoleato magnesium and ammonium protein (P-MAPA) together with its cytotoxic action in mononuclear cells. It also investigates, in vivo, its immunomodulatory effect in dogs naturally infected by Leishmania spp. To assess cell viability after the action of P-MAPA, the colorimetric assay with (3 - (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) was used. There mononuclear cells derived from peripheral blood and were cultured with different concentrations of P-MAPA, 0, 50, 100 and 200 μg/mL in a humid environment at 37 ° C with 5% CO2 for 72 hours. The leishmanicidal action of immunomodulators was evaluated using the same method to form promastigosta of Leishmania (L.) chagasi. To assess the therapeutic action of P-MAPA, twenty mongrel dogs, with clinical symptoms compatible with leishmaniasis and positive detection of anti-leishmania antibodies by ELISA assay were treated. Ten dogs received 15 doses of the immunomodulator (2.0 mg / kg) intramuscularly, and ten received saline solution as placebo. The groups were followed for observation of clinical signs of remission; in the both groups, skin samples were collected before and after administration of the immunomodulator to quantify the parasite load. At the end of treatment, peripheral blood samples were used for the isolation of mononuclears, the profile investigation of type T lymphocytes, together with the production of IL-10, IFN-gamma and IL-2 cytokines in cell culture supernatant. The quantification of parasite load in the samples was performed by PCR in real time. The profile of type T lymphocytes was performed by flow cytometry, and quantification of cytokines in culture supernatants by ELISA capture... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: A Leishmaniose visceral canina (LVC), conhecida como calazar, é uma antropozoonose endêmica no Brasil, causada pela Leishmania L. chagasi. O teste sorológico de ELISA tem sido empregado na rotina de inquéritos epidemiológicos e no auxílio diagnóstico clínico de cães suspeitos. O método de ensaio imunoenzimático em fase sólida (ELISA) usando o antígeno total de Leishmania L. chagasi (ELISA-AgT), assim como, o ELISA - Ligante de Fucose e Manose (ELISA-FML), tem demonstrado boa sensibilidade e especificidade para detectar a doença em cães assintomáticos e oligossintomáticos. O presente trabalho teve como objetivo comparar dois antígenos pelo método de ELISA no sorodiagnóstico de cães naturalmente infectados pela LVC, positivos no exame parasitológico, e agrupados em: grupo sintomático e, grupo oligossintomáticos, tendo como grupo controle cães de área não endêmica. Nos animais oligossintomáticos, a sensibilidade observada para ELISA-AgT foi de 86,7%, já para o método ELISA-FML apresentou valor de 90%. A especificidade foi de 100% no método de ELISA-AgT e 96,7 % para o ELISA-FML. Nos animais sintomáticos, a sensibilidade e especificidade para o ELISA-AgT foram de 90% e 93,3%, respectivamente; já o método de ELISA-FML apresentou sensibilidade e especificidade de 86,7% e 96,7%. No teste ELISA-AgT o valor preditivo positivo foi de 93,1% nos sintomáticos e 100% nos oligossintomáticos, enquanto que nos animais submetidos ao teste ELISA-FML, foi observado 96,3% para os sintomáticos e 96,4% para os oligossintomáticos. O índice Kappa foi utilizado para medir o grau de concordância real entre os dois métodos imunoenzimáticos empregados e o exame parasitológico direto, mostrando boa concordância entre os métodos realizados. / Abstract: Visceral canine leishmaniasis or calazar is Brazilian an endemic antropozoonosis caused by Leishmania L. chagasi. ELISA sorologycal test has been used in routine of epidemiological studies and in diagnosis of clinical suspect dogs. The immunoenzymatic assay in solid phase (ELISA) using Leishmania L. chagasi total antigens AgT-ELISA and Fucose Manose ligant-ELISA (FML-ELISA) has been showed good sensibility and specificity for detection disease in asymptomatic and oligosymptomatic dogs. The present paper has the goal of compare the efficiency of two antigens by ELISA methods in dogs naturally affect by leishmaniasis with positive parasitological exam and grouped by symptoms. Group composed by symptomatic dogs, and Group by oligosymptomatic dogs. Control group was constituted of dogs from Leishmania free areas. Dogs of Group oligosymptomatics presented 86,7% of sensibility in AgT-ELISA and 90% at FML-ELISA. The specificity was 100% at AgT-ELISA and 96.7% for FML-ELISA. At Group symptomatics the sensibility and specificity for AgTELISA and FML-ELISA were respectively 90% and 93.3% and, the FMLELISA showed 86.7% and 96.7% corresponding to sensibility and specificity. On ELISA-AgT the positive predictive valor was 93.1% at symptomatic and 100% at oligosymptomatic, moreover in the dogs tested by FML-ELISA the valor was 96.3% for the symptomatic and 96.4% for oligosymptomatics. The Kappa was used and showed a good concordance between both methods tested. Our results had shown that in oligosymptomatics animals the FML-ELISA presented greater sensitivity, while that, in the symptomatic animals, the AgT-ELISA showed more sensible in the detention of positive. / Orientador: Maria Cecília Rui Luvizotto / Coorientador: Valéria Marçal Felix de Lima / Banca: Marcia Dalastra Laurenti / Banca: Gisele Fabrino Machado / Mestre

