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Identificação, purificação e caracterização de peptídeos antimicrobianos presentes na secreção cutânea do anuro Hypsiboas raniceps

Falico, Diego Alejandro 07 March 2014 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Biologia, Programa de Pós-graduação, Departamento de Biologia Animal, 2014. / Submitted by Cristiane Mendes (mcristianem@gmail.com) on 2014-11-20T19:38:59Z No. of bitstreams: 1 2014_DiegoAlejandroFalico.pdf: 11887714 bytes, checksum: 2ee479f958a7bbf12e17ec4ccbb0f4e8 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2014-11-25T10:42:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_DiegoAlejandroFalico.pdf: 11887714 bytes, checksum: 2ee479f958a7bbf12e17ec4ccbb0f4e8 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-25T10:42:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_DiegoAlejandroFalico.pdf: 11887714 bytes, checksum: 2ee479f958a7bbf12e17ec4ccbb0f4e8 (MD5) / O estudo de novas fontes de compostos bioativos permitiu o desenvolvimento de muitos produtos biotecnológicos, incluindo drogas com importantes atividades biológicas, muitas das quais são usadas atualmente no tratamento de doenças relevantes, especialmente de natureza infecciosa. No presente trabalho, foi realizada uma varredura por peptídeos com atividade antifúngica a partir da secreção cutânea da rã brasileira Hypsiboas raniceps. Indivíduos adultos de H. raniceps foram coletados no estado de Goiás, Brasil. As secreções cutâneas foram obtidas por meio de estimulação elétrica moderada, congeladas, secas e fracionadas por HPLC empregando-se coluna de fase reversa C18. Todas as frações cromatográficas foram testadas quanto à capacidade de inibir a proliferação do fungo Candida albicans e as frações ativas foram analisadas por espectrometria de massas (MALDI-TOF MS). O perfil cromatográfico resultou em cerca de 30 frações, oito das quais promoveram redução na proliferação do fungo C. albicans acima de 25%. As frações com atividade antifúngica apresentaram componentes de massa molecular variando entre 1000 e 3000 Da. As frações 27 e 28 foram as mais ativas, mas a análise por MS revelou a presença de vários componentes nessas frações. A fração 28 foi selecionada e submetida a uma passo cromatográfico adicional, levando à obtenção do peptídeo bioativo presente nessa fração. O peptídeo HR 36 puro foi acumulado e testado contra o fungo C. albicans. Este novo peptídeo apresenta massa molecular igual a 3 kDa e é capaz de inibir a proliferação de C. albicans na concentração de 128 M em 50%. No presente estudo, foi constatada que a secreção cutânea de H. raniceps é uma fonte de peptídeos antifúngicos e um novo peptídeo antifúngico de 3 kDa foi obtido em alto grau de pureza de modo a permitir a sua caracterização biológica e química. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The study of new sources of bioactive compounds allowed the development of many biotechnological products, including drugs with important biological activities, many of which are used today for the treatment of relevant diseases, especially those of infectious nature. In the present study we performed a screening for peptides with antifungal activity from the skin secretion of the Brazilian frog Hypsiboas raniceps. Adult specimens of H. raniceps were collected in Goiás, Brazil. Skin secretions were obtained by mild electric stimulation, freeze-dried and fractionated by HPLC using a C18 reversed-phase column. All fractions were tested for inhibitory activity against the fungus Candida albicans, and the bioactive fractions were submitted to mass spectrometric analysis (MALDI-TOF MS). The typical chromatographic profile showed approximately 30 fractions, eight of which promoted reduction in yeast cell proliferation above 25%. The antifungal fractions showed molecular mass components ranging from 1000 to 3000 Da. Fractions 27 and 28 were the most active but the MS analysis revealed multiple components present in these fractions. Fraction 28 was selected and submitted to an additional chromatographic step in order to obtain the major bioactive peptide present in this sample. Peptide HR 36 was acumulated and tested against C. albicans. This new peptide has a molecular mass of 3 kDa and is able to inhibit the proliferation of C. albicans at 128 M in 50%. It was observed that H. raniceps skin secretion is a source of antifungal peptides and one new 3 kDa antifungal peptide was obtained in high-purity which will allow in its biological and chemical characterization.
