Resumo: Uma ADAM e uma proteina com aproximadamente 750 aminoacidos de comprimento e com multidominios, que incluem o pro-dominio, o dominio metaloprotease, o dominio desintegrina, o dominio rico em cisteina, o dominio semelhante a fator de crescimento epidermal (EGF-like), a regiao ransmembranica e a cauda citoplasmatica. A proteina ADAM23 (MDC3), dentro do seu dominio metaloprotease, nao possui o sitio ativo de aminoacidos para a ligacao de zinco, o qual e critico para a atividade proteasica. E altamente expressa no encefalo, mas e detectada apenas fracamente ou nao detectada em outros tecidos. Neste rabalho foram expressos satisfatoriamente os dominios recombinantes da proteina ADAM23 desintegrina e metaloprotease+desintegrina fusionados a GST em bacterias E. coli cepa DH5ƒ¿, mas so foi possivel purificar a proteina recombinante GST-desintegrina. Ja a proteina recombinante 6-His-desintegrina+rico em cisteina foi expressa mais significativamente em bacterias E. coli cepa BL21(DE3)STAR em comparacao om a cepa BL21(DE3)pLysS, e sua purificacao ocorreu de forma apropriada. A imunizacao de camundongos Balb/c com a proteina recombinante GST-desintegrina nao mostrou-se satisfatoria, enquanto a imunizacao com a proteina recombinante 6- His-desintegrina+rico em cisteina levou a producao de anticorpos policlonais especificos para ADAM23. Foi realizada uma fusao entre os esplenocitos de camundongo imunizado e celulas de mieloma, levando a obtencao de hibridomas. Apenas um hibridoma demonstrou-se secretor de anticorpos monoclonais especificos para ADAM23, entretanto nao apresentou estabilidade ompativel com a producao ilimitada e reprodutivel de anticorpos monoclonais.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-06-12Bitstream added on 2014-06-13T19:15:43Z : No. of bitstreams: 1 guerraneto_g_me_jabo.pdf: 348832 bytes, checksum: c1e9389f44fc98cf291fae81d2fe881a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Levantamentos sorológicos em todo o mundo têm demonstrado o envolvimento de diferentes espécies silvestres na epidemiologia da da leptospirose, como roedores, edentatas, carnívoros, marsupiais e artiodáctilos. São poucos os estudos sobre a leptospirose em animais silvestres cativos, especialmente com animais neotropicais, onde a literatura é ainda mais escassa. Com o objetivo de determinar a freqüência de anticorpos contra Leptospira spp. em felídeos neotropicais e identificar os sorovares de maior predominância nas diferentes espécies estudadas, foram colhidas amostras sanguíneas de 359 felídeos de cativeiro provenientes de 41 instituições localizadas em 41 cidades nos Estados de São Paulo, Minas Gerais e Rio de Janeiro. Dos 359 soros sangüíneos, 46 (12,81%) foram reagentes no teste de soroalglutinação microscópica (SAM). As espécies de felídeos que apresentaram amostras reagentes foram: Panthera onca, Puma concolor; Leopardus pardalis, Leopardus tigrinus e Herpailurus yagouaroundi. Os felídeos .das espécies Leopardus wiedii, Oncifelis colocolo e Oncifelis geoffroy não foram reagentes. O sorovar Grippotyphosa foi o mais freqüente (39,13%) e a maior freqüência de soros reagentes foi para a espécie Leopardus pardalis (20,54%). As freqüências de animais reagentes, com exceção das jaguatiricas, quando comparadas estatisticamente entre os Estados de São Paulo e Minas Gerais não apresentaram diferença significativa. Os exames das amostras de felídeos pertencentes às instituições no Estado do Rio de Janeiro não foram suficientes para verificar a presença de anticorpos contra Leptospira spp.

