Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2017-02-13T13:03:08Z No. of bitstreams: 1 Luciana Cavalcanti de Arruda Coutinho.pdf: 4647135 bytes, checksum: a250b87f919a5205eb093e027264fbce (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-13T13:03:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luciana Cavalcanti de Arruda Coutinho.pdf: 4647135 bytes, checksum: a250b87f919a5205eb093e027264fbce (MD5) Previous issue date: 2014-06-11 / Equine infectious anemia (EIA ) is a difficult control disease, characterized by a wide variety of clinical signs that appear in recurring and dynamic cycles. According with Brazilian law, positive animals in the agar gel immunodiffusion (AGID) must be sacrificed, therefore, there is a dependency relationship between diagnosis and disease control. For reasons related with peculiar characteristics of the infection and immune response EIA, this test may not be able to detect newly infected animals. Considering that the IDGA has a decisive role in the fate of the animal tested, we study the possibility of complementing the diagnostic with the ELISA. In this context, in a previous study, we developed the recombinant protein p26 (rp26) from VAIE, produced in yeast Pichia pastoris, aiming their use as antigens in immunoassays . The purpose of the current study was to test this antigen in AGID, ELISA and Western blot, standardize an indirect ELISA (iELISA) using the rp26 protein from equine infectious anemia virus (EIAV) as antigen, and also compare it with the pattern test. In all these immunoassays was identified the functionality of the RP26 antigen. After analyzing 101 AGID - positive sera from animals and 704 AGID - negative at the new iELISA, was observed excellent concordance (kappa=0,9) between tests. The cutoff point (15%) was selected by observing the distribution of the relative values of the optical densities of the samples IDGA -positive and negative. The relative sensitivity and specificity were 97 % and 97,9 %, respectively. The excellent results using the rp26 as antigen in iELISA enables the consideration of a new alternative diagnostic for EIA. / A anemia infecciosa equina (AIE) é uma doença de difícil controle, caracterizada por uma ampla variedade de sinais clínicos que surgem em ciclos recorrentes e dinâmicos. De acordo com a legislação brasileira, animais positivos no exame sorológico Imunodifusão em gel de ágar (IDGA) devem ser sacrificados, existindo, portanto, uma relação de dependência entre o diagnóstico e o controle da doença. Por questões relacionadas às características da infecção e resposta imunológica peculiar à AIE, este teste pode não ser capaz de detectar animais recém-infectados. Tendo em vista que o IDGA tem papel decisivo no destino do animal testado, estuda-se a possibilidade de complementação do diagnóstico com ELISA. Diante deste cenário, em um estudo anterior, foi desenvolvida a proteína p26 recombinante (rp26) do VAIE, produzida na levedura Pichia pastoris, vislumbrando seu uso como antígeno em imunoensaios. A finalidade do atual estudo foi testar o antígeno produzido no IDGA, ELISA e Western blot bem como padronizar um ELISA indireto (iELISA) utilizando a proteína rp26 do vírus da anemia infecciosa equina (VAIE) como antígeno, e ainda compará-lo com o teste padrão IDGA. Em todos os imunoensaios referidos foi possível identificar a funcionalidade da rp26 como antígeno. Após a análise de 101 soros de animais IDGA-positivos e 704 IDGA-negativos no novo iELISA, foi observada uma excelente concordância (kappa=0,9) entre os testes. O ponto de corte (15%) foi selecionado pela observação da distribuição dos valores relativos das densidades ópticas das amostras IDGA-positivas e IDGA-negativas. A sensibilidade e especificidade relativas foram de 97% e 97,9%, respectivamente. Os ótimos resultados encontrados com o uso da rp26 como antígeno no iELISA possibilita a consideração de uma nova alternativa de diagnóstico para AIE.