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Caracterização química e biológica da secreção cutânea do anuro Leptodactylus labyrinthicus: peptídeos antimicrobianos e anticarcinogênicos, fosfolipases e peptidases

Libério, Michelle da Silva January 2008 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2008. / Submitted by Luana Patrícia de Oliveira Porto (luana_porto_23@hotmail.com) on 2010-03-12T20:33:00Z No. of bitstreams: 1 2008_MichelledaSilvaLiberio.pdf: 6096417 bytes, checksum: 5931809225d410af1726c5387c700412 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-12T18:28:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_MichelledaSilvaLiberio.pdf: 6096417 bytes, checksum: 5931809225d410af1726c5387c700412 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-12T18:28:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_MichelledaSilvaLiberio.pdf: 6096417 bytes, checksum: 5931809225d410af1726c5387c700412 (MD5) Previous issue date: 2008 / Atualmente, o surgimento de resistência às drogas disponíveis no mercado pelos microorganismos e pelas células de câncer tornou o desenvolvimento de novas formas terapêuticas imprescindível. A secreção cutânea dos anfíbios é uma rica fonte natural de peptídeos com atividades anticarcinogênica (PAC) e antimicrobiana (PAM). Entretanto, o veneno desses animais também é constituído de outras macromoléculas, por exemplo, enzimas, as quais têm sido pouco investigadas. O presente estudo teve como objetivo caracterizar, de forma geral, a secreção glandular da rã-pimenta Leptodactylus labyrinthicus. Especificamente, buscou-se identificar e caracterizar química e biologicamente alguns dos peptídeos presentes, além de investigar a presença de atividades enzimáticas. O estudo revelou a ocorrência de inúmeros peptídeos e proteínas, demonstrando a riqueza e o potencial biológico desse veneno. Os dois peptídeos antimicrobianos purificados foram fallaxin e pentadactylin, os quais já haviam sido isolados de outras espécies do gênero Leptodactylus. Ambos apresentaram atividade contra bactérias Gram-positivas e Gram-negativas; e fallaxin foi identificado como fracamente hemolítico. Como vários PAMs de amplo espectro de ação também são citotóxicos para células de câncer, os dois peptídeos isolados foram testados contra as linhagens celulares de câncer HeLa, MCF-7 e B16F10, demonstrando-se efetivos contra todas as linhagens. Observou-se também que os dois PACs são pouco seletivos, pois foram mais tóxicos para células normais de fibroblasto (FHN) do que para as células tumorais. Portanto, o uso terapêutico desses PACs deverá ser via estratégias que aumentem a especificidade dos mesmos. Os estudos de mecanismo de ação com pentadactylin não foram conclusivos, sugerindo a morte de células de MCF-7 via apoptose, podendo ser seguida pelo processo necrótico. Além desses, o fragmento Flx-16 de fallaxin e o peptídeo PGL-Ll, rico em glicina e leucina, foram testados, contudo nenhuma atividade biológica foi detectada. A investigação da atividade enzimática da secreção revelou a presença de enzimas proteolíticas pertencentes aos clãs das metalo- e serino-peptidases e que atuam de maneira ótima em pH neutro a ligeiramente básico; e de fosfolipases do tipo A2. O estudo e caracterização da composição da secreção cutânea de anfíbios são de extrema relevância, podendo ajudar a esclarecer questões taxonômicas, identificar drogas terapêuticas em potencial, além de auxiliar no entendimento da biologia dos anfíbios. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Nowadays, the emergence of resistance to the current available chemotherapeutic drugs by microorganisms and cancer cells make the development of new agents imperative. The skin secretion of amphibians is a natural rich source of antimicrobial (PAM) and anticancer peptides (PAC). Nevertheless, the venom of these animals is also composed by other macromolecules, such as enzymes, which have not been studied extensively yet. The aim of this study was to characterize the glandular secretion of the pepper-frog Leptodactylus labyrinthicus, targeting to identify and characterize chemically and biologically some of the peptides present, besides detecting enzymatic activities. The research has found a variety of peptides and proteins, showing the richness and the biological potential of this venom. Two PAMs were purified, fallaxin and pentadactylin, which have already been isolated from other species of the genus Leptodactylus. Both peptides were active against Gram-positive and Gram-negative bacterias; moreover, fallaxin showed a weak hemolytic activity. As some PAMs of broad spectrum of action are also toxic to cancer cells, the two peptides isolated were tested against the cancer cell lines HeLa, MCF-7 and B16F10, being effective against all of them. We noticed that both PACs aren’t specific, since they have been more toxic to normal fibroblast cells (FHN) than to tumor cells. Therefore, it is mandatory that the therapeutic use of these PACs be accompanied by strategies that enhance their selectiveness. The studies of action mechanism with pentadactylin were not conclusive, suggesting that MCF-7 cells die by apoptosis; however it may be followed by necrosis. The peptide PGL-Ll, rich in glycine and leucine, and the fragment Flx-16 from fallaxin were tested, though no biological activity was found. The research of enzyme activity of the secretion revealed the presence of proteolytic enzymes of the clans metallo- and serine-peptidases, and that they act optimally at neutral to slightly basic pH, and of phospholipases A2. The study and characterization of the skin secretion of amphibians is of extreme relevance, helping to elucidate taxonomic issues, identifying putative therapeutic drugs, besides helping to understand the biology of amphibians.
