O mosquito Aedes (Stegomyia) aegypti Linnaeus, 1762 é o principal vetor do vírus do dengue sorotipo 1-4 (DEN 1-4) e da febre amarela. Por não haver vacina disponível, a redução da transmissão da dengue só pode ser alcançada mediante o controle do vetor. Entre as medidas de controle, os órgãos responsáveis utilizam-se de compostos químicos, principalmente organofosforados. Além disso, devido ao grande incomodo causado pelo Aedes, a população faz uso de inseticidas domésticos, a base de piretróides, na tentativa de eliminar e ou repelir o mosquito. As repetidas aplicações destes inseticidas e seu uso contínuo possibilitam o desenvolvimento de resistência em populações de mosquitos, processo resultante do efeito seletivo de exposição a dosagens que matam os indivíduos suscetíveis, sobrevivendo os resistentes, que transferem essa capacidade a seus descendentes. Dentre os mecanismos de resistência, a redução da sensibilidade do sítio alvo é dada por mutações pontuais no sitio de ação dos inseticidas. Tais mutações podem levar a uma substituição de aminoácidos na molécula alvo e a uma diminuição da afinidade do inseticida com essa molécula. No caso dos piretróides a mudança estrutural na molécula formadora do canal de sódio (Nav), sítio alvo deste inseticida, é a causa da resistência tipo knockdown resistence (kdr), um mecanismo de resistência bastante conhecido. Em Aedes aegypti, a associação entre a presença da mutação V1016I e o fenótipo de resistência a piretróide já foi verificada em algumas regiões Brasileiras, utilizando primers alelo-específicos. A mutação I1011M também está associada à resistência a piretróides e já foi descrita no Brasil. O objetivo deste estudo foi determinar a frequência destas mutações que levam às substituições V1016I e I1011M no AaNav de populações de Aedes aegypti no estado de São Paulo e avaliar a evolução desta frequência no período de dez anos. Para isso, indivíduos coletados em 2001 e 2011 tiveram o DNA extraído e primers alelo específicos foram utilizados para a realização de PCR a fim de verificar a presença da mutação. Houve um aumento significativo do alelo 1016 Ile nas populações estudadas, comparando-se os anos 2001 e 2011. Entretanto para o alelo 1011 Met, somente a população de Santos apresentou essa diferença significativa. Este aumento na frequência destas mutações pode ter sido ocasionado pela utilização de inseticidas domésticos à base de piretróides, uma vez que os órgãos de controle interromperam a utilização desses compostos / The mosquito Aedes (Stegomyia) aegypti Linnaeus, 1762 is the main vector of the virus dengue serotypes 1-4 (DEN 1-4) and the yellow fever virus. As there is not vaccine available, the reduction of the transmission of dengue can only be achieved by controlling the vector. Among the control measures, the responsible agencies use chemical compounds, organophosphate mainly. Furthermore, due to the big nuisance caused by Aedes, the population makes use of domestic insecticide, pyrethroids based, trying to eliminate or repel the mosquito. The repeated applications of these insecticides and the continuous use of them enable the resistance development in the mosquitoes population. This process is the result of selective effect of exposure to dosages that can kill the susceptible individuals, and then the surviving individuals transfer these characteristics to their descendents. Among the mechanism of resistance, the reduction of sensibility of the target site is given by punctual mutation (SNIP) in the action site of the insecticides. This mutation can lead to a substitution of amino acids in the target molecule and a reduction of affinity of the insecticide with this molecule. In the case of pyrethroids, the structural change in the forming molecule of the sodium channel (Nav), target site of this insecticide, is the cause of knockdown resistence (kdr) type. In Aedes aegypti, the association between the presence of the mutation V1016I and the pyrethroid resistance phenotype has been previously verified in many Brazilian regions, using Allele Specific primers The mutation I1011M is also associated with the pyrethroids resistance and it has been described in Brazil. The objective of the this study was to determine the frequency of the mutations that leads to the substitutions V1016I e I1011M in AaNav of the Aedes aegypti population in the state of Sao Paulo and to evaluate the evolution of this frequency in the period of ten years. Therefore, collected individuals in 2001 and 2011 had their DNA extracted and specific primers were used for PCR, in order to verify the presence of the mutation. There was a significant raise of allele 1016 Ile in the studied population, comparing the years 2001 and 2011. Nevertheless for allele 1011 Met, only the population of Santos showed this significant difference. This raise in the frequency of these mutations may have been caused by the utilization of domestic insecticides pyrethroid based, whereas the control agencies interrupted the utilization of this compost

