Orientador: Roberto Wagner Lourenço / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T22:22:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barbosa_GersonLaurindo_M.pdf: 4104372 bytes, checksum: c81a93674f03b1fc99037e16f9b3cf09 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Dengue é um importante problema de Saúde Pública. Seu vírus é transmitido pela picada do mosquito Aedes aegypti, cujo combate vem sendo realizado desde os tempos de Oswaldo Cruz, com tentativas de erradicação sem sucesso. O atual Programa de controle, não atinge o objetivo de manter baixos níveis de infestação, e impedir a transmissão do dengue. Este trabalho objetivou analisar a relação entre a distribuição espaço-temporal de casos de dengue, os indicadores larvados e características socioambientais no município de Tupã no período de janeiro de 2004 a dezembro de 2007. Foram construídos indicadores larvários por quarteirão e totalidade do município. Os casos de dengue foram agrupados por quarteirão. Foi utilizado estimador kernel para analise espacial. Foram também construídos indicadores de qualidade socioambiental por setor censitário. A positividade de larvas no período estudado apresenta sazonalidade marcante, com maiores valores observados no primeiro e quarto trimestres do ano. A correlação cruzada defasada é significativa nos 2 anos de transmissão de dengue, considerando 2 meses de defasagem. Os mapas do estimador Kernel da positividade de recipientes com larvas indicam uma distribuição heterogênea, com aglomerados espaciais em diferentes regiões ao longo do período estudado. Os mapas dos casos de dengue mostram que houve um espalhamento da epidemia com aglomerados em diferentes regiões nos dois anos. Não ficou evidenciada relação entre infestação larvária e ocorrência de dengue com níveis socioambientais. Conclui-se que a incorporação de técnicas de geoprocessamento e análise espacial no programa podem contribuir com as ações de controle, na tomada de decisões, indicando os aglomerados espaciais de maior incidência / Abstract: Undoubtedly dengue fever is a major problem for Public Health. Its virus is transmitted by the bite of the mosquito Aedes aegypti, which combat has been carried out since Oswaldo Cruz's time without success despite several eradication attempts. The current control Program does not meet the target of keeping the levels of infestation low and preventing the transmission of dengue fever. This work had as its aim to analyze the relationship between the spatiotemporal distribution of cases of dengue fever, the larval indices and the environmental characteristics in the Tupa municipal district from January 2004 to December 2007. Larval indices were built by block and municipal district totality. The cases of dengue fever were grouped by block. The kernel density estimation was applied in order to obtain the spatial analysis. Indicators of environmental quality were also built by census sector. The existence of larvae during the studied period shows remarkable seasonal features, with higher values being observed in the first and fourth periods of three months. The cross-lagged correlation is significant in the two years of dengue fever transmission considering two months of discrepancy. The kernel density estimation maps of positivity of recipients with larvae indicate a heterogeneous distribution with spatial groupings in different regions throughout the studied period. The maps of cases of dengue fever demonstrate that there was a spreading of the epidemic with agglomeration in different regions in the two years. There was no evidence of a relation between larval infestation and the occurrence of dengue fever with environmental levels. It was concluded that the incorporation of techniques of geographic processing and spatial analysis into the program may contribute to the control actions, decision taking, indicating a spatial agglomeration of higher incidence / Mestrado / Epidemiologia / Mestre em Saude Coletiva

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / Dengue fever has been shown to be one of the main public health problems in Cearà the principal vector is the Aedes aegypti mosquito In recent decades chemical control has been under question, both due to the insectâs selective resistance capacity and for environmental reasons Thus the use of biological alternatives has been encouraged worldwide Consequently the objective of this study was to evaluate 5 fish species that have been used as an alternative for the control of Aedes aegypti larvae in domestic water tanks in the State of Cearà Brazil The species evaluated were Betta splendens Trichogaster trichopteros Astyanax fasciatus e Poecilias reticulata and sphenops Larvae-eating capacity prefered predation locations and resistence to chlorine were evaluated All five species had a high larvae-eating capacity; Betta splendens and Poecilias were noteworthy for their larger capacity in relation to weight and body size Astyanax fasciatus and Betta splendens appeared to survive well without the presence of larvae or artificial food in the domestic water tanks whilst Poecilias presented a significant weight loss during the 5-week evaluation Regarding the location of predation it was observed that Poecilias spent most of the time at the surface whereas Trichogaster and Betta had greater mobility in the container As to chorine resistance Poecilias had a significant mortality when exposed to concentrations of 0.5mg/litre while other species of Betta and Trichogaster were able to survive concentrations up to 4.00mg/litre Therefore it was possible to demonstrate that the 5 species can be used as biological control alternatives although each one is indicated for different water tanks due mainly to the food available and the chlorine concentrations / O dengue vem se mostrando como um dos principais problemas de saÃde pÃblica no Cearà e o mosquito Aedes aegypti à seu principal vetor Nas Ãltimas dÃcadas o