Orientador: Prof. Dr. Renato Tambara Filho / Co-orientador: Prof. Dr. Antônio Carlos L. Campos / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Clínica Cirúrgica. Defesa: Curitiba, 04/09/2009 / Bibliografia: f. 50-62 / Resumo: INTRODUÇÃO: A neoplasia prostática é a mais incidente nos homens, apresentando um curso clínico variável. Procuram-se métodos que melhor identifiquem estas variáveis, melhorando a acurácia prognóstica e facilitando a escolha do tratamento. OBJETIVOS: Avaliar a expressão imuno-histoquímica do MIB-1, CD34 e p27 no carcinoma localizado de próstata. Correlacionar a expressão desses marcadores com PSA, escore de Gleason, e estádio patológico; e analisar os fatores envolvidos com recidiva tumoral. MATERIAL E MÉTODOS: Foram estudados 100 pacientes submetidos à prostatectomia radical com doença localizada (T1c a T2c), cujos blocos histológicos foram analisados e submetidos ao preparo imuno-histoquímico para os três marcadores. RESULTADOS: Dos 100 pacientes, 26 % recidivaram num seguimento médio de 36,7±18,8 meses. A recidiva estava relacionada de forma significativa com o PSA (p=0,002), escore de Gleason (p=0,006), estádio patológico (p<0,0001) e com a maior expressão do CD34 na área tumoral(p=0,025). A expressão tecidual foi negativa: 63% e 40% respectivamente para o MIB-1 e p27. O MIB-1 e o CD34 correlacionaram-se com o PSA, escore de Gleason, estadiamento patológico e com maior chance de recidiva. O p27 correlacionou-se apenas com o escore de Gleason. CONCLUSÃO: O MIB-1 e o CD34 mostraram-se, similares aos fatores prognósticos essenciais, preditores para a recidiva da doença. / Abstract: INTRODUCTION: Prostate cancer is the most frequent in men, with a variable clinical course. We are searching for methods to better identify these variables, improving prognostic accuracy and facilitating the choice of treatment. OBJECTIVES: To evaluate the immuno-histochemical tissue expression of MIB-1, CD34 and p27 in localized prostate carcinoma. To correlate the expression of these markers with: PSA, Gleason score and pathological stage, and analyze the factors involved with tumor relapse. MATERIAL AND METHODS: We studied 100 patients who went radical prostatectomy with localized disease (T1c to T2c). The surgical specimens were properly prepared and evaluated for expression of three markers immuno-histochemical. RESULTS: Of the 100 patients, 26% relapsed in a median follow up of 36.7 ± 18.8 months. The relapse was related significantly with PSA (p = 0.002), Gleason score (p = 0.006), pathological stage (p <0.0001) and with the highest expression of CD34 in tumor area (p = 0.025). The tissue expression was negative in 63% and 40% respectively for the MIB-1 and p27. The MIB-1 and CD34 correlated with the PSA, the Gleason score and pathological stage and with greater chance of relapse. The p27 correlated only with the Gleason score. CONCLUSION: The MIB-1 and CD34 showed up, similar to the key prognostic factors, to be predictors for disease relapse.

Introdução: O emprego de técnicas de interpretação imunológica de agentes infecciosos, de uma maneira geral, confere maior sensibilidade e especificidade ao exame histopatológico; o anticorpo policlonal anti-BCG tem sido testado como uma coloração imunoistoquímica de triagem para espécimes de biópsias cutâneas, com suspeita de origem infecciosa; em casos de infecções fúngicas e bacterianas, os resultados mostraram-se claramente superiores aos conseguidos pelas técnicas histoquímicas convencionais. Objetivos: Verificar a positividade da reação imunoistoquímica com o anti-BCG em granulomas imunológicos cutâneos, que não puderam ter o seu diagnóstico etiológico definido pelos métodos histoquímicos usuais de coloração para agentes infecciosos (Grocott e Ziehl-Neelsen) e também descrever a sensibilidade e especificidade deste anticorpo, através da comparação com os exames culturais para fungos e micobactérias. Metodologia: Procedeu-se à técnica imunoistoquímica com o anti-BCG em 33 biópsias cutâneas com granulomas imunológicos, com colorações de Grocott e Ziehl-Neelsen negativas. Também foram selecionados 13 casos de hanseníase virchowiana e 11 de granulomas por degeneração do colágeno, para que servissem de controles positivos e negativos, respectivamente. A leitura das lâminas foi realizada por dermatopatologista do HCPA que não tinha conhecimento dos dados clínicos dos pacientes. Não foi realizada a quantificação do antígeno nos cortes. Resultados: Dos 33 casos estudados, 13 (39,4%) apresentaram imunoistoquímica positiva com o anti-BCG, os diagnósticos finais foram: 4 casos (12,12%) de tuberculose, 4 casos de esporotricose, 1 caso (3.03%) de cromomicose, 1 caso de hanseníase