Resumo: O pró-fármaco de diclofenaco, 1-(2,6-diclorofenil)indolin-2-ona (DICCIC), apresenta atividade anti-inflamatória comparável ao diclofenaco sem efeitos gastroulcerativos. Essa vantagem torna-o uma possível alternativa terapêutica em quadros de inflamação onde há a indicação de anti-inflamatórios não esteroidais. Assim neste trabalho, foi investigado o perfil farmacocinético do DICCIC e seu potencial para conversão no diclofenaco. O DICCIC e o diclofenaco foram administrados em dose única a ratos Wistar (n=20) intravenosamente. Foram colhidas amostras seriadas de sangue. As amostras de plasma foram processadas e o extrato final do processamento foi analisado por CLAE. O sistema cromatográfico consistiu de uma bomba 600E Waters®, com detector UV-vis operando a 276 e 250 nm. A separação foi feita em coluna Symmetry C18 (4,6 x 250 mm, 5µm) sob eluição da fase móvel metanol:acetonitrila: ácido metanoico 0,1%, na proporção de 5:55:40, em modo isocrático e fluxo de 1 mL/min. O método bioanalítico foi validado e seus limites de confiança foram apropriados para sua aplicação. As médias dos parâmetros farmacocinéticos foram calculadas pelas curvas de concentração plasmática versus tempo e comparadas pelo teste de Mann-Whitney (p<0,05). A meia-vida do diclofenaco a partir de DICCIC (49,7 ± 10,9 min) foi significativamente menor que a meia-vida do diclofenaco após administração de diclofenaco (188,3 ± 78 min). O mesmo foi observado para a área sob a curva, cujo resultado para diclofenaco de DICCIC (48,8 ± 4,2 µg.min/mL) foi mais de dez vezes menor que a do diclofenaco após administração... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The diclofenac prodrug, 1-(2,6-dichlorophenyl)indolin-2-one (DICCIC), has anti-inflammatory effects comparable to diclofenac, but without gastroulcerative effect. This advantage makes it a potential therapeutic approach in inflammation frames where there is an indication of nonsteroidal anti-inflammatory drugs. Thus, in this study, we investigated the pharmacokinetic profile of DICCIC and its potential for conversion to diclofenac. The DICCIC and diclofenac were administered in single dose to Wistar rats (n = 20) intravenously. Blood samples were collected serially. The plasma samples were processed and thereafter analyzed by HPLC. The HPLC system consisted of a Waters® 600E pump with a UV-Vis detector (Waters® 2487), and a reverse phase C18 column (5µm, 250mm x 4.6 mm I.D, Symmetry®, Waters). The mobile phase was 0.1% methanoic acid:methanol:acetonitrile (40:5:55) at a flow rate 1 mL/min. The UV-Vis detector was set to 276 nm for detection of diclofenac and naproxen (Internal Standard), and 250 nm for DICCIC. The HPLC method for simultaneous determination of diclofenac and DICCIC was validated to perform the profile evaluation. The confidence limits were appropriate for its application. The mean pharmacokinetic parameters were then calculated (using) the curves of plasma concentration versus time and compared using the Mann-Whitney test (p <0.05). The half-life of diclofenac from DICCIC (49.7 ± 10.9 min) was significantly lower than the half-life of diclofenac after administration of diclofenac (188.3 ± 78 min). The area under the curve for diclofenac from DICCIC (48.8 ± 4.2 μg.min/mL) was more than ten-fold lower than that of diclofenac originated from diclofenac ... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Rosângela Gonçalves Peccinini / Coorientador: Jean Leandro dos Santos / Banca: Chug Man Chin / Banca: Regina Helena Costa Queiroz / Mestre

Orientador: Irma de Godoy / Coorientador: Susana Erico Tanni Minamoto / Coorientador: Camila Renata Corrêa / Banca: José Antonio Baddini Martinez / Banca: Mariana Gobbo Braz / Banca: Oliver Augusto Nascimento / Banca: Ângela Victoriano de Campos Soares / Resumo: Foi realizado estudo transversal para avaliar e comparar a associação entre estresse oxidativo e estado inflamatório e suas relações com a força muscular, a massa muscular sistêmica, a capacidade funcional de exercício e o estado geral de saúde em tabagistas, pacientes com doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC) leve/moderado e controles não tabagistas. Foram avaliados 32 tabagistas ativos (carga tabágica >10 anos/maço) sem DPOC, 32 pacientes com DPOC leve/moderado [tabagistas ativos ou ex-tabagistas (carga tabágica >10 anos/maço)] e 32 indivíduos não tabagistas. Todos os indivíduos foram submetidos à avaliação clínica e do estado tabágico, espirometria pré e pósbroncodilatador, oximetria de pulso e as concentrações de mediadores inflamatórios [proteína C-reativa (PCR), interleucina (IL) 6, receptores do fator de necrose tumoral alfa (TNFR1 e TNFR2)] e indicadores de estresse oxidativo [produtos finais de glicação