Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-10-11T14:26:18Z No. of bitstreams: 1 rafaelguzelladecarvalho.pdf: 5817882 bytes, checksum: 3cecfbefd0364ef85d5c3183dcbdfc47 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-10-16T14:07:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rafaelguzelladecarvalho.pdf: 5817882 bytes, checksum: 3cecfbefd0364ef85d5c3183dcbdfc47 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-16T14:07:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rafaelguzelladecarvalho.pdf: 5817882 bytes, checksum: 3cecfbefd0364ef85d5c3183dcbdfc47 (MD5) Previous issue date: 2015-07-23 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Glicosaminoglicanos (GAGs) são heteropolissacarídeos lineares ligados a um núcleo proteico dos proteoglicanos (PGs). Condroitim sulfato (CS) é GAG sulfatado composto por unidades dissacarídicas repetidas de ácido D-glucurônico e N-acetil-galactosamina, esse composto possui atividades biológicas associadas à interação com diferentes elementos da matriz. Estas ações têm sido relacionadas às suas características estruturais relativas ao elevado teor de grupos sulfato e carboxila que originam domínios estruturais que são conhecidos por participar de funções fisiológicas específicas. O presente trabalho teve por objetivo a identificação e caracterização estrutural dos GAGs extraídos de diferentes tecidos de lula (Doryteuthis plei) bem como a avaliação da atividade anticoagulante destes compostos. Para isso inicialmente determinamos a técnica de extração dos GAGs dos tecidos de manto, nadadeira, tentáculos e pele utilizando degradação com enzimas proteolíticas e purificação utilizando a técnica de cromatografia de troca iônica. Realizamos a identificação dos GAGs com degradações com liases específicas (chases AC e B de F. heparinum), em que ficou evidenciado que CS é o GAG majoritário dos tecidos de D. plei. Os CS encontrados tiveram peso molecular detectados na faixa de 30-50 kDa. A dosagem química de sulfato demonstrou que estes CS possuíam relação superior a 1,2 sulfato/hexosamina o que nos forneceu o indicativo que estas macromoléculas eram supersulfatadas. Este fato foi confirmado pela análise por FACE dos produtos da digestão de CS de manto e nadadeira com chase AC de A. aurescens em que a maior sulfatação foi relacionada à presença de alta proporção de resíduos di-sulfatados, ΔDi4,6S (≈55%). Técnicas espectroscópicas de Raman e RMN permitiram confirmar a maior substituição e sulfatação nas posições 4- e 6- da GalNAc, respectivamente. Os CS de manto e nadadeira ainda demonstraram atividade anticoagulante associada à inibição da via intrínseca da coagulação sendo detectada inibição dos fatores IIa e Xa. Desta forma concluímos que CS-E é o tipo de glicosaminoglicano constituinte nos tecidos de lula e que ele possui características tecido-específica, desempenhando sua atividade anticoagulante de acordo com o padrão de sulfatação. / Glycosaminoglycans (GAGs) are linear heteropolysaccharides attached to a core protein of proteoglycans (PGs). Chondroitin sulfate (CS) is sulfated GAG composed of repeating disaccharide units of D-glucuronic acid and N-acetyl-galactosamine, this compound has biological activities associated to their interaction with different components of the extracellular matrix. These activities have been related to their structural characteristics due to the high content of sulfate and carboxyl groups originating structural domains which are known to participate in specific physiological functions. This aim of this study was the identification and structural characterization of glycosaminoglycans extracted from squid different tissues (Doryteuthis plei) as well as evaluation of the anticoagulant activity of these compounds. Initially, we determined the procedures GAGs extraction in mantle tissue, fin, tentacles and skin using degradation with proteolytic enzymes and purification using ion exchange chromatography. We carried out the identification of GAG to degradation with specific lyases (chases AC and B from F. heparinum), wherein we evidenced that CS is the principal GAG of the D. plei tissues. Molecular weight of CS had a range of 30-50 kDa. Quantification of sulfate groups demonstrated that these CS had higher ratio of sulfate/hexosamine (1.2), a indicative that these macromolecules were oversulfated. This fact was confirmed by FACE analysis of CS from mantle and fin after digestion with chase AC from A. aurescens where most sulfation was related to the presence of high proportion of di-sulfated residues, ΔDi4,6S (≈55%). Raman spectroscopic and NMR techniques confirmed the increased substitution and sulfation in positions 4 and 6 of GalNAc, respectively. CS of the mantle and fin demonstrated anticoagulant activity associated with inhibition of the intrinsic coagulation pathway by inhibition of factors Xa and IIa. Thus, we conclude that CS-E is the kind of glycosaminoglycan constituent in squid tissues and it has tissue-specific characteristics, playing their anticoagulant activity according to the sulfation pattern.

