Neste trabalho, o forno de microondas focalizadas (CEM, Star System 2) e o forno de microondas doméstico adaptado (CCE, MW - 850) foram utilizados para o processo térmico descontínuo e contínuo, respectivamente para reduzir a atividade da POD e PFO presentes na água de coco. No processo descontínuo um sensor de fibra óptica permaneceu em contato direto com as amostras, o que permitiu a obtenção de perfis precisos da temperatura em função do tempo e a determinação dos parâmetros cinéticos D e z para as enzimas, no intervalo de temperatura entre 50 e 100 °C. No processo contínuo, a aquisição dos dados de temperatura foi realizada por termopar tipo T localizado na saída da cavidade do forno e alcançou temperatura máxima entre 66 e 91 °C. Para avaliar a influência dos principais constituintes químicos da água de coco na atividade enzimática soluções simuladas (água; água/açúcares; água/sais; água/sais/açúcares) e água de coco estéril com adição de POD e PFO comerciais foram submetidas ao processo descontínuo por microondas. Os parâmetros cinéticos determinados para as enzimas come rciais nas soluções simuladas obedeceram à cinética de 1ª ordem e os valores D e z foram respectivamente: PFO/água (D93°C = 16 s, z = 35,5 °C), PFO/açúcares (D91°C = 18 s, z = 33,0 °C), POD/água (D92°C = 44 s, z = 24,0 °C), POD/açúcares (D92°C = 21 s, z = 19,5 °C), PFO/água de coco estéril (D84,45ºC = 43 s, z = 39,5 °C) e POD/água de coco estéril (D86,54ºC = 20 s, z = 19,3ºC). Nas soluções simuladas com sais, as atividades iniciais das enzimas foram significativamente menores. Na água de coco as enzimas apresentaram resistência térmica maior quando comparadas aos resultados das soluções simuladas apresentando D92,20°C = 52 s e z = 17,6 °C para a PFO e D92,92°C = 16 s e z = 11,5 °C para a POD. Nos ensaios em processo contínuo a redução da atividade da PFO obedeceu à cinética de 1a ordem e os resultados corroboraram àqueles determinados para o sistema descontínuo. A POD não apresentou atividade residual detectável para temperaturas de saída acima de 88 °C, mas abaixo de 77 ºC a atividade residual foi próxima dos resultados para a POD na água de coco obtidos pelo processo descontínuo. É importante mencionar que para todos os ensaios com água de coco processada, seja no sistema descontínuo ou contínuo, não foi observada a coloração rósea, normalmente atribuída à ação enzimática. Somado a isso, o estudo mostrou que o tratamento térmico por microondas foi mais efetivo na redução da atividade da POD e PFO presentes em água de coco quando comparado com a pasteurização convencional o que torna o uso das microondas uma boa alternativa de processamento para a conservação desse alimento. / In this work a focused microwave oven (CEM, Star System 2) and an adapted domestic microwave oven (CCE, MW - 850) were employed to reduce POD and PPO activity using batch and continuous processing. In a batch processing an optic fiber sensor was kept in direct contact with the samples, thus precise temperature as a function of time profiles were obtained as well as the kinetic parameters (D and z) in the range between 50 and 100°C. In the continuous processing temperature data were obtained by type T thermocouples in the entrance and exit of the microwave oven cavity in the range between 66 and 90°C. Simulated solutions (water; water/sugars; water/salts; water/sugars/salts) and sterile coconut water were formulated with addition of commercial POD and PPO and were exposed to batch processing by microwaves to evaluate the influence of the main chemical substances present in coconut water on the enzymatic activity. Commercial enzymes in the simulated solutions followed a first order order kinetic model. D and z values were: PPO/water (D93°C = 16 s, z = 35.5 °C), PPO/sugars (D91°C = 18 s, z = 33.0 °C), POD/water (D91,5°C = 44 s, z = 24.0 °C), POD/sugars (D92°C = 21 s, z = 19.5 °C), PPO/sterile coconut water (D84,45ºC = 43 s, z = 39.5 °C) and POD/ sterile coconut water (D86,54ºC = 20 s, z = 19.3 ºC). Added salts influenced commercial PPO and POD stability and significantly reduced their activity. In coconut water the enzymes were more thermally resistant when compared to the simulated solution presenting D92,9°C = 52 s and z = 17.6 °C for PPO and D92,9°C = 16 s and z = 11.5 °C for POD. In continuous processing PPO inactivation followed a first order kinetic model and the results were similar to those obtained in the batch processing. POD didn´t present residual activity at exit temperatures above 88 ºC. Below 77 ºC residual activity was close to that of the POD/coconut water treated by batch processing. An important fact is that for all assays with coconut water, wether batch or continuous process was employed, no pink color (that is attributed to enzyme activity) was observed. Besides this study has shown that thermal treatment by microwaves was more efficient than conventional thermal treatment in reducing PPO and POD activity in coconut water, therefore microwaves are an interesting alternative for conservation of this food.

Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de biossensores eletroquímicos baseados na imobilização de duas enzimas diferentes em filmes de polipirrol (PPI) eletrodepositados, a fitase e a polifenol oxidase (PFO), esta última na forma de extrato bruto do fruto de abacate. Como a fitase hidrolisa cataliticamente ácido fítico (AF) em íons fosfatos, foram preparados biossensores por imobilização da enzima sobre filmes de PPI para a detecção indireta de ácido fítico via íons fosfatos. Foram utilizados dois métodos de imobilização; no primeiro, a enzima, fitase, foi imobilizada ao filme de PPI por imersão do filme em uma solução contendo a enzima por um período de 2 h, no segundo, a fitase foi encapsulada em lipossomos de dipalmitoil fosfatidil glicerol (DPPG) e depois foi imobilizada nos filmes de PPI depositados em eletrodos impressos. O segundo método se mostrou melhor para a detecção de ácido fítico, pois levou a um maior alcance linear e um baixo valor de limite de detecção. Neste caso, verificou-se que o DPPG preservou a integridade enzimática e levou a biossensores mais estáveis e sensíveis. Já para a PFO, que catalisa a oxidação de compostos fenólicos a quinonas, foram preparados biossensores para a detecção indireta de catecol. Para esta enzima, foram utilizados três métodos de imobilização: adsorção, ligação cruzada e confinamento, sendo o último que levou a melhores respostas. O método de confinamento consiste na adição da enzima, juntamente com o monômero, à solução de eletropolimerização, quando se procede com a metodologia normal de preparo dos filmes de PPI, que foram caracterizados por: microscopia de força atômica (AFM), microscopia eletrônica de varredura (MEV), espectroscopia de infravermelho por transformada de Fourier (FTIR) e espectroscopia de reflexão e absorção no infravermelho com modulação da polarização (PM-IRRAS). Estas técnicas de caracterização permitiram com que a presença da enzima fosse associada às modificações das características estruturais e morfológicas dos filmes de PPI. / This doctoral thesis reports on the development of electrochemical biosensors based on the immobilization of enzymes phytase and polyphenol oxidase (PPO) (the latter in the form of crude extract of avocado fruit) on electrodeposited polypyrrole films (PPY). As phytase catalytically hydrolyzes phytic acid (PA) in phosphate ions, biosensors were prepared by its immobilization on PPY films for the indirect detection of PA via phosphate ions. In the first method the enzyme was maintained on the PPY film for a period of 2 h, whereas in the second, it was encapsulated in Dipalmitoyl Phosphatidyl glycerol (DPPG) and immobilized on printed electrodes. The second system proved more viable for the detection of PA and showed broader linear range and low detection limit because DPPG preserved the integrity of the enzyme and produced more stable and sensitive biosensors. Regarding PPO, which catalyzes the oxidation of phenolic compounds to quinones, biosensors for the indirect detection of catechol via the formation of quinone in solution were prepared. Three methods of immobilization were used: adsorption, cross-linking and confinement. The latter yielded favorable results in comparison to other methods. The films were characterized by atomic force microscopy (AFM), scanning electron microscopy (SEM) spectroscopy, fourier transform infrared (FTIR) spectroscopy and reflection absorption and infrared polarization modulation (PM-IRRAS) techniques and revealed the presence of the enzyme and a modification in the structural characteristics and morphology of the films.

A hidrocefalia é uma síndrome complexa caracterizada pelo acúmulo de líquido cérebro-espinal no interior das cavidades ventriculares. Considerando a sua fisiopatologia de caráter multifatorial sendo um dos fatores envolvidos o estresse oxidativo desencadeado pela peroxidação lipídica e formação de radicais livres, este trabalho visa estudar o possível efeito neuroprotetor proveniente do polifenol galato de epigalocatequina (EGCG) na hidrocefalia experimental. Foram utilizados ratos da linhagem Wistar (N=56), com 7 dias de idade. Os filhotes foram submetidos à indução da hidrocefalia pelo método da injeção intracisternal de caulim a 20%. O polifenol foi administrado intraperitonealmente por 9 ou 20 dias consecutivos a partir da indução da hidrocefalia. Aferição do peso corporal diário e testes comportamentais foram realizados. Dez ou 21 dias após a indução da hidrocefalia os animais, profundamente anestesiados, foram sacrificados através da perfusão cardíaca com solução salina. Seus encéfalos foram removidos, fixados com paraformaldeído 3% em tampão fosfato 0,1M e processados para inclusão em parafina. Preparações histológicas foram realizadas para a análise por coloração hematoxilina eosina, solocromo-cianina e imunoistoquímica para GFAP e Ki67. Os diferentes parâmetros de avaliação demonstraram que os animais tratados com o polifenol por 9 dias consecutivos apresentaram redução da atividade astrocitária através da imunomarcação pelo GFAP no corpo caloso, cápsula externa e matriz germinativa; além de apresentarem corpo caloso mais espesso e mielinizado, exibindo uma tonalidade azul mais intensa evidenciada pela coloração solocromocianina. Apesar desses resultados demonstrarem um possível efeito neuroprotetor na fase inicial de instalação da doença, estudos adicionais devem ser realizados para obtenção de uma terapêutica eficiente e segura para o aprofundamento com testes clínicos. / Hydrocephalus is a complex syndrome, characterized by the accumulation of cerebrospinal fluid in cerebral ventricles. Considering its multifactorial pathophysiology, one of the factors being the oxidative stress triggered by lipid peroxidation and free radical formation, this work aims to study the possible neuroprotective effect of the polyphenol epigallocatechin gallate (EGCG) in experimental hydrocephalus. Seven-day old Wistar rats (N=56) were used in this study. The pups were subjected to hydrocephalus induction by kaolin 20% through intracisternal injection. The polyphenol was administered intraperitoneally for 9 or 20 days from the induction of hydrocephalus. Measurement of daily body weight and behavioral tests were performed. The animals, deeply anesthetized, were sacrificed by cardiac perfusion with saline 10 or 21 days after induction of hydrocephalus. Their brains were removed, fixed with 3% paraformaldehyde in 0.1 M phosphate buffer, and processed for paraffin embedding. Preparations were made for histological analysis by hematoxylin and eosin, solochrome-cyanine and immunohistochemistry for GFAP and Ki67. The different evaluated parameters showed that animals treated with the polyphenol for 9 consecutive days displayed reduction on the reactive astrocytes GFAP immunostaining at the corpus callosum, external capsule and germinal matrix, also having thicker and more myelinated corpus callosum exhibiting a more intense blue staining by solocromo-cyanine. Although these results demonstrate a possible neuroprotective effect at the initial onset of the disease, additional studies should be performed to obtain an effective and safe therapy for deeper studies in clinical trials.

