Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-06-01T16:45:23Z No. of bitstreams: 1 Fernanda Katharine de Souza Lins Borba.pdf: 4059966 bytes, checksum: cce20c494a8d5b3926e4508d0ff50750 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-01T16:45:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernanda Katharine de Souza Lins Borba.pdf: 4059966 bytes, checksum: cce20c494a8d5b3926e4508d0ff50750 (MD5) Previous issue date: 2012-02-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Chondroitin Sulfate (CS) and Glucosamine Sulfate (GS) are functional constituents of vertebrate tissues. GS is an amino sugar and CS is part of the glucosaminoglycans group (GAGs). Studies have suggested CS and GS to have anti-inflammatory properties, however it has also been shown that these compounds promote scarring and proliferation of fibroblasts, which express molecules important for blood vessel growth (angiogenesis). This study was aimed at evaluating the effects of CS and GS on in vitro models regarding cell viability (cytotoxicity - MTT), proliferation (BrdU incorporation) and differentiation (tubulogenesis in Matrigel support) on human umbilical vein endothelial cells (HUVEC line). In vivo angiogenesis was also evaluated in (1) extraembryonic membranes of Gallus domesticus (number of chorioallantoic vessels - CAM assay and vitelinic YSM assay; and fractal geometry analysis); (2) and subcutaneous tissue of adult mice (Mus muscullus) by hemoglobin quantification (Spectroscopy) in Gelfoam implants. In the HUVEC assay, both CS and GS (1-3000 g/mL) displayed partial cytotoxic effect (~50% viability), but only in the highest tested concentrations (3000 and 1000 g/mL). It was observed that CS (3 g/mL), but not GS, promoted proliferation and tubulogenesis of HUVEC in 40% (P < 0.05) and 64% (P < 0.05), respectively, relative to control (RPMI-1640 medium). These effects did not significantly differ from the respective 28% and 53% promoted by the well known angiogenic growth factor FGF-2 (50 ng/mL). In the in vivo vasculoangiogenesis YSM assay on 2 to 4-day old embryos, GS (0.001-0.1mg/disk) and, to a lesser extent, CS (0.030-0.1mg/disk) increased the amount of vessels relative to control (P < 0.05). The effects of administration of CS and GS (0.1mg/disk) did not differ from what was observed in groups treated with 50 ng/mL FGF2. In the CAM angiogenesis assay on 6 to 8-days old embryos, again both CS and GS increased the amount of vessels relative to control, but only in concentrations as high as 2.0 mg/disk. This effect was no different from what was observed in groups treated with 50 ng/mL FGF2. The pro-angiogenic effects of CS (2 mg/disk) in embryonary angiogenesis were confirmed in the advanced angiogenesis of mice: only the group treated with CS (2 mg/implant) displayed a significant increase in the amount of blood vessels, expressed as hemoglobin content (0.52 ± 0.08g/dL), relative to control (vehicle; PBS; 0.20 ± 0.07 g/dL). This pro-angiogenic effect was no different than that of FGF2 (0.53 ± 0.1g/dL). The in vitro and in vivo results indicate the pro-angiogenic properties of CS and GS. However, CS (GAG) was the more effective compound in the tests performed. As a constituent of proteoglycans, it is suggested that CS exerts its effects by interacting with FGF and other angiogenic factors in the extracellular matrix, stabilizing the receptor, and thus positively modulating the pro-angiogenic signal in endothelial cells. While the cellular mechanisms underlying CS and GS activity demand more specific research, there is an evident potential therapeutic use for both compounds in clinical situations, such as those related to vascular discrepancy. / Sulfato de glucosamina (SG) e Sulfato de condroitina (SC) são constituintes funcionais dos tecidos de vertebrados. O SG é um aminoaçúcar e o SC integra o grupo das glicosaminoglicanas (GAG). Estudos apontam propriedades antiinflamatórias do SC e SG, e demonstram ainda que essas substâncias promovem a cicatrização e a proliferação de fibroblastos, os quais expressam moléculas que atuam na formação de vasos sanguíneos (angiogênese). Os objetivos deste estudo foram avaliar a ação do SC e SG em modelos in vitro sobre a viabilidade (citotoxicidade pelo MTT), proliferação (incorporação por BrdU) e diferenciação (tubulogênese em suporte matrigel) na linhagem de células endoteliais de veia umbilical humana (HUVEC). Também se investigou a angiogênese in vivo: (1) em membranas anexas de embriões de Gallus domesticus (número de vasos corioalantóides - ensaio da CAM, e vitelínicos – ensaio da YSM; e análise por geometria fractal); (2) e no tecido subcutâneo de camundongos adultos por meio de quantificação da hemoglobina em implantes de Gelfoam. No ensaio com HUVEC, SC e SG (1-3000 g/mL) exerceram efeito citotóxico parcial (~50% de viabilidade), e somente nas respectivas maiores concentrações (3000 e 1000 g/mL). Verificou-se que o SC (3 g/mL), mas não o SG, estimulou a proliferação e a tubulogênese de HUVEC em 40% (p < 0,05) e em 64% (p < 0,05) respectivamente, em relação ao controle (meio RPMI-1640). Estes efeitos não diferiram estatisticamente dos 28% e 53%, respectivamente, promovidos pelo bem conhecido fator de crescimento angiogênico FGF-2 (50 ng/mL). No ensaio de vasculo-angiogênese na YSM de embriões de 2-4 dias de idade o SG (0,001-0,1mg/disco) principalmente, e o SC (0,030-0,1mg/disco) aumentaram o número de vasos em relação ao grupo controle (p < 0,05). Os efeitos da administração de SC e SG (0,1 mg/disco) não diferiram do observado no grupo tratado com 50 ng/mL de FGF-2. No ensaio de angiogênese na CAM de embriões de 6-8 dias de idade, ambos, SC e SG também elevaram o número de vasos em relação ao controle na concentração elevada de 2,0 mg/disco. Este efeito também não diferiu do observado no grupo exposto a 50 ng/mL de FGF- 2. O efeito pró-angiogênico do SC (2 mg/disco) na angiogênese embrionária foi confirmado na angiogênese avançada de camundongos adultos. Apenas o grupo que recebeu SC (2 mg/implante) mostrou um aumento significativo de vasos sanguíneos, expresso como conteúdo de hemoglobina (0,52 ± 0,08g/dL), comparado ao controle (veículo; PBS; 0,20 ± 0,07 g/dL). Este efeito pró-angiogênico não diferiu do obtido com FGF2 (0,53 ± 0.1g/dL). Os resultados in vitro e in vivo demonstram as propriedades pró-angiogênicas do SC e SG, contudo o SC (GAG) foi o mais efetivo nos ensaios. Como um constituinte de proteoglicanas, o SC sugere exercer seus efeitos pela interação com o FGF e outros fatores angiogênicos na matriz extracelular, estabilizando-os nos receptores e modulando assim, positivamente, o sinal pró-angiogênico nas células endoteliais. Embora mecanismos celulares subjacentes à atividade de SC e SG demandem mais estudos, evidencia-se um potencial papel terapêutico das duas substâncias em situações clínicas relacionadas à defasagem vascular.

