Cyclic-AMP dependent protein kinase A (PKA) regulates traffic of multiple proteins at different stages along the constitutive secretory pathway. PKA effects are regulated by protein phosphatases, which reverse the actions of PKA by dephosphorylation of PKA-substrates. Localization of specific PKA effects is mediated by the binding of A-kinase anchoring proteins (AKAPs). Apolipoprotein E (apoE) is an important regulator of lipid metabolism and atherosclerosis, and represents a large proportion of total protein constitutively secreted from macrophages. The signalling and trafficking pathways regulating secretion of apoE are unknown. Catalase is a peroxisomal enzyme which contributes to defence against hydrogen peroxide (H2O2). The primary hypothesis of this thesis is PKA and related protein phosphatase pathways are involved in the regulation of apoE secretion. The secondary hypothesis is that these pathways also regulate cellular clearance of H2O2. In Chapter Three, I have investigated the role of PKA in apoE secretion from primary human macrophages. Structurally distinct inhibitors of PKA (H89, KT5720, inhibitory peptide PKI14-22) all decreased basal secretion of apoE by between 50-80% whereas apoE mRNA or cellular protein are unaffected. Disruption of PKA-AKAP anchoring also significantly inhibited apoE secretion from human macrophages. Secretion of apoE was not immediately stimulated by PKA activity, suggesting that although PKA activity may be permissive for apoE secretion, it is in itself insufficient to stimulate apoE secretion above basal levels. Data from confocal microscopy and live cell imaging revealed PKA inhibition paralysed apoE vesicular movement from and to the plasma membrane. In Chapter Four, I investigated the effects of protein phosphatase 2B (PP2B) inhibition on apoE secretion by cyclosporin A (CsA). This was found to dose- and time-dependently inhibit secretion of apoE from primary human macrophages and increased cellular accumulation of apoE without affecting apoE mRNA levels. The role of PP2B in regulating apoE secretion was confirmed by using additional peptide and chemical inhibitors of PP2B. This effect was independent of the known inhibition of ABCA1 by CsA. Live cell imaging and confocal microscopy all demonstrated that inhibition of PP2B did not affect the apparent cellular distribution of apoE. Biochemical and microscopy studies indicated distinct mechanisms for PKA and PP2B regulation of apoE secretion. Chapter Five identified PKA-anchoring AKAPs in human macrophages, and investigated AKAP220 expression and its role in PKA-dependent processes relevant to atherosclerosis. AKAP220 protein was absent in human monocytes but was detectable after their differentiation into macrophages, with stable expression during late stages of maturation. It was also present in Chinese Hamster Ovary cells (CHO) cells. AKAP220 silencing had no effects on lipoprotein cholesteryl ester accumulation, total cellular apoE levels, apoE secretion or cholesterol efflux from human macrophages. Confocal microscopy in CHO cells revealed peroxisomal localisation of AKAP220. Catalase activity was confirmed to be PKA-regulated process, and AKAP220 was found to be a negative regulator of catalase activity, such that cell lysate catalase activity increased during AKAP220 silencing. AKAP220 silencing also decreased basal secretion of H2O2, detected using a sensitive and specific Amplex?? Red assay kit from intact CHO monolayers. In conclusion, this thesis has provided evidence that apoE secretion occurs via PKA- and PP2B-dependent pathways in human macrophages, and has identified the A-kinase anchoring protein AKAP220 as a regulator of cellular H2O2 clearance. These results will provide a basis for future investigations into the roles of PKA-related pathways in apoE secretion and catalase activity.