Introdução: Após alguns anos possivelmente ausente do Brasil, o Ae. aegypti, principal transmissor dos vírus da dengue volta a ser encontrado, sendo este fato comprovado no Estado de São Paulo desde 1985. No município de Santos focos de Ae. aegypti foram assinalados em 1980, todavia a sua infestação foi comprovada em 1994 (SUCEN). Os primeiros casos de dengue autóctones (contraídos no município de Santos) emergiram no início de 1997. O objeto de estudo desse trabalho é a dengue no município de Santos e sua transmissão que parece ininterrupta. Objetivo: estudar a ocorrência da dengue no município de Santos no período de 1997 a 2008 em alguns de seus aspectos epidemiológicos, clínicos e vetoriais e possíveis causas da flutuação das epidemias1 consecutivas permeadas por períodos de surtos epidêmicos2. Método: Estudo descritivo com análise comparativa entre os índices de infestação do Aedes com a incidência3 da dengue no mesmo período para avaliar se houve impacto das ações de controle. As variáveis para a análise de incidência serão somente os casos notificados, confirmados e residentes em Santos nos anos de 1997 a 2008, por faixa etária, sexo, ano e mês de ocorrência. Resultados: A incidência acumulada da doença de aproximadamente 84% pode apontar para uma possível diminuição de suscetíveis para os três sorotipos (1, 2 e 3), e o risco de novas epidemias é possível, seja com a introdução do sorotipo 4, onde toda a população é suscetível, aumentando o risco dos casos de dengue hemorrágica, ou epidemias infantis, atingindo em maior número lactantes e crianças até 14 anos, uma vez que a prevalência é menor. Conclusões: O comportamento da incidência da dengue durante esses doze anos consecutivos de autoctonia no município de Santos mostrou como característica principal a ciclotimia, anos epidêmicos intercalados com surtos, possível esgotamento de suscetíveis adultos para cada novo vírus introduzido, e os métodos utilizados no controle da doença mostraram que não foram suficientes, embora legitimamente embasados, faltou a integração das ações, com planejamento, acompanhamento e avaliação / Introduction: After a few years away from possibly Brazil, Ae. aegypti, the main transmitter of the dengue virus is again found, and this was proven in the State of São Paulo since 1985. In the city of Santos foci of Ae. aegypti was reported in 1980, but its infestation was confirmed in 1994 (SUCEN). The first cases of indigenous dengue fever (contracted in the city of Santos) re-emerged in early 1997. The object of this paper is to study dengue in the city of Santos and its transmission that seems unbroken. Objective: To study the incidence of dengue in the city of Santos in the period 1997 to 2008 in some of its epidemiological, clinical and vector and possible causes of fluctuations in consecutive epidemics1 interspersed by periods of epidemic outbreaks2. Method: A descriptive and comparative analysis between the infestation levels of Aedes with the incidence3 of dengue in the same period to assess whether there was impact of control measures. The variables for the incidence analysis will only be notified cases confirmed and living in Santos in 1997 and 2008, by age, sex, year and month of occurrence. Results: The prevalence of the disease approximately 84% can point to a possible reduction of susceptibility to the three serotypes (1, 2 and 3), and the risk of new epidemics are possible, either with the introduction of serotype 4, where the entire population is susceptible, increasing the risk of cases of dengue hemorrhagic fever, epidemic or \"childish\", reaching in many infants and children up to 14 years, since the prevalence is lower. Conclusions: The behavior of the incidence of dengue during these twelve consecutive years of autochthony the city of Santos showed the main characteristic of cyclothymia, interspersed with years epidemic outbreaks, depletion of susceptible adults for each new virus introduced, and the methods used to control the disease showed that there were sufficient, although legitimately grounded, lacked the integration of action, with planning, monitoring and evaluation