Orientador: Glaucia Maria Pastore / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-05T16:35:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Azevedo_AndreiaCristianeSouza_D.pdf: 1028995 bytes, checksum: 6758be8c224c65879df45396853361cf (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Diversos estudos epidemiológicos têm mostrado que o consumo regular de frutas e vegetais reduz a incidência de doenças crônico-degenerativas. A manga (Mangifera indica L.) é amplamente encontrada em regiões tropicais e subtropicais, é uma fruta popularmente conhecida no mundo, além de ter grande aceitação no Brasil e em outros países onde é produzida, seu consumo também tem se expandido para novos mercados, como na Europa. A manga, além de ser saborosa e aromática, possui ainda elevado valor nutritivo quando comparada com outras frutas e também alto valor comercial em muitas regiões do mundo, em especial nas regiões tropicais. Neste trabalho foram analisadas mangas produzidas no Brasil com os objetivos de estudar as enzimas oxidativas em diferentes cultivares da fruta, bem como em diferentes estádios de maturação e avaliar a presença de moléculas bioativas em mangas da cultivar Tommy Atkins. Para determinação da maturação da fruta, foram avaliados os seguintes parâmetros: coloração da casca, consistência da polpa, pH, acidez total titulável e sólidos solúveis totais. Os resultados da análise de composição centesimal e vitamina C mostraram a influência da maturação na composição química da fruta, causando a redução dos teores de água, cinzas, gorduras, fibras e vitamina C e aumento do teor de açúcares totais. No caso do estudo das enzimas oxidativas em relação às diferentes cultivares, a ¿Tommy Atkins¿ apresenta maior atividade das enzimas polifenol oxidase e peroxidase do que as cultivares Haden e Palmer, esta última apresentou as menores atividades para ambas enzimas. Considerando as atividades dessas enzimas em manga ¿Tommy Atkins¿ relacionadas ao estádio de maturação, as frutas verdes apresentaram maior atividade da polifenol oxidase com diminuição gradativa até o estádio maduro, enquanto que a peroxidase apresentou-se mais ativa em frutas maduras do que em verdes, com um aumento gradual de frutos verdes para frutos maduros. Dos treze padrões de polifenóis avaliados por CLAE, sete foram encontrados nas amostras de polpa de manga analisadas, sendo eles, ácido gálico, metil galato, catequina, epicatequina, ácido ferúlico, ácido isoferúlico e propil galato. Estes compostos responderam de maneira diferente à influência da maturação. A concentração de epicatequina apresentou aumento inicial seguido de redução significativa em seu teor até o final do período de avaliação. O propil galato, metil galato e ácido gálico apresentaram aumento gradual durante todo o período de avaliação. As concentrações de catequina e ácido ferúlico aumentaram do estádio verde para ¿de vez¿, mantendo estáveis até o estádio maduro. O teor de ácido isoferúlico aumentou durante a maturação. No estudo de determinação da mangiferina, detectou-se sua presença apenas na casca da manga e observou-se que este composto apresentou maior teor na casca de manga verde e gradativa redução até atingir o estádio maduro / Abstract: In several studies epidemiological it has been shown that the regular consumption of fruit and vegetables reduces the incidence of chronic-degenerative diseases. The mango (Mangifera indica L.) is abundantly found in tropical and subtropical areas and is one of the most popular fruits in the world, besides having great acceptance in Brazil and in other mango producing countries, its consumption also if has expanded for new markets, as in the Europe. The mango fruit is tasty and aromatic and possesses high nutritional value when compared to other fruits and also reaches a high commercial value in many countries worldwide but especially in the tropical ones. Mangos produced in Brazil were analyzed in order to study oxidative enzymes in different kinds of Mangos as well as in different maturation stadiums as well as the presence of bioactive molecules like mangiferin in Tommy Atkins mangos. To determine the state of maturation of the fruit different parameters were evaluated like coloration of the peel, consistence of the pulp, pH, total titratable acid and total soluble solids. The results of the composition analysis and the vitamin C content demonstrated the influence of the maturation on the chemical composition of the fruit, causing a reduction of content of water, ashes, fats, fibers and vitamin C and an increase in the total sugar content. Regarding the study of oxidative enzymes of different cultivations, the Tommy Atkins mango had shown a higher activity of the enzymes polyphenol oxidase and peroxidase in comparison to Haden and Palmer mango. The last one showed the smallest activity of both enzymes. Considering the relationship of the activities of those enzymes in Tommy Atkins mango to the state of maturation, the green fruits showed a higher activity of polyphenol oxidase with a gradual decrease of activity during the ripening, while the peroxidase activity was higher in ripe fruits than in green ones with a gradual increased during