Resumo: A beta talassemia heterozigota pode ser decorrente de mutações β 0 ou β + , de acordo com ausência ou redução na produção das cadeias da beta globina, respectivamente. Poucos estudos na literatura correlacionam possíveis efeitos deletérios dessas mutações, quando em heterozigose. A coerança com mutações em genes, não localizados no cluster do gene da β-globina, podem modificar o fenótipo talassêmico. O estresse oxidativo gerado pelo aumento de ERO é um dos mecanismos responsáveis pala aceleração da apoptose celular. Há evidências que o excesso de cadeias alfa, mesmo em pequenas quantidades, seja suficiente para iniciar a geração de ERO e, portanto, estresse oxidativo em beta talassêmicos heterozigotos. Nas formas homozigotas ou com dupla heterozigose os pacientes apresentam anemia grave, transfusão dependente, e a sobrecarga de ferro é uma das mais frequentes e graves complicações nesses indivíduos. Na forma heterozigota a ocorrência de sobrecarga de ferro é rara, porém alterações no perfil do ferro são observadas. O objetivo desse trabalho foi analisar a influência dos níveis de ferritina sérica, das mutações no gene da β-globina, das mutações no gene HFE, da atividade das enzimas de detoxificação GST e CAT e dos polimorfismos das GSTs na expressão fenotípica de indivíduos beta talassêmicos heterozigotos. Foram avaliados 158 portadores de beta talassemia heterozigota diagnosticados previamente por metodologias clássicas. Todos adultos, de origem caucasóide, residentes na região Central do Estado de São Paulo e acompanhados em serviços públicos ou privados da região. O grupo controle foi composto de 24 adultos, caucasóides e residentes na mesma região. A avaliação hematológica foi realizada pelo hemograma, em contadores automatizados de células e quantificação das sub frações de Hb A2 e Hb F por HPLC. O perfil... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Beta thalassemia may occur due to mutations β 0 or β +, according to absence or reduction in the production of beta globin chains, respectively. Few studies have been done correlating possible deleterious effects of these mutations, when in heterozygous. Co-inheritance with mutations in the genes, not located in the cluster of β-globin gene may modify the phenotype of the thalassemic. Stress oxidative generated by the increase of ROS is one of the mechanisms responsible for the acceleration of cell apoptosis. There are evidences that alpha chains in excess, even in small quantities, are sufficient to start ROS generation and thus oxidative stress in heterozygous beta thalassemic. In homozygous form or genetic heterozygous compound present severe anemia, transfusion dependent and iron overload is one of the complications more frequent and severe in these patients. In the heterozygous form the presence of iron overload is rare, but alterations in the profile of iron are observed. The aim of this study was to examine influence of the levels of serum ferritin, the mutations in the β-globin gene, the mutations in the HFE gene, activity of enzymes detoxification, GST and CAT, and polymorphisms of GSTs in the expression phenotypic of individuals heterozygous beta thalassemic. We evaluated 158 patients with beta thalassemia heterozygous previously diagnosed by classic methodologies. They were all adults, Caucasian origin, residents in the Central Region of São Paulo state and accompanied in public or private services of the region. The control group consisted of 24 adults, Caucasians and residents in the same region. Hematologic evaluation was carried out by hemogram, in automated counters of cells and quantification of the subfractions of Hb A2 and Hb F by HPLC; the iron profile was based on the transferrin saturation , calculated on the serum iron and total iron binding capacity... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Claudia Regina Bonini-Domingos / Coorientador: Eduardo Alves de Almeida / Banca: Elvira Maria Guerra Shinohara / Banca: Ivan Lucena Angulo / Banca: Maria Stella Figueiredo / Banca: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira / Doutor

Orientador: Sony Dimas Bicudo / Banca: Eunice Oba / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Banca: Valquíria Hypólito Barnabé / Banca: Maria Madalena Pessoa Guerra / Resumo: O Objetivo deste estudo foi determinar o efeito da adição do surfactante lauril sulfato de sódio (Orvus es Paste OEP) e dos antioxidantes Trolox-C (6- hidroxi-2, 5,7,8-tetrametilcroman-2-acido carboxílico) e catalase ao meio diluidor, na motilidade espermática, integridade de membrana plasmática, acrossomal e mitocondrial, estádio de capacitação e geração de radicais livres no espermatozóide ovino pós-descongelação. Para isso, foram realizados dois experimentos. No Experimento 1, avaliou-se o efeito da adição do surfactante ao diluidor. O sêmen de 10 carneiros foi coletado por meio de vagina artificial e diluído para uma concentração final de 400x106 