Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-02-26Bitstream added on 2014-06-13T20:34:26Z : No. of bitstreams: 1 camili_ec_me_botfca.pdf: 1770083 bytes, checksum: f5ea3a6bbc481ab702d9339e5ee2ce93 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Perdas significativas ocorrem durante o armazenamento e a comercialização de uvas de mesa devido, principalmente, à ocorrência do mofo cinzento (Botrytis cinerea Pers.:Fr.) e, visando o controle de patógenos emprega-se, geralmente, o dióxido de enxofre (SO2). Diante da restrição crescente ao uso de produtos químicos em pós-colheita, tem ocorrido considerável interesse em métodos alternativos de controle. Este trabalho teve como principal objetivo avaliar os efeitos dos agentes bióticos (Lentinula edodes (Berk.) Pegler e Agaricus blazei (Murril) ss. Heinem) e abióticos (quitosana, ácido acético e irradiação UV-C), possíveis indutores de resistência, na proteção de uva Itália pós-colheita contra B. cinerea. In vivo, avaliou-se o efeito direto e indireto dos agentes de controle através do tratamento dos cachos de uva, antes e após a inoculação com o patógeno. Utilizaram-se extratos aquosos dos cogumelos A. blazei (linhagem ABL 29) e L. edodes (linhagem LED 17) nas concentrações de 0,0; 2,5; 5,0; 10,0; 20,0 ou 40,0 % (v/v); quitosana nas concentrações de 0,00; 0,25; 0,50; 1,00; 1,50 e 2,00 % (v/v); vapor de ácido acético a 0,0; 2,6; 5,2; 10,5 ou 21,0 mg.L-1 e; irradiação UV-C (254 nm) nas doses de 0,00; 0,84; 1,30; 2,40; 3,60; 4,80 e 7,50 kJ.m-2. Para inoculação, em cada cacho foram feridas 10 bagas, fazendo-se um furo por baga de 2 mm de profundidade, procedendo-se em seguida, a aspersão da suspensão de conídios ( 105 conídios.mL-1) de B. cinerea. Após os tratamentos, os cachos foram mantidos a 25 1 C / 80-90 % UR; quando avaliações de incidência e severidade foram realizadas diariamente, além de análises físicas e físico-químicas da uva. Avaliações in vitro do efeito dos agentes de controle sobre o patógeno também foram realizadas analisando-se o crescimento micelial e a germinação dos conídios de B. cinerea... / Significant losses of table grapes occur during storage and commercialization due mainly to the occurrence of gray mold (Botrytis cinerea Pers.:Fr.), and sulfur dioxide (SO2) is frequently used to control such pathogens. Due to increasing restrictions on the postharvest use of chemical products, considerable interest in alternative control measures has arisen. The main objective of this study was to evaluate the effects of biotic (Lentinula edodes (Berk.) Pegler and Agaricus blazei (Murril) ss. Heinem) and abiotic (chitosan, acetic acid and UV-C irradiation) agents as possible resistance inducers in 'Itália' grapes, aimed at post-harvest protection against B. cinerea. The direct and indirect effects of these control agents were evaluated in vivo by treating bunches of grapes before and after inoculation with the pathogen. Aqueous extracts of the mushrooms A. blazei (strain ABL 29) and L. edodes (strain LED 17) were used in the concentrations of 0.0; 2.5; 5.0; 10.0; 20.0 and 40.0 % (v/v); chitosan at 0.00; 0.25; 0.50; 1.00; 1.50 and 2.00 % (v/v); acetic acid vapor at 0.0; 2.6; 5.2; 10.5 and 21.0 mg.L-1 and UV-C (254 nm) irradiation at doses of 0.00; 0.84; 1.30; 2.40; 3.60; 4.80 and 7.50 kJ.m-2. For inoculation, 10 grapes in each bunch were injured by piercing the grape to a depth of 2 mm, followed by spraying with the inoculum of B. cinerea conidia ( 105 conidia.mL-1). After the treatments, the bunches were kept at 25 1 C / 80-90 % RH, carrying out daily evaluations of disease incidence and severity, as well as physical and physical-chemical analyses of the grapes. In vitro evaluations of the effect of the control agents were also carried out based upon mycelial growth and germination of B. cinerea conidia. The results showed that the extracts of A. blazei and L. edodes failed to control deterioration by B. cinerea in 'Itália' grapes when applied after inoculation. However, the A. blazei... (Complete abstract, click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-13Bitstream added on 2014-06-13T20:42:46Z : No. of bitstreams: 1 000747656.pdf: 7028047 bytes, checksum: 08cff2377e358d42746fc91b70fbe183 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Anemia falciforme (A.F.) é uma doença genética caracterizada pela mutação pontual que possui como base a troca de um ácido glutâmico por uma valina na cadeia beta da hemoglobina. Em estados de desoxigenação há interação das subnidades hidrofóbicas das cadeias beta levando à polimerização da hemoglobina que pode causar a deformação da estrutura do citoesqueleto do eritrócito. Em análises microscópicas frequentemente se observa glóbulos vermelhos com a forma de foice. Tem sido relatado que pacientes com A.F. apresentam aumento dos níveis circulantes de citocinas pró-inflamatórias como o fator de necrose tumoral alfa (TNF-a). A hidroxiuréia (HU) é o mais utilizado fármaco para tratamento, e seus efeitos benéficos estão relacionados em parte à capacidade desta se biotransformar in vivo em óxido nítrico (NO). Entre os efeitos benéficos do NO destacam-se: vasodilatação, inibição da agregação plaquetária, indução da expressão gênica de gama globina – constituinte da hemoglobina fetal. Nesse contexto, em continuidade com uma linha de pesquisa que visa o planejamento, síntese e avaliação farmacológica de novos protótipos candidatos a fármacos para tratamento dos sintomas da anemia falciforme foram sintetizados uma série de compostos híbridos (I-VIII) de acordo com