the maturation process. Seven out of thirteen polyphenolic substances analysed by HPLC were found in the samples of mango pulp: gallic acid, methyl gallate, catechin, epicatechin, ferulic acid, isoferulic acid and propyl gallate. The found substances have shown different reactions to the influence of the maturation. The concentration of epicatechin was first increased and decreased significantly in the end of the analysis. The concentration of propyl gallate, methyl gallate and gallic acid was gradually increase during the whole evaluation period. The concentrations of catechin and ferulic acid increased from the green to half-green stadiums, and kept constant values until the ripe stadium. The concentration of isoferulic acid increased during the maturation. In the study of determination of the mangiferin content revealed that its occurrence is limited to the peel of the mango and the highest concentration was found in the peel of green mango with a gradual decrease to the ripe stadium / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Helia Harumi Sato / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-05T16:51:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guimaraes_DanielaPaiva_M.pdf: 17454686 bytes, checksum: 95c3e2eb551f853fabd105f2d0d03911 (MD5) Previous issue date: 2006 / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

A utilização descontrolada de pesticidas tem provocado no decorrer dos anos a intoxicação de milhares de pessoas no mundo, uma vez que, seus resíduos têm sido depositados em alimentos, em solos e em ambientes aquáticos. Assim, a construção de duas novas plataformas sensoras para a detecção de pesticidas é o objetivo desse trabalho. Na primeira plataforma foi utilizado o polieletrólito catiônico polietilenoimina (PEI) em conjunto com o polissacarídeo extracelular algal (PSE) produzido pela microalga criptofícea Cryptomonas tetrapirenoidosa preparados através da técnica de deposição \"spin-coating\". E a segunda plataforma foi produzida por eletrodeposição pulsada, entre um potencial de redução e um de oxidação, utilizando nanoestruturas de óxido de zinco (ZnO). Para caracterizar as plataformas, foram utilizadas as técnicas de microscopia eletrônica de varredura com fonte de emissão de campo (FEG-SEM), difração de raios X (XRD), espectroscopia de absorção ultravioleta-visível (UV-Vis), microscopia de força atômica (AFM) e espectroscopia de reflexão-absorção no Infravermelho com modulação da polarização (PM-IRRAS). Através da imobilização da enzima polifenol oxidase na forma de extrato bruto em sua fonte natural (fruto abacate), as plataformas de PEI/PSE e ZnO, foram avaliadas como biossensores de catecol e do inseticida carbaril. De modo comparativo, as plataformas de PEI/PSE sem a presença imobilizada da enzima também foram estudadas para a detecção do catecol e do carbaril. A simplicidade na formação e na construção dessas plataformas vem qualificá-las como viáveis a serem produzidas em escala industrial e com baixo custo de processamento. E diante dos resultados obtidos no desenvolvimento desses biossensores destaca-se a eficiência e a rapidez de detecção, o que os tornam economicamente promissores e competitivos em termos de aplicações ambientais. / The uncontrolled use of pesticides has resulted over the years the intoxication of thousands of people in the world, since their waste has been deposited in food, in soil and aquatic environments. Thus, the construction of two new sensors platforms for pesticide detection is the objective of this work. At first platform was used cationic polyelectrolyte polyethyleneimine (PEI) along with the extracellular algal polysaccharide (EPS) produced by microalgae criptofícea Cryptomonas tetrapirenoidosa prepared by deposition technique \"spin-coating\". The second platform was produced by pulsed electrodeposition between a reduction and an oxidation potential using nanostructures zinc oxide (ZnO). To characterize the platforms, we used the techniques of field emission gun scanning electron microscopy (FEG-SEM), X-ray diffraction (XRD), ultraviolet visible absorption spectroscopy (UV-Vis), atomic force microscopy (AFM), and polarization modulation infrared reflection-absorption spectroscopy (PM-IRRAS). By immobilization of the polyphenol oxidase enzyme as a crude extract in their natural source (avocado fruit), platforms PEI/PSE and ZnO, they were evaluated as catechol and carbaryl insecticide biosensors. In a comparative way, the platforms PEI/PSE without the presence of immobilized enzyme were also studied for detection of catechol and carbaryl. The simplicity in the formation and construction of these platforms comes qualify them as viable to be produced on an industrial scale and low cost processing. And on the results obtained in the development of such biosensors stand out the efficiency and speed of detection, which make them economically promising and competitive in terms of environmental applications.