Une désescalade thérapeutique des traitements du cancer du sein est observée notamment grâce à la chimiothérapie néo-adjuvante (CNA). Alors que la technique du ganglion sentinelle (GS) n'est actuellement pas recommandée après CNA, nous avons démontré sa faisabilité dans une série prospective de 129 patientes traitées par CNA avec un taux d'identification de 93,8%, un taux de FN de 14,3% et de 0% pour les patientes N0 avant CNA. En cas d'atteinte duGS, le risque de GNS métastatique était corrélé à la taille tumorale (p=0.016) et la taille de la métastase du GS (p=0.0055). Le nomogramme du MD Anderson (AUC=0.716) et le score de Thenon (AUC=0.778) pouvaient évaluer la probabilité d'atteinte du GNS. L'analyse per opératoire du GS par apposition a permis l'identification d'une métastase chez 72% des patientes (sensibilité=38.2% ; spécificité=97.8%). Les patientes qui présentaient une micro métastase ou la présence de cellules tumorales isolées dans le GS avaient un risque multiplié par 2,3 de FN de l'apposition par rapport aux patientes qui avaient une atteinte macro métastatique. En conclusion, notre travail a permis de montrer que la CNA n'avait pas d'influence négative sur la faisabilité de la technique du GS, en particulier pour les patientes N0 clinique avant traitement. Après CNA, l'analyse per opératoire du GS est possible ainsi que l'utilisation de certains nomogrammes déjà existants pour calculer la probabilité d'atteinte du GNS lorsque le GS est métastatique.

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Background: Advancement in diagnosis and treatment of various cancer entities led to an increasing incidence of brain metastases in the last decades. Surgical excision of single and multiple brain metastases is one of the central treatment options beside radiotherapy, radiosurgery and chemotherapy. To evaluate the benefit of surgery with/without whole-brain radiation therapy (WBRT) in single brain metastases and the influence of image guidance for brain metastases resection, 104 patients were retrospectively evaluated for post-operative outcome. Patients and Methods: Between January 1994 and December 1999 150 patients were surgically treated for brain metastases at the Department of Neurosurgery at the Technical University of Dresden. Outcome could be evaluated in 104 patients with respect to special treatment strategies and survival time (69 patients with single and 35 patients with multiple lesions). Results: Most metastases originated from primary lung and breast tumours. Karnofsky performance score improved on average by 10 after surgery. The extent of the extracerebral tumour burden was the main influence on survival time. Patients’ age below 70 years was combined with prolonged survival time (median survival time, MST: 4.5 months vs. 7 months). Patients with solitary cerebral metastasis had a MST of 16 months, whereas patients with singular lesions had a MST of 7 and 4 months, depending on the extent of the extracerebral tumour growth. Additional post-operative WBRT with 30 Gy was combined with an increase in MST in patients with single brain metastasis (surgery + WBRT: MST 13 months; surgery only: MST 8 months). In addition, the rate of recurrent cerebral tumour growth was distinctly higher in the non-WBRT group. Neuronavigation did not significantly improve post-operative survival time. In 80% of patients extracerebral tumour growth limited patients’ survival. Conclusion: Surgery is an initial treatment option in patients with single and multiple brain metastases especially with large tumours (> 3 cm). Post-operative WBRT seems to prolong survival time in patients with single brain metastasis by decreasing local and distant tumour recurrence. Neuronavigational devices permit a targeted approach. Multiple processes can be extirpated in one session without prolonging the hospitalisation time for the patient. However, neuronavigational devices cannot assure complete tumour resection. / Hintergrund: Fortschritte in der Diagnostik und Therapie von Krebserkrankungen haben in den letzten Jahrzehnten zu einer steigenden Inzidenz von Hirnmetastasen geführt. Die chirurgische Entfernung singulärer und multipler Hirnmetastasen stellt neben Strahlentherapie, Radiochirurgie und Chemotherapie eine zentrale Therapieoption dar. Um die Wertigkeit der chirurgischen