Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-09-10Bitstream added on 2014-06-13T19:42:40Z : No. of bitstreams: 1 guirado_mm_dr_sjrp.pdf: 243606 bytes, checksum: d763ca85a0e74640c2c01e853c525fde (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Hoje se sabe que as enzimas esterásicas estão relacionadas com o desenvolvimento de resistência a inseticidas, em muitos organismos. Em Aedes aegypti, a dedução desse envolvimento tem resultado mais de testes que permitem a avaliação da atividade das esterases no extrato total dos mosquitos (mostrando valores maiores nas populações resistentes) do que de estudos mais profundos de padrões e bandas individualizadas e sua relação com a resistência. Com o objetivo básico de contribuir para o conhecimento desse aspecto, no presente trabalho 11 populações geográficas daquele vetor, sendo seis classificadas como resistentes, três como suscetíveis e duas como tendo suscetibilidade diminuída, foram analisadas quanto ao polimorfismo de esterases, por eletroforese em géis de poliacrilamida. O resultado do estudo de cerca de 30 amostras de larvas e adultos de cada população mostrou 24 bandas que foram tentativamente associadas com oito loci genéticos. Considerando também os dados de Lima-Catelani et al. (2004) e de Sousa-Polezzi & Bicudo (2005), temos o total de 25 bandas esterásicas, incluídas em 12 supostos loci, em 15 populações daquele vetor, até a presente data. A população de São José do Rio Preto, analisada em intervalos de cinco anos entre aqueles dois estudos, e sete anos entre Sousa-Polezzi & Bicudo (2005) e o presente trabalho, mostrou modificações no padrão de esterases, que ocorreram ao longo do tempo paralelamente ao surgimento e aumento da resistência aos inseticidas utilizados no controle, nessa população. Essas modificações abrangeram, basicamente, aumento ou diminuição da freqüência de algumas bandas e ausência de bandas previamente detectadas. De modo geral, a busca por padrões esterásicos específicos, relacionados ao desenvolvimento da resistência, indicou algumas bandas ou combinações de bandas para um estudo mais aprofundado. Essas bandas são: EST-1, sozinha, devido à sua alta freqüência em cinco das seis populações classificadas como resistentes, a combinação de EST-1 com EST-4, ambas ocorrendo simultaneamente, de forma predominante nas populações resistentes, e as colinesterases , detectadas nas 11 populações, mas apresentando freqüências mais altas em quatro das seis populações consideradas resistentes. Diante do conhecimento atual sobre as esterases e sua relação com a resistência a inseticidas, em A. aegypti, no presente trabalho é discutida a possibilidade de que a quantidade total de esterases (principalmente das carboxilesterases) produzidas por um grupo de genes possa ser mais importante em gerar resistência do que o grau de expressão de genes individuais que codificam para bandas específicas. Contudo, entendemos que as bandas destacadas neste trabalho devem ser alvo de um estudo mais detalhado, antes que essa hipótese ganhe maior força. / It is presently known that the esterases are involved in the process of resistance to insecticides, in several organisms. In Aedes aegypti, the conclusion about such involvement resulted rather from tests in which the total amount of esterases is computed in extracts of the mosquitoes (showing greater quantities in the resistant ones) than from deeper studies of esterase patterns or particular esterase bands and their relationship with resistance. With the basic aim to contribute to the knowledge of this relationship, in the present study the esterase polymorphism of 11 geographic populations of that vector, being six classified as resistant, three as susceptible and two as presenting decreased susceptibility, was studied by electrophoresis in polyacrylamide gels. The results of the analysis of about 30 individual samples of larvae and adults of each population showed 24 esterase bands which were tentatively associated to eight loci. Considering also the data from Lima-Catelani et al. (2004) and Sousa-Polezzi & Bicudo (2005), a total of 25 bands and 12 loci, in 15 populations, was obtained. The population from São José do Rio Preto, analyzed at intervals of five years between those two studies and seven years between Sousa-Polezzi & Bicudo (2005) and the present study, showed changes in the esterase pattern, which occurred along time concomitant to the increase of insecticide resistance in that population, including frequency increase or decrease of some bands and absence of bands previously detected. The search for specific esterase patterns related to the resistance development indicated some bands and combinations of bands as deserving a deeper study. They are EST-1 alone, due to high frequency in five of the six resistant populations, or the combination of EST-1 with EST-4, both occurring simultaneously, with high frequency, mainly in the resistant populations, and the cholinesterases, which although present in the 11 populations, showed higher frequencies in four of the six resistant ones. In front of the present knowledge on esterases related with resistance, in A. aegypti, we discuss the possibility that the total amount of esterases (mainly carboxilesterases) produced by a group of genes might be more important in the generation of resistance than the degree of expression of genes codifying particular bands. However, we understand that the bands stood out in the present study must be the target of a more detailed analysis, before this hypothesis gains a greater consideration. / FAPESP: 05/59219-5