controle quÃmico vem sendo questionado tanto pela capacidade de seleÃÃo de resistÃncia dos insetos quanto por questÃes ambientais Com isso o uso de alternativas biolÃgicas vem sendo incentivado no mundo Desta forma o objetivo deste trabalho foi avaliar 5 espÃcies de peixe que vem sendo utilizados como alternativa de controle para larvas de Aedes aegypti em depÃsitos domiciliares no Estado do Cearà As espÃcies avaliadas foram o Betta splendens Trichogaster trichopteros Astyanax fasciatus e Poecilias reticulata e sphenops Foram avaliadas capacidade larvÃfaga locais preferenciais de predaÃÃo e resistÃncia ao cloro Todas as cinco espÃcies apresentaram uma elevada capacidade larvÃfaga destacando-se o Betta splendens e os Poecilias por apresentarem as maiores capacidades em relaÃÃo ao peso e tamanho corporal As espÃcies Astyanax fasciatus e Betta splendens parecem sobreviver bem sem a presenÃa de larvas ou alimentos artificiais nos reservatÃrios domiciliares enquanto os Poecilias apresentam uma perda significativa de peso durante as 5 semanas de avaliaÃÃo Em relaÃÃo ao local de predaÃÃo foi possÃvel observar que os Poecilias permaneceram a maior parte do tempo na superfÃcie enquanto o Trichogaster e o Betta apresentaram uma maior mobilidade no reservatÃrio Quanto à resistÃncia ao cloro mostrou-se que as espÃcies de Poecilias jà apresentam uma significativa mortalidade quando expostos à concentraÃÃes de 0,5mg/litro enquanto alguns espÃcimens do Betta e do Trichogaster mostraram capacidade de sobreviver atà concentraÃÃes de 4,00mg/litro Desta forma foi possÃvel demonstrar que as 5 espÃcies podem ser utilizadas como alternativa de controle biolÃgico entretanto cada uma se apresenta mais indicada a depÃsitos diferentes devido principalmente a oferta de alimentaÃÃo e concentraÃÃo de cloro

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-12-01T08:08:44Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Sávio da Silva Cabral - 2015.pdf: 9714568 bytes, checksum: f7d378786c6256c4c799baf29e381ad4 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-12-01T08:12:06Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Sávio da Silva Cabral - 2015.pdf: 9714568 bytes, checksum: f7d378786c6256c4c799baf29e381ad4 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-01T08:12:06Z (GMT). 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So how vaccines are not ready for use, dengue control has been done by the intervention of actions against the vector, Ae. aegypti. Among the actions, the use of synthetic chemical insecticides has been the main, it emerged mosquito susceptibility of modification in many Brazilian cities and later confirmation of resistance status. This paper proposes the search for alternatives, through prospecting of natural compounds insecticides for the control of Ae. aegypti. Among the actions, the use of synthetic chemical insecticides has been the main. However, with the continuous use of the same product in some brazilians municipalities seemed evidence of mosquito susceptibility modification and subsequently confirm the resistance status. Among, measures control alternatives Ae. aegypti is prospecting for natural compounds insecticides. This work proposes the study of crude ethanol extract (c.e.e.) the result of Swinglea glutinous as larvicide and it showed CL50 and CL90 of 74.4 ppm to 125.2 ppm for third instar larvae of Ae. aegypti, besides the toxicity effect on these intestinal cells larvae investigated by morphohistological study. The morphological changes that are intensified with increasing time of exposure to the larvae of c.e.e. were visualized particularly in the posterior region of the midgut, included folding of the peritrophic matrix, increasing subperitrophic space, cytoplasmic vacuolization, reduction of the microvilli cells. What characterized and checked the larvicidal effect of c.e.e. demonstrating its potential use for controlling Ae. aegypti. / Aedes aegypti é o principal vetor de dengue, da febre amarela urbana e arboviroses emergentes no Brasil, como a febre chikungunya. Esse mosquito encontra-se adaptado ao ambiente urbano, e tem como importante fator para a manutenção de sua espécie, o longo período de quiescência dos ovos, que foi uma extraordinária adaptação fisiológica aos diferentes fatores climáticos. Aproximadamente 2,5 bilhões de pessoas vivem em países endêmicos, expostos à transmissão de dengue. A melhor solução para o controle seria vacinas plurivalentes para os sorotipos existentes. Vacinas tetravalentes estão sendo testadas em vários países, incluindo o Brasil. Recentemente, foi descrito um quinto sorotipo, e isto provavelmente pode ampliar o curso da pesquisa. O controle de dengue, ainda tem sido feito pela intervenção de ações contra o vetor, Ae. aegypti. Dentre as ações, o uso de inseticidas químicos sintéticos tem sido a principal. Porém, com o uso contínuo do mesmo produto, em alguns municípios brasileiros apareceram indícios da modificação da suscetibilidade do mosquito e, posteriormente, a confirmação do status de resistência. Dentre medidas alternativas de controle de Ae. aegypti está a prospecção de compostos naturais inseticidas. Este trabalho propões o estudo do extrato bruto etanólico (e.b.e.) do fruto de Swinglea glutinosa como larvicida e este apresentou CL50 de 74,4 ppm e CL90 de 125,2 ppm para larvas de terceiro estádio de Ae. aegypti, além do efeito de toxicidade em células do intestino dessas larvas, investigados por meio de estudo morfohistológico. As alterações morfológicas que se intensificavam com o aumento do tempo de exposição das larvas ao e.b.e., foram visualizadas principalmente na região posterior do mesêntero, incluía o dobramento da matriz peritrófica, o aumento do espaço subperitrófico, vacuolizações citoplasmáticas, diminuição das microvilosidades das células. O que caracterizou e comprovou o efeito larvicida do e.b.e., demonstrando seu potencial uso para o controle de larvas de Ae. aegypti.