Orientador: Simone Baldini Lucheis / Coorientador: Helio Langoni / Banca: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Antonio Carlos Paes / Resumo: Devido à proximidade filogenética entre Leishmania spp. e Trypanosoma cruzi (T. cruzi), podem ocorrer reações cruzadas e resultados falso-positivos à sorologia. O objetivo do presente estudo foi contribuir com o diagnóstico elucidativo da leishmaniose e da tripanossomíase caninas, utilizando a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), o exame parasitológico direto e a pesquisa de DNA, tanto de Leishmania spp., quanto de T.cruzi, pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) em amostras de fígado e baço. Para tanto, foram utilizados 100 cães eutanasiados no Centro de Controle de Zoonoses da cidade de Bauru-SP, onde a leishmaniose visceral é endêmica, e 100 cães eutanasiados no canil municipal da cidade de Botucatu-SP, área indene. Sessenta e cinco amostras de soros dos cães de Bauru foram positivas pela RIFI para Leishmania spp. e 40 foram positivas para T.cruzi, enquanto que todas as 100 amostras de cães de Botucatu foram negativas pela RIFI para leishmaniose e somente quatro amostras foram positivas para T. cruzi. Do total de 200 soros testados, 33 (16,5%) apresentaram resultado positivo à sorologia para ambos parasitos. Em 30 amostras de fígado e/ou de baço dos 33 cães que apresentavam anticorpos contra Leishmania spp. e T.cruzi, tanto o exame parasitológico direto como a PCR para Leishmania spp. resultaram positivos, indicando a verdadeira infecção por este parasito. Nenhuma amostra de fígado e baço dos 200 cães de Bauru e Botucatu foi positiva pela PCR para T. cruzi. Estes resultados reforçam a ocorrência de reações cruzadas entre Leishmania spp. e T. cruzi pela RIFI, bem como a necessidade da realização do exame parasitológico direto e/ou da PCR para o diagnóstico elucidativo da leishmaniose e das tripanossomíases caninas. / Abstract: Due Leishmania spp. and Trypanosoma cruzi (T. cruzi) phylogenetical closely, some serological cross-reactions and false-positives results can occur. The objective of this study was to contribute with the elucidative canine leishmaniasis and trypanossomiasis' diagnosis, using Indirect Immunofluorescence (IIF) serologic test, direct parasitological exam and Leishmania spp. and T.cruzi DNA investigation by Polimerase Chain Reaction (PCR) in liver and spleen samples. For this purpose, it were used 100 culled dogs of Zoonosis Control Center in Bauru-SP where Visceral Leishmaniasis (VL) is endemic, and 100 culled dogs of the municipality kennel in Botucatu-SP where VL is non-endemic. Sixty-five (65%) serum samples of dogs from Bauru were positive by IFI for Leishmania spp. and 40 (40%) were positive for T. cruzi. All serum samples (100%) of dogs from Botucatu were negative by IFI for leishmaniasis and only 4 samples were positive for T. cruzi. Of a total of 200 tested serum samples, 33 (16.5%) showed serologic positive results for both parasites. In 30 liver and/or spleen samples of 33 dogs that presented antibodies anti-Leishmania spp. and anti-T.cruzi, both direct parasitological exam and PCR for Leishmania spp. resulted positive, indicating the true dog's infection by this parasite. No liver and spleen samples of 200 dogs from Bauru and Botucatu were positive by PCR for T. cruzi. These results reinforce the occurrence of antibodies cross reactions for Leishmania spp. and T. cruzi by IFI, and also confirm the necessity of a parasitological exam and/or a PCR test for the canine leishmaniasis and trypanosomiasis elucidative diagnosis. / Mestre

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Núcleo de Medicina Tropical, 2010. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2011-01-17T18:25:28Z No. of bitstreams: 1 2010_CesarOmarCarranzaTamayo.pdf: 2331387 bytes, checksum: a74afd3014bb08366f7a5e52e402ad70 (MD5) / Rejected by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br), reason: on 2011-01-17T18:31:34Z (GMT) / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2011-01-17T19:10:59Z No. of bitstreams: 1 2010_CesarOmarCarranzaTamayo.pdf: 2331387 bytes, checksum: a74afd3014bb08366f7a5e52e402ad70 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2011-01-30T16:49:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_CesarOmarCarranzaTamayo.pdf: 2331387 bytes, checksum: a74afd3014bb08366f7a5e52e402ad70 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-01-30T16:49:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_CesarOmarCarranzaTamayo.pdf: 2331387 bytes, checksum: a74afd3014bb08366f7a5e52e402ad70 (MD5) / Foi desenvolvido um estudo transversal baseado na prova de intradermorreação de Montenegro (IDRM) para avaliar a infecção por Leishmania nas comunidades da Fercal, área rural da região de Sobradinho, Brasília - Distrito Federal entre 2007 e 