tuberculóide e 3 casos (9.09%) que não puderam ter o diagnóstico conhecido, pois perderam o acompanhamento médico. A sensibilidade do anti-BCG quando comparado com a cultura para fungos foi de 57,1% e a especificidade de 66,7%; na comparação com a cultura para micobactérias a sensibilidade foi de 100%, porém só haviam 2 exames positivos, e a especificidade foi de 67,7%. Nos casos de hanseníase virchowiana, a sensibilidade e a especificidade foi de 100%. Conclusão: A técnica imunoistoquímica com o anticorpo anti-BCG é relativamente fácil, rápida e de baixo custo e mostrou ser útil na identificação de microorganismos que não foram prontamente visualizados com as colorações de Grocott e Ziehl-Neelsen. Entretanto, o pequeno número de controles pode ter influenciado no desempenho do método.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-17T20:49:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ledson Gláucio Olinto Braga.pdf: 1356552 bytes, checksum: f145aaa4b1928c836dd7c89671c5f565 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-20T22:49:50Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ledson Gláucio Olinto Braga.pdf: 1356552 bytes, checksum: f145aaa4b1928c836dd7c89671c5f565 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-20T22:49:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ledson Gláucio Olinto Braga.pdf: 1356552 bytes, checksum: f145aaa4b1928c836dd7c89671c5f565 (MD5) Previous issue date: 2016-09-15 / FACEPE / O câncer do colo do útero é um problema de saúde pública mundial que afeta principalmente países em desenvolvimento como o Brasil. O Papiloma Vírus Humano é o principal causador desse tipo de câncer e está presente em 99% dos casos. O principal método de rastreio, hoje, é o exame de Papanicolaou, porém o mesmo apresenta algumas limitações como resultados falso-negativos e insatisfatórios e nos últimos anos vem sendo desenvolvidas metodologias que objetivam minimizar essas limitações como o uso de marcadores de proliferação celular. Foram utilizados os marcadores Ki 67 e TOP IIa que quando estão com níveis de expressão muito elevados indicam desregulação. A mensuração desses marcadores pode ser feita por alguns métodos como a Imunoquimiluminescencia. Neste trabalho objetivou-se estabelecer protocolo para imunocitoquímica por quimiluminescência em amostras cervicais, detectar os marcadores Ki 67 e TOP IIa e relacionar com os resultados citológicos convencionais. 31 mulheres participaram do estudo formando cinco grupos: Negativo para Lesão Intraepitelial (NILM), Lesão de significado Indeterminado (ASC US), Lesão de Significado Indeterminado Não excluindo lesão de alto grau (ASC H), Lesão de Baixo Grau (LSIL) e Lesão de Alto Grau (HSIL). A análise dos dados mostrou que na expressão de Ki 67 os grupos LSIL – NILM (0.0208905) e LSIL – ASC (0.0208905) e na expressão TOP IIa os grupos NILM – LSIL (0.0126204) foram significativas ao nível de 5% de significância. Os marcadores Ki 67 e TOP IIa são eficientes na detecção das lesões cervicais, porém são necessários estudos aprofundados, com uma maior amostragem para validar a sensibilidade dos testes imunoquimiluminescentes. / Cervical cancer is a worldwide public health problem that affects mainly developing countries like Brazil. The Human Papilloma Virus is the main cause of this type of cancer and is present in 99% of the cases. The main method of screening today is the Pap test, but it has some limitations as false-negative and unsatisfactory results, and in recent years methodologies have been developed that aim to minimize these limitations, such as the use of markers of cell proliferation. Ki 67 and TOP IIa markers were used, which, when they have very high levels of expression, indicate deregulation. Measurement of these markers can be done by some methods such as Immunochemiluminescence. In this work we aimed to establish protocol for immunocytochemistry by chemiluminescence in cervical samples, to detect Ki 67 and TOP IIa markers and to relate to the conventional cytological results. 31 women participated in the study in five groups: Negative for Intraepithelial Injury (NILM), Injury of Undetermined Significance (ASC US), Injury of Undetermined Significance Not excluding high grade lesion (ASC H), Low Grade Lesion (LSIL) Of High Grade (HSIL). Data analysis showed that the LSIL - NILM (0.0208905) and LSIL - ASC (0.0208905) and TOP IIa NILM – LSIL (0.0126204) groups were significant at the 5% significance level in Ki 67 expression. The Ki 67 and TOP IIa markers are efficient in the detection of cervical lesions, however, in-depth studies are required, with greater sampling to validate the sensitivity of immunochemiluminescent assays.