Submitted by ANGELICA AUGUSTA GRIGOLI DOMINATO null (angelica@unoeste.br) on 2017-02-16T18:51:51Z No. of bitstreams: 1 Angélica A. Grigoli Dominato.pdf: 4485568 bytes, checksum: 4abc8fe39b8c64a5ed8be37f2be077de (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-02-20T20:26:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dominato_aag_dr_sjrp.pdf: 4485568 bytes, checksum: 4abc8fe39b8c64a5ed8be37f2be077de (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-20T20:26:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dominato_aag_dr_sjrp.pdf: 4485568 bytes, checksum: 4abc8fe39b8c64a5ed8be37f2be077de (MD5) Previous issue date: 2017-01-20 / A atividade metabólica fúngica, especialmente nos endofíticos, favorece a secreção de moléculas como antibióticos, pigmentos, enzimas e polissacarídeos, que podem ser aplicadas nas indústrias alimentícia, cosmética, farmacêutica, entre outras. A diversidade química dos exopolissacarídeos (EPS) bem como a possibilidade de sua utilização como substrato para diferentes modificações químicas (carboxilação, sulfatação e metilação) aumentam seu espectro de aplicação. Realizar o cultivo submerso dos fungos endofíticos Neofusicoccum parvum, Fusarium sp e Colletotrichum gloeosporioides para a produção de EPS foi o primeiro objetivo deste trabalho. Uma vez obtidos, os EPS foram purificados e quimicamente caracterizados. Sulfatação e ensaio da atividade anticoagulante foram realizados. Os parâmetros concentração de inóculo e tempo de cultivo foram estabelecidos para maior produção dos EPS, por fermentação submersa. Etapas de purificação, por centrifugação, foram efetuadas após análises por cromatografia de exclusão estérica a alta pressão, com detecção por índice de refração (HPSEC/RID). Os EPS purificados [precipitado do C. gloeosporioides (C. gloeosporioidesprec) e os três sobrenadantes] mostraram-se praticamente isentos de proteínas. A hidrólise ácida e subsequente análise dos hidrolisados por cromatografia de troca aniônica a alta pressão com detecção por amperometria pulsada (HPAEC/PAD) indicaram que apenas o C. gloeosporioidesprec era uma glucana. A análise por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massa (GC/MS) mostrou um único derivado, 1,3,5 tri-O-acetil, 2,4,6-tri-O-metil glucitol com fragmentos de massa (m/z 118, 161, 203, 234.1) condizente com uma glucana do tipo (1→3). Os espectros de FT-IR apresentaram sinais na região de impressão digital, 926 cm-1 e 820 cm-1, típicos de polissacarídeos em configuração . Esses resultados foram confirmados por ressonância magnética nuclear bidimensional (HSQC), com um único acoplamento C1/H1, em 99,3/5,18 ppm e um sinal deslocado para campo baixo, 82,8/3,74 ppm, característico de C-3 substituído, indicando que o EPS é uma α-(1→3)-glucana. A sulfatação desta molécula resultou em α-(1→3)-D-glucanasulf com DS de 0,75 que foi utilizada nos ensaios de atividade anticoagulante. O aumento do tempo para a coagulação, nos testes do APTT (Tempo de Tromboplastina Parcial Ativada) e TT (Tempo de Trombina), foi concentração-dependente, indicando que [α-(1→3)-D-glucanasulf] pode atuar como um inibidor da via intrínseca da coagulação sanguínea e da conversão do fibrinogênio em fibrina, caracterizando-a como um potencial anticoagulante. / Fungal metabolic activity, especially in the endophytic, favors secretion of molecules such as antibiotics, pigments, enzymes and polysaccharides, which can be applicable by food, cosmetic and pharmaceutical industries, and others. The chemical diversity of the exopolysaccharides (EPS), as well as the possibility of their use as substrate for different chemical modifications (carboxylation, sulfation and methylation) increases their application spectrum. Submerged cultivation of the endophytic fungi Neofusicoccum parvum, Fusarium sp and Colletotrichum gloeosporioides for the production of EPS was the first aim of this study. Once the EPS were obtained, they were purified and chemically characterized. Chemical modification by sulfation and anticoagulant activity assays were performed. Cultivation to obtain EPS were performed in submerged fermentation. The inoculum concentration and incubation time parameters were set in order to obtain a higher amount of EPS. Purification by centrifugation was performed after analysis by high pressure steric exclusion chromatography with refractive index detection (HPSEC / RID). Purified EPS [precipitate of C. gloeosporioides (C. gloeosporioidesprec) and the three supernatants] proved to be virtually free of protein polysaccharides. Acid hydrolysis and subsequent analysis of the hydrolysates with high performance anionic exchange chromatography with amperometric detection (HPAEC/PAD) indicated that only the C. gloeosporioidesprec was a glucan. Analysis from gas chromatography and mass spectrometry showed a single derivative, 1,3,5-tri-Oacetyl, 2,4,6-tri-O-methyl glucitol with mass fragments (m/z 118, 161, 203, 234.1) consistent with a (1→3)-glucan. FT-IR spectra showed absorption bands typical from carbohydrate and signals in the digital region at 926 cm-1 and 820 cm-1, typical of polysaccharides in the α- configuration. These results were confirmed by two-dimensional nuclear magnetic resonance (HSQC), with a single C1/H1, in 99.2/4.98 ppm, typical of one α bonding, and low-field 82.6/3.55 ppm signal displacement, characteristic of substituted C-3, indicating that EPS is an α-(1→3)-glucan. Sulfation of this molecule resulted in α- (1→3)-glucansulf with DS of 0.75 which was used in the anticoagulant activity assays. The increase in coagulation reaction time in the APTT (Activated Partial Thromboplastin Time) and TT (Thrombin Time) tests was concentration-dependent, indicating that [α-(1→3)-D-glucansulf] might act as an inhibitor of the intrinsic via of blood clotting and conversion of fibrinogen into fibrin, characterizing it as a potential anticoagulant.