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2016-01-20T15:41:36Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Amanda Gabrielle da Silva - 2015.pdf: 1218291 bytes, checksum: 56dd4b22c77bb02a83c9d20a4cc4e0ce (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-01-21T07:54:16Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Amanda Gabrielle da Silva - 2015.pdf: 1218291 bytes, checksum: 56dd4b22c77bb02a83c9d20a4cc4e0ce (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-21T07:54:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Amanda Gabrielle da Silva - 2015.pdf: 1218291 bytes, checksum: 56dd4b22c77bb02a83c9d20a4cc4e0ce (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-09-09 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Considering potential molecular methods for diagnostic and/or therapeutic purpose of infectious human diseases, such as dengue, highlights the systematic evolution of ligands by exponential enrichment, known as SELEX. In this method, ligands to a target are exponentially enriched generating aptamers of DNA or RNA with high specificity, being considered as artificial antibodies. In this work, we aimed to realize the isolation of aptamers binding to 3'-UTR (untranslated region) of the RNA from dengue virus (DENV), because present important conformational structures that act as functional elements into RNA necessary in the infectious process. Total RNA of C6/36 infected cells was extracted, submitted to reverse transcription reaction to obtain viral cDNA (serotypes 2 and 3) and amplified by symmetric and/or asymmetric PCR technique to produce the 3’-UTR from DENV as target, generating RNA-like by containing deoxyuridine triphosphate (dUTP) and biotin in the 5’ region of the target. The random library of RNA ligands was obtained by sonication of a pool from human genomic DNA used in three successive PCR, and in the last reaction was introduced the promoter of T7 RNA polymerase, presenting fragments ranging from 80 to 600-bp. Eight rounds of selection were performed between the target and the library by using paramagnetic particles coated with streptavidin. For each round, after the incubation, the non-ligands were removed by using magnetic platform, and the ligands were eluted with NaOH. The eluted ligands were precipitated, submitted to RT-PCR and transcription in vitro, completing one round of selection. For analysis of variability of ligands, the product obtained from the eighth round was cloned and fourteen clones were randomly selected for amplification. The results demonstrated that the aptamers presented sizes with estimated molecular weights varying from 80 to 100-bp. These data indicated the viability of aptamers isolation against conformational elements present in the 3'-UTR of RNA from dengue virus, which may contribute to future research focusing on prevention and/or control of the disease. / Dentre os potenciais métodos moleculares para o diagnóstico e/ou terapêutica de doenças que acometem a saúde humana, tais como a dengue, destaca-se a seleção de ligantes pela utilização da química combinatória, conhecida como SELEX. Nesse método, os ligantes a um alvo são enriquecidos exponencialmente tendo como produto final a obtenção de aptâmeros de DNA ou RNA com elevada especificidade, sendo considerados como anticorpos artificiais. No presente trabalho foi realizado o isolamento de aptâmeros de RNA ligantes à extremidade 3’-UTR (untranslated region) do RNA do vírus da dengue (DENV), por apresentar elementos de RNA conformacionais e funcionais importantes no processo infeccioso. A partir do RNA extraído de células C6/36 infectadas foi feita a transcrição reversa (RT) para produção de cDNA viral (sorotipos 2 e 3) e amplificação por PCR simétrica e/ou assimétrica para a produção do alvo 3’-UTR do DENV, na forma de RNA-like por conter desoxiuridina trifosfatada (dUTP) e biotina na extremidade 5’. A biblioteca randômica de ligantes de RNA foi obtida por sonicação de um pool de DNA genômico humano utilizado como alvo em três PCRs sucessivas sendo que na última reação foi introduzido o promotor da T7 RNA polimerase e cujos fragmentos variaram de 80 a 600-pb. Foram realizados oito rounds de seleção entre alvo e biblioteca utilizando partículas paramagnéticas revestidas com estreptavidina. A cada round, após o período de incubação, os oligonucleotideos não ligantes foram removidos com o auxílio de plataforma magnética, e os ligantes foram eluídos com NaOH. Os ligantes eluídos foram precipitados e submetidos à RT-PCR e transcrição in vitro, finalizando um round de seleção. Para verificar a variabilidade de ligantes, o produto do oitavo round foi clonado e 14 clones foram selecionados aleatoriamente para amplificação. Os resultados demonstraram que os aptâmeros isolados possuem tamanhos distintos, com pesos moleculares estimados variando de 80 a 100-pb. Os dados aqui obtidos indicaram a viabilidade do processo de isolamento de aptâmeros para elementos conformacionais presentes na extremidade 3’-UTR do RNA do vírus da dengue os quais poderão contribuir para pesquisas futuras com foco na prevenção e/ou controle da doença.

A crescente demanda por combustíveis provenientes de fontes renováveis, em função de questões ambientais e possível escassez dos derivados de petróleo, juntamente com a obrigatoriedade de sua adição no óleo diesel empregado atualmente, levou a uma \"explosão\" do número de empresas que produzem biodiesel. Este produto é obtido pela transesterificação de gorduras animais e óleos vegetais na presença de catalisador, processo que resulta um único sub-produto, a glicerina, a qual teve um aumento de produção na medida do aumento de produção do biodiesel. Uma forma de contribuir para diminuir os problemas advindos do acúmulo da glicerina é utilizá-la como base para formular meios de fermentação e obter produtos de interesse sócio-econômico. Um exemplo é o bioinseticida produzido pela bactéria Bacillus thuringiensis para o controle do mosquito transmissor do vírus da dengue. Este produto apresenta várias vantagens quando comparado aos inseticidas químicos, pois impede que os insetos adquiram resistência, não polui e é seletivo, não oferecendo riscos de intoxicação para os insetos benéficos e animais vertebrados. Cabe salientar que as toxinas produzidas por esta bactéria são letais também para larvas dos mosquitos transmissores da malária e da elefantíase. Assim, no presente trabalho propõe-se obter um bioinseticida com princípio ativo produzido por Bacillus thuringiensis var. israelensis, empregando o resíduo da fabricação de biodiesel a partir de óleo vegetal. Para tanto, o trabalho compreendeu três fases: 1. Definição de um tratamento para o resíduo que proporcionasse o crescimento da bactéria e a produção de toxina. 