Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade em Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2017. / Submitted by Raiane Silva (raianesilva@bce.unb.br) on 2017-08-02T18:18:02Z No. of bitstreams: 1 2017_AlessandradosSantosDomingues.pdf: 2563000 bytes, checksum: 193d95b4e62c9b005a210825918a392b (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-09-20T12:24:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_AlessandradosSantosDomingues.pdf: 2563000 bytes, checksum: 193d95b4e62c9b005a210825918a392b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-20T12:24:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_AlessandradosSantosDomingues.pdf: 2563000 bytes, checksum: 193d95b4e62c9b005a210825918a392b (MD5) Previous issue date: 2017-09-20 / A doença celíaca é uma desordem inflamatória autoimune caracterizada por uma intolerância permanente ao glúten, que afeta indivíduos de qualquer faixa etária geneticamente suscetíveis, podendo causar sintomas intestinais e sistêmicos. A predisposição genética está fortemente relacionada aos alelos HLA-DQ2 e DQ8. Familiares de primeiro grau de pacientes celíacos e portadores de outros distúrbios autoimunes, tais como diabetes mellitus tipo I, tireoidite de Hashimoto, apresentam uma prevalência de doença celíaca superior à população geral, a qual é de aproximadamente 1%. Relatou-se também elevada prevalência entre pacientes com a doença de Kawasaki (5,5%), uma vasculite sistêmica aguda autolimitada de etiologia desconhecida que afeta predominantemente crianças menores de 5 anos, podendo acometer adolescentes. Apesar de anormalidades imunológicas serem descritas durante a fase aguda da doença de Kawasaki, a ocorrência de um segundo transtorno imunológico raramente é relatada. Objetivo: determinar a prevalência da doença celíaca em pacientes pediátricos com diagnóstico prévio de doença de Kawasaki atendidas em Serviço de Reumatologia Pediátrica de Brasília e identificar a prevalência dos alelos de predisposição genética nesses pacientes. Metodologia: estudo descritivo de prevalência que incluiu cento e dez crianças com doença de Kawasaki (66 do sexo masculino, idade mediana 4,8 anos) que realizaram a pesquisa dos alelos HLA através do teste de reação em cadeia de polimerase e a pesquisa do anticorpo antitransglutaminase IgA através do teste imunoenzimático ELISA. Nos pacientes com níveis anormais deste anticorpo se realizou ainda a pesquisa do anticorpo antiendomísio IgA através do teste de imunofluorescência indireta, seguido por biópsia duodenal. Resultado: apenas um paciente, do sexo masculino, de 9 anos de idade, diagnósticado com doença de Kawasaki aos 5 anos apresentou anticorpos positivos, HLA-DQ2 e DQ8 além de biópsia duodenal com atrofia vilositária (Marsh 3A). No rastreio dos familiares de primeiro grau deste paciente se obteve o diagnóstico de doença celíaca em sua irmã. A prevalência de genótipos predisponentes para doença celíaca foi de 29,1%, semelhante à população geral. Conclusão: a prevalência de doença celíaca encontrada neste grupo de pacientes com Kawasaki não foi superior à da população geral (0,9% versus 1%), assim como a prevalência dos seus 7 alelos predisponentes (29,1% versus 30-40%). Desta forma não se pode afirmar que haja associação entre ambas as condições. / Celiac disease is an autoimmune inflammatory disorder characterized by a permanent intolerance to gluten, which affects genetically susceptible individuals, at any age, causing intestinal and systemic symptoms. Genetic predisposition is strongly related to HLA DQ2 and DQ8 alleles. First-degree relatives of celiac patients and carriers of other autoimmune disorders, such as type 1 diabetes mellitus, Hashimoto's thyroiditis, have a higher prevalence of celiac disease than the general population, which is approximately 1%. There is also a report of higher prevalence among patients with Kawasaki disease (5.5%), a self-limiting acute systemic vasculitis of unknown etiology that predominantly affects children under 5 years of age, and may affect adolescents. Although immunological abnormalities are described during the acute phase of Kawasaki disease, the occurrence of a second immune disorder is rarely reported. Objective: to determine the prevalence of celiac disease in pediatric patients with Kawasaki disease attending at a reference service in Brasília, and to identify the prevalence of genetic predisposition alleles in those patients. Methods: a descriptive prevalence study that included one hundred and ten children with Kawasaki disease (66 male, median