Orientador: Marcelo da Costa Ferreira / Coorientador: Carlos Fernando Salgueirosa de Andrade / Banca: Casimiro Dias Gadanha Júnior / Banca: Maurício Vladimir Botti / Banca: Nilza Maria Martinelli / Banca: Júlio César Galli / Resumo: Objetivou-se avaliar o diâmetro e a uniformidade de gotas produzidas por pulverizadores, com concentrações de água e de óleo com e sem adjuvante para controle de Aedes aegypti. Os experimentos foram realizados no Depto. Fitossanidade, UNESP - Jaboticabal. Foram analisados diâmetros, uniformidades e porcentagem gotas 15 μm de aerossóis MULT, MAFÚ, SBP, DETEFON, RAID, RODA. (E.B), e RODA. (A.T) e de pulverizadores de bico rotativo e de bico pneumático, com as caldas água + malathion 500 CE (1mL/L) + óleo (0; 6,25; 12,5; 25; 50 e 100%). Mais tarde avaliou-se com e sem 1 mL do adjuvante Iharaguen-S/500 mL de calda e ainda água + malathion + 5, 10, 15 e 20% de óleo na calda. As médias foram comparadas pelo teste de Tukey (p<0,05) em delineamento inteiramente casualizado. Noutro experimento, fez-se a aplicação numa sala, com mosquitos retidos em gaiolas. As avaliações foram realizadas logo após aplicação e 24 horas após. Os resultados de mortalidade foram comparados pelo teste de Tukey (p < 0,05) e a eficiência das misturas pela fórmula de Abbott. Os aerossóis DETEFON, RODA. (E.B), RAID e ROD. (A.T) apresentaram DMV adequados. Todos os aerossóis possuem porcentagem segura de gotas com diâmetro 15 μm. RAID apresentou menor uniformidade de gotas. O bico pneumático resultou em maior uniformidade de gotas. A concentração de 20% foi considerada adequada ao coeficiente de uniformidade. A adição do adjuvante aumentou a uniformidade de gotas do bico rotativo. Ambos os pulverizadores apresentaram DMV adequados. O equipamento pneumático apresentou, no geral, maior eficiência na mortalidade de A. aegypti em relação ao rotativo / Abstract: The objective was to assess the diameter and uniformity of droplets produced by sprays, with concentrations of water and oil with and without adjuvant for control of Aedes aegypti. The experiments were carried out on Department. Plant Health, UNESP - Jaboticabal. We analyzed diameters, uniformity and percentagen drop 15 μm of aerosol MULT, MAFÚ, SBP, DETEFON, RAID, RODA, (E.B), e RODA. (A.T) nozzle and spray nozzle and rotary pneumatic grout with water + Malathion 500 EC (1 ml / L) + Oil (0, 6.25, 12.5, 25, 50 and 100%). Later it was evaluated with and without 1 mL of the adjuvant Iharaguen-S/500 mL of syrup and still water + malathion + 5, 10, 15 and 20% of oil in the sauce. Means were compared by Tukey test (p <0.05) in a completely randomized design. In another experiment, application made to a room with mosquitoes held in cages. Evaluations were performed immediately after and 24 hours after application. The mortality outcomes were compared by Tukey test (p <0.05) and efficiency of mixing the formula of Abbott. Aerosols DETEFON, RODA. (E.B), RAID and RODA. (A.T) had adequate VMD. All aerosols are safe percentagen of droplets 15 micrometers. RAID showed less uniformity of drops. The pneumatic nozzle resulted in greater uniformity of drops. The concentration of 20% was considered appropriate to the coefficient of uniformity. The addition of the adjuvant increased the uniformity of droplets from the nozzle rotation. Both sprays had adequate VMD. The pneumatic presented, in general, greater efficiency in killing of A. aegypti in relation to the rotary / Doutor

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:40:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-05-12. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:15Z : No. of bitstreams: 1 000869614.pdf: 7034100 bytes, checksum: 68b8ee31f062952cc1cfe255a55cc99e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Aedes aegypti é considerado o principal vetor de arboviroses que acomentem os seres humanos. Até o momento a única medida disponível para erradicação da dengue, é o controle do vetor, Ae. aegypti. O conhecimento aprofundado sobre a estruturação genética e dinâmica populacional dessa espécie em diferentes ambientes é crucial, uma vez que populações geneticamente diferentes podem apresentar diferenças quanto à capacidade e competência vetorial. O Brasil possui regiões com diferentes características climáticas e geográficas, assim o conhecimento detalhado sobre populações de mosquitos que colonizam diferentes habitats, é pertinente. Este trabalho avaliou a estrutura populacional de mosquitos Ae. aegypti provenientes de cinco cidades do Brasil (i.e., Belo Horizonte, Botucatu, Campo Grande, Maringá e Rondonópolis) utilizando marcadores microssatélites. Ainda, empregouse esses marcadores para investigar a dinâmica de oviposição e consequente dispersão de mosquitos Ae. aegypti em Botucatu. Em macro-análises populacionais, utilizando DAPC, observamos agrupamento entre indivíduos de mesma localidade e estruturação populacional para mosquitos de Belo Horizonte. Análises de micro-estruturação populacional identificaram seis sub-populações de mosquitos Ae. aegypti entre as seis sub-regiões de Belo Horizonte, ainda foram sugeridas estruturação populacional intermediária para mosquitos das sub-regiões de Campo Grande e falta de estruturação genética entre mosquitos das subregiões de Botucatu. Com esses resultados acreditamos que estruturação genética ocorra em correlação com o tamanho da cidade - localidades maiores parecem proporcionar estruturação genética para populações de mosquitos Ae. aegypti. Análises de PCA em ovitrampas da cidade de Botucatu apontaram organização populacional de Ae. aegypti em famílias. Análises de