avançada (AGEs) e receptor solúvel do produto final de glicação (sRAGE)] foram avaliadas no soro. Foi realizada avaliação da composição do corpo por bioimpedância, da força muscular periférica por dinamometria, da capacidade funcional de exercício (distância percorrida em seis minutos) e da avaliação do estado geral de saúde, por meio do Medical Outcomes Study 36-item Short-Form Health Survey (SF-36) e da Escala Hospitalar de Ansiedade e Depressão (HAD). Tabagistas (p<0,001) e pacientes com DPOC (p<0,001) apresentaram valores superiores de AGEs quando comparados aos controles. Não houve diferença estatisticamente significante entre tabagistas e pacientes com DPOC. As concentrações de sRAGE não diferiram entre os grupos (p=0,92). Tabagistas (p=0,01) e pacientes com DPOC (p=0,01) apresentaram valores superiores da PCR em comparação aos controles, sem diferenças nas demais comparações. As concentrações de IL6 (p=0,07) e TNFR1 (p=0,07) não diferiram entre os grupos. Os valores... / Abstract: The aim of this study was to evaluate the association between oxidative stress and inflammatory markers and their relationship with muscle strength, systemic muscle mass, exercise capacity, quality of life in smokers, mild/moderate COPD patients and nonsmokers controls. Were evaluated 32 active smokers (smoking history> 10 pack/years) without COPD, 32 mild/moderate COPD patients [current smokers or former smokers (smoking history> 10 pack/years) and 32 nonsmokers. All individuals underwent to medical and smoking status evaluations, spirometry pre and post-bronchodilator and pulse oximetry. The concentration of inflammatory mediators [C-reactive protein (CRP), interleukin (IL) 6, and tumor necrosis factor-alpha receptors (TNFR1 and TNFR2)] and indicators of oxidative stress [advanced glycation end-products (AGEs) and soluble receptors for advanced glycation end-products (sRAGE)] were measured in serum. We assessed body composition by bioimpedance, peripheral muscle strength by dynamometry, exercise capacity (six minutes walk distance) and the health status through the Medical Outcomes Study 36-Item Short-Form Health Survey (SF-36) and the Hospital Anxiety and Depression Scale (HAD). Smokers (p<0.001) and COPD patients (p<0.001) had higher values of AGEs when compared to controls there was no statistically significant difference between smokers and COPD patients. The sRAGE concentrations did not differ between groups (p=0.92). Smokers (p=0.01) and patients with COPD (p=0.01) showed higher values of CRP compared to controls, there was no statistical significant difference between smokers and COPD groups. The concentrations of IL-6 (p=0.07) and TNFR1 (p=0.07) did not differ between groups. Regarding concentrations of TNFR2, COPD patients showed higher values when compared to smokers (p=0.004) and controls (p=0.004). We identified positive association of smoking (p=0.04), CRP (p=0.03) and IL6 (p=0.03) with the concentrations of AGEs. The ... / Doutor

Orientador: Vanderlan da Silva Bolzani / Resumo: O gênero Croton, um dos maiores da família Euphorbiaceae, é conhecido pela sua riqueza de metabólitos secundários de origem terpênica, como os clerodânicos. No entanto, estudos recentes apontam para a presença de uma classe de compostos que vem ganhando visibilidade e interesse dos cientistas e de indústrias farmacêuticas, os peptídeos cíclicos. Os peptídeos naturais, especialmente aqueles de natureza cíclica e de baixo peso molecular (orbitídeos), constituem uma classe de moléculas promissoras para a identificação de novos hits e leads de fármacos. Nessa perspectiva, esse trabalho trata do estudo de duas espécies da Mata Atlântica: Croton floribundus e Croton campanulatus na busca por peptídeos cíclicos, mais precisamente por orbitídeos. Assim sendo, inicialmente investigou-se em pequena escala folhas e caules de ambas as espécies, raiz da espécie C. floribundus e látex da espécie C. campanulatus e após essas análises preliminares selecionou-se a raiz da de C. floribundus e o látex de C. campanulatus para dar continuidade com os estudos. O processo de extração das substâncias de interesse da raiz foi feito por maceração hidroetanólica e do látex, por partição líquido-líquido com acetato de etila. Em seguida esses extratos foram submetidos à cromatografia em coluna, empregando octadecilsilano (C18) como fase estacionária para a obtenção das frações contendo peptídeos. O processo de purificação dessas frações foi feito por HPLC em modo analítico e preparativo que permitiu o is... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Croton genus, the largest of the Euphorbiaceae family, is known for its richness of secondary metabolites of terpenic origin, such as the clerodanic ones. However, recent studies point to the presence of a class of compounds that has gained visibility and interest from scientists and pharmaceutical industries, the cyclic peptides. Natural peptides, especially those of a cyclic and low molecular weight nature (orbitides), represent a class of promising molecules for identification of hits and leads in drug discovery. In this perspective, this research deals with the study of two species from the Atlantic Forest: Croton floribundus and Croton campanulatus in the search for cyclic peptides, more precisely for orbitides. Thus, leaves and stems of both species, root from C. floribundus and latex from C. campanulatus were investigated in a small scale, and after these preliminary analyzes, the C. froribundus’ root and the latex from C. campanulatus were selected to continue the studies. The extraction process of the root's compounds of interest was performed by hydroethanolic maceration, while the latex extraction consisted by liquid-liquid partition with ethyl acetate. Then, these extracts were submitted to a chromatographic column using octadecylsilane (C18) as a stationary phase to obtain fractions containing peptides. The fractions purification process was carried out by analytical and preparative HPLC, which allowed the isolation of 2 compounds from C. campanulatus and 4 c... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Augusto Batagin Neto / Coorientador: Rondinelli Donizetti Herculano / Coorientador: Matheus Carlos Romeiro Miranda / Banca: Gustavo Ventorim / Banca: Danielle Goveia / Resumo: A liberação sustentada de fármacos é um tópico importante para várias aplicações em nanotecnologia devido ao seu potencial impacto na sociedade, como a criação de sistemas de carreadores otimizados. A relevância dos sistemas de liberação sustentada de princípios ativos advém do fato de que raramente um fármaco veiculado em solução aquosa, ou numa forma convencional, consegue atingir um alvo específico no organismo em concentrações adequadas para provocar o efeito terapêutico esperado. Neste contexto, o látex natural tem se mostrado um material bastante promissor, sendo já empregado em diversos sistemas de liberação. Dentre os principais benefícios deste material, pode-se destacar o baixo custo relativo e a facilidade de aplicação/utilização. Dadas estas interessantes propriedades, diversos trabalhos têm avaliado a utilização de membranas de látex em sistemas de liberação de fármacos, no intuito de desenvolver adesivos de liberação transdérmica utilizando o látex como matriz de dispersão. O presente trabalho avaliou um novo sistema fármaco/membrana baseado em ibuprofeno e o mesmo foi caracterizado por meio de diferentes métodos físicos e químicos. Os resultados obtidos apontam o sistema estudado como um possível precursor de um novo adesivo a base de látex natural. Observou-se a ausência de ligações intermoleculares que dificultariam a liberação do fármaco. Uma pequena perda da capacidade de deformação e elasticidade do látex foi observada após a incorporação do fármaco, a qua... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Sustained drug release is an important topic for many applications in nanotechnology because of its potential impact on society, such as the creation of optimized carrier systems. Sustained release systems of active principles come from the fact that rarely does a drug delivered in aqueous solution, or in a conventional form, achieve a specific target in the body at concentrations adequate to elicit the expected therapeutic effect. In this context, natural latex has shown to be a very promising material and has already been used in several release systems. Among the main benefits of this material is the low relative cost and ease of use. Given these interesting properties, several studies have evaluated the use of latex membranes in drug delivery systems, in order to develop transdermal release adhesives using the latex as a dispersion matrix. The present work evaluated a new drug / membrane system based on ibuprofen and the same was characterized by different physical and chemical methods. The obtained results point out the evaluated system as a possible precursor of a new adhesive based on natural latex. It was observed the absence of intermolecular bonds that would hinder the release of the drug. A slight loss of the deformability and elasticity of the latex was observed after incorporation of the drug, which does not prevent its application as an adhesive. Finally, the promising drug release patterns and low degree of hemolysis define the studied system as a promising bio... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Luciane Dias de Oliveira / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Marcos Roberto Furlan / Resumo: Visando o potencial terapêutico do extrato glicólico de B. pendula em tratamentos de infecções bacterianas e fúngicas e de doenças inflamatórias, foram avaliadas suas atividades antimicrobiana, antiinflamatória, citotóxica e genotóxica. A atividade antimicrobiana do extrato foi analisada em Candida albicans, C. dubliniensis, C. glabrata, C. guilliermondii, C. krusei, C. tropicalis, Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans, Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa com a determinação das Concentrações Inibitória Mínima e Microbicida Mínima (CIM e CMM) em culturas planctônicas e posteriormente testado sobre biofilmes monotípicos. A atividade citotóxica foi avaliada em cultura de macrófagos de camundongo (RAW 264.7) e fibroblastos gengivais humanos (FMM-1) após exposição de 5 min e 24 h ao extrato, com o teste MTT e teste imunoenzimático (ELISA) que quantificou a produção das citocinas IL-1β e TNF-α produzidas por RAW 264.7. A genotoxicidade do extrato foi avaliada pelo teste de micronúcleos. A atividade antiinflamatória foi avaliada nos sobrenadantes coletados de culturas de RAW 264.7 estimuladas com LPS de E. coli e expostas aos extratos (5 min e 24 h) pela quantificação de citocinas IL-1β, TNF-α e IL-10 por ELISA e óxido nítrico (ON) pelo método de Griess. A análise estatística foi realizada por ANOVA e teste de Tukey, com significância de 5%. O extrato teve ação antimicrobiana em todos biofilmes, com redução acima de 39,5% em 5 min e acima de 78% em 24 h. A viabilidade celular foi satisfatória em concentrações abaixo de 50 mg/mL em 5 min tanto para FMM-1, quanto para RAW 264.7, contudo em 24 h concentrações acima de 3,13 e 12,5 mg/mL foram citotóxicas para RAW 264.7 e FMM-1, respectivamente. Não houve indícios de ação genotóxica do extrato. A atividade anti-inflamatória foi evidenciada pela redução significativa na produção de TNF-a e ON nos grupos tratados . Conclui-se que o... / Abstract: In order to verify the therapeutic potential of glicolic extract of B. pendula on the threatment of bacterial and fungical infection and on inflammatory diseases, its antimicrobial, anti-inflammatory actions, cytotoxic and genotoxic effects were evaluated. The antimicrobial activity of the extracts was tested on Candida albicans, C. dubliniensis, C. glabrata, C. guilliermondii, C. krusei, C. tropicalis, Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa with determination of Minimum Inhibitory and Minimum Microbicide Concentrations (MIC and MMC) in planktonic growth, following of test in monotypic biofilms. The cytotoxic activity was evaluated in mouse macrophages (RAW 264.7) and human gingival fibroblast (FMM-1) after exposure of 5 min and 24 h to extract, through the MTT test and by Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) to quantify the production of the cytokines IL-1β and TNF-α by RAW 264.7. The genotoxicity of the extracts was evaluated by micronucleus test. The anti-inflammatory activity was evaluated in RAW 264.7 stimulated with LPS from E. coli, after the period of exposure to the extract (5 min and 24 h) the supernatant was removed to quantify pro-inflammatory (IL-1β and TNF-α.) and antiinflammatory (IL-10) cytokines by ELISA and nitric oxide (NO) by Griess method. Statistical analysis was performed by ANOVA and Tukey's test, with significance level of 5%. The extract has shown antimicrobial activity with reduction above of 39.5% of biofilm in 5 min and more than 78% in 24 h. The cell viability was satisfactory at concentrations below 50 mg/mL in 5 min to RAW 264.7 and FMM-1, however in 24 h concentrations above 3.13 and 12.5 mg/mL were cytotoxic to RAW 264.7 and FMM-1, respectively. There was no evidence of genotoxic action of the extract. The anti-inflammatory activity was evidenced by the significant reduction in the production o... / Mestre

Orientador: Claudia Maria Bertan Membrive / Banca: Rui Machado / Banca: Cecílio Viega Soares Filho / Resumo: Estratégias farmacológicas são empregadas para reduzir a mortalidade embrionária em fêmeas bovinas. Objetivou se comparar o efeito do Flunixin Meglumine (FM), Somatotropina Recombinante Bovina (bST) e/ou Gonadotrofina Coriônica Humana (hCG) na redução da mortalidade embrionária em vacas Nelore no período compreendido entre o 15º e 19º dias da gestação, baseando se na taxa de concepção aos 40 dias de gestação. A hipótese é que vacas tratadas com FM, bST e/ou hCG, apresentam menor mortalidade embrionária e maiores taxas de concepção. Vacas Nelores (n=975), lactantes, com 35 a 70 dias pós parto, receberam no D 10 um dispositivo intravaginal contendo 1g de Progesterona (DIB®) associado a uma njeção de 2mg de Benzoato de Estradiol (Gonadiol®), via intramuscular (IM). No D 2 o dispositivo