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Purificação parcial e caracterização de um peptídeo antimicrobiano produzido por Pseudomonas aeroginosa 4B / Partial purification and characterization of an antimicrobial peptide produced by Pseudomonas aeruginosa 4B

Fontoura, Roberta January 2008 (has links)
Uma substância antimicrobiana produzida por Pseudomonas aeruginosa foi caracterizada. O microrganismo produtor foi isolado de um lago de tratamento de efluentes em um frigorífico localizado na região do vale do Rio Pardo, no Rio Grande do Sul. O isolado foi caracterizado por análise bioquímica e seqüenciamento do 16S rDNA. As condições de maior produção ocorreram a 30°C, sob agitação contínua, com o maior pico de produção a partir de 108 horas. A substância antimicrobiana foi parcialmente purificada através de precipitação com sulfato de amônio 70%, cromatografia de gel filtração (Sephadex G-100) e de troca iônica (DEAE Sepharose). A substância antimicrobiana foi caracterizada com as duas alíquotas coletadas a partir do eluato da coluna de gel filtração. Os dados da caracterização indicam que ambas as alíquotas são a mesma substância. A atividade antimicrobiana foi analisada sobre o gel de poliacrilamida. Uma banda majoritária no gel de poliacrilamida sugere que o peptídeo apresente uma massa molecular de aproximadamente 30 kDa. A substância apresentou uma ampla atividade antimicrobiana sobre cepas indicadoras, tais como S. aureus, L. monocytogenes, B. cereus e importantes bactérias patogênicas e deteriorantes. A atividade antimicrobiana foi constante na faixa de 10 a 100°C, por até 60 minutos, iniciando um declínio a 120°C. O peptídeo antimicrobiano resistiu a todas as proteases testadas e teve sua atividade diminuída com DMSO, Tween 20 e 80, TCA e uréia. A substância parcialmente purificada foi utilizada no combate de S. aureus artificialmente inoculados em hambúrgueres crus de carne bovina e não inibiu seu crescimento nas condições do experimento. / An antimicrobial substance produced by Pseudomonas aeruginosa was characterized. The producer microorganism was isolated from an effluents treatment lake from an abattoir localized in Rio Pardo valley area, Rio Grande do Sul, Brazil. The strain was characterized by chemical profiling and 16S sequencing. It has reached its maximum of production under the following conditions: 86ºF, continuous agitation and aeration, 108 h. The antimicrobial substance was partially purified by ammonium sulfate precipitation 70%, gel filtration (Sephadex G-100) and ion exchange chromatography (DEAE Sepharose). The antimicrobial substance was characterized into two fractions collected from gel filtration’s eluate. The characterization data indicates that both fractions are the same substance. Direct activity on sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) was observed. A major band on SDS-PAGE suggested that the peptide had a molecular mass of about 30 kDa. The substance was inhibitory to a broad range of indicator strains such as S. aureus, L. monocytogenes B. cereus, and important pathogenic and spoilage bacterias. The activity was constant from 50 to 212ºF, for 60 minutes, beginning to decline at 248ºF. The antimicrobial peptide resisted to all proteolitic enzymes tested and only reduced its activity with dimethyl sulfoxide, polysorbate 20, polysorbate 80, trichloroacetic acid and urea. The partially purified substance was used to combat S. aureus in meat hamburgers and didn’t inhibit its growth at the experiment conditions.