o planejamento estrutural. A estratégia de doação de óxido nítrico associada à inibição de TNF-a representa uma nova abordagem terapêutica para o tratamento dos sintomas da anemia falciforme, e mostrou-se promissora de acordo com os dados previamente obtidos em nosso laboratório. Foram sintetizados e caracterizados oito compostos finais (I-VIII) obtidos através da estratégia de hibridação molecular entre a subunidade ftalimídica e o núcleo furoxânico. Na avaliação da atividade antinociceptiva periférica em modelo de contorção abdominal induzida por ácido acético 0,6% foram avaliados os compostos I, III, IV, V e VII.... / Sickle cell disease (SCD) is a genetic disease characterized by pontual mutation that has as basis for exchange of glutamic acid valine in a beta chain of hemoglobin. In deoxigenation state there are hydrophobic interaction among the beta chains leading to polymerization of hemoglobin that may carry out to deformation of cytoskeleton structure of red blood cells. Often in microscopic analysis has seen red blood cell in the shape of sickle. It has been reported that patients with SCD has increased levels of circulating pro-inflammatory cytokines such as tumor necrosis factor TNF-a. The hydroxyurea (HU) is the most widely used drug for treatment and its benefical effects are related in part to the ability of this (HU) suffered biotransformation in vivo in nitric oxide (.NO). Among the beneficial effects of NO are: vasodilatation, inhibition of platelet aggregation, induction of gamma globin gene expression - constituent of fetal hemoglobin. In this context, in continuity with our research line aimed at planning, synthesis and evaluation of new drug candidates to treat the symptoms of sickle cell disease were synthesized, for optimization, a series of hybrid compounds (IVIII) according to the structural planning. The strategy of nitric oxide donation and TNF-a inhibition represent a new therapeutical approach to treat the symptoms of sickle cell disease, and was promising according to the data previously obtained in our laboratory. Eight compounds (I-VIII) was designed through the strategy of molecular hybridization between the phthalimide subunit and furoxanic ring. It was synthesized and characterized. The peripheric antinociceptive activity was evaluated using acetic acid-induced abdominal writhing model for the compounds I, III, IV, V and VII. Of these, the compounds III and IV showed analgesic activity profile similar to metamizol (dipyrone) used as standard, with inhibiting around 45% to abdominal writhing. These results characterized ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-25Bitstream added on 2014-06-13T20:04:49Z : No. of bitstreams: 1 barcelos_dlz_dr_arafo.pdf: 1410281 bytes, checksum: 88fc07656faada5c1cb225effea91bad (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo do presente estudo foi avaliar clinicamente e histologicamente o efeito do condicionamento químico da superfície radicular com ácido cítrico (AC), tetraciclina hidroclorada (TTC HCl), e ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) na reparação periodontal de defeitos ósseos tipo deiscência em cães. Defeitos tipo deiscência com 5 × 3 mm foram criados cirurgicamente na face vestibular das raízes mesiais dos primeiros molares, segundos e terceiros pré-molares superiores de sete cães. Assim, em cada animal foram criados seis defeitos que foram posteriormente submetidos ao acúmulo de placa por 45 dias. Após este período, foi realizado o exame clínico (baseline) dos dentes envolvidos no experimento e, em seguida, um retalho de espessura total foi rebatido. As superfícies radiculares foram raspadas e os defeitos receberam um dos seguintes tratamentos: I) irrigação com solução salina estéril (controle); II) ácido cítrico (25%, 3 min); III) EDTA (24%, 3 min); IV) tetraciclina hidroclorada (50 mg/ml, 3 min); V) ácido cítrico (3 min) + tetraciclina hidroclorada (3 min); VI) tetraciclina hidroclorada (3 min) + ácido cítrico (3 min). Após três meses de cicatrização, foi realizado o exame clínico final e os animas foram sacrificados para obtenção dos blocos contendo dente e tecidos periodontais adjacentes para análise histológica. Clinicamente, foi verificado que houve uma redução significativa da profundidade de sondagem e um significativo ganho de inserção clínica em todos os grupos após o tratamento dos defeitos (p < 0.05), porém sem diferença estatisticamente significante entre os grupos experimentais (p > 0.05). Em relação aos parâmetros histológicos avaliados, também não foi constatado uma diferença significativa entre os grupos (p > 0.05). A migração epitelial assim como a formação de novo cemento e osso alveolar foram semelhantes em... / The purpose of this study was to clinically and histologically evaluate the effect of root surface conditioning with citric acid (CA), tetracycline hydrochloride (TTC HCl), and ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) on the periodontal repair of dehiscence-type defects in dogs. Dehiscence defects measuring 5 × 3 mm were surgically created on the buccal aspect of mesial roots of the maxillary first molars and second and third pre-molars of seven mongrel dogs. For each animal, a total of six defects were created and exposed to plaque accumulation for 45 days. After this period, clinical evaluation (baseline) of all teeth was performed and a full thickness buccal flap raised. The root surfaces were scaled and the defects were randomly assigned to one of the following treatments: I) irrigation with sterile saline