foi removido e os animais receberam uma injeção de 112,5Cg de D Cloprostenol (Preloban®); 300UI de Gonadotrofina Coriônica Eqüina (Folligon®) e 1mg de Cipionato de Estradiol (ECP®), todos via IM. Após 48 horas da última injeção (D0), as fêmeas foram submetidas à inseminação artificial em tempo fixo (IATF) e sete dias após foram divididas equitativamente em oito grupos para receberem um dos seguintes tratamentos: não tratadas (Grupo Controle; n= 124); FM no D16 (Grupo FM; n=122); bST no D7 (Grupo bST; n=119); bST no D7 + FM no D16 (Grupo bST + FM; n=121); hCG no D7 (Grupo o hCG; n=124); hCG no D7 + FM no D16 (Grupo hCG + FM; n=124); bST e hCG no D7 (Grupo bS T + hCG; n=120) ou bST e hCG no D7 + FM no D16 (Grupo bS T + hCG +FM; n=121). Utilizou se 2.500UI de hCG (Chorulon®), IM; 500mg de bST (Boostin®), via subcutânea, na fossa ísqueo retal e 2,2mg/Kg de FM (Banamine®), IM. Amostras de sangue foram coletadas no D7 e D16, para mensuração das concentrações plasmáticas de progesterona (P4) por radioimunoensaio. O diagnóstico de gestação foi realizado 40 dias após... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Pharmacologic strategies are employed to reduce the embryonic mortality in bovine females. The aim of the study was to compare the effect of Flunixin Meglumine (FM), Recombinant Bovine Somatotropin (bST) and/or Human Corionic Gonadotropin (hCG) on the reduction of embryonic mortality in Nelore cows in the period between the 15th and 19th days of gestation, based on conception rate at 40 days gestation. The hipothesis is that, cows treated with FM, bST and/or hCG, show lower embryo mortality and greater conception rates. Lactating Nelore cows (n=975), 35 to 70 days postpartum, received on D 10 an intravaginal device containing 1g of Progesterone (DIB®) associated with an injection of 2mg of estradiol benzoate (Gonadiol®), i.m. On D 2 the device was removed and the animals received one injection of 112,5Cg of D Cloprostenol (Preloban®); 300UI of Equine Chorionic Gonadotropin (Folligon®) and 1mg of Estradiol Cipionate (ECP®), all through i.m. route. After 48 hours from the last injection (D0), the cows were submitted to Fixed Timed Artificial Insemination (FTAI) and seven days later were divided equitably in eight groups and received one of the following treatments: untreated (Group Control; n= 124); FM on D16 (Group FM; n=122); bST on D7 Group bST; n=119); bST on D7 + FM on D16 (Group bST+FM; n=121); hCG on D7 (Group hCG; n=124); hCG on D7 + FM on D16 (Group hCG+FM; n=124); bST and hCG on D7 (Group bST+hCG; n=120) or bST and hCG on D7 + FM on D16 (Group bST+ hCG+FM; n=121). Used 2.500UI of hCG (Chorulon®), IM; 500mg of bST (Boostin®), through subcutaneous route, on the ischiorectal fossa and 2,2mg/Kg of FM (Banamine®), i.m. Blood samples were collected on D7 and D16, to measure plasmatic progesterone (P4) concentration through radioimuneassay. Pregnancy diagnosis was performed by ultrasound exam 40 days after FTAI. The variable rate design was analyzed by logistic... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador : André Gonzaga dos Santos / Banca: Marcio Adriano Andréo / Banca: Cleverton Roberto de Andrade / Banca: Rosangela Gonçalves Peccinini / Banca: Jean Leandro dos Santos / Resumo: Casearia sylvestris Sw. (Salicaceae) é uma espécie vegetal arbórea ou arbustiva conhecida como "guaçatonga", utilizada na medicina popular por suas propriedades antisséptica, antiofídica, antiulcerativa, anti-inflamatória e cicatrizante. A partir da droga vegetal (folhas) desenvolveu-se tratamento prévio e controle de qualidade, com o objetivo de caracterizar a planta como matéria-prima farmacêutica. O extrato etanólico foi produzido a partir de 2,0 Kg da droga vegetal e o rendimento da extração foi de 11,8% (p/p). Foi realizada uma extração em fase sólida (EFS) com o extrato etanólico seco de folhas de C. sylvestris. A partir da fração EFSCs2 foi isolada uma substância por cromatografia em coluna de fase normal que foi identificada por análises espectrométricas como a casearina J. Análises cromatográficas foram realizadas para identificação e quantificação de diterpenos clerodânicos no extrato etanólico e suas frações. Os diterpenos clerodânicos caseargrewiina F, casearinas B e X foram identificados e o teor de diterpenos clerodânicos totais foi determinado por CLAE-DAD no extrato EEtCs e na fração EFSCs2, cujos valores foram 27,4% e 50,6%, respectivamente. Das análises por cromatografia líquida de alta eficiência foram também obtidos os teores de casearina J e caseargrewiina F no extrato etanólico das folhas, cujos valores foram de 2,35 e 1,1%, respectivamente. Para avaliarmos a atividade anti-inflamatória foi realizado o ensaio do edema de pata em ratos sendo os resultados