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Caracterização da virulência e resistência de Staphylococcus spp. Isolados de pacientes oncológicos e não oncológicos de dois hospitais da cidade do Recife-PE

RABELO, Marcelle Aquino 17 February 2017 (has links)
Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-07-17T21:03:07Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Marcelle Aquino Rabelo.pdf: 1811490 bytes, checksum: a8883899ff40c5c405ea02f911de3b40 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-19T22:19:11Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Marcelle Aquino Rabelo.pdf: 1811490 bytes, checksum: a8883899ff40c5c405ea02f911de3b40 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-19T22:19:11Z (GMT). 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Também, identificou-se a resistência à vancomicina em Staphylococcus spp., através de métodos fenotípicos e os fatores de risco mais prevalentes para infecção em pacientes oncológicos. Observou-se um maior percentual de isolados sensíveis aos antimicrobianos testados. Em relação ao fármaco vancomicina, foram identificados 27,3% de isolados resistentes pela técnica do screening. No hospital oncológico foram positivos, 50% e 77,7% respectivamente para o gene blaZ e mecA. Observou-se percentuais de isolados positivos de 25%, 42,8%, 32,1% e 70%, respectivamente para icaAD e hlg no hospital universitário e hospital oncológico. No hospital oncológico, observou-se um isolado de fenótipo constitutivo positivo para o gene ermC. Após a realização dos testes de associação estatísticos, não foi observada diferença estatisticamente significante na presença dos genes de resistência quando comparou-se os dois hospitais. No grupo de pacientes oncológicos, observou-se diferença significativa quando comparados os indivíduos infectados com Staphylococcus spp. que albergavam o gene mecA e os indivíduos infectados com Staphylococcus spp. sem o gene mecA em relação a contagem de neutrófilos no período da infecção. Em relação aos genes de virulência, foi possível observar diferença estatisticamente significante entre os dois hospitais. Assim, não existe diferença significativa na presença de genes de resistência quando se compara grupos de pacientes, entretanto observa-se diferenças significativas em relação à presença dos genes relacionados à virulência entre diferentes grupos, o que pode estar associado às características dos pacientes e suas internações. Desta forma, concluiu-se que o monitoramento antimicrobiano é essencial para o tratamento das infecções em cada hospital e a condição do paciente parece estar ligada ao potencial patogênico do microrganismo. / Staphylococcus spp. is one of the major infection-associated agent within health care and one of principal cause of complication in cancer patients. The severity of staphylococcal infections is related to the presence of resistance and virulence factors, which favor bacterial evasion of the host defense system. In order to compare isolates of Staphylococcus spp. of oncological and non-oncological patients from two hospitals in the city of Recife, during the period of 2013, antimicrobial susceptibility and polymerase chain reaction (PCR) tests were performed to identify the occurrence of resistance genes (mecA, blaZ, ermA and ermC) and virulence genes (icaAD and hlg). Resistance to vancomycin was identified by phenotypic methods in Staphylococcus spp. and the most prevalent risk factors for infection in cancer patients. A higher percentage of antimicrobial susceptible isolates was observed. Regarding the vancomycin drug, 27.3% of resistant isolates were identified by the screening technique. At the oncology hospital they were positive, 50% and 77.7% respectively for the blaZ and mecA gene. Percentage of positive isolates of 25%, 42.8%, 32.1% and 70%, respectively, found for icaAD and hlg in the university hospital and oncology hospital, respectively. A positive constitutive phenotype isolate for the ermC gene was observed at the oncology hospital. After performing the statistical association tests, no statistically significant difference was observed in the presence of resistance genes when comparing the two hospitals. In the group of cancer patients, a significant difference was observed when compared to individuals infected with Staphylococcus spp. that harbored the mecA gene and individuals infected with Staphylococcus spp. without the mecA gene in relation to the neutrophil count at the time of infection. Regarding the virulence genes, it was possible to observe a statistically significant difference between the two hospitals. Thus, there is no significant difference in the presence of resistance genes when comparing groups of patients, however, there are significant differences regarding the presence of virulence-related genes between different groups, which may be associated to the characteristics of the patients and their hospitalizations. In conclusion, antimicrobial monitoring is essential for the treatment of infections in each hospital and the patient's condition appears to be linked to the pathogenic potential of the microorganism.