Pedigree e coeficiente de inbreeding, indicaram que de 30 mosquitos... / Aedes aegypti is considered the main vector of arboviruses affecting humans. Nowadays, the only feasible measure to eradicate the dengue fever depends exclusively of vector control. The deep knowledge about the structure and dynamics of Ae. aegypti population in distinct environments is critical, since genetically different populations may present differences related to vector competence and capacity. Brazil has regions with different climatic and geographic characteristics, therefore, detailed knowledge about mosquito population that colonizes different habitats is extremely important. The present study evaluated the population structure of Ae. aegypti mosquitoes in five different Brazilian cities (i.e., Belo Horizonte, Botucatu, Campo Grande, Maringá and Rondonópolis) using a microsatellite markers. Those markers were also used to evaluate the oviposition dynamic and the consequences of Ae. aegypti mosquitoes dispersion, of the city of Botucatu. Population macro-analysis, using DAPC evidenced, genetic clusters among individuals of the same locality, and population structure in mosquitoes of Belo Horizonte. Population microstructure analysis identified six sub-populations of Ae. aegypti mosquitoes among six sub-regions of Belo Horizonte. In addition, the microstructure analysis suggested intermediate population structure in the sub-regions of Campo Grande, and lack of genetic structure among mosquitoes from the sub-regions of Botucatu. Therefore, these results indicate that genetic organization occurs in correlation with city size - where large towns seem to provide genetic structure to the populations of Ae. aegypti. PCA analysis of ovitraps obtained in Botucatu indicated population organization of Ae. aegypti mosquitoes in families. Pedigree analysis and inbreeding coefficient indicated that only for out of 30 mosquitoes analyzed in the same ovitrap, keep restricted familial relationships. These results suggest that Ae. aegypti...

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:10:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 VivianeFM.pdf: 385619 bytes, checksum: 686c3c14624bf0efc41a4a22cc1f7b4b (MD5) Previous issue date: 2007-06-28 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / ?Dengue, amongst the virus illnesses one can get by vectorial transmission, is the one that causes more impact in the morbidity and mortality of world s population. The resistance to the insecticides has caused difficulties to control of vector insect (Aedes aegypti) and has stimulated a search for vegetables with larvicidal activity. The biodiversity of Caatinga is barely known and it is potential of use even less. Some plants of this biome are commercialized in free fairs northeast of Brazil, because of its phytotherapics properties. The vegetables in this study had been selected by means of a questionnaire applied between grass salesmen and natives of the Serido region from Rio Grande do Norte state; culicids eggs had been acquired with traps and placed in container with water for the larva birth. Thirty larvae had been used in each group (a group control and five experimental groups), with four repetitions four times. The vegetables had been submitted to the processes of decoction, infusion and maceration in the standard concentration of 100g of the vegetable of study in 1l of H2O and analyzed after ?, 1, 2, 4, 8, 12, 24 and 48 hours for verification of the average lethal dose (LD50) from the groups with thirty larva. The LD50 was analyzed in different concentrations (50g/l, 100g/l, 150g/l, 200g/l e 300g/l) of Aspidosperma pyrifolium Mart. 48 extracts of rind, leaf and stem of the seven vegetal species: Aspidosperma pyrifolium Mart., Mimosa verrucosa Benth, Mimosa hostilis (Mart.) ?Benth., Myracrodruon urundeuva Allem?o, Ximenia americana L, Bumelia sartorum Mart Zizyphus joazeiro Mart, had been analyzed. The extracts proceeding from the three methods were submitted to the freezedrying, to evaluate and to quantify substances extracted in each process. The results had shown that Aspidosperma pyrifolium Mart. and Myracrodruon urundeuva Allem?o are the species that are more distinguished as larvicidal after 24 hours of experiment, in all used processes of extraction in the assays. The Zizyphus joazeiro Mart species has not shown larvicidal activity in none of the assays. In relation to the extraction method, the decoction was the most efficient method in the mortality tax of the A. aegypti larvae / ?A Dengue, dentre as doen?as virais de transmiss?o vetorial, ? a que mais causa impacto na morbidade e mortalidade da popula??o mundial. O surgimento de resist?ncia aos inseticidas tem causado dificuldades no controle do inseto vetor (Aedes aegypti) e estimulado ? busca de vegetais com a??o larvicida. A biodiversidade da caatinga ? pobremente conhecida e o seu potencial de uso menos ainda. Algumas plantas desse bioma s?o comercializadas em feiras livres do Nordeste do Brasil, com base em suas propriedades fitoter?picas. Os vegetais usados neste estudo foram selecionados por meio de?um?question?rio?aplicado entre?vendedores?de?ervas?e?populares?da?regi?o?do?Serid? do Rio Grande do Norte; ovos de culic?deos foram adquiridos com armadilhas de postura, e colocados em recipiente com ?gua para eclos?o das larvas. Trinta larvas foram usadas em cada grupo (um grupo controle e cinco grupos experimentais), com quatro repeti??es. Os vegetais foram submetidos aos processos de decoc??o, infus?o e macera??o na concentra??o padr?o de 200g do vegetal de estudo em 1l de H2O e analisados ap?s ? , 1, 2, 4, 8, 12, 24 e 48 horas para verifica??o da dose letal m?dia (LD50) dos grupos com trinta larvas. A LD50 foi analisada em diferentes concentra??es (50g/l, 100g/l, 150g/l, 200g/l e 300g/l) de Aspidosperma pyrifolium Mart. Foram analisados 48 extratos de casca, folha e caule pertencentes a sete esp?cies vegetais Aspidosperma pyrifolium Mart. (Pereiro), Mimosa verrucosa Benth (Juremabranca), Mimosa hostilis (Mart.) Benth. (Juremapreta), Myracrodruon urundeuva Allem?o (Aroeira), Ximenia americana L (Ameixa), Bumelia sartorum Mart?