Behandlung von singulären Hirnmetastasen mit/ohne Ganzhirnbestrahlung (WBRT) und den Einfluss der Neuronavigation zu untersuchen, wurden 104 Patienten retrospektiv bezüglich ihres postoperativen «Outcomes» untersucht. Patienten und Methoden: Zwischen Januar 1994 und Dezember 1999 wurden 150 Patienten mit Hirnmetastasen in der Klinik für Neurochirurgie der Technischen Universität Dresden operiert. Das «Outcome » von 104 Patienten konnte bezüglich der verschiedenen Behandlungsstrategien und Überlebenszeit ausgewertet werden (69 Patienten mit singulären und 35 Patienten mit multiplen Läsionen). Ergebnisse: Die meisten Metastasen stammen von Lungen- und Mammakarzinomen. Nach operativer Behandlung verbesserte sich der Karnofsky-Index um durchschnittlich 10. Das Ausmaß der extrazerebralen Tumormasse stellte die Haupteinflussgröße für die Überlebenszeit dar. Ein Lebensalter unter 70 Jahren war mit einer verlängerten Überlebenszeit verbunden (mittlere Überlebenszeit, MÜZ: 4,5 Monate vs. 7 Monate). Patienten mit solitären Metastasen hatten eine MÜZ von 16 Monaten, während Patienten mit singulären Läsionen, abhängig vom Ausmaß des extrazerebralen Tumorwachstums, eine MÜZ von 7 bzw. 4 Monaten aufweisen. Eine zusätzliche postoperative WBRT mit 30 Gy zeigte eine Verbesserung der MÜZ bei Patienten mit singulären Hirnmetastasen (OP + WBRT: MÜZ 13 Monate; OP allein: MÜZ 8 Monate). Gleichzeitig war die Rate der zerebralen Tumorrezidive in der Nicht-WBRT Gruppe deutlich höher. Die postoperative Überlebenszeit wurde durch Verwendung der Neuronavigation nicht signifikant verbessert. In 80% der Patienten limitierte das extrazerebrale Tumorwachstum die Überlebenszeit. Fazit: Bei Patienten mit singulären und multiplen Metastasen stellt die initiale chirurgische Tumorentfernung eine Therapiealternative insbesondere bei großen Tumoren (> 3 cm) dar. Eine postoperative WBRT scheint die ÜLZ der Patienten mit singulären Hirnmetastasen durch Begrenzung des Auftretens von Rezidivtumoren zu verlängern. Die Neuronavigation erlaubt eine gezielte Zugangsplanung. Multiple Prozesse können einzeitig operiert werden, ohne dass die postoperative stationäre Verweildauer verlängert wird. Hingegen wird eine radikale Tumorentfernung durch Verwendung der Neuronavigation nicht gewährleistet. / Dieser Beitrag ist mit Zustimmung des Rechteinhabers aufgrund einer (DFG-geförderten) Allianz- bzw. Nationallizenz frei zugänglich.

As ferramentas termo-analíticas, tais como a calorimetria exploratória diferencial (DSC) e a análise termogravimétrica (TGA), são os métodos usualmente utilizados para a verificação preliminar acerca da existência de interações entre fármacos e adjuvantes. Neste trabalho, foram verificados a equivalência entre a quercetina, empregada como matéria-prima, e a quercetina referência, seus comportamentos térmicos e a possível existência de interações entre esta substância e adjuvantes tecnológicos usualmente empregados no desenvolvimento de formas farmacêuticas sólidas e semi-sólidas. A evidência de interações foi investigada por análise de misturas físicas binárias sólidas da quercetina e o adjuvante. Os adjuvantes utilizados foram o ácido esteárico, álcool estearílico, celulose microcristalina, croscarmelose sódica, dióxido de silício coloidal, estearato de magnésio, lactose, manitol, monoestearato de glicerila, polissorbato 80, povidona, propilenoglicol, talco e vaselina sólida. A influência do processo de secagem por aspersão sobre as características da quercetina isolada e em presença do adjuvante de secagem dióxido de silício coloidal também foi avaliada. Os perfis espectroscópicos e cromatográficos das duas amostras de quercetina foram sobreponíveis, enquanto que o comportamento térmico da quercetina matéria-prima, obtido por DSC, não se mostrou equivalente ao da referência, pressupondo diferentes forma de cristalização ou solvatação. Para as misturas físicas, apenas aquelas contendo estearato de magnésio e lactose apresentaram indícios de interação verificados por DSC e confirmados por TGA, mas não ratificados por espectroscopia no infravermelho. O processo de secagem por aspersão modificou o perfil térmico da quercetina, enquanto o produto seco por aspersão contendo adjuvante de secagem apresentou resultados semelhantes aos obtidos para a mistura física com as mesmas substâncias.

