Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-02-25T18:49:42Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Camila Marques Queiroz.pdf: 1322318 bytes, checksum: fa38b127181cbd3fb8d4a21effd1f9e2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-25T18:49:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Camila Marques Queiroz.pdf: 1322318 bytes, checksum: fa38b127181cbd3fb8d4a21effd1f9e2 (MD5) Previous issue date: 2015-02-24 / CAPES / O aumento da incidência de casos de dengue constitui um importante problema de saúde pública mundial. A patogênese da Febre Hemorrágica da Dengue (FHD) ainda não está completamente esclarecida. A invasão do vírus às células do sistema imunológico modifica o estado normal celular, induzindo a produção e a liberação de inúmeros mediadores imunológicos como espécies reativas de oxigênio, incluindo o óxido nítrico (NO) e citocinas pró-inflamatórias (IFN-α e IFN-β, TNF-α e IL-6). A indefinição acerca do papel desses mediadores imunológico durante a infecção humana pelo dengue vírus (DENV) e possível papel na disfunção endotelial justifica a realização do presente trabalho buscando esclarecer a dinâmica da relação vírus-hospedeiro frente ao agravamento da infecção. O objetivo desse estudo foi avaliar o potencial de marcador biológico da dosagem dos níveis séricos de NO e mediadores imunoinflamatórios em pacientes diagnosticados com dengue em sua forma grave. Foram analisadas 307 amostras de soros coletadas entre 2009 a 2011. A dosagem de NO foi realizada por reação de Griess e a dosagem das citocinas pelo método ELISA, seguindo as instruções sugeridas por cada kit, buscando correlacionar os valores séricos encontrados com a gravidade das formas clínicas da doença. Como resultado, não houve diferença nos níveis séricos de NO entre pacientes com Dengue Clássica (DC) ou FHD, infecção primária ou secundária ou mesmo entre os diferentes sorotipos virais. Analisando os resultados em tempos específicos de sintomatologia, observou-se que até os 02 dias iniciais, maiores níveis de NO foram detectados em pacientes com infecção primária em relação à infecção secundária, e principalmente nos pacientes com DC em relação aos pacientes com FHD. Na dosagem do TNF-α não houve diferença entre os grupos de pacientes estudados. Observou-se diferença entre dengue primária e dengue secundária, sendo maior a produção de IFN-α nos pacientes com dengue primária. A dosagem do IFN-β foi realizada, porém não foram detectados níveis séricos mínimos dessa citocina. Observamos a circulação de três sorotipos diferentes na mesma população de estudo, porém sem associação com os níveis de citocinas circulantes. Os dados sugerem que a quantificação sérica do NO e citocinas pró-inflamatórias na população estudada não auxilia como determinação de marcador biológico de dengue para formas graves da doença. / The increased incidence of dengue cases is an important problem of global public health. The pathogenesis of Dengue Hemorrhagic Fever (DHF) is not yet fully elucidated. The invasion of the virus into immune system cells modifies the cell normality, triggering the production and release of several immune mediators. With emphasis in oxygen reactive species, for example, nitric oxide (NO) and proinflammatory cytokines (IFN-α, IFN-β, TNF-α and IL-6). The uncertainty about the role of these immune mediators during the human infection by DENV justifies the need for new research, seeking to clarify the virus-host dynamics relationship in to the aggravation of infection. The aim of this study was to evaluate the prognostic potential of NO serum levels and others proinflammatory cytokines in patients diagnosed with dengue. We analyzed 307 serum samples collected between 2009 to 2011. The NO level was evaluated with the Griess reagent and the dosage of proinflammatory cytokines by ELISA technique following the instructions suggested by each kit seeking to correlate the serum levels with the severity of the clinical forms of the disease. As a result, there was no difference in serum levels of NO in patients with Classical Dengue (DC) or DHF, primary or secondary infection or even between different serotypes. Analyzing the results at specific times of symptomatology, it was observed that up to 02 days initial, high levels of NO were detected in patients with primary infection, compared to secondary infection, especially in patients with DC compared to patients with DHF. There was no difference in TNF-α levels among the groups of patients. It were observed significant differences between primary dengue and secondary dengue, with a higher IFN-α production in patients with primary dengue. The IFN-β dosage was performed, but there were no detected minimum serum levels of this cytokine. We observed the presence of three different serotypes in the same population studied, but no association with cytokine levels. The detection of elevated levels of NO in patients with DC, in the initial days of symptomatology, reinforces the potential role of this molecule in the control of the viral infection, however, was not found difference in later times of symptomatology. The data suggest that the serum quantification of NO and inflammatory cytokines in this population does not help to determine biological marker for severe forms of dengue disease.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:54:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5251_1.pdf: 8448361 bytes, checksum: 597c18fdb4c3552df4a7902f080c08bc (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / A migrânea é uma cefaléia primária comum, sendo a queixa mais freqüente nos serviços de atendimento em Neurologia. A fisiopatologia da migrânea ainda não foi completamente elucidada e as principais estruturas envolvidas podem ser o sistema trigeminovascular, fibras autonômicas e os vários agentes vasoativos locais. Aspectos peculiares do óxido nítrico (NO) e a presença da sintase do óxido nítrico (NOS) tanto a nível periférico (endotélio, fibras nervosas ao redor dos grandes vasos cerebrais e dura-máter), como no tronco cerebral e áreas hipotalâmicas, tornam esse composto um bom candidato a mediador dos mecanismos das crises de cefaléias vasculares, especialmente a migrânea. O NO provavelmente participa da inflamação neurogênica e da ativação das fibras perivasculares que conduzem os impulsos nociceptivos para o gânglio trigeminal. Terapias com estatinas melhoram a viabilidade do NO e possuem propriedades antiinflamatórias. O presente estudo é um ensaio clínico, aberto, prospectivo e comparativo, cujos objetivos foram avaliar a ação preventiva do propranolol, amitriptilina ou sinvastatina no controle dos ataques de migrânea; e correlacionar a produção plasmática de NO com a redução