(Quixabeira), Zizyphus joazeiro Mart?(Joazeiro).?Os extratos?provenientes?dos tr?s m?todos foram submetidos ? liofiliza??o, para avaliar e quantificar as subst?ncias ?extra?das em cada processo. Os resultados mostraram que Aspidosperma pyrifolium Mart. e Myracrodruon urundeuva Allem?o s?o as esp?cies que mais se destacam como larvicidas ap?s 24 horas de experimento, em todos os processos de extra??o usados nos bioensaios. A esp?cie Zizyphus joazeiro Mart n?o demonstrou atividade larvicida em nenhum dos ensaios. Em rela??o ao m?todo de extra??o, a decoc??o foi o m?todo mais eficaz?na?taxa?de?mortalidade?das?larvas?de A.?aegypti

Aedes aegypti is an important vector of human arboviruses as dengue, yellow fever and chikungunya in several tropical and subtropical countries. Studies of population genetic on Ae. aegypti has been growing in recent years and several molecular markers has been used to assess genetic variability of this vector. Among the molecular markers used is the ISSR (Inter-Simple Sequence Repeat) based on the use of nonspecific primers as microsatellites, and SNP (Single Nucleotide Polymorphism) that detect single base mutations in the chain of nitrogenous bases. The aim of this study was to determine the genetic variability in Ae. aegyti populations in the State of Sergipe through the molecular markers ISSR and SNP. Mosquito samples were caught using ovitraps in seven cities of Sergipe State: Canindé de São Francisco, Carira, Pinhão, Neópolis, Maruim, Aracaju and Umbaúba. DNA from adult mosquitoes was extracted and amplified with two ISSR primers and nine SNP markers. For ISSR marker analysis AMOVA resulted in 32% of genetic variation among populations and 68% within the population. The value of phiST was equal to 0.3225 indicating high genetic structure among populations. The dendrogram generated by UPGMA grouped the populations into two clusters that showed 61% similarity. The Mantel test by means of partial correlation between genetic distances and road excluding the interference of population size of the city was significant (r = -0.5399, p = 0.0359), assuming the occurrence of gene flow between Ae. aegypti populations passively by human action. For the marker SNP AMOVA analysis revealed genetic differentiation of FST = 0.07354 (p <0.01) and genetic diversity of 7.35% among populations. The analysis, showed the existence of two clusters based on genotypic similarities. For this analysis we found genetic differentiation between populations located in the countryside and on the coast. Both markers were efficient for the genetic study of natural populations of Ae. aegypti and able to differentiate among samples on a geographic scale from 30km to 240km. / Aedes aegypti é um importante vetor de graves arboviroses humanas como dengue, febre amarela e chikungunya em diversos países tropicais e subtropicais. O número de estudos envolvendo genética de população com Ae. aegypti vem crescendo nos últimos anos, sendo utilizados diversos marcadores moleculares para avaliar a variabilidade genética deste vetor. Entre os marcadores utilizados estão os ISSR (Inter-Simple Sequence Repeat) baseados na utilização de microssatélites como primers inespecíficos, e SNP (Single Nucleotide Polymorphism) que detectam mutações em bases únicas da cadeia de bases nitrogenadas. O objetivo do estudo foi determinar a variabilidade genética de populações de Ae. aegyti do estado de Sergipe por meio dos marcadores moleculares ISSR e SNP. Foram capturadas amostras do mosquito por meio de armadilhas ovitrampas de sete municípios sergipanos: Canindé de São Francisco, Carira, Pinhão, Neópolis, Maruim, Aracaju e Umbaúba. Para avaliação do polimorfismo genético foi extraído o DNA do mosquito adulto e amplificado com dois primers para ISSR e nove marcadores de SNP. Para o marcador ISSR a análise AMOVA resultou em 32% de variação genética entre as populações e 68% dentro das populações. O valor de phiST foi igual a 0,3225 indicando alta estruturação genética entre as populações. O dendograma gerado pelo método UPGMA agrupou as populações em dois clusters que apresentaram 61% de similaridade. O teste de Mantel por meio de correlação parcial entre as distâncias genética e rodoviária excluindo a interferência do tamanho da cidade foi significativo (r = - 0,5399 e p = 0,0359), supondo a ocorrência de fluxo gênico entre as populações de Ae. aegypti de forma passiva pela ação humana. Para o marcador SNP a análise AMOVA revelou diferenciação genética entre as populações de FST = 0,07354 (p < 0,01) e diversidade genética entre as populações de 7,35%. A análise por meio do software Structure 2.3.1, evidenciou a existência de dois clusters baseados em semelhanças genotípicas. Por essa análise foi observada uma diferenciação genética entre populações localizadas no interior do estado e populações mais próximas do litoral. Ambos marcadores moleculares foram eficientes no estudo genético de populações naturais de Ae. aegypti, sendo possível diferenciar amostras numa escala geográfica entre 30km a 240km.