solution; II) citric acid (25%, 3 min); III) EDTA (24%, 3 min); IV) tetracycline hydrochloride (50 mg/ml, 3 min); V) citric acid (3 min) and tetracycline hydrochloride (3 min); VI) tetracycline hydrochloride (3 min) and citric acid (3 min). After 3 months of healing, the clinical parameters (final) were evaluated and the animals were sacrificed to obtain block sections of the teeth and surrounding tissues for histological analyses. Clinically, all treatments yielded significant improvements in terms of probing depth decrease and attachment clinical level gain compared to baseline values (p < 0.05), however without significant differences among the experimental groups (p > 0.05). Epithelial apical migration as well as newly formed cementum and alveolar bone were similar in all treatment groups. No statistically significant differences were found among the groups in relation to the histological parameters evaluated (p > 0.05). Within the limits of this study, it can be concluded that chemical root surface conditioning combined with flap surgery and root scaling did not have any... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-04Bitstream added on 2015-04-09T12:47:40Z : No. of bitstreams: 1 000819891_20170203.pdf: 114246 bytes, checksum: 1096a63bbbc0e40bd32fc72ec64b94dd (MD5) Bitstreams deleted on 2017-02-03T10:35:33Z: 000819891_20170203.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-02-03T10:36:26Z : No. of bitstreams: 1 000819891.pdf: 673610 bytes, checksum: 544514b4993b42558a386af189b49cbf (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Programa de Apoio ao Desenvolvimento Científico da Faculdade de Ciências Farmacêuticas (PADC-FCF/UNESP) / Este trabalho teve como objetivo reunir informações sobre os limonoides, em especial a limonina, visando compreender as causas da sua formação no suco de laranja, desenvolver e validar método analítico para determinação de limonina no suco de laranja, avaliar a influência do porta-enxerto, da configuração de extração e do período de maturação no teor de limonina, nas características físico-químicas, na aceitação sensorial, na intensidade dos gostos doce, ácido e amargo, na escala do ideal do gosto amargo e na intenção de compra do suco de laranja Pêra-Rio, além de determinar o threshold da limonina no suco de laranja da variedade Pêra-Rio. Para a validação do método analítico foram avaliados os parâmetros curva de calibração, linearidade, precisão, exatidão, limite de detecção e limite de quantificação. Em relação às características físico-químicas do suco de laranja, foram avaliados o teor de sólidos solúveis totais, a acidez titulável total, o conteúdo de ácido ascórbico e de açúcares totais, o pH e o ratio. Na aceitação sensorial do suco de laranja foram avaliados os atributos aparência, aroma, impressão global, sabor, textura e sabor residual no início e no fim da safra. Foram também avaliadas a intensidade dos gostos doce, ácido e amargo, e a escala do ideal para o gosto amargo do suco de laranja, além da intenção de compra no início e no fim da safra. Os limonoides são derivados triterpênicos presentes em Citrus. São encontrados em diferentes partes da planta na forma de agliconas e/ou glicosídeos. Os limonoides contribuem para o desenvolvimento do gosto amargo no suco de frutas cítricas, com impacto negativo sobre a qualidade do suco. A limonina, principal limonoide responsável pelo gosto amargo do suco de laranja, não está presente na fruta in natura, sendo formada a partir da extração do suco. A quantidade de limonina formada no suco é influenciada pelo tipo de ... / The aim of this work was to gather information about limonoids, specially limonin, to understand the causes of their formation in orange juice, to develop and to validate an analytical method to determinate limonin in orange juice, to evaluate the influence of rootstock, extractor setting and maturity on the limonin level, the physico-chemical characteristics, the sensory acceptance, the intensity of sweet, sour and bitter tastes, the scale of the ideal for bitter taste and purchase intent of Pêra-Rio orange juice, and also to determine the threshold of limonin in orange juice from Pêra-Rio variety. Validation of the analytical method involved calibration curve, linearity, precision, accuracy, limit of detection and limit of quantification. Regarding to the physico-chemical characteristics of orange juice, soluble solids, titratable acidity, ascorbic acid and total sugars, pH and ratio were evaluated. Sensory acceptance of orange juice evaluated appearance, aroma, overall impression, flavor, texture and aftertaste at the beginning and ending of harvest. The intensity of sweet, sour and bitter tastes, the scale of the ideal for bitter taste of orange juice, and the purchase intent at the beginning and ending of harvest were also evaluated. Limonoids are highly oxygenated triterpenoids present in Citrus, in different parts of the plant as aglycones and/or glucosides. Limonoids contribute to the development of bitterness in citrus juice, with a negative impact on the quality of the juice. Limonin, the main limonoid responsible for bitterness in orange juice, is not present in the in natura fruit, but is formed from the extraction of the juice. The amount of limonin in the juice is influenced by the type of rootstock and variety of orange, mainly due to the maturation period. The developed and validated method was used to determine limonin in orange juice with precision and accuracy. Wide linear range was obtained (0.410-61.5 μg.mL-1), ...