2- Estudo do processo fermentativo com o objetivo aumentar a atividade larvicida do meio fermentado em frascos (definição da composição do meio e de condições de fermentação) e 3. Estudo da transferância de oxigênio em diferentes fases do desenvolvimento da bactéria, em biorreator. O estudo em frasco foi realizado em Erlenmeyer de 1.000 mL, provido ou não de chicanas, com 200 mL de meio. O estudo da transferência de oxigênio foi realizado em fermentador Bioflo III, (New Brunswick Sci. Co.) de 1,25 L. Com os resultados obtidos, foi possível concluir que o melhor tratamento para o resíduo em estudo, consistiu do abaixamento do pH até 4 com ácido fosfórico, seguido de decantação por 24 horas. Com este tratamento foi possível obter uma fonte de carbono mais viável enocomicamente e, pelos estudos de otimização de processo, foi possível determinar a melhor composição de meio de cultura (10 g/L de glicerina tratada, 6 g/L de extrato de levedura, 3 g/L de (NH4)2SO4, 0,12 g/L de CaCl2.2H2O, 1,5 g/L de MgSO4.72H2O, 0,09 g/L de MnSO4, 1,5 g/L de K2HPO4 e 1,5 g/L de KH2PO4) e a melhor condição de aeração (manter a concentração de oxigênio dissolvido em 45% da saturação durante todas as fases do desenvolvimento da bactéria). Desta forma, foi possível produzir um meio fermentado 583 vezes mais potente que o ensaio controle empregando glicerol PA. / The increasing demand for fuels originated from renewable sources, due to environmental issues and possible scarce of petroleum products, together with the mandatory of its inclusion in diesel oil currently used, generated a significant increase in the number of biodiesel producting companies. This product is obtained through transesterification reaction of animal fat and vegetable oils in the presence of a catalyzer, process that results in a single by-product, the glycerin, which had an increase of its production as biodiesel production increases. A way to contribute for the reduction of problems generated by the excess of glycerin is to use it in the composition of fermentation medium and obtain products that are demanded by society. An example is the bioinsecticides produced by the bacteria named Bacillus thuringiensis, used in the controlling of mosquito vectors of the dengue viruses. This product presents several advantages when compared to chemical insecticides because it prevents insects resistance, it does not pollute the environment and it is selective, which means it does not create risks of intoxication for other insects and vertebrate animals. It is important to mention that toxins produced by these bacteria are lethal as well to the larvae of malaria and elephantiasis mosquito vectors. Thus, in this work it is intended to obtain a bioinsecticide containing active ingredient from Bacillus thuringiensis var. israelensis by using the biodiesel production waste from vegetable oils. In order to achieve that, this work consisted of three steps: 1. Definition of a treatment for the waste of biodiesel to provide the growth of Bacillus thuringiensis and its toxin production; 2. Study of the fermentative process to increase larvicidal activity of the fermentation broth in flasks (definition of the medium composition and the fermentative conditions) and 3. Study of the oxygen transference in bioreactor in diferent development phases of the bacteria. The study in flask was made in a 1000 mL Erlenmeyer flask, with and without baffles, and 200 mL of medium. The study of oxygen transference was realized in a 1,25 L bench fermentor (New Brunswick Sci. Co./Bioflo III). With the results obtained it was possible to conclude that the best treatment to the waste of biodiesel consisted of decreasing pH until 4 with phophoric acid, followed by 24 hours of decantation. With this treatment it was possible to obtain a promising carbon source more and, by the process optimization studies, it was possible to determine the best composition of culture medium (10 g/L of treated glycerin; 6 g/L of yeast extract; 3 g/L of (NH4)2SO4; 0,12 g/L of CaCl2.2H2O; 1,5 g/L of MgSO4.7H2O; 0,09 g/L of MnSO4; 1,5 g/L of K2HPO4 and 1,5 g/L of KH2PO4) and the best aeration condition (mantaining the oxygen concentration at 45% of saturation during all phases of bacterial development). So, it was possible to obtain a fermented broth 583 times more potent than the control test using pure glycerol.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Cryptostegia grandiflora R. Br. à um arbusto da famÃlia Apocynaceae conhecida popularmente como âunha de bruxaâ. O lÃtex dessa espÃcie à pouco estudado e ensaios preliminares jà haviam demonstrado a sua aÃÃo sobre o vetor da dengue. Dessa forma, este trabalho teve como objetivo caracterizar o lÃtex de Cr. grandiflora quanto as suas propriedades bioquÃmicas e avaliar a aÃÃo de suas proteÃnas contra o Aedes aegypti. ApÃs a coleta, o lÃtex foi separado em duas fraÃÃes, uma insolÃvel constituÃda por borracha (97%) e uma solÃvel contendo proteÃnas (3%). AnÃlises por eletroforese demonstraram a presenÃa de proteÃnas de variadas massas moleculares, cujo perfil foi completamente alterado apÃs tratamento com agente redutor e predominÃncia de proteÃnas Ãcidas com pI inferior a 5,0 (59%). Algumas proteÃnas da fraÃÃo solÃvel foram detectadas na borracha apÃs extraÃÃo com soluÃÃes Ãcidas, bÃsicas e salinas. Na fraÃÃo protÃica foram detectadas glicoproteÃnas, atividade quitinolÃtica (58,68  4,45 nKat/Âg) e de enzimas antioxidantes tais como Catalase (0,254  0,03 ÂMol H2O2/min g), SuperÃxido Dismutase (886,36  0,35 