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EduardoHCF.pdf: 473372 bytes, checksum: 2fca55fdea3773bfb6942b7901966772 (MD5) Previous issue date: 2006-07-07 / Since the first description of sulfated polysaccharides from seaweeds, the biological activities of these compounds have been evaluated under different aspects and experimental procedures. Among the broad biological activities presented by seaweed polysaccharides, anticoagulant action appears as a promising function. In this present study we have obtained sulfated polysaccharides from the green seaweed Codium isthmocladium by proteolytic digestion, followed by separation into five fractions (0.3, 0.5, 0.7, 0.9 and 1.2) by sequential acetone precipitation. The chemical analyses have demonstrated that all fractions are composed mainly by sulfated polysaccharides. The anticoagulant activity of these fractions was determined by activated partial thromboplastin time (aPTT) and prothrombin time test (PT) using citrate normal human plasma. None fraction has shown anticoagulant activity by PT test. Furthermore, all of them have shown anticoagulant activity by aPTT test. These results indicated that the molecular targets of these sulfated polysaccharides are mainly in the intrinsic via of the coagulation cascade. Agarose gel electrophoresis in 1,3-diaminopropane acetate buffer, pH 9.0, stained with 0.1% toluidine blue showed the presence of two or three bands in several fractions while the fraction 0.9 showed a single spot. By anion exchange chromatography, the acid polysaccharides from the 0.9 acetone fraction were separated into two new fractions eluted respectively with 2.0 and 3.0 M NaCl. These compounds showed a molecular weight of 6.4 and 7.4 kDa respectively. Chemical analyses and infrared spectroscopy showed that Gal 1 and Gal 2 are sulfated homogalactans and differ one from the other in degree and localization of sulfate groups. aPPT test demonstrated that fractions 2,0 and 3,0M (Gal1 and Gal 2, respectively) have anticoagulant activity. This is the first time that anticoagulant sulfated homogalatans have been isolated from green algae. To prolong the coagulation time to double the baseline value in the aPTT, the required amount of sulfated galactan 1 (6,3mg) was similar to low molecular heparin Clexane?, whereas only 0,7mg of sulfated galactan 2 was needed to obtain the same effect. Sulfated galactan 2 in high doses (250mg) induces platelet aggregation. These results suggest that these galactans from C. isthmocladum have a potential application as an anticoagulant drug / Desde a primeira descri??o de polissacar?deos sulfatados em algas marinhas, as atividades biol?gicas destes compostos foram avaliadas sob diferentes aspectos e procedimentos experimentais. Dentre as diversas atividades biol?gicas apresentadas pelos polissacar?deos de algas marinhas, a a??o do anticoagulante aparece como sendo uma fun??o promissora. Neste presente estudo foram obtidas cinco fra??es de polissacar?deos sulfatados da alga Codium isthmocladium (F0.3, F0.5, F0.7, F0.9 e F1.2) , atrav?s de prote?lise seguida de fracionamento com volumes crescentes de acetona. An?lises qu?micas demonstraram que todas as fra??es s?o compostas por polissacar?deos sulfatados. A atividade anticoagulante destas fra??es cet?nicas foram determinadas por testes de tempo de tromboplastina parcial ativada (aPTT) e tempo de protrombina (PT), utilizando plasma humano normal citratado. Nenhuma fra??o apresentou atividade via teste de PT. No entanto todas as fra??es demonstraram atividade anticoagulante para teste de aPPT. Estes resultados indicam que o(s) seus alvo(s) molecular(es) esta(?o) localizado(s) principalmente na via intr?nseca da cascata de coagula??o. Eletroforese em gel de agarose demonstrou a presen?a de 2 ou 3 bandas em varias fra??es cet?nicas, enquanto a F0.9, somente uma banda. Os polissacar?deos da F 0.9, quando submetidos a cromatografia da troca i?nica, foram separados em duas novas fra??es elu?das com 2,0 e 3,0 M de NaCl. Estes compostos apresentaram um peso molecular de 6.4 e 7.4 kDa respectivamente. Analises qu?micas e espectroscopia de infravermelho das Gal 1 e Gal 2 demonstraram que essas s?o homogalactanas sulfatadas e que diferenciavam uma da outra apenas no grau e localiza??o dos grupamentos sulfato. Teste de aPTT mostrou que as fra??es 2,0 e 3,0 M (Gal 1 e Gal 2, respectivamente) possuem atividade anticoagulante. Esta ? a primeira vez que homogalactanas sulfatadas anticoagulantes s?o extra?das de macroalgas verdes. A massa necess?ria de Gal 1 (6,3mg) para prolongar o tempo normal de coagula??o em duas vezes, via teste de aPTT, foi semelhante a Clexane?, no entanto somente 0,7mg da Gal 2 s?o necess?rios para se obter o mesmo efeito. A Gal 2 em altas doses (250mg) induziu a agrega??o plaquet?ria. Estes resultados sugerem que as galactanas da alga C. isthmocladum tem potencial aplica??o como f?rmacos anticoagulantes

