Submitted by REGINALDO KELLER FERNANDES null (regiskeller@msn.com) on 2017-04-12T12:10:23Z No. of bitstreams: 1 Tese Dr definitiva.pdf: 5601863 bytes, checksum: 50eec58640e31a0c12ce54dde368d5a3 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-17T20:28:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 fernandes_rk_dr_bot.pdf: 5601863 bytes, checksum: 50eec58640e31a0c12ce54dde368d5a3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-17T20:28:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fernandes_rk_dr_bot.pdf: 5601863 bytes, checksum: 50eec58640e31a0c12ce54dde368d5a3 (MD5) Previous issue date: 2017-02-24 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica endêmica na América Latina, principalmente no Brasil, Argentina e Venezuela, e que promove um importante impacto na saúde pública. Seu agente etiológico é um fungo termodimórfico pertencente ao gênero Paracoccidioides que compreende o Paracocidioides brasiliensis (Pb) e suas espécies crípticas S1, PS2, PS3 e Paracoccidioides lutzii. As consequências da interação do fungo com as células da resposta imune inata, tais como as células dendríticas (DC), destacando a capacidade destas células para instruir a resposta imune adaptativa, não são totalmente compreendidas. Em estudo anterior, descobrimos que DCs não maturam em resposta ao desafio com Pb. Esta falha foi associada à inibição de PGE2 nas DCs pelo fungo, uma vez que este eicosanóide é um fator importante para a maturação dessas células. Na tentativa de melhor entender este processo e suas conseqüências para a instrução da resposta adaptativa CD4, nós buscamos analisar o perfil transcricional de DCs em resposta ao Pb assim como o de linfócitos CD4+ cocultivados com DCs sensibilizados com o fungo. Para estas análises, nós utilizamos a metodologia de RNA-seq, que permitiu o sequenciamento de alto rendimento e a quantificação sistemática de expressão gênica. Após as análises, os genes que foram regulados positivamente ou negativamente em ambas as células (DCs e CD4) foram listados e as funções das proteínas codificadas por eles, identificadas. A análise geral das proteínas codificadas por esses genes, como diversas citocinas e quimiocinas, mediadores inflamatórios, bem como fatores de transcrição envolvidos na diferenciação de populações de linfócitos, permitiram determinar o perfil de resposta adaptativa que foi diferenciado após Interação de DCs com células CD4, bem como alguns mecanismos que levaram a este perfil. / FAPESP: 2013/14733-0

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-14Bitstream added on 2014-06-13T18:59:03Z : No. of bitstreams: 1 000760003.pdf: 3284436 bytes, checksum: eb7831cb9642442476baebeb6fa5a800 (MD5) / Leishmania infantum (syn. L. chagasi) é o agente causador da Leishmaniose Visceral (LV) no Novo Mundo, com áreas endêmicas que se estendem do Sul dos EUA ao norte da Argentina. As leishmanioses assumem grande importância em saúde pública por sua natureza zoonótica e, atualmente, vêm apresentando crescente disseminação nas diferentes regiões do Brasil, em especial no Estado de São Paulo. No Brasil, a Leishmaniose Tegumentar (LT) tem sido assinalada em praticamente todos os Estados e vem crescendo progressivamente nos últimos 20 anos, ocorrendo surtos em todas as regiões do país. Apesar dos registros de ocorrências de infecções esporádicas de leishmaniose felina (LF), são necessários mais estudos para se considerar os felinos como reservatórios importantes nas leishmanioses. Estes animais quase não apresentam sinais clínicos, mesmo estando infectados, constituindo-se em importantes fontes de infecção para outros animais domésticos, o homem ou vice-versa. Coletaram-se amostras de sangue de 50 gatos procedentes do Bosque Municipal de Marília, área de grande concentração de transeuntes e já detectado flebotomíneos no local. Armadilhas do tipo CDC luminosas foram instaladas em dez diferentes pontos do bosque, nos meses de julho a dezembro/2012, tendo-se capturado um total de quatro espécies de Lutzomyia longipalpis (Lu. longipalpis) sendo dois machos e duas fêmeas e quatro espécies fêmeas do gênero Brumptomyia spp. A análise parasitológica do conteúdo intestinal das duas fêmeas da espécie Lu. longipalpis foi negativa. Realizou-se a prova de Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para Leishmania infantum, tendo-se quatro (8%) animais reagentes. Todos os animais foram não reagentes à prova de RIFI para Leishmania(Viannia) braziliensis. Em relação ao teste de ELISA indireto para Leishmania infantum, 42% dos animais (21/50) foram reagentes. Para L. braziliensis, 18% dos animais (9/50) foram reagentes... / Leishmania infantum (syn. L. chagasi) is the causative agent of visceral leishmaniasis (VL) in the New World, with endemic areas that spreads from the south of United States until the north of Argentina. Leishmaniasis represents a great importance in public health due to the zoonotic nature, and currently have been presented a great dissemination in