UA/g) e Peroxidase do Ascorbato (0,389  0,03 ÂMol H2O2/min g). As proteÃnas do lÃtex tambÃm apresentaram forte atividade proteolÃtica em pH 5,0 (5,43 UA/μgP) a qual foi aumentada 6,13 UA/μgP apÃs ativaÃÃo com o agente redutor DTT. A forte atividade proteolÃtica com o substrato BANA (20,95 UA/μgP) e a inibiÃÃo da mesma na presenÃa dos inibidores especÃficos E-64 e IAA demonstrou a predominÃncia de proteases cisteÃnicas no lÃtex. Proteases serÃnicas, aspÃrticas e metaloproteases nÃo foram detectadas. A atividade proteolÃtica foi resistente a altas temperaturas, persistindo em 50 % apÃs 30 min a 75 ÂC. Inibidores de papaÃna e tripsina parecem ocorrer no lÃtex visto que a atividade destas enzimas foi praticamente eliminada quando incubadas previamente com a fraÃÃo protÃica sem atividade proteolÃtica. O fracionamento das proteÃnas do lÃtex atravÃs de cromatografia de troca iÃnica (DEAE- Sepharose Fast-flow, pH 5,0) gerou dois picos. A atividade proteolÃtica ficou concentrada nas proteÃnas nÃo retidas e foi residual no pico retido eluÃdo em NaCl 1M. Os ensaios biolÃgicos mostraram que a fraÃÃo protÃica nÃo foi capaz de inibir a eclosÃo de ovos do mosquito da dengue atà 24h, no entanto, foi capaz de interferir no desenvolvimento larval acarretando em 60% de mortalidade apÃs 72h. A mortalidade de larvas de terceiro estÃgio causada pela fraÃÃo protÃica (96,66%) aumentou apÃs tratamento com DTT (100%) e foi reduzida apÃs tratamento com os inibidores de proteases cisteÃnicas E-64 (36,66%) e IAA (21,42%). A atividade larvicida foi detectada apenas no pico cromatogrÃfico que concentrava a atividade proteolÃtica. Proteases comerciais inespecÃfica (pronase) e do tipo serÃnicas (tripsina e quimotripsina) nÃo foram tÃxicas para as larvas mesmo em concentraÃÃes iguais as da protease cisteÃnica papaÃna que apresentou aÃÃo tÃxica. BromelaÃna tambÃm nÃo apresentou atividade larvicida. Fotomicrografia das larvas submetidas aos diversos tratamentos nÃo evidenciou nenhum dano morfolÃgico embora tenha sido observada hipertrofia dos segmentos abdominais. Houve alteraÃÃo no perfil eletroforÃtico das proteÃnas larvais incubadas com a fraÃÃo protÃica do lÃtex e proteases comerciais (papaÃna, tripsina e quimotripsina). AtravÃs de anÃlise por microscopia de fluorescÃncia foi observada a presenÃa de proteÃnas em toda a estrutura larval, com algumas distinÃÃes entre as trÃs fraÃÃes protÃicas de lÃtex avaliadas. As proteÃnas do lÃtex nÃo apresentaram atividade inibitÃria contra os vÃrus da dengue tipos 1, 2 e 3. A aÃÃo tÃxica aguda em camundongos nÃo foi evidente em doses de atà 100 mg/kg peso corpÃreo, no entanto, a dose de 1000 mg/kg apresentou 33,33% de mortalidade atà 24h. Esse trabalho mostrou que as proteÃnas do lÃtex de Cr. grandiflora possuem forte efeito larvicida sobre Ae. aegypti e a atividade proteolÃtica do tipo cisteÃnica parece estar correlacionada com os efeitos deletÃrios observados, entretanto, alÃm das proteases outras proteÃnas podem estar envolvidas na toxicidade sobre as larvas. / Cryptostegia grandiflora R. Br. is a shurb belonging to Apocynaceae family popularly known as âunha de bruxaâ. There are few studies available about the latex from this species and preliminary assays had shown its action against Dengue vector. Thus, this study aimed to characterize the biochemical properties of Cr. grandiflora latex and to evaluate the action of its proteins against Aedes aegypti. After collected the latex was separated into two fractions one consisting of insoluble rubber (97%) and another containing soluble proteins (3%). Electrophoretic analysis showed the presence of proteins of several molecular weights whose profile has changed completely after treatment with reducing agent and predominance of acidic proteins with pI less than 5.0 (59%). Proteins from soluble fraction were also detected in the rubber fraction after extraction with acidic, basic and saline solutions. In the protein fraction were detected glycoproteins, chitinolytic activity (58.68  4.45 nKat/Âg) and antioxidant enzymes such as catalase (0.254  0.03 ÂMol H2O2/min g), superoxide dismutase (886.36  0.35 UA/g) and ascorbate peroxidase (0.389  0.03 ÂMol H2O2/min g). Latex proteins also showed strong proteolytic activity at pH 5.0 (5.43 UA/μgP) which was increased to 6.13 UA/μgP after activation by the reducing agent DTT. The strong proteolytic activity with BANA (20.95 UA/μgP) and inhibition of the same in the presence of specific inhibitors E-64 and IAA showed the predominance of cysteine proteases in latex. Serine, aspartic and metalloproteases were not detected. The proteolytic activity was resistant to high temperatures, remaining at 50% after 30 min ate 75. Papain and trypsin inhibitors seem to occur in the latex as the activity of these enzymes was virtually eliminated when previously incubated with protein fraction devoid of endogenous proteases. When fractioned by ion exchange chromatography (DEAE-Sepharose Fast-flow; pH 5.0) the protein fraction produced two peaks. The proteolytic activity was concentrated in non-retained proteins and residual in retained proteins eluted with 1M NaCl. Biological assays showed that the protein fraction was not able to inhibit egg hatching until 24h, however, it was able to interefere upon larval development (60% of mortality after 72h). Larval mortality caused by protein fraction (96.66%) increased after treatment with DTT (100%) and was reduced after treatment with cysteine protease inhibitors E-64 (36.66%) and IAA (21.42%). The larvicidal activity was detected only in the chromatographic peak which concentrated proteolytic activity. Purified non-specific (pronase) and serine proteases (trypsin and chymotrypsin) were not toxic to the larvae even at concentrations equal to those of the cysteine protease papain that showed toxic action. Bromelain also had no larvicidal activity. Photomicrography of larvae subjected to various treatments did not evidence any morphological damage although hypertrophy of abdominal segments was observed. There were alterations in the electrophoretic profile of proteins larval incubated with protein fraction of latex and purified proteases. Larvae exposed to FITC-PL exhibited fluorescence throughout the body and only discrete differences were documented. Latex proteins did not exhibit inhibitory activity against Dengue virus type 1, 2 and 3. The acute toxic action in mice was not evident at doses up to 100 mg / kg body weight, however, the dose of 1000 mg / kg showed 33.33% mortality within 24h. This study showed that proteins from Cr. grandiflora latex have strong larvicidal effect against Ae. aegypti and proteolytic activity of cysteine type seems to be correlated with the deleterious effects observed, however, in addition to proteases other proteins may be involved in toxicity upon larvae.