age 4.8 years) who performed the HLA allele research using the polymerase chain reaction test and the IgA anti-transglutaminase antibody by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The anti-endomysial IgA antibody was also investigated through the indirect immunofluorescence test in patients with abnormal levels of this antibody, followed by duodenal biopsy. Results: Only one 9-year-old male patient, diagnosed with Kawasaki disease at age 5, presented positive antibodies, HLA DQ2 and DQ8 in addition to duodenal biopsy with villous atrophy (Marsh 3A). This first-degree relatives screening returned the diagnosis of celiac disease in his sister. The prevalence of predisposing genotypes for celiac disease was 29.1%, similar to the general population. Conclusion: The prevalence of celiac disease in this group of Kawasaki patients was not greater than the general population (0.9% versus 1%), as was the prevalence of predisposing alleles (29.1% vs. 30-40%). This way it can not be stated that there is an association between both conditions.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2011. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2017-01-10T14:13:38Z No. of bitstreams: 2 2011_TaynaCardimMoraisFino.pdf: 23284689 bytes, checksum: 28506ba533ee333f188b92bed3f83723 (MD5) 2011_TaynaCardimMoraisFino.pdf: 23284689 bytes, checksum: 28506ba533ee333f188b92bed3f83723 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2017-01-13T15:38:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 2011_TaynaCardimMoraisFino.pdf: 23284689 bytes, checksum: 28506ba533ee333f188b92bed3f83723 (MD5) 2011_TaynaCardimMoraisFino.pdf: 23284689 bytes, checksum: 28506ba533ee333f188b92bed3f83723 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-13T15:38:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 2011_TaynaCardimMoraisFino.pdf: 23284689 bytes, checksum: 28506ba533ee333f188b92bed3f83723 (MD5) 2011_TaynaCardimMoraisFino.pdf: 23284689 bytes, checksum: 28506ba533ee333f188b92bed3f83723 (MD5) / A falta de informação acerca da situação sanitária do rebanho de bovinos Crioulos Lageanos em relação às infecções causadas por HVB-1 e BVDV, motivou a realização desta pesquisa, que teve como principal objetivo mensurar a prevalência de anticorpos contra esses vírus em bovinos criados no Planalto Serrano Catarinense. O capítulo 1 revisa a bibliografia pertinente à raça Crioula Lageana, bem como às infecções causadas por Pestivírivus (BVD) e Herpesvírus (HVB-1) com enfoque nos agentes virais supracitados. Ambos os patógenos provocam perdas expressivas de produtividade, sendo as mais importantes relacionadas aos aspectos reprodutivos. Repetições de cio, abortamentos e nascimento de bezerros fracos ou natimortos são os sinais clínicos mais frequentemente observados. O capítulo 2 mostra a sorologia realizada em seis propriedades criadoras e as prevalências de anticorpos contra HVB-1 e BVDV encontradas (27,18 e 58,25%, respectivamente). Todas as fazendas analisadas tiveram animais positivos para os dois agentes virais, além disso, os altos títulos de anticorpos observados são um indicativo de atividade viral no rebanho. Por último, o capítulo 3 aborda a importância da implantação de medidas de biossegurança nas propriedades, considerando o caráter preservacionista da criação desses animais. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The lack of information about the sanitary situation of the Criollo Lageano herd regarding the infections caused by HVB-1 and BVDV motivated the study. The aim is to mensure the prevalence of antibodies against these viruses in bovines from the Santa Catarina Highland Plateau. The first chapter reviews the bibliography related to the Criollo Lageano breed, and also the infections caused by the bovine pestivirus (BVDV) and bovine herpesvirus 1 (BHV-1) focusing the above mentioned viral agents. Both pathogenous cause sound losses on production, being remarkable the losses regarding reproductive aspects. Rutting repetition, abortion and the birth of weak or stillbirth calves are the most common clinic signals observed. Chapter 2 shows the serology done in six farms where cattles are reared and the antibodies prevalences against HVB - 1 and BVDV found (27.18 and 58.25% respectively). All analysed farms had positive animals for both of the viral agents. Also, the high antibody titles observed indicates the viral activity in the herd. Furthermore, chapter 3 is preoccupied in showing the importance of the biosecurity measures in properties, considering the preservation of the species.