A vascularização tem um papel central na progressão tumoral e representa um alvo terapêutico de grande interesse. A inibição da angiogênese tem potencial de retardar a progressão tumoral e inibir metástase. Em decorrência disto, terapias anti-angiogênicas têm demonstrado ser promissora no controle do crescimento tumoral. Segundo a literatura, interferon-? (IFN?, ativador do sistema imune inato e adaptativo) e p19Arf (supressor de tumor e parceiro funcional de p53), quando estudados individualmente, alteram a vasculatura tumoral. Nosso grupo construiu e utilizou vetores adenovirais recombinantes portadores dos cDNAs de INFbeta e p19Arf e observou que a transferência desta combinação de genes induziu morte celular e diminuiu progressão tumoral, resultados foram observados em modelos murinos de melanoma B16 de terapia genica in situ, vacina profilática e vacina terapêutica. Neste trabalho, exploramos a ideia que a combinação dos vetores adenovirais portadores de INFbeta e p19Arf proporcionam efeitos anti-angiogênicos através de seu impacto em células endoteliais. Para averiguarmos essa hipótese, células endoteliais murinas (tEnd) foram transduzidas com os vetores adenovirais, revelando que o vetor Ad-p19 confere inibição da proliferação, formação de tubos, migração e induz aumento na expressão de genes relacionados a via de p53 e morte celular. O vetor Ad-IFNbeta sozinho ou adicionado em combinação com Ad-p19, não teve impacto significante nestes ensaios. Alternativamente, a influencia indireta, ou parácrina, nas células tEnd cultivadas juntamente com as células B16 transduzidas com os vetores adenovirais também foi investigada. Quando as células B16 foram transduzidas com Ad-IFNbeta ou a co-transdução Ad-IFNbeta+Ad-p19 em co-cultura com a linhagem tEnd, houve inibição da proliferação. Não observamos efeito inibitório na tEnd da co-cultura quando as células da B16 foram transduzidas somente com Ad-p19. Seguindo o ensaio de co-cultura, produzimos meio condicionado da B16 transduzida com os vetores e aplicamos esses meios nas células tEnd. Observamos que Ad-IFN, sozinho ou em combinação com Ad-19, diminuiu a viabilidade, proliferação e levou a morte das células tEnd. Neste trabalho, constamos que inibição de células endoteliais pode ser realizada por transdução direta com Ad-19 ou quando estas células são expostas ao ambiente modulado por células tumorais transduzidas com o vetor Ad-IFNbeta. Mesmo que a transferência gênica de ambos IFNbeta e p19Arf não demonstrou ser uma abordagem superior à aplicação dos genes isolados, observamos que nossa abordagem pode ter um impacto importante na inibição da angiogênese pelas células endoteliais / The vasculature plays a central role in tumor progression and represents a therapeutic target of great interest. Inhibition of angiogenesis has the potential to slow down tumor progression and inhibit metastasis. As a result, anti-angiogenic therapies have been shown to be promising for the control of tumor growth. According to the literature, interferon ? (IFN?, activator of the innate and adaptive immune systems) and p19Arf (tumor suppressor and functional partner of p53) when studied individually alter tumor vasculature. Our group has constructed and used recombinant adenovirus vectors carrying the cDNAs of INFbeta and p19Arf and noted that the transfer of this combination of genes induced cell death and decreased tumor progression, as observed in the B16 murine model of in situ melanoma gene therapy as well as prophylactic and therapeutic vaccine approaches. In this study, we explore the idea that the combination of adenoviral vectors bearing INFbeta and p19Arf produce anti-angiogenic effects due to their impact on endothelial cells. To test this hypothesis, murine endothelial cells (tEnd) were transduced with adenoviral vectors, revealing that Ad-p19 vector confers inhibition of proliferation, tube formation, migration and induces increased expression of genes related to the p53 cell death pathway. The Ad-IFNbeta vector alone had no significant impact on these tests. Alternatively, influences on paracrine effects are evaluated on endothelial cells co-cultured with B16 cells that were previously transduced with adenoviral vectors. When the B16 cells were transduced with Ad-IFNbeta or co-transduced with Ad-IFNbeta + Ad-p19, co-culture resulted in the inhibition of proliferation of the endothelial cells. When B16 cells were transduced with Ad-p19 only, co-culture did alter endothelial cell behavior. Following the co-culture assay, we produce conditioned medium from B16 cells that were transduced with the vectors and applied the media on tEnd cells. We noted that conditioned medium derived from B16 transduced with Ad-IFN alone or in combination with Ad-19 decreased the viability and proliferation and induced cell death of tEnd. In this work, we show that inhibition of endothelial cells can be performed directly by transduction with Ad-19 or when such cells are exposed to the environment modulated by tumor cells transduced with Ad-IFNbeta. Even though the gene transfer of both IFNbeta and p19 was not found to be superior to the application of single genes, we observed that our approach may have an important impact on the inhibition of angiogenesis through endothelial cells