obtidos promissores comparando-se à indometacina e tanto frações (EFSCs 1 e 2) como substâncias purificadas (Casgw F e Cas B) não apresentaram grau de lesão gástrica nos animais quando analisados macroscopicamente, ao contrário da indometacina que apresentou grau 5 (máximo) de lesão pelo índice de ulceração. Na atividade anti-inflamatória crônica (artrite)... / Abstract: Casearia sylvestris Sw (Salicaceae) is a tree or shrub known as "guaçatonga" used in folk medicine for its antiseptic, antiophidian, antiulcerogenic, anti-inflammatory and wound healing properties. From the leaves it was developed pretreatment and quality control, in order to characterize the plant as pharmaceutical raw material. The ethanol extract was produced from 2.0 kg of the plant drug, and the extraction yield was 11.8% (w/w).It was performed a solid phase extraction (EFS) with 20.0 g of the ethanol extract of dried leaves of C. sylvestris. The purification was carried out in three steps, including a solid phase extraction by means of silica and activated carbon, normal-phase column chromatography and aqueous reversed-phase high efficiency chromatography. The diterpenes caseargrewiin F, casearins B and X. were used as standards. The clerodane type diterpenes were identified and quantified via HPLC-DAD in the extract EEtCs and EFSCs2 fraction whose values were 27.4% and 50.6%, respectively. From EFSCs2 fraction it was isolated a substance identified via spectrometric analysis as casearin J, existing in the literature. From the HPLC-UV analysis the casearin J and caseargrewiin F contents were gotten in the leaves ethanol extract, which values were 2.35 and 1.1% respectively. In order to evaluate the anti-inflammatory activity, rat's paw edema was performed where the results were promising regarding to indomethacin and, either extract (EEtCs), fractions (EFSCs 1 and 2) and purified substances (Cas B and CasgwF) showed no gastric wound in the animals stomach when macroscopically examined, in opposite to indomethacin that showed wound level 5 (maximum) on the ulceration index. In the chronic anti-inflammatory activity (arthritis) the reestablishment of the joints proportion for the group treated with dexamethasone (1 mg / kg) was 80 % and for the group treated with the ... / Doutor

Orientador: Ana Paula Girol / Coorientador: Sonia Maria Oliani / Banca: Ana Cláudia Polli Lopes / Banca: Wanessa Silva Garcia Medina / Resumo: O processo de reparo de lesões térmicas pode ser dividido nas fases de inflamação, proliferação e remodelação. No seu processo de desgranulação, os mastócitos (MCs) liberam fatores quimiotáticos, citocinas e proteases, como triptase e quimase, para o meio extracelular, contribuindo na degradação da matriz lesada e síntese de uma nova. Além disso, estudos indicam que os MCs armazenam a proteína anti-inflamatória anexina A1 (AnxA1), envolvida na inflamação, apoptose, crescimento e diferenciação celular. Contudo, não se conhecem relatos da expressão e função da AnxA1 no reparo de queimaduras. Diante disso, os objetivos desse estudo foram quantificar e avaliar a ativação, acúmulo de histamina e heterogeneidade para triptase e quimase dos MCs, bem como, verificar a expressão da AnxA1, quantificar macrófagos, e dosar as citocinas TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10 e a quimiocina MCP-1 em modelo de queimadura de segundo grau em ratos Wistar. Para o desenvolvimento da lesão os animais foram anestesiados e submetidos à aplicação de um bloco metálico aquecido no dorso. Os animais foram divididos em grupos controles e tratados com pomada de sulfadiazina de prata a 1% (SDP 1%). As análises foram realizadas em 3, 7, 14 e 21 dias após injúria, e também em fragmentos de pele normal. Avaliações macroscópicas e histopatológicas da cicatrização confirmaram as características de queimadura de segundo grau e a melhor evolução da cicatrização nos animais tratados. A quantificação dos MCs mostrou grande quantidade de células intactas na pele normal e redução significante dessas células nas fases de inflamação (dia 3) e de proliferação (dia 7). Nas fases de proliferação de matriz (dia 14) e remodelação (dia 21) foi verificada maior quantidade de MCs nos animais controles e essas células foram observadas, principalmente, desgranuladas no dia 14 e... / Abstract: The repair process of thermal injury can be divided into phases of inflammation, proliferation and remodeling. The mast cells (MCs) in their degranulation process, release chemotactic factors, cytokines and proteases, as tryptase and chymase, to the extracellular environment contributing to the degradation of damaged matrix and synthesis of a new one. Moreover, studies indicate that MCs store the antiinflammatory protein annexin