Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCV07MA019.pdf: 374475 bytes, checksum: 5b7cf7f2d6a9a5ca65d84dd86e71af73 (MD5) Previous issue date: 2007-02-05 / Salmonella is one of the main causes of food poisoning. In the last years, the main focus has been on meat and swine products both because of public health concerns and also because of its commercialization/exportation. Two studies were conducted in order to: 1) verify the prevalence of Salmonella serovars in fresh pork sausages commercialized in Lages, Santa Catarina and analyze its level of contamination, and 2) determine the profile of antimicrobial resistance in samples of Salmonella sp. isolated in fresh pork sausages. For this purpose, 200 samples of nine brands were collected in different commercial stores. At laboratory 25 grs of the collected material was weighed aseptically. Each sample was submitted to a pre-enrichment in buffered water peptone (37oC/24 h) followed by selective enrichment in Tetrationate Muller- Kauffmann and Rappaport-Vassiliadis (42oC/24h) and isolated in Xylose Lysine Tergitol-4 agar and Brilliant-Phenolred-bile-Lactose-Saccharose agar with Novobiocine. Suspected colonies were cofirmed by biochemical and serological tests. Among the samples analyzed, Salmonella sp. was isolated from 27% (54). Serovar Typhimurium (20%) accounted for the highest percentage of isolates in a total of 15 serovars. Only one sausage sample had a quantity of Salmonella capable of causing diseases in human beings (>1.100 MPN/g). In the second study, the 60 strains were tested against 14 antimicrobials by the agar diffusion method. 56,67% of the analyzed isolates showed resistance to at least one antimicrobial agent, and 20% showed multi-resistance. The highest rate of resistance was detected against sulfonamide (45%) and tetracycline (41%). No sample was resistant to amoxicillin/clavulanic acid, ceflacor, gentamicin, neomycin and tobramycin. The sample that showed resistance against the highest number of antimicrobial agents (7/14) belonged to serovar Schwarzengrund, although serovar Typhimurium presented the highest number of multiresistent isolates (5/12 41,67%). Although most products were positive for Salmonella sp., in amounts below the infection dosis, their prevalence may be a risk for the consumer. The high number of isolated agents found in the study stresses that future monitoring of the use of antimicrobial agents is necessary to control the risk of selection and transmission of resistant families through the food chain / A Salmonella sp. é uma das principais causas mundiais de toxinfecção alimentar. Nos últimos anos, as preocupações têm se voltado para a carne e produtos suínos tanto no aspecto de saúde pública como de comercialização/exportação. Dois estudos foram conduzidos com o objetivo de: 1) verificar a prevalência de sorovares de Salmonella sp. em lingüiças tipo frescal de matéria-prima suína comercializadas em Lages/SC, bem como seu nível de contaminação; e, 2) verificar o perfil de resistência aos antimicrobianos em linhagens de Salmonella isoladas de lingüiças frescal suína. Para tanto, na primeira fase do trabalho, foram coletadas 200 amostras de nove marcas em diferentes estabelecimentos comerciais. No laboratório, foram pesados assepticamente 25 g de cada material coletado. Cada amostra foi submetida a pré-enriquecimento em água peptonada tamponada (37oC/24h), seguido de enriquecimento seletivo em Tetrationato Muller-Kauffmann e Rappaport-Vassiliadis (42oC/24h) e isolamento em agar seletivo Xilose Lisina Tergitol-4 e Verde Brilhante Lactose Sacarose acrescido de Novobiocina. Colônias suspeitas foram identificadas através de perfil bioquímico e sorologia. Das amostras analisadas, foram isoladas Salmonella sp. em 27% (54), sendo o sorovar Typhimurium o mais encontrado (20%) num total de 15 sorovares. Em apenas seis amostras foi isolado mais de um sorovar. Apenas uma apresentou uma quantidade de microrganismos capaz de causar enfermidade no homem (>1.100 NMP/g). Na segunda fase, os 60 isolados foram submetidos ao teste de susceptibilidade in vitro frente a 14 antimicrobianos através do método de difusão em agar Mueller-Hinton. Das amostras analisadas, 56,67% apresentaram resistência a pelo menos um dos antimicrobianos testados e o perfil de multi-resistência foi encontrado em 20% das