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2016-09-02T15:02:36Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jhessica Cavalcante de Souza Golveia - 2016.pdf: 2178992 bytes, checksum: bbc320d2f858d086790c3448278f38c2 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-09-05T13:03:33Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jhessica Cavalcante de Souza Golveia - 2016.pdf: 2178992 bytes, checksum: bbc320d2f858d086790c3448278f38c2 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-05T13:03:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jhessica Cavalcante de Souza Golveia - 2016.pdf: 2178992 bytes, checksum: bbc320d2f858d086790c3448278f38c2 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-04-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Laccase (EC 1.10.3.2, benzenediol: oxygen oxidoreductase) belongs to multicobre oxidases family, produced mainly by fungi. Due to its ability to catalyze oxidation of a wide variety of substrates, laccase has been used in various industrial applications such as delignification and bleaching of pulp, discoloration of dyes in textile effluents and detoxification of environmental pollutants. To meet the high demand of laccase at low cost is necessary to increase their production. One strategy is use of inducers such as metal ions and aromatic compounds. However, these compounds may have high toxicity and high cost. The use of agro-industrial and agricultural wastes containing laccase inducers is a sustainable and promising alternative strategy. The main of this study was to evaluate "in vitro" the capacity of ten agro-industrial wastes to induce the production of laccase from Pycnoporus sanguineus. We evaluated two different culture conditions (1% Malto extract and potato dextrose broth 0.5%) and the cultivation under stirring and static condition. The plant materials were added at a concentration of 1% (w / v) in 250 ml Erlenmeyer flasks containing 60 ml of culture medium. The best growing conditions have been established and the results of maximum laccase activity were with the medium CBD 0.5%, stirring 150 rpm at 28 ° C. Positive controls were performed (with induction xylidine and copper) and negative controls (no addition of inducer). All tests were performed in triplicate. The wastes that induced highest amount of enzyme were the cupuassu (1642U.mL-1) and cocoa (1589U.mL-1), guariroba´s straw (1258 U.mL-1) and açaí (886 U.mL-1), being greater than the induced positive control with 2,5-xylidine and copper (511 U.mL-1). Cupuassu and cocoa was selected for characterization. The enzymatic extract induced with cupuassu proved to be more stable at high temperatures and at different pHs, in addition to being able to oxidize different substrates. The extract was choice for the remediation of ethinylestradiol. Obtained 86% removal after 4 hours reaction and after 8 hours the concentration of hormone was below the method detection limit. Analysis of MS-ESI-TOF showed that hormone molecule was biodegraded during the enzymatic process. / A enzima lacase (EC 1.10.3.2, benzenodiol: oxigênio-oxidorredutase) pertence à família das multicobre oxidases, produzida principalmente por fungos. Devido à sua habilidade de catalisar a oxidação de uma ampla variedade de substratos, a lacase tem sido utilizada em várias aplicações, dentre elas a detoxificação de poluentes ambientais. Para atender a alta demanda de lacase a baixo custo é necessário aumentar a sua produção. Para isso utilizam-se indutores, como íons metálicos e compostos aromáticos, que possuem elevada toxicidade e alto custo. A utilização de resíduos agroindustriais contendo indutores de lacase é uma estratégia alternativa sustentável e promissora. O objetivo deste trabalho foi avaliar “in vitro” a capacidade de dez resíduos agroindustriais em induzir a produção de lacase de Pycnoporus sanguineus e aplicar o extrato com melhor atividade enzimática na biorremediação do 17-α-Etinilestradiol. Os resíduos foram adicionados na concentração de 1% (p/v) em erlenmeyers de 250 mL, contendo 60 mL de meio de cultura. Foram realizados controles positivos (com indução por xilidina e cobre) e controles negativos (sem adição de indutores). Para a biorremediação, um volume referente a 200 U de atividade enzimática foi adicionado a frascos erlenmeyer de 150 mL, contendo 10 mL de tampão acetato 50 mM pH 5,0 e 10 mL de solução de Etinilestradiol 10 mg.mL-1. Os frascos foram colocados sob agitação de 150 rpm a 25ºC. A porcentagem de remoção foi avaliada por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência-CLAE após 1,2,4,8,10,12 e 24 horas de reação. Dos resíduos testados, os que levaram à maior produção de lacase foram os de cupuaçu (1642 U.mL-1), cacau (1589 U.mL-1), palha de guariroba (1258 U.mL-1) e açaí (886 U.mL-1) no sexto dia de cultivo, sendo superiores ao controle positivo induzido com 2,5-xilidina e cobre (511 U.mL-1). O extrato enzimático induzido com resíduo de cupuaçu se mostrou ser estável a elevadas temperaturas, bem como a diferentes pHs, além de ter sido capaz de oxidar diferentes substratos, sendo o extrato de escolha para a remediação do 17-α-Etinilestradiol. Obteve-se 86% de remoção após 4 horas de reação e após 8 horas a concentração do hormônio foi abaixo do Limite de Detecção do método. Análises de MS-ESI-TOF mostraram que a molécula de hormônio pode ter sofrido biodegradação durante o processo de biorremediação.