O termo hemoplasma refere-se ao grupo de micoplasmas que parasitam os eritrócitos do hospedeiro e podem causar anemia. O uso das técnicas baseadas na reação em cadeia da polimerase (PCR) tem sido utilizadas para a melhor compreensão da doença. No Brasil os hemoplasmas Mycoplasma. haemofelis e ‘Candidatus Mycoplasma. haemonminutum já foram identificados, porém dados de prevalência e fatores de risco não foram avaliados até o momento. A espécie ‘Candidatus Mycoplasma turicensis’ já foi descrita em diferentes países, porém a técnica de diagnóstico utilizando PCR em tempo real limita seu estudo no Brasil devido ao custo e necessidade de pessoal especializado. O presente trabalho desenvolveu uma técnica por PCR convencional para a detecção da espécie ‘Candidatus M. turicensis’ e descreve pela primeira vez sua presença infectando gatos domésticos no Brasil e a prevalência, fatores de risco e achados hematológicos da infecção por hemoplasmas foi avaliada. No total de 371 gatos, 79 (21.3%) foram positivos para pelo menos uma espécie de hemoplasma. A infecção por ‘Candidatus M. haemominutum’ foi detectada em 50 (13,48%) dos animais, ‘Candidatus M. turicensis’ e M. haemofelis foram detectados em 10/371 (2.69%) e 8/371 (2.16%) dos animais respectivamente. Coinfecção com M. haemofelis- ‘Candidatus-M. haemominutum’ foi detectada em 4/371 (1.08%), ‘Candidatus M. haemominutum’-‘Candidatus M. turicensis’ em 5/371 (1.35%) e infecção tripla em 2/371 (0.54%). Gatos machos, jovens e com acesso a rua são mais susceptíveis a infecção por hemoplasmas. Anemia é associada à infecção por M. haemofelis e ‘Candidatus M. haemominutum’. O presente trabalho também descreve a infecção por micoplasma hemotrófico similar ao M. haemofelis em um paciente humano HIV positivo e alerta para seu potencial zoonótico. Em conclusão, espécies de hemoplasmas são comuns e importantes agentes de infecções em gatos domésticos no sul do Brasil. Estudos futuros devem ser conduzidos para melhor entender seu impacto em animais de companhia e determinar o seu papel como agentes zoonóticos, particularmente em pessoas imunocomprometidas. / The term haemoplasma refers to the mycoplasmas that parasitize the red blood cells of the host and can cause anemia. Molecular approaches based on the polymerase chain reaction (PCR) have been used to better understand the disease. In Brazil, The species Mycoplasma haemofelis and ‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’ were identified, whereas prevalence and risk factor were not evaluated to date. The specie ‘Candidatus Mycoplasma turicensis’ was described in many countries, however the use of real time-PCR for the diagnostic of the infection had limited its use in Brazil and other countries since it is expensive and requires specialized technicians. The current study developed a conventional PCR assay to the diagnosis of ‘Candidatus M. turicensis’ and report for the first time the infection in domestic cats in Brazil. We also evaluated the prevalence, risk factors and hematological findings for the hemoplasma infections. In a total of 371 cat samples, 79 (21.3%) were PCR-positive for at least one species of haemoplasma. ‘Candidatus M. haemominutum’ infection was found in 50 out of 371 (13.48%) positive cats, ‘Candidatus M. turicensis’ and M. haemofelis DNA were found in 10/371 (2.69%) and 8/371 (2.16%) of the cats respectively. Coinfection with M. haemofelis-‘Candidatus M. haemominutum’ was found in 4/371 (1.08%), ‘Candidatus M. haemominutum’-‘Candidatus M. turicensis’ in 5/371 (1.35%) and infection with all 3 haemoplasmas in 2/371 (0.54%). Male cats, younger age and outdoor access were risk factors for haemoplasma infection. Anemia was associated with M. haemofelis and ‘Candidatus M. haemominutum’ infection. The present study also reports a case of a Mycoplasma haemofelis-like organism infection in a HIV positive patient and warns the zoonotic potential of the haemoplasmas. In conclusion, the haemoplasmas are common infectious agent in domestic cats in southern Brazil. Further studies are needed to better understand their impact on companion animals, as well as their role as zoonotic agents, particularly in immunocompromised people.