espermatozóides/mL no meio Tris-gema contendo OEP (0; 0,5 e 1%) ou no diluidor glicina-gema-leite (controle). A motilidade foi determinada pelo sistema computadorizado de análise de sêmen (CASA), a integridade de membrana pela combinação dos corantes fluorescente iodeto de propídio e diacetato de carboxifluoresceína (IP+DIC) e o estádio de capacitação pela técnica da CTC. Houve efeito significativo do tratamento em todos os parâmetros da motilidade, na integridade de membranas e na capacitação espermática. A adição de 0,5% ou 1% de OEP ao diluidor TRIS-gema aumentou significativamente (P<0,05) a motilidade, a integridade de membranas e o percentual de espermatozóides não capacitados, comparado ao controle. O diluidor TRIS 1 foi selecionado para utilização como meio base para o experimento 2. No Experimento 2, foi determinado o efeito da adição dos antioxidantes ao diluidor. O sêmen foi coletado e os seguintes tratamentos foram aplicados: T1- TRIS (controle), T2- TRO+ (diluidor T1 + Trolox, 50mM/108 espermatozóides), T3-CAT+ (diluidor T1 + catalase, 50mg/mL), T4- TRO/CAT+ (diluidor T1 + Trolox e Catalase, nas mesmas concentrações utilizadas no T2 e T3)...(Rsumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to determine the effect of addition of surfactant sodium lauryl sulfate (Orvus es Paste OEP), and antioxidants, Trolox-C (6- hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxilic acid) and catalase to an extender on the motility, plasmatic and acrosomal and mitochondrial membrane integrity, capacitation status and free radicals generation of post thaw ram spermatozoa. Two experiments were performed. In Experiment 1, the effect of addition of surfactant was evaluated. The semen was collected from ten rams by artificial vagina and it was diluted to a final concentration of 400x 106 sperm/mL in egg yolk-Tris extender containing OEP (0, 0.5 and 1%) or glycinegg yolk-milk extender (control). The sperm motility was evaluated using a computer-assisted sperm analysis (CASA); the membrane integrity was verified using the fluorescent stains (propidium iodide and carboxyfluorescein diacetate) and the capacitation status determined by CTC technique. There was a significant treatment effect in all parameters involving sperm motility, membrane integrity and spermatic capacitation. The addition of OEP 0.5% or 1% to the egg yolk-Tris extender improved (P<0.05) the motility and membrane integrity and the percentage of uncapacited spermatozoa compared to the control. Then, the TRIS 1 extender was selected to be used at experiment 2. Experiment 2: the Exp 2 aimmed to determine the effect of antioxidants addition to the extender. Semen was collected and these treatments were applied: T1 - egg yolk-Tris extender (control), T2- TRO+ (T1 extender +Trolox, 50mM/108 spermatozoa), T3- CAT+ (T1 extender + catalase, 50mg/mL) and T4 TRO/CAT+ (T1 extender + trolox and catalase on the concentrations used in T2 and T3). Motility was determined by CASA system, plasmatic and acrosomal 4 membrane integrity and mitochondrial function were evaluated with PI, FITCPSA and JC-1 association...(Complete abstract, click electronic address below) / Doutor

Orientador: Carlos Alexandre Costa Crusciol / Banca: Gaspar Henrique Korndorfer / Banca: João Domingos Rodrigues / Banca: Rogério Peres Soratto / Banca: Rafaella Rossetto / Banca: Benetido Apparecido Braz / Resumo: O trabalho teve por objetivo estudar a eficácia da aplicação foliar de boro e silício associados ou não à maturadores, com diferentes mecanismos de ação, e as alterações fisiológicas e bioquímicas na cana-de-açúcar, suas implicações na produtividade, qualidade tecnológica e rebrota da soqueira, tanto em aplicação de início como de final de safra. Para tanto, a pesquisa foi composta de experimentos conduzidos nos meses de setembro de 2006 e 2007 (momento da aplicação dos tratamentos envolvendo a variedade de cana-de-açúcar de maturação médiatardia SP80-3280) e março de 2007 e 2008 (momento da aplicação dos tratamentos envolvendo a variedade de cana-de-açúcar de maturação precoce RB855453). Os experimentos foram conduzidos nas Fazendas Santa Maria e Bosque, situadas no município de Igaraçu do Tietê, Estado de São Paulo, pertencente ao GRUPO COSAN - Unidade Barra. Os tratamentos consistiram na aplicação de 16 (dezesseis) tratamentos, divididos em 2 (dois) experimentos distintos, representados conforme a seguir: Experimento 1 - aplicação de 3 (três) maturadores com diferentes mecanismos de ação, sendo classificados como inibidores (Glifosate e Sulfometuron metil) e retardante do crescimento vegetal (KNO3) e a testemunha (maturação natural), associados ou não à aplicação foliar de boro e; Experimento 2 - aplicação dos maturadores supracitados e a testemunha (maturação natural), associados ou não à aplicação foliar de silício. O delineamento experimental utilizado nos experimentos foi o em blocos casualizados, com cinco repetições. O estudo