Orientadores: Luis Antonio Violin Dias Pereira, Paulo Pinto Joazeiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T16:42:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arroteia_KelenFabiola_M.pdf: 4085296 bytes, checksum: b16df432ee68b5350004243c026c3866 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: O processo de fecundação em mamíferos depende de uma seqüência de eventos que culminam na ativação do oócito pelo espermatozóide. A diferenciação completa das células germinativas testiculares em células com capacidade fecundativa envolve não somente o testículo, mas também o epidídimo, ducto deferente e trato reprodutor feminino. No epidídimo acontece a maturação epididimária dos espermatozóides, pela qual ocorrem alterações no padrão molecular da superfície do gameta, visando a capacidade de fecundação. Diversas proteínas sintetizadas pelas células epiteliais do epidídimo, inicialmente liberadas na luz deste órgão, parecem ser posteriormente localizadas na superfície ou mesmo no interior da vesícula acrossômica do espermatozóide. A aquisição da capacidade de fertilização pelo espermatozóide tem sido correlacionada com a nova organização molecular da membrana adquirida durante o fluxo do mesmo a partir da cabeça em direção à cauda do epidídimo. A obtenção de anticorpos monoclonais que reconhecem os antígenos expressos pelas células germinativas testiculares durante seus processos contíguos de diferenciação, bem como aqueles expressos pelas células dos ductos pelos quais os espermatozóides transitam durante o processo de maturação têm constituído importante estratégia para permitir a geração de um mapa das moléculas que atuam na preparação do espermatozóide para a fecundação. O anticorpo monoclonal (Amc) TRA (testicular germ cells immunized to rat- monoc/onal antibody) 54 reconhece um antígeno localizado em espermatócitos e espermátides dos túbulos seminíferos de camundongos C57 BL/6 com idade superior a 24 dias pós-parto (d.p.p.). Resultados preliminares mostraram que o mesmo Amc -reconhece um antígeno nas células epiteliais da cabeça do epidídimo, bem como espermatozóides da luz deste órgão. Este estudo teve por objetivo caracterizar a expressão do antígeno reconhecido pelo Amc TRA 54 nas células epiteliais do epidídimo quanto à ontogenia, características bioquímicas e regulação da expressão. Em conjunto, os dados obtidos com o desenvolvimento deste trabalho poderão auxiliar no esclarecimento do modelo da expressão do antígeno identificado em células germinativas e em células somáticas epiteliais e, adicionalmente, poderão permitir inferências acerca do papel funcional desta molécula na biologia da reprodução / Abstract: In mammals, fertilization depends on a sequence of events that culminates in the activation of the oocyte by the spermatozoa. The complete differentiation of the testicular germ cells in cells with fertilization ability involves the testis, epididymis, vas deferens and female reproductive organs. In the epididymis, the membrane surface of the spermatozoa may be modified, t hrough a process k nown as epididymal maturation. S everal proteins synthesized and secreted by the epididymal epithelial cells can be further located on the spermatozoa membrane surface or even though inside its acrosomal vesicle. The acquisition of the fertilization ability by the spermatozoa has been related with a new molecular organization of the membrane provided during the epididymal transit. The production of monoclonal antibodies (mAb) that recognizes antigens exclusively expressed by testicular germ cells or by the cells of the ducts through the spermatozoa passes during its maturation have been important approach to permit the elaboration of the molecular map involved in the spermatozoa preparation. The mAb TRA 54 recognizes an antigen located in spermatocytes and spermatids of the seminiferous tubules of C57 BU6 mice more than 24 days old. Preliminary results showed that this mAb also recognizes an antigen in the epithelial cells of the caput of the epididymis and in the luminal spermatozoa. This work was performed in order to obtain