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Presença de cepas de Salmonella spp resistentes aos antimicrobianos criticamente importantes usados na produção de aves comerciais no Brasil / Presence of Salmonella spp strains resistant to the critically important antimicrobials used in the commercial poultry production in Brazil

Camargo, Jaci Clea de Carvalho 04 October 2013 (has links)
O Brasil é hoje um dos maiores produtores e exportadores de alimento no mundo, destacando-se no cenário de produção de proteína animal como o 1º país exportador em volume de carne de frango, dentre tantas conquistas recentes do agronegócio brasileiro. Essas conquistas foram alcançadas pelo país graças à sua inegável vocação agropecuária, resultado de uma série de fatores, como extensão territorial e áreas agricultáveis, clima, disponibilidade de água e ambiente regulatório favorável à adoção de tecnologias. Dentre as tecnologias existentes e disponíveis que tornam possível um país de vocação agrícola se tornar um dos maiores produtores mundiais de alimentos estão os aditivos zootécnicos melhoradores do desempenho e, dentre eles, os antimicrobianos. Na posição de um dos atores principais no cenário internacional de produção de alimentos, o Brasil vem-se deparando com questões relacionadas à preocupação global com relação à segurança do alimento e aos escândalos de contaminação de alimentos ocorridos em diversos países, inclusive na Europa. A preocupação com a segurança do alimento tem levado os diversos organismos internacionais, dentre eles, a Organização Mundial da Saúde e a Organização Mundial de Saúde Animal a estabelecerem critérios de análise de risco com relação aos principais patógenos envolvidos em surtos de toxinfecções alimentares e ao risco de transmissão de resistência bacteriana através dos alimentos. Sendo assim, o presente estudo foi desenvolvido com base na lista de antimicrobianos criticamente importantes, elaborada em conjunto pela OMS e OIE, na determinação do perfil de resistência destes frente a Salmonella isolada de aves e materiais avícolas em diferentes períodos. Foram utilizadas 100 amostras de Salmonella spp isoladas em granjas no Brasil, sendo 68 amostras colhidas durante o período atual (de 2008 a 2010) e 32 amostras colhidas durante a década de 90 (de 1989 a 1999), as quais passaram por testes de difusão em disco, determinação da concentração inibitória mínima, sorotipificação e determinação clonal por eletroforese em campo pulsado. Com relação às amostras colhidas no período atual (2008 a 2010), evidenciou-se uma redução no perfil de sensibilidade para diferentes antimicrobianos, marcadamente para a classe das cefalosporinas, com 19 (22%) das amostras resistentes e 38 (56%) das amostras apresentando resistência intermediária. Várias das amostras desse período apresentaram multirresistência. Para 32 das amostras isoladas na década de 90, não se evidenciou resistência a nenhum dos antimicrobianos selecionados, embora se tenham encontrado 13 amostras (41%) com perfil de resistência intermediário para o ceftiofur. Ainda, detectaram-se 10 diferentes sorovares de Salmonella com somente um perfil clonal para as amostras antigas e perfil variado para as amostras atuais. Os resultados comprovaram o aumento de resistência aos antimicrobianos criticamente importes em amostras recentes isoladas de aves e material avícola. Tais dados comprovam que cada vez mais a atenção deve ser focada no uso prudente dos antimicrobianos na produção animal. / Brazil is currently one of the largest producers and exporters of food in the world, appearing in the animal protein production ranking as the 1st exporter of poultry, in terms of volume, among many recent achievements of the brazilian agribusiness. These achievements have been made possible due to the country natural agriculture vocation, which is the result of a number of factors, such as land extension and available land for agriculture, climate, water availability and regulatory environment open to technology adoption. Among the existing technologies available that enable a country to become one of the largest producers of food are the feed additives and performance enhancers, including the antibiotics. In the position of one of the key actors in the international food production environment, Brazil has been facing issues related to the global concerns on food safety and the food contamination scandals occurred in several countries, including in Europe. These concerns has led several international organizations, including the World Health Organization and the International Organization of Animal Health to establish criteria for risk analysis in relation to the main pathogens involved in foodborne disease outbreaks and the risk of transmission of resistant bacteria from food. Therefore, this study was developed based on the list of the critically important antimicrobials, developed jointly by WHO and the OIE, in determining the resistance profile of them against Salmonella isolated from poultry and poultry materials in different periods. It have been used 100 samples of Salmonella isolated from poultry farms in Brazil, 68 samples taken during the current period (2008 to 2010) and 32 samples taken during the 90s (1989-1999), which have been tested for antibiotic disk diffusion, minimum inhibitory concentration, serotyping and clone determination by pulsed field gel electrophoresis. In the samples collected in the current period (2008-2010), there was a reduction in susceptibility to different antimicrobials, notably for the class of cephalosporins with 19 (22%) of isolates resistant and 38 (56%) of samples presenting intermediate resistance. Several samples from this period showed multidrug resistance. For 32 of the isolates in the 90s, there was no evidence of resistance to any antimicrobial selected, although it was found 13 samples (41%) with intermediate resistance profile for ceftiofur. It have been identified 10 different Salmonella serovars, among them only one clone profile for the old samples and different clone profiles for the current samples. Results showed increased antimicrobial resistance to the critically important antimicrobials for the more recent isolates from poultry and poultry material. These data demonstrate that more attention should be focused on the prudent use of antimicrobials in animal production.