do índice de cefaléia (obtido através do cálculo do produto da freqüência de crises por mês X duração da dor em horas X intensidade da dor). Um total de 357 pacientes com diagnóstico de migrânea participou do estudo no período de novembro de 2004 a março de 2006. As pacientes receberam propranolol, amitriptilina ou sinvastatina por três meses e amostras de sangue foram coletadas para a determinação plasmática do NO. Em relação ao índice de cefaléia e número de dias com migrânea, as pacientes que usaram propranolol (60 mg; 80 mg; 120 mg), amitriptilina (12,5 mg; 25 mg; 50 mg) ou sinvastatina (10 mg; 20 mg; 40 mg) apresentaram redução significativa desde o segundo mês de tratamento (p<0,001), com exceção das usuárias de amitriptilina, que apresentaram redução a partir do primeiro mês (p<0,001). Aumento significativo no nitrato plasmático (p<0,001) foi detectado nas pacientes com dor (31 ± 1 &#956;M, n=357) quando comparadas no período sem dor (28 ± 1&#956;M, n=357). A redução &#8805;50% no número de dias com migrânea ao final do terceiro mês foi significativa para os três tratamentos instituídos, porém não houve diferença na eficácia entre os mesmos. Os nitratos plasmáticos analisados na fase livre de migrânea diminuiram significativamente entre as avaliações no controle e no terceiro mês, para as pacientes tratadas com propranolol 60 mg/dia (28,1 ± 1,0 vs 20,3 ± 1,0 &#956;M, p<0,01), 80 mg/dia (28,1 ± 1,0 vs 22,3 ±1,2 &#956;M, p<0,05) e 120 mg/dia (28,1 ± 1,0 vs, 21,5 ± 1,5 &#956;M, p<0,01); para as pacientes que utilizaram a amitriptilina 12,5 mg/dia (30,1 ± 1,7 vs 22,3 ± 1,2 &#956;M, p<0,05), 25 mg/dia (30,1 ± 1,7 vs 23,0 ± 1,3 &#956;M, p<0,05) e 50 mg/dia (30,1 ± 1,7 vs 21,3 ± 1,0 &#956;M; p<0,01); e para as migranosas tratadas com sinvastatina 10mg/dia (24,82 ± 1,0 vs 16,5 ± 1,0 &#956;M, p<0,01), 20 mg/dia (24,82 ± 1,0 vs 19,9 ±1,0 &#956;M, p<0,05) e 40 mg/dia (24,82 ± 1,0 vs 20,0 ±1,0 &#956;M, p<0,05). Concluimos que a sinvastatina foi eficaz como medicação profilática na migrânea, assim como o propranolol e a amitriptilina e a redução no índice de cefaléia ocorreu paralelamente com a diminuição da produção do NO

Orientador: Benedito de Oliveira Filho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T11:00:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Teixeira_SimoneAparecida_M.pdf: 11013825 bytes, checksum: 8435b211df8f9b2d75e3e1cc42b1ace7 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Uma interação entre o sistema renina-angiotensina-aldosterona e o óxido nítrico (NO) foi inicialmente observada por Ribeiro et al. (1992) quando verificaram que na hipertensão experimental causada pela inibição da síntese do NO por análogos da L-arginina, a elevação da pressão arterial era evitada pelo tratamento concomitante com losartan, um antagonista competitivo dos receptores do tipo I de angiotensina II, verificando-se também que os níveis de atividade da renina plasmática se encontravam elevados. No entanto, os resultados obtidos por outros autores sobre tal atividade são um tanto controversos. Ao longo do presente trabalho de tese são mostrados os resultados obtidos sobre o desenvolvimento e padronização de um método para quantificar a atividade da enzima conversora de angiotensina I (ECA) tecidual proveniente de órgãos de ratos. Posteriormente, esta metodologia foi aplicada para avaliar o efeito do tratamento crônico com um inibidor da NOS em ratos (L-NAME, 20 mg/animal/dia, durante 1, 2, 4 e 8 semanas, v.o.) sobre a atividade da ECA proveniente de homogenatos de fígado, pulmão, coração e rim. Ratos tratados com L-NAME mostraram valores de pressão arterial média elevados enquanto que o grupo de animais tratados prévia e simultaneamente com o inibidor competitivo da ECA, o maleato de enalapril, não desenvolveram hipertensão. A atividade da ECA medida em homogenatos de coração, fígado e pulmão não mostrou nenhuma diferença significante entre os grupos tratado e não tratado (controle) a qualquer tempo, mas uma queda na atividade da ECA renal foi observada após 8 semanas de tratamento com L -NAME. Estes resultados sugerem que a ativação do sistema renina-angiotensina-aldosterona decorrente da inibição da NOS não é acompanhada por aumento da atividade de ECA tecidual em ratos. Mecanismos de retroalimentação negativa poderiam explicar a diminuição observada na atividade da ECA renal após um período de 8 semanas de tratamento com L-NAME / Abstract: An interaction between the renin-angiotensin-aldosterone system and nitric oxide (NO) was initially observed by Ribeiro et aI. (1992) when they verified that in experimental hypertension caused by NO synthesis blockade, the raise in arterial pressure could be prevented by concomitant treatment with losartan, a competitive type I angiotensin II receptor antagonist and that plasma renin activity was also increased. However, reports by other investigators have not always confirmed the latter observation. The present work describes the development and standardization of a method for the in vitro quantification of angiotensin I converting enzyme (ACE) activity in rat organs. The method was used to evaluate ACE activity in liver, lung, heart and kidney homogenates from rats treated chronically with the NO synthase (NOS) inhibitor L-NAME (20 mg/animal/day, orally, for 1,2,4 or 8 weeks). L-NAME-treated rats developed hypertension while the animals previously and simultaneously treated with enalapril maleate, a competitive ACE inhibitor, did not. The ACE activities of heart, liver and lung homogenates were not significantly different between the treated and non-treated groups at any time, but a significant decrease in renal ACE activity was observed in the L-NAME treated animals after eight weeks of treatment. These results suggest that activation of the renin-angiotensin-aldosterone system in rats as a result of chronic NOS inhibition is not accompanied by an increase in tissular ACE activity. Negative feed-back mechanisms could explain the decrease in renal ACE activity observed after eight weeks of treatment with L-NAME / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Jose Antonio Rocha Gontijo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-27T11:25:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rossi_CintiadeLima_M.pdf: 5938205 bytes, checksum: 808ca84dcaae6fbc7da2331443d929b5 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: O diabetes mellitus é uma doença metabólica, caracterizada por uma ação insuficiente da insulina, seja pela ausência deste hormônio ou pela resistência a sua atividade. De acordo com estas características o diabetes mellitus pode ser classificado como Diabetes Mellitus Insulino Dependente ou diabetes tipo 1 e, Diabetes Mellitus Não Insulino