O termo hemoplasma refere-se ao grupo de micoplasmas que parasitam os eritrócitos do hospedeiro e podem causar anemia. O uso das técnicas baseadas na reação em cadeia da polimerase (PCR) tem sido utilizadas para a melhor compreensão da doença. No Brasil os hemoplasmas Mycoplasma. haemofelis e ‘Candidatus Mycoplasma. haemonminutum já foram identificados, porém dados de prevalência e fatores de risco não foram avaliados até o momento. A espécie ‘Candidatus Mycoplasma turicensis’ já foi descrita em diferentes países, porém a técnica de diagnóstico utilizando PCR em tempo real limita seu estudo no Brasil devido ao custo e necessidade de pessoal especializado. O presente trabalho desenvolveu uma técnica por PCR convencional para a detecção da espécie ‘Candidatus M. turicensis’ e descreve pela primeira vez sua presença infectando gatos domésticos no Brasil e a prevalência, fatores de risco e achados hematológicos da infecção por hemoplasmas foi avaliada. No total de 371 gatos, 79 (21.3%) foram positivos para pelo menos uma espécie de hemoplasma. A infecção por ‘Candidatus M. haemominutum’ foi detectada em 50 (13,48%) dos animais, ‘Candidatus M. turicensis’ e M. haemofelis foram detectados em 10/371 (2.69%) e 8/371 (2.16%) dos animais respectivamente. Coinfecção com M. haemofelis- ‘Candidatus-M. haemominutum’ foi detectada em 4/371 (1.08%), ‘Candidatus M. haemominutum’-‘Candidatus M. turicensis’ em 5/371 (1.35%) e infecção tripla em 2/371 (0.54%). Gatos machos, jovens e com acesso a rua são mais susceptíveis a infecção por hemoplasmas. Anemia é associada à infecção por M. haemofelis e ‘Candidatus M. haemominutum’. O presente trabalho também descreve a infecção por micoplasma hemotrófico similar ao M. haemofelis em um paciente humano HIV positivo e alerta para seu potencial zoonótico. Em conclusão, espécies de hemoplasmas são comuns e importantes agentes de infecções em gatos domésticos no sul do Brasil. Estudos futuros devem ser conduzidos para melhor entender seu impacto em animais de companhia e determinar o seu papel como agentes zoonóticos, particularmente em pessoas imunocomprometidas. / The term haemoplasma refers to the mycoplasmas that parasitize the red blood cells of the host and can cause anemia. Molecular approaches based on the polymerase chain reaction (PCR) have been used to better understand the disease. In Brazil, The species Mycoplasma haemofelis and ‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’ were identified, whereas prevalence and risk factor were not evaluated to date. The specie ‘Candidatus Mycoplasma turicensis’ was described in many countries, however the use of real time-PCR for the diagnostic of the infection had limited its use in Brazil and other countries since it is expensive and requires specialized technicians. The current study developed a conventional PCR assay to the diagnosis of ‘Candidatus M. turicensis’ and report for the first time the infection in domestic cats in Brazil. We also evaluated the prevalence, risk factors and hematological findings for the hemoplasma infections. In a total of 371 cat samples, 79 (21.3%) were PCR-positive for at least one species of haemoplasma. ‘Candidatus M. haemominutum’ infection was found in 50 out of 371 (13.48%) positive cats, ‘Candidatus M. turicensis’ and M. haemofelis DNA were found in 10/371 (2.69%) and 8/371 (2.16%) of the cats respectively. Coinfection with M. haemofelis-‘Candidatus M. haemominutum’ was found in 4/371 (1.08%), ‘Candidatus M. haemominutum’-‘Candidatus M. turicensis’ in 5/371 (1.35%) and infection with all 3 haemoplasmas in 2/371 (0.54%). Male cats, younger age and outdoor access were risk factors for haemoplasma infection. Anemia was associated with M. haemofelis and ‘Candidatus M. haemominutum’ infection. The present study also reports a case of a Mycoplasma haemofelis-like organism infection in a HIV positive patient and warns the zoonotic potential of the haemoplasmas. In conclusion, the haemoplasmas are common infectious agent in domestic cats in southern Brazil. Further studies are needed to better understand their impact on companion animals, as well as their role as zoonotic agents, particularly in immunocompromised people.