A subnutrição é uma doença causada pela ingestão inadequada e/ou insuficiente de energia ou de outras biomoléculas, que pode comprometer o crescimento e o desenvolvimento dos tecidos. Em conjunto, a cartilagem do processo condilar da mandíbula e a sincondrose basioccipital representam os dois centros efetivos do crescimento craniofacial, que depende, dentre outros, de fatores locais como a produção do fator de crescimento semelhante à insulina I (IGF-I) e seu receptor (IGF-IR). Alterações tanto no peptídeo quanto no receptor estão associadas a graves atrasos no crescimento e desenvolvimento ósseo. Dentre os nutrientes alternativos com a capacidade de promoção da recuperação nutricional, destaca-se o resveratrol, um polifenol contido na uva e derivados que pode promover a melhora do crescimento através de propriedades osteogênicas, além de atuar como condroprotetor. Assim, a presente pesquisa teve por objetivo avaliar os efeitos da subnutrição proteica na cartilagem do processo condilar da mandíbula (PC) e na sincondrose basioccipital (SBo) de ratos, bem como os processos de renutrição e suplementação com resveratrol nos períodos pré-púbere (21 dias) e púbere (60 dias). Os grupos nutrido (N) e subnutrido (S) foram formados por filhotes cujas mães receberam dieta normoproteica e hipoproteica, respectivamente, desde o período de acasalamento; ao completarem 21 dias de vida extrauterina, época determinada para o desmame, os filhotes foram eutanasiados. A partir do 22° dia de vida, filhotes dos grupos N e S foram mantidos com as respectivas dietas até o 60° dia de vida quando constituíram, respectivamente, os grupos NN e SS. Dois grupos considerados renutridos foram formados por animais do grupo S, que a partir do 22° dia passaram a receber, o primeiro, a dieta normoproteica com 20% de caseína (grupo RN), e o segundo, a dieta normoproteica acrescida de resveratrol (RRv). A cartilagem do PC e a SBo foram processadas através das técnicas histológicas rotineiras e posteriormente submetidas às colorações da HE, Picrossíruis e Safranina-O, para a evidenciação dos componentes celular e colágeno e imunohistoquímica para a marcação de células reativas ao IGF-I e IGF-IR. Os aspectos ultraestruturais também foram analisados através da microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados mostraram que a subnutrição foi capaz de alterar os componentes da matriz extracelular (MEC), acarretando em modificações na secreção das fibrilas colágenas e acúmulo de proteoglicanas nos tecidos; diminuição do número de células imunorreativas ao IGF-I e IGF-IR na cartilagem do PC e atraso no crescimento ósseo endocondral, comprovado através das avaliações quantitativas e morfométricas, em ambos os tecidos. A renutrição com dieta normal foi parcialmente eficaz na recuperação dos parâmetros avaliados, e pode ter provocado uma diminuição da capacidade de resposta celular ao IGF-I. Os efeitos condroprotetores do resveratrol foram fundamentados através da recuperação dos componentes da MEC e organelas dos condrócitos e uma possível diminuição da insensibilidade ao IGF-I; o atraso no crescimento ósseo endocondral foi minimizado através do seu potencial osteogênico (mais acentuado na SBo). Muito embora a recuperação dos tecidos não tenha ocorrido totalmente, diante dos dados apresentados, pode-se afirmar que a suplementação de resveratrol na dieta auxiliou de forma mais efetiva no restabelecimento dos parâmetros afetados pela subnutrição do que somente a recuperação proteica com dieta normal / Undernutrition is a disease caused by inadequate and / or insufficient intake of energy or other biomolecules, which can compromise growth and development of tissues. Together, the mandibular condylar cartilage and basioccipital synchondrosis represent the two effective centers of craniofacial growth, which depends of the factors such as the local production of insulin like growth factor I (IGF-I) and receptor (IGF-IR). Changes in both the peptide and receptor are associated with serious delays in growth and bone development. Among the alternative nutrients to the promotion capacity of nutritional recovery, there is resveratrol, a polyphenol contained in grapes and derivatives that can promote improved growth through osteogenic properties, besides acting as chondroprotective. Thus, the present study aimed to evaluate in rats the effects of protein undernutrition in the mandibular condylar cartilage and basioccipital synchondrosis, as well renutrition and supplementation with resveratrol in pre pubertal periods (21 days) and pubertal (60 days). The nourished groups (N) and undernourished (S) were formed by young whose mothers received normal protein and hypoproteic diet respectively since the breeding season; to complete 21 days of extra-uterine life, given time to weaning, puppies were euthanized. From the 22nd day of life, puppies from N and S groups were kept with their diets until the 60th day of life when constituted, respectively, NN and SS groups. Two groups considered re-nourished were formed by the S group, which from day 22 began receiving, the first, the normal protein diet with 20% casein (RN group), and the second, the normal protein diet plus of resveratrol (RRv). The cartilage of PC and SBo were