Orientadora : Profª. Drª. Larissa M. Alvarenga / Coorientador : Profª. Drª. Andrea E. M. Stinghen e Profª. Drª. Juliana F. de Moura / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 08/04/2016 / Inclui referências : f. 65-73 / Área de concentração: Patologia / Resumo: Os produtos finais de glicação avançada (AGEs) são um grupo heterogêneo de moléculas que se acumulam no plasma e tecidos em diversas condições clínicas, tais como envelhecimento, diabetes e falência renal. Evidências crescentes apontam tais moléculas como toxinas urêmicas as quais são efetoras no processo fisiopatológico de complicações vasculares e renais, em virtude de sua capacidade de modificar de forma irreversível as propriedades químicas e funcionais de uma série de moléculas, entre elas as proteínas. Existem atualmente mais de 20 tipos de AGEs descritos, metilglioxal, N-carboximetillisina (CML) e pentosidina os melhores caracterizados até o momento, e que servem como marcadores de acúmulo de AGEs em uma ampla gama de tecidos, sendo a CML o domínio antigênico mais abundante e melhor caracterizado. O presente estudo teve como objetivo produzir e caracterizar anticorpos monoclonais anti-CML para uso na confecção de ensaios que possam detectar e quantificar essa toxina em fluídos biológicos e aplicação desta ferramenta no entendimento das vias de sinalização envolvidas com a progressão da Doença Renal Crônica (DRC). Para tanto, três diferentes moléculas protéicas carreadoras foram modificadas por glicação: hemocianina de molusco (KLH), soro albumina bovina (BSA) e soro albumina humana (HSA); caracterizadas por eletroforese e espectrometria de massa. As moléculas glicadas foram usadas como imunógenos em camundongos Balb-c para produzir anticorpos policlonais e monoclonais epítopo-específico capazes de reconhecerem o domínio CML. Sete clones e quatorze subclones foram obtidos e testados frente ao CML e respectivos controles. Dentre os subclones, o anticorpo monoclonal mAb 2D6G2, foi selecionado com base nos ensaios de especificidade para melhor caracterização e empregado na detecção de CML. Para validação dos anticorpos produzidos foram utilizados soros de pacientes em diferentes estágios de DRC. Posteriormente, diferentes condições como variação nas concentrações de antígenos, anticorpos e diluições dos soros foram avaliadas a fim de padronizar um teste de ELISA competitivo capaz de detectar e quantificar CML em soro. Os resultados obtidos permitiram correlacionar concentração de CML nos soros com os diferentes estágios da doença. Além disso, o mAb 2D6G2, foi empregado em ensaios in vitro em células THP-1 com intuito de avaliar a interação de CML-HSA no ambiente celular. Nossos resultados demonstram a eficiência do anticorpo produzido, e abrem novas perspectivas para o emprego de tais anticorpos como bioferramenta na detecção, quantificação e entendimento dos mecanismos celulares e moleculares envolvidos na toxicidade urêmica relacionada a DRC. . Palavras chave: Doença renal crônica, toxinas urêmicas, AGEs, CML, anticorpo monoclonal. / Abstract: The advanced glycation end products (AGEs) are a heterogeneous group of molecules that accumulate in the plasma and tissues in several clinical conditions such as aging, diabetes and renal failure. These molecules have been show to act as uremic toxins and effectors in the pathophysiological vascular damage and renal complications, because of their ability to modify irreversibly chemical and functional properties of a number of molecules, among them proteins. Currently over 20 types of AGEs are described, including: methylglyoxal, N-carboxymethyllysine (CML) and, pentosidine, and they function as AGEs accumulation biomarkers widely used in several tissues, being CML the major antigenic domain. This work aimed the production and characterization anti-CML monoclonal antibodies for detection and quantification of this toxin in biological fluids. In addition this antibody may be used as a tool to investigate the signaling pathways involved in the CKD progression. Thus, three carrier proteins were modified by glycation: keyhole limpet hemocyanin (KLH), bovine serum albumin (BSA) and human serum albumin (HSA); characterized by gel electrophoresis and mass spectrometry. The glycated molecules were used in Balb-c as immunogens to have the production of epitope-specific polyclonal and monoclonal antibodies able to recognize CML. Fourteen