amostras testadas. Os maiores índices de resistência foram apresentados contra sulfonamida (45%) e tetraciclina (41,67%). Nenhuma amostra foi resistente a amoxicilina/ácido clavulânico, cefaclor, gentamicina, neomicina e tobramicina. A amostra com maior índice de resistência (50%) foi do sorovar Schwarzengrund, porém o sorovar Typhimurium foi o que apresentou maior número de isolados multiresistentes (5/12 41,67%). Apesar da maioria dos produtos positivos para Salmonella sp. conter uma quantidade de microrganismo abaixo da dose infectante, sua prevalência elevada pode representar um risco ao consumidor. Além disso, o alto número de isolados resistentes encontrado no presente estudo indica a necessidade de futuro monitoramento do uso de antimicrobianos na granja, para controlar o risco de seleção e transmissão de cepas resistentes através da cadeia alimentar

A resistência aos antimicrobianos pela produção de β-lactamases em enterobactérias é um problema adicional neste cenário. Staphylococcus spp é considerado um patógeno humano freqüentemente associado a infecções adquiridas no ambiente hospitalar. O objetivo desse trabalho foi estudar a resistência aos antimicrobianos em cepas de Enterobactérias e Staphylococcus spp. isoladas de equipamentos utilizados no preparo de dietas destinadas à pacientes internados em um hospital universitário no município do Rio de Janeiro, além de verificar a presença de genes codificadores de enterotoxinas nas cepas de Staphylococcus spp. As enterobactérias e os Staphylococcus spp. foram isolados e identificados por metodologia convencional. Para o teste de susceptibilidade aos antimicrobianos foram utilizados discos contendo antimicrobianos clinicamente relevantes. Foi determinada a concentração inibitória mínima (CIM) pela técnica de microdiluição em caldo para os antimicrobianos clinicamente relevantes. A pesquisa de genes que codificam β-lactamases em enterobactérias foi realizada pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) e sequenciamento para os genes blaTEM, blaSHV, blaCTX-M, blaOXA-1 e blaCMY-2. Para Staphylococcus spp. foram pesquisados, através da PCR e sequenciamento, os genes de resistência a meticilina, gentamicina e eritromicina e os genes codificadores de enterotoxinas (sea-see, seg-sej, sen-ser e seu). Foram isoladas 97 cepas de enterobactérias, 40 de liquidificador e 57 de batedeira e 40 cepas de Staphylococcus spp., 20 de cada equipamento. Dentre as enterobactérias, o gênero Enterobacter foi isolado com maior frequencia (n=37, 38%). Foram ainda isoladas seis cepas de Salmonella spp. Das enterobactérias, 80% (n=79) foram resistentes a pelo menos um antimicrobiano e 38% (n=37) a três ou mais. A expressão fenotípica presuntiva de b-lactamases do tipo AmpC foi detectada em 32 cepas. O gene blaCMY-2 não foi encontrado. Doze cepas apresentaram halos de inibição com screaning positivo para a pesquisa de ESBL. Foi detectada a presença do gene blaSHV em K. pneumoniae subsp. pneumoniae. O sequenciamento desse gene permitiu identificá-lo como sendo blaSHV-36. Dentre os Staphylococcus spp., oito foram identificados como coagulase-positivas (SCP) e 32 como coagulase-negativas (SCN). As oito cepas de SCP foram identificadas como S. aureus subsp. aureus. Dentre os SCN, as espécies identificadas com maior frequência foram: S. caprae (n=7, 17,5%), S. simulans (n=5, 12,5%) e S. epidermidis (n=4, 10%). Destas, 83% (n=33) foram resistentes a pelo menos um antimicrobiano e 30% (n=12) foram resistentes a mais do que três. Duas cepas (5%) de S. epidermidis apresentaram perfil de resistência a até seis antimicrobianos e genes de resistência a meticilina, a eritromicina e a gentamicina. Todas as sete cepas que foram resistentes no TSA e na CIM a gentamicina, apresentaram o gene aac(2)/aph(6). O gene ermB foi observado ainda em uma S hominis subsp hominis que apresentou resistência na CIM e no TSA. Foi detectada a presença de pelo menos um gene codificador de enteroxotxina em 83% (n=33) das cepas. O gene seg foi detectado em 11 cepas, o gene sei em 17 cepas e o gene sen em 31 cepas. Os resultados encontrados implicam as dietas preparadas com esses equipamentos como veículo de disseminação de enteropatógenos e Staphylococcus spp. com marcadores de resistência e genes codificadores de enterotoxinas relevantes no ambiente hospitalar.

