Made available in DSpace on 2016-05-11T12:56:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 leonardo_ruivo_ioc_mest_2016.pdf: 2337878 bytes, checksum: 69b7ee821ee7eed53dca00b82150fc69 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Alterações no perfil de glicosilação de proteínas, células e tecidos têm sido utilizadas como marcadores biológicos para processos fisiológicos e patológicos. Glicoconjugados contendo o ácido siálico (Neu5Ac) estão envolvidas em interações celulares e parasito-hospedeiro, tráfego de linfócitos e regulação do sistema imune. O Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas (DC), expressa em sua superfície e libera no plasma do hospedeiro, uma enzima restrita ao gênero Trypanosoma, a trans-sialidase (TS). Esta é capaz de transferir Neu5Ac de moléculas doadoras e realocá-las em moléculas na superfície do parasito ou sialilar glicoproteínas de células do hospedeiro. A molécula CD43 é um importante aceptor de Neu5Ac em células T e um provável sítio de ação da TS. Na infecção experimental pelo T. cruzi, as células T CD8+ apresentam, majoritariamente, perfis segregados (i) perforina+ (Pfn+), com ação citotóxica, ou (ii) interferon-gama+ (IFN\03B3+), com perfil inflamatório. Estas células estão diferencialmente compartimentalizadas e atuam de forma antagônica, enquanto as Pfn+ se acumulam na inflamação cardíaca e contribuem para a injúria tecidual, as IFN\03B3+ estão majoritariamente na periferia (sangue e baço) e atuam de forma benéfica. Neste trabalho, propomos que na infecção pelo T. cruzi há alterações de glicofenótipos em proteínas séricas e subpopulações de linfócitos T CD8+ funcionalmente segregadas. Camundongos C57BL/6 foram infectados pela cepa Colombiana do T. cruzi e analisados clinicamente. O glicofenótipo de proteínas séricas foi analisado por espectrometria de massas (MALDI-TOF) e o glicofenótipo de tecido cardíaco e de células do baço foi analisado usando lectinas por histoquímica e citometria de fluxo, respectivamente Não detectamos modificação no perfil glicosídico em proteínas séricas em animais infectados. Observamos, no tecido cardíaco, reduzida marcação para a lectina Peanut agglutinin (PNA), aumento para Sambucus nigra (SNA) e não alteração para Maackia amurensis (MAL) em células musculares e inflamatórias. Notamos nas fases aguda (42 dpi) e crônica (120 dpi) aumento na frequência de células PNA+ nas células T CD8+CD43+ e CD4+CD43+, redução no percentual de células SNA+ nas células T CD8+ e CD4+ e diminuição na proporção de células MAL+ nas células T CD4+ e CD8+CD4+. Células T CD8+ totais ou CD8+PNA+ apresentaram perfis semelhantes de ativação (CD44+CD62L-), migração (LFA-1+CCR5+ ou LFA-1+CCR1+) e funcionalidade (Pfn+, Pfn+IFN\03B3+ ou IFN\03B3+). Em 120 dpi, detectou-se enriquecimento de células CD8+PNA+IFN\03B3+ no baço. Assim, durante a DC experimental, células T CD8+PNA+ apresentam-se ativadas e com potencial de migrar e exercer atividade inflamatória (IFN\03B3+), contudo estas não foram detectadas em tecido cardíaco. Resta-nos esclarecer se estas células não migram para este tecido, acumulando-se na periferia, ou se ao entrarem no tecido cardíaco têm seu glicofenótipo alterado ou morrem de modo seletivo. Embora nossos achados não permitam a identificação de biomarcadores de natureza glicosídica de progressão e/ou gravidade da DC, abrem perspectivas para explorar outros modelos experimentais de infecção e para estudos sobre a compartimentalização de células fenotipicamente distintas e funcionalmente relacionadas à proteção contra a injúria cardíaca na infecção pelo T. cruzi / Changes in glycosylation profile of proteins, cells and tissues have been used as biological markers of physiological and pathological processes. Glicoconjugates containing sialic acid (Neu5Ac) are involved in cell and host-parasite interactions, lymphocyte traffic and regulation of the immune system. Trypanosoma cruzi, the causative agent of Chagas disease (CD), expresses on the surface and releases in the host plasma, a restricted enzyme to the genus Trypanosoma, the trans-sialidase (TS). This enzyme transfers Neu5Ac from donor molecules and relocates them on parasite surface molecules or sialylates glycoproteins of the host cells. The CD43 molecule is a major acceptor of Neu5Ac on T cells and a target site for TS. In experimental T. cruzi infection, CD8+ T cells have, mostly, segregated profiles (i) perforin+ (Pfn+) with cytotoxic action, or (ii) interferon-gamma+ (IFN\03B3+), with inflammatory profile. These cells are differentially compartmentalized and play antagonistic roles, while the Pfn+ cells accumulate in cardiac inflammation and contribute to tissue injury, the IFN\03B3+ are, mostly, at the periphery (blood and spleen) and play a beneficial role. In the present study, we propose that in T. cruzi infection there are glycophenotype changes in serum proteins and subpopulations of functionally segregated CD8+ T lymphocytes. C57BL/6 mice were infected