hybridomas were obtained and tested against CML and their respective controls. Among the hybridomas, mAb 2D6G2 was selected based on specificity assays and employed for further CML toxin characterization and detection. Analysis of serum sample from patients who presented different CKD stages were used for validation of home-made antibody. Furthermore, different conditions of antigens and antibodies concentrations, and serum dilutions were evaluated to standardize a ELISA competitive test capable to detect and measure serum CML.The results allowed to correlate CML concentration in serum samples with the different CKD stages. Beside, mAb 2D6G2 was employed in vitro in order to assess CML-HSA interaction with THP-1 cells. These results demonstrate the efficiency of the antibody mAb 2D6G2, and our data open new avenues for the use antibodies as tools in the detection, quantification and understanding of the cellular and molecular mechanisms involved in uremic toxicity related to CKD. Key words: chronic kidney disease, uremic toxins, AGEs, CML, monoclonal antibody.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-07-18Bitstream added on 2014-06-13T19:35:47Z : No. of bitstreams: 1 pacheco_rdl_me_botfmvz.pdf: 741471 bytes, checksum: 835d6c59d074a8b55c1a6e52dd8cf20b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O presente estudo teve por objetivo avaliar os possíveis impactos causados pela suplementação de anticorpos policlonais Y contra Streptococcus bovis, Fusobacterium necrophorum e algumas cepas de bacterias proteolíticas, ou monensina sódica na carcaça e qualidade de carne de bovinos jovens. Foram usados 72 animais, sendo 24 nelores puros, NE, 24 canchins (3/8 Nelore e 5/8 Charolês, CC) e 24 Tri-cross (½ sangue Brangus, ¼ Nelore e ¼ Angus, TC), desmamados com sete meses de idade. Os animais foram alimentados com dieta de alta proporção de concentrado duas vezes ao dia, no período da manhã e tarde e monitorados a cada 28 dias com ultra-som em tempo real. Não houve interação (P>0,05) aditivo x grupo genético. NE apresentaram menor (P<0,05) peso inicial, final, área de olho de lombo e quantidade de ácidos graxos saturados e maior CLA (P<0,01) quando comparados aos outros grupos genéticos. CC apresentou maior (P<0,05) área de olho de lombo e menor (P<0,05) espessura de gordura subcutânea, comparando TC e NE. TC obteve menor (P<0,05) rendimento de carcaça e força de cisalhamento. O grupo suplementado com anticorpos obteve menor rendimento de carcaça, enquanto não houve efeito de aditivo para os demais parâmetros avaliados. O uso de anticorpos não afetou negativamente os parâmetros estudados neste trabalho, salvo o rendimento de carcaça. / The objective of this study was to evaluate effects of feed additive (300 mg monensin/hd, MO, vs 10 mL/hd of a polyclonal antibody preparation against lactateproducing bacteria, PAP ) or biotype (Nellore, NE, Canchim cross, 5/8 Charolais, 3/8 Nellore, CC, or a 3-way cross, ½ Brangus, ¼ Nellore and ¼ Angus, TC) on ultrasound (US)-assessed measures of fat and ribeye area, carcass characteristics, and longissimus dorsi tenderness (shear force, SF, and myofibrillar fragmentation index, MFI) of bullocks fed high-concentrate diets. 72 bullocks were allocated in a 2 X 3 factorial arrangement replicated thrice (4 bullocks/pen) of feed additive (FA) and biotype (GG), and monitored monthly for a 107-d (CC and TC) or 147-d (NE) feeding period. Analyses of variance included the initial measurement covariate when appropriate (P < 0.05). Final (BW) and hot carcass weight (HCW) were unaffected (P < 0.05) by FA, but were lower (P < 0.05) for NE than CC and TC. Dressing percentage (DP) was lower (P < 0.05) for TC than NE and CC bullocks. Monensin had greater (P < 0.05) DP than PAP. There was no effect (P > 0.05) of FA on monthly measurements of fat depth (BFT), rump fat (P8), visceral fat (VF), ribeye area (REA), or SF and MFI. Bullocks of CC biotype were leaner (P < 0.05; less BFT and P8) than those of TC and NE biotypes. Bullocks of NE biotype had smaller (P < 0.05) REA than those of CC and TC biotypes. Steaks of TC biotype had lower (P < 0.05) SF values than those of the other biotypes. There were no differences (P > 0.05) in MFI or VF due to biotypes. NE presented greater (P<0,01) concentrations of unsaturated fatty acids and CLA. Other than effects of PAP on DP, PAP did not affect carcass fat, REA or tenderness.