Dependente ou tipo 2. Inúmeras alterações funcionais e histológicas são observadas em diversos órgãos como conseqüência evolutiva desta doença. Alterações glomerulares e vasculares renais são exaustivamente descritas, entretanto pouco se conhece a respeito da função tubular no diabetes mellitus clínico ou experimental. O objetivo do presente trabalho foi definir e caracterizar alguns parâmetros funcionais do néfron e modificações da pressão arterial relacionados ao desenvolvimento da neftopatia diabética e sua possível relação com a atividade do sistema nitroxidérgico. O estudo funcional renal foi estimado através do clearance de creatinina endógena e do clearance de lítio, para avaliação da filtração glomerular e do manuseio tubular de sódio, respectivamente. Todos os procedimentos foram realizados em ratos Wistar-Hannover, acordados, não-restritos em gaiolas metabólicas individuais. Os principais resultados observados mostram que o desenvolvimento do diabetes mellitus experimental, induzido por estreptozocina, promoveu um significativo acréscimo na excreção renal de sódio, estudada seja sob a forma de carga excretada ou relacionada à filtração glomerular como ftação de excreção. A elevação na excreção urinária de sódio ocorreu já na primeira semana após a indução do diabetes-experimental. A natriurese foi acompanhada por uma significativa elevação da caliurese. O sítio de rejeição de sódio identificado pelo estudo através do clearance de lítio ficou restrito aos segmentos mais distais do néfron (FEPPNa, fração de excreção pós-proximal), não havendo aparentemente participação dos segmentos proximais. As modificações observadas no manuseio tubular de sódio, ocorreu independentemente de modificações significativas da filtração glomerular e da pressão arterial. Não conseguimos também demonstrar uma participação efetivado sistema nitroxidérgico, através de seu bloqueio com L-NAME, sobre os fatores que precocemente, modificam a reabsorção de sódio neste modelo experimental. Assim, concluímos que modificações tubulares precoces relacionadas ao transporte tubular de sódio, podem ocorrer em animais diabéticos, tratados com estreptozocina, independentemente de modificações significativas na pressão arterial, na filtração glomerular ou na atividade da NO sintetase / Abstract: The role ofthe kidney in the control ofhydrosaline homeostasis in patients or experimental models with diabetes mellitus has been striking demonstrated by several studies. Recently, growing evidence suggesting that precocious tubular dysfunction may precede glomerular modifications and influence directly the renal function and cardiovascular homeostase. However, no data are available that examine in details the sodium and potassium tubule handling changes at time-dependent fashion in models of streptozotocin-induced diabetes mellitus (DM). AIso, we hypothesized that a possible nitroxidergic contribution may modulate the renal function and consequently changing the urinary sodium excretion. To test this hypothesis, we investigated the effects of streptozotocin-induced diabetes mellitus on tubule sodium handling of unanesthetized, unrestrained rats and their controIs, by lithium c1earance. AIso, to examine the influence of nitroxidergic system inhibition on renal function rats were assigned randomly to one of four groups: (1) control rats, (2) streptozotocin-induced (STZ) DM rats, (3) L-NAME treated rats and (4) STZ-induced DM, L-NAME treated rats. In the current studies, we demonstrated that diabetic rats treated with streptozotocin showed a substantial and time-related increase in the urinary output of sodium (Control FENa + , first week: 0.I27:t0.009 %; forth week: 0.132 :t0.02 % and STZ induced DM FENa+ , first week: 0.244 :t0.05 %; forth week:0.529:t0.009 %) and potassium (Control FEK+ , first week: 0.085 :tO.OI %; forth week: 0.118:t0.03 % and STZ induced DM FEK+ , first week: 0.118:t0.Ol %; forth week:0.276:t0.02 %), and did not confirm the hypothesis that the renal ion excretion in STZ-induced DM, L-NAME treated rats is, at least in part, related to changes in NOS activity (L-NAME FENa+ , first week: 0.459 :t0.07 %; forth week: 1.190 :t0.25 % and STZ-induced DM L-NAME- treated FENa+ , first week: 0.732:tO.20 %; forth week: 1.797:t0.22 %). In addition, we showed that renal sodium handling changes occurred by increasing post-proximal tubule sodium rejection (FEPPNa+) despite an unchanged glomerular filtration rate (CCr) in the proportion ofthe sodium load filtered and arterial blood pressure. Thus, the observed increase in renal sodium and potassium excretion may be due to the inability of renal tubules to handle the electrolytes, with a promoted disruption in glomerotubular balance. Together, these fmdings may suggest that a possible precocious misleading of post-proximal tubular segment of nephron without any change of glomerular filtration rate or hemodynamic dysfunction in STZ-induced rats. Further studies are required to investigate and understand this tubular involvement in dysfunctional diabetes-tubular kidney interaction / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador : Benedito de Oliveira Filho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T07:26:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Teixeira_SimoneAparecida_D.pdf: 13269459 bytes, checksum: 1a0894c0bcf3d4f0833e532b94fe8018 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: o óxido nítrico (NO) é um radical livre produzido endogenamente a partir da oxidação de um dos nitrogênios do grupo guanidino terminal do aminoácido L-arginina por oxigênio molecular. Essa biossíntese é catalisada por uma família de enzimas denominadas óxido nítrico sintases (NOS), as quais podem ser inibidas por análogos estruturais da L-arginina que possuem grupos substituintes no grupo guanidino terminal. O NO tem significativa reatividade com espécies químicas diversas tais como oxigênio, ânion superóxido, grupos tióis, metais de transição, etc; sendo que os íons nitrito (NO2-) e nitrato (NO3-) são os produtos finais estáveis da oxidação do NO no entorno fisiológico. NO, e espécies reativas derivadas do nitrogênio (NDRS) em geral, participam de vários processos fisiológicos no cérebro, incluindo neurotransmissão, neuromodulação e plasticidade sináptica, assim como de processos patológicos tais como neurodegeneração e neuroinflamação. Altos níveis de NO têm sido associados com a atividade da encefalomielite alérgica experimental (EAE), modelo empregado amplamente em animais para o estudo da esclerose múltipla em humanos. Neste trabalho, nós caracterizamos a atividade e a expressão das isoformas das NOS, bem como a presença de resíduos protéicos de nitrotirosina (NT, como indicador da produção