SILVA, Silvana de Fátima Ferreira da, também é conhecida em citações bibliográficas por: FERREIRA, Silvana / Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-27T21:44:07Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Silvana de Fátima Ferreira da Silva.pdf: 1951264 bytes, checksum: a74e449927a46092c45afce0bc99d7eb (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-05T19:01:09Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Silvana de Fátima Ferreira da Silva.pdf: 1951264 bytes, checksum: a74e449927a46092c45afce0bc99d7eb (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-05T19:01:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Silvana de Fátima Ferreira da Silva.pdf: 1951264 bytes, checksum: a74e449927a46092c45afce0bc99d7eb (MD5) Previous issue date: 2005-06-27 / A toxoplasmose é uma zoonose de larga distribuição mundial, causada pelo Toxoplasma gondii, protozoário intracelular obrigatório. Uma vez o indivíduo infectado, o parasito se mantém latente por vários anos, pois o rápido avanço da imunidade humoral e celular restringe eficientemente a ação patogênica do parasito. Entretanto, a imaturidade do sistema imune (como em fetos e recém-nascidos) ou a sua deficiência (no caso dos indivíduos imunodeprimidos) pode causar séria morbidade ou mortalidade. A parasitose apresenta uma variedade de sinais e sintomas clínicos, e o diagnóstico laboratorial torna-se uma ferramenta de importância fundamental. O emprego de uma metodologia diagnóstica que consiga discernir entre infecção latente e ativa é o principal meio para diminuir os danos provocados pelo parasita. O presente trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de uma estratégia diagnóstica na tentativa de elucidar a fase da doença. Para alcançar esse objetivo foi desenvolvido um ensaio sorológico enzimático (enzyme-linked immunosorbent assay – ELISA) utilizando anticorpo monoclonal da classe IgA (mab-IgA - monoclonal antibodies IgA) contra a enzima Nucleosil Trifosfato Hidrolase (NTPase), produzida por taquizoítos de Toxoplasma gondii (forma ativa do parasito). Para desenvolvimento do método, o mab-IgA foi produzido por expansão celular e purificado por meio de sistema de duas fases aquosa: polietileno glicol e fosfato (SDFA: PEG-Fosfato). O anticorpo purificado foi fixado em placas de ELISA e testado frente a soros de indivíduos na fase ativa da infecção, apresentando a forma ocular da doença, diagnosticados clinicamente por meio de fundoscopia. Os resultados revelaram uma concordância entre o teste desenvolvido e o diagnóstico clínico, apresentando especificidade de 86,30% e sensibilidade de 85,18%, com eficiência de 0,89 revelando a capacidade do método em identificar infecção ativa. Diante dos resultados, o presente estudo sugere a possibilidade da utilização de anticorpo monoclonal anti-NTPase de Toxoplasma gondii como marcador de fase ativa. / Toxoplasmosis is a worldwide spread zoonotic disease caused by Toxoplasma gondii, an obligate intracellular protozoan. Once an individual is infected, the parasite remains latent for several years, since the fast advance of humoral and cellular immunity effectively restrains the parasite’s pathogenic action. However, an immature immune system (as in fetuses and newborns) or its deficiency (as is the case of immunocompromised individuals) may cause serious morbidity or mortality. The parasitosis presents a variety of clinical signs and symptoms, and laboratory diagnosis becomes a fundamental tool. The use of a diagnostic methodology capable to distinguish between latent and active infection is the main means to reduce the damages caused by the parasite. The objective of this study was to develop a diagnostic strategy in an attempt to elucidate the stage of the disease. To achieve that goal, an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed using an IgA-class monoclonal antibody against the Nucleosil Triphosphate Hydrolase enzyme (NTPase), produced by Toxoplasma gondii tachyzoites (the parasite’s active form). To develop the method, an IgA monoclonal antibody was produced by cell expansion and purified by means of an aqueous two-phase system: polyethylene glycol and phosphate (ATPS: PEG/Phosphate). The purified antibody was fixed on ELISA plates and tested against sera from individuals in the active phase of the infection, presenting the ocular form of the disease, clinically diagnosed by ophtalmoscopy. The results showed conformity between the developed test and the clinical diagnosis, presenting specificity of 86.30% and sensitivity of 85.18%, with an efficiency of 0.89 revealing the method’s capability to identify active infections. In view of these results, the present study suggests the possibility of using Toxoplasma gondii’s anti-NTPase monoclonal antibody as an active phase marker.