with the Colombian strain of T. cruzi and analyzed for clinical changes. The glycophenotype of serum proteins was analyzed by mass spectrometry (MALDI-TOF) and glycophenotypes of the cardiac tissue and splenic cells were analyzed using a lectin-based immunohistochemistry and flow cytometry, respectively In infected mice, we did not detect changes in glycoside profile of serum proteins. In the cardiac tissue, we observed reduced staining for the lectin Peanut agglutinin (PNA), increased for Sambucus nigra (SNA) and no alterations for Maackia amurensis (MAL) in muscle and inflammatory cells. In the acute (42 dpi) and chronic (120 dpi) phases, we noticed increased frequency of PNA+ cells among CD8+CD43+ and CD4+CD43+ T cells, reduced percentage of SNA+ cells among CD8+ and CD4+ T cells and decreased proportion of MAL+ cells among CD4+ and CD8+CD4+ T cells. Total and PNA+ CD8+ T cells showed similar profiles of activation (CD44+CD62L-), migration (LFA-1+CCR5+ cells or LFA-1+CCR1+) and functionality (Pfn+, Pfn+IFN\03B3+ or IFN\03B3+). At 120 dpi, there is an enrichment in IFN\03B3+ cells among splenic CD8+PNA+. Thus, in experimental CD PNA+ CD8+T cells are activated and potentially able to migrate towards heart tissue and show inflammatory profile (IFN\03B3+); however, PNA+ cells were not detected in this tissue. It remains to be clarified whether these cells do not migrate to this tissue, accumulating in peripheral tissues, or whether they enter the cardiac tissue but have their glycophenotype modified or selectively dye. Although, our finds do not allow identifying glycosidic biomarkers of progression and/or severity of CD, they open new pathways to be explored using other experimental models of infection and studying the compartmentalizationof phenotypically and functionally distinct cells associated with detrimental or protective role in heart injury in T. cruzi infection

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-04-26T19:16:13Z No. of bitstreams: 1 JonalsonNogueiraAraujo_DISSERT.pdf: 2283136 bytes, checksum: 83cd9344cc38a30060e338ebb45988cd (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-04-28T22:04:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 JonalsonNogueiraAraujo_DISSERT.pdf: 2283136 bytes, checksum: 83cd9344cc38a30060e338ebb45988cd (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-28T22:04:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JonalsonNogueiraAraujo_DISSERT.pdf: 2283136 bytes, checksum: 83cd9344cc38a30060e338ebb45988cd (MD5) Previous issue date: 2015-06-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Sementes de plantas s?o reservat?rios de mol?culas com grande potencial para elabora??o de bioprodutos e por este motivo uma especial aten??o tem sido direcionada na busca de prote?nas bioativas com a??o antimetab?lica e propriedades farmacol?gicas. As lectinas de plantas s?o prote?nas com atividades biol?gicas relacionadas a defesa, mas que podem ser utilizadas, heterologamente, como interferentes no metabolismo de outros organismos. Uma lectina das sementes de Canavalia maritima (CML) foi purificada em dois passos, pelo fracionamento com sulfato de am?nio seguido pela cromatografia de afinidade em coluna Sephadex G- 50. CML foi analisada por SDS-PAGE e parte de sua sequ?ncia de amino?cidos determinada por espectrometria de massas. Os 20 res?duos identificados apresentaram 100% de identidade com ConM. ConM foi testada contra eritr?citos do sangue perif?rico humano e foi constatado a aus?ncia de toxicidade quando incubados com at? 1000 ?g/mL da prote?na. J? contra c?lulas mononucleares, a lectina n?o foi significativamente t?xica nas concentra??es de 1, 2,5 e 5 ?g/mL, mas o foi a partir da concentra??o 7 ?g/mL e contra a linhagem RAEC a prote?na n?o apresentou toxicidade significante com 25 ?g/ml da prote?na. Outros ensaios de citotoxicidade revelaram que a ConM ? t?xica para as linhagens tumorais A549, 786- 0, HT-29 e HeLa no intervalo entre 24 e 72 horas, principalmente nas concentra??es de 5, 7 e 10 ?g/ml. ConM foi capaz de aglutinar as formas promastigotas de Leishmania spp na concentra??o de 6,25 ?g/ml. Quanto a a??o contra Candida spp, nenhuma das concentra??es testadas (1 a 500 ?g/ml) foi capaz de interferir no crescimento. Quando avaliada a atividade bacteriost?tica, a ConM nas concentra??es variando de 0,39 a 400 ?g/ml n?o inibiu o crescimento de Escherichia coli, j? para Staphylococcus aureus a concentra??o de 25 ?g/ml se mostrou ativa, reduzindo o crescimento em 75 %. Com base nos dados obtidos, a lectina isolada corresponde a uma isolectina do tipo ConA, e suas propriedades anti-tumoral, bacteriost?tico e aglutinante para Leishmania precisam ser melhor investigados para que seu potencial biotecnol?gico seja explorado. / Plant seeds are reservoirs of molecules with great potential for development of bioproducts and for this reason special attention has been directed in the search of bioactive proteins with antimetabolic and