Orientador: Prof. Dr. Jorge Eduardo Fouto Matias / Co-orientadora: Profª. Drª. Maria de Lourdes Pessole Biondo-Simões / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Clínica Cirúrgica. Defesa: Curitiba, 16/12/2016 / Inclui referências : f.49-50 / Resumo: A fim de abordar os efeitos da administração tópica do metronidazol na absorção local e neovascularização durante cicatrização experimental por segunda intenção, 108 ratos machos, Wistar, pesando entre 300-350g foram submetidos a uma ferida de pele de espessura total, circular, com 2cm de diâmetro. Os animais foram divididos em 5 grupos (18 cada grupo) de acordo com a concentração usada da solução de metronidazol (4%, 6%, 8%, 10% e 12%) durante todo o período do experimento os curativos foram realizados diariamente, cada subdividido em três tempos de análise ( após 3, 7 e 14 dias de observação). Amostras de sangue venoso para avaliação da concentração de metronidazol foram obtidas por punção cardíaca e manipuladas por cromatografia líquida de alta performance; neovasos formados foram demonstrados usando CD34 e vimentina por técnicas de imunoistoquímica. Análise estatística, incluindo comparações intergrupos e intragrupos foram calculados por testes não paramétricos de Kruskal-Wallis usando SSPS software e valor de "p" 0,05, significância estatística de 95%. O metronidazol esteve presente na corrente sanguínea em todos os grupos de metronidazol e momentos estudados mas não houve diferença estatística de acordo com a concentração de metronidazol usada ou o tempo de exposição da ferida à droga. Foi significante o número de neovasos formados (p=0,005) nas feridas tratadas com administração de solução de metronidazol tópico 6% e 8%. Concentrações séricas de metronidazol não foram afetadas pelo uso tópico das concentrações da solução de metronidazol topicamente ou pela duração do tempo de administração. O uso tópico de metronidazol em soluções de 6% e 8% em feridas com cicatrização experimental por segunda intenção melhorou significativamente a neovascularização local conforme avaliado pelas técnicas imunoistoquímicas CD34 e vimentina. Estes achados podem ser potencialmente usados em favor do processo de cicatrização de feridas. Descritores: Cicatrização. Metronidazol. Absorção cutânea. Neovascularização. Administração tópica. Fisiológica. Ratos. / Abstract: In order to address beneficial effects of metronidazole topical administration on local absorption and neovascularization during experimental second-intention healing, 108 Wistar male rats, weighing 300-350g were submmited to a circular, 2 cm diameter, total deep back skin wound. Animals were divided into five groups (18 each group) according to the metronidazole solution concentration used (4%, 6%, 8%, 10% and 12%) during the dressing performed daily all over the period of experiment which was subdivided into three times of analysis (after 3, 7 and 14 days of observation). Blood samples for metronidazole venous concentration were obtained from cardiac puncture and manipulated by High-Performance Liquid Chromatography; newly formed vessels were demonstrated using CD34 and vimentin immunohistochemistry techniques. Statistical analysis, including intergroups and intragroups comparisons was calculated by non-parametric Kruskal-Wallis test using SSPS software and p value of 0,05, statistical significance of 95%. Metronidazole was present at bloodstream in all metronidazole groups and moments studied but there was no statistical differences according to metronidazole solution concentration used or time of wound exposure to the drug. There was significantly more newly formed vessels (p=0,005) at the wounds treated by topical administration of 6% and 8% metronidazole solutions. Metronidazole serum concentrations are not affected by metronidazole solution concentration used topically or by the duration time of administration. Topical administration of metronidazole solutions at 6% and 8% in experimental second-intention skin wounds was able to improve significantly local neovascularization as assessed by CD34 and vimentin immunohistochemistry techniques. These findings can be potentially used in favor of the wound healing process. Keywords: Wound Healing. Metronidazole. Administration, Topical. Skin Absorption. Neovascularization, Physiologic. Rats.