different regions of Brazil, specially in Sao Paulo State. In Brazil, cutaneous leishmaniasis has been occurred in almost all States, and have been growing up progressively in the last twenty years, occurring outbreaks in all regions of the country. Even though the sporadic reports of feline leishmaniasis, more studies are necessary to consider cats as the great importance as reservoirs in the feline leishmaniasis. These animals almost do not represent any clinical symptoms, even infected, representing important source of infection to another domestic animals, humans and vice-versa. Blood samples were collected from fifty cats habiting the Municipal Grove from Marília-SP, an area with high number of visitors and already detected sandflies. Traps CDC were installed in ten different points of the Municipal Grove from Marília-SP, since July to December/2012. Four specimens of Lutzomyia longipalpis (Lu. longipalpis) were captured (two males and two females) and four females specimens of the Brumptomyia genre. The parasitological analysis of gut contents of two females of Lu. longipalpis was negative. The Immunofluorescence Antibody Test (IFAT) for Leishmania infantum was performed, resulting in four (8%) reagent animals. All cats were non-reagent to Leishmania braziliensis by IFAT. Regarding to Indirect Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) test for Leishmania infantum, 42% of the animals (21/50) were reagent. For L. braziliensis, 18% of the animals (9/50) were reagent to ELISA test. The Polimerase Chain Reaction (PCR) for Leishmania infantum and for Leishmania braziliensis from ...

Submitted by Rui Rafael Durlacher (rui.durlacher@saolucas.edu.br) on 2018-04-13T20:38:11Z No. of bitstreams: 1 Tese-RUI RAFAEL DURLACHER - DINTER.pdf: 926965 bytes, checksum: 79fa32ffa8165d98f1c245255bbd4716 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Rimoli de Oliveira null (anapaula@foa.unesp.br) on 2018-04-16T11:58:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 durlacker_rr_dr_araca_int.pdf: 926965 bytes, checksum: 79fa32ffa8165d98f1c245255bbd4716 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-16T11:58:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 durlacker_rr_dr_araca_int.pdf: 926965 bytes, checksum: 79fa32ffa8165d98f1c245255bbd4716 (MD5) Previous issue date: 2017-10-17 / Introdução: a paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica endêmica cuja incidência vem aumentando de forma significativa na região norte do Brasil. Duas espécies, Paracoccidioides brasiliensis e Paracoccidioides lutzii podem causar a doença. A última aparenta ter maior importância em Rondônia, estado com as maiores taxas de incidência e mortalidade por PCM do Brasil. Objetivo: descrever as características clínicas, epidemiológicas e laboratoriais de pacientes portadores de PCM e estabelecer correlação com lesões orais. Material e Métodos: estudo retrospectivo de pacientes atendidos no Centro de Referência em Medicina Tropical de Rondônia durante o período de janeiro de 2013 a dezembro de 2016. Resultados: foram diagnosticados 107 pacientes com média de idade de 53,8 anos, sendo 100 homens e 07 mulheres. Observou-se que 77% mantinham contato ou relataram experiência anterior com lavoura. A maioria (98,1%) apresentou a forma crônica da doença. O diagnóstico foi confirmado em 74,7%, e baseado em achados clínicos e/ou epidemiológicos no restante. O diagnóstico sorológico não esteve disponível no período. O tempo médio entre o início dos sintomas e a realização do diagnóstico foi de 7,3 meses. Os principais locais acometidos foram os pulmões (95,3%), seguidos da cavidade oral (55,1%) e dos gânglios (28%). Na cavidade oral, a faringe/laringe predominou (33%), seguida da mucosa jugal (17,8%) e palato mole (13,1%). Houve 58,3% de associação com tabagismo. O medicamento mais utilizado para o tratamento foi o Itraconazol, fornecido pelo governo. Conclusão: não houve diferença entre os grupos com ou sem comprometimento da cavidade oral. A presença de lesões orais em mais da metade dos casos, com diagnóstico mais acessível, sugere que se pode diminuir o tempo entre o início dos sintomas e o início do tratamento, e contribuir para uma menor proporção de sequelas. Sugere-se ainda que o P. lutzii pode manifestar doença com características clínicas, epidemiológicas e laboratoriais semelhantes ao P. brasiliensis, exceto pela menor proporção de formas agudas de PCM. Mas novos estudos são necessários. / Background: Paracoccidioidomycosis (PCM) is an endemic systemic mycosis whose incidence has been increasing significantly in the northern region of Brazil. Two species, Paracoccidioides brasiliensis and Paracoccidioides lutzii can cause the disease. The latter appears to be more important in Rondônia, the state with the highest incidence and mortality rates by PCM in Brazil. O bjective : T o describe the clinical, epidemiological and laboratory characteristics of PCM patients and to establish correlation with oral