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-05-27Bitstream added on 2015-04-09T12:47:37Z : No. of bitstreams: 1 000813856.pdf: 877403 bytes, checksum: 4d057065026683ed53dc4ee470bf988f (MD5) / Objetivou-se determinar variáveis fisiológicas, eletrolíticas e hemogasométricas de equinos da raça Quarto de Milha (QM), com desempenhos distintos, submetidos a uma corrida simulada de três tambores (TT). Ademais, compararam-se as alterações no equilíbrio ácido-base destes equinos QM com outros atletas da espécie equina, da raça Puro Sangue Árabe (PSA), competidores de enduro equestre de 160 km de distância. Adicionalmente, realizamos a comparação de dois métodos de cálculo da variável Atot. No experimento 1, 10 equinos da raça QM foram distribuídos em dois grupos, sendo um de desempenho superior (DS, n=5) e outro de desempenho inferior (DI, n=5). Submeteram-se estes equinos a uma corrida de TT e verificou-se as possíveis alterações no equilíbrio ácido-base pela abordagem tradicional e mecanicista, sendo os momentos de coleta antes e após o esforço. No experimento 2, 16 equinos da raça PSA participaram de uma prova seletiva de enduro equestre de 160 km e foram avaliados antes, durante e após a competição. Amostras de sangue venoso foram coletadas em ambos os experimentos. Determinou-se frequência cardíaca somente dos equinos QM. Quantificou-se variáveis fisiológicas, eletrolíticas e hemogasométricas de todos os equinos que participaram do presente estudo. Realizou-se para o experimento 1, teste t pareado e não pareado para diferenças entre os momentos e entre os grupos, respectivamente. Para o experimento 2, foi realizada análise de variância (ANAVA) para comparação das variáveis seguido do teste de Tukey para as diferenças estatísticas encontradas. Todas as análises foram realizadas com 95% de significância (p<0,05). As FCpico e FCm foram de 206 ± 8,7 e 203 ± 12,9, e de 181 ± 7,5 e 177 ± 3,5 bpm, para os grupos DS e DI, respectivamente. O principal distúrbio encontrado pelas duas metodologias para a modalidade TT foi a acidose metabólica. Para esta modalidade obtivemos concordância total... / The aim of the present study was to determine physiological, electrolytic and hemogasometric parameters of Quarter horses, with distinct fitness levels, submitted to a simulated barrel racing (BR). Moreover, the alterations in the acid-base balance were compared between Quarter and Arabian horses, competitors of equine endurance of 160 km. Besides, it was performed a comparison of two methods to determine the variable Atot. In the experiment 1, 10 Quarter horses were distributed in two groups, one composed by high fitness animals (HF, n=5) and other with lower fitness (LF, n=5). These horses were submitted to a BR and it was verified the possible alterations in the acid-base balance using the traditional and mechanistic approaches, being the collecting moments before and after the exercise. In the experiment 2, 16 Arabian horses participated in an endurance ride of 160 km and they were evaluated before, during and after the competition. Samples of venous blood were collected in both experiments. The heart frequency was determined only for the Quarter horses. Physiological, electrolytic and hemogasometric parameters were quantified for all equines of the present study. Were performed for the experiment 1, the t-paired and not-paired t-test between moments and groups, respectively. For the experiment 2, it was performed the analysis of variance (ANOVA) to compare the variables followed by Tukey’s test. All analysis were performed with 95% of significance. The FCpeak e FCm were 206 ± 8,7 and 203 ± 12,9 bpm for the HF group, and 181 ± 7,5 e 177 ± 3,5 bpm for the LF group. The main disturbance found by the two approaches for the BR was the metabolic acidosis. For this discipline, total matching between the approaches was obtained. For endurance, 10 animals sucessfully completed the competition and 6 were eliminated. The main disturbance found in the sucessfull animals for both approaches was the metabolic alkalosis. In the ...