pharmacological properties action. Plant lectins are proteins with biological activities related to defense, but that can be used, heterologously as interfering with the metabolism of other organisms. A Canavalia mar?tima seeds lectin (CML) was purified in two steps by ammonium sulfate fractionation followed by affinity chromatography on Sephadex G-50 column. CML was analyzed by SDS-PAGE and part of its amino acid sequence determined by mass spectrometry. The 20 resulting residues identified showed 100% identity with conm. ConM was tested against erythrocytes of human peripheral blood and it was observed absence of toxicity when incubated with up to 1000 ?g/mL of protein. Since against mononuclear cells, the lectin was not significantly toxic at concentrations of 1, 2.5 and 5 ?g/mL, but it was from concentration 7 ?g/mL. Against RAEC lineage protein showed no significant toxicity with 25 ?g/mL of protein. Other cytotoxicity assays revealed that CONM is toxic for the tumor cell lines A549, 786-0, HT-29 and HeLa in the range between 24 and 72 hours, particularly at concentrations of 5, 7 and 10 ?g/mL. ConM was still able to agglutinate promastigotes of Leishmania spp at concentrations of 6.25 ?g/mL. About action against Candida spp any of the tested concentrations (1 to 500 ?g/ml) was able to interfere with growth. When evaluated bacteriostatic activity, ConM in concentrations ranging from 0.39 to 400 ?g/mL did not inhibit the growth of Escherichia coli, but the concentration of 25 ?g/mL proved active aganist Staphylococcus aureus, reducing its growth by 75%. Based on these data, the lectin corresponds to a isolectin ConA-like, and its anti-tumor properties, bacteriostatic and binder for Leishmania need to be further investigated for its biotechnological potential exploited.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / As lectinas de algas marinhas possuem vÃrias aplicaÃÃes farmacolÃgicas. O objetivo deste trabalho foi caracterizar parcialmente a estrutura e avaliar os efeitos em modelos clÃssicos de inflamaÃÃo da lectina da alga marinha verde Caulerpa cupressoides. A lectina de Caulerpa cupressoides (LCc) foi extraÃda com tampÃo Tris-HCl 25 mM, pH 7,5 e isolada por cromatografia de troca iÃnica em coluna de DEAE-celulose. A caracterizaÃÃo estrutural parcial apresentou uma sequÃncia aminoterminal com 31 resÃduos de aminoÃcidos, obtida de acordo com o mÃtodo de degradaÃÃo de Edman, enquanto que na espectroscopia de ressonÃncia magnÃtica nuclear unidimensional 1H para a LCc purificada por Sephadex G-100 e obtida por DEAE-celulose, foi demostrado uma similaridade entre os sinais obtidos em ambos os espectros. A atividade anti-inflamatÃria foi avaliada em ratos Wistar machos (n=6), utilizando o modelo de edema de pata induzidos por carragenana (700 μg/pata), dextrana (500 μg/pata), histamina (100 μg/pata), serotonina (20 μg/pata) ou bradicinina (30 μg/pata). Grupos de animais foram submetidos ao tratamento com LCc (0,1; 1,0 ou 10,0 mg/kg; i.v.), 30 min antes do estÃmulo inflamatÃrio. Foi avaliado o envolvimento da LCc (1,0 mg/kg) na via da Heme oxigenase-1. Foram utilizados grupos que receberam tratamento com LCc ligada ao inibidor mucina (8,0 mg/kg; i.v.) ou somente mucina (8,0 mg/kg; i.v.) e dexametasona (1,0 mg/kg; s.c.) foram utilizados como controles. O efeito edematogÃnico de LCc foi avaliado aplicando as doses de 0,1; 1,0 ou 10 mg/kg (i.pl.). No ensaio de edema de pata induzido por carragenana, LCc reduziu a formaÃÃo de edema sendo confirmado pela determinaÃÃo dos nÃveis teciduais de mieloperoxidase. A LCc (1,0 mg/kg) ligada a mucina nÃo apresentou efeito anti-inflamatÃrio no edema de pata induzido por carragenana, exceto na primeira hora apÃs o estÃmulo. No edema induzido por dextrana, LCc tambÃm inibiu o edema osmÃtico. Apenas a dose de 1,0 mg/kg foi utilizada no edema induzido por histamina reduzindo em 40% o edema no intervalo de 30 min LCc (1,0 mg/kg), entretanto, nÃo reduziu a formaÃÃo de edema induzido por serotonina ou bradicinina. AlÃm disso, na anÃlise histolÃgica do tecido subplantar, LCc (1,0 e 10,0 mg/kg) foi capaz de reduzir a migraÃÃo celular. Na presenÃa de ZnPP IX (3,0 mg/kg; s.c.), LCc perdeu sua capacidade inibir o edema induzido por carragenana, exercendo seu mecanismo de aÃÃo anti-inflamatÃrio atravÃs do envolvimento da via da HO-1. Enquanto que na imunohistoquÃmica, LCc (10 mg/kg) reduziu a expressÃo de IL-1β, porÃm ocorreu intensa marcaÃÃo das citocinas TNF-α e IL-6, alÃm da expressÃo de HO-1, nos grupos tratados com a mesma dose de LCc. Com relaÃÃo ao efeito edematogÃnico, LCc foi capaz de induzir intenso processo inflamatÃrio com efeito dose-dependente. No entanto, o edema induzido com a dose de 10 mg/kg de LCc foi foi inibido por indometacina, meclizina, pentoxifilina e dexametasona. Portanto, a LCc quando parcialmente caracterizada apresentou na sua sequÃncia aminoterminal uma identidade de 43% com a proteÃna da alga verde unicelular Chlamydomonas reinhardtii