Objetivo: Comparar o efeito da terapia da fotocoagulação panretiniana (PFC) associada à injeção intravítrea de Ranibizumabe (RBZ) versus terapia isolada com PFC em pacientes com retinopatia diabética proliferativa (RDP) precoce, virgens de tratamento, com ou sem edema macular diabético (DME) durante 6 meses de acompanhamento. Projeto: Estudo prospectivo intervencionista, randomizado e controlado. Métodos: Sessenta olhos de 30 pacientes com RDP bilateral precoce foram randomizados para o grupo de estudo (GE) que foram tratados com PFC associado a duas injeções de RBZ intravítreo (0.5mg/0.05ml) ou para o grupo controle (GC) tratados apenas com PFC. Mudanças na acuidade visual (AV) corrigida, na sensibilidade ao contraste (SC) e na espessura foveal (EF) foram comparados no início, e nos 1, 3 e 6 meses após o tratamento. Resultados: No GE, a diferença na média da AV do baseline para o mês 6 teve um aumento significativo de + 3,4 letras (p = 0,006) e uma diminuição significativa na EF de - 47.6um (p < 0,001). No GC, a diferença na média da AV teve uma diminuição de - 3,4 letras (p = 0,04) e uma mudança na EF de -3.8 um (p = 0,96). Com relação ao teste de SC dentre os 28 olhos do GE, houve uma melhora no mês 6 em relação ao baseline nos ciclos: 1,5 (p < 0.001) e 3,0 ciclo (p=0.023). Dentre os 30 olhos do GC, não houve uma diferença estatística nos momentos estudados. Conclusão: A injeção intravítrea de RBZ associado com PFC pode ser um tratamento eficaz em olhos de pacientes com RDP precoce e EMD / Purpose: To compare the efficacy of therapy with panretinal photocoagulation (PRP) and intravitreal ranibizumab (RBZ) injection versus PRP alone in patients with treatment-naive bilateral non-high risk proliferative diabetic retinopathy (PDR) with and without diabetic macular edema (DME) with a 6-month follow-up. Design: Prospective, interventional, randomized controlled trial. Methods: Sixty eyes of 30 patients with bilateral non-high risk PDR were randomized either to the study group (SG) receiving PRP plus two intravitreal ranibizumab injections (0.5mg/0.05ml), the first one week before and the second four weeks after the PRP or to the control group (CG) receiving PRP alone. Mean change in best-corrected visual acuity (BCVA), contrast sensitivity (CS) and central macular thickness (CMT) were compared at baseline and 1, 3 and 6 months after treatment. Results: Changes from baseline to 6 months showed in the SG an increased in the BCVA by + 3.4 letters (p= 0.006) with a decrease in CMT by - 47.6um (p < 0.001). In the CG, a decrease by - 3.4 letters (p = 0.04) and an decrease by -3.8um (p= 0.96). Regarding the CS in the SG, there was an improvement compared to baseline for the sixth month in the 1.5 (p < 0.001) and 3.0 cycles (p = 0.023). The CG did not show significant results from baseline to month 6. Conclusion: Intravitreal RBZ associated with PRP can be an effective treatment in eyes with non-high risk PDR and DME

Diversas doenças estão associadas com a formação de novos vasos a parti vasos pré-existentes, ou angiogênese. Dentre elas está a aterosclerose (Griffioen & Molema, 2000). Pesquisas recentes demonstram que a hipercolesterolemia, que têm um papel importante na fisiologia da aterosclerose, também pode prejudicar a ação de fatores angiogênicos (Jang et.al., 2000). A hipercolesterolemia que é decorrente de aumento de LDL no plasma ocasiona um aumento no tempo de permanência desta partícula na circulação (Yasunobu, 2001). Contudo, a LDL pode sofrer modificação na circulação, dando origem a uma subfração mais eletronegativa da LDL, a LDL (-). A LDL (-) pode prejudicar cada etapa da angiogênese, desregulando a função endotelial (Tai et. al., 2006). Em nosso estudo, vimos que apesar da LDL (-) ter estimulado a miga celular, esta partícula inibiu a formação de túbulos in vitro. A LDL (-) não foi capa afetar a angiogênese in vivo. / A large number of diseases is associated with formation of new blood vessels out of pre-existing capillaries, or angiogenesis. These diseases include the atherosclerosis (Griffioen & Molema, 2000). Resents researches demonstrate that the hypercholesterolemia, that have a important role in the physiology of the atherosclerosis, can impaired the angiogenesis (Jang et. al., 2000) . The hypercholesterolemia that is decurrente of high levels of LDL in the plasma causes an increase in the time of permanence this particle in the circulation (Yasunobu, 2001). However, the LDL can to suffer modification in the circulation, giving rise to a subfration more eletronegative from LDL, the LDL (-). The LDL (-) could impair each one of the steps of the angiogenesis, thereby dysregulating endothelial function (Tai et. al., 2006). In our study, see that despite the LDL (-) have stimulated the cell migration, this particle inhibited the Tube formation in vitro. The LDL (-) didn\'t affect the angiogenesis in vivo.