A1 (AnxA1) which involved in inflammation, apoptosis, growth and cell differentiation. However, there are no known reports of the expression and function of AnxA1 in burns repair. Thus, the objectives of this study were to quantify, assess the activation, histamine accumulation and heterogeneity for tryptase and chymase of MCs, as well as, check the expression of AnxA1, associated with macrophages quantification and the levels of TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10 and MCP-1 in a second degree burn model in rats. For the development of the lesions, animals were anesthetized for applying a water-heated metal block in the dorso. The animals were divided into control and treated or not with the cream of silver sulfadiazine 1% (SDP 1%). The analyzes were performed on 3, 7, 14 and 21 days after injury, and also in normal skin fragments. Macroscopic and histopathological evaluations of healing confirmed the burning characteristics of second degree and the better progress of wound repair in treated animals. Quantification of MCs showed large amount of intact cells in normal skin and a significant reduction of these cells in the stages of inflammation (day 3) and proliferation (day 7). In the phases of matrix proliferation (day 14) and remodeling (day 21) it was observed increased amount of MCs, only in the control animals, and these cells were mainly degranulated on day 14, but intact on day 21. Also, in the treated group on day 7 and in both groups on day 14, it was ... / Mestre

Orientador: Sonia Maria Oliani / Coorientador: Cristiane Damas Gil / Banca: Eloisa Amália Vieira Ferro / Banca: Claudia Regina Bonini Domingos / Resumo: Introdução: A inflamação ocular é geralmente tratada com glicocorticoides, cujos efeitos colaterais estimulam novas estratégias terapêuticas. Nesse aspecto, destacamos a Galectina-1 (Gal-1), proteína com potencial anti- inflamatório, cuja ação em tecidos oculares foi pouco investigada. Objetivo: No presente estudo avaliamos a expressão da Gal-1 nas células epiteliais pigmentadas da retina humana (ARPE-19), após ativação pelo inflamógeno lipopolissacarídeo (LPS) e tratamentos com a Gal-1 recombinante humana (hrGal-1). Métodos: Para avaliar o efeito anti-inflamatório da Gal-1, as células ARPE-19 foram cultivadas em meio DMEM:F-12 completo (controle), ativadas pelo LPS (10 µg/mL) e tratadas com hrGal-1 (0,04; 0,4 e 4 µg/mL) ou glicocorticoide dexametasona (Dex: 1µM), nos períodos de 2, 8, 24 e 48 horas. Nessas condições, avaliamos a citotoxicidade dos tratamentos farmacológicos por ensaios de viabilidade celular e, a expressão da Gal-1 endógena nas células ativadas pelo LPS e tratadas com Dex, por meio da imunocitoquímica ultraestrutural. Nos sobrenadantes, em todos os tempos experimentais, analisamos os níveis das citocinas IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IL-1β e MCP-1 pelo método de ELISA. Com a finalidade de determinar a especificidade do efeito da hrGal-1, via domínio reconhecedor de carboidrato (CRD) sobre as células ARPE-19, adicionamos nas culturas os açúcares com ou sem afinidade pelo CRD (respectivamente β-galactose ou sucrose - 100mM) e, após 8 horas, os sobrenadantes foram coletados para análise das citocinas pró-inflamatórias IL- 6 e IL-8. Ainda, investigamos a expressão da enzima ciclo-oxigenase 2 (COX- 2), um importante mediador do processo inflamatório, nos períodos de 8 e 24 horas, por imunofluorescência. Resultados: Os ensaios de viabilidade celular mostram que os diferentes tratamentos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction: Ocular inflammation has often been treated with glucocorticoids, however, collateral side effects stimulate the search for new therapeutic strategies. In view of this, we emphasis on Galectin-1 (Gal-1), a protein with anti-inflammatory potential that has been poorly investigated in ocular tissues. Aim: The aim of this paper is to evaluate the expression and mechanism of action of Gal-1 in human retinal pigment epithelial cells (ARPE-19 cells) activated by lipopolysaccharide (LPS) and treated with recombinant human Gal- 1 (hrGal-1). Methods: To assess the anti-inflammatory effect of Gal-1, ARPE- 19 cells were cultured in DMEM: complete F-12 (control), activated by LPS and treated with hrGal-1 (0,04; 0,4 e 4 µg/mL)or glucocorticoid dexamethasone (Dex: 1μM) at 2, 8, 24 and 48 hours. Under these conditions, we evaluated the cytotoxicity of pharmacological treatments by cell viability assays, and the expression of the endogenous Gal-1 in cells activated by LPS and treated with Dex by ultrastructural immunocytochemistry. In the supernatants of these cells, in all experimental periods, we analyzed the levels of IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IL-1β and MCP-1 by ELISA. In order to determine the specificity of the effect of hrGal-1 via carbohydrate recognizer domain (CRD) on ARPE-19 cells, we added sugars to the culture with or without their affinity for the CRD (respectively β-galactose or sucrose - 100 mM), and these supernatants were collected after 8 hours for analysis of pro-inflammatory cytokines IL-6 and IL-8. We also analyzed the expression of the cyclooxygenase-2 (COX-2) enzyme, an important inflammatory process mediator, at 8 and 24 hours by immunofluorescence. Results: The assays of cell viability show that the different drug treatments have low cytotoxicity. The cells activated with... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Yara Marcondes Machado Castiglia / Banca: Marco Aurélio Marangoni / Banca: Leopoldo Muniz da Silva / Banca: Eliana Marisa Ganem / Banca: Norma Sueli Pinheiro Módolo / Resumo: O parecoxibe, único anti-inflamatório inibidor seletivo da COX-2 disponível para uso parenteral, tem comprovada eficácia analgésica no tratamento de dor pós-operatória. No entanto, seus efeitos adversos renais não estão esclarecidos, principalmente em situações de hipoperfusão renal, como hemorragia e hipovolemia. A isquemia renal estimula a produção de mediadores inflamatórios como citocinas, responsáveis pelo início e progressão da inflamação e lesão renal. O objetivo desta pesquisa foi avaliar se o pré-tratamento com dose única de parecoxibe tem influência na função, na lesão celular e na resposta inflamatória do rim de ratos submetidos à hemorragia aguda intra-operatória. Quarenta e quatro ratos Wistars adultos anestesiados com sevoflurano foram divididos, de forma aleatória, em quatro grupos (n=11 animais por grupo): grupo placebo/ sem hemorragia (Plac/SH); grupo parecoxibe/ sem hemorragia (Pcx/SH); grupo placebo/ hemorragia (Plac/H) e grupo parecoxibe/ hemorragia (Pcx/H). Receberam bolus endovenoso em dose única de parecoxibe (20mg/kg em 2 mL/kg) ou placebo (solução salina isotônica 2mL/kg) de acordo com a distribuição por grupos, e solução de para-aminohipurato de sódio (PAH) - 1 mg seguido de 1 mg/h - e de iotalamato de sódio (IOT) - 0,5 mg seguido de 0,25 mg/h, até o final do experimento. Os animais dos grupos com hemorragia sofreram sangria correspondente a 30% da volemia (em três etapas de retirada de 10% com intervalos de 10 minutos). Amostras de sangue foram colhidas para determinação do hematócrito e das concentrações de PAH, IOT e das citocinas séricas (IL-1α, IL-1β, IL-6, IL-10 e TNF-α) após trinta minutos da administração do bolus de parecoxibe ou placebo (momento Mi) e trinta minutos após o terceiro tempo de sangria (momento Mf). Foi realizada nefrectomia bilateral, seguida do sacrifício dos ratos. Os rins coletados foram divididos ... / Abstract: Parecoxib, the only selective COX-2 inhibitor available for parenteral use, has proven analgesic efficacy in the treatment of postoperative pain. However, adverse renal effects are not clear, especially in situations of renal hypoperfusion, such as hemorrhage and hypovolemia. Renal ischemia stimulates the production of inflammatory mediators, such as cytokines, responsible for the onset and progression of inflammation and renal injury. The aim of this study was to evaluate whether pretreatment with a single dose of parecoxib affects the function, cell injury and inflammatory response of the kidney of rats subjected to acute intraoperative hemorrhage. Forty-four adult Wistar rats anesthetized with sevoflurane were randomized into four groups (n = 11 animals per group): placebo/ without hemorrhage (Plac/NH); parecoxib/ without hemorrhage (Pcx/NH); placebo/ hemorrhage (Plac/H), and parecoxib/ hemorrhage (Pcx/H). They all received a single dose of intravenous parecoxib (20mg.kg-1 at 2 mL.kg-1) or placebo (isotonic saline 2mL.kg-1) according to group distribution. They also received solution of sodium para-aminohippurate (PAH) - 1 mg followed by 1 mg.h-1, and iothalamate sodium (IOT) - 0.5 mg followed by 0.25 mg.h-1, until the end of the experiment. Animals in groups with hemorrhage suffered bleeding corresponding to 30% of volemia (three-stage withdrawal of 10% with a 10 minute interval). Blood samples were collected to measure hematocrit and concentrations of PAH, IOT and serum cytokines (IL-1α, IL-1β, IL-6, IL-10 and TNF-α) thirty minutes after administration of bolus of parecoxib or placebo (Mi) and thirty minutes after the third time of bleeding (Mf). Bilateral nephrectomy was then performed, followed by sacrifice of the rats. Kidneys were longitudinally divided into two halves - one for histological analysis and the other to obtain the renal supernatant of proteins for determination of tissue cytokines (IL-1α, IL-1β, IL-6, IL-10 ... / Doutor