Made available in DSpace on 2015-05-29T12:50:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000469532-Texto+Completo-0.pdf: 772339 bytes, checksum: b1ca6d60639abd0248f0ea693f8f7d1f (MD5) Previous issue date: 2015 / Introduction : There has been a continuous search for safe tests that can predict antibody-mediated rejection in organ transplants, and the positive complement dependent cytotoxic crossmatch, developed in the 1960’s, was until recently considered the gold standard and the main test for prediction of rejection. The new methods for assessing humoral immunity, notably flow cytometric crossmatching and the Luminex® technology significantly increased the sensitivity of these assessments, but also the complexity in the interpretation of these results, as well as in the correlation of different methodologies. Despite the sensitivity of these methods, not any donor-specific antibody detected by solid phase assay results in positive or negative crossmatch. Information obtained with the specificities (such as fluorescence intensity) of anti-HLA antibodies may define the immunological risk for the patient, assisting in the selection of the ideal donor, as well as in the immunosuppressive regimen, for prophylactic and therapeutic uses.Objectives : The present study aimed to establish a cut-off point at the fluorescence intensity of antibodies detected by the panel Single Antigen Beads of class I and II that correlates to positive flow cytometric crossmatching (FCXM). It also aimed to assess whether there are differences between the use of DSAs with higher MFI alone and the sum of all the DSAs of a given patient.Methodology : A cross-sectional study of two databases of results of panels (Luminex®) and flow cytometric crossmatching of patients on a waiting list for kidney transplantation registered at the Laboratório de Imunologia de Transplantes da Santa Casa de Misericórdia, in Porto Alegre. Database 1 was composed of 1,316 crossmatches against deceased donors and panels of anti-HLA antibodies for loci A, B and DRB1 performed in 2010. Database 2 was composed of 2,288 crossmatches against deceased donors and panels of anti-HLA antibodies for loci C and DQB1 performed between July 2013 and July 2014. As an inclusion criterion for both databases, only samples with results available in the Panel on the same date of the serum tested in flow cytometry crossmatches were used resulting in 834 samples in database 1. Besides, for database 2 only samples with donor-specific antibody (DSA) for loci C and or DQB1, resulting in 348 crossmatches.Results and Conclusions : we demonstrated that 97. 6% of the patients with DSAs anti-HLA- ABDRB1 with MFI ≥ 5000 resulted in positive FCXM. These were the optimal MFI cut-off values for donor selection when we assessed sensitivity and specificity for correlation with positive flow cytometric crossmatching. For DSAs HLA-DQB1, fluorescence intensities above 15,000 MFI offer high specificity (97. 8%). Anti-HLA-C sensitization is less frequent (n=40). Only 5 patients showed MFI≥5000. Of these, the crossmatch was positive in only one patient (20%). Virtual crossmatch is a resource that can assist in making pre-kidney transplantation decisions. / Introdução : A busca por testes seguros que possam prever a rejeição mediada por anticorpo em transplantes de órgãos tem sido contínua e a prova cruzada por citotoxicidade dependente de complemento, desenvolvida na década de 60, até pouco tempo era considerada padrão ouro e principal teste preditor de rejeição. Os novos métodos de aferição da imunidade humoral, notadamente a prova cruzada por citometria de fluxo e a tecnologia Luminex®, aumentaram significativamente a sensibilidade destas avaliações, mas também a complexidade na interpretação destes resultados, assim como na correlação das diferentes metodologias Embora bastante sensível, nem todo anticorpo doador específico detectado pelo teste de fase sólida resulta em uma prova cruzada positiva ou com rejeição. As informações obtidas com as especificidades (assim como a intensidade de fluorescência) dos anticorpos anti-HLA podem definir o risco imunológico do paciente, auxiliando a escolha do doador ideal, bem como do esquema imunossupressor, tanto profilático quanto terapêutico.Objetivos : O objetivo deste trabalho foi estabelecer um ponto de corte no nível de fluorescência de anticorpos detectados pelo painel Single Antigen Beads de classe I e II que se correlacione com a prova cruzada