da aplicação foliar de boro, associado ou não a compostos químicos com diferentes mecanismos de ação (Glifosate, KNO3 e Sulfometuron metil), no início das safras 2007 e 2008, possibilitou as seguintes conclusões: a) o micronutriente isolado ou associado aos agentes químicos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The work aimed to study the effectiveness of foliar application of boron and silicon, with and without maturation, with different mechanisms of action, and physiological and biochemical alterations in sugarcane, its implications on productivity, quality and technological regrowth stump, both application early as the end of harvest. For this, the research consisted of experiments conducted during September 2006 and 2007 (when the treatments involving the variety of sugarcane in medium-late maturing SP80-3280) and March 2007 and 2008 (when the treatments involving the variety of sugarcane early ripening RB855453). The experiments were conducted in Santa Maria and Bosque Farms, located in the municipality of Igaraçu Tietê, São Paulo, which belongs to the group COSAN - Barra. The treatments consisted of applying 16 (sixteen) treatments, divided into 2 (two) separate experiments, represented as follows: Experiment 1 - the application of three (3) maturation with different mechanisms of action and is classified as inhibitors (Glyphosate and Sulfomethuron methyl) and plant growth retardant (KNO3) and control (natural ripening), with and without foliar application of boron and Experiment 2 - maturation application above and the control (natural ripening), associated or not with foliar application of silicon. The experimental design used in the experiments was a randomized block with five replications. The study of foliar application of boron, with or without the chemical compounds with different mechanisms of action (Glyphosate, KNO3 and Sulfomethuron methyl) at the beginning of the harvest 2007 and 2008, allowed the following conclusions: a) the micronutrient alone or in combination with agents chemical (Glyphosate, KNO3 and Sulfomethuron methyl) induced significant changes in acid invertase activity and neutral, albeit as different intensities and the mechanism of action of chemical... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-02-21T00:14:46Z No. of bitstreams: 1 JulianaGabrielaSilvaDeLima_DISSERT.pdf: 2326207 bytes, checksum: 72dd0aa19271777e0700d9c307ad79e7 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-03-03T21:38:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 JulianaGabrielaSilvaDeLima_DISSERT.pdf: 2326207 bytes, checksum: 72dd0aa19271777e0700d9c307ad79e7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-03T21:38:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JulianaGabrielaSilvaDeLima_DISSERT.pdf: 2326207 bytes, checksum: 72dd0aa19271777e0700d9c307ad79e7 (MD5) Previous issue date: 2016-09-16 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Durante o desenvolvimento p?s-germinativo, o d?ficit h?drico e concentra??es t?xicas de sais podem afetar processos dos tecidos cotiledonares, como o crescimento, a atividade de enzimas e a mobiliza??o das reservas lip?dicas, al?m de gerar um desequil?brio redox celular. No entanto, os estudos geralmente relatam altera??es metab?licas ao longo do desenvolvimento sob estresses aplicados apenas no momento da embebi??o. Visto isso, o objetivo desde estudo foi avaliar as mudan?as fenol?gicas e fisiol?gicas ocasionadas pelos estresses h?drico, induzido por polietilenoglicol (PEG-8000), e salino, induzido por NaCl, aplicados no momento da embebi??o ou durante a fase de transi??o semente-pl?ntula. Adicionalmente, o estudo tamb?m teve como finalidade caracterizar a atividade das enzimas APX, CAT e SOD e a express?o das enzimas APX, CAT, ICL e MLS das pl?ntulas de c?rtamo de pl?ntulas submetidas aos estresses apenas durante a fase de transi??o semente-pl?ntula. Verificou-se que as pl?ntulas sofreram altera??es fenol?gicas e fisiol?gicas diferentes de acordo com o momento de aplica??o do NaCl e do PEG. Os tratamentos realizados durante a transi??o semente-pl?ntula afetaram em menor grau o crescimento das ra?zes, a taxa e o ?ndice de velocidade de germina??o do que a aplica??o de NaCl e PEG no momento da embebi??o. Entretanto, o efeito do PEG sob os par?metros fenol?gicos e fisiol?gicos avaliados foi mais severo em rela??o ao observado para o NaCl independentemente do momento de aplica??o dos tratamentos. Interessantemente, durante a transi??o semente-pl?ntula, os teores de H2O2 e de lip?deos peroxidados nas pl?ntulas controle sofreram intenso aumento durante o estabelecimento. Por?m, ambos os estresses induziram diminui??es nos teores de clorofilas, carotenoides, H2O2 e lip?deos peroxidados, quando comparado ao controle, apesar das plantas submetidas aos tratamentos apresentarem consider?vel diminui??o na atividade da SOD e CAT. Estas redu??es tamb?m ocorreram a n?vel transcricional, uma