lesions . Material and Methods: a retrospective study of patients attended at the Reference Center in Tropical Medicine of Rondônia during the period from January 2013 to December 2016. Results: A total of 107 patients were diagnosed, with mean age of 53.8 years, 100 men and 7 women. It was observed that 77% maintained contact or reported previous experience with rural areas . The majority (98.1%) presented the chronic form of the disease. The diagnosis was confirmed by the finding of the fungus in clinical specimen s in 74.7%, and based on clinical and/or epidemiological findings in the rest. The serological diagnosis was not available in the period. The mean time between onset of symptoms and the diagnosis was 7.3 months. The main sites were the lungs (95.3%), follo wed by the oral cavity (55.1%) and the ganglia (28%). In the oral cavity, the pharynx/larynx predominated (33%), followed by jugal mucosa (17.8%) and soft palate (13.1%). There was an 58,3 % association with smoking . The most commonly used drug was Itr acona zole in 93.5% of patients. Conclu sion: There was no difference between groups with or without oral cavity involvement. The presence of oral lesions in more than half of the cases, with a more accessible diagnosis, suggests that the time between onset of sy mptoms and the beginning of treatment can be shortened and contribute to a lower proportion of sequelae. It is also suggested that P. lutzii can manifest disease with clinical, epidemiological and laboratory characteristics similar to P. brasiliensis , exce pt for the smaller proportion of acute forms of PCM. But new studies are needed.

?rea de concentra??o: Farmacologia de produtos naturais e plantas medicinais. / Submitted by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2015-10-23T16:44:04Z No. of bitstreams: 2 valeria_gomes_almeida.pdf: 1888901 bytes, checksum: 721c755514ecbe7426926c79618f632a (MD5) license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2015-10-23T16:45:38Z (GMT) No. of bitstreams: 2 valeria_gomes_almeida.pdf: 1888901 bytes, checksum: 721c755514ecbe7426926c79618f632a (MD5) license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-23T16:45:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 valeria_gomes_almeida.pdf: 1888901 bytes, checksum: 721c755514ecbe7426926c79618f632a (MD5) license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Previous issue date: 2012 / A Pseudobrickellia brasiliensis (Asteraceae), conhecida como arnica-do-campo, ? uma planta nativa da flora brasileira cuja prepara??o alco?lica tem sido utilizada como anti-inflamat?rio pela medicina popular. No entanto, os mecanismos biol?gicos envolvidos nessa atividade, ainda n?o foram devidamente elucidados. Nesse contexto, o presente estudo avaliou o potencial anti-inflamat?rio de P. brasiliensis atrav?s da an?lise da produ??o de citocinas anti e pr?-inflamat?rias por leuc?citos mononucleares do sangue perif?rico. Foram utilizados extratos de P. brasiliensis ap?s extra??o com os solventes Acetato de Etila (ACE) e Etanol (ETA), ambos dilu?dos em Dimetilsulf?xido (DMSO), bem como o extrato aquoso dilu?do em PBS (AQU). A citotoxicidade dos extratos, ap?s 24h ou 5 dias de cultura celular, foi avaliada por meio da t?cnica de exclus?o com Azul de Tripan e, tais resultados foram confirmados por meio de ensaios de apoptose e necrose, ap?s marca??o com Anexina V-FITC e Iodeto de Prop?deo. No ensaio de inibi??o da produ??o de citocinas, C?lulas Mononucleares do Sangue Perif?rico humano (PBMC) foram incubadas em meio de cultura, contendo Miristato-Acetato de Forbol (PMA) e Ionomicina como agentes estimuladores, na aus?ncia ou presen?a do extrato AQU nas concentra??es finais de 0,025 mg/mL, 0,05 mg/mL ou 0,1 mg/mL. Tamb?m, foi avaliado o efeito do extrato AQU sobre a resposta proliferativa de linf?citos ao est?mulo mitog?nico Fitohemaglutinina (PHA) como teste complementar na an?lise de ativa??o celular. De acordo com os dados obtidos, os extratos ACE e ETA apresentaram um alto grau de citotoxicidade, sendo, portanto exclu?dos das an?lises posteriores, que avaliaram o perfil de produ??o de citocinas e prolifera??o. O extrato AQU, al?m de n?o induzir apoptose e necrose, n?o demonstrou a??o t?xica, mesmo ap?s 5 dias de cultura. Nas culturas tratadas com AQU na concentra??o final de 0,1 mg/mL foi observada redu??o significativa da express?o de IFN-? e TNF-? em resposta ? estimula??o com PMA e ionomicina. O efeito inibit?rio do extrato AQU, tamb?m, pode ser observado por meio da diminui??o da resposta proliferativa de linf?citos ao PHA. Estes achados sugerem que o efeito anti-inflamat?rio atribu?do ? P.brasiliensis na medicina popular pode, pelo menos em parte, ser devido ? inibi??o da produ??o de citocinas pr?-inflamat?rias por linf?citos, bem como da resposta proliferativa. Ensaios futuros, utilizando subst?ncias isoladas e identificadas a partir do extrato aquoso, s?o necess?rios para fortalecer os dados aqui apresentados e para demonstrar quais os mecanismos moleculares envolvidos nas a??es inibit?rias apresentadas no presente trabalho. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa Multic?ntrico de P?s-gradua??o em Ci?ncias Fisiol?gicas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, [2012]. / ABSTRACT Pseudobrickellia brasiliensis (Asteraceae), also known as ?Arnica-do-Campo? is a native plant from Brazilian flora and its alcoholic preparation has been used as anti-inflammatory in folk medicine. However, the biological mechanisms involved in the anti-inflammatory activity are not well elucidated. In this context, the present study evaluated the anti-inflammatory potential of P. brasiliensis by performing an anti- and pro-inflammatory cytokine analysis on human peripheral blood leucocytes as well as cell activation, measured by proliferation assay. We used P. brasiliensis extracts utilizing different solvents including Ethyl Acetate (ACE) and ethanol (ETA), both diluted in dimethylsulfoxide (DMSO), and aqueous extract (AQU) diluted in PBS. After 24h or 5 days, in vitro cytotoxicity promoted by those extracts was evaluated using the exclusion technique with Trypan Blue. Furthermore, apoptosis and necrosis was measured by Annexin V-FITC and propidium iodide staining, after 4 hours of culture. For cytokine production inhibitory assay, humans Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMC) were incubated in medium containing Phorbol Myristate Acetate (PMA) plus ionomycin as stimulating agents in the absence or presence of AQU extract at the final concentrations 0.025 mg/ml, 0.05 mg/ml or 0.1 mg/ml. We also assessed, as a complementary test for cellular activation analysis, the effect of AQU extract on lymphocytes proliferative response after mitogenic stimulation with Phytohemagglutinin (PHA). According to the obtained data, ACE and ETA showed a high cytotoxicity rate and, therefore, they were not used in cytokine and proliferative analysis. The AQU extracts, besides not inducing apoptosis and necrosis, showed no toxic effects even after 5 days of culture. In cultures treated with AQU extract at final concentration of 0.1 mg / ml was observed a significant reduction in IFN-? and TNF-? expression in response to PMA stimulation. The AQU extract inhibitory effect can also be observed by the decrease of lymphocytes proliferative rate in response to PHA stimulation. These findings suggest that P.brasiliensis anti-inflammatory effect can be, at least in part, due PBMC pro-inflammatory cytokines inhibition as well as the proliferative response. Further assays, using aqueous extract isolated and identified substances are needed to strengthen the presented data and to demonstrate the molecular mechanisms involved in inhibitory actions reported in this study.

Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Coorientador: Alexandra Ivo Medeiros / Banca: Carlos Pelleschi Taborda / Banca: Sonia Rozental / Banca: Maria do Rosário Rodrigues Silva / Banca: Anderson Assunção Andrade / Resumo: O fungo do gênero Paracoccidioides é o agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM), micose de grande importância no Brasil e América Latina. Há diferentes terapias disponíveis, como os antifúngicos da classe dos poliênicos, azóis e sulfonamidas. O desenvolvimento de novos antifúngicos com eficácia superior é necessário para prevenir recaídas e diminuir os efeitos secundários, o período de tratamento e sequelas. A molécula de ácido gálico com diferentes modificações (galatos de alquila) apresentou atividade antifúngica contra um painel representativo de fungos patogênicos. O galato de decila (G14) foi objeto de estudo deste trabalho, para o qual a interação Paracoccidioides¬-hospedeiro foi relacionada ao mecanismo de ação. Para tanto, o fungo Paracoccidioides lutzii (Pl01) foi desafiado com o G14 para análise das alterações no desenvolvimento de brotamentos e na viabilidade celular pelo ensaio de MTT. Foi avaliada a influência do G14 na taxa de interação de Pl01 com a linhagem de macrófago alveolar murino AMJ2-C11, com as linhagens pulmonares de mamífero A549 e MRC-5, e hemócitos da larva de Galleria mellonella utilizando ensaios por citometria de fluxo. O G14 ainda foi avaliado quanto à taxa de sobrevivência da larva de G. mellonella infectada e a capacidade na modulação da produção de óxido nítrico em macrófago RAW. O estudo do mecanismo de ação foi realizado pelo ensaio de interação químico-genética seguida da interação genética, que consiste na comparação de uma coleç... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The fungus of genus Paracoccidioides is the etiological agent of paracoccidioidomycosis (PCM), an important mycosis in Brazil and Latin America. There are different available therapies, as antifungals belong to the class of polyenes, azoles and sulfonamides. The development of new antifungal agents with greater effectiveness is required to prevent relapse and reduce side effects, the period of treatment and sequelae. The gallic acid molecule with different modifications (alkyl gallates) showed antifungal activity against a representative panel of pathogenic fungi. The decyl gallate (G14) was the study object of this work, for which the Paracoccidioides-host interaction was connected with the mechanism of action. Therefore, the fungus Paracoccidioides lutzii (Pl01) was challenged with the G14 to analyze the changes in the development of budding and cell viability by MTT assay. Then, it was assessed the influence of the G14 in the interaction rate of Pl01 with murine alveolar macrophage lineage AMJ2-C11, with mammalian lung lineage A549 and MRC-5, and hemocytes of Galleria mellonella larvae using assays by flow cytometry. The compound G14 was evaluated for survival rate of infected G. mellonella larvae and to capacity of modulation of nitric oxide production in RAW macrophages. The mechanism of action was performed by chemical-genetic interaction assay followed by genetic interaction, which involves comparing a mutant collection, of Saccharomyces cerevisiae yeast, with hypersen... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Angela Maria V. Campos Soares / Coorientador: Luciane Alarcão Dias-Melicio / Banca: Denise Fecchio / Banca: Dulce Helena Jardim Costantino / Resumo: O fungo Paracoccidioides brasiliensis é o agente etiológico da Paracoccidioidomicose, uma micose sistêmica, endêmica na América Latina. As células dendríticas (DCs) desempenham papel crucial na detecção de patógenos, desencadeamento de uma resposta inicial do hospedeiro, assim como na instrução da resposta imune adaptativa. Mediadores liberados pelas DCs, de uma forma autócrina, modulam as suas funções. Entre esses, destacamos as prostaglandinas e leucotrienos. Assim, avaliamos se DCs humanas produzem PGE2 e LTB4 em resposta ao fungo, a participação de receptores de reconhecimento de padrões moleculares (PRRS) nessa produção, assim como o papel modulador desses eicosanóides sobre a maturação fenotipica dessas células e a produção das citocinas IL-6, IL-10, IL-12, IL-23 e TNF-α. DCs humanas imaturas (CD14- / CD1ahigh / CD83 low) obtidas a partir da diferenciação de monócitos cultivados com GM-CSF e IL-4 (7 dias) liberaram substanciais concentrações de PGE2 e LTB4 que aumentaram significativamente, no caso da PGE2, com incubação com LPS durante 1h, 2h, 4h, 8h, 12h, 18h, 24h ou 48h. No entanto, os níveis de PGE2 e LTB4 foram significativamente inibidos após o desafio com as duas cepas do fungo. Ensaios de bloqueio dos PRRS mostraram que o processo de inibição de PGE2 envolveu o receptor de manose. Adicionalmente, ensaios de fenotipagem mostraram que após o desafio com o fungo, as DCs não alteraram o seu fenótipo de imaturas para o de células maduras. Assim, detectamos uma clara associação entre inibição da produção de PGE2 e LTB4 e a incapacidade do fungo em induzir a maturação de DCs. Ensaios utilizando PGE2 ou LTB4 exógenos confirmaram essa associação. Estas células ainda produzem altos níveis de IL-6... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The fungus Paracoccidioides brasiliensis is the etiological agent of paracoccidioidomycosis, a systemic mycosis, endemic in Latin America. Dendritic cells (DCs) play a crucial role in the detection of pathogens, triggering an initial response from the host as well as the instruction of the adaptive immune response. Mediators released by DCs, by an autocrine way, modulate their functions. Among these, we highlight the prostaglandins and leukotrienes. We therefore assessed whether human DCs produce PGE2 and LTB4 in response to fungus, the participation of recognition receptors of molecular patterns (PRRS) in this production, as well as the modulating role of these eicosanoids on phenotypic maturation of these cells and the production of the cytokines IL-6, IL-10, IL-12, IL-23 e TNF-α. Human immature DCs (CD14-/ CD1ahigh/CD83low) derived from the differentiation of monocytes cultured with GMCSF and IL-4 (7 days) released substantial concentrations of PGE2 and LTB4 which increased significantly in the case of PGE2, with incubation with LPS for 1h, 2h, 4h, 8h, 12h, 18h, 24h or 48h. However, the levels of PGE2 and LTB4 were significantly inhibited after challenge with two different strains of the fungus. Trials have shown that blockade of PRRS process involved the inhibition of PGE2 mannose receptor. Additionally, phenotyping assays showed that after challenge with the fungus, DCs did not change their phenotype of immature cells to mature ones. Accordingly, we detected a clear association between inhibition of the production of PGE2 and LTB4 fungus and inability to induce maturation of DCs. Assays using exogenous PGE2 and LTB4 confirmed this association. These cells also produce high levels of IL-6 in response to fungus, which, however, were not associated with inhibition of the production of eisosanóides. Rather than that, these DCs do not produce... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador : Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Ricardo José Giordano / Banca: Carlos Pelleschi Taborda / Banca: Alexandra Ivo de Medeiros / Banca: Celso Luiz Marino / Resumo: O gênero Paracoccidioides consiste de fungos dimórficos, agentes etiológicos da paracoccidioidomicose (PCM). Atualmente, estudos filogenéticos dividem o gênero Paracoccidioides em duas espécies denominadas Paracoccidioides brasiliensis e Paracoccidioides lutzii. A primeira é dividida em três espécies filogenéticas S1, PS2 e PS3, e a segunda é chamada de Pb01-like. A correta taxonomia molecular do gênero abriu novas possibilidades para o estudo e compreensão de suas relações com seu hospedeiro. Os fungos do gênero Paracoccidioides têm algumas características que permitem o seu crescimento em condições adversas, que podem contribuir para o desenvolvimento da doença, e têm mecanismos que lhes permitem aderir e invadir os tecidos do hospedeiro. A adesão ocorre através de uma classe específica de proteínas presentes na parede celular, essas proteínas são chamadas adesinas, e são capazes de mediar interações do fungo com os tecidos do hospedeiro durante a infecção. Diferenças na adesão são responsáveis pelo aumento da virulência/patogenicidade de um isolado em relação aos outros. O objetivo deste trabalho foi contribuir para ao maior conhecimento de componentes superficiais de espécies do gênero Paracoccidioides e sua influência na virulência. Para tanto, foram analisados os perfis de adesão e expressão de adesinas, bem como a clonagem e expressão heteróloga da proteína CS (Cell surface protein) que pode estar envolvida na virulência de Paracoccidioides spp e a caracterização e identificação de moléculas por phage display com capacidade de inibir a ligação de Paracoccidioides spp. Assim, ao se avaliar o perfil de adesão das espécies P. brasiliensis e P. lutzii bem como uma análise da expressão de genes codificantes de adesinas previamente caracterizadaspor PCR em Tempo Real, verificou-se alta heterogeneidade de comportamento nas diferentes espécies em relação à adesão, mostrando ainda ... / Abstract: The Paracoccidioides genus consists of dimorphic fungi, etiologic agents of paracoccidioidomycosis (PCM). Currently, phylogenetic studies divide the Paracoccidioides genus in two species named Paracoccidioides brasiliensis and Paracoccidioides lutzii. The first is divided in three phylogenetic species, S1, PS2 and PS3 and the second is named Pb01-like. The correct molecular taxonomy of this fungus has opened new possibilities for the study and understanding of their relationships with their hosts. The fungi of the Paracoccidioides genus have some features that allow their growth in adverse conditions provided by the host, which may contribute to disease development and it have mechanisms that enable them to adhere and invade host tissues. Adhesion is provided by a particular class of proteins present in the cell wall called adhesins, capable of mediating interactions with the fungal host tissues during infection. Differences in adhesion are responsible for increased virulence/pathogenicity of an isolate in relation to others. The goal of this study was to contribute to a better knowledge of the superficial components of the species of Paracoccidioides genus e its influence in the fungi virulence. For this, we analyzed the adhesion profile and the adhesins expression during the interaction of the fungi with the host, cloned and expressed the CS protein, in a heterologous system, which may be involved in virulence of Paracoccidioides spp. as well as characterize and identify molecules capable of inhibit the adhesion of Paracoccidioides spp. using a Phage Display system. So, when we evaluated the adhesion profile of the species P. brasiliensis and P. lutzii, as well as the analysis of the expression of genes coding adhesins by Real Time PCR, it has been founded a high heterogeneity of behavior in the different species, showing that the adhesins 14-3-3 and enolase are the most used ones adhesins by the pathogen, independent of the strain ... / Doutor

Orientador: Marineide Rosa Vieira / Banca: Alcebiades Ribeiro Campos / Banca: Paulo de Souza Gonçalves / Resumo: A seringueira Hevea brasiliensis é a principal fonte de borracha natural produzida no mundo. A grande expansão da área plantada no Estado de São Paulo foi feita com o clone RRIM 600. Atualmente, uma série maior de opções se encontra à disposição dos produtores como os PB, GT, PR, IAC, IRCA, séries mais recentes de RRIM e IAN. Devido à necessidade de informações que possam nortear a escolha dos clones a serem plantados, o presente projeto teve por objetivo comparar a influência de clones de seringueira sobre o desenvolvimento populacional dos ácaros fitófagos e avaliação do desfolhamento provocado. O experimento foi conduzido na área do Pólo Regional de Desenvolvimento do Noroeste Paulista, APTA\SAA, no município de Votuporanga, duas áreas experimentais já instaladas foram escolhidas