O termo hemoplasma refere-se ao grupo de micoplasmas que parasitam os eritrócitos do hospedeiro e podem causar anemia. O uso das técnicas baseadas na reação em cadeia da polimerase (PCR) tem sido utilizadas para a melhor compreensão da doença. No Brasil os hemoplasmas Mycoplasma. haemofelis e ‘Candidatus Mycoplasma. haemonminutum já foram identificados, porém dados de prevalência e fatores de risco não foram avaliados até o momento. A espécie ‘Candidatus Mycoplasma turicensis’ já foi descrita em diferentes países, porém a técnica de diagnóstico utilizando PCR em tempo real limita seu estudo no Brasil devido ao custo e necessidade de pessoal especializado. O presente trabalho desenvolveu uma técnica por PCR convencional para a detecção da espécie ‘Candidatus M. turicensis’ e descreve pela primeira vez sua presença infectando gatos domésticos no Brasil e a prevalência, fatores de risco e achados hematológicos da infecção por hemoplasmas foi avaliada. No total de 371 gatos, 79 (21.3%) foram positivos para pelo menos uma espécie de hemoplasma. A infecção por ‘Candidatus M. haemominutum’ foi detectada em 50 (13,48%) dos animais, ‘Candidatus M. turicensis’ e M. haemofelis foram detectados em 10/371 (2.69%) e 8/371 (2.16%) dos animais respectivamente. Coinfecção com M. haemofelis- ‘Candidatus-M. haemominutum’ foi detectada em 4/371 (1.08%), ‘Candidatus M. haemominutum’-‘Candidatus M. turicensis’ em 5/371 (1.35%) e infecção tripla em 2/371 (0.54%). Gatos machos, jovens e com acesso a rua são mais susceptíveis a infecção por hemoplasmas. Anemia é associada à infecção por M. haemofelis e ‘Candidatus M. haemominutum’. O presente trabalho também descreve a infecção por micoplasma hemotrófico similar ao M. haemofelis em um paciente humano HIV positivo e alerta para seu potencial zoonótico. Em conclusão, espécies de hemoplasmas são comuns e importantes agentes de infecções em gatos domésticos no sul do Brasil. Estudos futuros devem ser conduzidos para melhor entender seu impacto em animais de companhia e determinar o seu papel como agentes zoonóticos, particularmente em pessoas imunocomprometidas. / The term haemoplasma refers to the mycoplasmas that parasitize the red blood cells of the host and can cause anemia. Molecular approaches based on the polymerase chain reaction (PCR) have been used to better understand the disease. In Brazil, The species Mycoplasma haemofelis and ‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’ were identified, whereas prevalence and risk factor were not evaluated to date. The specie ‘Candidatus Mycoplasma turicensis’ was described in many countries, however the use of real time-PCR for the diagnostic of the infection had limited its use in Brazil and other countries since it is expensive and requires specialized technicians. The current study developed a conventional PCR assay to the diagnosis of ‘Candidatus M. turicensis’ and report for the first time the infection in domestic cats in Brazil. We also evaluated the prevalence, risk factors and hematological findings for the hemoplasma infections. In a total of 371 cat samples, 79 (21.3%) were PCR-positive for at least one species of haemoplasma. ‘Candidatus M. haemominutum’ infection was found in 50 out of 371 (13.48%) positive cats, ‘Candidatus M. turicensis’ and M. haemofelis DNA were found in 10/371 (2.69%) and 8/371 (2.16%) of the cats respectively. Coinfection with M. haemofelis-‘Candidatus M. haemominutum’ was found in 4/371 (1.08%), ‘Candidatus M. haemominutum’-‘Candidatus M. turicensis’ in 5/371 (1.35%) and infection with all 3 haemoplasmas in 2/371 (0.54%). Male cats, younger age and outdoor access were risk factors for haemoplasma infection. Anemia was associated with M. haemofelis and ‘Candidatus M. haemominutum’ infection. The present study also reports a case of a Mycoplasma haemofelis-like organism infection in a HIV positive patient and warns the zoonotic potential of the haemoplasmas. In conclusion, the haemoplasmas are common infectious agent in domestic cats in southern Brazil. Further studies are needed to better understand their impact on companion animals, as well as their role as zoonotic agents, particularly in immunocompromised people.