e apresentou propriedades anti- e prÃ-inflamatÃrias, sendo considerada um agente terapÃutico em potencial para estudos futuros nos processos inflamatÃrios. / Lectins seaweed have various pharmacological applications. This work was partially characterize the structure and evaluate the effects on classical models of inflammation lectin of the green seaweed Caulerpa cupressoides. The Caulerpa cupressoides lectin (CcL) was extracted with Tris-HCl 25 mM, pH 7.5 and isolated by ion exchange chromatography on DEAE-cellulose. Structural characterization showed a partial aminoterminal sequence with 31 amino acid residues, obtained according to the method of Edman degradation, while in nuclear magnetic resonance spectroscopy to the CcL 1H-NMR purified by Sephadex G-100 and DEAE-cellulose obtained by was demonstrated similarity between signals obtained in both spectra. The anti-inflammatory activity was evaluated in male Wistar rats (n = 6), using the model of paw edema induced by carrageenan (700 μg/paw), dextran (500 μg/paw), histamine (100 μg/paw), serotonin (20 μg/paw) or bradykinin (30 μg/paw). Groups of animals were treated with CcL (0.1, 1.0 or 10.0 mg/kg, i.v.) 30 min before the inflammatory stimulus. Was evaluated the involvement of CcL (1.0 mg/kg) towards heme oxygenase-1. Groups were used that were treated with inhibitor CcL linked mucin (8.0 mg/kg, i.v.) or only mucin (8.0 mg/kg, i.v.) and dexamethasone (1.0 mg/kg, s.c.) were used as controls. The effect edematogenic CcL was evaluated by applying the doses of 0.1, 1.0 or 10 mg/kg (i.pl.). In the trial of paw edema induced by carrageenan, CcL reduced edema formation was confirmed by determining tissue levels of myeloperoxidase. CcL (1.0 mg/kg) showed no mucin linked to anti-inflammatory effect on the paw edema induced by carrageenan, except in the first hour after stimulation. In dextran-induced edema, CcL also inhibited the osmotic swelling. Only the dose of 1.0 mg/kg was used in reducing histamine-induced edema by 40% the edema within 30 min CcL (1.0 mg/kg), however, did not reduce the edema induced by serotonin or bradykinin. Besides, in the histological analysis of tissue subplantar, CcL (1.0 and 10.0 mg/kg) was able to reduce cell migration. In the presence of ZnPP IX (3.0 mg/kg, s.c.), CcL has lost its ability to inhibit the carrageenan-induced edema, exerting its mechanism of action anti-inflammatory pathway through the involvement of HO-1. While in immunohistochemistry, CcL (10 mg/kg) reduced the expression of IL-1β, but intense staining occurred cytokines TNF-α and IL-6, and expression of HO-1 in the groups treated with the same dose of CcL. In relation the effect edematogenic, CcL was able to induce intense inflammatory process with dose-dependent effect. However, the induced edema at a dose of 10 mg/kg was CcL was inhibited by indomethacin, meclizine, pentoxifylline and dexamethasone. Therefore, when the CcL partially characterized presented in its aminoterminal sequence of 43% identity with the protein from unicellular green alga Chlamydomonas reinhardtii and showed anti-and pro-inflammatory therapeutic agent is considered a potential for future studies in inflammatory processes.

ANDRADE, Igo Renan Albuquerque de. Destoxificação da torta de mamona por produtos químicos alternativos. 2015. 91 f. Tese (Doutorado em Zootecnia)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by Vitor Campos (vitband@gmail.com) on 2016-10-06T23:04:56Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_iraandrade.pdf: 1066084 bytes, checksum: d0e22653e500e6aad6267d895bef9366 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-10-07T17:45:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_iraandrade.pdf: 1066084 bytes, checksum: d0e22653e500e6aad6267d895bef9366 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-07T17:45:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_iraandrade.pdf: 1066084 bytes, checksum: d0e22653e500e6aad6267d895bef9366 (MD5) Previous issue date: 2015 / The objectives of the present study were to evaluate the use of alternative chemical sources in the degradation and inactivation of ricin and Ricinus communis agglutinin from castor cake; the use of an easily applicable methodology able to precisely identify the biological activity of the lectins present in the castor cake; and the influence of the detoxification process on the nutritional values of the castor cake and estimate the maximum sale price of detoxified cakes so that their use in the concentrate feed replacing soybean meal can be viable. The use efficiency of ten chemical compounds (calcitic limestone, magnesian limestone, sodium chloride, potassium chloride, dicalcium phosphate, monodicalcium phosphate, calcium hydroxide, sodium hydroxide, calcium oxide, and urea) in the inactivation of lectins from castor cake was evaluated, using four different volumes of water. Detoxification analyses were performed by visual observation and densitometry of electrophoresis