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-04-06T15:26:21Z No. of bitstreams: 2 Tese - Heloisa Helena Garcia da Silva - 2004.pdf: 1077687 bytes, checksum: a8199d694949b3c777b3b578a89c2f28 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-04-06T15:29:32Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Heloisa Helena Garcia da Silva - 2004.pdf: 1077687 bytes, checksum: a8199d694949b3c777b3b578a89c2f28 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-06T15:29:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Heloisa Helena Garcia da Silva - 2004.pdf: 1077687 bytes, checksum: a8199d694949b3c777b3b578a89c2f28 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2004-12-02 / Fundação de Apoio à Pesquisa - FUNAPE / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Dengue is an acute viral disease of great importance to the public health, and its high incidence in the tropical countries is intimately related to the presence of the main vector, the mosquito Aedes aegypti. Throughout the years, attempts to control the vector have been based on the application of synthetic chemical insecticides, which have already began to produce undesirable effects. The modification of the susceptibility and the emergence of generations resistant mosquitoes besides fast proliferation stimulated studies about the activity of natural products on the larvae of A. aegypti, as an alternative measure for control. In this work, phytochemicals studies were accomplished by larvicidal activity of the plants Magonia pubescens St. Hil. (Sapindaceae) and Copaifera reticulata Ducke (Leguminosae), with the purpose of isolating fractions and/or pure substances with insecticide potential. After collection of peels of the M. pubescens stem and C. reticulata oil-resin in natura, extracts obtained were submitted to bioassays, guided-purification and structural identification. For the larvicidal activity assays, 3rd instar larvae of A. aegypti were used. They were obtained from cyclic colony maintained by ten years, at 28±1°C, 80±5% of relative humidity and 12 h photoperiod. Twenty larvae were used for each concentration and the bioassays were carried out in 5 replicate, in an acclimatized ambient similar to colony growth. Control assays were conducted using the same number of larvae in a dimethylsulphoxide and distilled water solution. The mortality of larvae was measured after 24 and 48 h. Fractions, subfractions and pure substances with larvicidal activity, obtained from those procedures, were monitored chemically through thin layer chromatography and analyzed by 1H nuclear magnetic resonance and 13C, and gas chromatography coupled to mass spectrometry. The identified active substance in the M. pubescens was a tannin (C45H36O18 and molecular mass of 864.77 Da) which presented LC50 of 3.1 ppm; from the C. reticulata the acid 3-acetoxi-labda-8(17),13-dien-15-oic was isolated (C22H34O4, and molecular mass of 362 Da) with LC50 of 0.8 ppm. These two active substances presented lethal concentrations with potential use in the actions to control of the A. aegypti. / O dengue é uma doença viral aguda de grande importância na saúde pública, e sua alta incidência nos países tropicais está intimamente relacionada à presença do principal vetor, o mosquito Aedes aegypti. Ao longo dos anos, as tentativas de controlar esse vetor têm sido baseadas na aplicação de inseticidas químicos sintéticos, os quais já começam a produzir efeitos indesejáveis. A modificação da suscetibilidade e o aparecimento de gerações de mosquitos resistentes aos produtos utilizados, além de sua rápida proliferação, estimularam estudos sobre a atividade de produtos naturais sobre as larvas de A. aegypti, como uma medida alternativa para o seu controle. Neste trabalho foram realizados estudos fitoquímicos e de atividade larvicida das plantas Magonia pubescens St. Hil. (Sapindaceae) e Copaifera reticulata Ducke (Leguminosae), com o objetivo de se isolarem frações e/ou substâncias puras com potencial fitoinseticida. Após coleta de cascas do caule de M. pubescens e óleo in natura de C. reticulata, obtiveram-se os extratos, que foram submetidos a procedimentos cromatográficos guiados por bioensaios, purificação e identificação estrutural. Para detecção da atividade larvicida foram utilizadas larvas de 3° estádio de A. aegypti, obtidas de colônia cíclica mantida por dez anos, a 28±1°C, 80±5% de umidade relativa e fotofase de 12h. Foram utilizadas 20 larvas para cada concentração e os bioensaios foram realizados com 5 réplicas, em câmara climatizada similarmente à da criação. Para o controle utilizou-se o mesmo número de larvas em solução de dimetilsulfóxido e água destilada. As leituras de mortalidade foram feitas 24 e 48h após o início dos bioensaios. As frações, subfrações e substâncias puras com atividade larvicida, obtidas desses procedimentos, com as duas plantas, foram monitoradas quimicamente através de cromatografia em camada delgada e analisadas por ressonância magnética nuclear de hidrogênio e carbono-13, e cromatografia a gás acoplada à espectrometria de massas. O princípio ativo identificado na M. pubescens foi um tanino catéquico (C45H36O18 e massa molecular de 864.77 Da) que apresentou CL50 de 3,1 ppm; da C. reticulata foi isolado o ácido 3-acetoxi-labda-8(17),13-dien-15-oico (C22H34O4, e massa molecular de 362 Da) com CL50 de 0,8 ppm. Esses dois princípios ativos apresentaram concentrações letais com potencial de uso nas ações de controle do A. aegypti.