Introdução: Os linfomas não-Hodgkin de células T periféricas (LCTP) são neoplasias raras caracterizadas pela proliferação monoclonal de linfócitos T maduros. Correspondem a 15% das malignidades linfoides e têm distribuição geográfica peculiar. Compreendem 22 entidades clínico-patológicas distintas, heterogêneas do ponto de vista clínico-epidemiológico, morfológico, fenotípico e molecular. O grupo de apresentação predominantemente nodal compreende as variantes histológicas LGCA/ALK+, LGCA/ALK-, LCTA e LCTP/SOE. Sua terapêutica se baseia em poliquimioterápicos à base de antraciclina e consolidação com transplante de células tronco hematopoiéticas autólogas (TCTH). Com exceção do LGCA/ALK+, apresentam sobrevida global em cinco anos de 30% a 40%. Devido aos desfechos desfavoráveis, estudos de perfil de expressão gênica e de metilação de genes supressores tumorais têm emergido nos últimos anos para refinar o diagnóstico destas neoplasias, melhorar o conhecimento fisiopatológico e o prognóstico e estabelecer possíveis alvos terapêuticos. Estudos preliminares com LCTP nodais indicam valor prognóstico favorável da hiperexpressão de genes de padrão inflamatório NFkB1 e IKBkB e desfavorável nos casos de supraregulação de genes de padrão proliferativo como CCNA2, TOP2A e CHEK1 e do fenótipo metilado de p15INK4b e p16INK4a. Objetivo:Avaliar o impacto da expressão relativa dos genes CCNA2, TOP2A, CHEK1, NFkB1, IKBkB e VEGF1 e da metilação dos genes p15 e p16 em população brasileira com LCTP nodais tratados com quimioterapia CHOP-símile para os desfechos de sobrevida global, sobrevida livre de progressão e sobrevida livre de doença. Métodos: A expressão gênica foi avaliada por qtPCR de amostras fixadas em formol e incluídas em parafina de 63 pacientes. A mediana de expressão dos genes foi comparada com variáveis clínicas e desfechos. PCR qualitativa metilação-específico foi usada avaliar a metilação de p15 e p16. Resultados: Com mediana de seguimento de vinte meses, as SG, SLP e SLD foram, respectivamente, 45,6%, 34,3% e 63,0% e a resposta completa de 46,0%. Em análise multivariada, ECOG >= 2 e a hiperexpressão do gene CCNA2 foram associadas à pior SG em cinco anos, nos LCTP nodais (p=0,008 e p=0,002). Em análise univariada os genes CCNA2, TOP2A e CHEK1 foram associados ao pior prognóstico nos LCTP/SOE e melhor nos LGCA/ALK-. A hiperexpressão do gene VEGF1 se associou ao pior prognóstico no LGCA/ALK- e LCTA. Metilação de p15INK4b não foi encontrada nos LGCA/ALK+ e em análise multivariada foi associada a pior SLP em 5 anos nos LCTP não-ALK+ (HR: 9,88; p=0,03). O painel gênico testado não apresentou poder para discriminar as diferentes variantes histopatólogicas de LCTP nodais, porém demonstrou-se associação direta entre a intensidade de mediana de expressão desses genes e agressividade biológica nesse grupo heterogêneo de neoplasias. O significado prognóstico de imunoexpressão da proteína ALK sofreu influência das variáveis constituintes do IPI nessa coorte. Conclusão: A hiperexpressao dos genes CCNA2, TOP2A e CHEK1 foram associadas a prognóstico desfavorável nos LCTP/SOE e favorável nos LGCA/ALK-. Fenótipo hipermetilado de p15INK4b não foi evento observado em LGCA/ALK+, porém foi associado a pior prognóstico nos LCTP nodais não-ALK+ / Background: Peripheral T-cell non-Hodgkin\'s lymphomas (PTCL) are rare tumors characterized by monoclonal proliferation of mature T lymphocytes; they correspond to 15% of lymphoid malignancies and have specific geographic distribution. PTCL comprise 22 distinct clinicopathologic entities, heterogeneous from the clinical and epidemiological perspective, as well as morphologic, phenotypic and molecular. The group of presentation predominantly nodal comprises the histological variants ALCL/ALK+, ALCL/ALK-, AITL and PTCL/NOS. Its treatment is based on polychemotherapy with anthracycline and consolidation with autologous hematopoietic stem cell transplantation (ASCT). With the exception of ALCL/ALK+, these tumors show overall survival at 5 years from 30% to 40%. Due to unfavorable outcomes, gene expression profile studies, as well as studies of methylation of tumor suppressor genes, have emerged in recent years in order to refine the pathological diagnosis of these cancers, improve the pathophysiological knowledge and prognosis, and establish possible therapeutic targets. Preliminary studies with nodal PTCLs indicate favorable prognostic value of overexpression of inflammatory pattern genes like NFkB1 e IKBkB, and unfavorable in the case of proliferative genes as CCNA2, TOP2A, CHEK1 and the methylated phenotype of suppressor genes p15INK4b e p16INK4a. Objectives: Assess the impact of relative expression of genes CCNA2, TOP2A, CHEK1, NFkB, IKBkB and VEGF1 and the methylation of the genes p15 and p16 in Brazilian population with nodal PTCLs treated with CHOP-like chemotherapy for the outcomes of overall survival, progression-free survival and disease-free survival. Methods: Gene expression was assessed by qtPCR of paraffin samples of 63 patients. The median gene expression was compared with clinical variables and outcomes. Qualitative methylation-specific PCR was used to assess the methylation of p15 and p16. Results: With a segment median of 20 months, the OS, PFS and DFS were, respectively, 45,6%, 34,3% and 63,0% and the complete response (CR) was 46,0%. In multivariate analysis, ECOG >= 2 and overexpression of the gene CCNA2 were associated with worse OS at 5 years in nodal PTCLs (p = 0,008 and p = 0,002). In univariate analysis, the genes CCNA2, TOP2A and CHEK1 were associated with worse prognosis in PTCL/NOS and better in ALCL/ALK negative. The overexpression of the gene VEGF1 was associated with