Para avaliar um sistema integrado de aquicultura foram realizadas análises microbiológicas da água utilizada neste sistema e determinada a incidência e resistência antimicrobiana dos enteropatógenos no ecossistema relacionado. As amostras de água testadas apresentaram 32,9% de taxas de coliformes fecais (≤1.600/100mL), de acordo com a OMS para piscicultura em águas residuais. Salmonella spp. foram detectadas em 14,5% das amostras. De um total de 33 cepas, 15,1% eram resistentes a um ou dois antimicrobianos testados e resistência a múltiplas drogas não foi observada. Aeromonas spp. foram identificadas em 91,6% das amostras. De um total de 416 cepas, resistência a uma classe de antimicrobianos foi observada em 66,3% e a multirresistência às drogas em 37,7%. Na avaliação da virulência dos isolados de Aeromonas hydrophila, 85,3% das cepas apresentaram Beta-hemólise nos três diferentes tipos de eritrócitos empregados e 99,1% nos eritrócitos de coelho e cavalo, sendo possível a caracterização através da PCR do gene aerA e lip, em 100% das amostras. Os resultados obtidos apontam para a relevância quanto às vantagens da implementação de um sistema integrado, disponibilizando alimentos com custo reduzido, porém este sistema necessita de um controle rígido e efetivo para que estes produtos não constituam veículos para a disseminação de doenças. / To evaluate an integrated aquaculture system, microbiological analyses of water used in this system were carried out and the incidence and antimicrobial resistance of enteropathogens were determined in the related ecosystem. Water samples tested had 32.9% of fecal coliforms rates (≤1600/100mL) in accordance with WHO for psiculture in wastewater. Salmonella spp. were detected in 14.5% of the samples. From a total of 33 strains, 15.1% were resistant to one or two antimicrobial drugs tested and multidrug-resistance was not observed. Aeromonas spp. were identified in 91.6% of the samples. From a total of 416 strains, resistance to one antimicrobial class was observed in 66.3% and multidrug-resistance in 37.7%. In relation to virulence factors of Aeromonas hydrophila, 85.3% of the strains showed beta-hemolysis in three different types of erythrocytes and 99.1% in horse and rabbit erythrocytes. It was possible to characterize by PCR assay, the genes aerA and lip in 100% of the strains. The results indicate the relevance of the benefits of implementing an integrated system, providing food with reduced cost, but this system requires a strict and effective control so that these products do not constitute a vehicle for the spread of disease.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Multiple antibiotic resistant Staphylococcus aureus represent a big problem in the control of hospital infections. Resistance pattern of isolated S. aureus presented in central vascular catheter of patients interned in the Intensive Therapy Center of the School Hospital of the Universidade Federal do Triângulo Mineiro was evaluated by antimicrobial tests, in which it was possible to detect high level of resistance to penicillin (94.7%) and ampicillin (86.8%), only considering the samples that presented resistance, beyond one strain that presented resistance to vancomycin. The oxacillin resistance evaluation was confirmed by PCR with the presence of the gene mecA. The association of the results obtained in the phenotypic test with the presence of the gene mecA, considered the reference method, was confirmed through the Table of Contingency and the Test of Χ2 with Yates correction. In 49 isolates evaluated, 23 were resistant to oxacillin, being possible to detect the mecA gene in 21 samples. The test of molecular screening by RAPD allowed the separation of the phenotypic groups in two different grouping patterns, the ones that presented resistance to antimicrobials and the sensible ones, with a dissimilarity of 73,3%. There is a higher genetic similarity between groups that present the same type of resistance, thus confirming the phenotypic analyses. Molecular markers for detection of resistance to oxacillin, like the gene mecA, were more sensitive than the phenotypic markers. / Staphylococcus aureus resistentes a múltiplos antibióticos representam um grande problema no controle das infecções hospitalares. O perfil de resistência a antimicrobianos de isolados de S. aureus presentes em cateteres vasculares central de pacientes internados em leitos do centro de terapia intensiva do Hospital Escola da Universidade Federal do Triângulo Mineiro foi avaliado por meio de testes antimicrobianos, pelos quais foi possível detectar um elevado nível de resistência à penicilina (94,7%) e ampicilina (86,8%), considerando-se somente as amostras que possuíam resistência, além de uma cepa resistente à vancomicina. A avaliação da resistência à oxacilina foi confirmada por PCR através da presença do gene mecA. A associação dos resultados obtidos no teste fenotípico com a presença do gene mecA, considerado um método de referência, foi confirmada através da Tabela de Contingência e do Teste de Χ2 com correção de Yates. Em 49 amostras avaliadas, 23 apresentaram resistência à oxacilina, sendo possível detectar a presença do gene de resistência mecA em 21 amostras. O teste de tipagem molecular por RAPD permitiu a separação dos grupos fenotípicos em dois padrões diferentes de agrupamento, os que possuíam resistência e os sensíveis aos antimicrobianos, com uma dissimilaridade de 73,3%. Há maior similaridade genética entre grupos que apresentam o mesmo tipo de resistência, confirmando assim as análises fenotípicas. Marcadores moleculares para detecção de resistência à oxacilina, como o gene mecA, foram mais sensíveis que os marcadores fenotípicos. / Mestre em Genética e Bioquímica