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No. of bitstreams: 1 jenifercarvalhogorssi.pdf: 6998133 bytes, checksum: f49277dca971587203cbebb23396270d (MD5) Previous issue date: 2018-03-26 / As tiossemicarbazonas são uma classe de compostos químicos com amplo perfil farmacológico, contudo há poucos estudos sobre sua toxicidade em insetos. O Aedes aegypti (Linnaeus, 1762) é na atualidade um dos mosquitos que mais tem causado problemas de saúde pública, devido ao seu potencial de disseminar doenças, como dengue, febre amarela, chikungunya e zika. Entre as estratégias mais eficientes no controle dessas doenças está o combate ao vetor. No entanto, o número limitado de agentes larvicidas e o surgimento de mosquitos resistentes podem comprometer esse combate, o que tem motivado a busca por novas moléculas que podem atuar como larvicidas. Neste trabalho foi avaliada a toxicidade de uma série de quatorze tiossemicarbazonas derivadas de benzaldeído, acetofenona e benzofenona contra larvas do Aedes aegypti. Os compostos foram preparados e caracterizados a partir de seus espectros de infravermelho e ressonância magnética nuclear, bem como, por sua estabilidade coloidal em solução aquosa com dimetilsulfóxido 1%. A toxicidade dos compostos em concentrações na faixa de 0,1 a 100 μM foi avaliada frente a larvas no estádio L4, sendo demonstrado que as tiossemicarbazonas derivadas de benzofenona apresentam atividade larvicida. O comportamento de nado e a morfologia externa e das células do intestino médio foram avaliados para os compostos que apresentaram atividade larvicida, sendo observado a redução da mobilidade, deformidade de algumas larvas e alterações nas células após a exposição com tiossemicarbazonas. Ensaios de imunofluorescência utilizando os anticorpos anti-fosfohistona H3, anti-proteína de cadeia leve 3 associada a microtúbulos (anti-LC3A/B), anti-caspase-3 e anti-peroxidase foram realizados nas células do intestino médio das larvas. Esses resultados ressaltaram o efeito citotóxico das tiossemicarbazonas, contudo sem a participação dos processos de apoptose, autofagia e de enzimas peroxidase. Os resultados obtidos corroboram a potencial atividade larvicida das tiossemicarbazonas, mas a origem da sua citotoxicidade deve ser melhor investigada. / The thiosemicarbazones are a class of chemical compounds with broad pharmacological profile, however, there is few studies on its toxicity in insects. Currently, Aedes aegypti mosquitoes (Linnaeus, 1762) has caused public health problems due to its potential for disease dissemination, such as dengue fever, yellow fever, chikungunya and zika. The fight against the vector is one of most efficient strategies used in the control of these diseases. However, the limited number of larvicidal agents and the emergence of resistant mosquitoes can compromise this fight, which has motivated the research for new molecules that can act as larvicides. In this work, a series of fourteen thiosemicarbazones derived from benzaldehyde, acetophenone and benzophenone against Aedes aegypti larvae were evaluated. The compounds were prepared and characterized by their infrared and nuclear magnetic resonance spectra as well as its colloidal stability in 1% DMSO aqueous solution. The larvicidal activity of the compounds, at concentration range from 0.1 to 100 μM, was evaluated against larvae in the L4 stage, being that benzophenone-derived thiosemicarbazones demonstrated larvicidal activity. The swimming behavior and external and midgut cells morphology were evaluated for the active compounds. In these experiments were observed a reduction of mobility, deformity of some larvae and alterations in cells upon exposition to thiosemicarbazones. Immunofluorescence assays involving anti-phospho-histone H3, microtubule-associated protein light chain 3 antibody (anti-LC3A/B), anti-caspase 3, and anti-peroxidase antibodies were performed on midgut cells from larvae. These results highlight the cytotoxic effect of thiosemicarbazones, but without the participation of apoptotic and autophagic processes and peroxidase enzymes. The results obtained corroborate a potential larvicidal activity of thiosemicarbazones, however, the origin of its cytotoxicity should be better investigated.