entre as que existem no local, identificadas como Área 1 e Área 2, em ambas foi utilizada a mesma metodologia para coleta, contagem e identificação dos ácaros. Os clones avaliados foram: Área 1, RRIM 600 (testemunha), RRIM 701, GT 1, IAN 873, PR 255, PR 261, PB 217, PB 235 e na Área 2, os clones: RRIM 600 (testemunha), PB 260, PB 330, PB 235, IAC 15, IAC 35, IAC 40, IAC 300, IRCA 111, IAN 3156 e PB 28/59. Os experimentos foram conduzidos em dois períodos: 2004/2005 e 2005/2006. As amostragens foram mensais, coletando-se folhas dos clones para identificação e contagem dos ácaros e das exúvias em laboratório. As espécies fitófagas observadas foram: Calacarus heveae Feres, Tenuipalpus heveae Baker, Phyllocoptruta seringueirae Feres, Schevtchenkella petiolula Feres, Eutetranychus banksii (McGregor), Oligonychus gossypii (Zacher) e Tetranychus mexicanus (McGregor). Os sintomas foram avaliados através de exame visual com atribuição de notas para a porcentagem de amarelecimento e de desfolha das plantas em cada dia de coleta. Foram observadas diferenças significativas ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The rubber tree Hevea brasiliensis is the main source of natural eraser produced in the world. The great expansion of the area planted in the State of São Paulo was done with the clone RRIM 600. Nowadays, a larger series of options is to the disposition of the producers like PB, GT, PR, IAC, IRCA, more recent series of RRIM and IAN. Due to the need of information that they can orientate the choice of the clones to be planted, the present project had for objective to compare the influence of rubber tree clones on the population development of the acarids fitófagos and evaluation of the provoked leaf fall. The experiment was driven in the area of the Regional Pole of Development of the Northwest From São Paulo, APTA\SAA, in the municipal district of Votuporanga, two experimental areas already installed were chosen among the ones that exist at the place, identified as Area 1 and Area 2, in both the same methodology was used for collection, counting and identification of the acarids. The appraised clones were: Area 1, RRIM 600 ( testifies), RRIM 701, GT 1, IAN 873, PR 255, PR 261, PB 217, PB 235 and in the Area 2, the clones: RRIM 600 ( testifies), PB 260, PB 330, PB 235, IAC 15, IAC 35, IAC 40, IAC 300, IRCA 111, IAN 3156 and PB 28/59. The experiments were driven in two periods: 2004/2005 and 2005/2006. The samplings were monthly, being collected leaves of the clones for identification and counting of the acarids and of the exúvias in laboratory. The species observed fitófagas were: Calacarus heveae Feres, Tenuipalpus heveae Baker, Phyllocoptruta seringueirae Feres, Schevtchenkella petiolula Feres, Eutetranychus banksii (McGregor), Oligonychus gossypii (Zacher) and Tetranychus mexicanus (McGregor). The symptoms were appraised through visual exam with attribution of notes for the leaves that are being yellow percentage and of it defoliates of the plants in every day of collection...(Complete abstract, click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ângela Maria Victoriano de Campos Soares / Coorientador: Luciane Alarcão Dias-Melício / Banca: Ramon Kaneno / Banca: Sueli Aparecida Calvi / Banca: Fabiane Gal Frantz / Banca: Fatima Regina Vilani Moreno / Resumo: A paracoccidioidomicose é uma micose sistêmica causada pelo fungo dimófico Paracoccidioides brasiliensis, que é endêmico na América Latina. As células fagocitárias desempenham um papel importante durante a resposta imune inata contra o Pb, e se tornaram alvo de estudos neste sentido. Em especial, os neutrófilos são capazes de destruir microrganismos através de três mecanismos: fagocitose, seguida pela morte em fagolisossoma, secreção de agentes microbicidas e através do mais recente mecanismo descoberto, a netose, que consiste na liberação de redes extracelulares a partir dos neutrófilos (NETs), constituídas por proteínas granulares associadas a cromatina. Neste estudo demonstramos pela primeira vez que leveduras de P. brasiliensis induzem NETs in vitro principalmente através da ligação pelo receptor dectina-1 presente nos neutrófilos. Estas estruturas foram demonstrados através de microscopia eletrônica de varredura, e os componentes específicos das NETs: histona, elastase e DNA foram evidenciados a partir da microscopia eletrônica de imunofluorescência confocal. As leveduras foram capturadas pelas NETs, o que revelou um importante papel destas esrtruturas: impedir a disseminação do fungo. Além disso, o tratamento das co-culturas com DNAse, que degradou as NETs evidenciou aumento da sobrevivência do fungo, o que denota sua capacidade microbicida / Abstract: Paracoccidiodomycosis is a systemic mycosis caused by the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis, which is endemic in Latin America. Since phagocytic cells play an important role during innate immune response against this fungus, we have studied the relationship