gels, in addition to hemagglutination assays. After satisfactory results were obtained with the treatments using calcium oxide and sodium hydroxide, analyses of chemical composition; crude protein fractionation; rumen degradation of dry matter, crude protein, and neutral detergent fiber; and intestinal digestibility of crude protein were performed. Next, aiming to analyze the viability of using detoxified castor cake in concentrate diets completely replacing soybean meal, different diets were formulated to estimate its maximum sale costs. Alkaline treatments calcium oxide and sodium hydroxide provided complete inactivation of the lectins from castor cakes. Reagent concentration and water volume were decisive to the inactivation efficiency, with detoxification being effective when 60 or 90 g sodium hydroxide were used with water volumes equal to or greater than 1500 mL/kg castor cake or calcium oxide at the concentration of 90 g with 2500 or 3000 mL water/kg of cake. Chemical detoxification treatments directly influenced the profile of the different nitrogen fractions that compose the dietary crude protein; the rumen degradation parameters of dry matter, crude protein, and neutral detergent fiber; as well as the intestinal digestibility of the rumen-undegradable protein. Chemical detoxification treatments changed the nutritional value and the use of the dietary protein by the ruminant, reducing the nutritional value of the cakes and providing feedstuffs with different nutritional characteristics. Castor cakes treated with calcium oxide allowed a higher level of replacement of soybean meal as compared with the cakes treated with sodium hydroxide. In economic terms, the cakes treated with calcium oxide allowed a higher sale price of the product in relation to those treated with sodium hydroxide. / O presente estudo foi conduzido com o objetivo de avaliar o uso de fontes químicas alternativas na degradação e inativação da ricina e Ricinus communis aglutinina da torta de mamona; o uso de uma metodologia de fácil aplicação, capaz de identificar com precisão a atividade biológica das lectinas presentes na torta de mamona; bem como verificar a influência do processo de destoxificação sobre os valores nutritivos da torta de mamona e estimar o custo máximo de venda das tortas destoxificadas, para que seja viável a sua utilização na ração concentrada, em substituição ao farelo de soja. Foi avaliada a eficácia do uso de dez produtos químicos: calcário calcítico, calcário magnesiano, cloreto de sódio, cloreto de potássio, fosfato bicálcico, fosfato monobicálcico, hidróxido de cálcio, hidróxido de sódio, óxido de cálcio e ureia, na destoxificação das lectinas da torta de mamona, utilizando quatro diferentes volumes de água. As análises de destoxificação foram realizadas através da observação visual e por densitometria de géis de eletroforese, além de ensaios de hemaglutinação. Após verificados resultados satisfatórios dos tratamentos que utilizaram óxido de cálcio e hidróxido de sódio, foram realizadas análises de composição química, fracionamento da proteína bruta, degradação ruminal da matéria seca, proteína bruta e fibra em detergente neutro, além da digestibilidade intestinal da proteína bruta. Em seguida, com o intuito de analisar a viabilidade de uso da torta de mamona destoxificada em rações concentradas, substituindo totalmente o farelo de soja, foram formuladas diferentes rações, buscando estimar os custos máximos de comercialização das mesmas. Verificou-se que os tratamentos químicos alcalinos, óxido de cálcio e hidróxido de sódio, promoveram completa inativação das lectinas das tortas de mamona. A concentração do reagente e o volume de água foram determinantes para a eficácia de tal inativação, sendo a destoxificação eficaz ao se utilizar 60 ou 90 g de hidróxido de sódio em volumes de água iguais ou superiores a 1500 mL/kg de torta de mamona ou óxido de cálcio na concentração de 90 g de reagente com 2500 ou 3000 mL de água/kg de torta de mamona. Os tratamentos químicos de destoxificação influenciaram diretamente o perfil das diferentes frações nitrogenadas que compõe a proteína bruta dietética, assim como os parâmetros de degradação ruminal da matéria seca, proteína bruta e fibra em detergente neutro, bem como a digestibilidade intestinal da proteína bruta não degradável no rúmen. Os tratamentos químicos de destoxificação alteraram o valor nutritivo e o aproveitamento da proteína dietética pelo animal ruminante, observando diminuição do valor nutritivo das tortas e proporcionando alimentos com diferentes características nutricionais. As tortas de mamona tratadas com óxido de cálcio permitiram um nível de substituição do farelo de soja mais elevado, quando comparados às tortas de mamona tratadas com hidróxido de sódio. Em termos econômicos, verificou-se que as tortas tratadas com óxido de cálcio permitiram um maior preço de venda da mesma em relação às tortas tratadas com hidróxido de sódio.