Um dos grandes problemas da saúde pública no país esta diretamente ligada à dengue, uma vez que aproximadamente 550 mil pessoas são infectadas anualmente, e cerca de 20 mil vêm a óbito. Esta doença é causada pelo vírus da família Flaviviridae, transmitido pela fêmea ao hospedeiro durante o repasto sanguíneo. Este projeto teve como objetivo isolar e caracterizar células indiferenciadas de ovos embrionados e do tubo digestivo de larvas em quarto instar de Aedes aegypti, como fonte de pesquisa na área de biologia celular e estrutural destes vetores. Mediante cultura celular, as células foram isoladas e recultivadas em meio de cultura DMEM-High, e temperatura de 28 ºC. As seguintes análises foram feitas: morfologia celular, ciclo celular, testes de imunofenotipagem pelo método de citometria de fluxo e analise de imunohistoquimica. As células de Aedes aegypti analisadas pela morfologia celular, apresentaram formato globóide, tamanho pequeno e população heterogênica. A análise das fases do ciclo Sub-G1, G0-G1, S e G2-M após cultura primaria de ovos embrionados atingiram (27,5%; 68%; 30,2% e 1,9%, respectivamente). Após 24 horas atingiram (10%; 92,4%; 6,2% e 0,6%, respectivamente). A análise de imunofenotipagem realizada pelo método de citometria de fluxo demonstrou em ovos embrionados, marcações positivas para pluripotencia, assim como baixa expressão para Oct 3/4, e alta expressão para o (Sox2). As células mesenquimais tiveram alta expressão para os marcadores (Stro-1, Vimentina e Nestin). O marcador de morte celular por apoptose (Caspase3), teve alta expressão nas células cultivadas, enquanto que os marcadores endossomicos específicos para células de insetos (Anti GM130 e Anti RAB-5) também foram altamente expressos. Na cultura celular derivada do tubo digestivo de larvas de Aedes aegypti, as analises dos marcadores para pluripotencia tais como Oct 3/4 não demonstrou expressão, entretanto, o marcador Sox2 foi altamente expresso na cultura. Para as células mesenquimais não houve expressão de nenhum marcador utilizado, ou seja, (Stro-1, Vimentina e Nestin). No entanto para o marcador de morte celular por apoptose (Caspase 3) as células em cultura demonstraram alta expressão, enquanto que para os marcadores endossomicos específicos de insetos os mesmos foram altamente marcados. O teste de imunohistoquímica realizado em ovos embrionados no final do período embrionário demonstrou que as células tinham potencial ploriferativo mediante marcação positiva para PCNA. As células pluripotentes foram pouco expressas pelos marcadores Nanog, Oct 3/4, e muito expressas pelo marcador Sox2. As células de origem mesenquimais foram altamente expressas pelos marcadores SSEA-4, Stro-1, Vimentina e Nestin assim como para os marcadores endossomicos específicos para células de insetos, os quais demonstraram alta expressão nas células de embriões de Aedes. Sendo assim, conclui-se que tanto ovos embrionados quanto larvas de quarto instar de Aedes aegypti possuem células indiferenciadas, com grande potencial para estudos com biologia molecular, visando o controle biológico deste vetor / A major problem of public health in the country is directly linked to dengue, as approximately 550 million people are infected annually, and about 20,000 have died. This disease is caused by the virus of the Flaviviridae family, transmitted by the female to the host during blood feeding. This project aimed to isolate and characterize stem cells from fertilized eggs and larvae gut fourth instar Aedes aegypti, as a source of research in cell biology and structural area of these vectors. Upon cell culture, the cells were isolated and recultured in DMEM-high culture temperature and 28 º C. The following analyzes were performed: cell morphology, cell cycle tests immunophenotyping by flow cytometry and immunohistochemistry analysis. The Aedes aegypti cells analyzed by cell morphology showed globular shape, small size and heterogenic population. The analysis of sub-G1 phase of the cycle, G0, G1, S and G2-M after primary culture reached embryonated eggs (27.5%, 68%, 30.2% and 1.9%, respectively). Achieved after 24 hours (10%, 92.4%, 6.2% and 0.6%, respectively). Immunophenotyping analysis by flow cytometry demonstrated in embryonated eggs, positive for pluripotency markers, as well as low expression of Oct 3/4 and high expression for the (Sox2). The mesenchymal cells had high expression for markers (Stro-1, vimentin and Nestin). The marker of cell death by apoptosis (Caspase3) had high expression in cultured cells, whereas the endosomal markers specific for insect cells (GM130 and Anti-Anti RAB 5) were also highly expressed. In cell culture derived from the gut of larvae of Aedes aegypti, the analysis of pluripotency markers such as Oct for 3/4 showed no expression, however, the marker Sox2 was highly expressed in the culture. For mesenchymal cells no expression of any label used, ie (Stro-1, Nestin and vimentin). However marker for cell death by apoptosis (caspase 3) cells in culture showed high expression, whereas for the specific endosomal markers insects they were highly labeled. The immunohistochemistry test on embryonated eggs at the end of the incubation period the cells have demonstrated potential ploriferativo by positive staining for PCNA. Pluripotent cells were slightly expressed by markers Nanog, Oct 3/4, Sox2, and expressed by the marker. The cells of mesenchymal origin were highly expressed by SSEA-4 markers, Stro-1, Nestin and vimentin as well as the specific endosomal markers for insect cells, which showed high expression in cells of Aedes embryos. Therefore, it is concluded that both embryonated eggs as room instar larvae of Aedes aegypti have undifferentiated cells, with great potential for studies of molecular biology, targeting the biological control of this vector