worse prognosis in the variants AITL and ALCL/ALK negative. Methylation of the gene p15INK4b was not found in ALCL/ALK+ group, and in multivariate analysis was associated with worse 5-years PFS in the group of PTCL non-ALK+ (HR: 9,88 and p = 0,03). The gene panel tested showed no power to discriminate the different histopathology of nodal PTCL, but it showed a direct association between the median intensity of expression of these genes and biological aggressiveness in this heterogeneous group of neoplasms. The prognostic significance of immunostaining of ALK protein was influenced by IPI constituents variables in this cohort. Conclusion: The overexpression of genes CCNA2, TOP2A e CHEK1 were associated with poor prognosis in PTCL/NOS and favorable in ALCL/ALK negative. Hypermethylated phenotype of gene p15INK4b was not an observed event in ALCL/ALK+, but it was associated with poor prognosis in nodal PTCL non-ALK+

INTRODUÇÃO: O presente estudo avaliou o tratamento com injeções intravítreas de Bevacizumabe (IVB) associadas à panfotocoagulação (PFC) da retina na retinopatia diabética proliferativa (RDP) de alto risco com ou sem edema macular (EM). MÉTODOS: Ensaio clínico randomizado, prospectivo, aberto e mascarado composto por pacientes com Diabetes melitos (DM) tipo 2. A acuidade visual (AV) foi medida com a tabela Early Treatment Diabetic Retinopathy Study e a sensibilidade ao contraste (SC) pela da tabela Vistech Consultants Incorporation 6500. Os pacientes foram submetidos a exame de angiofluoresceinografia para observação de neovascularização retiniana e isquemia macular e à tomografia de coerência óptica (OCT), para se obter a espessura foveal (EF) e o volume macular (VM). Após os exames, um dos olhos do mesmo paciente foi randomizado para realizar somente PFC, grupo controle (GC), e o outro para PFC associado a injeções IVB, grupo de estudo (GE). A hemorragia vítrea (HV) e a presença de complicações também foram avaliadas. RESULTADOS: Dos 42 pacientes incluídos, 35 completaram o estudo. A média de idade foi de 56±8 anos, com predominância do gênero masculino 21 (60%). Vinte e seis (74%) pacientes eram portadores de Hipertensão Arterial Sistêmica com média de duração de 9±10 anos. A média de duração do DM foi de 18±9 anos sendo 23 (66%) usuários de insulina e 21 (68,5%), fácicos. A AV e a SC não demonstraram diferença entre os grupos no total da amostra. O GE demonstrou melhora em comparação ao GC na EF no 1º mês, e no VM nos 1° e 3º meses de seguimento. Quanto aos 12 pacientes com EM bilateral somente a EF demonstrou redução no GE no 1º mês de seguimento. Ao se avaliar os grupos separadamente, o GC apresentou agravamento da AV e SC durante todo seguimento. Houve também aumento da EF nos 1º e 6º meses e VM nos 1º , 3º e 6º meses de seguimento. O GE demonstrou estabilização da AV, SC, EF e VM. Correlacionado às funções visuais, AV com a SC, toda vez que houve piora da AV esta foi acompanhada pelo agravamento da SC em todos os momentos no GC e GE. Quando correlacionadas as AV e SC com as EF e VM, toda vez que a espessura macular aumentava, havia piora da função visual. Dos sete pacientes excluídos do estudo por apresentarem HV, cinco integravam o GC e dois o GE. Não houve aparecimento de catarata, endoftalmite e/ou aumento significativo da pressão ocular. CONCLUSÃO: Na RDP de alto risco, o uso adjuvante de injeções intravítreas de Bevacizumabe associadas à panfotocoagulação da retina pode estabilizar a AV, SC, EF e VM, diminuir a incidência de HV e reduzir a da espessura macular. Em relação à correlação entre as variáveis, quando houve piora da AV, esta foi acompanhada da piora da SC e o aumento da EF e VM causaram piora da AV e SC / INTRODUCTION: This study evaluated the treatment with intravitreal injections of Bevacizumab (IVB) associated with panretinal photocoagulation (PRP) in high-risk proliferative diabetic retinopathy (PDR) with or without diabetic macular edema (DME). METHODS: Prospective, open and masked, randomized clinical trial, composed of patients with type 2 Diabetes Mellitus (DM). The visual acuity (VA) was measured with the Early Treatment Diabetic Retinopathy Study charts and the contrast sensitivity (CS) through the chart of Vistech Consultants Incorporation 6500. Patients were submitted to a fluorescein angiography examination to observe retinal neovascularization and macular ischemia and to an optical coherence tomography (OCT) to obtain the foveal thickness (FT) and macular volume (MV). After the tests, one of the eyes from the same patient was randomized to realize only the PRP, the control group (CG), and the other for PRP associated to IVB injections, the study group (SG). Vitreous hemorrhage (VH) and presence of complications were also evaluated. RESULTS: Thirty-five of the forty-two patients included, completed the study. The mean age was 56±8 years, with a predominance of 21 (60%) males. Twenty-six (74%) patients had systemic hypertension with a mean duration of 9±10 years. The mean duration of DM was 18±9 years, of which 23 (66%) were insulin users and 21 (68.5%) were phakic. The VA and CS showed no difference between groups in the total sample. The SG showed improvement compared to the CG in FT for the 1st month, and in MV for the 1st and 3rd month of follow-up. As for the 12 patients with bilateral ME, only the FT showed a reduction in the SG for the 1st month of follow-up. When evaluating the groups separately, the CG showed worsening of VA and CS at all times. There was also an increase of FT for the 1st and 6th months and of MV for the 1st, 3rd and 6th month follow-up. The SG showed stabilization of VA, CS, FT and MV. When correlated to visual functions, VA and CS, a worsening of the VA was accompanied every time by a worsening of the CS in both the CG and SG. When VA and CS are correlated to FT and MV, there was worsening of visual function whenever macular thickness increased. Of the seven patients excluded from the study by presenting VH, 5 belonged to the CG and the 2 to the SG. There was no incidence of cataracts, endophthalmitis and/or significant increase in intraocular pressure. CONCLUSION: In high-risk PDR, intraocular injections of Bevacizumab as an adjuvant treatment to PRP, can stabilize VA, CS, FT and MV, reduce of the incidence of VH and decrease the macular thickness. Regarding the correlation between variables, when there was a worsening of VA, this was accompanied by a worsening of the CS, and an increase in FT and MV caused the worsening of the VA and CS