de peroxinitrito) em massa encefálica total (MET) de ratos Lewis durante o desenvolvimento da EAE. A EAE foi induzida em ratos Lewis através da administração subcutânea de uma emulsão contendo proteína básica de mielina (MBP) e a evolução clínica da doença (estágios Q - 111) foi avaliada diariamente. No final de cada estágio, as METs foram removidas, e análises da atividade de NOS, expressão de proteínas contendo resíduos de NT, e conteúdo de mRNA para as diferentes isoformas de NOS foram realizadas. Amostras de sangue também foram coletadas para a medida dos ânions NO2- e NO3- no soro, como índice da produção de NO sistêmico. Na falta de adição de qualquer cofator exógeno de NOS (exceção feita para o NADPH), a atividade de NOS dependente de Ca2+ foi significativamente diminuída nos ratos com EAE-III quando comparada com as dos grupos controle, EAE-Q ou EAE-I, mas nenhuma diferença foi observada entre os grupos na atividade de NOS independente de Ca2+. Por outro lado, quando os cofatores calmodulina (CaM), FAD, tetrahidrobiopterina (BH4) e NADPH foram adicionados, nenhuma diferença na atividade de NOS dependente de Ca2+ foi observada entre os grupos controle e EAE-III. Uma diminuição similar também foi observada na atividade de NOS dependente de Ca2+ dos grupos controle e EAE-III quando o FAD foi omitido do meio de incubação, mas nenhuma alteração ocorreu na ausência dos outros cofatores. Um aumento não significativo foi observado na atividade de NOS independente de Ca2+ da MET de ratos com EAE-II I quando comparada à atividade obtida pelo grupo controle na presença de todos os cofatores. A atividade de NOS independente de Ca2+ de ratos com EAE-III não foi afetada pela omissão de qualquer um dos cofatores adicionados, enquanto que a do grupo controle foi inibida significativamente tanto pela ausência de FAD como de BH4 no meio de incubação. A análise por RT-PCR não revelou qualquer alteração significativa no mRNA das isoformas nNOS ou eNOS entre os grupos experimentais; contudo, níveis aumentados de mRNA para iNOS foram detectados em homogenatos de MET de ratos com EAE-III em comparação com os animais controle. A análise de proteínas contendo resíduos de NT por Western blot mostrou um aumento significativo na intensidade de duas bandas (pesos moleculares 53 e 28 kDa) nos grupos EAE-II e EAE-III em comparação com o grupo controle. Os níveis de N03- sérico foram encontrados significativamente mais altos nos ratos com EAE 111 do que nos animais controle. Homogenatos de MET ou soro de animais controle mostraram sobre a atividade de NOS exacerbado efeito inibitório quando comparado àquele observado para homogenatos de MET ou soro de animais com EAE-III. No entanto, as diferenças entre os grupos desaparecem após desnaturação por aquecimento (tanto dos homogenatos de MET como dos soros). Com base nesses resultados, nós concluímos que paralelo a uma diminuição da atividade de NOS dependente de Ca2+, um aumento da expressão ("up-regulation") de iNOS ocorre durante estágios mais avançados da doença, o qual poderia ser responsável pelo aumento da produção de NO sistêmico observado e ao aparecimento de proteínas modificadas por nitração de resíduos de tirosina a nível de sistema nervoso central. Por outro lado, a diminuição da sensibilidade de iNOS para ambos FAD e BH4, e a ausência de inibidor circulante termolábil de NOS observado em animais com EAE reflete uma complexa modulação da atividade de NOS nos diferentes níveis de sítios regulatórios nesse modelo animal de esclerose múltipla / Abstract: Nitric oxide (NO) is a free radical endogenously synthetised by oxidation of one of the guanidinum nitrogen atoms of the aminoacid L-arginine by molecular oxygen. This biosynthesis is catalised by a family of enzimes generically known as nitric oxide synthases (NOS), which can be inhibited by structural analogs of L-arginine having substituent groups at the terminal guanidinum moeity. NO is extremely reactive toward different chemical species such as oxyigen, superoxide anion, thiol groups, transition metal ions, etc; nitrite (NO2-) and nitrate (NO3-) anions are the stable end products which result from NO oxidation within the physiological environment. NO, and nitrogen-derived reactive species (NDRS) as a whole, take part of several physiological processes in the brain, including neurotransmision, neuromodulation and synaptic plasticity, as well as pathological processes such as neurodegenerative diseases and neuroinflammation. Increased nitric oxide (NO) production has been associated with disease activity in experimental allergic encephalomyelitis (EAE). In this study, we characterized the expression and activity of the different NOS isoforms, as well as the presence of protein nitrotyrosine residues (NT, as a marker of peroxynitrite production) in whole encephalic mass homogenates during the development of EAE in rats. EAE was induced in Lewis rats by subcutaneous injection of an emulsion containing myelin basic protein and the development of the disease (stages Q - 111) was clinically evaluated daily. In the end of the different stages, whole encephalic masses (WEM) were removed for further analysis of NOS activity, protein NT residues (Western blot) and mRNA for the different NOS isoforms (RT-PCR). Blood samples were also collected for measurement of serum NO2- and NO3- as an index of systemic NO production. In the absence of the addition of any exogenous NOS cofactor (with the exception made for NADPH), Ca2+-dependent NOS activity was significantly decreased in rats with EAE at stage 111 when compared with either control, EAE-Q ar EAE-I groups, but no differences in Ca2+-independent NOS activity were observed among the groups. In the other hand, when the cofactors calmodulin (CaM), FAD, tetrahydrobiopterin (BH4) and NADPH were exogenously added, no differences in WEM Ca2+-dependent NOS activity were observed between control and EAE III groups. Similar decreases in Ca2+dependent NOS from either control or EAE 111 rats were observed when FAD was omitted from the incubation media, but no changes occurred in the absence of the other cofactors. A non-significant increase in Ca2+ -independent NOS activity was observed in WEM from EAE 111 rats compared to those from control animais in the presence of ali the cofactors. Ca2+ -independent NOS activity in WEM homogenates from EAE III rats was not affected by the omission of any of the added cofactors, while the one from control animais was significantly inhibited by the absence of either FAD or BH4 in the incubation media. RT-PCR analysis revealed no significant changes in either nNOS or eNOS mRNA among the groups of rats; however, increased levels of iNOS mRNA were detected in WEM homogenates from