O presente estudo teve o objetivo de avaliar o perfil de sensibilidade in vitro de 171 isolados de Staphylococcus hyicus a nove antimicrobianos utilizados na suinocultura. A coleta das amostras foi realizada através de suabes de pele de leitões das fases de maternidade e creche provenientes de casos de epidermite exsudativa. As amostras foram submetidas ao isolamento e identificação e compreenderam dois grupos, classificadas de acordo com o período em que foram coletadas. O primeiro grupo foi formado por amostras históricas (80 isolados) provenientes de estudos anteriores entre 1975 a 1984 no Rio Grande do Sul, e mantidos liofilizados no laboratório de sanidade do Setor de Suínos (FAVET-UFRGS), e o segundo grupo (91 isolados) coletados no ano de 2012 nos estados do Rio Grande do Sul, Santa Catarina, Paraná e Minas Gerais. A realização do teste de susceptibilidade foi feita utilizando a técnica de diluição em ágar conforme protocolo M31-A3 do CLSI. Através de valores de Concentração Inibitória Mínima (CIM), foi obtido o perfil quantitativo de resistência em relação a nove antimicrobianos utilizados na suinocultura. A análise estatística possibilitou a avaliação de mudanças entre os dois grupos de amostras isoladas em diferentes épocas. Os resultados obtidos nesse estudo revelaram que para todas as cepas obtidas os beta-lactâmicos (ceftiofur e amoxicilina) foram os antimicrobianos mais ativos, com CIM para 90% dos isolados históricos (CIM90) de 0.5 μg/mL e 2.0 μg/mL para isolados recentes. A lincomicina, sulfametoxazol e tilmicosina foram os antimicrobianos menos ativos, com CIM90 variando de 128 a 256 μg/mL. O aumento na resistência entre o grupo de amostras históricas e recentes foi observado em seis dos nove antimicrobianos testados (amoxicilina, enrofloxacina, florfenicol, lincomicina, tilmicosina e tiamulina), em particular para a enrofloxacina e tiamulina. No caso do sulfametoxazole e tetraciclina, não foram observadas diferenças significativas na resistência, entretanto altos valores de CIM foram observados nos dois grupos avaliados (p<0,05). / This study was performed to evaluate the "in vitro" susceptibility profile of 171 Staphylococcus hyicus isolates from cases of exudative epidermitis to nine antibiotics used in pig production. Sample consisted of skin swabs from weanling and nursery piglets from farms suspected of exudative epidermitis. Samples were processed for bacterial isolation and identification and divided in two groups, according to the time of collection. The first group comprised historical samples (80 isolates) from previous studies (1975-1984) conducted in the state of Rio Grande do Sul, and stocked lyophilized in Swine Health Lab (FAVET-UFRGS), and the other group (91 isolates) formed by isolates collected in 2012 in the states of Rio Grande do Sul, Santa Catarina, Paraná and Minas Gerais, Brazil. The test was carried out using agar dilution protocol, according to M31-A3 CLSI. Through Minimal Inhibitory Concentrations (MIC) data, analysis was performed to get a quantitative profile of resistance to antimicrobials. Statistical analysis was performed to evaluate changes in resistance between the groups studied. Results showed that beta-lactam (ceftiofur and amoxicillin) were the most active antimicrobials for all strains tested, with the lowest MIC for inhibition of 90% of isolates (MIC90) of 0.5 μg/ml for historical isolates and of 2.0 μg/ml for recent isolates. Lincomycin, sulfamethoxazole and tilmicosin were the less active antimicrobials, with MIC90 varying from 128 to 256 μg/ml. Significant increase in resistance between historical and recent strains was observed for six out of nine antimicrobials tested (amoxicillin, enrofloxacin, florfenicol, lincomycin, tilmicosin and tiamulin), in particular for enrofloxacin e tiamulin. For sulfamethoxazole and tetracycline there was no significant differences in resistance between strains collected in different periods, however high MIC values were observed for these drugs.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Anna Carolina da Costa.pdf: 691308 bytes, checksum: 6714037f8e5e5965d7add36bb39f6e67 (MD5) Previous issue date: 2010-02-25 / This study was conducted on 12 dairy farms and in laboratories Bacteriology and Quality of Milk, both of the School of Veterinary Medicine Federal University of Goias objective of this study to characterize the microorganisms in milk from cows with subclinical mastitis and relate the pathogens identified with the variation of cell count somatic (CCS), also identify the risk factors and the likely sources of infection to subclinical mastitis, by visual observations, application of questionnaires, by isolation and identification of pathogens from the hands of milkers, swabs and solutions liners and pre posdipping. The profile sensitivity to key antimicrobial and bactericidal effect of the extract of Calendula officinalis has been determined on the pathogens isolated in most cases subclinical mastitis in herds. To evaluate the variation of CCS in relation to the pathogens involved, we used analysis of frequency and Chi-square, and the risk factors were analyzed for Logistic regression to test associations between