QUEIROZ, Ismael Nilo Lino de. Caracterização estrutural preliminar e efeitos na inflamação da lectina da alga marinha verde Caulerpa cupressoides. 115 f. : Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular, Universidade Federal do Ceará Fortaleza-CE, 2013. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-05-23T13:42:40Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_inlqueiroz.pdf: 2778929 bytes, checksum: 1ecf927693bc8e91aabb5a746c3dfbce (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-07-05T19:19:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_inlqueiroz.pdf: 2778929 bytes, checksum: 1ecf927693bc8e91aabb5a746c3dfbce (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-05T19:19:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_inlqueiroz.pdf: 2778929 bytes, checksum: 1ecf927693bc8e91aabb5a746c3dfbce (MD5) Previous issue date: 2013 / Lectins seaweed have various pharmacological applications. This work was partially characterize the structure and evaluate the effects on classical models of inflammation lectin of the green seaweed Caulerpa cupressoides. The Caulerpa cupressoides lectin (CcL) was extracted with Tris-HCl 25 mM, pH 7.5 and isolated by ion exchange chromatography on DEAE-cellulose. Structural characterization showed a partial aminoterminal sequence with 31 amino acid residues, obtained according to the method of Edman degradation, while in nuclear magnetic resonance spectroscopy to the CcL 1H-NMR purified by Sephadex G-100 and DEAE-cellulose obtained by was demonstrated similarity between signals obtained in both spectra. The anti-inflammatory activity was evaluated in male Wistar rats (n = 6), using the model of paw edema induced by carrageenan (700 μg/paw), dextran (500 μg/paw), histamine (100 μg/paw), serotonin (20 μg/paw) or bradykinin (30 μg/paw). Groups of animals were treated with CcL (0.1, 1.0 or 10.0 mg/kg, i.v.) 30 min before the inflammatory stimulus. Was evaluated the involvement of CcL (1.0 mg/kg) towards heme oxygenase-1. Groups were used that were treated with inhibitor CcL linked mucin (8.0 mg/kg, i.v.) or only mucin (8.0 mg/kg, i.v.) and dexamethasone (1.0 mg/kg, s.c.) were used as controls. The effect edematogenic CcL was evaluated by applying the doses of 0.1, 1.0 or 10 mg/kg (i.pl.). In the trial of paw edema induced by carrageenan, CcL reduced edema formation was confirmed by determining tissue levels of myeloperoxidase. CcL (1.0 mg/kg) showed no mucin linked to anti-inflammatory effect on the paw edema induced by carrageenan, except in the first hour after stimulation. In dextran-induced edema, CcL also inhibited the osmotic swelling. Only the dose of 1.0 mg/kg was used in reducing histamine-induced edema by 40% the edema within 30 min CcL (1.0 mg/kg), however, did not reduce the edema induced by serotonin or bradykinin. Besides, in the histological analysis of tissue subplantar, CcL (1.0 and 10.0 mg/kg) was able to reduce cell migration. In the presence of ZnPP IX (3.0 mg/kg, s.c.), CcL has lost its ability to inhibit the carrageenan-induced edema, exerting its mechanism of action anti-inflammatory pathway through the involvement of HO-1. While in immunohistochemistry, CcL (10 mg/kg) reduced the expression of IL-1β, but intense staining occurred cytokines TNF-α and IL-6, and expression of HO-1 in the groups treated with the same dose of CcL. In relation the effect edematogenic, CcL was able to induce intense inflammatory process with dose-dependent effect. However, the induced edema at a dose of 10 mg/kg was CcL was inhibited by indomethacin, meclizine, pentoxifylline and dexamethasone. Therefore, when the CcL partially characterized presented in its aminoterminal sequence of 43% identity with the protein from unicellular green alga Chlamydomonas reinhardtii and showed anti-and pro-inflammatory therapeutic agent is considered a potential for future studies in inflammatory processes. / As lectinas de algas marinhas possuem várias aplicações farmacológicas. O objetivo deste trabalho foi caracterizar parcialmente a estrutura e avaliar os efeitos em modelos clássicos de inflamação da lectina da alga marinha verde Caulerpa cupressoides. A lectina de Caulerpa cupressoides (LCc) foi extraída com tampão Tris-HCl 25 mM, pH 7,5 e isolada por cromatografia de troca iônica em coluna de DEAE-celulose. A caracterização estrutural parcial apresentou uma sequência aminoterminal com 31 resíduos de aminoácidos, obtida de acordo com o método de degradação de Edman, enquanto que na espectroscopia de ressonância magnética nuclear unidimensional 1H para a LCc purificada por Sephadex G-100 e obtida por DEAE-celulose, foi demostrado uma similaridade entre os sinais obtidos em ambos os espectros. A atividade anti-inflamatória foi avaliada em ratos Wistar machos (n=6), utilizando o modelo de edema de pata induzidos por carragenana (700 μg/pata), dextrana (500 μg/pata), histamina (100 μg/pata), serotonina (20 μg/pata) ou bradicinina (30 μg/pata). Grupos de animais foram submetidos ao tratamento com LCc (0,1; 1,0 ou 10,0 mg/kg; i.v.), 30 min antes do estímulo inflamatório. Foi avaliado o envolvimento da LCc (1,0 mg/kg) na via da Heme oxigenase-1. Foram utilizados grupos que receberam tratamento com LCc ligada ao inibidor mucina (8,0 mg/kg; i.v.) ou somente mucina (8,0 mg/kg; i.v.) e dexametasona (1,0 mg/kg; s.c.) foram utilizados como controles. O efeito edematogênico de LCc foi avaliado aplicando as doses de 0,1; 1,0 ou 10 mg/kg (i.pl.). No ensaio de edema de pata induzido por carragenana, LCc reduziu a formação de edema sendo confirmado pela determinação dos níveis teciduais de mieloperoxidase. A LCc (1,0 mg/kg) ligada a mucina não apresentou efeito anti-inflamatório no edema de pata induzido por carragenana, exceto na primeira hora após o estímulo. No edema induzido por dextrana, LCc também inibiu o edema osmótico. Apenas a dose de 1,0 mg/kg foi utilizada no edema induzido por histamina reduzindo em 40% o edema no intervalo de 30 min LCc (1,0 mg/kg), entretanto, não reduziu a formação de edema induzido por serotonina ou bradicinina. Além disso, na análise histológica do tecido subplantar, LCc (1,0 e 10,0 mg/kg) foi capaz de reduzir a migração celular. Na presença de ZnPP IX (3,0 mg/kg; s.c.), LCc perdeu sua capacidade inibir o edema induzido por carragenana, exercendo seu mecanismo de ação anti-inflamatório através do envolvimento da via da HO-1. Enquanto que na imunohistoquímica, LCc (10 mg/kg) reduziu a expressão de IL-1β, porém ocorreu intensa marcação das citocinas TNF-α e IL-6, além da expressão de HO-1, nos grupos tratados com a mesma dose de LCc. Com relação ao efeito edematogênico, LCc foi capaz de induzir intenso processo inflamatório com efeito dose-dependente. No entanto, o edema induzido com a dose de 10 mg/kg de LCc foi foi inibido por indometacina, meclizina, pentoxifilina e dexametasona. Portanto, a LCc quando parcialmente caracterizada apresentou na sua sequência aminoterminal uma identidade de 43% com a proteína da alga verde unicelular Chlamydomonas reinhardtii e apresentou propriedades anti- e pró-inflamatórias, sendo considerada um agente terapêutico em potencial para estudos futuros nos processos inflamatórios.