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-14T17:39:52Z No. of bitstreams: 1 Luciana Cavalcanti Arruda Coutinho.pdf: 1249795 bytes, checksum: d8c5b0923169bdb4b101bcf96c920d9f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-14T17:39:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luciana Cavalcanti Arruda Coutinho.pdf: 1249795 bytes, checksum: d8c5b0923169bdb4b101bcf96c920d9f (MD5) Previous issue date: 2011-02-22 / Equine Infectious Anemia (EIA) is an important lentivirose in horses, characterized by a chronic and degenerative profile, causing many economic losses. It is considered that animals exposed to the virus and underwent serological evidence, when considered positive, remain so throughout life, which justifies the great concern and disease surveillance. The aim of this study was to use Pichia pastoris yeast cells for protein production of p26 gag region of Equine Infectious Anemia Virus (EIAV) for diagnostic purposes. The p26 gene of EIAV was optimized through the codon usage strategy to be expressed in cells of the Pichia pastoris yeast. The insert was cloned into pPICZαA expression vector after appropriate enzymatic digestion. P. pastoris transformed with the construction pPICZαAp26 were induced to express the p26 recombinant protein under the regulation of AOX1 promoter by adding methanol to the culture medium. The p26 recombinant protein was identified by RT-PCR and Dot blotting assay using anti-His antibody. Further studies are needed to optimize bioprocesses involved in this system in order to obtain a stable, purified and useful antigen for diagnostic purposes. / A Anemia Infecciosa Equina (AIE) é uma importante lentivirose em equídeos, caracterizada por causar um quadro crônico e degenerativo, trazendo muitos prejuízos econômicos. Considera-se que animais expostos aos vírus e submetidos à prova sorológica, quando considerados positivos, assim permanecerão por toda vida, fato que justifica a grande preocupação e vigilância da doença. Neste trabalho objetivou-se utilizar células da levedura Pichia pastoris para produção da proteína p26 da região gag do vírus da anemia infecciosa equina (VAIE) para fins de diagnóstico. O gene da proteína p26 do VAIE foi sintetizado e otimizado por meio da utilização de códons preferenciais para ser expresso em célula da levedura Pichia pastoris. O inserto foi subclonado em vetor de expressão pPICZαA após digestão enzimática apropriada. Células de P. pastoris transformadas com a construção pPICZαAp26 foram induzidas a expressarem a proteína recombinante p26 sob regulação do promotor AOX1 através da adição de metanol ao meio de cultura. A análise quanto à produção da proteína recombinante e sua identificação foram realizadas através de RT-PCR e Dot blotting utilizando anticorpo anti-His.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:17:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007 - Antonia Regina Sessa da Silva.pdf: 384094 bytes, checksum: 91d2147f8402249dead112e338e89b66 (MD5) Previous issue date: 2007-03-30 / Brazil has currently the second bigger flock of equines of the world and the brazilian equines breeding plays an important role in the development of the sector of agribusiness. Among the infectious disease that affect the national equines breeding, the Equine infectious anemia (EIAV) has been shown of difficult control. The Equine infectious anemia is caused by a retrovirus, it has a worldwide distribution, and it is recognized as the