São preocupantes as doenças que tem o Aedes aegypti como vetor. A elevada competência vetorial deste mosquito, bem como sua antropofilia e adaptação ao ambiente urbano, geram habitats favoráveis e torna sua prevenção uma árdua tarefa considerando os recursos disponíveis. O controle atual enfatiza o mosquito, mas ainda há espaço para o aprimoramento da sua efetividade e sucesso, o que torna fundamental o maior conhecimento sobre este inseto. O Brasil apresenta condições favoráveis para a disseminação do mosquito. Diante do exposto este estudo visa estudar a vigilância entomológica do Aedes aegypti no Município de São Paulo no ano de 2013, bem como descrever as características morfológicas, morfométricas da fase de ovo e seu desenvolvimento embrionário. A análise da vigilância entomológica no Município de São Paulo, foi realizada a partir de dados secundários oriundos da Secretaria de Saúde do município. Já a etapa envolvendo a descrição morfológica, morfometrica e o desenvolvimento embrionário foi realizada a partir do material biológico cedido pelo Instituto de Ciências Biomédicas-USP utilizando recursos, tais como a Microscopia Eletrônica de Varredura, Microscopia Eletrônica deTransmissão e Microscopia Confocal. Os indicadores entomológicos Índice de Breteau (IB), Índice de Infestação Predial (IP) e Índice por Tipos de Recipientes Positivos (ITR), tiveram comportamento similares entre si nos anos estudados. Já o ITR revelou que o principal tipo de recipiente positivo para presença do vetor foi o prato/pingadeira para planta, seguido do vaso de planta, ou seja, os principais recipientes positivos encontram-se no ambiente domiciliar. Na avaliação do padrão morfológico e da mensuração acerca do comprimento, largura, razão comprimento/largura (índice) e diâmetro da micrópila constatou-se diferenças significantes entre as duas populações de ovos estudados, para cada um dos atributos morfométricos avaliados. Já a morfologia e o desenvolvimento embrionário apontam exocórion de grande resistência e de difícil permeabilidade, dificultando o acesso ao embrião. Considera-se fundamental a avaliação integrada dos dados oriundos do levantamento entomológico e de pesquisas quanto a características deste vetor nas diversas fases do ciclo biológico, pois somente desta maneira é possível investir em áreas específicas e promissoras para elaboração de políticas públicas efetivas e com poder transformador da realidade. / The diseases that have Aedes aegypti as a vector are worrisome. The high vectorial competence of this mosquito, as well as its anthropophilia and adaptation to the urban environment, generate favorable habitats and makes its prevention an arduous task considering the available resources. The current control emphasizes the mosquito, but its effectiveness and success in containing its dispersion still needs to improve, which makes fundamental the greater knowledge about this insect. Brazil presents highly favorable conditions for the spread of the mosquito. In view of the above, this study aims to study the entomological surveillance of Aedes aegypti in the city of São Paulo in 2013, as well as the morphological, morphometric characteristics of the egg phase and its embryonic development. The analysis of entomological surveillance was based on secondary data from health secretariats. The morphology, morphometry and embryonic development stages were performed using the biological material provided by the Institute of Biomedical Sciences of the University of São Paulo using resources such as Scanning Electron Microscopy (SEM), Transmission and Confocal. The entomological indicators Breteau Index (IB), Infestation Index (PI) and Index by Types of Positive Containers (ITR), had similar behavior among themselves in the years studied, since the ITR revealed that the main type of positive container for presence of the vector was dish / drip tray for plant followed by plant pot, the main positive containers are in the home environment. In the evaluation of the morphological pattern and measurement on length, width, length / width ratio (index) and diameter of the micropyle, it was observed significant differences between the two egg populations for each of the evaluated morphometric attributes. The morphology and embryonic development point to exochorion of big resistance and of difficult permeability, making difficult the access to the embryo. It is considered fundamental the integrated evaluation of data from the entomological survey and research on the characteristics of this vector in the various phases of the biological cycle, since only in this way is it possible to invest in specific and promising areas for the elaboration of effective public policies with transformative power of reality.