additional information about the antigen recognized by the mAb TRA 54 in the epididymal epithelial cells for ontogenic expression, biochemical characteristics and expression regulation. The results obtained with the development of this work could contribute to elucidate the expression pattem of the antigen recognized by the antigen identified in both germinative and somatic cells and, -additionally, could permit the formulation of hypothesis around the functional role of this molecule in the reproductive biology / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:31:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8080_1.pdf: 168508 bytes, checksum: 987b692e6b7f2fdbcdd2fa53acd024a7 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2003 / O objetivo deste estudo foi determinar a freqüência de anticorpos antitireoglobulina e antimicrossomais e realizar a dosagem sérica dos hormônios tiroideanos em 41 pacientes com Dermatite Herpetiforme e 120 pacientes do grupo controle. O desenho do estudo foi o comparativo entre um grupo de casos (portadores de D.H.) e um grupo controle. Foram estudados retrospectivamente 41 pacientes do ambulatório de Dermatologia do Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Pernambuco entre Janeiro de 1990 e Dezembro de 2000 que preencheram os critérios para o diagnóstico (características clínicas e hispopatológicas). Os níveis de TSH, T3, T4 e a presença de anticorpos antimicrossomais e antitireoglobulina de acordo com o sexo e a idade forma avaliados em ambos os grupos. No grupo de pacientes com D.H. a idade média foi de 34 anos com mínima de 21 e máxima de 51 anos, sendo 60% dos pacientes do sexo feminino. A freqüência de anticorpos antitireoglobulina utilizando o método de hemaglutinação foi de 7,3% em pacientes com D.H e em 1,7% no grupo controle. A presença de anticorpos antimicrossomais foi detectada em 36% dos pacientes com D.H. e em 11,7% no grupo controle, esta diferença foi estatisticamente significativa (p<0,000). Dois pacientes com hipotiroidismo e um com hipertiroidismo foram diagnosticados no grupo com D.H., e no controle foi detectado um caso de hipertiroidismo e outro de hipotiroidismo. Estes resultados demonstram a occorrência freqüente de anticorpos antitiroideanos em pacientes com Dermatite Herpetiforme, embora a falência tiroideana seja menos comumente associada a esta condição

Orientador: Marcos Antonio Machado / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T23:46:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Justino-Kuga_ElaineAparecida_M.pdf: 5500665 bytes, checksum: 5d07026a0dc49cbeb174c82abd0c0995 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Estudos preliminares sobre a localização de epítopos na proteína do capsídeo (CP) de três isolados de CTV ('Pêra IAC', 'Pêra CB-22' e 'Pêra CB-104') foram realizados em três etapas. Na primeira, foi realizada a amplificação de oito regiões distintas do gene da CP, codificantes para três regiões Nterminais (aa 1 até 70; aa 1 até 120; aa 1 até 170), três regiões C-terminais (aa 70 até 223; aa 120 até223; aa 170 até 223) e duas regiões internas da CP (aa 37 até 67 e aa 64 até 94) onde haviam sido determinadas diferenças significativas entre as CPs dos três isolados. Na segunda etapa, foram avaliadas duas estratégias para expressão dos peptídeos de interesse: clonagem em vetor de expressão através de ligação AT (vetor Pinpoint TM Xa-1 T, Promega) e clonagem das seqüências alvo em vetores do sistema de expressão pET. O vetor Pinpoint TM Xa-1 T, carreando como inserto o gene inteiro da CPCTV, obtido como produto de PCR após amplificação do cDNA dos três isolados, transformou células competentes de E. coli JM109, mas após indução com IPTG, não houve expressão da proteína de fusão esperada. Os vetores do sistema pET, após ligação das seqüências alvo, não transformaram células competentes de E. coli BL21(DE3)pLysS. Na terceira etapa, três proteínas recombinantes (MBP-CPCTV, CB-22 e CB-104) produzidas a partir da expressão do gene da CP-CTV dos três isolados, foram clivadas com brometo de cianogênio. Os produtos de clivagem foram avaliados