Objetivo: Comparar o efeito da terapia da fotocoagulação panretiniana (PFC) associada à injeção intravítrea de Ranibizumabe (RBZ) versus terapia isolada com PFC em pacientes com retinopatia diabética proliferativa (RDP) precoce, virgens de tratamento, com ou sem edema macular diabético (DME) durante 6 meses de acompanhamento. Projeto: Estudo prospectivo intervencionista, randomizado e controlado. Métodos: Sessenta olhos de 30 pacientes com RDP bilateral precoce foram randomizados para o grupo de estudo (GE) que foram tratados com PFC associado a duas injeções de RBZ intravítreo (0.5mg/0.05ml) ou para o grupo controle (GC) tratados apenas com PFC. Mudanças na acuidade visual (AV) corrigida, na sensibilidade ao contraste (SC) e na espessura foveal (EF) foram comparados no início, e nos 1, 3 e 6 meses após o tratamento. Resultados: No GE, a diferença na média da AV do baseline para o mês 6 teve um aumento significativo de + 3,4 letras (p = 0,006) e uma diminuição significativa na EF de - 47.6um (p < 0,001). No GC, a diferença na média da AV teve uma diminuição de - 3,4 letras (p = 0,04) e uma mudança na EF de -3.8 um (p = 0,96). Com relação ao teste de SC dentre os 28 olhos do GE, houve uma melhora no mês 6 em relação ao baseline nos ciclos: 1,5 (p < 0.001) e 3,0 ciclo (p=0.023). Dentre os 30 olhos do GC, não houve uma diferença estatística nos momentos estudados. Conclusão: A injeção intravítrea de RBZ associado com PFC pode ser um tratamento eficaz em olhos de pacientes com RDP precoce e EMD / Purpose: To compare the efficacy of therapy with panretinal photocoagulation (PRP) and intravitreal ranibizumab (RBZ) injection versus PRP alone in patients with treatment-naive bilateral non-high risk proliferative diabetic retinopathy (PDR) with and without diabetic macular edema (DME) with a 6-month follow-up. Design: Prospective, interventional, randomized controlled trial. Methods: Sixty eyes of 30 patients with bilateral non-high risk PDR were randomized either to the study group (SG) receiving PRP plus two intravitreal ranibizumab injections (0.5mg/0.05ml), the first one week before and the second four weeks after the PRP or to the control group (CG) receiving PRP alone. Mean change in best-corrected visual acuity (BCVA), contrast sensitivity (CS) and central macular thickness (CMT) were compared at baseline and 1, 3 and 6 months after treatment. Results: Changes from baseline to 6 months showed in the SG an increased in the BCVA by + 3.4 letters (p= 0.006) with a decrease in CMT by - 47.6um (p < 0.001). In the CG, a decrease by - 3.4 letters (p = 0.04) and an decrease by -3.8um (p= 0.96). Regarding the CS in the SG, there was an improvement compared to baseline for the sixth month in the 1.5 (p < 0.001) and 3.0 cycles (p = 0.023). The CG did not show significant results from baseline to month 6. Conclusion: Intravitreal RBZ associated with PRP can be an effective treatment in eyes with non-high risk PDR and DME

Diversas doenças estão associadas com a formação de novos vasos a parti vasos pré-existentes, ou angiogênese. Dentre elas está a aterosclerose (Griffioen & Molema, 2000). Pesquisas recentes demonstram que a hipercolesterolemia, que têm um papel importante na fisiologia da aterosclerose, também pode prejudicar a ação de fatores angiogênicos (Jang et.al., 2000). A hipercolesterolemia que é decorrente de aumento de LDL no plasma ocasiona um aumento no tempo de permanência desta partícula na circulação (Yasunobu, 2001). Contudo, a LDL pode sofrer modificação na circulação, dando origem a uma subfração mais eletronegativa da LDL, a LDL (-). A LDL (-) pode prejudicar cada etapa da angiogênese, desregulando a função endotelial (Tai et. al., 2006). Em nosso estudo, vimos que apesar da LDL (-) ter estimulado a miga celular, esta partícula inibiu a formação de túbulos in vitro. A LDL (-) não foi capa afetar a angiogênese in vivo. / A large number of diseases is associated with formation of new blood vessels out of pre-existing capillaries, or angiogenesis. These diseases include the atherosclerosis (Griffioen & Molema, 2000). Resents researches demonstrate that the hypercholesterolemia, that have a important role in the physiology of the atherosclerosis, can impaired the angiogenesis (Jang et. al., 2000) . The hypercholesterolemia that is decurrente of high levels of LDL in the plasma causes an increase in the time of permanence this particle in the circulation (Yasunobu, 2001). However, the LDL can to suffer modification in the circulation, giving rise to a subfration more eletronegative from LDL, the LDL (-). The LDL (-) could impair each one of the steps of the angiogenesis, thereby dysregulating endothelial function (Tai et. al., 2006). In our study, see that despite the LDL (-) have stimulated the cell migration, this particle inhibited the Tube formation in vitro. The LDL (-) didn\'t affect the angiogenesis in vivo.