Orientador: Julia Keiko Sakurada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-20T23:40:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Orsi_MariaAngela_M.pdf: 4219517 bytes, checksum: 3b74fc60bfe20e7919cb4ebd6130a066 (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: Os estudos sobre as protease do Trypanosoma cruzi foram realizados utilizando-se as formas epimastigota do parasita. Embora a enzima SH-dependente tenha sido detectada nas diferentes formas evolutivas do parasita (RANGEL et alli,1981 b). No entanto existem poucos estudos das enzimas presentes nas formas tripomastigota e amastigota. Neste trabalho, procuramos investigar através da eletroforese em gel de poliacrilamida, a expressão da proteinase nas formas tripomastigota e amastigota com capacidade de degradara gelatina e obtenção de anticorpos monoclonais reati vos com aproteinase de epimastigota. Os resultados obtidos, no presente trabalho mostram que as formas tripomastigota e amastigota expressam o mesmo pOlipeptideo de 48 kDa com atividade enzimática em pH ácido. Entretanto em pH neutro foi detectada uma banda de 35 kDa, e esse polipeptideo não apresentou nenhuma correlação antigênica com aproteinase de epimastigota.O efeito dos anticorpos monoclonais com especificidade para a proteinase na invasão e multiplicação do T. cruzi nas células hospedeiras mostrou um aumento da infectividade, sugerindo que as proteinase do T.cruzi interferem negativamente na penetração e multiplicação do parasita nas células hospedeiras / Mestrado / Imunologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientadores: Lucila Costallat Ricci, Wirla M. S. Cunha Tamashiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T14:19:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Augusto_VivianeDelghingaro_M.pdf: 11601280 bytes, checksum: 69569f53acee2f50cd0b8d0768b0bcca (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Neste trabalho, foram criteriosamente avaliados nove anticorpos monoc1onais (MAbs) reativos para PCFO2, quanto ao reconhecimento de epítopos na fimbria purificada a partir de duas amostras diferentes, produtoras da mesma e também frente a outros fatores de colonização (PC) purificados, expressos por amostras de Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC) associada à diarréia humana. Em provas preliminares de "Western blot", este fator apresentou reações positivas não apenas frente aos soros polic1onais anti-PCFO2 como com anti-CF AII, anti-CF A/II (CSl, CS3), anti-CFA/II (CS2, CS3), anti-CFA/III, anti-CFA/IV (CS4, CS6) e anti-PCFO159. Provas de ELISA indireto, desenvolvidas tanto com os 4 MAbs pertencentes ao isotipo IgA, como com os 5 do isotipo IgG2b, confirmaram estes resultados, apenas frente aos FC do complexo CF A/II. Porém, em revelações no "Western blot" apenas bandas com pesos moleculares (p.M.) correspondentes à CSl, CS2, CS3, CFA/III, CS4 e CS6 foram reveladas, demonstrando apresentarem estes antígenos homologia de epítopos com PCFO2. Estes resultados foram confirmados, também de forma direta, em reações de imunomicroscopia eletrônica reveladas com os MAbs lDIC5, do isotipo IgA e 2C4F12, do isotipo IgG2b. Pesquisando-se diferenças de reconhecimento de epítopos entre os MAbs, buscou-se obter subunidades protéicas da fimbria PCFO2 após tratamento com 6M de Guanidina HCI-0,05M Tris. As frações obtidas após ultrafiltrações deste material, em membranas XM50 e YMIO, foram analisadas em SDS-P AGE e em provas de "Western blot". Pelos resultados obtidos, verificou-se a presença de uma única banda reconhecida pelos MAbs apresentando P.M. correspondente à PCFO2. Estes dados comprovam ser esta fimbria constituída por uma única subunidade protéica de 34,5 kDa. Após a avaliação da afinidade e especificidade das soluções preparadas com os 9 anticorpos monoc1onais em "Western blot", estes foram titulados por ELISA indireto, determinando-se que as preparações dos MAbs lDlC5 e 2C4F12 apresentavam maior título. Desta forma, estes foram selecionados para a padronização da Prova de Inibição do ELISA, avaliando-se, paralelamente, também os "pools" preparados com a mistura dos líquidos ascíticos dos dois diferentes isotipos. Assim sendo, a concentração do antígeno e dos MAbs foi padronizada, de tal forma que amostras expressando PCFO2 reduzissem a D.O. da reação controle para valores superiores a 50%. Na adequação da técnica, 66 cepas de E. coli, sendo 51 amostras ETEC e 16 não ETEC, foram avaliadas. Destas, 4 cepas isoladas de dois casos de diarréia no nosso meio, foram identificadas como produtoras de PCFO2 / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientadores: Maria Helena Andrade Santana, Ricardo de Lima Zollner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-26T19:05:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pinho_SamanthaCristinade_M.pdf: 3067197 bytes, checksum: 2fb8cfde2b754187ee86b2e937d591a0 