EAE 111 in comparison with those from control animais. Western blotting of NT-containing proteins showed two major bands (MW: 53 and 28 kDa) of significantly increased intensity at both stages 11 and 111 in comparison with controls. Serum NO3- levels were found significantly higher in EAE 111 rats than in control animais. The addition of either WEM homogenates or sera from control animais to a NOS preparation led to an exacerbated enzyme inhibition than that observed with WEM homogenates or sera obtained from EAE 111 rats. However, differences between groups disappear after heat-denaturation of both the WEM homogenates and sera. Based on these results we conclude that parallel to a decrease of constitutive Ca2+dependent NOS activity, up-regulation of iNOS occurs during advanced EAE stages, which could be responsible for the observed increase in systemic NO production and the appearance of NT-modified proteins at the CNS leveI. On the other hand, the decreased sensitivity of iNOS to both FAD and BH4, and the absence of a thermolabile circulating NOS inhibitor observed in animais with EAE reflect a complex modulation of NOS activity at different regulatory site levels in this animal model of multiple sclerosis / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Ione Salgado / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T20:56:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Modolo_LuziaValentina_M.pdf: 10120070 bytes, checksum: b0747249577dcdd216c84605af571a6a (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: O presente trabalho analisou a participação da enzima óxido nítrico sintase (NOS) na produção de fitoalexinas, como parte do mecanismo de defesa de soja ao ataque do fungo Diaporthe phaseolorum f. sp. meridionalis (Dpm), causador da doença do cancro da haste. A produção de fitoalexinas e a atividade NOS em cotilédones de soja eliciados com extrato do fungo Dpm foram comparadas com aquela induzida por nitroprussiato de sódio (SNP), uma molécula capaz de liberar óxido nítrico (NO). Os flavonóides produzidos foram identificados e quantificados utilizando Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) e padrões autênticos. A atividade NOS foi determinada pela síntese de L-[U_14C] citrulina a partir de L-[U-14C] arginina. A eliciação dos cotilédones de soja com o extrato de Dpm ou com SN P induziu intensa produção de fitoalexinas. Não foi observada produção de fitoalexinas quando o SNP foi substituído por ferricianeto que difere estruturalmente do primeiro apenas por não conter o NO. A produção de fitoalexinas induzida pelo extrato de Dpm, mas não aquela induzida por SNP, foi inibida quando os cotilédones de soja foram pré-tratados com inibidores característicos da enzima NOS de origem animal. A eliciação com Dpm induziu também atividade NOS nos tecidos em contato com o eliciador, atividade não observada nos tecidos eliciados por SNP. A atividade NOS induzida mostrou ser dependente de Ca2+ e NADPH e foi inibida por L-NAME [NG-nitro-L-arginina metil éster], AMG [Aminoguanidina] e L-NIL [L-N6-(1-iminoetil) lisina], inibidores característicos da NOS de origem animal. A indução de atividade NOS precedeu a ativação da produção de flavonóides nos cotilédones eliciados por Dpm. O acúmulo destes metabólitos foi mais precoce quando os cotilédones foram eliciados com SNP. O conjunto de resultados sugeriu que na eliciação por Dpm ocorreu a ativação de uma enzima do tipo NOS produzindo NO que foi capaz então de induzir a produção de flavonóides que apresentam atividade antimicrobiana. Não foram observadas diferenças significativas na produção de fitoalexinas pelos cotilédones entre os cultivares IAC-18 e IAC-14, resistente e suscetível ao Dpm, respectivamente. Estes resultados indicaram que ambos os cultivares seriam capazes de se defender ao ataque do patógeno nos estádios iniciais de desenvolvimento da planta / Abstract: The formation of phytoalexin is part of the defense mechanism of soybeans against the fungus Diaporthe phaseolorum f. sp. meridionalis (Dpm), the causal agent of stem canker disease. In this work, the involvement of nitric oxide synthase (NOS) in phytoalexin production was examined. Phytoalexin formation and NOS activity in soybean cotyledons stimulated with a Dpm extract were compared with the levels in cotyledons exposed to sodium nitroprusside (SNP), a nitric oxide (NO) donor. The flavonoids were identified and quantified by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) using authentic standards. NOS activity was determined by the biosynthesis of L-[U_14C] citrulline from L-[U_14C] arginine. Exposure of soybean cotyledons to the Dpm extract or SNP resulted in a high accumulation of phytoalexin, but this was not observed when SNP was replaced by ferricyanide, a structural analog of SNP devoid of the NO moiety. Phytoalexin production induced by the Dpm extract, but not by SNP, was prevented when the cotyledons were pretreated with NOS inhibitors. The Dpm extract also induced NOS activity in soybean cotyledon tissue proximal to the site of extract application. No such activity was observed with SNP. The induced NOS activity was Ca2+- and NADPH-dependent and was sensitive to the NOS inhibitors L-NAME [NGnitro-L-arginine methyl ester], AMG [aminoguanidine] and L-NIL [L-N6-(iminoethyl) Iysine]. The induction of NOS activity preceded the maximal accumulation of flavonoids in cotyledons exposed to the Dpm extract. The accumulation of these metabolites was faster in SNP than in Dpm treated cotyledons. These results suggest that Dpm extract induce NOS activity, with the formation of NO subsequently stimulating biosynthesis of flavonoids. There was no significant difference in the phytoalexin accumulation between cotyledons from cultivars IAC-18 and IAC-14 which are resistant and susceptible to Dpm, respectively. Thus, both cultivars should be able to defend themselves against attacks by pathogens in the earlier stages of plant development / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Antonio Roberto Martins / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T15:02:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zucchi_FabiolaCristinaRibeiro_M.pdf: 24090460 bytes, checksum: 27e1bbac09c938fe441fff2ec63849ce (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: o PIN é a proteína inibidora da sintase neuronal do óxido nítrico (nNOS). O mecanismo de regulação ocorre pela interação do PIN com a nNOS, inibindo sua dimerização, dissociando os dímeros já formados e assim inibindo a formação da enzima ativa. O PIN é uma proteína de 10 kDa e 89 resíduos de aminoácidos altamente conservada na natureza. O PIN humano apresenta 100% de homologia com a cadeia leve da dineína (DLC) humana. A DLC