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LeandroSC_DISSERT_1-68.pdf: 3005513 bytes, checksum: 4d385177273793fb97add8fa79a198b9 (MD5) Previous issue date: 2012-03-08 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The coast of Rio Grande do Norte has more than 100 species of seaweed, mostly unexplored regarding their pharmacological potential. The sulfated polysaccharides (PS) are by far the more seaweed compounds studied, these present a range of biological properties, such as anticoagulant activity, anti-inflammatory, antitumor and antioxidant properties. In this study, we extract sulfated polysaccharide rich-extracts of eleven algae from the coast of Rio Grande do Norte (Dictyota cervicornis; Dictiopterys delicatula; Dictyota menstruallis; Dictyota mertensis; Sargassum filipendula; Spatoglossum schr?ederi; Gracilaria caudata; Caulerpa cupresoides; Caulerpa prolifera; Caulerpa sertularioides e Codim isthmocladum), and these were evaluated for the potential anticoagulant, antioxidant and antiproliferative. All polysaccharide extracts showed activity for anticoagulant, antioxidant and/or antiproliferative activity, especially D. delicatula and S. filipendula, which showed the most prominent pharmacological potential, thereby being chosen to have their sulfated polysaccharides extracted. By fractionating method were obtained six fractions rich in sulfated polysaccharides to the algae D. delicatula (DD-0,5V, DD-0, 7V, DD-1,0v, DD-1,3v, DD-1,5v and DD-2,0) and five fractions to the alga S. filipendula (SF-0,5V, SF-0,7V, SF-1,0v, SF-1,5v and SF-2,0v). For the anticoagulant assay only the fractions of D. delicatula showed activity, with emphasis on DD-1, 5v that presented the most prominent activity, with APTT ratio similar to clexane? at 0.1 mg/mL. When evaluated the antioxidant potential, all fractions showed potential in all tests (total antioxidant capacity, hydroxyl and superoxide radicals scavenging, ferrous chelation and reducing power), however, the ability to chelate iron ions appears as the main mechanism antioxidant of sulfated polysaccharides from seaweed. In antiproliferative assay, all heterofucanas showed dose-dependent activity for the inhibition of cell proliferation of HeLa, however, with the exception of SF-0,7V, SF- 1,0v and SF-1,5v, all fractions showed antiproliferative activity against MC3T3, a normal cell line. The heterofucana SF-1,5V had its antiproliferative mechanism of action evaluated. This heterofucan induces apoptosis in HeLa cells by a pathway caspase independent, promoting the release of apoptosis Inducing Factor (AIF) in the cytosol, which in turn induces chromatin condensation and DNA fragmentation into 50Kb fragments. These results are significant in that they provide a mechanistic framework for further exploring the use of SF-1.5v as a novel chemotherapeutics against human cervical cancer. / O litoral do Rio Grande do Norte apresenta mais de 100 esp?cies de macroalgas marinhas, a maioria delas ainda n?o explorada quanto ao seu potencial farmacol?gico. Os polissacar?deos sulfatados (PS) s?o de longe os compostos de macroalgas marinhas mais estudados, sendo atribu?da a estes uma gama de propriedades biol?gicas, como: atividade anticoagulante, antiinflamat?ria, antitumoral e antioxidante. Neste trabalho, obteve-se extratos ricos em polissacar?deos de onze algas do litoral do Rio Grande do Norte (Dictyota cervicornis; Dictiopterys delicatula; Dictyota menstruallis; Dictyota mertensis; Sargassum filipendula; Spatoglossum schr?ederi; Gracilaria caudata; Caulerpa cupresoides; Caulerpa prolifera; Caulerpa sertularioides e Codium isthmocladum), e estas foram avaliadas quanto ao seu potencial anticoagulante, antioxidante e antiproliferativo frente ? linhagem celular tumoral HeLa. Todos os extratos polissacar?dicos apresentaram atividades anticoagulante, antioxidante e/ou antiproliferativa, com destaque para os das algas D. delicatula e S. filipendula, que apresentaram os maiores ?ndices de potencial farmacol?gico, sendo, portanto, escolhidas para serem submetidos a passos posteriores de purifica??o de seus polissacar?deos sulfatados. Atrav?s do fracionamento com volumes crescentes de acetona foram obtidas seis fra??es ricas em polissacar?deos sulfatados da alga D. delicatula (DD-0,5v, DD-0,7v, DD-1,0v, DD-1,3v, DD-1,5v e DD-2,0v) e cinco fra??es da alga S. filipendula (SF-0,5v, SF- 0,7v, SF-1,0v, SF-1,5v e SF-2,0v). An?lises f?sico-qu?micas mostraram que estas s?o ricas em heterofucanas sulfatadas. Apenas as fra??es da alga D. delicatula apresentaram atividade anticoagulante, com destaque para DD-1,5v que apresentou a atividade mais proeminente com raz?o de APTT semelhante ? clexane?, f?rmaco anticoagulante comercial. Quando avaliadas com rela??o ao potencial antioxidante todas as fra??es apresentaram atividade em todos os testes realizados (Capacidade antioxidante total, sequestro de radicais super?xido e hidroxila, quela??o f?rrica e atividade redutora), entretanto, a capacidade de quela??o de ?ons ferro aparece como o principal mecanismo antioxidante dos polissacar?deos sulfatados dessas macroalgas marinhas. No ensaio antiproliferativo, todas as heterofucanas apresentaram atividades dose-dependente para a inibi??o da prolifera??o celular de HeLa, entretanto, as fra??es SF-0,7v, SF-1,0v e SF-1,5v apresentaram atividade espec?fica para esta linhagem celular, n?o inibindo a prolifera??o da linhagem celular normal MC3T3, sendo a heterofucana SF-1,5v escolhida para ter seu mecanismo de a??o antiproliferativo determinado. SF-1,5v induz a apoptose em c?lulas HeLa principalmente atrav?s de uma via independente da ativa??o das caspases, promovendo a libera??o do Fator Indutor da Apoptose (AIF) no citosol, que por sua vez induz a condensa??o da cromatina e fragmenta??o do DNA em fragmentos de 50Kb. Este trabalho ? o primeiro relato mostrando uma heterofucana cujo principal mecanismo antiproliferativo ? a libera??o de AIF mitocondrial para o citosol, o que torna SF-1,5v um promissor f?rmaco na terapia antitumoral, possibilitando uma alternativa aos quimioter?picos tradicionais.