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: O encapsulamento de ferrofluidos no núcleo de lipossomas origina vesículas denominadas magnetolipossomas, que podem ser eficientemente separadas da solução quando sob a ação de um campo magnético de alto gradiente. Essa propriedade possibilita a aplicação dos magnetolipossomas como adsorventes específicos em processos de separação de estruturas como células e biomoléculas. A maior vantagem desta abordagem é a simplicidade e eficiência. Anticorpos antifosfolípides constituem uma importante classe de biomoléculas, para a qual fosfolipídios específicos podem ser usados como ligantes de afinidade. A incorporação desses fosfolipídios na matriz estrutural dos lipossomas produz suportes coloidais de elevada área específica, com sítios de afinidade sobre a superficie, que são úteis para aplicação em processos de separação e detecção dessa classe de anticorpos. Os autoanticorpos estão presentes no soro de pacientes portadores de doenças autoimunes e a sua detecção apresenta dificuldades no que diz respeito à reprodutibilidade e à variabilidade dos suportes usados em kits comercialmente disponíveis. A adsorção específica de autoanticorpos na superficie dos magnetolipossomas e o desenvolvimento de sinal magnético resultante da ligação constitui técnica alternativa promissora para o diagnóstico de autoanticorpos. As vantagens do novo método seriam a reprodutibilidade, versatilidade do suporte e a condução do ensaio em etapa única. O objetivo deste trabalho foi o estudo da preparação e caracterização de magnetolipossomas de afinidade, além da avaliação do desempenho desses suportes na ligação dos autoanticorpos. Na preparação dos magnetolipossomas, foi usada magnetita coloidal como ferrofluido, cardiolipina, fosfatidiletanolamina e fosfatidilserina como lipídios de afinidade e fosfatidilcolina como lipídio estrutural. A adsorção dos anticorpos na superficie dos magnetolipossomas foi estudada em mistura e de modo frontal em coluna capilar. Como resultado da preparação das partículas obteve-se associação adequada entre a magnetita e os fosfolipídios, reprodutibilidade e boa estabilidade. Em relação à adsorção dos anticorpos observou-se que há especificidade, demonstrando a potencialidade de utilização dos magnetolipossomas no desenvolvimento de uma nova técnica de detecção de autoanticorpos antifosfolípides / Abstract: The entrapment of ferrofluids into the core of liposomes provides vesic1es called magnetoliposomes, which can be efficient1y captured ITom a solution under the action of a high gradient magnetic field. Due to this property, it is possible the aplication of magnetoliposomes as specific adsorbents in separation processes of structures like cells and biomolecules. The main advantage of this approach is its simplicity and efficiency. Antiphospholipid antibodies are an important c1ass of biomolecules, to whom specific phospholipids can be used as affinity ligands. The aggregation of these phospholipids in the structural matrix of the liposomes produces co1110idal supports with high specific surface area, with affinity sites on the surface, which are useful for applications in separation processes and detection of this antibody c1ass. They are present in the sera of patients with autoimmune diseases, and their detection presents difficulties in respect to the reprodutibilty of results, due to the heterogeneity of the molecules in this group. In addition, there is the multi-step characteristic of the ELISA assay, the most commonly used, and the variability of the supports in the available commercial kits. The specific antibody adsorption on the surface of magnetoliposomes and the development of a magnetic signal due to the linking is an alternative technique for the autoantibody diagnostico The advantages of the new method would be the reprodutibility, versatility of the supports and a single-step assay. The aim of this work was the preparation and characterization of affinity magnetoliposomes, and the evaluation of their performance in the interaction with autoantibodies. In their preparation colloidal magnetite was used as ferrofluid, cardiolipin, serine and ethanolamine as affinity lipids and choline as the structural one. The antibody adsorption was studied in batch and plug-flow mode in capilar column. As a result of the preparation, we obtained reprodutibility, and as for the adsorption, we observed that there is a good potentiality to use magnetoliposomes in the development of a detection technique of antiphospholipid antibodies / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Orientador : Adilson Leite / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T02:31:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cancado_LeticiaJungmann_M.pdf: 8379211 bytes, checksum: 6919d2f69023aa6c69d933716edf3d7a (MD5) Previous issue date: 2002 / Mestrado