positiva por citometria de fluxo (XMCF). Também objetivou-se avaliar se existem diferenças entre o emprego de apenas DSAs com maior MFI e a soma de todos os DSAs de um determinado paciente.Metodologia : Foi realizado estudo transversal de dois bancos de dados de resultados de Paineis (Luminex®) e prova cruzada por citometria de fluxo de pacientes em lista de espera para transplante renal cadastrados no Laboratório de Imunologia de Transplantes da Santa Casa de Misericórdia de Porto Alegre. O banco número 1 era composto de 1316 provas cruzadas contra doadores falecidos e painéis de anticorpos anti-HLA dos loci A, B e DRB1, realizados no ano de 2010. O banco número dois era composto de 2288 provas cruzadas contra doadores falecidos e painéis de anticorpos anti-HLA dos loci C e DQB1 realizadas entre julho de 2013 e julho de 2014. Como critério de inclusão para ambos os bancos de dados foram utilizadas somente amostras que possuíam resultados de Painel na mesma data do soro testado nas provas cruzadas por citometria de fluxo, resultando em 834 amostras no banco de número 1. Além disso, para o banco de dados número 2 foram utilizados apenas amostras que possuíam anticorpo específico contra o doador (DSA) dos loci C e ou DQB1, resultando em 348 provas cruzadas.Resultados e Conclusões : demonstramos que 97,6% dos pacientes com DSAs anti-HLA- ABDRB1 com MFI≥5000 resultaram em XMCF positiva. Os níveis de MFI nesta faixa corresponderam aos melhores pontos de corte de escolha quando avaliamos a sensibilidade e especificidade para a correlação com a prova cruzada positiva por citometria de fluxo. Para os DSAs HLA-DQB1, níveis de fluorescência acima de 15. 000 MFI ofereceram elevada especificidade (97,8%). A sensibilização anti-HLA-C é menos frequente (n=40). Apenas 5 pacientes apresentaram MFI≥5000. Destes, apenas em um (20%) a prova cruzada foi positiva. A prova cruzada virtual é um recurso que pode auxiliar na tomada de decisões pré-transplante renal.

Resumo não disponível

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-graduação em Ciências Médicas, 2014. / Submitted by Estágio Supervisionado (gid@bce.unb.br) on 2015-01-08T11:40:14Z No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado - Ana Cristina 01.11.14 (FINAL EM PDF).pdf: 17966834 bytes, checksum: 9b92b35f1f17f5ea8199bedc65b46a00 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2015-01-12T12:00:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado - Ana Cristina 01.11.14 (FINAL EM PDF).pdf: 17966834 bytes, checksum: 9b92b35f1f17f5ea8199bedc65b46a00 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-12T12:00:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado - Ana Cristina 01.11.14 (FINAL EM PDF).pdf: 17966834 bytes, checksum: 9b92b35f1f17f5ea8199bedc65b46a00 (MD5) / Introdução: O Brasil possui a maior área endêmica de febre amarela (FA) do mundo. A doença é produzida por vírus de RNA transmitido pela picada de insetos hematófagos culicídeos. Trata-se de doença com significativa morbidade e letalidade e os casos suspeitos devem ser notificados em 24 horas às autoridades sanitárias, tamanha é seu potencial endêmico. O quadro clínico varia de formas assintomáticas até a chamada forma hemorrágica, com letalidade em torno de 50%. Não há tratamento específico e a vacina é forma mais eficaz e segura de prevenção. Esta é constituída a partir de vírus vivo atenuado. No entanto, uma forma rara de febre amarela provocada pelo vírus vacinal tem sido descrita e está provavelmente relacionada a características do hospedeiro, como o seu status imunológico. Por isso, a vacina 17D é contraindicada em pacientes com doenças reumáticas em uso de medicamentos imunomoduladores ou imunossupressores. Não se conhece a resposta imune à vacinação nesse grupo. Não há estudos nessa população que avaliem a resposta humoral pelo padrão ouro, que é a produção de anticorpos neutralizantes. Objetivos: Avaliar a resposta imune protetora, por meio de anticorpos neutralizantes e eventos adversos em pacientes com doenças reumáticas, em uso de imunomoduladores ou imunossupressores, que foram inadvertidamente revacinados contra a FA. Casuística e Métodos: Realizado estudo descritivo, do tipo série de casos de pacientes portadores de doenças reumáticas autoimunes, em uso de medicamentos imunomoduladores ou imunossupressores, inadvertidamente revacinados contra a FA, para avaliação da presença de anticorpos neutralizantes em níveis protetores e ocorrência de eventos adversos. Os