vez que n?o houve express?o da CAT durante o tratamento com NaCl, sendo observada apenas 72 h ap?s o tratamento com PEG. J? a atividade e express?o da APX se mantiveram altas nas pl?ntulas tratadas, assim como a express?o da MLS. A partir disto, conclu?mos que condi??es estressantes especificamente durante a transi??o semente-pl?ntula podem interferir no processo de sinaliza??o induzido por H2O2 necess?rio ao completo estabelecimento, ocasionando atrasos no in?cio do metabolismo fotossint?tico. Al?m disso, o sistema da APX pode ter um importante papel na manuten??o deste processo. / During seed?s post-germinative development, drought and toxic ionic concentrations affect physiological and metabolic processes of cotyledonary tissues, such as growth, enzyme activity and mobilization of lipid reserves, as well as contribute to a cellular redox imbalance. However, studies generally report metabolic changes throughout the development under stress conditions applied only at the time of soaking. Therefore, this study aimed to evaluate the phenological and physiological changes caused by Poliethyleneglycol induced-osmotic stress (PEG-8000) and NaCl induced-salt stresses applied during soaking or during seed-to-seedling transition. In addition, the present work characterizes the activity of APX, CAT and SOD enzymes and APX, CAT, ICL and MLS mRNA expression of safflower seedlings subjected to stress applied only at the seed-to-seedling transition stage. It was observed that seedlings suffered phenological and physiological changes according to application time of NaCl and PEG treatments. During the seed-to-seedling transition, stress conditions affected root growth, germination rate and germination speed index in lower levels than when they are applied at the time of soaking. PEG-induced osmotic stress exerts more severe effects on the evaluated phenological and physiological parameters, regardless of application time. Interestingly, during seed-to-seedling transition, the H2O2 and lipid peroxidation levels in control seedlings showed an intense increase during establishment. Conversely, both stresses induced decreases in chlorophyll, carotenoids, H2O2, and peroxidized lipid levels when comparing to control, even though stressed plants presented marked reductions in SOD and CAT activities. These reductions were also at the transcriptional level, since CAT mRNA expression was only observed after 72 h of PEG treatment and not observed at all during NaCl treatment. On the other hand, APX activity and expression remained high during both treatments, as well as MLS mRNA expression. Taking into account all the obtained results, we conclude that specific stress conditions during seed-to-seedling transition may interfere in the H2O2 signalization needed to complete establishment, causing delays on the beginning of photosynthetic metabolism. Also, it seems that APX system may have an important role in maintenance of this process.

Submitted by Eduardo Barros de Almeida Silva (eduardo.philippe@ufpe.br) on 2015-04-17T12:44:08Z No. of bitstreams: 2 Tese Henriqueta Dias Cardoso.pdf: 5265290 bytes, checksum: e2e8c3ba450de08f6e92ede26a203fc0 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T12:44:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese Henriqueta Dias Cardoso.pdf: 5265290 bytes, checksum: e2e8c3ba450de08f6e92ede26a203fc0 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-02-26 / FACEPE / Os ácidos graxos essenciais (AGEs) têm sido indicados como potenciais agentes preventivos e terapêuticos em uma grande variedade de doenças neurodegenerativas assim como indispensáveis para o desenvolvimento cerebral. O principal objetivo deste trabalho foi investigar os mecanismos relacionados com a perda de neurônios dopaminérgicos induzida pela deficiência crônica em AGEs previamente detectada na substância negra (SN) de ratos Wistar jovens (J), estendendo a análise também a animais adultos (A). Para isso, foram utilizadas dietas balanceadas e que diferiram apenas na fonte lipídica, sendo óleo de soja para os grupos controles (C) e óleo de coco para os grupos experimentais (E). As dietas foram fornecidas às mães a partir do acasalamento e mantidas por uma (F1) ou duas (F2) gerações. Marcadores de insulto oxidativo: lipoperoxidação (LP), atividade das enzimas superóxido dismutase total (SOD-t), catalase (CAT) na SN e corpo estriado (CE) foram avaliados em animais AF1 e em JF2 e AF2. Indicadores de neurodegeneração na SN e CE destes animais foram avaliados utilizando a técnica de marcação com o fluoróforo, Fluoro Jade C. Análise quantitativa do tamanho e nº de neurônios dopaminérgicos e da distribuição de células imunorreativas ao fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) foi realizada em animais AF2. Os níveis de nitrito, como indicador da produção de óxido nítrico na SN e CE, foram analisados em animais JF2 e AF2. A dieta experimental reduziu em ~28%, ~50% e ~60% os níveis de ácido docosahexaenóico (DHA) na SN dos grupos experimentais AF1, JF2 e AF2 respectivamente, comparado aos seus controles. Nos animais EAF1 um aumento em ~17% e ~45% na atividade da SOD-t foi observado na SN e CE comparado ao grupo controle, o evitou níveis danosos de lipoperoxidação. Por outro lado, um aumento nos níveis de lipoperoxidação (~34%) foi detectado na SN de animais EJF2, acompanhados de não reatividade da SOD-t e de uma redução em 4,8 vezes na atividade da CAT. Sinais de neurodegeneração foram evidenciados em neurônios dopaminérgicos e não dopaminérgicos da SN do grupo EJF2. No CE, o aumento da LP em ~39% foi acompanhado de redução em 3,8 vezes e 2,8 vezes da atividade da SOD-t e CAT, respectivamente, só foram observados nos animais do grupo EAF2. A dieta experimental não alterou os níveis de nitrito na SN, mas aumentou de forma significativa estes níveis no CE de animais jovens (30%) e adultos (1,8 vezes). A deficiência crônica em DHA até a idade adulta comprometeu o crescimento do corpo celular e aumentou a perda de neurônios dopaminérgicas na SN rostro-dorso-medial (~35%) afetando também aqueles localizados na região caudo-ventro-lateral deste núcleo. Uma redução de ~22% no número de células BDNF+ foi também observada na SN. Os resultados mostram que a restrição dietética em AGEs por duas gerações até a idade adulta é capaz de induzir lipoperoxidação na SN e CE devido a comprometimento na atividade das enzimas anti-oxidantes, perda de células BDNF+ na SN e aumentados níveis de óxido nítrico no CE. Tidos em conjunto, tais mecanismos podem estar atuando de forma sinérgica na degeneração de neurônios dopaminérgicos induzida pela deficiência em DHA.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-06T11:28:13Z No. of bitstreams: 1 Maiza de Azevedo Dantas.pdf: 1426194 bytes, checksum: 248ab81985fd9f5b4bd3a17adefea341 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-06T11:28:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maiza de Azevedo Dantas.pdf: 1426194 bytes, checksum: 248ab81985fd9f5b4bd3a17adefea341 (MD5) Previous issue date: 2014-02-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Orchids stand out among the ornamental tropical due to the exotic beauty of flowers, exuberant colors and shapes. Due to the high market demand, depredation of habitat, low rate of seed germination in natural environment and slow growth, tissue culture has been presented as an important tool for the production of seedlings of orchids on a large scale, in a reduced period of time and with greater seedling quality over conventional methods. The polysaccharide chitosan has been tested as an additive in the culture medium of some species as it stand out as a growth promoter and by acting as an antioxidant. This study aimed to evaluate the influence of dietary supplementation of chitosan to the nutrient medium in vitro cultivation of Dendrobium Phalaenopsis and Cattleya labiata in liquid and solid medium. Shoots from in vitro seedlings of both species were inoculated into vials containing 30 ml of MS medium with half the ionic strength. The experiment consisted of the combination of three chitosan concentrations (0, 15 and 20 mg.L-1) with nutrient medium in solid and liquid state. Each treatment had four replicates, each with two plants. The experimental design was completely randomized with a factorial scheme of 3x2 (chitosan concentration x physical state of the medium). For 50 days were evaluated the total fresh weight, number of shoots and roots, and were determined activities of superoxide dismutase enzyme (SOD), ascorbate peroxidase (APX) and catalase (CAT). In cultivation in liquid medium, D. phalaenopsis fresh weight showed higher treatment with 20 mg.L-1 of chitosan as the highest number of shoots was observed in both media, at the same concentration. C. labiata also exhibited higher fresh weight and number of shoots in liquid medium, but at the concentration of 15 mg.L-1 of chitosan. The solid medium favored the emission of roots in both species, but inhibited the formation of shoots of C. labiata regardless of the chitosan concentration. The best development of seedlings of both species in liquid medium coincided with increased activity of SOD directly proportional to the chitosan. This activation of SOD was not accompanied by an increase in the activity of APX or CAT, showing the action of chitosan in the dismutation of superoxide without forming hydrogen peroxide. On solid medium, the action of chitosan on the antioxidative mechanism is also provided by the activation of the APX and CAT. Verified the prevalence of the liquid medium for micropropagation of the species studied and confirmed the combination of chitosan in controlling levels of reactive oxygen species in joint action with the antioxidant enzyme system action. / As orquídeas destacam-se entre as ornamentais tropicais, devido à beleza exótica das flores, exuberância de