Introdução: Os linfomas não-Hodgkin de células T periféricas (LCTP) são neoplasias raras caracterizadas pela proliferação monoclonal de linfócitos T maduros. Correspondem a 15% das malignidades linfoides e têm distribuição geográfica peculiar. Compreendem 22 entidades clínico-patológicas distintas, heterogêneas do ponto de vista clínico-epidemiológico, morfológico, fenotípico e molecular. O grupo de apresentação predominantemente nodal compreende as variantes histológicas LGCA/ALK+, LGCA/ALK-, LCTA e LCTP/SOE. Sua terapêutica se baseia em poliquimioterápicos à base de antraciclina e consolidação com transplante de células tronco hematopoiéticas autólogas (TCTH). Com exceção do LGCA/ALK+, apresentam sobrevida global em cinco anos de 30% a 40%. Devido aos desfechos desfavoráveis, estudos de perfil de expressão gênica e de metilação de genes supressores tumorais têm emergido nos últimos anos para refinar o diagnóstico destas neoplasias, melhorar o conhecimento fisiopatológico e o prognóstico e estabelecer possíveis alvos terapêuticos. Estudos preliminares com LCTP nodais indicam valor prognóstico favorável da hiperexpressão de genes de padrão inflamatório NFkB1 e IKBkB e desfavorável nos casos de supraregulação de genes de padrão proliferativo como CCNA2, TOP2A e CHEK1 e do fenótipo metilado de p15INK4b e p16INK4a. Objetivo:Avaliar o impacto da expressão relativa dos genes CCNA2, TOP2A, CHEK1, NFkB1, IKBkB e VEGF1 e da metilação dos genes p15 e p16 em população brasileira com LCTP nodais tratados com quimioterapia CHOP-símile para os desfechos de sobrevida global, sobrevida livre de progressão e sobrevida livre de doença. Métodos: A expressão gênica foi avaliada por qtPCR de amostras fixadas em formol e incluídas em parafina de 63 pacientes. A mediana de expressão dos genes foi comparada com variáveis clínicas e desfechos. PCR qualitativa metilação-específico foi usada avaliar a metilação de p15 e p16. Resultados: Com mediana de seguimento de vinte meses, as SG, SLP e SLD foram, respectivamente, 45,6%, 34,3% e 63,0% e a resposta completa de 46,0%. Em análise multivariada, ECOG >= 2 e a hiperexpressão do gene CCNA2 foram associadas à pior SG em cinco anos, nos LCTP nodais (p=0,008 e p=0,002). Em análise univariada os genes CCNA2, TOP2A e CHEK1 foram associados ao pior prognóstico nos LCTP/SOE e melhor nos LGCA/ALK-. A hiperexpressão do gene VEGF1 se associou ao pior prognóstico no LGCA/ALK- e LCTA. Metilação de p15INK4b não foi encontrada nos LGCA/ALK+ e em análise multivariada foi associada a pior SLP em 5 anos nos LCTP não-ALK+ (HR: 9,88; p=0,03). O painel gênico testado não apresentou poder para discriminar as diferentes variantes histopatólogicas de LCTP nodais, porém demonstrou-se associação direta entre a intensidade de mediana de expressão desses genes e agressividade biológica nesse grupo heterogêneo de neoplasias. O significado prognóstico de imunoexpressão da proteína ALK sofreu influência das variáveis constituintes do IPI nessa coorte. Conclusão: A hiperexpressao dos genes CCNA2, TOP2A e CHEK1 foram associadas a prognóstico desfavorável nos LCTP/SOE e favorável nos LGCA/ALK-. Fenótipo hipermetilado de p15INK4b não foi evento observado em LGCA/ALK+, porém foi associado a pior prognóstico nos LCTP nodais não-ALK+ / Background: Peripheral T-cell non-Hodgkin\'s lymphomas (PTCL) are rare tumors characterized by monoclonal proliferation of mature T lymphocytes; they correspond to 15% of lymphoid malignancies and have specific geographic distribution. PTCL comprise 22 distinct clinicopathologic entities, heterogeneous from the clinical and epidemiological perspective, as well as morphologic, phenotypic and molecular. The group of presentation predominantly nodal comprises the histological variants ALCL/ALK+, ALCL/ALK-, AITL and PTCL/NOS. Its treatment is based on polychemotherapy with anthracycline and consolidation with autologous hematopoietic stem cell transplantation (ASCT). With the exception of ALCL/ALK+, these tumors show overall survival at 5 years from 30% to 40%. Due to unfavorable outcomes, gene expression profile studies, as well as studies of methylation of tumor suppressor genes, have emerged in recent years in order to refine the pathological diagnosis of these cancers, improve the pathophysiological knowledge and prognosis, and establish possible therapeutic targets. Preliminary studies with nodal PTCLs indicate favorable prognostic value of overexpression of inflammatory pattern genes like NFkB1 e IKBkB, and unfavorable in the case of proliferative genes as CCNA2, TOP2A, CHEK1 and the methylated phenotype of suppressor genes p15INK4b e p16INK4a. Objectives: Assess the impact of relative expression of genes CCNA2, TOP2A, CHEK1, NFkB, IKBkB and VEGF1 and the methylation of the genes p15 and p16 in Brazilian population with nodal PTCLs treated with CHOP-like chemotherapy for the outcomes of overall survival, progression-free survival and disease-free survival. Methods: Gene expression was assessed by qtPCR of paraffin samples of 63 patients. The median gene expression was compared with clinical variables and outcomes. Qualitative methylation-specific PCR was used to assess the methylation of p15 and p16. Results: With a segment median of 20 months, the OS, PFS and DFS were, respectively, 45,6%, 34,3% and 63,0% and the complete response (CR) was 46,0%. In multivariate analysis, ECOG >= 2 and overexpression of the gene CCNA2 were associated with worse OS at 5 years in nodal PTCLs (p = 0,008 and p = 0,002). In univariate analysis, the genes CCNA2, TOP2A and CHEK1 were associated with worse prognosis in PTCL/NOS and better in ALCL/ALK negative. The overexpression of the gene VEGF1 was associated with worse prognosis in the variants AITL and ALCL/ALK negative. Methylation of the gene p15INK4b was not found in ALCL/ALK+ group, and in multivariate analysis was associated with worse 5-years PFS in the group of PTCL non-ALK+ (HR: 9,88 and p = 0,03). The gene panel tested showed no power to discriminate the different histopathology of nodal PTCL, but it showed a direct association between the median intensity of expression of these genes and biological aggressiveness in this heterogeneous group of neoplasms. The prognostic significance of immunostaining of ALK protein was influenced by IPI constituents variables in this cohort. Conclusion: The overexpression of genes CCNA2, TOP2A e CHEK1 were associated with poor prognosis in PTCL/NOS and favorable in ALCL/ALK negative. Hypermethylated phenotype of gene p15INK4b was not an observed event in ALCL/ALK+, but it was associated with poor prognosis in nodal PTCL non-ALK+