variables and increased CCS. It was found that agents with higher frequency of isolation were S. aureus (28.8% of samples), E. coli (19.8%) and Enterobacter spp. (11.3%). CCS average herd was approximately 875 x 103cél/mL, and the type etiologic agent of a significant influence on the variation in SCC. It was found that S. aureus and Streptococcus spp. were responsible for greater increase in SCC, with an average of 1192 x 1174 x 103cél/mL and 103cél/mL, respectively. This variation was significantly higher (p <0.05) when compared to the average SCC in milk were the other isolates microorganisms: S. coagulase negative, Pseudomonas spp., E. coli and Enterobacter spp. It was found that the risk factors that showed significant association with increased SCC were unsatisfactory hygiene environment and milker, inadequate drying of the teats, and factors related to milking equipment, such as poor maintenance and inadequate cleaning. The hands of the milkers and the sets of liners were able to convey both the infectious agents as the environment, important in epidemiology of bovine mastitis. It was also concluded that the extract of marigold showed bactericidal activity in vitro against S. aureus isolates, and antimicrobial agents used showed variation in the spectrum of sensitivity. / O presente trabalho foi conduzido em 12 explorações leiteiras e nos Laboratórios de Bacteriologia e de Qualidade de Leite, ambos da Escola de Veterinária da Universidade Federal de Goiás. Objetivou-se neste estudo caracterizar a população microbiana presente no leite de vacas com mastite subclínica e relacionar os patógenos identificados com a variação da contagem de células somáticas (CCS), além de identificar os fatores de risco e as prováveis fontes de infecção para a mastite subclínica, através de observações visuais, aplicação de questionários, pelo isolamento e identificação de patógenos das mãos de ordenhadores, suabes de teteiras e em soluções de pre e posdipping. O perfil de sensibilidade aos principais antimicrobianos e o efeito bactericida do extrato da Calendula officinalis foi determinado sobre os patógenos mais isolados em casos de mastite subclínica dos rebanhos estudados. Para avaliação da variação da CCS em relação aos patógenos envolvidos utilizou-se análises de frequência e o teste de qui-quadrado, e para os fatores de risco foram realizadas análises de Regressão Logística para testar associações entre as variáveis e o aumento da CCS. Constatou-se que os agentes com maior frequência de isolamento foram S. aureus (28,8% das amostras), E. coli (19,8%) e Enterobacter spp. (11,3%). A CCS média dos rebanhos foi de aproximadamente 875 x 103cél/mL, sendo que o tipo de agente etiológico apresentou efeito significativo sobre a variação na CCS. Verificou-se que S. aureus e Streptococcus spp. foram os responsáveis pela maior elevação da CCS, com média de 1.192 x 103cél/mL e 1.174 x 103cél/mL, respectivamente. Essa variação foi significativamente maior (p < 0,05) ao ser comparado às CCS médias do leite em que foram isolados os demais microrganismos: S. coagulase negativo, Pseudomonas spp., E. coli e Enterobacter spp. Verificou-se que os fatores de risco que apresentaram associação significativa com o aumento da CCS foram higiene insatisfatória do ambiente e ordenhador, secagem inadequada dos tetos, e fatores relacionados ao equipamento de ordenha, como falta de manutenção e limpeza inadequada. As mãos dos ordenhadores assim como os conjuntos de teteiras foram capazes de veicular tanto os agentes contagiosos quanto os ambientais, importantes na epidemiologia da mastite bovina. Conclui-se também que o extrato de calêndula apresentou atividade bactericida in vitro sobre S. aureus isolados, e os antimicrobianos utilizados apresentaram variação no espectro de sensibilidade.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-01-21T11:19:26Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Sarah Inês Rodrigues Rosa - 2015.pdf: 3749246 bytes, checksum: 1a9a8f107442eeddf5e57f4eaaf4e954 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-01-21T11:22:28Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Sarah Inês Rodrigues Rosa - 2015.pdf: 3749246 bytes, checksum: 1a9a8f107442eeddf5e57f4eaaf4e954 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-21T11:22:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Sarah Inês Rodrigues Rosa - 2015.pdf: 3749246 bytes, checksum: 1a9a8f107442eeddf5e57f4eaaf4e954 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-03-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Campylobacteriosis have been related as main cause of gastroenteric diseases in Europe and North America. In Brazil, the lack of data about this disease hinders a comparison with other countries and difficult the decision making to combat the causative bacterium. Due high incidence of Campylobacter spp. in meat, main in poultry carcasses and by-products, this study aimed isolate and identify this bacteria in chicken fresh sausage sampled in Aparecida de Goiânia, in Goiás state. Thirty-four samples were collected in the period from July to October, each one were subdivided in 68 sub-samples, half of sub-samples were analyzed immediately, in fresh/chilled condition, and the other half were frozen for further analysis. In 11.65% of fresh samples were isolated Campylobacter coli and Campylobacter lari. For the frozen samples, no positive results were observed. Worked also with simple and double concentration of