Introdução: após os tumores de pele não - melanoma o câncer de próstata é o tumor maligno mais comumente diagnosticado e a segunda causa de morte relacionada ao câncer na população masculina. A maioria dos pacientes que morrem por câncer de próstata possuem metástases ósseas e esta doença é pouco responsiva ao tratamento quimioterápico. O microambiente ósseo, através de uma interação bidirecional com as células cancerígenas prostáticas provoca, nessas células, alterações fenotípicas. Uma dessas alterações é a expressão das células cancerígenas metastáticas anteriormente c-KIT negativas de receptores c- KIT. Hipotetizamos, aqui, que essas alterações poderiam contribuir para a quimiorresistência desses tumores. Objetivo: avaliar a hipótese de que a expressão de c-KIT pelas células de câncer de próstata contribui para a reduzida sensibilidade dessa neoplasia ao agente quimioterápico Docetaxel. Métodos: estudo experimental, utilizando células PC3, derivadas de metástases de câncer de próstata humano andrógeno-independente e C42b derivadas de metástases ósseas de câncer de próstata de coluna lombar de ratos atímicos . Ambas linhagens celulares c-KIT negativas foram tratadas em meio celular adequado e, sempre que atingiram a confluência de 90 %, foram isoladas para experimento ou expansão celular. Com o objetivo de mimetizar a expressão de c-KIT in vitro, parte das células foram submetidas a transfecção celular estável de c-KIT. Para isso foi utilizada uma formulação para transfecção de ácidos nucleicos em células eucarióticas (LIPOFECTAMINE 2000, Invitrogen) e, após isso, foi realizada a seleção de clones transfectantes estáveis. Os grupos foram divididos em c-KIT positivo, com ou sem o tratamento de SCF e c- KIT negativo com ou sem o tratamento de SCF, submetidos a doses crescentes do quimioterápico Docetaxel. Resultados: utilizando-se o índice da metade da concentração de inibição máxima (IC50), foi observado que nos experimentos com tratamento com Docetaxel por 2 dias os IC50 dos grupos C42b c-KIT e PC3 c-KIT, na presença ou não do ligante SCF, foram bastante superiores aos IC50 dos grupos C42b e PC3 que não sofreram a transfecção estável do c-KIT, na presença ou não do ligante SCF (p<0,001 grupoxdose). Nos experimentos com tratamento de Docetaxel por 3 dias, não foi observada diferença com significância estatística dos IC50 entre os grupos das células C42b transfectadas ou não com c-KIT e PC3 transfectadas ou não com c-KIT, na presença ou não do ligante SCF, principalmente quando foram usadas doses de Docetaxel mais próximas aos IC50 encontrados nos experimentos precedentes (tratamento com Docetaxel por 2 dias, doses inferiores a 10 nM de Docetaxel). Na tentativa de entender o aumento da quimiorresistência ao tratamento do Docetaxel por 3 dias aos grupos sem a transfecção de c-KIT, realizou-se o tempo de duplicação celular (TD) nos grupos C42b e PC3, o qual também não demonstrou diferença entre os grupos (PC3 EV TD = 40 horas, PC3 c-KIT TD 32 horas, C42b EV TD = 12 horas, C42b c-KIT TD = 14 horas). Conclusões: o presente estudo não demonstrou aumento da quimiorresistência das células C42b e PC3 ao quimioterápico Docetaxel quando transfectadas com c-KIT. / Introduction: after non-melanoma skin tumors, prostate cancer is the most commonly diagnosed malignant tumor and the second greatest cancer-related cause of death among men. Most patients who die of prostate cancer have bone metastases. This disease does not respond well to chemotherapy. The bone microenvironment, through a bidirectional interaction with prostatic cancerous cells, causes phenotypic alterations in these cells. One of these alterations is the expression of previously c-KIT negative metastatic cancerous cells of c-KIT receptors. Here we hypothesize that these alterations might contribute to the chemoresistance of such tumors. Objective: evaluating the hypothesis that the c-KIT expression by prostate cancer cells contributes to the reduced sensibility of this neoplasia to chemotherapeutic agent Docetaxel. Methods: experimental study, using PC3 cells derived from metastases of androgen-independent human prostate cancer and C42b cells derived from prostate cancer bone metastases from the lumbar spine of athymic mice. Both c-KIT negative cell lines were treated in the proper cellular medium and isolated for experiment or cellular expansion whenever they reached 90% confluence. Aiming at mimicking the c-KIT expression in vitro, part of the cells was submitted to stable c-KIT cell transfection. In order to do so, we used a formulation for the transfection of nucleic acids into eukaryotic cells (LIPOFECTAMINE 2000, Invitrogen). Following, the selection of stable transfectant clones was made. The groups were divided into c-KIT positive, with or without SCF treatment, and c-KIT negative, with or without SCF treatment, receiving increasing doses of the chemotherapeutic agent Docetaxel. Results: using the half maximal inhibitory concentration index (IC50), we observed that in the experiments treated with Docetaxel for 2 days, the IC50 values of the groups C42b c-KIT and PC3 c-KIT, in the presence or absence of the ligand SCF, were very superior to the IC50 values of the groups C42b and PC3 that had not undergone the stable c-KIT transfection, in the presence or absence of the ligand SCF (p<0.001 groupxdose). In experiments treated with Docetaxel for 3 days, we did not observe any statistically significant difference of IC50 values between the groups of C42b cells transfected or not transfected with c-KIT and PC3 cells transfected or not transfected with c-KIT, in the presence or absence of the ligand SCF, especially when using doses of Docetaxel that were more similar to the IC50 values found in previous experiments (treatment with Docetaxel for 2 days, doses below 10 nM of Docetaxel). In an attempt to understand the increased chemoresistance to the treatment with Docetaxel for 3 days in the groups without c-KIT transfection, we performed the cell doubling time (DT) in the groups C42b and PC3, which also showed no difference between groups (PC3 EV DT = 40 hours, PC3 c-KIT DT = 32 hours, C42b EV DT = 12 hours, C42b c-KIT DT = 14 hours). Conclusions: the present study showed no increased chemoresistance of C42b and PC3 cells to the chemotherapeutic agent Docetaxel when they are transfected with c-KIT.