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mariana Santana Santos Pereira da Costa_DISSERT.pdf: 1585088 bytes, checksum: 3aeda3818f245371875985348e34059a (MD5) Previous issue date: 2010-03-19 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Seaweeds sulfated polysaccharides have been described as having various pharmacological activities. However, nothing is known about the influence of salinity on the structure of sulfated polysaccharides from green seaweed and pharmacological activities they perform. Therefore, the main aim of this study was to evaluate the effect of salinity of seawater on yield and composition of polysaccharides-rich fractions from green seaweed Caulerpa cupressoides var. flabellata, collected in two different salinities beaches of the coast of Rio Grande do Norte, and to verify the influence of salinity on their biological activities. We extracted four sulfated polysaccharides-rich fractions from C. cupressoides collected in Camapum beach (denominated CCM F0.3; F0.5; F1.0; F2.0), which the seawater has higher salinity, and Buzios beach (denominated CCB F0.3; F0.5; F1.0; F2.0). Different from that observed for other seaweeds, the proximate composition of C. cupressoides did not change with increased salinity. Moreover, interestingly, the C. cupresoides have high amounts of protein, greater even than other edible seaweeds. There was no significant difference (p>0.05) between the yield of polysaccharide fractions of CCM and its CCB counterparts, which indicates that salinity does not interfere with the yield of polysaccharide fractions. However, there was a significant difference in the sulfate/sugar ratio of F0.3 (p<0.05) and F0.5 (p<0.01) (CCM F0.3 and CCB F0.5 was higher than those determined for their counterparts), while the sulfate/sugar ratio the F1.0 and F2.0 did not change significantly (p>0.05) with salinity. This result suggested that the observed difference in the sulfate/sugar ratio between the fractions from CCM and CCB, is not merely a function of salinity, but probably also is related to the biological function of these biopolymers in seaweed. In addition, the salinity variation between collection sites did not influence algal monosaccharide composition, eletrophoretic mobility or the infrared spectrum of polysaccharides, demonstrating that the salinity does not change the composition of sulfated polysaccharides of C. cupressoides. There were differences in antioxidant and anticoagulant fractions between CCM and CCB. CCB F0.3 (more sulfated) had higher total antioxidant capacity that CCM F0.3, since the chelating ability the CCM F0.5 was more potent than CCB F0.5 (more sulfated). These data indicate that the activities of sulfated polysaccharides from CCM and CCB depend on the spatial patterns of sulfate groups and that it is unlikely to be merely a charge density effect. C. cupressoides polysaccharides also exhibited anticoagulant activity in the intrinsic (aPTT test) and extrinsic pathway (PT test). CCB F1.0 and CCM F1.0 showed different (p<0,001) aPTT activity, although F0.3 and F0.5 showed no difference (p>0,05) between CCM and CCB, corroborating the fact that the sulfate/sugar ratio is not a determining factor for biological activity, but rather for sulfate distribution along the sugar chain. Moreover, F0.3 and F0.5 activity in aPTT test was similar to that of clexane?, anticoagulant drug. In addition, F0.5 showed PT activity. These results suggest that salinity may have created subtle differences in the structure of sulfated polysaccharides, such as the distribution of sulfate groups, which would cause differences in biological activities between the fractions of the CCM and the CCB / Polissacar?deos sulfatados de algas marinhas t?m sido descritos por apresentarem diversas atividades farmacol?gicas. No entanto, nada se sabe a respeito da influ?ncia da salinidade da ?gua do mar na estrutura de polissacar?deos sulfatados de algas verdes e nas atividades farmacol?gicas por eles desempenhadas. Por isso, objetivo principal deste trabalho foi avaliar o efeito da salinidade da ?gua do mar no rendimento e na composi??o de fra??es polissacar?dicas da alga verde Caulerpa cupressoides var. flabellata, coletada em duas praias de diferentes salinidades do litoral do Rio Grande do Norte, bem como verificar se as altera??es provocadas pela salinidade se refletiriam em atividades biol?gicas das fra??es. Extraiu-se quatro fra??es ricas em polissacar?deos sulfatados da C. cupressoides coletada na praia de Camapum (denominado CCM F0.3, F0.5, F1.0, F2.0), a qual a ?gua tem maior salinidade, e na praia de B?zios (denominados CCB F0.3; F0.5, F1.0, F2.0). Diferente do observado para outras algas, a composi??o centesimal da C. cupressoides n?o se alterou em fun??o desta crescer em ambiente de maior da salinidade. Al?m disso, interessantemente, a C. cupressoides t?m altas quantidades de prote?nas, maior at? do esp?cies de algas comest?veis. N?o houve diferen?a significativa (p> 0,05) entre o rendimento das fra??es polissacar?dicas da CCM e das suas correlatas na CCB, o que indica que a salinidade n?o interfere no rendimento das fra??es polissacar?dicas. No entanto, houve uma diferen?a significativa na raz?o sulfato/a??car da F0.3 (p <0,05) e F0.5 (p <0,01) (a raz?o sulfato/a??car da CCM F0.3 e da CCB F0.5foram maiores do que suas correlatas), enquanto a raz?o sulfato/a??car da F1.0 e F2.0 n?o se alterou significativamente (p> 0,05) com a salinidade. Este resultado sugere que a diferen?a observada na raz?o sulfato/a??car entre as fra??es da CCM e CCB, n?o ?, meramente, fun??o da salinidade, mas provavelmente est? relacionada com a fun??o biol?gica destes biopol?meros nas algas marinhas. Al?m disso, a varia??o de salinidade entre os locais de coleta n?o influenciou a composi??o monossacar?dica, a mobilidade eletrofor?tica ou os espectros de infravermelho das fra??es polissacar?dicas, demonstrando que a salinidade n?o altera a composi??o de polissacar?deos sulfatados de C. cupressoides. Houve diferen?as nas atividades antioxidantes e anticoagulantes entre a CCM e CCB. CCB F0.3 (mais sulfatada) apresentou maior capacidade antioxidante total que CCM F0.3, j? a habilidade quelante da CCM F0.5 foi mais potente que a CCB F0.5 (mais sulfatada). Estes dados indicam que, provavelmente, as atividades biol?gicas das fra??es polissacar?dicas da CCM e CCB dependem