enrichment medium, recovering three positive samples in the simple one and a positive sample in the double. It was observed 100% resistance against the antimicrobial bases tested. It is recommended more studies of this nature, broadening the scope as to poultry products and greater number of samples; therefore, it is believed that they may evaluated the prevalence of this important microorganism in animal products in the Goiás state. Such investigations may provide important information for the National Program for Monitoring Prevalence and Bacterial Resistance in Chicken, established in 2008 by the National Agency of Sanitary Surveillance of the Ministry of Health. / Campilobacteriose tem sido frequentemente relatada como principal causadora de doenças gastroentéricas na Europa e América do Norte. No Brasil, a escassez de dados em relação à notificação dessa enfermidade dificulta uma comparação com outros países e a tomada de decisões quanto a políticas de combate à bactéria causadora. Devido a relatos de alta incidência de Campylobacter spp. em carnes, principalmente em carcaças de frango e derivados, este estudo teve como objetivo o isolamento e identificação dessa bactéria em linguiças de frango do tipo frescal obtidas no município de Aparecida de Goiânia, no estado de Goiás. Foram coletadas 34 amostras do produto no período de julho a outubro de 2014, cada uma delas foi dividida em duas partes totalizado 68 subamostras, metade delas foram imediatamente analisadas, na condição fresca/refrigerada, e metade foi submetida ao congelamento para posterior análise. Em 11,75% das amostras frescas pesquisadas, isolou-se Campylobacter coli e Campylobacter lari. Não foi observado resultado positivo para Campylobacter spp. nas linguiças congeladas. Trabalhou-se também, com simples e dupla concentração do meio de enriquecimento, recuperando três amostras positivas no meio simples e uma amostra positiva no meio em dupla concentração. Foi observada 100% de resistência frente às bases antibióticas testadas. Recomenda-se mais estudos desta natureza, ampliando a abrangência quanto aos produtos avícolas e com maior número de amostras, pois acredita-se que poderão avaliar a prevalência deste importante micro-organismo em produtos de origem animal no estado de Goiás. Tais investigações poderão contribuir com informações importantes para o Programa Nacional de Monitoramento da Prevalência e da Resistência Bacteriana em Frango, estabelecido em 2008 pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária do Ministério da Saúde.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-01-11T10:54:50Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Robmary Matias de Almeida - 2017.pdf: 3556874 bytes, checksum: 27db72af224144cb18266e9f23af2021 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-01-11T10:55:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Robmary Matias de Almeida - 2017.pdf: 3556874 bytes, checksum: 27db72af224144cb18266e9f23af2021 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-11T10:55:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Robmary Matias de Almeida - 2017.pdf: 3556874 bytes, checksum: 27db72af224144cb18266e9f23af2021 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-06-26 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Haemophilus influenzae (Hi) and Haemophilus haemolyticus (Hhae) are important microorganisms present in human nasopharyngeal colonization, with rates varying according to locality, sampling frequency, individual and social factors. Hi is a pathological agent that causes diseases such as meningitis, pneumonia, sepsis and otitis media, which presents in encapsulated forms with six serotypes a, b, c, d, e, f, and uncapsulated or non-typeable (HiNT). Hhae is a nasopharyngeal comensal and rarely causes invasive diseases. The objective of this study was to estimate the prevalence of Hi and Hhae in children under five years of age attending public day care centers in the city of Goiânia-GO, to determine the circulating serotypes, to analyze the risk factors associated with the nasopharyngeal carrige, as well as to characterize the antimicrobial resistance of Hi. Were analyzed 1.188 nasopharynx swabs from healthy children between 36 and 59 months of age from October to December 2010. The samples were submitted to bacterial culture for the isolation of Haemophilus spp. For the identification of the species, the Real-Time Polymerase Chain Reaction (TR-PCR) was used. Serotyping, as well as detection of the bla TEM-1 and bla ROB-1 resistance genes, was performed through the conventional Polymerase Chain Reaction. Phenotypic detection for β-lactamase production was performed by the chromogenic cephalosporin test. The database was constructed with the statistical software SPSS (Chicago, IL, USA) version 18.0. Risk factors, children aged 3 years, low maternal schooling and three or more children under 10 years of age living in the same household of the child recruited in the study were evaluated by multivariate Poisson regression. The prevalence of Hi carriers was 54.4% (646 / 1.188), 0.9% (n = 11) of the serotype e, 0.9% (n = 11) of serotype f, 0.2% (n = 2) serotype a, 0.08% (n = 1) serotype d, 0.0% (n = 0) serotype b and c and 52.3% (621 / 1.188) of HiNT. The prevalence of Hhae was 1.2% (14 / 1.188). Among the encapsulated Hi, the prevalence of the bla TEM-1 gene was 4.0% (1/25) and the bla ROB-1 gene was 4.0% (1/25). Among the 20% (124/621) of HiNT