pacientes foram selecionados nos ambulatórios de hospital terciário e clínicas particulares de região endêmica. Foram registrados dados como idade, data da vacinação, diagnóstico, medicações e eventos adversos possivelmente relacionados à vacinação. A análise de anticorpos neutralizantes foi ! feita pelo método padrão ouro, o PRNT (Teste de Neutralização por Redução de Placas). Valores acima de 794 mUI/mL (1:50) foram considerados positivos. Resultados: Selecionados 31 pacientes, todas do sexo feminino, com doenças reumáticas, 20 (64,5%) deles no serviço público e 11 (35,5%) em clínicas particulares. Diagnósticos: artrite reumatoide (23), lúpus eritematoso sistêmico (5), esclerose sistêmica (2) e espondilite anquilosante (1). A média de idade na revacinação foi 46,77 (DP =12,72) anos. O intervalo médio entre a imunização e a coleta foi de 39,61 (DP= 8,51) meses. Os títulos de anticorpos neutralizantes variaram de 221 a maior que 15.680 (mediana de 2159 mUI/mL). Quatro apresentaram eventos adversos leves, 24 negaram e 3 não se recordaram. A média geométrica de anticorpos neutralizantes naqueles que apresentaram eventos adversos foi de 2082,25 (Mediana= 2.229) e de 3395,02 (Mediana= 2145,50) mUI/ml nos assintomáticos, não sendo demonstrada correlação entre os resultados e a ocorrência de eventos adversos para a amostra estudada. (Pearson = -0,19) Conclusões: Os eventos adversos e títulos protetores foram semelhantes ao esperado para a população em geral, não sendo demonstrada correlação entre os anticorpos neutralizantes e ocorrência de eventos adversos. Este é o primeiro estudo que avalia a resposta imune protetora à vacina antiamarílica em pacientes com doenças reumáticas autoimunes, em uso de medicamentos imunomoduladores ou imunossupressores. _____________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introduction: Brazil has the largest endemic area for yellow fever (YF) in the world. RNA virus transmitted by hematophagous insects of Culicidae family causes the disease. YF has significant morbidity and lethality. Thee suspected cases should be reported in 24 hours to health authorities, such is its gravity. The clinical picture varies from asymptomatic forms until the so-called hemorrhagic form, with lethality in 50 percent. There is no specific treatment and vaccine is the safest and the most effective form of prevention. This is made from live attenuated virus. However, a rare form of yellow fever caused by the vaccine virus has been described and is related to characteristics of the host, such as the immune status. Thus, the 17D vaccine is contraindicated for patients with rheumatic disease who are using immunosuppressants. There are no studies on this population to assess the humoral response by the gold standard. Therefore, no previous studies have assessed the humoral response and adverse reactions in this group. Objectives: To assess the protective immune response, based on neutralizing antibody (NAb) titers and adverse events (AEs), in patients with rheumatic disease who were using immunomodulators or immunosuppressants and inadvertently revaccinated against YF. Methods: We conducted a descriptive study of a number of cases of rheumatic disease to assess the protective levels of NAb and the occurrence of ARs. Epidemiological, medication, and AR data were recorded. The NAb analysis was conducted by using the plaque reduction neutralization test method, with a titer greater than 794 mIU/mL (1:50). Results: Thirty-one patients were selected, 23 with rheumatoid arthritis, 5 with lupus, 2 with systemic sclerosis, and 1 with ankylosing spondylitis. The mean (SD) age at revaccination was 46.77 (12.72) years. The mean (SD) interval between the immunization and sample collection was 39.61 (8.51) months. The NAb titer varied between 221 mIU/mL and 15,680 (median, 2,159 mIU/mL). Four patients presented with mild ARs. The geometric mean (SD) NAb titers were 2,082.25 (Median= 2,229) ! and 3,395.02 (Median= 2,145.50) mIU/mL in the patients with ARs and in asymptomatic patients, respectively. No correlation was found between the results and the occurrence of adverse events in all the study groups (Pearson, −0.19). Findings: The AEs and protective titers were similar to those expected for the overall population, and no correlation was found between the NAb titers and the occurrence of AE. This is the first study to assess the protective immune response to the yellow fever vaccine in patients with rheumatic disease.