do padr?o de distribui??o espacial dos grupos sulfatos no pol?mero e que n?o ?, meramente, um efeito da densidade de carga. Polissacar?deos de C. cupressoides tamb?m exibiram atividade anticoagulante na via intr?nseca (aPTT) e via extr?nseca (teste PT). CCB F1.0 e CCM F1.0 mostraram diferen?as significantes (p <0,001) no aPTT, j? F0.3 e F0.5 n?o mostraram diferen?a (p> 0,05) entre a CCM e CCB, corroborando o fato de que a raz?o sulfato/a??car n?o ? um fator determinante para a atividade biol?gica, mas sim, a distribui??o do sulfato ao longo da cadeia do polissacar?deo. Al?m disso, F0.3 e F0.5 apresentaram atividade no teste de aPTT semelhante a clexane?, medicamento anticoagulante. Adicionalmente, as F0.5 mostraram atividade no PT. Estes resultados sugerem que a salinidade pode ter criado sutis diferen?as na estrutura dos polissacar?deos sulfatados, como por exemplo, na distribui??o dos grupos sulfatos, o que ocasionaria as diferen?as nas atividades biol?gicas entre as fra??es da CCM e da CCB

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 VanessaOS.pdf: 1126102 bytes, checksum: dba464c890585c6be32a3fd2dc600a81 (MD5) Previous issue date: 2006-06-12 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Sulfated Polysaccharides with unique chemical structures and important biological activities has been found in a diversity of sea invertebrates. For that, to exist a huger interest on the biotechnology field in the research theses sulfated compounds isolated from sea organisms. Despite the privileged brazilian position for these compounds attainment, there are still a few scientific informations about the isolated substances and their biological activities. A head the displayed, the present work has for objectives, to evaluate the pharmacological properties of the glycosaminoglycans isolated from the sea shrimp Litopenaeus schimitti on homeostasis, blood coagulation, leukocytes migration and platelet/leukocyte adhesion. For this, yhe glycosaminoglycans were extracted from crustacean tissues by proteolysis, fractionation with acetone and later submitted to pharmacological assays. The crustacean tissues showed compounds heparin-like, with anticoagulant activity of 45 IU/mg and 90 IU/mg, respectively. These molecules showed low residual hemorrhagic effects in the tested concentration (100 ?g/mL), when compared to unfractionated commercial heparin (UFH). Another dermatan sulfate-like compound, predominately constituted for disulfated disaccharides, was isolated from crustacean abdomen. This compound showed an efficient effect on leukocytes migration inhibition, in the concentration of 15 ?g/mL, reducing the cellular infiltration in 65% when compared to the controlled animals. In this same concentration, the DS reduced in 60% the protein concentration of the peritoneal exudates. In the concentration, this compound of 0.5 mg/mL, it was capable to reduce in 40% platelet/leukocytes adhesion. Our data demonstrate that these sulfated polysaccharides isolated from the shrimp L. schimitti will can be used as bioactive compounds, appearing as active principles for pharmacological development, anticoagulants and inflammatory response regulators / Polissacar?deos sulfatados com caracter?sticas estruturais distintas e importantes atividades biol?gicas t?m sido encontrados em uma diversidade de invertebrados marinhos. Por isso existe um grande interesse no campo da biotecnologia na pesquisa destes compostos sulfatados isolados de organismos aqu?ticos. No entanto, apesar da posi??o privilegiada do Brasil para a obten??o destes compostos, ainda s?o poucas as informa??es cient?ficas sobre as subst?ncias isoladas e suas atividades biol?gicas. Diante do exposto, este presente trabalho teve por objetivos avaliar os potenciais farmacol?gicos dos glicosaminoglicanos (GAGs) isolados do camar?o marinho Litopenaeus schimitti, sobre a hemostasia, coagula??o sang??nea, migra??o leucocit?ria e ades?o celular. Para isso os GAGs foram extra?dos dos tecidos do crust?ceo mediante prote?lise, fracionamento com acetona e posteriormente submetidos aos ensaios farmacol?gicos. Os tecidos do crust?ceo, abd?men e cefalot?rax, apresentaram compostos semelhantes ? heparina (heparin?ides) com atividade anticoagulante de 45 UI/mg e 90 UI/mg, respectivamente. Estas mol?culas apresentaram baixo efeito hemorr?gico residual na concentra??o de 100 ?g/mL, quando comparada com a heparina comercial n?o fracionada (HNF). Um outro composto semelhante ao dermatam sulfato (DS), constitu?do predominantemente por dissacar?deos dissulfatados foi isolado do abd?men do crust?ceo. Este composto apresentou, na concentra??o de 15 ?g/?L, uma inibi??o significativa (P<0.01) da migra??o leucocit?ria, reduzindo a infiltra??o celular em 65% quando comparado com os animais controle. Nessa mesma concentra??o o DS reduziu em 60% a concentra??o de prote?nas do lavado peritonial. As an?lises qualitativas da composi??o celular do exudato peritonial foram similares ao encontrado para os animais controles em todas as concentra??es testadas. Na concentra??o de 0,5 mg/mL foi capaz de reduzir em 40% a ades?o das plaquetas aos leuc?citos. Os dados obtidos demonstram que estes polissacar?deos sulfatados isolados do camar?o L.schimitti podem vir a ser utilizados como compostos bioativos, podendo surgir como princ?pios ativos para o desenvolvimento de f?rmacos, anticoagulantes e moduladores da resposta inflamat?ria