analysed, the prevalence of the bla TEM-1 gene was 13,7% (17/124) and the prevalence of the bla TEM-1 gene was 1,6% (2/124). Continuous surveillance of Haemophilus spp. as a colonizer, is necessary to evaluate its transmission and dissemination in the population where there is a higher risk of invasive disease, to control Hib re-emergence after the vaccinacion and to continue to monitor antimicrobial resistance. / Haemophilus influenzae (Hi) e Haemophilus haemolyticus (Hhae) são importantes microrganismos presentes na colonização nasofaríngea humana, com taxas que variam de acordo com a localidade, frequência de amostragem, fatores individuais e sociais. O Hi é um agente patológico causador de doenças como meningite, pneumonia, sepse e otite média que se apresenta sob as formas capsuladas com seis sorotipos a, b, c, d, e, f, e não capsuladas ounão tipáveis (HiNT). O Hhae é comensal nasofaríngeo e raramente causa doenças invasivas. O objetivo do estudo foi estimar a prevalência de Hi e Hhae em crianças menores de cinco anos de idade que frequentam creches públicas no município de Goiânia-GO, determinar os sorotipos circulantes, analisar os fatores de risco associados ao portador nasofaríngeo, bem como caracterizar a resistência antimicrobiana dos Hi. Foram analisados 1.188 swabs de nasofaringe de crianças saudáveis entre 36 e 59 meses de idade, no período de outubro a dezembro de 2010. As amostras foram submetidas à cultura bacteriana para o isolamento do Haemophilus spp. Para identificação da espécie foi utilizada a Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real (PCR-TR). A sorotipagem, assim como a detecção dos genes de resistência bla TEM-1 e bla ROB-1 , foi realizada através da Reação em Cadeia da Polimerase convencional. A detecção fenotípica para produção da β-lactamase foi executada pelo teste da cefalosporina cromogênica. A base de dados foi construída com o programa estatístico SPSS (Chicago, IL, USA) versão 18.0. Os fatores de risco, crianças com idade de 3 anos, baixa escolaridade da mãe e três ou mais crianças menores de 10 anos de idade convivendo no mesmo domicilio da criança recrutada no estudo, foram avaliados por regressão de Poisson multivariada. A prevalência de portador do Hi foi de 54,4% (646/1.188) sendo 0,9% (n=11) do sorotipo e, 0,9% (n=11) do sorotipo f, 0,2% (n=2) do sorotipo a, 0,08%(n=1) do sorotipo d, 0,0% (n=0) dos sorotipos b e c e 52,3% (621/1.188) de HiNT. A prevalência do Hhae foi de 1,2% (14/1.188). Entre os Hi encapsulados a prevalência do gene bla TEM-1 foi de 4,0% (1/25) e do gene bla ROB-1 foi de 4,0% (1/25). Em 20% (124/621) dos HiNT, a prevalência do gene bla TEM-1 foi de 13,7% (17/124) e do gene bla ROB-1 de 1,6% (2/124). A vigilância contínua do Haemophilus spp. como colonizador, se faz necessária para avaliar sua transmissão e disseminação na população onde há maior risco de incidência de doenças invasivas, controlar a re-emergência do Hib após a vacinação e continuar monitorando a resistência antimicrobiana.

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As micobactérias de crescimento rápido causam infecções pulmonares, infecções relacionadas a traumas cutâneos e aos cuidados com a saúde. Ha um número reduzido de opções terapêuticas para o tratamento dessas infecções e os dados nacionais sobre os determinantes genéticos dessa resistência são escassos. Duas classes de antimicrobianos importantes no tratamento são as fluorquinolonas e os macrolídeos. Enquanto a maioria dos isolados do Grupo M. chelonae-abscessus apresenta resistência intrínseca às fluorquinolonas, e são sensíveis aos macrolídeos, a maioria dos isolados do Grupo M. fortuitum é sensível às fluorquinolonas e expressa RNA-metilases que impedem a ação dos macrolídeos. Os determinantes da resistência às fluorquinolonas conhecidos em micobactérias são mutações no gene gyrA e para os macrolídeos é a expressão de genes erm, que codificam RNA-metilases. Nos dois casos os determinantes tem localização cromossômica. Outros determinantes de resistência podem ter localização plasmidial, a exemplo do gene aacA4\'-8, presente em plasmídio do grupo de incompatibilidade IncP, detectado em M. abscessus, que codifica resistência à kanamicina e tobramicina. Neste estudo foram avaliados: a correlação entre à susceptibilidade ao ciprofloxacino e moxifloxacino e presença de mutações nos genes gyrA e gyrB; a susceptibilidade à claritromicina e presença de genes que codificam RNA-metilases; a presença de plasmídios do grupo de incompatibilidade IncP em diferentes espécies de micobactérias; a estabilidade e a transferência por conjugação do plasmídio pBRA-100; a relação clonal entre isolados que albergam plasmídios IncP e o perfil de susceptibilidade antimicrobiana de uma coleção de isolados da espécie M. abscessus. Cento e vinte e dois isolados dos Grupos M. abscessus e M. fortuitum foram analisados quanto às concentrações inibitórias mínimas, por microdiluição, utilizando-se o painel RAPMYCO&#174;. As sequências parciais dos genes gyrA e gyrB e a presença de genes que codificam RNA-metilases foram determinadas em 69 e 59 desses isolados, respectivamente. A presença de plasmídios do grupo IncP foi determinada por PCR e os produtos de amplificação tiveram suas sequencias caracterizadas. A estabilidade do plasmídio pBRA-100 em Escherichia coli TOP10&#174; foi avaliada realizando-se repiques sucessivos por 57 dias e semeadura em agar LB contendo kanamicina. A transferência horizontal foi avaliada por