cores e formas. Em virtude da alta demanda do mercado, depredação do habitat, baixa taxa de germinação das sementes em ambiente natural e o lento crescimento, a cultura de tecidos vem se apresentando como uma importante ferramenta para a produção de mudas de orquídeas em larga escala, em período reduzido de tempo e com maior qualidade das mudas em relação aos métodos convencionais. O polissacarídeo quitosana tem sido testado como aditivo no meio de cultura de algumas espécies por se destacar como promotor de crescimento e por sua ação como antioxidante. O presente trabalho teve por objetivo avaliar a influência da suplementação de quitosana ao meio nutritivo no cultivo in vitro de Dendrobium phalaenopsis e Cattleya labiata, em meio líquido e sólido. Brotações provenientes de mudas in vitro de ambas as espécies foram inoculadas em frascos com 30 ml de meio MS com metade da força iônica. O experimento constou da combinação de três concentrações de quitosana (0, 15 e 20 mg L-1 de quitosana) em meio nutritivo em estado sólido e líquido. Cada tratamento contou com quatro repetições, cada uma com duas plantas. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado em esquema fatorial de 3x2 (concentrações de quitosana x estado físico do meio). Aos 50 dias avaliaram-se o peso fresco total, número de brotos e de raízes, e foram determinadas as atividades das enzimas superóxido dismutase (SOD), ascorbato peroxidase (APX) e catalase (CAT). No cultivo em meio líquido, D. phalaenopsis apresentou maior peso fresco no tratamento com 20 mg.L-1 de quitosana, enquanto o maior número de brotos foi observado em ambos os meios, nessa mesma concentração. C. labiata também exibiu maior peso fresco e número de brotos em meio líquido, porém na concentração de 15 mg.L-1 de quitosana. O meio sólido favoreceu a emissão de raízes das duas espécies, mas inibiu a formação de brotos de C. labiata, independente das doses de quitosana. O melhor desenvolvimento das mudas das duas espécies em meio líquido coincidiu com aumento da atividade de SOD diretamente proporcional ao da concentração de quitosana. Essa ativação da SOD não foi acompanhada pelo aumento na atividade da APX nem da CAT, evidenciando a ação da quitosana na dismutação do superóxido sem formação de peróxido de hidrogênio. Em meio sólido, a ação da quitosana no mecanismo antioxidativo se deu pela ativação da APX e CAT. Constatou-se a prevalência do meu líquido para a micropropagação das espécies estudadas e confirmou-se a ação combinada da quitosana no controle dos níveis de espécies reativas de oxigênio, em ação conjunta com o sistema enzimático antioxidativo.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-18T17:08:25Z No. of bitstreams: 1 Maria Shirlei Barros.pdf: 885582 bytes, checksum: 12e5ba4dbe4dbc6811c0b54fef726658 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-18T17:08:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria Shirlei Barros.pdf: 885582 bytes, checksum: 12e5ba4dbe4dbc6811c0b54fef726658 (MD5) Previous issue date: 2010-02-24 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / With the objective of to evaluate mitochondrial membrane potential (MMP), kinetic, the structural and ultrastructural of goat sperm submitted to freezing in skimmed-milk and glycerol, superoxide dismutase and catalase. It was used five bucks of Boer race, submitted to semen collect by artificial vagina. Semen samples were diluted in skimm-milk plus glycerol (7%), aiming have 320x106 sperm/mL, supplemented with antioxidants according to the experimental groups: G1) extender (control), G2) extender SOD + 25 IU/mL; G3) extender + SOD 50 IU/mL; G4) extender + SOD 100 IU/mL; G5) extender + CAT 25 IU/mL; G6) extender + CAT 50 IU/mL; G7) extender + CAT 100 IU/mL and G8) extender + SOD 100 IU/mL + CAT 25 IU/mL. Then the samples were packed in straws (0.25 mL), frozen and stored in cold storage cylinder (-196 oC). After thawing (37 ºC/30 seconds), aliquots of semen frozen/thawed of each group were evaluated to PMM, kinetic (CASA), structure and ultrastructure of spermatozoa, where did not observe significant difference (P>0.05) among experimental groups in parameters PMM, kinetic, iMP and iAc. In ultrastructural evaluation, fresh sperm was morphologically preserved mainly on mitochondrial membrane. Analyzes of thawed cells showed greater quantity of damages on acrosome; however, in lower percentage on G8 cells. G7 cells showed ultrastructural damages in acrosomes of 92.31%ofspermatozoas. In contrast, great percentage of spermatozoa have plasma and acrossomal membranes intacts, mainly on G2, G4 and G8 groups. Based on the ultrastructural results, it can be recommended addition of SOD (100 U/mL) and CAT (25 U/mL) on the freezing goat semen diluents with skimmed-milk and glycerol; as well as other studies should be realized using higher concentrations than 100U/mL of SOD in this diluent to freezing goat semen, associated to in vivo evaluation