2009. A pesquisa envolveu duas avaliações com intervalo de um ano entre uma e outra. Os indivíduos foram selecionados de forma aleatória, avaliando-se uma criança ou adolescente entre 2 e 14 anos em cada casa selecionada. No período inicial foram incluídas 700 pessoas, divididos de forma estratificada segundo o número de residências em cada comunidade. Além da IDRM foram realizados testes moleculares (PCR) e um teste imunocromatográfico (Kalazar detect™) para avaliar o estado de infecção por Leishmania. Foram colhidos dados pessoais e domiciliares visando a avaliação de fatores associados com a infecção por Leishmania. Na primeira avaliação obtivemos prevalência de 33,28% (IC95% 29,87 – 36,84) segundo a IDRM. A PCR foi positiva em quatro indivíduos nesta avaliação. A positividade da prova imunocromatográfica foi de zero em ambas as avaliações. A segunda avaliação - realizada na coorte de 396 suscetíveis segundo o primeiro inquérito - mostrou incidência da infecção de 23,2% (IC95% 19,27 – 27,58) segundo a IDRM, enquanto a PCR foi positiva em nove casos. A regressão logística multivariada tipo one step mostrou que as características associadas com a positividade à IDRM foram ter mais de sete anos de idade (OR=3,04; IC95% 1,86 - 4,99; p<0,01) e a presença de gambás no peridomicílio (OR=1,46; IC95% 1,02 - 2,10; p=0,04). Esta última característica mostrou-se também associada com a incidência de infecção por Leishmania (OR=3,22; IC95% 1,35 - 7,68; p=0,01). Uma abordagem diferente dos testes de regressão logística (stepwise forward) mostrou que além das características encontradas previamente, na primeira avaliação houve associações adicionais, como gênero masculino (OR=1,95; IC95% 1,19 - 3,17; p=0,01) e criação de aves domésticas diferentes de galinhas (OR=2,23; IC95% 1,19 - 4,18; p=0,01). Na segunda avaliação observaram-se associação da positividade à IDRM com convivência com cães suspeitos de leishmaniose visceral canina (OR=2,28; IC95% 1,02 - 5,10; p=0,04) e criação de aves domésticas (OR=2,94; IC95% 1,08 - 8,02; p=0,04). A análise espacial mostrou que a medida que as comunidades se afastam da área urbana de Sobradinho a intensidade de infecção aumenta. Concluiu-se que em áreas periurbanas de introdução recente de espécies viscerotrópicas de Leishmania existem algumas características associadas ao estado de infecção diferentes às descritas em áreas de colonização antiga por este parasito. / A survey was developed based on the leishmanin test (IDRM) to evaluate the infection for Leishmania in the communities of Fercal, rural area of Sobradinho, Brasília - Federal District between 2007 and 2009. The research involved two evaluations with interval of one year between each one. The individuals were selected in a random way, being evaluated a child or adolescent between 2 and 14 years in each selected house. In the initial period 700 people were included, stratified according to the number of houses in each community. Besides leishmanin tests they were accomplished a immunocromatographic test (Kalazar detect™) and a molecular test (PCR) to evaluate the infection state for Leishmania. There were registered personal and home data seeking the evaluation of factors associated with the infection for Leishmania. In the first evaluation we obtained prevalence of 33,28% (95%CI 29,87 - 36,84) according to IDRM. PCR was positive in four individuals in this evaluation. The positivity of the immunocromatographic test was zero in both evaluations. The second evaluation - just accomplished with the 396 susceptible people according to the first survey - showed incidence of 23,2% (95%CI 19,27 - 27,58) according to IDRM, while PCR was positive in nine cases. The multivariate logistic regression type one step showed that characteristics associated with the positivity to IDRM were to be more than seven years old (OR=3,04; 95%CI 1,86 - 4,99; p < 0,01) and the presence of skunks in the neighborhood (OR=1,46; 95%CI 1,02 - 2,10; p=0,04). This last characteristic was also associated with the incidence of infection by Leishmania (OR=3,22; 95%CI 1,35 - 7,68; p=0,01). A different approach of the multivariate logistic regression tests (stepwise forward) showed that besides the characteristics previously cited, in the first evaluation there were additional associations, as masculine gender (OR=1,95; 95%CI 1,19 - 3,17; p=0,01) and creation of domestic birds different to chickens (OR=2,23; 95%CI 1,19 - 4,18; p=0,01). In the second evaluation they were observed association of the positivity to IDRM with presence of dogs suspicious of visceral canine leishmaniasis (OR=2,28; 95%CI 1,02 - 5,10; p=0,04) and creation of domestic birds (OR=2,94; 95%CI 1,08 - 8,02; p=0,04). The spatial analysis showed that in the measure that the communities stand back of the urban area of Sobradinho the infection intensity increases. It is concluded that in periurban areas of recent introduction of viscerotropic species of Leishmania there are some different characteristics associated to the infection state to described in areas of old colonization for this parasite.