através de '¿Western Blotting¿ contra anticorpos monoclonais específicos para CTV. O monoclonal IC-04.6, desenvolvido contra a proteína recombinante CB-22 detectou epítopos, numa reação intensa, em peptídeos com massa estimada em 27 kDa e 18 kDa, originários da CB-22; o monoclonal 39-08, desenvolvido contra a proteína recombinante CB-104 detectou epítopos, numa reação moderada, em peptídeos com massa estimada de 28 kDa e 14 kDa, originários qa CB-104; o monoclonal MCA-13, desenvolvido contra um isolado da Florida, detectou epítopos em peptídeos originários das proteínas recombinantes MBP-CPCTV e CB-104; o monoclonal 3DF1, desenvolvido contra isolados de CTV espanhóis, detectou epítopos em peptídeos originários da CB-22 e CB-104 e o monoclonal 3CA5, desenvolvido contra isolados espanhóis de CTV, detectou epítopos apenas num peptídeo com massa estimada de 18 kDa presente na CB-22. Estes resultados sugerem que diferentes epítopos são reconhecidos pelos cinco monoclonais avaliados e que serão necessárias novas estratégias para avaliá-los / Abstract: Preliminary studies about the epitopes location in the capside protein of the isolates of the citrus tristeza virus of three isolate ('Pêra IAC', 'Pêra CB-22' and 'Pêra CB-104') were accomplished. In the first phase, the amplification was accomplished with specific direct and reverse primers of eight different regions of the CP gene, coding for three N-terminal peptides (aa 1 to 70, aa 1 to 120 and aa 1 to 170), three C-terminal peptides (aa 70 to 223, aa 120 to 223 and aa 170 to 223) and two internal peptides of CP (aa 37 to 64 and aa 64 to 90). In the second phase they were appraised two strategies for expression of the peptides: cloning in expression vector through AT cloning site (vector Pinpoint TM Xa-1 T promega), and cloning of the coding sequences in vectors of the system pET. Vector Pinpoint TM Xa-1, containing as insert the whole gene of CP, obtained as PCR's product after amplification of the three isolates' cDNA, transformed competent cells E. coli JM109, but after induction with IPTG there was not expression of the peptides of interest. The vectors of the pET system didn't transform competent cells E. coli BL21 (DE3)pLysS. In the third phase, three recombinant proteins (MBP-CPC1V, CB-22 and CB-104), produced from the expression of the CP-C1V gene of the three isolates, they were broken with cyanogen bromide. The break products were evaluated through "Western Blotting" against monoclonal antibodies specific for CTV. The monoclonal IC-04.6, developed against the recombinant protein CB-22 detected epitopes, in an intense reaction, in peptides with mass esteemed in 27 kDa and 18 kDa, original of CB-22; the monoclonal 39-08, developed against the recombinant protein CB-104 detected epitopes, in a moderate reaction, in peptides with esteemed mass of 28 kDa and 14 kDa, original of CB-104; the monoclonal MCA-13, developed against the T-36 isolate from Florida, detected epitopes in original peptides of the recombinants proteins MBP-CPCTV and CB-104; the monoclonal 3DF1, developed against Spanish isolates of CTV, detected epitopes in original peptides of CB-22 and CB-104 and the monoclonal 3CA5, developed against Spanish isolates of C1V, just detected epitopes in a peptide with esteemed mass of 18 kDa present in CB-22. These results suggest that the five monoclonal recognizes different epitopes and that will be necessary new strategies to evaluate them / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Jorge Rizzato Paschoal, Albina M. Altemani / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T16:18:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bianchini_WalterAdriano_M.pdf: 5535625 bytes, checksum: 54d2ccee014d2e36e194de8a7afac444 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: As neoplasias indiferenciadas em cabeça e pescoço e base do crânio não são raras: ocorrem tanto em mucosas como em glândulas salivares, em partes moles e em linfonodos. O diagnóstico histopatológico preciso é fundamental na conduta terapêutica ideal e na caracterização do prognóstico de cada caso. o objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência destas neoplasias em nosso serviço, sua distribuição conforme o padrão celular, a idade do paciente e a localização do tumor, avaliando-se a freqüência dos casos em que o exame imuno-histoquímico foi decisivo para o diagnóstico diferencial conclusivo das mesmas. Foram estudadas 43 biopsias de neoplasias indiferenciadas diagnosticadas no ambulatório da Disciplina de Otorrinolaringologia da UNICAMP, no período de 1990 a 1997. Aplicou-se um painel imuno-histoquímico conforme o método complexo avidinabiotina-peroxidase (ABC), dependendo da idade dos pacientes, da localização do tumor e do padrão citoarquitetural das células neoplásicas. O laudo final foi emitido após nova análise conjunta com as lâminas coradas pela técnica da hematoxilina e eosina. Os locais de ocorrência mais comuns foram os linfonodos, 20,93%; faringe e pescoço, 16,28%; seios paranasais, 13,95% e cavidade nasal, 11,63%. Estas neoplasias foram mais prevalentes na sétima década de vida (34,88%), sendo duas vezes mais prevalentes em homens do que em mulheres. O exame imuno-histoquímico permitiu o diagnóstico conclusivo em 60,47% dos tumores e o sugeriu em 20,93%. Os padrões citoarquiteturais mais comuns foram: célula redondas, 51,16%; células epitelióides, 20,93%; células fusiformes, 16,28%; mixóides, 9,30% e células pleomórficas, 2,33% / Abstract: Head and neck and skull base undifferentiated tumors are not unusual. They can arise in mucosa such as in salivary glands, soft tissues or in lymph nodes. Suitable therapy and prognosis of every case depends upon precise histopathological diagnosis. In this paper we evaluated the ocurrence of these tumors in our service and the way in wich they are distributed according to cellular pattem, patient' s age and tumors localization. Besides, we studied the role of immunohistochemical techniques conceming conc1usive diagnosis. We reviewed 43 biopsies performed in our service from january 1990 to december 1997, diagnosticated as undifferentiated tumors. We applied an immunohistochemical panel according to the method avidin-biotin-peroxidase complexo The final diagnostic was achieved after comparation to the biopsies stained with hematoxylin and eosin technique. The most frequent localization of undifferentiated tumors was lymph nodes, 20,93%; pharynx and neck, 16,28%; paranasal sinus, 13,95% and nasal cavity, 11,63%. They were more prevalent on seventh decade of life (34,88%), and twice more prevalent in men than women. The immunohistochemical technique allowed conc1usive diagnosis in 60,47% of tumors and was suggestive in 20,93% of the biopsies. The most prevalent cellular pattem was round cell (51,16%), followed by epithelioid cell (20,93%), spindle cell (16,28%), myxoid pattem (9,30%) and pleomorfic cell (2,33%). The results of this work demonstrate the role of immunohistochemical technique on conc1usive diagnostic of undifferentiated tumors / Mestrado / Otorrinolaringologia / Mestre em Ciências Médicas

Orientador : Humberto de Araujo Rangel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-17T14:06:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tamashiro_WirlaMariadaSilvaCunha_D.pdf: 4765290 bytes, checksum: f4c7892cd25a1ac49fbd89dc0752501b (MD5) Previous issue date: 1988 / Resumo: O presente trabalho teve três objetivos principais: (i) estudar a resposta imune humoral específica de camundongos F1 (CBA x C57 B1/10) infectados com a cepa Y do T.cruzl, (ii) produzir anticorpos monoclonais anti-T.cruzl, através da tecnologia de hibridomas, utilizando-se para as fusões células de mieloma SP2/0 e células esplênicas de camundongos F1 cronicamente infectados com o parasita, (iii) caracterizar os anticorpos monoclonais obtidos quanto a sua reatividade para os antígenos expressos nos diferentes estágios do T.cruzi ... O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Doutorado / Imunologia / Doutor em Ciências Biológicas