La Guadeloupe fait partie des pays où la Dengue est endémique avec des épidémies tous les 2 à 3 ans. Depuis 3 ans, d'autres arboviroses sont apparues sur le continent américain avec le Chikungunya en 2013 puis le Zika en 2015, causant d'importantes épidémies notamment en Guadeloupe. Le seul vecteur reconnu de ces maladies en Guadeloupe est le moustique Aedes aegypti. Il n'y a pas de vaccin, ni de traitements spécifiques contre ces infections et les moyens de prévention contre ces maladies passent par la surveillance et le contrôle des populations de moustiques sur le terrain. Les méthodes de surveillance sont basées le plus souvent sur l'analyse d'indices larvaires, parfois controversés. De plus, les moyens de contrôle des vecteurs ont longtemps été basés sur l'utilisation massive d'insecticides chimiques entraînant la résistance des moustiques à ces produits. Ce travail de thèse s'est donc articulé autour de deux grands axes devant permettre d'améliorer la prévention et le contrôle de ces arboviroses: i) la recherche d'un nouvel outil de surveillance des populations vectrices, basé sur la physiologie des femelles adultes et ii) l'évaluation des niveaux et l'étude de certains mécanismes de résistance à trois insecticides chimiques, le Téméphos, le Malathion (utilisés dans le passé) et la Deltaméthrine (utilisée actuellement). Un modèle de surveillance des populations vectrices basé sur les taux de parité en lien avec l'espérance de vie des femelles, en fonction des températures a été développé, et des pistes sur les situations entomologiques les plus à risques se sont dessinées. Les épreuves de résistance effectuées sur des larves de moustiques de Guadeloupe ont globalement révélé de forts niveaux de résistance au Téméphos et de faibles niveaux de résistance au Malathion. Les tests adulticides ont mis en évidence une résistance modérée des femelles à la Deltaméthrine. Les investigations moléculaires ont démontré des fréquences alléliques très élevées pour les mutations Kdr V1016I et F1534C connues pour être liées à la résistance aux pyréthrinoïdes. De plus, l'évaluation des niveaux d'expression constitutifs de certains gènes de détoxification a révélé des surexpressions significatives des populations testées par rapport à la souche sensible Bora-Bora, pour la carboxy-choline-estérase CCEAE3A, quatre cytochromes P450 à mono-oxygénases (014614, CYP6M11, CYP6BB2 et CYP9J23) et la glutathione-S-transférase GSTE2. / Guadeloupe is an endemic country for Dengue with epidemics every 2 to 3 years. In the past 3 years, other arboviruses have reached the Americas with Chikungunya virus in 2013 and Zika virus in 2015, causing major epidemics including in Guadeloupe. The only known vector of these diseases in Guadeloupe is the mosquito Aedes aegypti. As there is no vaccine nor specific treatment against these infections, prevention against these diseases is achieved through the monitoring and control of mosquito populations. Monitoring methods are based mostly on larval indices, with sometimes controversial results. In addition, vector control methods are based since a very long time on the massive use of chemical insecticides, causing mosquito resistance to these products. This work has therefore focused on two main areas to improve the prevention and control of these arboviruses: i) the search of a new vector population monitoring tool, based on the physiology of adult females and ii) the assessment of the resistance levels and mechanisms regarding three chemical insecticides, Temephos, Malathion (used in the past) and Deltamethrin (currently used). A vector population monitoring model based on females life expectancy as a function of parity rates and according to temperatures has being developed, and tracks on the entomological situations most at risk have emerged. Insecticide resistance tests performed on mosquito larvae have generally found strong Temephos resistance levels and low resistance to Malathion. Adulticide tests showed a moderate resistance of females to Deltamethrin. Molecular investigations have shown very high allelic frequencies for kdr mutations V1016I and F1534C, known to be associated with pyrethroid resistance. Moreover, the evaluation of constitutive expression levels of some detoxification genes revealed significant overexpression in tested Aedes aegypti populations compared to the susceptible Bora-Bora strain, for the carboxy-choline-esterase CCEAE3A, four cytochrome P450 mono-oxygenases (014614, CYP6M11, CYP6BB2 and CYP9J23) and the glutathione-S-transferase GSTE2.