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / In cats, cutaneous healing presents qualitative and quantitative differences in comparison with another species, that seems predispose them to healing problems. Wounds that heal by first intention present less resistance, rate of contraction and epithelization. In the second intention healing, the inflammatory phase is bland and the proliferative phase has slow appearing and progression. Considering these aspects, it becomes important to search ways to promote and conduce cutaneous wound healing in cats. The aims of this study were standardize a technique to obtain autologous platelet-rich plasma (PRP) in cats and evaluate your effect on cutaneous healing of experimentally produced wounds in this species. The experiment was developed in two stages: three manual protocols to produce autologous platelet-rich plasma in cats were compared in the first stage. Fifteen adult healthy indoor cats, randomly divided into three groups, were utilized. Five samples of 4.5 ml of jugular blood were collect, with a vacuum system, sequentially in citrated tubes from each cat. The samples were processed using double centrifugation protocols (P): P1 (113g 10 minutes; 652g 5 minutes); P2 (400g 10 minutes; 800g 10 minutes); P3 (400g 10 minutes; 600g 10 minutes). Platelet concentration obtained in PRP obtained in different protocols and the ratio of PRP and platelet counts were compared by t-test. The feasibility of the collect method to the species and ease of execution of techniques was evaluated too. In the second stage, ten healthy adult indoor cats were used. In each animal were surgically produced four circular skin defects, with a diameter of 1 cm, on left and right sides of trunk dorsal midline. The lesions on one side were treated with fluid PRP, obtained of animal itself, according to the best protocol defined in the first stage of the experiment. The control defects in the opposite side were filled with NaCl 0,9% sterile solution. Three observers evaluated the wounds, every three days, for 28 days. The presence of crusts, pain, swelling, exudate, granulation tissue and the color were considered. The results were statistically evaluated by Mann-Whitney rank test. The area of each lesion was analyzed by morphometry every seven days and the data compared by t-test. Skin fragments with normal and scar tissue, from two more cranial lesions (treated and control), were obtained weekly. The fragments were stained with hematoxylin-eosin (HE) and Masson's trichrome, and qualitatively evaluated for the presence of crust, ulcer, acanthosis, fibroplasia, collagen deposition and neovascularization. These data were analyzed using the Mann-Whitney rank test. The collect method was satisfactory and simplified the procedure. Two techniques (P2 and P3) were effective to produce PRP, yielding concentrations higher than 1x106 platelets.μL-1. The P3 protocol was statistically higher in capacity increase, and was selected for use in experimental wounds. In the second stage, the techniques for blood collection, and the selected protocol, were satisfactory. The use of PRP in liquid form, deposited directly on the lesion, made it easy to use. Clinically, there was a statistically significant difference (p = 0.025) and higher exudation in wounds treated to three days. In morphometric analysis we noticed a greater contraction in wounds treated with PRP, especially of the first seven days (p = <0.001). Histopathological evaluation was not significant in any compared parameters. Therefore, it is concluded that the sampling method is efficient and P2 and P3 protocols can be considered feasible to obtain PRP from cats. The protocol P3 was superior in the platelet concentration ability, producing a better quality PRP. Activation of PRP liquid by tissue injury is possible. The increased exudation suggests enhancement of the inflammatory process in treated wounds. Therapeutic use of liquid PRP improves contraction capacity on experimental wounds in cats, despite the absence of histological evidence by way the evaluation adopted. / A cicatrização cutânea em gatos possui diferenças qualitativas e quantitativas quando comparada à de outras espécies, fato que parece predispor a problemas. Feridas que cicatrizam por primeira intenção apresentam menor resistência, taxa de contração e epitelização. Já na cicatrização por segunda intenção, a fase inflamatória é branda e a fase proliferativa apresenta surgimento e progressão lenta. Tendo em vista esses aspectos, torna-se importante a busca de meios que ajudem a favorecer e conduzir o reparo de feridas cutâneas em gatos. Este estudo objetivou a padronização de uma técnica para obtenção de plasma rico em plaquetas (PRP) autólogo em gatos e a avaliação de sua ação sobre a cicatrização de feridas cutâneas produzidas experimentalmente nessa espécie. Ele