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000423166-Texto+Completo-0.pdf: 609105 bytes, checksum: 9690fb2eb1120fb52576bc8b57fca068 (MD5) Previous issue date: 2010 / Objetivo: O presente estudo teve por objetivo revisar sistematicamente as evidências da literatura acerca da associação entre anticorpos aCL e PE isolada. Métodos: Os autores procederam busca computadorizada nos bancos de dados PUBMED e LILACS até junho de 2009, busca por citações dos artigos selecionados através da base de dados ISI Web of Science, revisão de livros-texto especializados, revisão da lista de referências dos artigos e contato com autores especializados em síndrome antifosfolipídica. Foram incluídos estudos que apresentassem delineamento caso-controle, coorte ou transversal controlado; grupo-controle de gestantes saudáveis; casos e controles sem doença autoimune concomitante; dosagem de anticorpos aCL por ensaio imunoenzimático com ponto de corte 20 unidades para IgG e/ou IgM (níveis moderados ou altos); desfecho pré-eclâmpsia sem restrição de definição e gravidade; dados suficientes para cálculo de risco relativo ou odds ratio (OR). Resultados: Foram identificados 68528 publicações e 64 artigos foram selecionados para a análise final. Doze estudos foram incluídos na metanálise. O pooled OR para a associação entre anticorpos aCL e PE foi de 2,86 (IC95% 1,37-5,98). Houve forte associação entre anticorpos aCL e PE grave (pooled OR 11,15 IC95% 2,66-46,75) com evidência de moderada heterogeneidade (I2 70,2%). O funnel plot identificou um discreto viés de publicação, com a falta de estudos negativos com tamanho amostral pequeno; no entanto o teste de Egger foi não significante (P = 0,359). Entre estudos com tamanho amostral inferior a 200 pacientes, o pooled OR foi 1,99 (IC 95% 0,58-6,82). Entre estudos com 201 ou mais pacientes, o pooled OR foi 3,86 (IC95% 1,36-10,93).A metarregressão identificou as variáveis delineamento e tamanho do estudo como associadas à heterogeneidade; a proporção da variância entre os estudos explicada por essas variáveis foi de 59,83% e 38,83%, respectivamente. Entre as coortes, houve associação mais significativa entre anticorpos aCL e PE (pooled OR 10,18 IC95% 2,42-42,80), com baixa heterogeneidade (I2 39,9% e teste Q não significativo), do que nos estudos de caso-controle (pooled OR 1,68 (IC95% 0,92-3,08), também com baixa heterogeneidade (I2 44% e teste Q não significativo). Conclusão: os dados desta revisão sistemática com metanálise indicam que níveis moderados ou altos de anticorpos aCL se associam com a ocorrência de PE isolada.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2015. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-06-09T16:34:51Z No. of bitstreams: 1 2015_JuanFernandoRiascoPalácios.pdf: 14164265 bytes, checksum: be8665ac0b5a23fed04eb06845b22157 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-06-10T18:20:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_JuanFernandoRiascoPalácios.pdf: 14164265 bytes, checksum: be8665ac0b5a23fed04eb06845b22157 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-10T18:20:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_JuanFernandoRiascoPalácios.pdf: 14164265 bytes, checksum: be8665ac0b5a23fed04eb06845b22157 (MD5) / Os anticorpos monoclonais são glicoproteínas especializadas com capacidade de reconhecer outras moléculas (antígenos). Eles são ferramentas importantes na clínica e biotecnologia e têm sido úteis no diagnóstico e tratamento de doenças infecciosas, inflamatórias, imunológicas e neoplásicas, assim como no estudo da interação patógeno/ hospedeiro, e na detecção e quantificação de diversas moléculas. Os anticorpos monoclonais murinos (mAb) apresentam aplicações terapêuticas limitadas devido à sua natureza heteróloga, que pode gerar respostas imunogênicas e consequente a perda de atividade. A incorporação de técnicas de biologia molecular, e engenharia genética e proteomica tem aumentado a produção e utilização de anticorpos monoclonais, desenvolvendo técnicas como hibridoma, quimerização, e humanização de anticorpos monoclonais totalmente humanos. Ao longo dos últimos anos, novas gerações de anticorpos monoclonais (mAbs) anti-CD20 têm sido desenvolvidas para potenciais vantagens sobre a clássica e primeira geração do mAb