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-28Bitstream added on 2014-06-13T18:09:32Z : No. of bitstreams: 1 peixoto_fc_me_jabo.pdf: 395583 bytes, checksum: 5301166e57d35ee4c63acfab04548a15 (MD5) / Sekita Agropecuaria / Com o objetivo de avaliar o crescimento e o acúmulo de macronutrientes em cenoura „Forto‟ e obter equações que melhores os representem, conduziu-se um experimento em São Gotardo (MG), de maio a setembro de 2004. As amostragens de plantas foram realizadas aos 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110 e 120 dias após a semeadura (DAS), para determinação da matéria seca e do acúmulo de macronutrientes em folhas e raiz da cenoura. Aos 40 DAS, cinco dias após ter sido realizado o desbaste, a planta de cenoura „Forto‟ apresentava 0,18 g e 0,04 g em matéria seca de folhas (MSF) e de raiz (MSR), respectivamente. A partir de então, até 88 DAS, a partição de matéria seca mostrou-se favorável na parte aérea. A MSR de cenoura foi pequena até dois terços do cultivo, ou seja, 80 DAS. A partir de então, verificou-se que a quantidade de matéria alocada nesta parte da planta teve forte incremento, ultrapassando, aos 88 DAS, a quantidade de MSF. O acúmulo de nutrientes foi pequeno até 60 DAS, coincidindo com o período de menor acúmulo de matéria seca. A ordem decrescente de macronutrientes acumulados pela cultura foi K, N, Ca, P, S e Mg, nas quantidades de 906,7; 438,0; 155,5; 87,4; 58 e 37,6 mg planta-1, respectivamente. A raiz participou com 60,5% do acúmulo de N, 86,1% de P, 58,0% de K, 25,5% de Ca, 55,6% de Mg e 65,5% de S. / In order to quantify the growth and accumulation of macronutrients of carrot 'Forto', and obtain equations that best represent them, it was carried out experiment in the São Gotardo (MG), from May to September of 2004. Samples of plants were taken at 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110 and 120 days after sowing (DAS) to determine dry matter and accumulation of macronutrients in leaves and roots of carrot. At 40 DAS, five days after thinning, the plants had 0.18 g and 0.04 g of leaves dry mass (LDM) and root dry mass (RDM), respectively. From then, until 88 DAS, the partitioning of dry matter in the aerial part were more pronounced. The RDM was low until 80 DAS, which corresponded to two thirds of the crop cycle, from when the amount of material allocated in this part of the plant had strong growth surpassing at 88 DAS the amount of LDM. The nutrient accumulation was small until 60 DAS, coinciding with the period of lower dry matter accumulation in the plant. The order of decreasing macronutrient accumulation by the plant was K, N, Ca, P, S e Mg, in the amounts of 906.7, 438.0, 155.5, 87.4, 58.0 and 37.6 mg plant-1, respectively. The commercial root participated with 60.5% of the accumulation of N, 86.1% of P, 58.0% of K, 25.5% of Ca, 55.6% of Mg and 65.5% of S.

Resumo: A técnica de potencial de corrosão, desde sua primeira descrição em laboratórios americanos pela equipe de Stratfull em 1957, é utilizada como um método eletroquímico de auxílio ao monitoramento da corrosão das armaduras de estruturas de concreto armado. Com os resultados obtidos durante a aplicação do método, é comum que se faça o mapeamento de valores através de isolinhas de potencial de corrosão, de modo a identificar regiões com armadura comprometida e como se distribui o processo de despassivação do aço na região em estudo. Porém, o método sofre a influência de inúmeros fatores ligados ao concreto, ao ambiente e aos procedimentos adotados no momento da efetuação das leituras. Este é o foco deste trabalho, estudar alguns dos possíveis fatores de influência nas medidas de potencial de corrosão a fim de fornecer informações para orientar o meio técnico e científico que façam uso deste tipo de técnica de avaliação não destrutiva. Os parâmetros avaliados são a relação água/cimento do concreto, a temperatura do sistema concreto/armadura, a espessura de cobrimento, o estado de contaminação por cloretos e teor de umidade do concreto. Os dados foram avaliados utilizando a ferramenta estatística denominada análise de variância (ANOVA) e pode-se dizer que a espessura do cobrimento e a relação água/cimento não apresentaram influência significativa nos resultados do monitoramento realizado. Por outro lado, a temperatura, o teor de umidade do concreto e o grau de contaminação apresentaram influência relevante nos resultados.