nÃo hà / TÃtulo - CaracterizaÃÃo BioquÃmica Parcial do LÃtex de Calotropis procera (Ait.) R. Br. e Efeito Sobre a EclosÃo de ovos e Desenvolvimento do mosquito transmissor da Dengue. Autor â GlaÃs de Paiva Bandeira. IntroduÃÃo - O arbusto Calotropis procera (Ait.) R.Br. à um membro da famÃlia Asclepiadaceae. à vastamente encontrado no Estado do Cearà e tem como caracterÃstica a produÃÃo de lÃtex. Ao lÃtex sÃo atribuÃdas propriedades tÃxicas e farmacolÃgicas. Neste trabalho, uma caracterizaÃÃo bioquÃmica parcial do lÃtex foi estabelecida e seu efeito sobre a eclosÃo de ovos e desenvolvimento larval do Mosquito transmissor da Dengue (Stegomyia aegypti) foi avaliado. MÃtodos - O lÃtex foi coletado de plantas nÃo cultivadas e apÃs etapas de diÃlise e centrifugaÃÃo deu origem a trÃs fraÃÃes: LP (rica em proteÃnas), DL (compostos de pequeno tamanho molecular e solÃveis em Ãgua) e RL (fraÃÃo rica em isopreno, insolÃvel em Ãgua). Uma anÃlise fÃsico-quÃmica de elementos inorgÃnicos foi realizada. As fraÃÃes foram analisadas atravÃs de eletroforese em uma e 2 dimensÃes, espectrometria de massas, tÃcnicas cromatogrÃficas e atividades enzimÃticas. A presenÃa de glicoproteÃnas foi investigada atravÃs de coloraÃÃo em gel e anÃlise por RessonÃncia PlasmÃnica de SuperfÃcie. Bioensaios para atividade ovicida e larvicida foram realizados com as fraÃÃes LP e DL, alÃm do lÃtex Ãntegro. Resultados â A fraÃÃo LP representou 10,03 % da massa seca do lÃtex enquanto que DL representou menos que 1 % e RL 84,97 %. O lÃtex possui quantidades apreciÃveis de HCO-3, Mg+2, Cl-, quantidades menores de SO4-, NO3- , NO-2, NH4+ e P-3, enquanto que Ca+2 e Fe+2 nÃo foram detectados. A fraÃÃo PL apresentou proteÃnas com massa molecular relativa entre 8.000 - 97.000 Da e isto foi confirmado por Espectrometria de massa. Foi verificado que as fraÃÃes RL e LP eram similares e peptÃdeos foram detectados na fraÃÃo DL. A fraÃÃo LP mostrou-se heterogÃnea em gel de eletroforese 2-D e as proteÃnas exibiram carÃter essencialmente bÃsico. TrÃs picos protÃicos foram recuperados por troca iÃnica. A fraÃÃo LP foi capaz de se ligar à matriz de quitina e foi detectada atividade quitinÃsica. Atividades para, superÃxido dismutase e ascorbato peroxidase foram detectadas, mas nÃo para catalase. GlicoproteÃnas do tipo oligomanosÃdicas e N-acetillactosamina parecem estar presentes na fraÃÃo LP. O lÃtex total causou 100 % de mortalidade para larvas do terceiro estÃgio de St. aegypti. As fraÃÃes tambÃm foram tÃxicas causando 100 % mortalidade em 24 hs. Quando as fraÃÃes LP e DL foram aquecidas a 100 ÂC a aÃÃo larvicida da fraÃÃo LP diminuiu e a da fraÃÃo DL foi pouco afetada sugerindo pouca termoestabilidade dos componentes ativos em LP. As fraÃÃes LP e DL foram parcialmente efetivas em prevenir a eclosÃo dos ovos do mosquito e muitos dos indivÃduos nÃo atingiram o primeiro ou segundo estÃgio. à esperado que os efeitos tÃxicos observados sobre a eclosÃo dos ovos e desenvolvimento das larvas poderiam ser, em parte, devido ao conteÃdo protÃico de LP / Calotropis procera (Ait.) R.Br. (Asclepiadaceae) is a well-known medicinal plant with leaves, roots and bark being exploited by popular medicine to fight many human and animal diseases. Despite, the lack of information about its biochemical content has stimulated the present study. Healthy plants of C. procera growing in the field around the beaches of Fortaleza were used as the source of fresh latex. The latex was collected in distilled water to give a dilution rate of 1:2 (v:v). The mixture was gently agitated during collection to overcome the natural coagulation effect of the material. Later in the laboratory the samples were centrifuged at 5.000 x g during 10 min at room temperature. The rubber-rich precipitate was separated and the supernatant was exhaustively dialyzed against distilled water at room temperature and recentrifuged using the conditions described above. Three distinct fractions were obtained: LP (rich in proteins); DL (rich in low molecular weight molecules) and RL (rich in poly-isoprene rubber). LP fraction constitutes 10.03 % of the dry matter of the latex while DL > 1% and RL 84.97 %. The latex possesses relevant amounts of HCO-3, Mg+2, Cl-, lower quantities of SO4-2 , NO3- , NO2-, NH4+ and P-3, while Ca+2 and Fe+2 were not detected. Proteins in LP showed molecular mass varying between 8,000 - 97,000 Da further confirmed by mass spectrometry. They are essentially basic proteins. RL and LP exhibited similar protein profile and peptides were detected in DL. LP could be fractionated in three newly fractions by ion exchange chromatography and able to bind chitin. Enzymatic activity of chitinases, superoxide dismutase and ascorbate peroxidases were detected. GlicoproteÃnas bearing oligomanosÃdic and N-acetylgalactosamine seems to be present in LP. The whole latex was shown to cause 100 % mortality of 3rd instars within five minutes. Both LP and DL fractions were partially effective to prevent egg hatching and most of individuals growing under experimental conditions died before reaching 2nd instars or stayed in 1st instars. Besides, the fractions were very toxic to 3rd instars causing 100 % mortality within 24 hs. When both fractions were submitted to heat-treatment the toxic effects of LP were strongly diminished while that of DL diminished slowly suggesting low thermostability of the toxic compounds in LP. According to the results, the latex of C. procera exhibits strong insecticide action upon St. aegypti and it is expected that proteins are at least in part involved in that an activity

Made available in DSpace on 2015-09-25T12:18:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Renata da Silva Leandro.pdf: 1211259 bytes, checksum: 2999635188f9dc2c5318f621049e78fc (MD5) Previous issue date: 2012-05-31 / Aedes (Stegomyia) aegypti (Linnaeus, 1762) and Aedes (Stegomyia) albopictus (Skuse, 1894) are introduced species in Brazil, with wide geographic distribution. A. aegypti is found predominantly in urban environments, while A. albopictus in rural, semi-wild and wild. These stand out today as public health problems due to their roles as transmitters of dengue and yellow fever. The inter and intraspecific competition are important stress factors for both species since their larvae develop in natural reservoirs and / or artificial, which vary in size, food availability over time and population density, which can lead to a limitation on the amount of food available, and encourage individuals to compete for resources. In the present study evaluated the competition, in the laboratory, these species, their life cycles, and also the distribution of forest environment, and urban interface, in addition to their household and peridomestic distributions. For this purpose, a survey was conducted, where it was decided to present their data in two parts, the first chapter we evaluated the competition and coparada biology of Aedes aegypti and Aedes albopictus and the second was treated patterns of geographical distribution of two species of genus Aedes in urban areas, interface and kills the city of João Pessoa - PB. / Aedes (Stegomyia) aegypti (Linnaeus, 1762) e Aedes (Stegomyia) albopictus (Skuse, 1894) são espécies introduzidas no Brasil, com ampla distribuição geográfica. A. aegypti é encontrado predominantemente em ambientes urbanos, enquanto A. albopictus em ambientes rurais, semi-silvestres e silvestres. Estes se destacam hoje como problemas em saúde pública, devido aos seus papéis como transmissores da dengue e febre amarela. A competição intra e interespecífica são fatores de estresse relevantes para ambas às espécies uma vez que suas larvas se desenvolvem em reservatórios naturais e/ou artificiais, que variam em tamanho, disponibilidade de alimento ao longo do tempo e densidade populacional, que pode levar a uma limitação na quantidade de alimento disponível, e estimular os indivíduos a competirem pelos recursos. No presente estudo avaliou-se a competição, em laboratório, destas espécies, seus ciclos de vida e, ainda, a distribuição em ambiente de Mata, interface e área urbana, além das suas distribuições intradomiciliar e peridomiciliar. Para tanto, foi realizada uma pesquisa, onde se optou apresentar seus dados em duas partes, no primeiro capítulo avaliou-se a competição e biologia coparada do Aedes aegypti e Aedes albopictus e no segundo tratou-se dos padrões de distribuição geográfica das duas espécies do gênero Aedes em área urbana, de interface e mata do município de João Pessoa PB.