está envolvida na modulação da atividade transcional do NFkB. A dineína está envolvida em uma variedade de processos de motilidade intracelular, incluindo divisão celular, tráfego de vesículas membranosas e outras partículas intracelulares. A interação de PIN com múltiplas proteínas e sua alta conservação evolutiva sugerem que o PIN possa ser um importante regulador de vários processos fisiológicos. O óxido nítrico (NO) atua como um mensageiro não convencional nos sistemas vascular, imune e nervoso. O modelo corticogênese cerebelar humana é relativamente bem conhecido e permite correlacionar eventos morfogenéticos e bioquímicos/moleculares. Observamos que a expressão imunohistoquímica de PIN/DLC e nNOS no cerebelo humano é desenvolvimento-dependente. Durante a ontogênese estas moléculas ocorrem em regiões proliferativas, como a EGL e a zona ventricular, no núcleo e citoplasma das células. Células com aspecto migratório foram imunomarcadas para PIN, DLC e nNOS no núcleo e no citoplasma. Este resultado é inédito, e não encontramos relatos semelhantes na literatura. Os interneurônios e as células de Purkinje expressaram PIN e DLC, principalmente no núcleo celular, desde o surgimento até 98 anos. E a imunodetecção de nNOS nos interneurônios e células de Purkinje foi observada principalmente no citoplasma e ramificações dendríticas em todas as idades observadas. A camada granular interna expressou PIN, DLC e nNOS em todo o período estudado. Detectamos imunorreatividade para PIN e DLC nas células ganglionares do núcleo denteado, principalmente no núcleo celular, e para a nNOS principalmente no citoplasma, desde a ontogênese até o envelhecimento do cerebelo humano. Nossos resultados imunohistoquímicos foram validados pela detecção de PIN, DLC, DIC e nNOS em amostras cerebelares obtidas de pacientes de 6, 16, 23, 47, 68 e 82 anos de idade usando Western bloting / Abstract: PIN is the protein inhibitor of neuronal nitric oxide synthase (nNOS). PIN interacts physically with nNOS, inhibits it by destabilizing its dimer form, thus being able to regulate nNOS activity. PIN is a 10 kDa protein composed of 89 amino acid residues, which are highly conserved in nature. Human PIN has 100% amino acid sequence identify to the human dynein light chain (DLC). DLC appears to play a role in the modulation of the transcriptional activity of NF-kB. Dynein is involved in several processes of intracellular motility, including mitosis, traffic of membranous vesicles, and others intracellular particles.The interaction of PIN/DLC with multiple proteins and its high evolutive conservation suggest that PIN can be an important regulator of various physiological processes. Nitric oxide (NO) acts as a nonconventional messenger in the vascular, immune and nervous systems. The model of human cerebellar corticogenesis is relatively well known and permits to correlate morphogenetic events with their molecular counterparts. We observed that the immunohistochemical expression of PIN/DLC and nNOS in the human cerebellum is development-dependent. During ontogenesis, this molecules were detected in the nuc1eiand cytoplasm of cells in proliferative regions, such as the EGL and the ventricular zone. We show here for the first time the detection of PIN, DLC and nNOS in the nuclei and cytoplasm of cells with a migratory profile. Intemeurons and Purkinje cells expressed PIN and DLC, mainly in the cellular nuclei, from the first time they were identified until age 98 years. Immunodetection of nNOS in the intemeurons and Purkinje cells was observed mainlyin the cytoplasm and dendritic arborization in all ages observed. Internal granular layer expressed PIN, DLC and nNOS through out the time range studied. PIN and DLC immunoreactivity were detected in ganglion cells of the dentate nucleus, mainly in the cellular nuclei, whereas anti-nNOS stained mainly the cytoplasm of these cells, throughout the time range studied. Our immunohistochemical data were further validated by the detection of PIN, DLC, DIC and nNOS in cerebella obtained from patients aged 6, 16, 23, 47, 68 and 82 years-old using Western bloting / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador : Antonio Condino Neto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-02T11:21:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Motta_PericlesMendoncaDiasda_D.pdf: 28986078 bytes, checksum: 7671ac8cbb611b4ea7ab9230a9d96ae6 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A anemia falciforme é uma alteração genética das hemácias, caracterizada por hemólise crônica e episódios de crises de oclusão vascular. O defeito genético consiste em uma mutação na posição 6 da cadeia f3da hemoglobina, que confere às hemácias alterações na sua forma e estrutura, tornando-as mais rígidas, deformadas e distorcidas, com tendência para a formação de polúneros e conseqüente obstrução do fluxo sanguíneo. Um simples ponto de mutação transforma a anemia falciforme em uma entidade clínica heterogênea, sugerindo a idéia de que diferentes mecanismos possam estar envolvidos. O mecanismo exato, pelo qual o fluxo sanguíneo normal é interrompido pelas hemácias, ainda não é totalmente esclarecido. Numa doença como a anemia falciforme, na qual a velocidade da passagem das hemácias rígidas pelos vasos sanguíneos tem importância relevante, o tônus e a regulação vascular assumem papel primordial, sendo este controle mediado, em parte, pelo óxido nítrico, cuja ação é inibidapelo superóxido. Diversos estudos têm indicado o envolvimento da lesão endotelial e do processo inflamatório subclínico no desencadeamento e progressão dos processos da oclusão vascular. A participação dos leucócitos no dano aos tecidos dos pacientes com anemia falciforme é objeto de investigação, sendo a leucocitose um fator de mau prognóstico na doença. Investigou-se inicialmente a liberação do óxido nítrico pelos leucócitos, analisando sua capacidade de inibir a agregação de plaquetas lavadas induzida pela trombina. Os resultados mostram que os granulócitos de pacientes com anemia falciforme (n=9) liberam óxido nítrico de maneira similar aos granulócitos de controles sadios (n=9), pois foi necessário um número semelhante de células para inibir a agregação plaquetária (mediana de 4,4 x 106e 4,3 x 106,respectivamente). Na ausência de SOD, não foi detectada liberação de óxido nítrico pelos leucócitos mononucleares de pacientes com anemia falciforme (n=9), pois eles não afetaram a agregação de plaquetas nesta situação. Na presença de SOD, não houve diferença na liberação do óxido nítrico entre leucócitos mononucleares de pacientes com anemia falciforme e controles, pois o número de leucócitos mononucleares necessário para inibir a agregação de plaquetas foi semelhante entre os