Resumo: Exopolissacarídeos do tipo β-glucanas são polímeros produzidos por uma grande variedade de microrganismos e podem possuir diferentes propriedades físicas, químicas e aspectos estruturais. Esses biopolímeros apresentam atividades biológicas interessantes (antitumor, antiviral, anticoagulante) e aplicações comerciais como produtos em alimentos, cosméticos e farmacêuticos. Entretanto, para a aplicação dessas moléculas, é necessário primeiramente o conhecimento de suas estruturas químicas. Assim, o objetivo deste trabalho foi a produção, caracterização química de quatro exopolissacarideos (EPSGRAVIOLA, EPSMANGA, EPSPINHA e EPSLARANJA) de isolados de Botryosphaeria obtidos de frutas tropicais em decomposição e crescidos em sacarose como única fonte de carbono, determinando o melhor EPS para realizar testes de atividade anticoagulante. A homogeneidade de cada EPS foi determinada por cromatografia de filtração em gel, os quais eluíram como um único pico. Hidrólise ácida total e análise por HPAEC/PAD mostrou glucose como constituinte básico. Dados de metilação e RMN de 13C indicaram que os EPSMANGA, EPSPINHA e EPSLARANJA são glucanas lineares unidas por ligações do tipo β(1®6) e o EPSGRAVIOLA é uma glucana com ligações β(1®3) e com ramificações em C-6 de resíduos glucopiranosídicos. O espectro de FT-IR mostrou uma banda em 891 cm-1, e a espectroscopia de 13C NMR mostrou que todas as ligações eram do tipo β. Estudos realizados com o corante Vermelho Congo indicaram que os EPS possuem conformação em tripla hélice. O EPSLARANJA, uma b- D-(1®6)-glucana, foi submetido a sulfatação visando induzir a atividade anticoagulante e melhorar a solubilidade da molécula em solução, importante para a atividade biológica. Espectros de FT-IR mostraram bandas em 808 and 1252 cm-1, indicando a entrada dos grupos sulfato e as análises de RMN de 13C mostraram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Exopolysaccharides (EPS) as β-glucans are polymers produced by a great variety of microorganisms and can possess different physical and chemical properties, and structural features. These biopolymers having interesting biological activities (antitumor, anti-viral, anticoagulant), and commercial applications in foods, cosmetics and pharmaceutical products. However, for the applications of these macromolecules, it is first necessary to understand their chemical structures. Therefore the goal of that study was the production, chemical characterization and biological activity of four exopolysaccharides (EPSGRAVIOLA, EPSMANGO, EPSPINHA and EPSORANGE) obtained from Botryosphaeria strains isolated from rotting tropical fruit grown on sucrose as carbon and the best EPS was used for the anticoagulant activity The homogeneity of each EPS was determined by gel filtration chromatography, which was eluted as a single peak. Total acid hydrolysis and HPAEC/PAD analysis of each EPS yielded only glucose. Data from methylation analysis and 13C NMR spectroscopy indicated that the EPSMANGO, EPSPINHA and EPSORANGE consisted of a linear chain of (1-6)- linked glucopyranosyl residues and EPSGRAVIOLA consisted of a main chain of glucopyranosyl (1-3) linkages substituted at O-6. FTIR spectra showed one band at 891 cm-1, and 13C NMR spectroscopy showed that all glucosidic linkages were of the β-configuration. Dye-inclusion studies with Congo Red indicated that each EPS existed in a triple-helix conformational state. The EPSORANGE, a β-(1®6)- D-glucan was submitted to a sulfation to induce anticoagulant activity and also to make this EPS more soluble, which is in favor to its biological action. The FT-IR spectrum showed bands at 808 and 1252 cm-1 indicating insertion of sulfonyl groups and the 13C NMR analysis showed that the sulfonyl groups were inserted mainly in C-4 of the b(1®6)-D-glucan... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Roberto da Silva / Coorientador: Maria de Lourdes Corradi da Silva / Banca: Gabriela Alves Macêdo / Banca: Maria Inês Rezende / Banca: Jonas Contiero / Banca: Eleonora Cano Carmona / Doutor

O estudo farmacognóstico comparativo das folhas de duas espécies de capuchinha, T. majus e de T. pentaphyllum, constituiu o escopo deste trabalho Artigos científicos sobre a espécie T. majus reportam a atividade antibacteriana, antifúngica, antiviral e antitumoral, devidas ao benzilisotiocianato, presente nos órgãos aéreos da espécie. Na medicina popular, também é utilizada para \"afinar\" o sangue. O efeito anticoagulante é de grande importância para indivíduos predispostos a distúrbios hemostáticos. No âmbito farmacológico, foram avaliadas, in vitro, as atividades anticoagulante sobre o plasma humano e antileishmania dos extratos e das frações. O benzilisotiocianato não apresentou atividade anticoagulante nem anti-leishmania. Foi observada atividade anticoagulante nos ensaios com os extratos e as frações hidrofílicas de T.majus e de T. pentaphyllum e a ausência de efeito destes sobre a viabilidade da forma promastigota de Leishmania chagasi. Os resultados apontam os flavonóides como os responsáveis pelo prolongamento do tempo de trombina provocado pelos extratos de T.majus e T. pentaphyllum. / The aim of this work was the pharmacognostic comparative study of leaves and flowers of nasturtium: Tropaeolum majus e Tropaeolum pentaphyllum. Scientific articles report the antibacterial, antiviral and antitumoral activity due to benzyl-isothiocianate, wich is present in the aerial organs of both species. Folk medicine uses leaves extract of T. majus to \"thin\" the blood. Anticoagulant effect is of great importance for predisposed individuals to haemostatic disturbances. Hidroalcoholic extracts of leaves and flowers of T. majus and T. pentaphyllum were appraised for the anticoagulant and anti-leishmania activities. The benzyl-isothiocianate neither presented anticoagulant activity nor anti-leishmania. Anticoagulant activity was observed in the essays with the extracts and the hidrofilic fractions of both species. The extracts and benzyl-isothiocianate showed no activity against Leishmania chagasi. The results allowed conclude that flavonoids are responsible for the prolongation of thrombin time (TT), provoked by the extracts of T. majus e T. pentaphyllum.