Orientador: Paulo Eduardo Marins Ribolla / Banca: Sérgio Luiz Bessa Luz / Banca: Maria Anice Mured Sallum / Banca: Sérgio Russo Matioli / Banca: Denise Selivon Schepmaker / Resumo: Aedes aegypti é o principal vetor dos vírus dengue e representa cada vez mais um problema de saúde pública. O uso de inseticidas de origem orgânica ou inorgânica é uma das metodologias mais adotadas como parte do controle de vetores, entretanto, processos de resistência têm sido detectados freqüentemente. O desenvolvimento de ferramentas moleculares tem facilitado o entendimento das relações entre o vetor, patógeno e o homem. Os marcadores genéticos mais utilizados em estudos de genética de populações geralmente representam um trabalho laboratorial intenso e, em alguns casos, são limitados pela quantidade de DNA genômico extraído por indivíduo. Recentemente, a tecnologia disponível, permitiu o desenvolvimento dos marcadores SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) que correspondem a diferenças de um único nucleotídeo na seqüência de DNA. Assim, o presente trabalho objetivou desenvolver marcadores SNPs localizados em genes nucleares, do mosquito Ae. aegypti, para aplicação na genotipagem de populações deste vetor no Brasil. Para tanto, foram investigada seqüencias em dezoito genes nucleares de dezesseis populações do Ae. aegypti, e nove destes genes foram selecionados para a presença de SNPs. Os oito marcadores mais polimórficos foram utilizados na caracterização de três populações do mosquito anteriormente analisadas utilizando-se as técnicas de RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) e seqüenciamento de genes mitocondriais. Os resultados obtidos com os SNPs mostraram um alto grau de polimorfismo intra e inter populacional, mais significativo quando comparado com os estudos realizados anteriormente, além da presença de duas diferentes linhagens genéticas entre as populações geográficas estudadas. / Abstract: Aedes aegypti is the primary vector of dengue fever virus and it represents a major problem of Public Health. The use of insecticides of organic or inorganic origin is one of the more accepted methodologies as part of this control, however, resistance processes have been detected constantly. The development of molecular tools has made possible the understanding of the relationships among vector, pathogen and man. The genetic markers more used in studies of genetics populations usually represent an intense laboratorial work and in some cases they are limited for the amount of genomic DNA extracted by individual. Recently, the available technology, allowed the development of the markers SNPs (Single Nucleotide Polymorphism) that correspond to differences of a single nucleotide in the sequence of DNA. Thus, this work aims to develop of SNPs markers in nuclear genes of the Ae. aegypti for application in genotyping of populations of this vector in Brazil. For so much, were investigated sequences in eighteen nuclear genes of sixteen populations of Ae. aegypti, and nine of this genes were selected to presence of the SNPs. Eight more polymorphic markers were used in the characterization of three populations of the mosquito previously analyzed using the techniques of RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) and sequencing of mitochondrial genes. Results obtained with the SNPs showed a high degree of polymorphic intra and interpopulations, more significantly when compared with the prior studies, besides the presence of two different genetic lineages distributed among the studied geographical populations. / Doutor