of these antioxidant action. / Objetivou-se com esse estudo avaliar o potencial de membrana mitocondrial (PMM), cinética, estrutura e ultraestrutura de espermatozoides caprinos, submetidos à criopreservação com diluente à base de leite desnatado e glicerol (7%), suplementado com superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT), em diferentes concentrações. Foram utilizados cinco reprodutores caprinos da raça Boer, submetidos à colheita de sêmen com vagina artificial. As amostras de sêmen foram diluídas em leite desnatado acrescido de glicerol (7%), de forma a apresentar 320x106 espermatozoides/mL, e suplementados com antioxidantes de acordo com os grupos experimentais: G1) diluente (Controle); G2) diluente + SOD 25 U/mL; G3) diluente + SOD 50 U/mL; G4) diluente + SOD 100 U/mL; G5) diluente + CAT 25 U/mL; G6) diluente + CAT 50 U/mL; G7) diluente + CAT 100 U/mL e G8) diluente + SOD 100 U/mL + CAT 25 U/mL. Em seguida, as amostras foram acondicionadas em palhetas (0,25 mL), congeladas e armazenadas em botijão criobiológico (-196o C). Após descongelação (37 oC/30 segundos), alíquotas de sêmen de cada grupo foram avaliadas quanto a PMM, cinética (CASA), iMP, iAc e ultraestrutura (microscopia eletrônica de transmissão). Não se constatou diferença significativa (P>0,05) entre os grupos experimentais dos parâmetros PMM, iMP, iAc e cinética espermática. Na avaliação ultraestrutural, espermatozoides in natura apresentaram-se morfologicamente preservados, principalmente na membrana mitocondrial. A análise das células pós-descongelação evidenciou maior quantidade de danos no acrossoma, todavia emmenor porcentual nas células do G8. O G7 apresentou dano ultraestrutural no acrossoma de 92,31% dos espermatozoides avaliados. Em contrapartida, grande porcentagem de espermatozóides apresentaram membrana plasmática e acrossomal intactas, principalmente nos grupos G2, G4, e G8. Com base nos resultados de ultraestrutura, é possível recomendar a adição de SOD (100U/mL) e CAT (25 U/mL) ao diluente de congelação do sêmen caprino à base de leite desnatado e glicerol; assim como outros estudos devem ser realizados utilizando concentrações maiores do que 100U/mL de SOD neste diluidor de congelação de sêmen caprino, associado à avaliação in vivo da ação deste antioxidante.

Leishmaniasis is an infectious disease caused by protozoa of the genus Leishmania (Kinetoplastida: Trypanosomatidae) which are transmitted by phlebotomine sand flies (Diptera: Phlebotominae). For the dixenous life cycle, leishmania parasites are equipped with enzymes that facilitate survival in both insect vectors and mammalian hosts. Gene for the enzyme catalase which protects cells from reactive oxygen species by the elimination of H2O2 and is present in related monoxenous trypanosomatids is, however, missing in Leishmania genome. Chitinase can be involved in the interaction of leishmania parasites with chitin-containing structures in sand flies (peritrophic matrix, stomodeal valve). The expression of the enzyme in amastigotes suggests its significant function also in the mammalian host. I tested the role of these enzymes in the life cycle of leishmania by direct comparison of L. mexicana mutants (i) with inserted catalase gene and (ii) with deleted chitinase gene with control groups. I conducted experimental infections of Lu. longipalpis including transmission of leishmania to the hosts by bite, tested the survival of leishmania in macrophages and performed experimental infections of BALB/c mice followed by xenodiagnoses. The experiments confirmed that the presence of catalase in leishmania does...

The high resolution structure of protein molecules and protein-protein complexes is important to investigate their functions. Today, large 3D or 2D crystals are required to obtain protein structures by X-ray crystallography or conventional Electron Microscopy, respectively. However, production of such crystals of good quality is a solely empirical procedure, which relies on screening numerous crystallization conditions. At the same time, multilayered protein crystals are often a by-product of attempts to grow 3D or 2D crystals and could be obtained more easily. So far, multilayered protein crystals have not been used in electron microscopy for structure determination, as the interpretation of an electron diffraction pattern is rather complicated. In this thesis we present the first protein structure bovine liver catalase at 4 Å resolution solved using electron diffraction data from multilayered crystals. 55 diffraction patterns (17 tilt series) were recorded and used for the reconstruction. The tilt geometry of each individual diffraction pattern was determined by a least-squares algorithm or Laue zone analysis to perform spot indexing. The phase problem was solved by molecular replacement. The influence of the missing data cone on the self-rotation function and interpretation of reconstructed map is discussed.