Estudos populacionais de Aedes aegypti são de grande importância para o desenvolvimento de estratégias de controle, mas infelizmente o Estado de São Paulo carece desse tipo de estudo. Devido a esse contexto, o objetivo do trabalho foi avaliar a variabilidade genética e fenotípica de 4 populações de Ae. aegypti na área metropolitana de São Paulo. As análises interpopulacionais de forma em ambos os sexos mostraram variabilidade morfológica alar que, no entanto não indica estruturação populacional. Não foi observada correlação entre valores de distância fenética alar e distância geográfica para machos (r =-0,03) e fêmeas (r=0,34). Estruturação populacional foi detectada (Fst global=0,062) e baixo fluxo gênico (Nm=0,47) foi presumido nas quatro localidades. Foi observada correlação entre as distâncias genética e geográfica (r=0,76). Os dois marcadores populacionais aqui empregados aparentemente têm graus de resolução distintos para eventos microevolutivos, tendo sido DNA microssatélite ligeiramente mais sensível para acusar estruturação populacional. / Populational studies of Ae. aegypti are important to develop control strategies, but unfortunately the State of São Paulo lacks such studies. Despite this context, the objective of this work was to evaluate genetic and phenotypic variability of population samples of Ae. aegypti from four collecting sites in the metropolitan area of São Paulo city. The interpopulational analysis of shape for females and males showed morphological variability in wings, but did not indicate population structure. Pairwise fenetic distances among populations were not correlated to the geographic distances for males (r=-0.03) and females (r =0.34). Populational structure was detected (global Fst= 0.062) and low gene flow (Nm= 0.41) was presumed among four locations. Pairwise genetic distances among populations were correlated to the geographic distances (r = 0.76). The two populational markers used here apparently have different degrees of resolution for microevolutionary events, being that microsatellite DNA were slightly more sensitive in revealing populational structure.

Com o aumento progressivo do número de casos de infecção por diferentes arbovírus, por exemplo, dengue, zica e chikungunya, faz-se necessário o desenvolvimento de novas técnicas para o combate a esses arbovírus. A manipulação genética possibilitou a obtenção de mosquitos geneticamente modificados que sejam capazes de suprimir a população selvagem ou impedir a transmissão de agentes etiológicos gerando doenças. O estudo teve como objetivo o estabelecimento de linhagens para supressão populacional de Aedes aegypti. Esta construção apresenta esterilidade condicionada à presença ou ausência de antibiótico no meio em que esses mosquitos se desenvolvem durante a fase larval. Dessa forma, sem a necessidade de se utilizar radiação para obter insetos estéreis, é possível melhorar a qualidade dos machos adultos liberados e aumentar a competitividade dos mesmos em competir por fêmeas selvagens e adicionalmente gerar o desejado quadro de supressão populacional. / The increasing number of infection cases by arboviruses, for instance Dengue, Zika and Chikungunya, it is necessary to develop new techniques to fight against these arboviruses. Genetic manipulation allowed the production of genetically modified mosquitoes that are capable of suppressing the wild population or prevent pathogens transmission and avoid disease development. The project proposes to establish lines for population suppression of Aedes aegypti, one of the main vectors of those diseases. This construction presents the conditional sterility due to the presence or absence of antibiotics in the environment where these mosquitoes are developed during the larval stage. Thus, without the need to use radiation for sterile insects, it is possible to improve the quality of the released adult males and enhance the competitiveness thereof in competing with wild females and additionally generate population suppression.