rituximabe, Apesar de seus sucessos, nem todos os pacientes respondem ao tratamento com rituximabe e quase todos tem um recaída em seu tratamento. Assim, melhorar as propriedades deste anticorpo para melhorar a sua eficácia é muito desejável. Comparado com o rituximabe, novos mAbs têm atividade anti-tumor melhorada, resultante do aumento da citotoxicidade dependente do complemento (CDC) e / ou citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC). Neste aspecto, cultivos de células animais são os sistemas de expressão para essas proteínas preferenciais, que requerem modificações póstradução. É assim que o grupo de Imunologia Molecular da Universidade de Brasília tem se interessado pela produção de proteínas heterólogas de interesse clínico em células de mamíferos desde 2001. Este trabalho teve como objetivo a produção de novos anticorpos anti CD-20 na forma de fragmento recombinante FvFc em sistema de expressão heteróloga em células de ovário hamster chinês (CHO-K1) e em células de rim embrionário humano (HEK-293). A eficiência de transfecção para ambas as linhagens celulares foi avaliada comparativamente, bem como a expressão transiente. Os resultados indicam as células de mamífero como um sistema ótimo para a produção de proteínas heterólogas, Os segmentos dos genes correspondentes a três versões recombinantes humanizadas homologas ao anticorpo monoclonal quimérico rituximabe obtidas por CDR graffting (Zaparolli 2015) A, O, e L) e uma versão híbrida elecionada por VL shuffling (H), foram amplificados e clonados num vetor de expressão para células de mamífero. Os resultados mostraram uma eficiência de transfecção e produção de anticorpos menor na linhagem de células CHO-K1 em comparação com HEK-293, embora estas fossem estáveis para a produção de anticorpo em transfectomas estáveis. Os anticorpos recombinantes produzidos foram purificados por cromatografia de afinidade, quantificados por ELISA, e analisados em relação a sua qualidade por SDS-PAGE, eletroforese capilar (Bioanalyzer) e Western Blotting. Os resultados deste projeto têm demostrado que fomos bem sucedidos na expressão e produção das construções humanizadas do anticorpo anti-CD20. / Monoclonal antibodies are specialized which have the ability to recognize other molecules (antigens). They are important tools in clinical practice and biotechnology and have been useful in the diagnosis and treatment of infectious, inflammatory, immunological and neoplasic diseases, as well as in the study of the host/pathogen interaction, and in the detection and quantification of diverse molecules. Murine monoclonal antibodies (mAb) present limited therapeutic applications because of their heterologous nature, which can generate immunogenic responses and consequent loss of activity. The incorporation of molecular biology, proteic and genetic engineering have extended the production and uses of monoclonal antibodies, finding techniques like hybridoma, chimerization, humanization and fully human monoclonal antibodies. Over the last few years, new generations of anti-CD20 monoclonal antibodies (mAbs) have been developed for potential benefits over the classical, first-generation mAb rituximabe. Despite its successes, not all patients respond to rituximabe therapy and virtually all relapse. Improving the properties of rituximabe to enhance its efficacy further is therefore highly desirable. Compared with rituximabe, new mAbs have enhanced antitumor activity resulting from increased complement-dependent cytotoxicity (CDC) and/or antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC). In this aspect animal cell, cultures are the preferential expression systems for those proteins, which require extensive posttranslational modifications. Our research group has been interested in the production of heterologous proteins in mammalian cells since 2001. This work aimed the production of new antibodies anti CD-20 as a recombinant FvFc fragment, in heterologous expression system Chinese hamster ovary cells (CHO-K1) and Human Embryonic Kidney cells (HEK-293) the transfection efficiency for both cell lines was comparatively