desenvolveu-se em duas etapas distintas: na primeira foram comparados três protocolos manuais para produção de PRP em gatos. Utilizaram-se 15 animais adultos hígidos e domiciliados, divididos aleatoriamente em três grupos. Cinco amostras de 4,5ml de sangue foram colhidas da jugular de cada animal, por sistema a vácuo, sequencialmente, em tubos com citrato de sódio. As amostras de cada grupo foram processadas por meio de protocolos de dupla centrifugação: P1 (113g 10 minutos; 652g 5 minutos); P2 (400g 10 minutos; 800g 10 minutos); P3 (400g 10 minutos; 600g 10 minutos). As concentrações plaquetárias obtidas no PRP dos diferentes protocolos e a relação entre o PRP e contagem de plaquetas foram comparadas por teste-t. A viabilidade do modo de coleta a vácuo para a espécie e a facilidade de execução das técnicas também foram avaliadas. Na segunda etapa, foram utilizados dez gatos adultos hígidos, domiciliados. Em cada animal foram produzidos, cirurgicamente, quatro defeitos circulares, pareados, com diâmetro de 1 cm, na pele, nas laterais esquerda e direita da linha média dorsal do tronco. As lesões de um lado foram tratadas com PRP líquido, obtido do próprio animal, de acordo com o melhor protocolo definido na primeira etapa do experimento. Os defeitos do lado oposto, considerados controle, foram preenchidos com solução de NaCl 0,9% estéril. As feridas foram avaliadas por três observadores, a cada três dias, por 28 dias. Considerou-se a presença de crostas, dor, edema, exsudato, tecido de granulação e a coloração. Os resultados foram avaliados estatisticamente pelo teste de Mann-Whitney em ranks. A área de cada lesão foi analisada por morfometria a cada sete dias e os dados comparados pelo teste-t. Também, semanalmente, foram obtidos fragmentos de pele contendo tecido normal e cicatricial a partir das duas lesões (tratada e controle) mais craniais. Os fragmentos foram corados por hematoxilina-eosina (HE) e tricrômico de Masson, e avaliados qualitativamente quanto a presença de crosta, úlcera, acantose, fibroplasia, colagenização e neovascularização. Esses dados foram analisados pelo teste de Mann-Whitney em ranks. O sistema de coleta de sangue a vácuo mostrou-se satisfatório e simplificou o procedimento. Duas das técnicas (P2 e P3) mostraram-se factíveis para a produção do PRP, proporcionando concentrações superiores a 1x106 plaquetas.μl-1. O protocolo P3 mostrou-se estatisticamente superior na capacidade de incremento, e foi selecionado para uso nas feridas experimentais. Na segunda etapa, a técnica para coleta de sangue e o protocolo selecionado, mostraram-se satisfatórios. A utilização do PRP na forma líquida, depositado diretamente sob a lesão, tornou fácil sua utilização. Clinicamente, houve diferença estatisticamente significativa (p=0,025) e maior exsudação nas feridas tratadas no dia três. Na análise morfométrica, notou-se maior contração nas feridas tratadas com PRP, principalmente nos primeiros sete dias (p=<0,001). Na avaliação histopatológica semi-quantitativa não houve significância em nenhum dos parâmetros comparados. Logo, conclui-se que o método de coleta é eficiente, e podem-se considerar exequíveis as técnicas para obtenção do PRP em gatos, a partir dos protocolos P2 e P3. O protocolo P3 demonstra superior eficiência na capacidade de concentrar plaquetas, gerando um PRP de melhor qualidade. É possível a ativação do PRP líquido por meio da lesão tecidual. O aumento da exsudação sugere intensificação do processo inflamatório nas feridas tratadas. O uso terapêutico do PRP na forma líquida melhora a capacidade de contração em feridas produzidas experimentalmente em gatos, apesar da ausência de evidências histopatológicas pela avaliação adotada.

As ferramentas termo-analíticas, tais como a calorimetria exploratória diferencial (DSC) e a análise termogravimétrica (TGA), são os métodos usualmente utilizados para a verificação preliminar acerca da existência de interações entre fármacos e adjuvantes. Neste trabalho, foram verificados a equivalência entre a quercetina, empregada como matéria-prima, e a quercetina referência, seus comportamentos térmicos e a possível existência de interações entre esta substância e adjuvantes tecnológicos usualmente empregados no desenvolvimento de formas farmacêuticas sólidas e semi-sólidas. A evidência de interações foi investigada por análise de misturas físicas binárias sólidas da quercetina e o adjuvante. Os adjuvantes utilizados foram o ácido esteárico, álcool estearílico, celulose microcristalina, croscarmelose sódica, dióxido de silício coloidal, estearato de magnésio, lactose, manitol, monoestearato de glicerila, polissorbato 80, povidona, propilenoglicol, talco e vaselina sólida. A influência do processo de secagem por aspersão sobre as características da quercetina isolada e em presença do adjuvante de secagem dióxido de silício coloidal também foi avaliada. Os perfis espectroscópicos e cromatográficos das duas amostras de quercetina foram sobreponíveis, enquanto que o comportamento térmico da quercetina matéria-prima, obtido por DSC, não se mostrou equivalente ao da referência, pressupondo diferentes forma de cristalização ou solvatação. Para as misturas físicas, apenas aquelas contendo estearato de magnésio e lactose apresentaram indícios de interação verificados por DSC e confirmados por TGA, mas não ratificados por espectroscopia no infravermelho. O processo de secagem por aspersão modificou o perfil térmico da quercetina, enquanto o produto seco por aspersão contendo adjuvante de secagem apresentou resultados semelhantes aos obtidos para a mistura física com as mesmas substâncias.