most important disease of equines. The most common clinical signals in the acute phase, are anemia followed of jaundice in the mucosae, ventral oedema, mioglobinury, caquexy and, mainly, intermittent fever. Once it has no treatment, Ministry of Agriculture, Cattle and Supplying determines, through legal mechanisms, a politics of obligatory examination in credentialed laboratories, for the transport and commercialization of equines in the country. The examination is based on the test of Coggins, an immunodiffusion in agar gel (IDGA) of the serum of the animal tested against antigen of the EIAV. As the infection is lifetime, positive animals are euthanasiated by Veterinarians of the Ministry of Agriculture. Considering that precision of the results is critical, once that false positives animals could uselessly be sacrificed, and false negatives will be preserved as infection source, diverse problems may occur, appeared the interest of a systematic analysis of the reproducibility of kits and on possible sources of error. For this purpose, positive and negative sera, referred by the repetition of the tests for Coggins and ELISA, had been evaluated by IDGA comparatively with three kits of different manufacturers. In the experiments of reproducibility, it observed a great distinction in the quality of the precipitation line promoted for the positive sera in the tests. This phenomenon may be justified by the use of the conditions techniques legal, determined for would carry of the Ministry of Agriculture that is distinct of the recommendation of the analyzed manufacturers of two of kits. Exactly thus, the evaluation of the reproducibility of the results of kits with the referred sera showed high correlation. / O Brasil possui atualmente o segundo maior rebanho de eq??deos do mundo e a Eq?ideocultura Brasileira desempenha um importante papel no desenvolvimento do setor de agroneg?cios. Entre as doen?as infecciosas que afetam a eq?inocultura nacional, a Anemia Infecciosa dos Eq?inos (AIE) tem se mostrado de dif?cil controle. A AIE ? causada por um retrov?rus, apresenta uma distribui??o mundial, e ? reconhecida como a mais importante doen?a dos eq?inos. Entre os sinais cl?nicos mais comuns, na fase aguda da doen?a, encontram-se a anemia seguida de icter?cia nas mucosas, edema ventral, mioglobin?ria, caquexia e, principalmente, febre intermitente. Como n?o h? tratamento, Minist?rio da Agricultura, Pecu?ria e Abastecimento (MAPA) determina, atrav?s de mecanismo legais, uma pol?tica de exame obrigat?rio em laborat?rios credenciados, para o transporte e comercializa??o de eq??deos no Pa?s. O exame ? baseado na prova de Coggins, uma imunodifus?o em ?gar gel do soro do animal testado contra ant?geno do v?rus da AIE. Como a infec??o ? vital?cia, animais soropositivos s?o eutanasiados por M?dicos Veterin?rios do MAPA. Considerando que a precis?o dos resultados ? cr?tica, posto que animais falso positivos podem ser sacrificados inutilmente, e falso negativos preservados como fonte de infec??o, surgiu o interesse de um an?lise sistem?tica da reprodutibilidade dos kits e poss?veis fontes de erro no diagn?stico. Para esta finalidade, soros positivos e negativos, referenciados pela repeti??o dos testes de Coggins e ELISA, foram avaliados pela prova de IDGA, comparativamente com tr?s kits de diferentes fabricantes. Nos experimentos de reprodutibilidade, observou-se uma grande distin??o na qualidade da linha de precipita??o promovida pelos soros positivos nos testes nos diferentes kits. Este fen?meno pode ser justificado pela utiliza??o das condi??es t?cnicas legais, determinadas por portaria do MAPA, que s?o distintas das recomenda??es dos fabricantes de dois dos kits analisados. Mesmo assim, a avalia??o da reprodutibilidade dos resultados dos kits com os soros referenciados mostrou elevada correla??o.