Resumo: Com o objetivo de avaliar o crescimento e o acúmulo de macronutrientes em cenoura „Forto‟ e obter equações que melhores os representem, conduziu-se um experimento em São Gotardo (MG), de maio a setembro de 2004. As amostragens de plantas foram realizadas aos 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110 e 120 dias após a semeadura (DAS), para determinação da matéria seca e do acúmulo de macronutrientes em folhas e raiz da cenoura. Aos 40 DAS, cinco dias após ter sido realizado o desbaste, a planta de cenoura „Forto‟ apresentava 0,18 g e 0,04 g em matéria seca de folhas (MSF) e de raiz (MSR), respectivamente. A partir de então, até 88 DAS, a partição de matéria seca mostrou-se favorável na parte aérea. A MSR de cenoura foi pequena até dois terços do cultivo, ou seja, 80 DAS. A partir de então, verificou-se que a quantidade de matéria alocada nesta parte da planta teve forte incremento, ultrapassando, aos 88 DAS, a quantidade de MSF. O acúmulo de nutrientes foi pequeno até 60 DAS, coincidindo com o período de menor acúmulo de matéria seca. A ordem decrescente de macronutrientes acumulados pela cultura foi K, N, Ca, P, S e Mg, nas quantidades de 906,7; 438,0; 155,5; 87,4; 58 e 37,6 mg planta-1, respectivamente. A raiz participou com 60,5% do acúmulo de N, 86,1% de P, 58,0% de K, 25,5% de Ca, 55,6% de Mg e 65,5% de S. / Abstract: In order to quantify the growth and accumulation of macronutrients of carrot 'Forto', and obtain equations that best represent them, it was carried out experiment in the São Gotardo (MG), from May to September of 2004. Samples of plants were taken at 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110 and 120 days after sowing (DAS) to determine dry matter and accumulation of macronutrients in leaves and roots of carrot. At 40 DAS, five days after thinning, the plants had 0.18 g and 0.04 g of leaves dry mass (LDM) and root dry mass (RDM), respectively. From then, until 88 DAS, the partitioning of dry matter in the aerial part were more pronounced. The RDM was low until 80 DAS, which corresponded to two thirds of the crop cycle, from when the amount of material allocated in this part of the plant had strong growth surpassing at 88 DAS the amount of LDM. The nutrient accumulation was small until 60 DAS, coinciding with the period of lower dry matter accumulation in the plant. The order of decreasing macronutrient accumulation by the plant was K, N, Ca, P, S e Mg, in the amounts of 906.7, 438.0, 155.5, 87.4, 58.0 and 37.6 mg plant-1, respectively. The commercial root participated with 60.5% of the accumulation of N, 86.1% of P, 58.0% of K, 25.5% of Ca, 55.6% of Mg and 65.5% of S. / Mestre

O principal objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade de uma membrana de aço 1010 absorver hidrogênio, quando submetida à corrosão por fresta em meios simulando as condições encontradas entre o aço e o concreto, comumente empregados na construção civil. Além disso, desenvolveu-se uma técnica para confecção de frestas, com áreas e espessuras específicas. No desenvolvimento deste trabalho, foi empregada a técnica de eletropermeação de hidrogênio em membranas de ferro, desenvolvida por Devanathan e Stachursky [1]. O fluxo de hidrogênio permeado foi medido no potencial de corrosão e em diferentes potenciais aplicados. Nos eletrólitos de medida - solução saturada de hidróxido de cálcio (Ca(OH)2) - variou-se o pH da solução e/ou a concentração de íons cloreto (CI-). A variação desses parâmetros teve como objetivo medir o efeito dos mesmos na absorção de hidrogênio em membranas de ferro expostas a frestas com diferentes espessuras. As superfícies das membranas expostas em eletrólitos variando-se o pH entre 12,4 e 6,5 foram examinadas ao microscópio eletrônico de varredura (MEV). Verificou-se, nas condições estudadas, que a nucleação da corrosão por fresta ocorreu após um período de aproximadamente 1 h, provocando também absorção de hidrogênio pelo aço. Maiores concentrações de cloreto produzem maiores taxas de absorção de hidrogênio. A solução contida na fresta sofre isolamento do restante da solução pela formação de um muro de magnetita. Isto explica a pouca influência da espessura da fresta na absorção de hidrogênio (H), para frestas com corrosão já nucleadas. Em valores mais baixos de pH ocorre a dissolução parcial do muro de magnetita e aumento da taxa de absorção de hidrogênio. / The principal aim of this work was to evaluate the absorption of hydrogen of a steel 1010 membrane, submitted to crevice corrosion in mediums simulating the conditions between steel and reinforced concrete in civil engineering. Moreover, a technique was developed to produce crevices with specific areas and widths. During this work, the hydrogen electropermeation technique developed by Devanathan and Stachursky [1] was applied to an iron membrane, The flux of permeated hydrogen was measured at the corrosion potential as well as under potentiostatic polarization. In the eletrolyte which consisted of a saturated calcium hidroxide solution (Ca(OH)2, the pH of the solution and/or the chloride concentration (CI-) were varied. The change of these parameters had the aim to measure their effect on the hydrogen absoption of the iron membrane exposed to crevices with different widths. Scanning electron microscopic examinations were performed with the surfaces of membranes, which had been exposed to saturated Ca(OH)2 solution, the pH of which varied between 12.4 and 6.5. Under the conditions studied in this work, the crevice corrosion usually started after ca. 1 hour. The solution inside the crevice was isolated from the bulk solution due to the formation of a magnetite wall. This probably explains the poor influence of the crevice width on the hydrogen absorption. Partial dissolution of this wall and an increase of the hydrogen absorption rate occurred at lower pH-values.