evaluated, as well as the transient expression. The results indicate mammalian cells as an optimal system for the production of heterologous proteins, Were amplified and cloned into an expression vector for mammalian cells the corresponding gene segments the three recombinant versions humanized homologous to monoclonal quimeric Rituximabe antibody obtained by CDR graffting (Zaparolli 2015) A,O and L) and a hybrid version selected by VL shuffling (H) . The results showed a lower transfection efficiency and production of antibodies in the CHO-K1 cell lineage compared to HEK- 293 cells, although these were stable for the production of antibody in stable transfectomas. The antibodies were purified by affinity chromatography were analyzed by ELISA, SDS-PAGE, capillary electrophoresis (bioanalyzer) and Western Blotting, for the production and quality of intact immunoglobulin. The results of this project have shown that we have succeeded in the expression and production of humanized constructs anti-CD20 antibody.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-08-29T15:42:49Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Patrícia Araújo Beck.pdf: 1348736 bytes, checksum: 03083b9a0a7fe03e4a73a0ac919621b0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-29T15:42:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Patrícia Araújo Beck.pdf: 1348736 bytes, checksum: 03083b9a0a7fe03e4a73a0ac919621b0 (MD5) / CNPQ;FIOCRUZ / O Rotavírus, pertencente à família Reoviridae, é o maior agente etiológico de diarréias agudas em bovinos. O vírus é não envelopado, de simetria icosaédrica e possui capsídeo duplo constituído pelas proteínas estruturais VP1, 2, 3, 4, 6 e 7. O objetivo deste trabalho foi a caracterização dos anticorpos monoclonais (AcM) produzidos contra Rotavírus bovino para sua aplicação como ferramenta de diagnóstico, utilizando as técnicas de Isotipificação, Dot-blot, Western-blot, Imunofluorescência indireta (IFI) e ensaio imunoenzimático (ELISA). A caracterização imunoquímica demonstrou que todos os AcM (1G5, 4F7, 1E12, 4F3 e 3C12) foram do isotipo IgG2a, com cadeia leve . Através da técnica de Dot-blot, os AcM 1G5, 4F7, 1E12, 4F3 detectaram antígenos do Rotavírus e apenas dois AcM (1E12 e 4F3) reconheceram proteínas virais pela técnica de Western-blot. Os cinco AcM reagiram positivamente na técnica de IFI e, também, foram capazes de detectar antígeno viral nas amostras fecais, pela técnica de ELISA de captura. Desta forma, foi possível identificar dois grupos de AcM: um formado pelo 4F7, 1E12 e 1G5 que tiveram resultados animadores para seu uso na detecção de antígeno viral em fezes, e outro pelos AcM 4F3 e 3C12, que podem ser usados para detectar antígeno viral em culturas de células através de IFI. Portanto, a caracterização imunoquímica dos AcM mostra o seu possível uso como ferramenta no diagnóstico das rotaviroses em bovinos.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T10:20:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 278471.pdf: 10142418 bytes, checksum: 81a2829aec816d6569139279ccf7dd18 (MD5) / Os primeiros anticorpos monoclonais (AcM) contra o vírus rábico foram produzidos por Wiktor e Koprowski em 1978 e, desde então, diversos outros foram produzidos e descritos. No entanto, apesar do grande número de AcM antirrábicos descritos na literatura, eles nem sempre são facilmente obtidos, principalmente porque a produção de AcM no Brasil é bastante limitada. Ademais, devido à grande diversidade de variantes de vírus rábico existentes no Brasil, torna-se importante produzir novos AcM que possam atender a interesses mais específicos. Assim, o objetivo do presente trabalho foi a produção e caracterização de AcM contra o vírus rábico. Para tanto, foram realizados cinco protocolos de imunização, nos quais camundongos Balb/c foram imunizados com os seguintes antígenos: (1) vacina antirrábica (VeroRab®, Aventis-Pasteur) para uso em humanos; (2) suspensão inativada de tecido de sistema nervoso central de camundongos infectados com vírus rábico selvagem isolado de um bovino naturalmente infectado por morcego hematófago em