Made available in DSpace on 2015-04-01T14:16:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2775324 bytes, checksum: ce5694da4c072e08c6fa70d415e06035 (MD5) Previous issue date: 2013-02-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Lectins are proteins or glycoproteins of non-immune origin that have at least one non-catalytic site which binds reversibly to carbohydrates and glycoconjugates, which makes them ideal models for studies of cell-cell interactions and cell-virus, being good models for the design of new drugs. Some carbohydrate-binding proteins resembling the lectins but with some structural and functional differences, that exclude of this group. The Fabaceae Acacia farnesiana has in its seeds an agglutinin chitin-binding (AFAL), classified as PHA-like1. Its standard chromatographic revealed time-dependent oligomerization. This dynamic behavior complicates the protein crystallization and determining of the three dimensional structure. To better understand the structure-function relationship, this study aimed to examine AFAL anti-inflammatory activity through structural comparison with legume lectins. For both, it was the molecular modeling and docking with a glycan and carrageenan. AFAL model is folded as a β sandwich, which differs from the template used (Pisum sativum lectin) in loop regions, number of β-sheets and carbohydrate site. The docking showed that the protein binds to the carrageenan and glycan at different sites, which can be explained by absence of the sixth β-sheet (frontal β-sheets) and two β-sheets in posterior region. The A. farnesiana agglutinin can inhibit carrageenan induced inflammation due binding it, preventing its entrance into the cell and triggers the inflammatory process reactions. / Lectinas são proteínas e/ou glicoproteínas de origem não imune que possuem, no mínimo, um sítio não-catalítico que se liga de forma reversível a carboidratos e glicoconjugados, o que as tornam modelos ideais de estudos de interações célula-célula, célula-vírus, sendo bons modelos para o desenho de novos fármacos. Algumas proteínas possuem capacidade de se ligar a carboidratos, assemelhando-se às lectinas, porém com algumas diferenças estruturais e funcionais, que as excluem desse grupo. A Fabaceae Acacia farnesiana possui em suas sementes uma aglutinina ligante de quitina (AFAL), classificada como PHA-like1. Seu padrão cromatográfico revelou oligomerização tempo-dependente. Esse comportamento dinâmico dificulta a cristalização dessa proteína, bem como determinação da estrutura tridimensional. Visando compreender melhor a relação estrutura-função, este trabalho teve por objetivo analisar a atividade anti-inflamatória de AFAL através de comparação estrutural com lectinas de leguminosas. Para tanto, fez-se a modelagem e docking molecular com um glicano e a carragenina. A AFAL apresentou um modelo dobrado como um sanduiche de folhas β, que difere do molde utilizado (lectina de Pisum sativum) em regiões de loops, no número de folhas β e no sítio de ligação à carboidratos. O docking revelou que a proteína se liga à carragenina e ao glicano em sítios diferentes, o que pode ser explicado pela ausência de uma sexta folha β frontal e de duas folhas β na região posterior. A aglutinina de A. farnesiana pode inibir a inflamação causada por carragenina, por se ligar a ela, impedindo sua entrada na célula e o desencadeamento de reações típicas do processo inflamatório.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O presente estudo foi conduzido com o objetivo de avaliar o uso de fontes quÃmicas alternativas na degradaÃÃo e inativaÃÃo da ricina e Ricinus communis aglutinina da torta de mamona; o uso de uma metodologia de fÃcil aplicaÃÃo, capaz de identificar com precisÃo a atividade biolÃgica das lectinas presentes na torta de mamona; bem como verificar a influÃncia do processo de destoxificaÃÃo sobre os valores nutritivos da torta de mamona e estimar o custo mÃximo de venda das tortas destoxificadas, para que seja viÃvel a sua utilizaÃÃo na raÃÃo concentrada, em substituiÃÃo ao farelo de soja. Foi avaliada a eficÃcia do uso de dez produtos quÃmicos: calcÃrio calcÃtico, calcÃrio magnesiano, cloreto de sÃdio, cloreto de potÃssio, fosfato bicÃlcico, fosfato monobicÃlcico, hidrÃxido de cÃlcio, hidrÃxido de sÃdio, Ãxido de cÃlcio e ureia, na destoxificaÃÃo das lectinas da torta de mamona, utilizando quatro diferentes volumes de Ãgua. As anÃlises de destoxificaÃÃo foram realizadas atravÃs da observaÃÃo visual e por densitometria de gÃis de eletroforese, alÃm de ensaios de hemaglutinaÃÃo. ApÃs verificados resultados satisfatÃrios dos tratamentos que utilizaram Ãxido de cÃlcio e hidrÃxido de sÃdio, foram realizadas anÃlises de