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-13Bitstream added on 2015-05-14T16:59:00Z : No. of bitstreams: 1 000829164.pdf: 1229097 bytes, checksum: c02b3e98095839e2ebc9ba29eeeeba97 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O silenciamento por RNA é um mecanismo conservado de resposta a moléculas de RNA dupla fita (dsRNA) presente em todos eucariontes, que desempenha papéis fundamentais na regulação da expressão gênica, na resistência a vírus e no controle da transposição de elementos móveis. Sabe-se que proteínas de diferentes origens, viral ou endógena, são capazes de suprimir o silenciamento por RNA, mas o mecanismo de ação da maioria delas não é totalmente compreendido. Um desses supostos supressores endógenos é uma proteína do tipo calmodulina denominada rgs-CaM (regulator of gene silencing CaM) que foi identificada em plantas de tabaco. Calmodulinas são proteínas que desempenham papéis importantes na sinalização mediada por cálcio em células eucarióticas e regulam a atividade de inúmeras proteínas com diversas funções celulares. Recentemente, porém, foi demonstrado que a rgs-CaM está envolvida na resposta de contra-defesa da planta aos supressores virais. Deste modo, os dados disponíveis na literatura sobre a função da rgs-CaM permanecem contraditórios. Pensando nisso, o presente trabalho teve como objetivo caracterizar funcionalmente a proteína rgs-CaM de tabaco. Para tal, diferentes abordagens foram utilizadas: estudo de interação com a proteína viral HC-Pro, localização subcelular desta interação, identificação de proteínas endógenas que interagem com a rgs-CaM, e análise funcional de plantas de tabaco transgênicas com superexpressão ou silenciadas para o gene que codifica a rgs-CaM. Análises estruturais da rgs-CaM expressa em Escherichia coli e analises in silico revelam uma proteína rica em hélices alfa, dotada de dois domínios globulares ligados por uma longa hélice α, e apresentando apenas 3 sítios de ligação para o íon cálcio. A presença desse íon ocasiona mudança na estrutura secundária da proteína. Deste modo, o fluxo e a ligação de Ca2+ pela rgs-CaM parece ser um ponto chave ... / RNA silencing is a conserved mechanism activated by double-stranded RNA molecules (dsRNA) that is present in eukaryotes. It plays basic roles in the regulation of gene expression and in host resistance to viruses and transposons. It is known that proteins of different origins, viral or endogenous, are able to suppress RNA silencing, but the mechanism of action of most of them are not fully understood. One of these endogenous suppressor is a protein called rgs-CaM (regulator of gene silencing CaM), which is a calmodulin-like protein (CaM) identified in tobacco plants. Calmodulins are proteins that play important roles in calcium signaling in eukaryotic cells and able to regulate the activity of numerous proteins with diverse cellular functions. Recently, however, rgs-CaM was shown to be a protein involved in the plant response to counterattack viral suppressors. Thus the data available in the literature about rgs-CaM function still contradictory. Taking these into consideration, the objective of this work was to functionally characterize the tobacco rgs-CaM. For such, different approaches were used: study of its interaction with the viral HC-Pro protein, the subcellular localization of this interaction, identification of endogenous proteins that interact with rgs-CaM and functional analysis of transgenic tobacco plants overexpressing or silenced for rgs-CaM. Structural analysis of the rgs-CaM expressed in Escherichia and in silico analysis revealed a protein rich in alpha helix, possessing two globular domains connected by a long alpha helix, and three binding sites for calcium. The presence of calcium led to a change in rgs-CaM secondary structure, suggesting that the flux and binding of Ca2+ by rgs-CaM may be a key point for its funtion during virus-plant interaction. The results of in vivo interaction employing BiFC showed no interaction between rgs-CaM and HC-Pro in the tested conditions, suggesting a possible ...

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-29Bitstream added on 2015-05-14T16:58:45Z : No. of bitstreams: 1 000828932.pdf: 760604 bytes, checksum: c30674cef7dfc0506331193c0c9efe70 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Devido às diversas formas de apresentação clínica e aos sinais clínicos comuns com outras afecções, o diagnóstico laboratorial do CDV (Canine distemper virus) se torna necessário. A RT-PCR seguida da NESTED com amostras de urina é atualmente a técnica mais recomendada para o diagnóstico do CDV. No Capítulo 2, foi desenvolvida a técnica de One-Step-RT-qPCR utilizando o sistema de detecção Syber Green I. Foram testados e comparados três kits comerciais (Sigma®, Promega® e Qiagen®). Foi determinada a sensibilidade analítica de dois sistemas de detecção (Sistema A e Sistema B) utilizando uma curva padrão de RNA sintético. Os três kits comerciais testados detectaram o vírus em 100% das urinas provenientes de animais sintomáticos e o kit da Qiagen® mostrou melhores resultados de reação. O Sistema A detectou aproximadamente 10 cópias de RNA por microlitro e no Sistema B detectou 100 cópias de RNA por microlitro na RT-qPCR e 10 cópias por microlitro quando seguida da NESTED-qPCR. No Capítulo 3 foram desenvolvidos três imunoconjugados de microesferas de poliestireno (MP) utilizando anticorpos policlonais hiperimunes anti-CDV (IgY, IgG e Proteína A+IgG) para o preparo de RNA e aplicação na RT-qPCR. A aplicação dos conjugados foi comparada ao método convencional de extração de RNA por kit comercial. Os conjugados foram padronizados e a sensibilidade analítica foi determinada através