Novas alternativas são necessárias para controlar o mosquito transmissor da dengue, como a manipulação genética. Baseada na técnica do inseto estéril (SIT) que compreende a esterilização, a criação em massa e a liberação de grandes números de insetos machos estéreis em uma área alvo, a tecnologia RIDL, baseada em SIT, compreende criação em massa e liberação de mosquitos machos que carregam gene letal para sua prole, neste caso a linhagem OX513A de Aedes aegypti é testada nesse projeto, através da avaliação em testes laboratoriais e em testes de campo com marcação liberação e recaptura, comparando esta linhagem com linhagens selvagens. Foi mensurada a competitividade, longevidade e dispersão. Os testes foram realizados no bairro de Itaberaba (Juazeiro/BA) e na Universidade de São Paulo. Além da avaliação foi realizado o monitoramento com armadilhas ovitrampa, captura de mosquitos adultos com aspirações em residências. E o desenvolvimento de um plano de comunicação para a sociedade. Os resultados apontam que a compatibilidade entre as linhagens (transgênica e selvagem) foi positiva e a competitividade não apresentou tendência entre as fêmeas de escolherem uma linhagem ou outra. Estatisticamente não há diferença entre o número de ovos e larvas (logo a fertilidade) entre a linhagem selvagem e transgênica. O monitoramento da área de estudo confirmou a presença de A. aegypti, e não foi capturado nenhum indivíduo de Aedes albopictus. Para avaliar a dispersão, os mosquitos machos transgênicos foram liberados no ambiente e esses apresentaram uma sobrevivência no campo de 2,3 dias e um raio de vôo de 80 metros do ponto de liberação. O índice de esterilidade relativa foi determinado baseado na competitividade e proporção de ovos fluorescentes encontrados. Foi possível estabelecer uma produção em massa para realizar a fase de pré-supressão com a liberação de 540.000 machos ao longo de seis semanas e obtenção de 17% de larvas transgênicas oriundas do cruzamento desses machos com fêmeas do campo. Baseado nesses dados iniciou-se a fase de supressão com a liberação alvo de 400.000 por semana, aproximadamente 05 vezes mais esperando alcançar o estágio de supressão. / New alternatives are needed to control mosquitoes that transmit Dengue. Based on insect technique Sterile (SIT), which comprises sterilizing, mass rearing and release a large number of sterile males in an area target, RIDL technology based on SIT, but using transgenesis instead of radiation. Doing the same process for mass rearing and release of male mosquitoes carrying lethal gene to their offspring, in this case the strain OX513A of Aedes aegypti is under test in this project, through the evaluation of laboratory and field trials with mark-release-recapture (MRR), comparing transgenic with wild-type. We measured competitiveness, longevity and dispersal. The tests were performed in Itaberaba neighborhood (Juazeiro / BA) and at University of São Paulo. The evaluation was carried out with monitoring through ovitraps and adult mosquitoes collection with aspiration in houses. It was also developed a communication plan to society/community in general. The results indicate that the compatibility between the lines (transgenic and wild-type) was positive, and competitiveness showed no trend among females to choose one lineage or another. Statistically there were no difference between the number of eggs and larvae (resulting fertility) between the transgenic line and wild-type. The study area monitoring confirmed the presence of Ae. aegypti, and no Aedes albopictus was captured. To evaluate dispersion, transgenic males were released into the environment and they showed a field survival of 2.3 days and a flight range of 80 meters from the release point. The relative sterility index was determined based on the competitiveness and fluorescent proportion of eggs. Mass production was established to perform the pre-suppression phase releasing 540,000 males over six weeks and obtaining 17% of transgenic larvae in response of transgenic males mating field females. Based on these data suppression process have started with a release target of 400,000 per week, this is about 05 times more to reach the suppression stage briefly.

O mosquito Aedes aegypti é vetor de doenças como a febre amarela, dengue, chinkungunya e zika. O sistema digestório é responsável pela digestão e absorção de nutrientes, é também uma interface com o ambiente externo sendo a porta de entrada de organismos infecciosos. A presença de duas lipases digestivas foi confirmada por qPCR, uma na fase larval (L-Aa7051) e outra na fase adulta (L-Aa7055). Estas enzimas foram agrupadas na família das lipases neutras e apresentam alterações em resíduos envolvidos na especificidade, domínio tampa e alça β9. A L-Aa7055 recombinante foi expressa heterologamente em Escherichia coli na porção insolúvel, com atividade após a renaturação. Observamos que a expressão da lipase L-Aa7055 sofre uma redução de 30% na infecção Plasmodium gallinaceum, não sendo afetada pelo vírus dengue sorotipo 2 (DENV2). A digestão de lipídeos é importante na fase larval, com altos níveis de transcrito. Um estudo mais aprofundado ainda será necessário para compreender completamente o papel das lipases no processo infeccioso. / The Aedes aegypti borne diseases yellow fever, dengue fever, chinkungunya and zica are important public healthy problems. The digestion and absorption of nutrients are performed in the digestive system, which is also an external environment interface that allows the infection by pathogenic microorganisms. The presence of two digestive lipases were identified by qPCR, L-Aa7051 in the larval phase and L-Aa7055 in the adult female. The lipase sequences were grouped in the neutral family, and exhibit alterations in residues involved in specificity, lid domain and β9 loop. The recombinant L-Aa7055 was expressed in the insoluble fraction, and show activity after a renaturation process. We notice that the expression levels of L-Aa7055 are reduced by 30% in the Plasmodium gallinaceum infection and were not affected by serotype 2 dengue virus (DENV2). The lipid digestion is important in the larval phase, with higher transcript levels. New studies will be necessary to the complete understanding of lipase contribution in the infectious process.