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Estudo longitudinal sobre similaridade, transmissão, e estabilidade de colonização de Estreptococcus mutans em famílias brasileiras / Longitudinal study of transmission, diversity and stability of mutans streptococci genotypes in Brazilian families

Rubira, Cássia Maria Fischer 13 September 2007 (has links)
O objetivo deste estudo foi investigar longitudinalmente a transmissão de Streptococcus mutans em um grupo de famílias brasileiras de baixa renda. Um critério de inclusão importante foi o de todos os adultos conviverem na mesma casa com a criança. Participaram da pesquisa 14 mães, pais e crianças e 8 avós. Amostras de saliva das crianças foram coletadas em quatro visitas durante 22 meses, para pesquisa de S.mutans. Foram positivas apenas 8 crianças, que tiveram os seus isolados e os isolados de suas famílias identificados pelo método de hibridização DNA-DNA. Um total de 506 isolados de S.mutans foi genotipado pelo método de AP-PCR, usando o primer OPA-02. Foram detectados 20 genótipos diferentes nas 8 famílias, variando de 1 a 5 nos adultos e 1-2 nas crianças. Todas as mães e alguns pais e avós compartilharam genótipos com as crianças. Em todas as famílias foram encontrados genótipos homólogos nos adultos. Alguns genótipos foram estáveis, e outros, se perderam, mas o compartilhamento pode favorecer a contínua reinfecção. Três crianças desenvolveram cárie no período. O encontro de genótipos de cada membro da família na criança e o compartilhar de genótipos nos adultos, sugerem uma reavaliação de modelos preventivos antimicrobianos focalizados apenas na figura materna. / The objective of this study was to investigate in a longitudinal study the transmission of Streptococcus mutans in Brazilian families of a low socioeconomic status. An important entry criterion for the study was to include all members of a household in the study. The study cohort was comprised of 14 mothers, fathers and children and 8 grandmothers. Saliva samples were collected for S. mutans analysis in 4 visits during 22 months. Only eight children were positive for S. mutans by employing DNA-DNA hybridization that was also applied to household members. A total of 506 isolates of S. mutans were genotyped by AP-PCR with the primer OPA-02. Twenty genotypes were detected in 8 families ranging from 1 to 5 in the adults and 1-2 in the children. All mothers and some fathers and grandmothers shared similar genotypes with the children. In all families homologous genotypes were encountered among adults. Some genotypes were stable, and others were lost although sharing a similar environment may favor additional transmission episodes. Three children developed decay during the study period. The fact that children shared genotypes from all household members suggest that reevaluation of preventive methods aimed at suppressing S. mutans infections should include additional family members and not only the mothers.
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Avaliação do perfil de resistência a antimicrobianos e metais pesados em micro-organismos isolados do Rio dos Sinos/RS / Evaluation of antimicrobial and heavy metal resistance profile of microrganism isolated from Rio dos Sinos/RS

Hahn, Ana Bárbara Barth January 2013 (has links)
A bacia do Rio dos Sinos banha total ou parcialmente 32 municípios e integra uma área territorial de 3.600 km2. Ao longo do seu curso, recebe vários tipos de dejetos oriundos de esgoto pluvial, doméstico e industrial. Sendo assim,o Rio recebe uma população microbiana bastante diversificada, possibilitando a presença de micro-organismos com fenótipo de resistência a diferentes antimicrobianos e a metais pesados. O objetivo principal desse estudo foi avaliar o perfil de resistência a antimicrobianos e metais pesados de bactérias isoladas no Rio dos Sinos. Foram testados 410 micro-organismos isolados das águas do Rio nos municípios de Três Coroas, Novo Hamburgo e Esteio, nas quatro estações do ano. O ensaio de susceptibilidade foi realizado com 13 antimicrobianos. Todos os isolados foram submetidos aos ensaios de concentração inibitória mínima (CIM) de metais pesados, os metais utilizados foram cromo, cobre e níquel. Foram também realizados testes de colimetria e contagem total de heterotróficos. Os resultados apontaram para um perfil de 77,32% dos isolados resistentes