pacientes (mediana de 3,4 x lO6ml, n=9) e os controles sadios (mediana de 3,3 x lO6ml,n=9). Os fagócitos contêm uma nicotinamida adenina inuc1eotídeofosfato (NADPH) oxidase (forma reduzida) associada à sua membrana citoplasmática, que gera superóxido e outros reativos intermediários tóxicos do oxigênio, os quais apresentam potencial de injúria aos tecidos. O sistema NADPH-oxidase é composto por cinco subunidades: p40-pho / Abstract: Sickle cell anemia is a genetic disorder of red blood cells characterized by chronic hemolysis and episodic vaso-oclusive crisis. The molecular defect is caused by a point mutation at the 6thposition ofthe f3chain ofhemoblobin, which leads erythrocytes to abnormal sickle shape, rigidity, deformability and distortion with consequent blood flow obstruction. A single point mutation leads sickle cell disease to a clínical heterogenous disorder, supporting the idea that a different set of mechanisms might be involved in this disease. It is still not completely understood how sickle erythrocytes interrupt blood flow. Current evidence indicate that endothelium damage, and a subclínical inflammatoryprocess take place in the initiation and progression of vascular occlusion. The role of leukocytes in the tissue injury of sickle cell anemia patients is a current subject of investigation. The NADPH-oxidase system of professional phagocytes catalyzes the production of superoxide by the one-eletron reduction of oxigen (respiratory burst). This is the starting point for the production of reactive oxidants species, which are potential tissueinjury mediators. The NADPH-oxidase system is composed by tive components: p40-Phox p4TPh°x,p6Tphoxexist in the cytosol as a complexoThe other two components gp91-phoxandp22-PhOX form the cytocrome b558in the cell membrane and function as the terminal electron carrier ofthe oxidase. Afier activation, the cytosolic complex migrate to membrane binding to citocrome b558and assemblythe active oxidase. The involvement of the leukocyte NADPH-oxidase system has not been investigated before in sickle cell anemia. The experimental approach was focused on: a) the release of nitric oxide by neutrophils and mononuclear leukocytes ITom sickle cell anemia patients. It was assayed by the ability of leukocytes to inhibit thrombin-induced washed platelet aggregation. Neutrophils ITom sickle cell anemia patients released nitric oxide in a similar manner to those ITomhealthy controls. The inhibition of platelet aggregation by neutrophils ftom sickle cell anemia or ftom hea1thycontrols was blocked by L-NAME (300JlM), but not by D-NAME (300JlM), and was reversed by L-arginine (lmM). Additionaly, a similar number of neutrophils ftom sickle cell anemia patients and írom healthy controIs was required to inhibit platelet aggregation. Mononuc1ear leukocytes írom sickle cell anemia patients inhibited platelet aggregation only in the presence of superoxide dismutase (60 U rnl-I) b) the release of superoxide by neutrophils and mononuc1earsickle cell anemia leukocytes. lt was assassed by the SOD specific inhibition of cytochrome c reduction assay. PMA (30nM) or ZYM (100 partic1es/cell)-induced release of superoxide by mononuc1ear leukocytes :lTomsickle cell anemia patients was significant1yhigher than that observed in mononuc1ear leukocytes írom healthy controIs (p<0,001 e p<O,Ol, respectively, Mann-Whitney test). The levels of superoxide released by neutrophils írom sickle cell anemia patients was similar to those írom healthy controIs. c) the activity of SOD or cellular glutathione peroxidase in neutrophils and mononuc1ear leukocytes írom sickle cell anemia patients was assayed by the xantine-oxidase induced cytochrome c reduction and the cellular glutathione peroxidase activity was asseyed by the NADPH oxidation induces by tbuthyl hydroperoxide. The activites of SOD and GHS-Px in neutrophils and mononuc1ear sickle cell anemia leukocytes were similar to those ITom healthy controIs d) the gene expression of gp91-phox, p22-phoxand p6Tphoxin mononuc1ear sickle cell anemia leukocytes. Monocytes' RNA :lTom steady state sickle cell disease patients and healthy control subjects were used in a quantitativerelative reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). The results revealed that gp91-phoxrelative gene expression in mononucIear leukocytes írom sickle cell anemia patients (n=21) was significant1yhigher compared to healthy controIs (n=23, p=0,03, Mann-Whitney test) and that p2Tphox(n=24 patients, 24 controls) and p6Tphox(n=22 patients, 22 controls) relative gene expression in mononuc1ear sickle cell anemia leukocytes was similar to healthy controIs.e) the phosphorylation of a group of 47kDa cell proteins. It was assayed by the incorporation of 32P-Labeledby sickle cell (n=4, 4 x1O7cells/rnl) or healthy controls (n=6, 4 xl07 cells/rnl) mononuclear leukocytes, in basal state or after stimulation with PMA (30nM). We found a higher phosphorylation in 47kDa protein sickle cell mononuclear leukocytes than in healthy controls. Conclusions The results have shown that leukocytes :&om sickle cell anemia patients released nitric oxide in a similar manner to those :&omhealthy controls; sickle cell anemia mononuclear leukocytes release more superoxide, when stimulated with PMA or ZYM, than mononuclear leukocytes ITom healthy controls; gp91-PhoXgene expression is upregulated in monocytes :&omsickle cell patients compared to healthy controls, and the phosphorylation of 47kDa proteins in sickle cell anemia mononuclear leukocytes is more intense than healthy controls. The NADPH-system is activated in sickle cell anemia mononuclear leukocytes and may be responsible, at least in part, for the inactivation of nitric oxide. This may contribute to inflammationand vascular dysregulation in sickle cell disease / Doutorado / Pediatria / Doutor em Saude da Criança e do Adolescente