Neste trabalho foram desenvolvidos procedimentos analíticos para a determinação de elementos-traço em amostras de petróleo e alguns de seus derivados. Para determinação de As e Cd em petróleo foi utilizada a espectrometria de absorção atômica com forno de grafite por amostragem direta. As amostras passaram somente por uma etapa de homogeneização e foram analisadas diretamente no GF AAS utilizando modificador químico convencional de Pd/Mg. A validação foi realizada por testes de recuperação, digestão e análise de material de referência certificado. Na determinação de Hg em derivados de petróleo foi utilizada como método de preparo das amostras a formação de microemulsões com propan-1-ol ou propan-2-ol. As microemulsões foram introduzidas em um reator fotoquímico e os analitos voláteis gerados transportados para o sistema de detecção. Para quantificação foi utilizada a técnica de espectrometria de absorção atômica, sendo que para a determinação de Hg em nafta e condensado de petróleo utilizou-se uma célula de quartzo e para determinação de Hg em amostras de gasolina, foi realizada pré-concentração em forno de grafite utilizando-se modificador químico convencional de Pd. Os resultados foram validados por testes de recuperação com adição de padrões orgânicos e inorgânicos de Hg. / In this work analytical procedures for the determination of trace elements in petroleum and some derivatives were developed. For the determination of As and Cd in petroleum samples graphite furnace atomic absorption spectrometry with direct sampling was used. The samples were only manually homogenized and analyzed directly in the GF AAS using conventional Pd/Mg chemical modifier. The accuracy was performed by recovery tests, acid digestion and analysis of certified reference material. In the determination of Hg in petroleum derivatives, microemulsions with propan-1-ol or propan-2-ol were used as sample preparation method. The microemulsions were introduced into a photochemical reactor and the generated volatile analytes transported to the detection system. Quantification was carried out by atomic absorption spectrometry; in the determination of Hg in naphtha and petroleum condensate a quartz cell was used and for the determination of Hg in gasoline samples, pre-concentration was performed in the graphite furnace using conventional chemical modifier Pd. The accuracy was estimated by recovery tests with addition of inorganic and organic Hg standards.

A determinação de As, Hg, Cd e Pb em amostras de pescado e frutos do mar é de grande interesse analítico devido à potencial toxicidade desses elementos. Neste trabalho foi avaliada a viabilidade da determinação da quantidade total de As, Pb e Cd em amostras de pescado por SS-GF AAS. O método desenvolvido permitiu a análise direta de pescado in natura para determinação acurada de Cd e Pb. Porém para As os valores de concentração encontrados não foram concordantes com os valores certificados dos CRMs. Por esta razão, foi realizado um estudo adicional para a determinação do As total utilizando a técnica de ICP-MS. A técnica de HPLC-ICP-MS foi utilizada na verificação da concentração da arsenobetaína (espécie de alta estabilidade térmica). Como a toxicidade do As e Hg é dependente das suas espécies químicas, a quantidade total destes elementos não fornece informação suficiente sobre a toxicidade das amostras analisadas. Desta forma, métodos para análise de especiação das amostras de pecado e frutos do mar do Brasil e da Espanha foram desenvolvidos. A especiação do As foi realizada por HPLC-ICP-MS e a especiação do Hg foi realizada por HPLC-UV-CV-AFS. / The determination of As, Hg, Cd and Pb in fish and seafood samples has large analytical interest due to the potential toxicity of these elements. In this work, the feasibility of Cd, Pb and As determination in fresh fish samples using SS-GF AAS was investigated. The results for total Cd and Pb were statistically not different from the certified values at 95% confidence level, but for total As the results were different. For this reason, ICP-MS was also used to determine total arsenic content and HPLC-ICP-MS technique was used to investigate the arsenobetaine (species with high thermal stability) concentration. The toxicity of As and Hg is dependent on its chemical species and the total amount of these metals do not provide enough information about the toxicity of the analysed sample. Thus, an analytical method for determination of arsenic and mercury species in Brazilian and Spanish seafood samples was developed. Arsenic speciation was carried out by HPLC-ICP-MS and mercury speciation by HPLC-UV-CV-AFS.