composiÃÃo quÃmica, fracionamento da proteÃna bruta, degradaÃÃo ruminal da matÃria seca, proteÃna bruta e fibra em detergente neutro, alÃm da digestibilidade intestinal da proteÃna bruta. Em seguida, com o intuito de analisar a viabilidade de uso da torta de mamona destoxificada em raÃÃes concentradas, substituindo totalmente o farelo de soja, foram formuladas diferentes raÃÃes, buscando estimar os custos mÃximos de comercializaÃÃo das mesmas. Verificou-se que os tratamentos quÃmicos alcalinos, Ãxido de cÃlcio e hidrÃxido de sÃdio, promoveram completa inativaÃÃo das lectinas das tortas de mamona. A concentraÃÃo do reagente e o volume de Ãgua foram determinantes para a eficÃcia de tal inativaÃÃo, sendo a destoxificaÃÃo eficaz ao se utilizar 60 ou 90 g de hidrÃxido de sÃdio em volumes de Ãgua iguais ou superiores a 1500 mL/kg de torta de mamona ou Ãxido de cÃlcio na concentraÃÃo de 90 g de reagente com 2500 ou 3000 mL de Ãgua/kg de torta de mamona. Os tratamentos quÃmicos de destoxificaÃÃo influenciaram diretamente o perfil das diferentes fraÃÃes nitrogenadas que compÃe a proteÃna bruta dietÃtica, assim como os parÃmetros de degradaÃÃo ruminal da matÃria seca, proteÃna bruta e fibra em detergente neutro, bem como a digestibilidade intestinal da proteÃna bruta nÃo degradÃvel no rÃmen. Os tratamentos quÃmicos de destoxificaÃÃo alteraram o valor nutritivo e o aproveitamento da proteÃna dietÃtica pelo animal ruminante, observando diminuiÃÃo do valor nutritivo das tortas e proporcionando alimentos com diferentes caracterÃsticas nutricionais. As tortas de mamona tratadas com Ãxido de cÃlcio permitiram um nÃvel de substituiÃÃo do farelo de soja mais elevado, quando comparados Ãs tortas de mamona tratadas com hidrÃxido de sÃdio. Em termos econÃmicos, verificou-se que as tortas tratadas com Ãxido de cÃlcio permitiram um maior preÃo de venda da mesma em relaÃÃo Ãs tortas tratadas com hidrÃxido de sÃdio. / The objectives of the present study were to evaluate the use of alternative chemical sources in the degradation and inactivation of ricin and Ricinus communis agglutinin from castor cake; the use of an easily applicable methodology able to precisely identify the biological activity of the lectins present in the castor cake; and the influence of the detoxification process on the nutritional values of the castor cake and estimate the maximum sale price of detoxified cakes so that their use in the concentrate feed replacing soybean meal can be viable. The use efficiency of ten chemical compounds (calcitic limestone, magnesian limestone, sodium chloride, potassium chloride, dicalcium phosphate, monodicalcium phosphate, calcium hydroxide, sodium hydroxide, calcium oxide, and urea) in the inactivation of lectins from castor cake was evaluated, using four different volumes of water. Detoxification analyses were performed by visual observation and densitometry of electrophoresis gels, in addition to hemagglutination assays. After satisfactory results were obtained with the treatments using calcium oxide and sodium hydroxide, analyses of chemical composition; crude protein fractionation; rumen degradation of dry matter, crude protein, and neutral detergent fiber; and intestinal digestibility of crude protein were performed. Next, aiming to analyze the viability of using detoxified castor cake in concentrate diets completely replacing soybean meal, different diets were formulated to estimate its maximum sale costs. Alkaline treatments calcium oxide and sodium hydroxide provided complete inactivation of the lectins from castor cakes. Reagent concentration and water volume were decisive to the inactivation efficiency, with detoxification being effective when 60 or 90 g sodium hydroxide were used with water volumes equal to or greater than 1500 mL/kg castor cake or calcium oxide at the concentration of 90 g with 2500 or 3000 mL water/kg of cake. Chemical detoxification treatments directly influenced the profile of the different nitrogen fractions that compose the dietary crude protein; the rumen degradation parameters of dry matter, crude protein, and neutral detergent fiber; as well as the intestinal digestibility of the rumen-undegradable protein. Chemical detoxification treatments changed the nutritional value and the use of the dietary protein by the ruminant, reducing the nutritional value of the cakes and providing feedstuffs with different nutritional characteristics. Castor cakes treated with calcium oxide allowed a higher level of replacement of soybean meal as compared with the cakes treated with sodium hydroxide. In economic terms, the cakes treated with calcium oxide allowed a higher sale price of the product in relation to those treated with sodium hydroxide.