Passos de Torres/SC; (3) fragmento recombinante da glicoproteína do vírus rábico cepa ERA compreendendo os aminoácidos 179 a 281 (denominado rGERA179-281) seguido da inoculação de vírus rábico cepa PV na pata; (4) rGERA179-281 seguida por um reforço com a mesma proteína ou com vírus rábico cepa PV; (5) rGERA179-281 e vacina VeroRab®. Esplenócitos dos camundongos imunizados foram fusionados com células de mieloma da linhagem P3X63Ag8.653 utilizando polietilenoglicol 4000 e os hibridomas secretores de anticorpos antirrábicos foram triados por imunofluorescência indireta em células BHK-21 infectadas com vírus rábico. Diluições limitantes foram realizadas e sete clones estáveis foram obtidos, sendo denominados LIA 02 (fusão 1), 6H8 e 7B7 (fusão 2) e 3E6, 8D11, 9C7 e 8B6 (fusão 3). Nos dois últimos protocolos, não foram obtidos hibridomas secretores de anticorpos antirrábicos estáveis. Dentre os AcM, três foram caracterizados como IgG2a (6H8, 8D11 e 8B6), dois como IgM (7B7 e 9C7), um como IgG2b (LIA 02) e um como IgG3 (3E6), todos com cadeia leve kappa. Por ensaio de neutralização, foi verificado que o AcM 8D11 foi capaz de neutralizar o vírus rábico cepa PV in vitro. Além disso, o 7B7 reconheceu a rGERA179-281 e apenas o 8D11 não reconheceu o vírus presente na vacina VeroRab®, conforme demonstrado por ELISA. Os AcM também foram testados contra vírus rábico selvagem isolado de diferentes animais (bovinos, equinos, morcegos, cães e canídeos silvestres) e de humano (uma amostra) oriundas de diferentes regiões do Brasil. O AcM 6H8 reconheceu todas as amostras testadas. Os AcM LIA 02, 3E6 e 9C7 juntos também reconheceram todas elas. Assim, a partir dos resultados obtidos neste trabalho, novos estudos utilizando esses AcM como ferramentas biotecnológicas poderão ser desenvolvidos.

Os herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) e tipo 5 (BoHV-5) são responsáveis por uma série de patologias em bovinos. A diferenciação entre tipos e subtipos desses vírus é importante para a compreensão da epidemiologia das infecções associadas a eles, assim como para permitir a tomada de medidas de controle adequadas. No presente estudo foram efetuadas análises antigênicas utilizando anticorpos monoclonais (AcMs) preparados contra antígenos específicos de herpesvírus bovinos. Quarenta e cinco amostras virais foram examinadas com um painel de 36 AcMs previamente preparados, em testes de imunoperoxidase em monocamada. Quatro amostras virais, sendo três BoHV-1 e uma BoHV-5, não apresentaram reatividade frente a nenhum dos AcMs avaliados. Oito dos 36 AcMs reagiram com todas as demais 41 amostras de herpesvírus bovinos. Por outro lado, oito amostras virais (três BoHV-5 e cinco BoHV-1) reagiram com todos os AcMs testados. Um AcM foi capaz de diferenciar o subtipo “c” do BoHV- 5 das demais amostras. Os demais resultados obtidos sugerem que não há uma clara correlação entre tipos e subtipos genomicamente determinados de herpesvírus bovinos e os AcMs aqui avaliados. / Bovine herpesvirus 1(BoHV-1) and 5 (BoHV-5) are associated to different clinical conditions of cattle. The differentiation between types and subtypes of these viruses maybe important for a better understanding of the epidemiology of bovine herpesvirus infections, as well as to provide support for adequate control measures. In the present study, antigenic analyses were performed with monoclonal antibodies (Mabs) prepared to bovine herpesviruses specific antigens. Fourty five virus isolates/strains were examined with a panel of 36 previously prepared Mabs, immunoperoxidase monolayer assays. Four virus isolates, of which three BoHV-1 and one BoHV-5, did not react with any of the Mabs tested. Eight of the 36 Mabs reacted with all other 41 bovine herpeviruses. On the other hand, eight viruses (three BoHV-5 and five BoHV-1) reacted with all Mabs tested. One Mab was capable of distinguishing BoHV-5 subtype “c” from the other subtypes. Additional results revealed that no clearcut correlation could be established between bovine herpesviruses types and subtypes determinated by molecular methods and the Mabs here evaluated.