a pelo menos um antimicrobiano. O antimicrobiano com maior índice de resistência foi a vancomicina com 64,15% dos isolados e o mais eficiente foi o imipenem, com apenas cinco isolados resistentes. Quanto aos ensaios com metais pesados 44,39% dos isolados foram resistentes a um MIC acima de 802,27 mg/L de níquel, 40,97% foram resistentes a MIC acima de 509,24 mg/L para cobre e 12,92% dos microorganismos foram resistentes MIC acima de 707,04 mg/L de cromo. Conforme a maioria dos resultados, as águas do Rio dos Sinos seriam classificadas como classe 3 pelas normas do CONAMA. / The Rio dos Sinos basin, covers wholly or partly 32 municipalities and a land area of 3,600 km2. Along its course, receives various types of waste arising from pluvial, domestic and industrial sewage. Hence, Rio dos Sinos receives a quite diverse microbial population, allowing for the presence of micro-organisms with resistance phenotype to different antibiotics and heavy metals. The main objective of this study was to evaluate the antimicrobial and heavy metals resistance profile of the bacteria isolated in Rio dos Sinos. 410 isolated microorganisms were tested from the municipalities of Rio Três Coroas, Esteio and Novo Hamburgo, in four seasons. The assay was performed with 13 antimicrobials. All isolates were subjected to the tests of minimum inhibitory concentration (MIC) of heavy metals, using chromium, copper and nickel. Were also held colimetries and heterotrophic bacterial count. Results showed a profile of 77.32% of the isolates were resistant to at least one antimicrobial. The antimicrobial with the highest rate of resistance was vancomycin (64.15%) and the most efficient was imipenem, with only five resistant isolates. The bacteria isolated in this study shows that 44.39% were resistant to MIC above 802.27 mg/L of nickel, 40.97% were resistant to MIC above 509.24 mg/L of copper and 12.92% microorganisms were resistant to MIC above 707.04 mg/Ll of chromium. According to most of the results, the waters of the Rio dos Sinos would be classified as Class 3 standards by CONAMA.
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Ribotipificação de sequências intergênicas de isolados de Salmonella enterica subspecie enterica provenientes de produtos avícolas do Brasil, Colombia e Estados Unidos.

Landinez, Martha Pulido January 2013 (has links)
Para avaliar a diversidade de Salmonella enterica, foram analisados os sorovares presentes em amostras de Salmonela isoladas de aves e seu ambiente do Sul do Brasil (n=155), Colômbia (n=141) e Mississippi (EUA, n=50). No total, foram examinados 346 isolados de Salmonela pela técnica de ribotipificação de sequências Intergênicas (ISR) usando PCR convencional (para bactérias vivas isoladas no Estado de Mississippi) ou nested PCR (para o DNA de Salmonelas do Brasil e da Colômbia, em cartões FTA). O sequenciamento da região intergênica do gene dkgB avalia polimorfismos de nucleotídeos simples que ocorrem em torno do gene ribossomal 5S. A concordância geral entre o esquema Kauffman-White-LeMinor (KWL) e a ISR foi de 85,2% em isolados do Brasil, e de 89,58% em isolados do Mississippi. É possível que a divergência seja devida à capacidade da ISR de detectar as misturas de sorovares numa cultura. Os sorovares de Salmonella enterica identificados nos isolados brasileiros foram: Heidelberg, Enteritidis, Hadar, Typhimurium, Gallinarum, Agona, Cerro, Livingstone, Infantis, Isangi, Mbandaka, Montevideo e Senftenberg. Três sorovares ISR únicos foram detectados (UN0041, UN0042, UN0043). Nos isolados colombianos, foram identificados os sorovares Enteritidis, Gallinarum, Isangi, Heidelberg, Paratyphi B var. Java, Tennessee, Saintpaul, Agona, Isangi, Mbandaka, Urbana, Albany, Javiana, Fresno, Miami, Muenster, Rissen, Braenderup, Yoruba e um sorovar ISR Único (UN0048). Já no tocante aos isolados de Mississippi, foram identificados os sorovares Enteritidis, Typhimurium, Kentucky, Bredeney, Mbandaka, Saintpaul, Montevideo, Cubana, Lille, Senftenberg, Johannesburg e um ISR Único (UN0094). Em geral, a ISR forneceu mais informações do que KWL sobre a ecologia de Salmonella enterica das aves comerciais. Em 73 isolados da Colômbia e 50 isolados de Mississippi, foram estabelecidas as resistências para 15 e 17 agentes antimicrobianos, respectivamente. Não foram identificados isolados pansusceptíveis. Todas as amostras