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A dengue à considerada, hoje, a arbovirose mais importante do mundo, tendo distribuiÃÃo e ressurgÃncia em todos os continentes e aumento das Ãreas de incidÃncia devido Ãs mudanÃas climÃticas. Um dos motivos que a torna tÃo importante à ausÃncia de uma vacina eficaz para os quatro sorotipos do vÃrus. Assim, para o controle dessa doenÃa à necessÃrio que haja o combate ao vetor, o mosquito Aedes aegypti. Os atuais programas de combate ao mosquito dispÃem de inseticidas sintÃticos, contudo o surgimento de populaÃÃes resistentes a esses inseticidas representa um entrave ao combate deste mosquito. Desta forma, torna-se necessÃria a busca por novas molÃculas inseticidas ou capazes de potencializar o efeito tÃxico dos inseticidas atuais. Assim, o presente trabalho teve por objetivo a obtenÃÃo de inibidores de tripsina de sementes de Leucaena leucocephala e avaliaÃÃo do potencial inseticida dessas molÃculas sobre as larvas do mosquito Ae. aegypti. Para isso, as proteÃnas presentes nas sementes de L. leucocephala foram extraÃdas, fracionadas e submetidas à cromatografia de afinidade a anidrotripsina acoplada a sepharose 4B, para a obtenÃÃo de uma fraÃÃo rica em inibidores de tripsina denominada sLlTi, a qual foi caracterizada bioquimicamente e utilizada em concentraÃÃo de 0,3 mg/mL nos ensaios de desenvolvimento das larvas do mosquito. A caracterizaÃÃo bioquÃmica do sLlTi permitiu concluir que os inibidores sÃo termorresistentes (a atividade foi mantida apÃs aquecimento por 30 min. a 100 ÂC), apresentam considerÃvel resistÃncia ao agente redutor (DTT), tendo decaimento da sua atividade inibitÃria frente a tripsina apenas quando incubado com 100 mM de DTT por 120 min, o mesmo, tambÃm, à resistente Ãs variaÃÃes de pH na faixa de 2 a 10. Os zimogramas reversos revelaram a presenÃa de bandas proteicas com massa molecular aparente de 20 kDa. Testes biolÃgicos in vitro mostraram que o sLlTi apresenta atividade inibitÃria superior a 90% frente a tripsina e 70% frente ao homogenato intestinal de larvas de Ae. aegypti. ApÃs a realizaÃÃo de eletroforese bidimensional, foi possÃvel a visualizaÃÃo de isoformas com pI entre 4 e 7, aproximadamente. Esses inibidores sÃo capazes de inibir as proteases de larvas de Ae. aegypti in vivo em 56%, causando retardo no desenvolvimento e cerca de 70% de mortalidade. Assim, o sLlTi possui potencial aÃÃo inseticida contra o mosquito vetor da dengue. / Dengue fever is currently the most important arboviral disease in the world, being widely distributed among the continents and having increased incidence areas due to climate change. One of the reasons that makes it so important is the absence of an effective vaccine against the four virus serotypes. So, to control this disease is necessary to fight the disease vector, the mosquito Aedes aegypti. Nowadays, health programs use synthetic insecticides to control the mosquito populations. However, the emergence of resistant populations to these insecticides is an obstacle to combating this mosquito. Thus, it is necessary to search for new insecticides or molecules capable of enhancing the toxic effect of current insecticides. The present study aimed to obtain trypsin inhibitors from Leucaena leucocephala seeds and evaluate the insecticidal potential of these molecules against Ae. aegypti larvae survival and development. For this, the proteins of L. leucocephala seeds were extracted, fractionated and subjected to anhydrotrypsin affinity chromatography to obtain a trypsin-enriched fraction (called sLlTi), which was biochemically characterized and used at a concentration of 0.3 mg/mL in assays of larvae development. Biochemical characterization of sLlTi concluded that the inhibitors are heat resistant (the activity was retained after heating for 30 min at 100  C), showed considerable resistance to the reducing agent DTT and reduction of their inhibitory activity against trypsin was demonstrated only when incubated with 100 mM DTT for 120 min. The inhibitor is also resistant to pH changes in a range from 2 to 10. The reverse zymograms revealed the presence of protein bands with apparent mass near 20 kDa. Biological testing in vitro showed that the sLlTi showed trypsin inhibitory activity greater than 90% and that sLlTi is also capable to inhibit Ae. aegypti digestive enzymes by 70%. After two-dimensional electrophoresis isoforms with pI ranging from 4 to 7, approximately, were observed. These inhibitors were able to inhibit proteases of Ae. aegypti in vivo by 56%, and was capable to delay the larval development after incubation for 10 days. Thus, sLlTi contains proteins with promising insecticidal action against dengue vector.