INTRODUÇÃO: O presente estudo avaliou o tratamento com injeções intravítreas de Bevacizumabe (IVB) associadas à panfotocoagulação (PFC) da retina na retinopatia diabética proliferativa (RDP) de alto risco com ou sem edema macular (EM). MÉTODOS: Ensaio clínico randomizado, prospectivo, aberto e mascarado composto por pacientes com Diabetes melitos (DM) tipo 2. A acuidade visual (AV) foi medida com a tabela Early Treatment Diabetic Retinopathy Study e a sensibilidade ao contraste (SC) pela da tabela Vistech Consultants Incorporation 6500. Os pacientes foram submetidos a exame de angiofluoresceinografia para observação de neovascularização retiniana e isquemia macular e à tomografia de coerência óptica (OCT), para se obter a espessura foveal (EF) e o volume macular (VM). Após os exames, um dos olhos do mesmo paciente foi randomizado para realizar somente PFC, grupo controle (GC), e o outro para PFC associado a injeções IVB, grupo de estudo (GE). A hemorragia vítrea (HV) e a presença de complicações também foram avaliadas. RESULTADOS: Dos 42 pacientes incluídos, 35 completaram o estudo. A média de idade foi de 56±8 anos, com predominância do gênero masculino 21 (60%). Vinte e seis (74%) pacientes eram portadores de Hipertensão Arterial Sistêmica com média de duração de 9±10 anos. A média de duração do DM foi de 18±9 anos sendo 23 (66%) usuários de insulina e 21 (68,5%), fácicos. A AV e a SC não demonstraram diferença entre os grupos no total da amostra. O GE demonstrou melhora em comparação ao GC na EF no 1º mês, e no VM nos 1° e 3º meses de seguimento. Quanto aos 12 pacientes com EM bilateral somente a EF demonstrou redução no GE no 1º mês de seguimento. Ao se avaliar os grupos separadamente, o GC apresentou agravamento da AV e SC durante todo seguimento. Houve também aumento da EF nos 1º e 6º meses e VM nos 1º , 3º e 6º meses de seguimento. O GE demonstrou estabilização da AV, SC, EF e VM. Correlacionado às funções visuais, AV com a SC, toda vez que houve piora da AV esta foi acompanhada pelo agravamento da SC em todos os momentos no GC e GE. Quando correlacionadas as AV e SC com as EF e VM, toda vez que a espessura macular aumentava, havia piora da função visual. Dos sete pacientes excluídos do estudo por apresentarem HV, cinco integravam o GC e dois o GE. Não houve aparecimento de catarata, endoftalmite e/ou aumento significativo da pressão ocular. CONCLUSÃO: Na RDP de alto risco, o uso adjuvante de injeções intravítreas de Bevacizumabe associadas à panfotocoagulação da retina pode estabilizar a AV, SC, EF e VM, diminuir a incidência de HV e reduzir a da espessura macular. Em relação à correlação entre as variáveis, quando houve piora da AV, esta foi acompanhada da piora da SC e o aumento da EF e VM causaram piora da AV e SC / INTRODUCTION: This study evaluated the treatment with intravitreal injections of Bevacizumab (IVB) associated with panretinal photocoagulation (PRP) in high-risk proliferative diabetic retinopathy (PDR) with or without diabetic macular edema (DME). METHODS: Prospective, open and masked, randomized clinical trial, composed of patients with type 2 Diabetes Mellitus (DM). The visual acuity (VA) was measured with the Early Treatment Diabetic Retinopathy Study charts and the contrast sensitivity (CS) through the chart of Vistech Consultants Incorporation 6500. Patients were submitted to a fluorescein angiography examination to observe retinal neovascularization and macular ischemia and to an optical coherence tomography (OCT) to obtain the foveal thickness (FT) and macular volume (MV). After the tests, one of the eyes from the same patient was randomized to realize only the PRP, the control group (CG), and the other for PRP associated to IVB injections, the study group (SG). Vitreous hemorrhage (VH) and presence of complications were also evaluated. RESULTS: Thirty-five of the forty-two patients included, completed the study. The mean age was 56±8 years, with a predominance of 21 (60%) males. Twenty-six (74%) patients had systemic hypertension with a mean duration of 9±10 years. The mean duration of DM was 18±9 years, of which 23 (66%) were insulin users and 21 (68.5%) were phakic. The VA and CS showed no difference between groups in the total sample. The SG showed improvement compared to the CG in FT for the 1st month, and in MV for the 1st and 3rd month of follow-up. As for the 12 patients with bilateral ME, only the FT showed a reduction in the SG for the 1st month of follow-up. When evaluating the groups separately, the CG showed worsening of VA and CS at all times. There was also an increase of FT for the 1st and 6th months and of MV for the 1st, 3rd and 6th month follow-up. The SG showed stabilization of VA, CS, FT and MV. When correlated to visual functions, VA and CS, a worsening of the VA was accompanied every time by a worsening of the CS in both the CG and SG. When VA and CS are correlated to FT and MV, there was worsening of visual function whenever macular thickness increased. Of the seven patients excluded from the study by presenting VH, 5 belonged to the CG and the 2 to the SG. There was no incidence of cataracts, endophthalmitis and/or significant increase in intraocular pressure. CONCLUSION: In high-risk PDR, intraocular injections of Bevacizumab as an adjuvant treatment to PRP, can stabilize VA, CS, FT and MV, reduce of the incidence of VH and decrease the macular thickness. Regarding the correlation between variables, when there was a worsening of VA, this was accompanied by a worsening of the CS, and an increase in FT and MV caused the worsening of the VA and CS