Introduction: Bioceramics have been studied for their ability to emit long infrared radiation producing non-thermal and thermal effects, with several biological activities. Objective: To evaluate the effects of bioceramics on peripheral inflammation in mice, as well as to analyze the possible neurobiological mechanism involved in this effect. Methods: Swiss male mice injected with CFA in the paw were submitted to bioceramic treatments by means of contact with a ceramic impregnated pad that, under paw heat, radiates far infrared. Six groups (n = 8) of animals were randomly distributed into naive, control group and treated by exposure (radiation) to the bioceramics for 30, 60, 120 minutes or by continuous exposure. Edema formation, Mechanical and thermal hyperalgesia were analyzed using behavioral tests, i.e., the von Frey test, a hot plate and a micrometer (paw thickness), respectively. In the biochemical analyzes the local tissue (paw) concentrations of pro and anti-inflammatory cytokines were measured by the ELISA method. In the oxidative stress analyzes, parameters related to oxidative damage (TBARS and carbonylated proteins), antioxidant defense (SOD and CAT) and inflammation (myeloperoxidase and nitrite / nitrate concentrations) were analyzed by spectrophotometry. Intraplantar administrations of AM281 or AM630 (cannabinoid), caffeine and DPCPX (adenosine), naloxone (opioid) were used to investigate the endogenous pain control systems involved in the antihyperalgesic activity of bioceramics. Results: Bioceramic treatment reduced edema, as well as mechanical and thermal hyperalgesia. In addition, it decreased TNF-α and IL-1β concentrations and increased IL-10. The treatment also decreased oxidative damage and increased the activity of antioxidant enzymes. Activation of μ-opioid receptors, A1, CB1 and CB2 appear to mediate the antihyperalgesic effect of bioceramics. Conclusion: Material impregnated with bioceramics has anti-hyperalgesic and antiedematogenic activity in vivo. This antihyperalgesic effect seems to be related to its antioxidant and anti-inflammatory activities, as well as its ability to activate endogenous pain control systems. / Submitted by Ralph Fernando Rosas (ralph.fernando@unisul.br) on 2018-01-10T19:19:10Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 805 bytes, checksum: c4c98de35c20c53220c07884f4def27c (MD5) Tese Ralph.pdf: 2333014 bytes, checksum: 4f908be9d81a609616c758dde27e1f72 (MD5) / Approved for entry into archive by Silvane Cauz (silvane.cauz@unisul.br) on 2018-02-06T12:45:15Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 805 bytes, checksum: c4c98de35c20c53220c07884f4def27c (MD5) Tese Ralph.pdf: 2333014 bytes, checksum: 4f908be9d81a609616c758dde27e1f72 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-06T12:45:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 805 bytes, checksum: c4c98de35c20c53220c07884f4def27c (MD5) Tese Ralph.pdf: 2333014 bytes, checksum: 4f908be9d81a609616c758dde27e1f72 (MD5) Previous issue date: 2017 / Biocerâmicas têm sido estudadas por sua capacidade de emitir radiação de infravermelho longo que produz efeitos não-térmicos e térmicos, com diversos efeitos biológicos. Objetivo: Avaliar os efeitos da biocerâmica na inflamação periférica, bem como analisar o possível mecanismo neurobiológico envolvido nesse efeito. Métodos: O modelo de inflamação periférica persistente usado foi induzido por CFA. Foram utilizados camundongos Swiss de ambos os sexos. Foi injetado 20 μl desta solução na pata direita de cada animal. O tratamento foi realizado com uma almofada de PVC de milho (colocada abaixo da maravalha) impregnada com cerâmica que, sob estímulo térmico, irradiava infravermelho. Para os testes comportamentais, os animais foram distribuídos nos grupos (n=8): naives, controles, animais submetidos ao CFA e expostos à biocerâmica por 30, 60 e 120 minutos e exposição contínua. A hiperalgesia mecânica foi avaliada utilizando monofilamentos de von Frey; a hiperalgesia térmica ao calor utilizando o teste da placa quente; o edema da pata com micrômetro e pletismômetro digital; a análise das concentrações de citocinas utilizou-se o método de ELISA. Para as análises bioquímicas, as superfícies ventrais (pele) das patas posteriores direitas dos animais foram utilizadas. Para avaliação do dano oxidativo e sistema antioxidante de defesa foram avaliadas a peroxidação lipídica endógena, determinadas as atividades das enzimas superóxido dismutase, catalase, a concentração nitrito/nitrato, a atividade da enzima mieloperoxidase e o dano oxidativo a proteínas carboniladas. O envolvimento