processed through routine histological techniques, and then subjected to HE, Sirius red and Safranin-O staining for the disclosure of cellular components and collagen and immunohistochemistry for marking cells responsive to IGF-I and IGF-IR. The ultrastructural aspects were also analyzed by transmission electron microscopy. The results showed that undernutrition was able to change the components of the extracellular matrix (ECM) leading to changes in the secretion of collagen fibrils and proteoglycans accumulation in the tissues; decrease in the number of immunoreactive cells to IGF-I and IGF-IR in PC cartilage and delayed endochondral bone growth, confirmed by quantitative and morphometric analysis in both tissues. Renutrition with normal diet was partially effective in recovering the parameters evaluated, and may have caused a decrease in cell responsiveness to IGF-I. The chondroprotective effects of resveratrol were founded by recovering the ECM components and organelles of chondrocytes and a possible decrease in the insensitivity to IGF-I; the delay in endochondral bone growth was minimized by osteogenic potential (more pronounced in SBo). Although the tissue recovery has not fully occurred, the resveratrol supplementation in the diet helped more effectively in restoring the parameters affected by undernutrition than just protein recovery with normal diet

Orientador: Miriam Dupas Hubinger / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-23T08:08:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_EmiliodeCarvalho_M.pdf: 13604632 bytes, checksum: 4270ae81b2660ac8c4ff7da858666d64 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O pequi (Caryocar brasiliense Camb.) é uma fruta do cerrado que apresenta alto teor de compostos fenólicos, carotenóides e alta atividade antioxidante. A microencapsulação dos polifenóis pode aumentar a sua estabilidade a fatores externos como luz e oxigênio, em relação a sua forma livre. Além disso, ajuda a reduzir os gostos indesejávies. Este trabalho teve como objetivo estudar a microencapsulação dos compostos bioativos dos extratos aquosos do pequi. Foram preparados extratos aquosos de diferentes razões fruta:água (1:2 e 1:3) com os seguintes parâmetros fixados: 1 h de extração, 25 C. Em seguida os extratos foram concentrados por nanofiltração, em uma membrana do tipo espiral com massa molecular de corte de 150 a 300 g/mol e área de 1,2 m2, onde foram avaliadas as condições de processo via: fluxo de permeado (8,4 a 16,6 L/hm2) e índice de retenção (93 a 95%). Os extratos obtidos foram microencapsulados usando um secador do tipo spray dryer, com os seguintes parâmetros fixados: vazão de ar de secagem de 300 m3/h, vazão do ar comprimido de 1,85 m3/h e pressão do ar comprimido de 3 bar. Foi inicialmente investigada a influência de cinco tipos de materiais de parede (Maltodextrina 10 DE, Maltodextrina 20 DE, Xarope de Glicose, HiCap e Snow Flake) e sua respectiva concentração (0 a 20% p/p) na retenção de polifenóis. Posteriormente foram avaliados os efeitos da temperatura do ar de entrada (140 C e 180 C) e diferentes diâmetros de bico atomizadores (1,0 e 2,0 mm) na qualidade dos pós gerados. As microesferas obtidas foram caracterizadas em relação ao conteúdo de umidade, atividade de água, higroscopicidade, distribuição de tamanho e diâmetro médio de partículas, temperatura de transição vítrea e microestrutura. No geral, as partículas produzidas apresentaram formato esférico sem rachaduras ou poros quando atomizadas a 180 C e formato mais irregular à 140 C. Além disso, foram também determinados: a retenção de polifenóis, atividade antioxidante via DPPH e FRAP e a estabilidade a 45 C por 49 dias. As micropartículas apresentaram retenção de polifenóis na ordem de 67 a 72% e atividade antioxidante de 42 a 68% de inibição via DPPH e 48 a 83 mg/g via FRAP. A estabilidade dos polifenóis ao longo do tempo foi analisada via espectrofotometria e cromatografia liquida de alta eficiência (CLAE). A análise via CLAE se mostrou mais confiável e as partículas atomizadas apresentaram uma menor degradação com o tempo, em relação às amostras liofilizadas. Independentemente do modo de produção do extrato, a microencapsulação à 140 C/1,0 mm foi mais adequada / Abstract: Pequi (Caryocar brasiliense Camb.) is a Brazilian fruit with high levels of phenolic compounds and high antioxidant activity but its phytochemical aspects are little known. The bioactive compounds present in pequi could be added to formulated foods and beverages. However these compounds are generally unstable in liquid form and microencapsulation may increase its stability to external factors such as light and oxygen. This work aimed to study the extraction and the microencapsulation by spraydrying of polyphenols present in pequi. Aqueous extracts were prepared from different proportion of fruit:water (1:2 and 1:3), with the following parameters determined: 1 h of extraction at 25 C. Then the extracts were concentrated by nanofiltration, in a spiral wound membrane with a molecular cut-off of 150 to 300 g/mol, and 1.2 m2 of active area and the process conditions were evaluated by: permeate flux, wich varied from 8.4 to 16.6 L /h.m2 and retention of phnolics index, wich varied from 93 