O estudo farmacognóstico comparativo das folhas de duas espécies de capuchinha, T. majus e de T. pentaphyllum, constituiu o escopo deste trabalho Artigos científicos sobre a espécie T. majus reportam a atividade antibacteriana, antifúngica, antiviral e antitumoral, devidas ao benzilisotiocianato, presente nos órgãos aéreos da espécie. Na medicina popular, também é utilizada para \"afinar\" o sangue. O efeito anticoagulante é de grande importância para indivíduos predispostos a distúrbios hemostáticos. No âmbito farmacológico, foram avaliadas, in vitro, as atividades anticoagulante sobre o plasma humano e antileishmania dos extratos e das frações. O benzilisotiocianato não apresentou atividade anticoagulante nem anti-leishmania. Foi observada atividade anticoagulante nos ensaios com os extratos e as frações hidrofílicas de T.majus e de T. pentaphyllum e a ausência de efeito destes sobre a viabilidade da forma promastigota de Leishmania chagasi. Os resultados apontam os flavonóides como os responsáveis pelo prolongamento do tempo de trombina provocado pelos extratos de T.majus e T. pentaphyllum. / The aim of this work was the pharmacognostic comparative study of leaves and flowers of nasturtium: Tropaeolum majus e Tropaeolum pentaphyllum. Scientific articles report the antibacterial, antiviral and antitumoral activity due to benzyl-isothiocianate, wich is present in the aerial organs of both species. Folk medicine uses leaves extract of T. majus to \"thin\" the blood. Anticoagulant effect is of great importance for predisposed individuals to haemostatic disturbances. Hidroalcoholic extracts of leaves and flowers of T. majus and T. pentaphyllum were appraised for the anticoagulant and anti-leishmania activities. The benzyl-isothiocianate neither presented anticoagulant activity nor anti-leishmania. Anticoagulant activity was observed in the essays with the extracts and the hidrofilic fractions of both species. The extracts and benzyl-isothiocianate showed no activity against Leishmania chagasi. The results allowed conclude that flavonoids are responsible for the prolongation of thrombin time (TT), provoked by the extracts of T. majus e T. pentaphyllum.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-06Bitstream added on 2014-06-13T21:05:14Z : No. of bitstreams: 1 vasconcelos_afd_dr_rcla.pdf: 873436 bytes, checksum: e2a838b6410dbd9cdc2bc380f1261e4e (MD5) / Exopolissacarídeos do tipo β-glucanas são polímeros produzidos por uma grande variedade de microrganismos e podem possuir diferentes propriedades físicas, químicas e aspectos estruturais. Esses biopolímeros apresentam atividades biológicas interessantes (antitumor, antiviral, anticoagulante) e aplicações comerciais como produtos em alimentos, cosméticos e farmacêuticos. Entretanto, para a aplicação dessas moléculas, é necessário primeiramente o conhecimento de suas estruturas químicas. Assim, o objetivo deste trabalho foi a produção, caracterização química de quatro exopolissacarideos (EPSGRAVIOLA, EPSMANGA, EPSPINHA e EPSLARANJA) de isolados de Botryosphaeria obtidos de frutas tropicais em decomposição e crescidos em sacarose como única fonte de carbono, determinando o melhor EPS para realizar testes de atividade anticoagulante. A homogeneidade de cada EPS foi determinada por cromatografia de filtração em gel, os quais eluíram como um único pico. Hidrólise ácida total e análise por HPAEC/PAD mostrou glucose como constituinte básico. Dados de metilação e RMN de 13C indicaram que os EPSMANGA, EPSPINHA e EPSLARANJA são glucanas lineares unidas por ligações do tipo β(1®6) e o EPSGRAVIOLA é uma glucana com ligações β(1®3) e com ramificações em C-6 de resíduos glucopiranosídicos. O espectro de FT-IR mostrou uma banda em 891 cm-1, e a espectroscopia de 13C NMR mostrou que todas as ligações eram do tipo β. Estudos realizados com o corante Vermelho Congo indicaram que os EPS possuem conformação em tripla hélice. O EPSLARANJA, uma b- D-(1®6)-glucana, foi submetido a sulfatação visando induzir a atividade anticoagulante e melhorar a solubilidade da molécula em solução, importante para a atividade biológica. Espectros de FT-IR mostraram bandas em 808 and 1252 cm-1, indicando a entrada dos grupos sulfato e as análises de RMN de 13C mostraram... / Exopolysaccharides (EPS) as β-glucans are polymers produced by a great variety of microorganisms and can possess different physical and chemical properties, and structural features. These biopolymers having interesting biological activities (antitumor, anti-viral, anticoagulant), and commercial applications in foods, cosmetics and pharmaceutical products. However, for the applications of these macromolecules, it is first necessary to understand their chemical structures. Therefore the goal of that study was the production, chemical characterization and biological activity of four exopolysaccharides (EPSGRAVIOLA, EPSMANGO, EPSPINHA and EPSORANGE) obtained from Botryosphaeria strains isolated from rotting tropical fruit grown on sucrose as carbon and the best EPS was used for the anticoagulant activity The homogeneity of each EPS was determined by gel filtration chromatography, which was eluted as a single peak. Total acid hydrolysis and HPAEC/PAD analysis of each EPS yielded only glucose. Data from methylation analysis and 13C NMR spectroscopy indicated that the EPSMANGO, EPSPINHA and EPSORANGE consisted of a linear chain of (1-6)- linked glucopyranosyl residues and EPSGRAVIOLA consisted of a main chain of glucopyranosyl (1-3) linkages substituted at O-6. FTIR spectra showed one band at 891 cm-1, and 13C NMR spectroscopy showed that all glucosidic linkages were of the β-configuration. Dye-inclusion studies with Congo Red indicated that each EPS existed in a triple-helix conformational state. The EPSORANGE, a β-(1®6)- D-glucan was submitted to a sulfation to induce anticoagulant activity and also to make this EPS more soluble, which is in favor to its biological action. The FT-IR spectrum showed bands at 808 and 1252 cm-1 indicating insertion of sulfonyl groups and the 13C NMR analysis showed that the sulfonyl groups were inserted mainly in C-4 of the b(1®6)-D-glucan... (Complete abstract click electronic access below)