Orientador: Luis Antônio Mathias / Resumo: A equideocultura possui grande importância econômica no Brasil, e a anemia infecciosa equina (AIE) representa ameaça para o crescimento do setor. Pouco se sabe sobre análise temporal da ocorrência da doença no Brasil, por isso este trabalho foi conduzido com o objetivo de investigar a frequência e distribuição da anemia infecciosa equina em todo o território brasileiro no período de 2005 a 2016, por meio das análises temporais do índice de morbidade, índice de eliminação de reagentes, razão entre o número de equídeos eliminados e o número de equídeos reagentes, índice de notificação de focos e índice de focos novos e antigos ao longo do período. Foi realizada uma análise de série temporal sobre AIE no período de 2005 a 2016, utilizando dois bancos de dados, o da OIE e o do MAPA. No Brasil, 2010 foi o ano que apresentou o menor índice de morbidade de AIE, com 100,9 casos por 100 mil cabeças, e 2009 apresentou o maior índice, com 159,1 por 100 mil cabeças, e a taxa de variação anual no período foi de -2,4% (-7,5% a 2,8%), revelando estabilidade desse indicador (P = 0,317). O índice de eliminação de reagentes por AIE no Brasil foi maior em 2010, com 62,7 por 100 mil cabeças, e menor em 2016, com 32,1. Durante todo o período estudado, a variação anual no país se mostrou estável, com valor de -6,1% (-18,2% a 7,8%) e valor de P não significativo (0,333). A razão entre o número de equídeos eliminados e o número de equídeos reagentes por 100 equídeos foi baixa em quase todas as UF’s ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-14T14:08:17Z No. of bitstreams: 1 Karin Florencio Lins de Paiva Fontes.pdf: 1183202 bytes, checksum: cd071de0a1543bbb031923846a82c239 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-14T14:08:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Karin Florencio Lins de Paiva Fontes.pdf: 1183202 bytes, checksum: cd071de0a1543bbb031923846a82c239 (MD5) Previous issue date: 2013-01-19 / Equine Infectious Anemia (EIA), considered one of the most important viruses in horses in the world, is caused by a lentivirus of the Retroviridae family. It is a chronic infection without treatment, mainly prevalent in regions with hot and humid climate, favorable for transmission by blood-sucking insects. According to the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA), the restriction of transit and slaughter of infected animals are the strategies for the control of EIA in Brazil, which causes losses in equine breeding. The official diagnosis of the disease is carried out by detection of circulating antibodies by Agar Gel Immunodiffusion (AGID) and ELISA. The p26 protein from EIAV is highly conserved and used in most diagnostic tests, since it induces a strong humoral response. The aim of this work was the production of a p26 recombinant protein in Escherichia coli for use in serologic tests. The p26 gene sequence was optimized with respect to E. coli codon usage, in order to maximize protein production, and was added with a marker sequence of six histidine residues (6xHis-tag) for later protein detection and purification. The sequence was synthesized and cloned downstream of the gene of a maltose binding protein (MBP2*) on the pMAL-c4X expression vector. The E. coli gene induction was performed by Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside and the resulting protein (MBP2*.p26mod) was detected by SDS-PAGE gel and Western blot with monoclonal anti-HIS. The MBP2*.p26mod was visualized as a 68.5 kDa band, the recombinant fusion protein was cleaved with factor Xa resulting in two bands of 42.5 and 26 KDa, corresponding to MBP2* and p26mod respectively. The MBP2*.p26mod purification was performed with affinity chromatography by nickel resin and yielded 78.12 mg/L of bacterial culture. The MBP2*.p26mod protein was intensely immunoreactive at AGID test where precipitation lines were observed only among the positive sera, including reference OIE serum, and the protein MBP2*.p26mod, showing high analytical sensitivity and specificity of the recombinant protein. / A Anemia Infecciosa Equina (AIE), considerada uma das viroses mais importantes em equinos no mundo, é causada por um lentivírus da família Retroviridae. É uma infecção crônica, sem tratamento, prevalente principalmente em regiões de clima quente e úmido, favorável à transmissão por insetos hematófagos. Segundo o Ministério da Agricultura e Pecuária e Abastecimento (MAPA), a restrição do trânsito e abate de animais infectados são as estratégias para o controle da AIE no Brasil, o que ocasiona perdas na equinocultura. O diagnóstico oficial da doença é realizado pela detecção de anticorpos circulantes através da imunodifusão em gel de Agar (IDGA) e de ELISA. A proteína p26 do vírus da AIE é altamente conservada e utilizada na maioria dos testes de diagnóstico, uma vez que induz uma forte resposta humoral. O objetivo com este trabalho foi a produção de uma