dos sistemas canabinoidérgico, adenosinérgico e opioidérgico, no efeito da biocerâmica foram investigados. Conclusão: Os resultados demonstraram que a biocerâmica reduz a dor de origem inflamatória, pois diminuiu a hiperalgesia mecânica juntamente com a hiperalgesia térmica e o edema de pata. Além disso, diminuíram-se os níveis das concentrações das citocinas pró-inflamatórias (TNF-α e IL-1β) e aumentaram-se da anti-inflamatória (IL-10). Também, houve diminuição do dano oxidativo com aumento da atividade das enzimas antioxidantes. Os sistemas citados estão envolvidos no efeito anti-hiperalgésico. Neste sentido, estes dados fornecem à literatura essenciais subsídios do efeito terapêutico da biocerâmica para o direcionamento de futuros ensaios clínicos.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA15MA170.pdf: 1407687 bytes, checksum: 6d77197fef831a6cbdc6fcf9e39c8629 (MD5) Previous issue date: 2015-07-23 / For a long time, Pasterella multocida has been considered only as a secondary agent in pneumonias in swine. However, studies developed in Brazil identified different isolates of P. multocida able to operate as primary disease agent in swine. The objective of his project was to study protection aspects of a vaccine with pathogenic samples of P. multocida in experimental model with high sanity status pigs. In addition, it aims to describe the expression of immune response in swine induced by P. multocida infection, and determinate the prevalence of P. multocida in tonsils of vaccinated and not vaccinated pigs through immunohistochemistry. The study was divided into three experiments: Immunization of mice with vaccines prepared with different adjuvants , Test of two adjuvants used in vaccine with a P. multocida homologous strain in swine and Experimental challenge in swine with a P. multocida heterologous strain to the vaccine . Four adjuvants were tested in mice: Al(OH)3, ISA 206, Montanide GEL 01 and ISA 760. Two of them were selected for testing in swine: Al(OH)3 which showed better results in mice-, and ISA 760 for being an oily adjuvant. At the second experiment, although two vaccines have been effective in the disease protection, the one with the adjuvant Al(OH)3 was selected, because showed lower vaccine reaction. Eighteen pigs were distributed into three groups for the specific test of the vaccine for pathogenic samples of P. multocida. Group 1 (G1) vaccine with Al(OH)3; group 2 (G2) infection control; and group 3 (G3) negative control. After the experiment, the animals were euthanized, and samples were collected in ice - for microbiological cultivation and relative quantification of cytokines gene expression (IL1 &#946;, IL2, TNF&#945;) and TLR4 , and in formaldehyde, for routine histopathology and immunohistochemistry. Results showed that the vaccine prototype with adjuvant Al(OH)3 was efficient in controlling pulmonary pasteurellosis. The immune response was mediated by TLR4, with increased expression of TNF&#945;. IL-1&#946; and IL2 were also expressed, however, there was no significant difference between the groups. The immunostaining of P. multocida in tonsil was positive in all pigs challenged with the bacteria / Por muito tempo, Pasteurella multocida foi considerada apenas como agente secundário nas pneumonias em suínos, todavia, estudos realizados no Brasil identificaram diferentes isolados de P. multocida capazes de atuar como agente primário de doença em suínos. Esse projeto teve como objetivo estudar aspectos de proteção de uma vacina com amostras patogênicas da P. multocida em modelo experimental com suínos de alto status sanitário . E de forma paralela descrever expressão da resposta imune dos suínos induzida pela infecção da P. multocida e determinar a prevalência dessa bactéria em tonsilas de suínos vacinados e não vacinados através de imunohistoquímica. O trabalho foi dividido em três experimentos: Imunização de camundongos com vacinas preparadas com diferentes adjuvantes ; Teste de dois adjuvantes utilizados na vacinação de suínos frente ao desafio com uma cepa homóloga de P. multocida ; e Desafio experimental em suínos com uma cepa de P. multocida heteróloga à da vacina . Em camundongo foram testados quatro adjuvantes: Al(OH)3, ISA 206, Montanide GEL 01 e ISA 760, dos quais, foram selecionados dois para teste em suínos: Al(OH)3, que apresentou melhor resultado nos camundongos e ISA 760, por ser um adjuvante oleoso. Embora as duas vacinas tenham sido efetivas na proteção da doença, no segundo experimento, selecionou-se àquela com adjuvante Al(OH)3, que apresentou menor reação vacinal. No terceiro experimento