Orientador: Hyun Mo Yang / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Matematica, Estatistica e Computação Científica / Made available in DSpace on 2018-08-09T23:30:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thome_RobertoCarlosAntunes_D.pdf: 2015666 bytes, checksum: 4f6cfba30cb89c24d0530c3bf19d0ecb (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O ciclo de mosquitos é dividido em dois estágios: fase aquática (ovos, larvas e pupas) e fase alada (mosquitos adultos). Apresentamos um modelo de controle ótimo de mosquitos que consiste na introdução de mosquitos machos estéreis obtidos pela técnica de irradiação. Nosso modelo é baseado em equações diferenciais ordinárias que descrevem a dinâmica dos mosquitos na fase aquática, dos mosquitos fêmeas imaturas (antes de acasalar), dos mosquitos fêmeas fertilizadas (depois de acasalar), dos mosquitos fêmeas não-fertilizadas (depois de acasalar), dos mosquitos machos (macho natural) e dos mosquitos machos estéreis (irradiados). O problema é colocado no formato de um problema de controle ótimo no qual minimizamos o custo com inseticida, o custo com a produção de mosquitos irradiados e o custo social (número de mosquitos fêmeas fertilizadas) / Abstract: The life cycle of mosquito Aedes aegypti is comprised by two phases: aquatic (egg, larvae and pupae) and winged form (adult mosquitoes). We present a model to describe the dynamics of mosquito population in which sterile male mosquitoes (prodeced by irradiation) are introduced as a form of biological control, besides the traditional application of insecticide. Our model is formulated taking into account a system of ordinary differential equations which describes the dynamics of the mosquitoes in the aquatic phase, of the immature female mosquitoes (before mating), of the fertilized female mosquitoes (after mating), of the unfertilized female mosquitoes (after mating), of the natural male mosquitoes (wild) and of the sterile male mosquitoes (irradiated). In order to analyze the minimal effort to reduce the fertile female mosquitoes, we search for the optimal control considering the cost of insecticide application, the cost of the production of irradiated mosquitoes and their delivery and the social cost (number of fertilized female mosquitoes, potential transmissor of dengue). The optimal control is obtained by applying the Pontryagin's Maximum Principle / Doutorado / Matematica Aplicada / Doutor em Matemática Aplicada

Aedes aegypti is an important vector of human arboviruses as dengue, yellow fever and chikungunya in several tropical and subtropical countries. Studies of population genetic on Ae. aegypti has been growing in recent years and several molecular markers has been used to assess genetic variability of this vector. Among the molecular markers used is the ISSR (Inter-Simple Sequence Repeat) based on the use of nonspecific primers as microsatellites, and SNP (Single Nucleotide Polymorphism) that detect single base mutations in the chain of nitrogenous bases. The aim of this study was to determine the genetic variability in Ae. aegyti populations in the State of Sergipe through the molecular markers ISSR and SNP. Mosquito samples were caught using ovitraps in seven cities of Sergipe State: Canindé de São Francisco, Carira, Pinhão, Neópolis, Maruim, Aracaju and Umbaúba. DNA from adult mosquitoes was extracted and amplified with two ISSR primers and nine SNP markers. For ISSR marker analysis AMOVA resulted in 32% of genetic variation among populations and 68% within the population. The value of phiST was equal to 0.3225 indicating high genetic structure among populations. The dendrogram generated by UPGMA grouped the populations into two clusters that showed 61% similarity. The Mantel test by means of partial correlation between genetic distances and road excluding the interference of population size of the city was significant (r = -0.5399, p = 0.0359), assuming the occurrence of gene flow between Ae. aegypti populations passively by human action. For the marker SNP AMOVA analysis revealed genetic differentiation of FST = 0.07354 (p <0.01) and genetic diversity of 7.35% among populations. The analysis, showed the existence of two clusters based on genotypic similarities. For this analysis we found genetic differentiation between populations located in the countryside and on the coast. Both markers were efficient for the genetic study of natural populations of Ae. aegypti and able to differentiate among samples on a geographic scale from 30km to 240km. / Aedes aegypti é um importante vetor de graves arboviroses humanas como dengue, febre amarela e chikungunya em diversos países tropicais e subtropicais. O número de estudos envolvendo genética de população com Ae. aegypti vem crescendo nos últimos anos, sendo utilizados diversos marcadores moleculares para avaliar a variabilidade genética deste vetor. Entre os marcadores utilizados estão os ISSR (Inter-Simple Sequence Repeat) baseados na utilização de microssatélites como primers inespecíficos, e SNP (Single Nucleotide Polymorphism) que detectam mutações em bases únicas da cadeia de bases nitrogenadas. O objetivo do estudo foi determinar a variabilidade genética de populações de Ae. aegyti do estado de Sergipe por meio dos marcadores moleculares ISSR e SNP. Foram capturadas amostras do mosquito por meio de armadilhas ovitrampas de sete municípios sergipanos: Canindé de São Francisco, Carira, Pinhão, Neópolis, Maruim, Aracaju e Umbaúba. Para avaliação do polimorfismo genético foi extraído o DNA do mosquito adulto e amplificado com dois primers para ISSR e nove marcadores de SNP. Para o marcador ISSR a análise AMOVA resultou em 32% de variação genética entre as populações e 68% dentro das populações. O valor de phiST foi igual a 0,3225 indicando alta estruturação genética entre as populações. O dendograma gerado pelo método UPGMA agrupou as populações em dois clusters que apresentaram 61% de similaridade. O teste de Mantel por meio de correlação parcial entre as distâncias genética e rodoviária excluindo a interferência do tamanho da cidade foi significativo (r = - 0,5399 e p = 0,0359), supondo a ocorrência de fluxo gênico entre as populações de Ae. aegypti de forma passiva pela ação humana. Para o marcador SNP a análise AMOVA revelou diferenciação genética entre as populações de FST = 0,07354 (p < 0,01) e diversidade genética entre as populações de 7,35%. A análise por meio do software Structure 2.3.1, evidenciou a existência de dois clusters baseados em semelhanças genotípicas. Por essa análise foi observada uma diferenciação genética entre populações localizadas no interior do estado e populações mais próximas do litoral. Ambos marcadores moleculares foram eficientes no estudo genético de populações naturais de Ae. aegypti, sendo possível diferenciar amostras numa escala geográfica entre 30km a 240km.