ensaio de conjugação com E. coli J53 resistente à azida sódica. Em M. abscessus não houve diferença entre as sequencias da região QRDR de GyrA e GyrB entre isolados sensíveis e resistentes ao ciprofloxacino. Em M. abscessus subsp. abscessus e M. abscessus subsp. bolletii todos os isolados testados apresentaram genes erm; entretanto não foi observada correlação entre a presença dos genes e resistência indutiva a claritromicina. O gene erm(45), descrito neste trabalho, foi detectado apenas em M. abscessus subsp. bolletii. Os ensaios de microdiluição evidenciaram que os antimicrobianos mais ativos contra M. abscessus subsp. abscessus foram amicacina (89%), tigeciclina (96%) e claritromicina (86%). Apenas nos dois isolados da espécie M. fortuitum resistentes ao ciprofloxacino foi detectada a substituição S83W na proteína GyrA. Trata-se de substituição ainda não descrita em micobactérias. Nao foi observada correlação entre substituições em GyrB e resistência ao ciprofloxacino ou moxifloxacino. O gene erm(46), descrito neste estudo, foi detectado em 65% dos isolados. Nos demais isolados foram detectados três outros genes: erm(47), erm(48) e erm(49), ainda nao descritos. Os plasmídios IncP foram detectados apenas em \"M. massiliense\" pertencentes a três grupos clonais distintos com índice de similaridade maior que 92%, quando analisados por ERIC-PCR. Houve sucesso na conjugação entre E. coli TOP-Myco e E. coli J53. Os ensaios de estabilidade evidenciaram que o plasmídio pBRA-100 é estável em E. coli com aproximadamente 100% da população bacteriana albergando o plasmídio após 57 subcultivos. / The rapidly growing mycobacteria cause lung infections, skin infections related to trauma and health care associated infections. There are a limited number of therapeutic options for treating these infections and national data on the genetic determinants of this resistance are scarce. Two major classes of antimicrobials used in treatment of these infections are macrolides and fluoroquinolones. While the majority of the isolates from M. chelonae-abscessus Group have intrinsic resistance to fluoroquinolones, and are sensitive to macrolides, most isolates from M. fortuitum Group are sensitive to fluoroquinolones and express RNA methylases that prevent the action of macrolides. The known fluoroquinolones resistance determinants in to mycobacteria are mutations in thegyrA gene and for macrolides the main determinant is the expression of erm genes which encode RNA methylases. In both cases the determinants are located at the chromosome. Other resistance determinants may have a plasmidial location, such as aacA4\'-8 gene, present in the pBRA100 plasmid detected in M. abscessus, which encodes resistance to kanamycin and tobramycin. This study evaluated the correlation between the susceptibility to ciprofloxacin and moxifloxacin and mutations in genes gyrA and gyrB; susceptibility to clarithromycin and the presence of RNA-methylases encodinggenes , the presence of plasmids of the incompatibility group IncP in different species mycobacteria; stability and conjugal transfer of plasmid pBRA-100; the clonal relationship between isolates harboring plasmids IncP and antimicrobial susceptibility profile of a collection of isolates of M. abscessus. One hundred and twenty-two isolates of M. chenolae-abscessus and M. fortuitum Groups were analyzed for their minimal inhibitory concentrations by microdilution, using the RAPMYCO&#174; Panel. The partial sequences of the genes gyrA and gyrB and the presence of genes encoding RNA methylases were determined in 69 and 59 isolates, respectively. The presence of IncP group plasmids was determined by PCR and the sequence of PCR products were characterized. The stability of the pBRA-100 plasmid in Escherichia coli TOP10&#174; was evaluated by performing successive subcultures for 57 days, and plating on LB agar containing kanamycin. The horizontal transfer was evaluated by conjugation with E. coli J53 a sodium azide resistant strain. In M. abscessus no differences between the sequences of the QRDR region of gyrA or gyrB among isolates susceptible and resistant to ciprofloxacin were observed. In M. abscessus subsp. abscessus and M. abscessus subsp. bolletii all isolates tested had erm genes; however there was no correlation between the presence of these genes and inducible resistance to clarithromycin. The erm(45), gene described in this paper, was only detected in M. abscessus subsp. bolletii. Microdilution tests showed that the most active antibiotics against M. abscessus subsp. abscessus were amikacin (89%), tigecycline (96%) and clarithromycin (86%). In only in two M. fortuitum isolates resistant to ciprofloxacin the amino acid substitution S83W was detected in GyrA. This substitution had not been described mycobacteria. No correlation was observed between substitutions in GyrB and resistance to ciprofloxacin or moxifloxacin. The erm(46) gene described in this study, was detected in 65% of the isolates. In the remaining isolates other three not yet described genes were detected: erm(47), erm(48) and erm(49). IncP plasmids were detected only in \"M. massiliense\" belonging to three clonal groups with at similarity index greater than 92% when analyzed by ERIC-PCR.We succeeded in conjugating E. coli TOP-Myco and E. coli J53. The stability tests showed that the plasmid pBRA-100 is stable in E. coli since approximately 100% of the bacterial population harbored the plasmid after 57 subcultures.