between human neutrophils (PMNs) and P. brasiliensis, focusing on the effector mechanisms of these cells. Neutrophils can destroy microrganisms using at least 3 distint mechanisms: phagocytosis followed by destruction in a phagolysossome, secretion of antimicrobial molecules, and the more recently identified netosis, involving the release of neutrophil extracellular traps ( NETs) that are constituted by chromatin associated with different granule proteins with antimicrobial activities. Here, we showed for the first time, that yeast cells from P. brasiliensis strain 18 are able to induce the release of NETs in vitro, by binding to dectin-1 receptor on human neutrophils. These structures were evidenced by scanning electron microscopy, and specific NETs compounds such as histone and elastase were shown by confocal microscopy. Fungi were ensnared by NETs, denotting the role of these structures in confining infection, avoiding dissemination. In addition, disruption of NETs by treatment of cocultures with DNAse increased the fungi survival, evidencing their killing capacity / Doutor

Resumo: A paracoccidioidomicose (PCM) é micose sistêmica causada pelos fungos dimórficos Paracoccidioides brasiliensis (espécies cripticas S1, PS2, PS3) e Paracoccidioides lutzii (Pb01-like espécies), endêmica na América Latina, principalmente no Brasil. A capacidade de causar micose com grande variedade de manifestações clínicas, desde formas localizadas até doença disseminada evoluindo para letalidade, depende da virulência do fungo e de sua habilidade em interagir com as estruturas superficiais do hospedeiro e invadi-las, e a resposta imunológica deste último. P. brasiliensis tem a capacidade de aderir e invadir células epiteliais de linhagens humanas e animais e o processo de invasão do fungo afeta a estrutura do citoesqueleto, interferindo em aspectos morfológicos da actina, tubulina e citoqueratina, indicando a participação funcional dos microfilamentos e microtúbulos neste mecanismo. Em estudos prévios foi identificada adesina de P. brasiliensis de 30 kDa, ligante de laminina, caracterizada como uma proteína pertencente à família 14-3-3. O objetivo deste trabalho foi produzir a proteína recombinante, verificar o papel desta na interação do fungo com células epiteliais pulmonares de linhagem contínua. Para tanto, com o anticorpo anti-14-3-3 foi verificada a sua localização, tanto nas formas leveduriformes do fungo como no processo de interação. A clonagem foi realizada em vetor de clonagem pCR2.1-TOPO - pET32a, para permitir a expressão da proteína Pb14-3-3r com cauda de histidina no espaço periplasmático de E. coli. A fração periplasmática foi purificada por cromatografia de afinidade seguida de eletroeluição. Foi possível verificar alteração do padrão de distribuição de actina quando as células foram tratadas com a proteína recombinante e nativa. A proteína 14-3-3 apresenta distribuição ubíqua na... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis caused by the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis (cryptic species S1, PS2, PS3) and Paracoccidioides lutzii (Pb01-like species), endemic in Latin America, mainly Brazil. The ability to cause mycosis with a variety of clinical manifestations, from localized forms to disseminated disease progressing to lethality, possibly depends on the relationship between the virulence of these, the ability to interact with the surface structures of the host and invade them, and this immune response. P. brasiliensis has the ability to adhere and o invade human and animal epithelial cells lineage and the process of invasion of the fungus affects the structure of the cytoskeleton, morphological interfering with actin, tubulin and cytokeratin morphology, indicating the functional participation of microfilaments and microtubules in this mechanism. Previous study identified a 14-3-3 protein (30 kDa) that acts as a P. brasiliensis adhesin (laminin ligand) and this protein contributes to the virulence of this important fungal pathogen. The objective of this study was to produce recombinant protein, to verify the role of the interaction of the fungus with lung epithelial cells of continuous lineage. To do so, with the anti-14-3-3 was verified its location, both in the forms of the fungus and yeast in the process of interaction. The cloning was done in cloning vector pCR2.1-TOPO - pET32a to allow expression of protein Pb14-3-3r-tailed histidine periplasmic space of E. coli. The periplasmic fraction was purified by affinity chromatography followed by electroelution. It was possible to see change in the pattern of distribution of actin when cells were treated with recombinant and native protein. The 14-3-3 protein has ubiquitous distribution in yeast cells of P. brasiliensis (strain 18/S1) have a certain... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Cleslei Fernando Zanelli / Banca: Alexandra Ivo de Medeiros / Banca: Clayton Luiz Borges / Banca: Oscar Zaragoza Hernandez / Doutor