to 95 %. The extracts were microencapsulated using a spray dryer with the following fixed parameters: drying air flow of 300 m3/h, compressed air flow of 1.85 m3/h and air pressure of 3 bar. The initial variables were: wall material concentration (0 to 20%) and type (maltodextrin 10 DE and 20 DE, Glucose Syrup, Hicap and Snow Flake). Highest polyphenols retention was the target. For the chosen condition: 15% of mixture - Snow Flake/maltodextrin 10 DE (1/3), drying temperature (140 C and 180 C) and nozzle diameter variation (1.0 and 2.0 mm) were investigated. The microspheres were characterized with respect to moisture content, water activity, hygroscopicity, size particle distribution and particle diameter, glass transition temperature and microstructure. In general, the spherical particles produced exhibited no cracks or pores when atomised at 180 C and were more irregular when atomised at 140 C. Moreover, polyphenol retention, antioxidant activity by DPPH and FRAP and stability at 45 C for 49 days were also determined. The microparticles showed 67 to 72 % of polyphenol retention and antioxidant activity of 42 to 68 % inhibition by DPPH and 48 to 83 mg/g by FRAP. The polyphenols stability was analyzed by spectrophotometer and high performance liquid chromatography (HPLC). The analysis by HPLC showed the most reliable and the atomized particles had lower degradation compared to lyophilized samples. Regardless of the method of production of the extract, microencapsulation using 140 C/1.0 mm was more suitable / Mestrado / Engenharia de Alimentos / Mestre em Engenharia de Alimentos

Dans le cadre d’une convention de thèse CIFRE en collaboration de recherche entre la société Pollenergie et le Centre de Coopération Internationale en Recherche Agronomique pour le Développement (CIRAD), le potentiel antifongique de la propolis a été étudié. A cet effet, six échantillons de propolis provenant de régions géographiques différentes (France et Brésil) et d’origines botaniques variées (genre Populus, Dalbergia ecastophyllum et Baccharis dracunculifolia) ont été analysés.Les Extraits Ethanoliques de Propolis (EEP) mis au point, riches en composéspolyphénoliques (de 12,8 ± 0,4 à 16,2 ± 0,3 g EAG.l-1) présentent une grande diversité de classes de molécules bioactives selon leur origine botanique. Les polyphénols identifiés dans les extraits de propolis de Populus (France) sont principalement des flavonoïdes et leurs dérivés (galangine, pinobanksine, chrysine) et des acides-phénols (acides p-coumarique et caféique) et dans les extraits de propolis verte de Baccharis dracunculifolia et rouge de Dalbergia ecastophyllum (Brésil) ce sont respectivement des acides-phénols et leur dérivés prénylés (artépilline C, acide p-coumarique) et des composés isoflavonoïdiques (vestitol, médicarpine).Tous les EEP ont démontré un potentiel antifongique in vitro, variable selon les espèces botaniques, à deux stades de développement d’une souche phytopathogène (Colletotrichum musae), isolée de la pourriture de couronne de la banane. Deux extraits de Populus (France) en particulier ont montré la plus forte efficacité contre C. musae.Un extrait aqueux de propolis rouge de Dalbergia ecastophyllum a démontré la plus grande efficacité in vitro. Cet extrait, testé ensuite in vivo sur trois maladies de conservation de la banane a prouvé tout son potentiel antifongique comme traitement alternatif et son efficacité en augmentant la durée de conservation des bananes à l’export. / In the framework of a CIFRE thesis agreement in collaboration between Pollenergie and the Center for International Cooperation in Agronomic Research for Development (CIRAD), the antifungal potential of propolis has been studied. For this purpose, six samples of propolis from different geographical regions (France and Brazil) and various botanical origins (genus Populus, Dalbergiaecastophyllum and Baccharis dracunculifolia) were analyzed.The Ethanolic Extracts of Propolis (EEP) finalized, rich in polyphenolic compounds (from 12.8 ± 0.4 to 16.2 ± 0.3 g EAG.L-1), exhibit a great diversity of classes of bioactive molecules according to their botanical origin. The polyphenols identified in propolis extracts of Populus (France) are mainlyflavonoids and their derivatives (galangin, pinobanksin, chrysin) and acids-phenols (p-coumaric and caffeic acids). In contrast, the extracts of green propolis of Baccharis dracunculifolia and red from Dalbergia ecastophyllum (Brazil) they are respectively phenol acids and their prenylated derivatives(artepillin C, p-coumaric acid) and isoflavonoid compounds (vestitol, medicarpin).All EEPs have demonstrated an in vitro antifungal potential, which varies according to botanical species, at two stages of development of a phytopathogenic strain (Colletotrichum musae), isolated from the crown rot of banana. Two extracts of Populus (France) in particular showed the greatest efficacy against C. musae.An aqueous extract of red propolis from Dalbergia ecastophyllum demonstrated the greatest efficiency in vitro. This extract, which was then tested in vivo on three banana conservation diseases, proved its antifungal potential as an alternative treatment and its effectiveness in increasing the shelf life of bananas for export.