Orientador: Mario Jose Abdalla Saad / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-02T16:53:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zecchin_HenriqueGottardello_M.pdf: 28934250 bytes, checksum: db4e45dda12195dad37965b91fd18adc (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Estudos epidemiológicos demonstram forte associação entre resistência à insulina, hipertensão e morbidade cardiovascular. A insulina, além de seus efeitos metabólicos, exerce efeitos cardiovasculares mediados pelo sistema nervoso simpático e pela via do óxido nítrico (NO). Recentemente foi descoberto que, em situações normais, a insulina ativa a produção de NO em células endoteliais em cultura através de um mecanismo dependente da fosfatidilinositol (PI) 3-quinase, com ativação da Akt e subseqüente fosforilação da óxido nítrico sintase endotelial (eNOS ou NOS3) em resíduos de serina. As ações da insulina no sistema cardiovascular estão reduzidas em diversos estados de resistência à insulina, porém o mecanismo através do qual ocorre manutenção da pressão arterial normal e ausência de doença cardiovascular em alguns modelos animais de resistência à insulina ainda não foi estudado. Neste estudo, usando técnicas de imunoprecipitação e immunoblotting, examinamos in vivo a regulação das proteínas envolvidas na transmissão do sinal de insulina no músculo esquelético e na aorta torácica de ratos obesos envelhecidos (12 meses de idade), os quais apresentaram resistência à insulina mas não desenvolveram doença cardiovascular, comparando-os com ratos jovens (2 meses de idade). As vias envolvidas na transmissão intracelular do sinal de insulina tiveram comportamentos diferentes nos tecidos estudados. Os ratos com 12 meses de idade apresentaram redução significativa na transmissão do sinal de insulina pela via da PI 3-quinase no músculo esquelético, com níveis teciduais e graus de ativação normais da MAP quinase. Na aorta, entretanto, a via da PI 3-quinase / Akt mostrou-se preservada, levando à ativação normal da óxido nítrico sintase endotelial; as isoformas ERK1/2 da MAP quinase apresentaram maiores graus de fosforilação e níveis teciduais nos animais com 12 meses, tanto na ausência quanto após estímulo com insulina, em comparação aos animais jovens. A redução na ativação da via da PI 3-quinase / Akt pela insulina no músculo esquelético de ratos com 12 meses de idade pode ter contribuído para o fenótipo de resistência à insulina apresentado por este modelo animal. No vaso, entretanto, apesar do aumento da quantidade e ativação da MAP quinase, a preservação da via da PI 3-quinase pode ter contribuído para evitar a aterosclerose e hipertensão arterial sistêmica no rato obeso e envelhecido / Abstract: The association between insulin resistance, hypertension and cardiovascular morbidity has been well established. However, the mechanism by which there is maintenance of normal blood pressure and absence of cardiovascular disease despite insulin resistance in some animal models is not c1ear. Besides its metabolic effects, insulin is able to act in cardiovascular system direct1y in vascular cells promoting the increase in amino acid transport, glycogen synthesis, DNA synthesis, gene expression, nitric oxide release and regulation of mRNA expression of matrix proteins. Insulin stimulates the tyrosine kinase activity of its receptor, resulting in the phosphorylation of its cytosolic substrates IRSs and Shc, which bind differentially to various downstream signaling proteins, such as phosphatidylinositol 3-kinase (pI 3-K). Recently, it has been demonstrated that insulin is able to stimulate NO production in cultured endothelial cells through a PI 3-K pathway, activating the serine/threonine protein kinase Akt and subsequently phosphorylating and activating the endothelial nitric oxide synthase (eNOS I NOS3). As is the case for other growth factors, insulin also stimulates the mitogen-activated protein (MAP) kinase extracellular signal-regulated kinase (ERK), which is critical in mitogenic response. The insulin resistance of type 2 diabetes, obesity and aging is characterized by defects at many levels, with decreases in receptor concentration and kinase activity, in concentration and phosphorylation of IRS-l and -2, in PI 3-K activity, in glucose transporter translocation and in the activity of intracellular enzymes in muscle, liver and adipocytes. In the present study, the insulin signaling pathways in skeletal muscle and thoracic aortae from 2- and 12-month-old rats - which have insulin resistance but do not develop cardiovascular disease - have been analysed using immunoprecipitation and immunoblotting technics. The 12-month-old normotensive rats showed marked insulin resistance, which parallels the reduced effects of this hormone in insulin signaling cascade in muscle. In aorta, hosphatidylinositol (PI) 3-kinase / Akt pathway was preserved, leading to a normal activation of endothelial nitric oxide synthase; however, mitogen-activated protein (MAP) kinase isoforms showed higher levels and activation in middle-aged rats, both in the basal state and afier stimulation with insulin, when compared to young rats. ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:04:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Manipulações nutricionais em períodos críticos de desenvolvimento, que levam à desnutrição, promovem consequências negativas em longo prazo no funcionamento do sistema imunológico. O macrófago atua em diferentes momentos da resposta imune, participando tanto da resposta inata quanto da resposta imune adaptativa, contudo, ainda são poucos os estudos que se dedicam a esclarecer o comportamento desta célula em situações onde houve privação de nutrientes em períodos precoces da vida. Tais informações poderiam ajudar a esclarecer o comportamento do sistema imune submetido à privação nutricional bem como as possíveis consequências destas mudanças na homeostase de um organismo. No artigo Desnutrição pós-natal imediata altera a viabilidade e função dos macrófagos em ratos , o impacto da manipulação nutricional no período pós-natal imediato em macrófagos alveolares de ratos foi avaliado quanto à função, quantidade e viabilidade em animais adultos. Ratos foram amamentados por mães alimentadas com uma dieta purificada deficiente em proteínas ou por uma dieta multideficiente semelhante a consumido durante a década de 1960 pelas populações desnutridas no nordeste do Brasil, chamada de Dieta Básica Regional (DBR). Quando adultos foram avaliados quanto aos parâmetros hematológicos e suas células broncoalveolares foram examinadas quanto a funcionalidade e viabilidade. O presente estudo mostrou que não ocorreram modificações nos valores hematológicos das séries vermelha e branca, bem como não alterou o numero de células totais no lavado broncoalveolar. O estudo da cultura celular revelou que ambas, as manipulações da dieta indicaram diminuição da viabilidade e da função da célula. Este último foi indicado pela redução da capacidade do macrófago em produzir NO. Em conclusão, as manipulações dietéticas ocorrida do período pós-natal imediato geram alterações permanentes nos macrófagos de ratos na vida adulta. Novos estudos ajudarão a desvendar os mecanismos pelos quais a desnutrição em períodos críticos de desenvolvimento prejudica o equilíbrio do sistema imune. O entendimento aprofundado destes mecanismos poderá, quem sabe, no futuro, permitir a prevenção dos efeitos deletérios da má nutrição no início da vida, quer seja por meio de intervenção medicamentosa, nutricional ou com mudanças dos hábitos de vida