realizado em suínos, foram utilizados 18 suínos em três grupos: grupo 1 (G1) - vacina com Al(OH)3, e grupo 2 (G2) controle de infeção e grupo 3 (G3) controle negativo. Após o experimento os animais foram eutanasiados para avaliação patológica, coleta de amostras em gelo para cultivo microbiológico e quantificação relativa da expressão gênica das citocinas (IL1 &#946;, IL2, TNF&#945;) e TLR4, para histopatologia de rotina e imunohistoquimica. Os resultados demostraram que o protótipo de vacina com adjuvante Al(OH)3 foi eficiente no controle de pasteurelose pulmonar. O perfil da expressão da resposta imune foi mediado por TLR4, com aumento da expressão de TNF&#945;. Também foram expressos IL-1&#946; e IL2, porém sem diferença significativa entre os grupos. A imunomarcação de P. multocida na tonsila foi positiva em todos os suínos desafiados com a bactéria, independente de serem ou não vacinados

Orientador: Luis Fernando Barbisan / Banca: Maria Aparecida Marchesan Rodrigues / Banca: Thomas Prates Ong / Banca: Luciana Azevedo / Banca: Rui Manuel Vieira Reis / Resumo: Estudos prévios mostraram que uma dieta rica em óleo de peixe aumentou a eficácia quimioprotetora do tamoxifeno contra a carcinogênese mamária induzida pela N-metil-Nnitrosuréia (MNU) em ratas Sprague-Dawley. O presente trabalho evidenciou que o tratamento com tamoxifeno modifica a expressão gênica de tumores mamários dependendo to tipo de gordura administrado na dieta dos animais. Ratas Sprague-Dawley iniciadas com MNU e tratadas com tamoxifeno receberam uma dieta rica em óleo de milho ou óleo de peixe. Após oito semanas, tumores do mesmo tipo histológico (cribriformes) foram coletados, e análise do RNA mensageiro (mRNA) foi executada através de microarray de expressão gênica e seguinte validação dos resultados por PCR em tempo real. A maior expressão do mRNA dos genes SerpinB10, Wisp2 e Apod em tumores de animais tratados com óleo de peixe é indicativo de que esses tumores eram altamente diferenciados. A redução da expressão de mRNA dos genes H19 e Igf2 nos grupos tratados com tamoxifeno, e de Thrsp e Wnt5b no grupo tratado com óleo de peixe e tamoxifeno pode estar relacionado à redução do crescimento tumoral e baixa capacidade metastática. A expressão aumentada do nível de transcrito Irf7 nos animais tratados com óleo de peixe sugere melhora na resposta imune antitumoral (padrão Th1), enquanto o aumento nos transcritos dos genes Fcer1a, Hdc, Ms4a2, Slp1, Mcpt1 and Mcpt2 nos animais tratados com óleo de peixe e tamoxifeno podem indicar uma mudança no padrão de resposta imune para Th2. O padrão Th2 representa um potencial mecanismo de escape da resposta imune adquirido pelas células tumorais dos animais tratados com óleo de peixe e tamoxifeno. Esses resultados sugerem que, apesar do tamoxifeno modular a expressão gênica levando à redução do crescimento tumoral, modulações de genes adicionais são influenciadas pela dieta rica em óleo de peixe... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Studies have shown that a fish oil-rich diet increased the chemopreventive efficacy of tamoxifen (Tam) against N-methyl-N-nitrosourea (MNU)-induced rat mammary carcinogenesis. Herein, we evidence that tamoxifen treatment modifies gene expression of mammary tumors depending upon the type of dietary fat fed to the animals. Rats initiated with MNU and treated with Tam were fed a diet rich in corn oil (CO) or fish oil (FO). After 8 weeks, tumors of the same histological type (cribriform) were collected and comprehensive analysis of messenger RNA expression was performed. The mRNA expression of genes such as SerpinB10, Wisp2 and Apod in tumors from FO-treated rats is indicative of highly differentiated tumors. Decreased expression of H19 and Igf2 mRNA in Tam-treated groups, and Thrsp and Wnt5b mRNA in FO+Tam group may be related to tumor growth impairment and lower metastatic capacity. Increased Irf7 transcript levels in FO-treated animals suggests an improved immune response against tumors (Th1 pattern) whereas decreased mRNA of Fcer1a, Hdc, Ms4a2, Slp1, Mcpt1 and Mcpt2 may indicate a shift of the immune response towards Th2 pattern. The Th2 pattern of gene expression represents a potential mechanism of escape from the immune response caused by FO+Tam treatment. These data show that, although tamoxifen modulates the expression of genes leading to tumor growth impairment, further modulations of genes are influenced by FO altering Tam-modulated expression of genes in a manner that may, in part, account for its enhancing chemopreventive effect against MNU-induced mammary carcinogenesis / Doutor