Made available in DSpace on 2015-09-25T12:20:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Lafayette Pereira Candido.pdf: 2279302 bytes, checksum: 0029aee0b4d6bb151ca450312a715bba (MD5) Previous issue date: 2011-01-31 / Aedes aegypti, is responsible for the transmission of the viruses of the affection and the yellow fever. The development of resistance to the synthetic insecticides and its toxicity take the search of new methods as, for example, the naturals extract use. The present work evaluated the effect of extracts of Cnidosculos phyllacanthus, Coutarea hexandra and Ricinus communis on the different periods of training of the cycle of life of A.aegypti. The tests of plant aticvidad had been carried through in acclimatized room 26°C±2ºC and fotofase of 12 hours. One used rude extracts of trunk of C. phyllacanthus and C. hexandra, concentrated in rotating evaporator and the seed for attainment of the oil of R. communis. In the bioassays the effect had been evaluated larvicide, pupicide and adulticide of these products in function of different concentrations and the time of exposition. Lethal, ovicidal the effect sub and of repellency of oviposição of vegetal extracts was carried through using the lethal concentrations of the larvicide test (CL50 and CL90). The repellency of surface impregnated with the vegetal products was carried through using the dose of 0,5mg/cm2 and 2mg/cm2, in the period of 8 hours. The mortality data had been submitted to the Analysis of Probit for the determination of (CL50 and CL90). Mean values for the preference for oviposition in multiple choice were compared by Friedman test (P <0.05) and no-choice by Kruskal-Wallis (P <0.05). Vegetable oils of C. phyllacanthus and R. communis showed a greater efficiency in controlling larval CL50 = 0.55 ml and CL90 = 3ml and CL50= 0.05 ml and CL90 = 0.50 ml more promising. In the test with pupae, it was found toxic effect of all products containing significant amounts of (CL50 and CL90) after 24 and 48 hours of exposure. To this end sub-lethal concentrations of adulticide and C. phyllacanthus (oil) acted more effectively on the insect. All products through the IOA values showed repellent action on oviposition of A. aegypti, however, the concentrations of the extracts showed little ovicidal activity. Vegetable oils of C. phyllacanthus and R. communis showed more potential in controlling the different stages of the life cycle of this vector. / Aedes aegypti é o principal responsável pela transmissão dos vírus da dengue e febre amarela. O desenvolvimento de resistência aos inseticidas sintéticos e sua toxidade levam à busca de novos métodos como, por exemplo, a utilização de extratos vegetais. Neste sentido, o presente trabalho avaliou os efeitos dos extratos de Cnidosculos phyllacanthus, Coutarea hexandra e Ricinus communis sobre os diferentes estágios do ciclo de vida do A. aegypti. Os testes de bioatividade vegetal foram realizados em sala climatizada a 26°C±2ºC e fotofase de 12 horas. Utilizaramse os extratos brutos do caule de C. phyllacanthus e C. hexandra, concentrados em evaporador rotativo e a semente para obtenção do óleo de R. communis e C. phyllacanthus. Nos bioensaios foram avaliados os efeitos larvicida, pupicida e adulticida desses produtos em função de diferentes concentrações e do tempo de exposição. O efeito sub letal, ovicida e de repelência de oviposição dos extratos vegetais foi realizado utilizando as concentrações letais do teste larvicida (CL50 e CL90). A repelência de superfície impregnada com os produtos vegetais foi feito com as dose de 0,5 mg/cm2 e 2 mg/cm2, no período de 8 horas. Os dados de mortalidade foram submetidos à Análise de Probit para a determinação das (CL50 e CL90). As médias referentes à preferência para oviposição em múltipla escolha foram comparadas pelo teste de Friedman (P<0,05) e sem chance de escolha pelo teste de Kruskal-Wallis (P<0,05). Os óleos vegetais de C. phyllacanthus e R. communis demonstraram maior eficiência no controle larval com CL50 = 0,55ml e CL90 = 3ml e CL50 = 0,05ml e CL90 = 0,50ml. No teste com pupas, verificou-se efeito toxico de todos os produtos com valores significativos das (CL50 e CL90) após 24 e 48 horas de exposição. Para o efeito Sub Letal e adulticida as concentrações de C. phyllacanthus (óleo) agiram mais efetivamente sobre inseto. Todos os produtos através dos valores IOA demonstraram ação repelente na oviposição de A. aegypti, porém, as concentrações dos extratos indicaram pouca atividade ovicida. Os óleos vegetais de C. phyllacanthus e R. communis demonstraram maior potencialidades no controle dos diferentes estágios do ciclo de vida desse vetor.