A análise quantitativa da excreção fecal de gordura (método de van de Kamer) permanece como o melhor e mais utilizado método de avaliação de pacientes suspeitos de alterações na digestão elou absorção de gorduras. No entanto, esta técnica é pouco aceita por todos os envolvidos na sua realização. Vários métodos foram propostos tentando solucionar questões como a manipulação de grandes quantidades de fezes. Uma destas técnicas é o esteatócrito, um método semiquantitativo de determinação da excreção fecal de gordura, descrito por PHUAPRADIT, NARANG, MENDONÇA et alli (1981). O método também sofreu críticas e, a partir destas, foram propostas modificações. Um dos objetivos deste trabalho foi o de estudar a técnica original e 5 modificações da mesma. Obtivemos 6 diferentes formas de realização do esteatócrito, a saber: 1) técnica clássica ( homogeneização por 1 minuto à temperatura ambiente); 2) homogeneização por 2 minutos à temperatura ambiente; 3) homogeneização por 1 minuto e material em banho-maria a 370 C por 24 horas; 4) homogeneização por 2 minutos nas mesmas condições de temperatura da técnica 3; 5} homogeneização por 2 minutos à temperatura ambiente com adição de ácido e corante lipídico e 6) como a técnica 5 mas em banho-maria a 750 C durante 10 minutos. Testes de correlação demonstraram que a técnica 2 é a mais adequada das 6 diferentes formas de realizar-se o esteatócrito. Seu coeficiente de correlação foi de 0,94. Para as demais, obtivemos os seguintes valores: técnica 1= 0,65; técnica 3= 0,65; técnica 4= 0,87; técnica 5= 0,74 e técnica 6= 0,73. Testes de variação intra e interensaio confirmaram a técnica 2 como a de melhor desempenho. Como mais uma alternativa ao método de van de Kamer, estudamos a determinação da concentração fecal de colesterol e triglicerídeos. Nosso objetivo era avaliar o desempenho da técnica. Obtivemos recuperação de 82,80 ± 14,200/0 para o colesterol e 113,24 ± 87,67% para os triglícerídeos. A variação nos resultados da determinação de colesterol não invíabilíza o seu uso na prática diária, o mesmo não é válido para os triglicerídeos (talvez sejam necessárias modificações na técnica para melhor desempenho). / The quantitative analysis of fecal fat excretion ( van de Kamer method) is still the best and most widely used method of evalutation of patients suspected of having alteration in their digestion and/or absorption of fats. However, this technique in not much accepted by everybody involved in its execution . Many methods have been proposed, trying to solve matters such as the manipulation of large quantities of feces. One of these techniques is the steatocrit, a semiquantitative method of determining the fecal fat excretion, described by PHUAPRADIT, NARANG, MENDONÇA et alii (1981). This method has also been criticized and, based on these critics, modofocations have been proposed. One of the objectives of this work was to study the original technique and five of its modifications. We obtained 6 different ways of executing the steatocrit, which are: 1) classic technique ( homogenization during 1 minute at environmental temperature); 2) homogenization during 2 minutes at environmental temperature; 3) homogenization during 1 minute and material in waterbath at 37° C for 24 hours; 4) homogenization during 2 minutes in the same temperature conditions as in technique 3; 5) homogenization during 2 minutes at environmental temperature with addition of acid and Iipid dyeing and 6) as in technique 5 but in water-bath at 75° C during 10 minutes. Correlation tests demonstrated that technique 2 is the most adequate of the 6 different forms of executing the steatocrit. tts coefficient of correlation was 0.94. For the others, we obtained the following values: techique 1= 0.65; technique 3= 0.65; technique 4= 0.87; technique 5= 0.74 and technique 6= 0.73. Intra and interexperiment variation tests confirmed technique 2 as being the one with the best performance. As an additional alternative to the van de Kamer method, we studied the determination of fecal concentration of cholesterol and triglycerides. Our objective was to evaluate the performance of the technique. We obtained a recuperation of 82.80±14.20% for cholesterol and 113.24±87.67°J'o for triglycerides. The variation in the results for the cholesterol determination does not render this technique unviable in daily practice. The same does not apply to triglycerides (maybe modifications in the technique are necessary for a better performance).