de curva padrão de RNA sintético. A sensibilidade diagnóstica foi determinada utilizando-se conjugado com IgY, MP sem anticorpos conjugados e urina adsorvida diretamente nos tubos de qPCR / The diagnosis of canine distemper is usually based on clinical suspicion of the disease. However, due to the different clinical forms of the disease and other disorders common to clinical signs, the laboratory diagnosis is necessary. The RT-PCR followed by NESTED is currently the method used to diagnosis of CDV (Canine Distemper Virus). The Chapter 2 aimed to standardized the technique of One-Step RT-qPCR-using Syber Green I system. Three commercial kits (Sigma®, Promega® and Qiagen®) were tested and compared. Analytical sensitivity of two detection systems (System A and System B) was determined using a standard curve. The three commercial kits tested detected the virus in 100% of samples from symptomatic dogs and the kit of Qiagen® showed better results. The System A detected approximately 10 RNA copies/μL and System B detected approximately 100 RNA copies/ μL in RT-qPCR and 10 RNA copies/ μL when followed by NESTED-qPCR. In Chapter 3 three immunoconjugates were developed with polystyrene microspheres (PM) using polyclonal hyperimmune anti-CDV antibody (IgY, IgG and protein A+IgG) to prepare RNA to canine distemper molecular diagnosis and comparison with the conventional method of RNA extraction by commercial kit. Conjugates were standardized and the analytical sensitivity was determined by standard curve. The diagnostic sensitivity was determined using IgY-conjugated, PM without conjugated antibodies and urine adsorption directly qPCR in tubes / FAPESP: 2011/50889-9

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:49:13Z : No. of bitstreams: 1 000829952.pdf: 2186504 bytes, checksum: 0fe5b3ab3f81a06b3bdec5cf05d69c8a (MD5) / O Eucalyptus é um dos gêneros mais importantes no setor florestal mundial. Por esse motivo, programas de melhoramento genético florestal são desenvolvidos no intuito de aumentar a produtividade, introduzir características desejáveis e reduzir impactos ambientais. No entanto, características deletérias podem ser incorporadas em determinados cruzamentos nos ciclos de melhoramento, seja por endogamia biparental ou segregação de loci heterozigóticos. As anomalias são um exemplo deste efeito e podem acarretar perdas na produção de mudas, na produtividade e atrasos no desenvolvimento de genótipos elite. Portanto, a identificação e caracterização de genes relacionados às anomalias são muito importantes nos programas de melhoramento. Ao realizar um cruzamento controlado entre dois indivíduos de Eucalyptus grandis, a empresa Suzano Papel e Celulose detectou uma anomalia com segregação mendeliana de 3 (normais) :1 (anormais) na progênie. As plântulas anômalas morrem em poucos meses e diferem significativamente em algumas características morfológicas, como altura, diâmetro da base do caule, dimensões e forma do limbo foliar e número de ramificações laterais. Estudos prévios permitiram identificar uma marca molecular ligada à anomalia que apresentou identidade com genes da superfamília Bet v1, família PR10 (pathogenesis-related protein 10). No entanto, não era claro o envolvimento desta família gênica no desenvolvimento da anomalia. Neste cenário, o presente trabalho teve como objetivo a identificação e caracterização dos genes envolvidos na anomalia detectada. Genes e vias metabólicas, diferencialmente expressos entre os fenótipos contrastantes, demonstraram elevada atividade em processos relacionados à resposta de defesa nas plantas anormais. Tais resultados sugerem que a anomalia é causada pela ativação inadequada do sistema imune da planta (resposta autoimune) associado à incompatibilidade ... / Eucalyptus is one of the most important genus in worldwide forestry culture. For this reason forest improvement programs are developed aiming the increase of productivity, the introduction of desirable traits and the reduction of environmental impacts. However deleterious traits can be incorporated in certain crossings through the recurrent improvement cycles either by biparental inbreeding or by segregation of the heterozygous loci. Anomalies are an example of this deleterious effect and they can cause losses in seedling production, productivity and delays in the elite genotypes development. Thus, the identification and characterization of genes related to the anomalies are very important in forest improvement programs. In a controlled cross between two Eucalyptus grandis individuals, the Suzano Papel and Celulose SA company has detected an anomaly with Mendelian segregation ratio of 3 (normal) :1 (abnormal) in the progeny. Abnormal seedlings die in a few months and show significant difference in some morphological characteristics, such as height, stem-base diameter, dimensions and shape of leaf lamina, and number of branches. Previous studies allowed the identification of a molecular marker related to the anomaly that showed identity with Bet v1 superfamily genes, PR10 family (pathogenesis-related protein 10). However, it was not clear the involvement of this gene family in the anomaly. In this scenario, the present study aimed to identify and characterize the genes involved in the detected anomaly. Genes and metabolic pathways, differentially expressed between the contrasting phenotypes, showed high activity of process related to defense response in abnormal plants. These results suggest that the anomaly is caused by the inappropriate activation of the immune system of the plant (autoimmune response) associated with genetic incompatibility. The gene families of thaumatin-like proteins, Bet v1 proteins, and chitinase class I proteins ...