proteína p26 recombinante em Escherichia coli para uso em testes diagnóstico sorológico. A sequência do gene p26 foi otimizada com relação aos códons preferenciais e ao conteúdo GC para uso em E. coli, a fim de maximizar a produção de proteínas, e foi adicionado à sequencia um marcador de seis resíduos de histidina (6xHis-tag) para posterior detecção e purificação protéica. A sequencia foi sintetizada e clonada a jusante do gene de uma proteína ligante de maltose (MBP2*) no vetor de expressão pMAL-c4X. A indução gênica da E. coli transformada foi realizada com isopropil β-D-tiogalactopiranosídeo e a proteína resultante (MBP2*.p26mod) foi detectada por SDS-PAGE em gel e Western blot com anticorpo monoclonal anti-HIS. A MBP2*.p26mod foi visualizada como uma banda de 68,5 kDa, a qual foi clivada com fator Xa resultando em duas bandas de 42,5 e 26 KDa, correspondentes à MBP2* e à p26mod respectivamente. A purificação MBP2*.p26mod foi realizada por cromatografia de afinidade com resina de níquel e foi obtido um rendimento de 78,12 mg/L de cultura bacteriana. A proteína MBP2*.p26mod foi intensamente imunoreativa no teste de IDGA, onde foram observadas linhas de precipitação únicas entre os soros positivos, inclusive o soro de referência OIE, e a proteína MBP2*.p26mod, demonstrando altas especificidade e sensibilidade analíticas da proteína recombinante.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-05-15T17:41:58Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PrevalenciaAnemiaInfecciosa.pdf: 867131 bytes, checksum: f5980973c7a58a5758e3acc3b4e523f9 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-05-19T15:06:08Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PrevalenciaAnemiaInfecciosa.pdf: 867131 bytes, checksum: f5980973c7a58a5758e3acc3b4e523f9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-19T15:06:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PrevalenciaAnemiaInfecciosa.pdf: 867131 bytes, checksum: f5980973c7a58a5758e3acc3b4e523f9 (MD5) Previous issue date: 2014 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo do estudo foi verificar a prevalência da anemia infecciosa equina nos municípios de Cachoeira do Arari, Salvaterra, Santa Cruz do Arari e Soure, Ilha de Marajó, estado do Pará, Brasil. Para a pesquisa sorológica foram selecionadas 349 amostras, coletadas no período de outubro de 2012 a março de 2013 e testadas pela imunodifusão em gel de ágar. Em 65 amostras foi realizado hemograma e em 70 exame bioquímico, no qual se pesquisou ureia, creatinina, aspartato aminotransferase, alanina aminotransferase, gama glutamiltransferase fosfatase alcalina, bilirrubina total e bilirrubina direta. Foi verificada uma prevalência de 24,06% (84/349). O número médio de hemácias foi significativamente menor nos animais soropositivos em relação aos soronegativos e não houve diferença significativa nos resultados médios de hematócrito, hemoglobina, volume globular médio, concentração de hemoglobina globular média, plaquetas, no leucograma, assim como no exame bioquímico. O quadro clínico observado foi estado nutricional ruim, apatia, mucosas pálidas, desidratação, além de elevação nas frequências cardíaca e respiratória. Na necropsia as principais alterações encontradas em todos os equinos foram carcaça ictérica, pequeno acúmulo de líquido na cavidade abdominal, assim como hepato e esplenomegalia. O exame histopatológico demonstrou baço e fígado com hemossiderose. A anemia infecciosa equina é endêmica nos municípios estudados. / The aim of the study was to determine the prevalence of equine infectious anemia in the municipalities of Cachoeira do Arari, Salvaterra, Santa Cruz do Arari and Soure, in the Marajó Island, State of Pará, Brazil. For serological survey were selected 349 samples collected from June 2012 to March 2013, tested by agar gel immunodiffusion. Blood count was performed in 65 samples and biochemical examinations in 70, in which was researched urea, creatinine, aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase, gamma glutamyl transferase, alkaline phosphatase, total bilirubin and direct bilirubin. A prevalence of 24.06% (84/349) was verified. The average number of red blood cells was significantly lower in seropositive animals in relation to the seronegative ones and there was no significant difference in mean results of hematocrit, hemoglobin, mean corpuscular volume, mean corpuscular hemoglobin concentration, platelets, in the white blood cell count, as well as in the biochemical examination. The clinical observed was poor nutritional status, apathy, pale mucous membranes, dehydration and elevation in heart and respiratory rate. At necropsy, the primary findings in all horses were jaundiced housing, small accumulation of fluid in the abdominal cavity, as well as hepatomegaly and splenomegaly. The histopathological examination showed spleen and liver with hemosiderosis. The equine infectious anemia is endemic in the cities studied.