Os herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) e tipo 5 (BoHV-5) são responsáveis por uma série de patologias em bovinos. A diferenciação entre tipos e subtipos desses vírus é importante para a compreensão da epidemiologia das infecções associadas a eles, assim como para permitir a tomada de medidas de controle adequadas. No presente estudo foram efetuadas análises antigênicas utilizando anticorpos monoclonais (AcMs) preparados contra antígenos específicos de herpesvírus bovinos. Quarenta e cinco amostras virais foram examinadas com um painel de 36 AcMs previamente preparados, em testes de imunoperoxidase em monocamada. Quatro amostras virais, sendo três BoHV-1 e uma BoHV-5, não apresentaram reatividade frente a nenhum dos AcMs avaliados. Oito dos 36 AcMs reagiram com todas as demais 41 amostras de herpesvírus bovinos. Por outro lado, oito amostras virais (três BoHV-5 e cinco BoHV-1) reagiram com todos os AcMs testados. Um AcM foi capaz de diferenciar o subtipo “c” do BoHV- 5 das demais amostras. Os demais resultados obtidos sugerem que não há uma clara correlação entre tipos e subtipos genomicamente determinados de herpesvírus bovinos e os AcMs aqui avaliados. / Bovine herpesvirus 1(BoHV-1) and 5 (BoHV-5) are associated to different clinical conditions of cattle. The differentiation between types and subtypes of these viruses maybe important for a better understanding of the epidemiology of bovine herpesvirus infections, as well as to provide support for adequate control measures. In the present study, antigenic analyses were performed with monoclonal antibodies (Mabs) prepared to bovine herpesviruses specific antigens. Fourty five virus isolates/strains were examined with a panel of 36 previously prepared Mabs, immunoperoxidase monolayer assays. Four virus isolates, of which three BoHV-1 and one BoHV-5, did not react with any of the Mabs tested. Eight of the 36 Mabs reacted with all other 41 bovine herpeviruses. On the other hand, eight viruses (three BoHV-5 and five BoHV-1) reacted with all Mabs tested. One Mab was capable of distinguishing BoHV-5 subtype “c” from the other subtypes. Additional results revealed that no clearcut correlation could be established between bovine herpesviruses types and subtypes determinated by molecular methods and the Mabs here evaluated.

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A new detection tool for enterotoxigenic E. coli bacteria was developed in the present work. Initially, the best antigenic sequence of the chimeric EtpA protein was determined by in silico prediction assays. After the construction of the recombinant antigen, we evaluated the production of anti-EtpA polyclonal antibodies in mice that were stimulated with this antigen. The mapping of epitopes using synthetic peptides demonstrated that only the 1.1 peptide was reactive to the pool of sera from the immunized animals. Specific recognition of anti-EtpA antibodies were assessed by flow cytometry. The results showed that the developed antibody was able to recognize the native EtpA protein. The evaluation of the specificity of anti-EtpA antibodies against different strains of diarrheogenic E. coli demonstrated the highest percentage and specificity for the ETEC strain (7.2%). The antibodies were then coupled into magnetic beads for the capture and detection of ETEC isolates. The results by cytometry showed high sensitivity, specificity and the efficacy of the method of separation and detection of these pathogens by magnetic beads bound to anti-EtpA antibodies. / As doenças diarreicas totalizam a segunda principal causa de morte em crianças menores de cinco anos de idade, perdendo apenas para a pneumonia. A cada ano a diarreia mata cerca de 760.000 crianças nessa faixa etária. A linhagem de E. coli enterotoxigênica (ETEC) é considerada como um dos agentes causadores mais frequentes da diarreia infantil e da diarreia dos viajantes nos países de baixa e média renda. Dentre os fatores de virulência secretados por ETEC, a exoproteína EtpA foi descrita como uma importante proteína que se interage com as regiões altamente conservadas do flagelo bacteriano. Essas interações são críticas para a adesão, colonização e entrega das toxinas nos enterócitos por ETEC. Foi desenvolvido no presente trabalho uma nova ferramenta de detecção para a bactéria E. coli enterotoxigênica. Inicialmente foi determinado a melhor sequência antigênica da proteína quimérica EtpA por ensaios de predição in silico. Após a construção do antígeno recombinante, avaliamos a produção de anticorpos policlonais anti-EtpA em camundongos que foram estimulados com esse antígeno. O mapeamento de epítopos utilizando peptídeos sintéticos demonstrou que apenas o peptídeo 1.1 foi reativo ao pool de soros dos animais imunizados. O reconhecimento específico dos anticorpos anti-EtpA foram avaliados por citometria de fluxo. Os resultados mostraram que o anticorpo desenvolvido foi capaz de reconhecer a proteína EtpA nativa. A avaliação da especificidade dos anticorpos anti-EtpA contra diferentes cepas de E. coli diarreiogênicas demonstrou a maior porcentagem e especificidade para um isolado de ETEC (7.2%). Em seguida, os anticorpos foram acoplados em beads magnéticas para a captura e detecção de isolados de ETEC. Os resultados por citometria evidenciaram alta sensibilidade, especificidade e a eficácia do método de separação e detecção desses patógenos por beads magnéticas ligadas aos anticorpos anti-EtpA.