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:09:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:26:08Z : No. of bitstreams: 1 000841573_20160227.pdf: 52441 bytes, checksum: 0714a4aabbfd4b8f2757a9be67d70414 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-02-29T12:16:21Z: 000841573_20160227.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-02-29T12:17:22Z : No. of bitstreams: 1 000841573.pdf: 695270 bytes, checksum: c6651c2f2a1c320f918fa825c4fb2418 (MD5) / O acesso às informações sobre a hanseníase, seu diagnóstico e tratamento com a Poliquimioterapia (PQT) se constituem como elementos chave da estratégia para seu controle. Resultado da infecção pelo Mycobacterium leprae (M. leprae), a hanseníase é uma doença crônica que acomete pele e nervos e a impossibilidade de cultivo do M. leprae em meio de cultura axênico, tem dificultado os estudos in vitro e o desenvolvimento de ensaios clínicos mostram-se complicados pela lenta progressão do bacilo. Assim, um método sensível e específico para a detecção da viabilidade do M. leprae adicionaria um critério imparcial aos meios já disponíveis, possibilitando ainda o diagnóstico em estágio mais precoce da doença. O presente estudo teve por finalidade a avaliação da viabilidade bacilar por meio da detecção de RNAr 16S específico para o M. leprae com a normalização das quantidades totais de micobactérias a partir da quantificação do DNA total de M. leprae. Foi utilizada como padrão a inoculação em coxim plantar de camundongos (Técnica de Shepard). Foram avaliados pacientes antes do tratamento, suspeitos de recidivas e pacientes em fim de tratamento. A inoculação foi altamente positiva nos pacientes não tratados quando comparados com os dos grupos recidiva e fim de tratamento. Os resultados sugerem que existe uma boa correlação entre os dados obtidos com a inoculação e o ensaio molecular, uma vez que também foi possível detectar níveis de RLEP e 16S rRNA nestas amostras. Esta metodologia poderá, futuramente, ajudar no monitoramento da eficácia do tratamento e na busca de novas possibilidades para o estudo da interação parasito-hospedeiro / Access to information about the disease, its diagnosis and treatment with multidrug therapy (MDT) are constituted as key elements of the strategy for its control. Result of infection by Mycobacterium leprae (M. leprae), leprosy is a chronic disease that affects the skin and nerves and the impossibility of cultivating M. leprae in axenic culture medium, has hampered in vitro studies and the development of clinical trials show is complicated by the slow progression of the bacillus. Thus, a sensitive and specific method for detection of viable M. leprae add a fair criterion to the means already available, allowing diagnosis even in early stage disease. This study aimed at evaluating the bacterial viability by specific 16S rRNA detection for M. leprae with the normalization of the total quantities of mycobacteria from the quantification of total DNA of M. leprae. It was used as a standard inoculation into the footpads of mice (Shepard Technique). Patients were evaluated prior to treatment and relapses in patients suspected to treatment. The inoculation was highly positive in untreated patients compared to the relapse groups and end of treatment. The results suggest that there is a good correlation between the data obtained from inoculation and molecular assay, since it was also possible to detect levels of 16S rRNA and RLEP these samples. This methodology may in the future help monitor the effectiveness of treatment and the search for new possibilities for the study of host-parasite interaction

As acidúrias 3-hidroxi-3-metilgutárica (HMGA) e 3-metilglutacônica (MGTA) são doenças que afetam o catabolismo da leucina e a cetogênese. Os pacientes afetados pela HMGA apresentam acúmulo e elevada excreção urinária dos ácidos 3-hidroxi-3-metilglutárico (HMG), 3-metilglutárico (MGA), 3- metilglutacônico (MGT) e 3-hidroxiisovalérico (OHIVA), ao passo que a MGTA é bioquimicamente caracterizada pelo acúmulo e aumento na excreção urinária de MGT, MGA e OHIVA. Os indivíduos afetados por MGTA apresentam predominantemente sintomas neurológicos. Já os pacientes acometidos pela HMGA também apresentam hepatomegalia, principalmente em situações de descompensação metabólica, quando ocorrem elevações drásticas nas concentrações dos metabólitos acumulados. Considerando que os mecanismos patogênicos responsáveis pelo dano neurológico encontrado nos pacientes portadores da HMGA e da MGTA são pouco conhecidos, inicialmente investigamos os efeitos in vitro dos ácidos HMG, MGA, MGT e OHIVA sobre importantes parâmetros de estresse oxidativo em córtex cerebral de ratos jovens. Verificamos que os metabólitos testados induziram peroxidação lipídica (aumento de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBA-RS) e da quimioluminescência) e dano oxidativo protéico (formação de carbonilas e oxidação de grupamentos sulfidrila). Além disso, a indução de peroxidação lipídica causada pelo HMG e pelo MGT foi prevenida pela adição de