O pantoprazol (PAN) é um inibidor da bomba de prótons clinicamente empregado para o tratamento de úlcera gástrica e refluxo gastro-esofágico. Estudos relacionados à estabilidade físico-química mostraram que a degradação do PAN está diretamente relacionada com a acidez do meio, determinando a necessidade de administrá-lo em uma forma gastrorresistente. Desse modo, este trabalho propôs-se a desenvolver micropartículas à base de polímero gastrorresistente (Eudragit S100®), polímero de baixa permeabilidade (Eudragit RS30D®) ou de blenda polimérica (Eudragit S100®/ Eudragit RS30D®), contendo PAN pela técnica de spraydrying . O estudo de dissolução in vitro utilizando célula de fluxo demonstrou que o PAN foi liberado das micropartículas em 120 minutos, seguindo cinética de primeira ordem, de acordo com o modelo monoexponencial. A avaliação da gastrorresistência in vitro em célula de fluxo e em dissolutor evidenciou que as formulações de micropartículas à base de Eudragit S100® e da blenda (Eudragit S100®/ Eudragit RS30D®), garantiram adequada proteção ao fármaco em ambiente ácido. Estudos in vivo confirmaram esses resultados, pois possibilitaram a constatação da proteção do fármaco pelas micropartículas durante a passagem pelo estômago, o que possibilitou absorção entérica do PAN em quantidade adequada para exercer atividade farmacológica. Por fim, a investigação ex vivo da permeação do PAN carreado por micropartículas no epitélio intestinal mostrou que estes sistemas foram capazes de garantir a absorção da totalidade do fármaco carreado, constatando-se ainda que este processo ocorreu segundo o modelo monoexponencial.

A determinação de As, Hg, Cd e Pb em amostras de pescado e frutos do mar é de grande interesse analítico devido à potencial toxicidade desses elementos. Neste trabalho foi avaliada a viabilidade da determinação da quantidade total de As, Pb e Cd em amostras de pescado por SS-GF AAS. O método desenvolvido permitiu a análise direta de pescado in natura para determinação acurada de Cd e Pb. Porém para As os valores de concentração encontrados não foram concordantes com os valores certificados dos CRMs. Por esta razão, foi realizado um estudo adicional para a determinação do As total utilizando a técnica de ICP-MS. A técnica de HPLC-ICP-MS foi utilizada na verificação da concentração da arsenobetaína (espécie de alta estabilidade térmica). Como a toxicidade do As e Hg é dependente das suas espécies químicas, a quantidade total destes elementos não fornece informação suficiente sobre a toxicidade das amostras analisadas. Desta forma, métodos para análise de especiação das amostras de pecado e frutos do mar do Brasil e da Espanha foram desenvolvidos. A especiação do As foi realizada por HPLC-ICP-MS e a especiação do Hg foi realizada por HPLC-UV-CV-AFS. / The determination of As, Hg, Cd and Pb in fish and seafood samples has large analytical interest due to the potential toxicity of these elements. In this work, the feasibility of Cd, Pb and As determination in fresh fish samples using SS-GF AAS was investigated. The results for total Cd and Pb were statistically not different from the certified values at 95% confidence level, but for total As the results were different. For this reason, ICP-MS was also used to determine total arsenic content and HPLC-ICP-MS technique was used to investigate the arsenobetaine (species with high thermal stability) concentration. The toxicity of As and Hg is dependent on its chemical species and the total amount of these metals do not provide enough information about the toxicity of the analysed sample. Thus, an analytical method for determination of arsenic and mercury species in Brazilian and Spanish seafood samples was developed. Arsenic speciation was carried out by HPLC-ICP-MS and mercury speciation by HPLC-UV-CV-AFS.