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2017-03-08T17:39:39Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Rayane Silva biblioteca.pdf: 1013981 bytes, checksum: d8b76305e22b14cf85166327afe7da53 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-08T17:39:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Rayane Silva biblioteca.pdf: 1013981 bytes, checksum: d8b76305e22b14cf85166327afe7da53 (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / FACEPE / O Aedes aegypti é um mosquito de grande importância epidemiológica por ser o vetor de viroses como a febre amarela e a dengue estando distribuído entre as regiões tropicais e subtropicais do globo. A fim de encontrar uma forma alternativa de combate ao mosquito, objetivou-se avaliar no presente estudo, a caracterização química do óleo essencial de Commiphora leptophloeos e sua atividade biológica frente A. aegypti através de análises eletrofisiológicas, testes de atividade larvicida, repelente e deterrente de oviposição. As análises por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa revelaram a presença de 55 compostos no óleo essencial de C. leptophloeos sendo o α- Felandreno, trans- Cariofileno e β- Felandreno os constituintes do óleo presentes em maior proporção, representando 26,26%, 18,01% e 12,93% respectivamente. Através de cromatografia gasosa acoplada à detecção eletroantenográfica foram obtidas 17 respostas aos constituintes do óleo, sendo em sua maioria a sesquiterpenos, estando entre elas o trans- Cariofileno, um dos compostos majoritários do óleo. A partir dos testes comportamento de oviposição com fêmeas grávidas de A. aegypti foi possível observar que o óleo essencial de C. leptophloeos apresentou atividade deterrente de oviposição nas concentrações de 100, 50 e 25 ppm, sendo a média de ovos deixadas no recipiente de teste menor que o depositado no controle (p<0,008). Testes de oviposição também foram realizados com o composto majoritário do óleo o α-Felandreno, e dois compostos que apresentaram respostas eletrofisiológicas (trans- Cariofileno e α-Humuleno). O α-Felandreno não demonstrou atividade significativa. O trans- Cariofileno, em contrapartida, se mostrou deterrente de oviposição (p<0,004), assim como o α-Humuleno (p<0,003). O óleo de C. leptophloeos não demonstrou atividade biológica em relação ao teste de repelência em olfatômetro de dupla escolha. A atividade larvicida foi constatada com CL50 de 99,4 ppm. Nesse contexto, os resultados demonstram que o óleo essencial de C. leptophloeos é uma fonte promissora de compostos que induzem respostas comportamentais em fêmeas de A. aegypti que buscam por um sítio de oviposição, havendo respostas deterrentes entre os diferentes compostos, além de atuar como agente larvicida. / Aedes aegypti has a large epidemiological importance for being the vector of viruses, such as yellow fever and dengue fever, being distributed across the tropical and subtropical regions of the globe. To find an alternative way for eradicating the mosquito, in this study it was evaluated the chemical characterization of the essential oil of Commiphora leptophloeos and its biological activity against A. aegypti through electrophysiological analyzes and tests of larvicidal activity, repellent and oviposition deterrent. The analysis by gas chromatography-mass spectrometry revealed the presence of 55 compounds in the essential oil of C. leptophloeos being the α-phellandrene, trans-caryophyllene and β-phellandrene the constituents present in greater proportion, representing 26.26%, 18.01% and 12.93% respectively. By gas chromatography- electroantennographic detection were obtained 17 responses to the constituents of the oil, most of them being the sesquiterpenes, among them trans-Caryophyllene, one of the major compounds from the oil. From behavior for oviposition, tests with pregnant females of A. aegypti reveled that the essential oil of C. leptophloeos showed oviposition deterrent activity at concentrations of 100, 50 and 25 ppm and the average of eggs left on the test vessel was smaller than the average deposited in the control vessel. Oviposition test were also carried out with the α-phellandrene, the major compound of the oil, and two compounds that showed electrophysiological responses (trans-caryophyllene and α-humulene). The α-phellandrene showed no significant activity. The trans-Caryophyllene, in contrast, showed oviposition deterrent (p <0.004), as well as α-Humulene (p <0.003). The oil of C. leptophloeos not demonstrated biological activity against the test repellency dual choice olfactometer. The larvicidal activity was observed with LC50 of 99.4 ppm. In this context, the results show that the essential oil of C. leptophloeos is a promising source of compounds that induce behavioral responses in female of A. aegypti seeking for an oviposition site, with answers deterrents between the different compounds, in addition to acting as an agent larvicide.