antioxidantes. Também foi demonstrado que o HMG, MGA, MGT e OHIVA diminuíram as defesas antioxidantes não-enzimáticas (diminuição das concentrações de glutationa reduzida (GSH), do potencial antioxidante total e da reatividade antioxidante total) e que a diminuição das concentrações de GSH causada pelo HMG e pelo MGA foi prevenida por antioxidantes. Por outro lado, nenhum dos ácidos orgânicos foi capaz de oxidar grupamentos sulfidrila de uma solução comercial de glutationa e de membranas mitocondriais isoladas de córtex cerebral. Na segunda parte do trabalho, comparamos a vulnerabilidade do estriado cerebral e do fígado ao dano oxidativo causado pelo HMG, MGA, MGT e OHIVA. Verificamos que todos os ácidos orgânicos aumentaram a medida de TBA-RS no estriado, sendo que apenas o HMG, além de apresentar o efeito mais pronunciado, induziu peroxidação lipídica no fígado. Esses metabólitos também diminuíram as concentrações de GSH em estriado. Novamente apenas o HMG reduziu as defesas antioxidantes não-enzimáticas no fígado. Finalmente, nossos resultados demonstraram que o HMG, MGA e o MGT induziram a oxidação de grupamentos sulfidrila em estriado, ao passo que nenhum dos metabólitos alterou esse parâmetro em fígado. Os efeitos detectados no presente estudo demonstram que os ácidos orgânicos acumulados na HMGA e na MGTA induzem estresse oxidativo em córtex cerebral, estriado e fígado de ratos jovens. Também evidencia que os tecidos cerebrais apresentam maior vulnerabilidade que o fígado ao dano oxidativo provocado por esses metabólitos, o que está de acordo com a sintomatologia apresentada pelos pacientes que é predominantemente neurológica. Portanto, presumimos que o estresse oxidativo pode contribuir, ao menos em parte, para a fisiopatologia dos danos teciduais encontrados nos pacientes acometidos pela HMGA e MGTA. / 3-Hydroxy-3-methylglutaric (HMGA) and 3-methylglutaconic (MGTA) acidurias are disorders that affect leucine catabolism and ketogenesis. HMGAaffected patients present tissue accumulation and high urinary excretion of 3- hydroxy-3-methylglutaric (HMG), 3-methylglutaric (MGA), 3-methylglutaconic (MGT) and 3-hydroxyisovaleric (OHIVA) acids, whereas MGTA is biochemically characterized by accumulation of MGT, MGA and OHIVA. MGTA- and HMGAaffected patients predominantly present neurologic symptoms. HMGA patients also present hepatomegaly, especially during metabolic crisis, which is characterized by a dramatic increase of the concentrations of the accumulating organic acids. Considering that the mechanisms of brain damage in HMGA and MGTA are poorly known, we first investigated the in vitro effects of HMG, MGA, MGT and OHIVA on important parameters of oxidative stress in cerebral cortex from young rats. We verified that the organic acids induced lipid peroxidation (thiobarbituric-acid reactive species, TBA-RS, and chemiluminescence increase) and protein oxidative damage (carbonyl formation and sulfhydryl oxidation) in cortical supernatants. The lipid peroxidation induced by HMG and MGT was prevented by the addition of free radical scavengers, suggesting that free radicals are involved in these effects. It was also demonstrated that HMG, MGA, MGT and OHIVA reduced non-enzymatic antioxidant defenses (reduced glutathione, GSH, concentrations, total radical-trapping antioxidant potential and total antioxidant reactivity) and that GSH decrease caused by HMG and MGA was prevented by free radical scavengers. On the other hand, the metabolites did not oxidize sulfhydryl groups from a commercial solution of GSH and from purified membrane protein-bound thiol groups, indicating that the decrease of GSH levels caused by the organic acids was not due to a direct oxidative effect. Next, we evaluated the vulnerability of a central (striatum) and a peripheral (liver) tissue to the oxidative damage caused by HMG, MGA, MGT and OHIVA. It can be observed that HMG, MGA, MGT and OHIVA induced lipid peroxidation (TBA-RS increase) in striatum. Among the various acids, only HMG increased TBA-RS in the liver. Furthermore, HMG induced the highest degree of lipid peroxidation in the striatum. It was also verified that the organic acids diminished GSH concentrations. Again, HMG presented the strongest effect compared to the other metabolites, reducing GSH levels in the striatum and in the liver. Finally, we observed that HMG, MGT and MGA reduced the sulfhydryl content (protein oxidation) in the striatum, whereas the metabolites did not alter this parameter in the liver. The present data indicate the HMG, MGA, MGT and OHIVA induce oxidative stress in cerebral cortex, striatum and liver from young rats. It can be also observed that the brain is more vulnerable than liver to lipid and protein oxidative damage induced by these organic acids, which is in agreement with the fact that the patients present predominantly neurologic symptoms. Therefore, it may be presumed that oxidative stress elicited in vitro by HMG, MGA, MGT and OHIVA contributes, at least in part, to the pathophysiology of the brain and hepatic damage found in HMGA and MGTA.