analisadas foram classificadas como multirresistentes. Os resultados deste estudo mostram uma grande diversidade entre os isolados analisados, não só com respeito aos sorovares identificados em cada país, mas também sobre a sua resistência aos antimicrobianos. Os resultados desta pesquisa irão beneficiar a indústria avícola do sul do Brasil, da Colômbia e de Mississippi, porque a caracterização de cepas isoladas de aves comerciais poderá ser usada no futuro para o desenvolvimento e adaptação de programas de controle. / To assess diversity of Salmonella enterica serotypes present in poultry and their environment from Southern Brazil (n=155), Colombia (n=141) and Mississippi (EUA, n=50); 346 isolates were examined with conventional PCR (live bacteria from Mississippi) or nested PCR (Brazilian and Colombian Salmonella DNA in FTA cards) and sequencing of the dkgB-linked intergenic sequence ribotyping (ISR) region that assesses single nucleotide polymorphisms occurring around a 5S ribosomal gene. Overall agreement between Kauffman-White-LeMinor (KWL) scheme and ISR was 85.2% in Brazilian Salmonella isolates, and 89.58% in Mississippi´s isolates. It is possible that the disagreement was due to the ability of ISR to detect mixtures of serotypes in culture. Salmonella enterica serotypes identified among Brazilian isolates were Heidelberg, Enteritidis, Hadar, Typhimurium, Gallinarum, Agona, Cerro, Livingstone, Infantis, Isangi, Mbandaka, Montevideo, and Senftenberg. Three unique ISRs were detected (UN0041, UN0042, UN0043). Regarding the Colombian isolates, serotypes Enteritidis, Gallinarum, Isangi, Heidelberg, Paratyphi B var. Java, Tennessee, Saintpaul, Agona, Isangi, Mbandaka, Urbana, Albany, Javiana, Fresno, Miami, Muenster, Rissen Braenderup, Yoruba, and One Unique ISR (UN0048) were identified and among Mississippian isolates, serotypes Enteritidis, Typhimurium, Kentucky, Bredeney, Mbandaka, Saintpaul, Montevideo, Cubana, Lille, Senftenberg, Johannesburg, and one Unique ISR (UN0094). Overall, ISR provided more information than KWL about the ecology of on-farm Salmonella enterica. In 73 isolates from Colombia and 50 isolates from Mississippi, there were established the antimicrobial resistance against 15 and 17 antimicrobial agents, respectively. No pansusceptible isolate was identified. All analyzed isolates were classified as Multidrug resistant. The results of this study show a great diversity among analyzed isolates, not only in respect to the serotypes, but also about their antimicrobial resistance. The results of this research will benefit the poultry industries of Southern Brazil, Colombia and Mississippi, because the characterization of strains isolated from poultry can be used in the future to the development and adaptation of Salmonella control programs.
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Influência do óxido de zinco como aditivo antimicrobiano nas propriedades de compostos termoplásticos a base de SEBS/PP

Simões, Douglas Naue January 2016 (has links)
Os elastômeros termoplásticos (TPE) são amplamente utilizados na sociedade atual. Alguns dos usos comuns são em utensílios domésticos e na medicina. Estas aplicações trazem à tona uma propriedade importante para estes materiais, a propriedade biocida. Esta característica pode prevenir a disseminação de doenças causadas por fungos e bactérias. Nesse sentido o objetivo deste trabalho é avaliar a influência do uso de óxidos de zinco como aditivo antimicrobiano no comportamento físico-mecânico e ação biocida em compostos TPE à base do copolímero estireno-etileno/butileno-estireno (SEBS) com polipropileno (PP), óleo e calcita visando materiais livres de ataque microbiano. Foram preparados compostos de SEBS/PP/óleo/calcita aditivados com óxido de zinco (ZnO) comercial de dois fornecedores diferentes (ZnO-Pe e ZnO-WR) nas proporções 0%, 1%, 3% e 5% em massa. Os compostos foram preparados em uma extrusora dupla rosca co-rotante com perfil de temperatura de 100°C a 190°C seguidos de moldagem por injeção. As amostras foram submetidas a dois métodos de envelhecimento térmico em estufa, com circulação de ar à 105 °C e submersos em solução de limpeza à 70 °C, ambos por 168 h. Todas as amostras, com e sem envelhecimento, foram caracterizadas por meio das suas propriedades reológicas, físicas, mecânicas, térmicas, químicas, atividade bacteriana e crescimento fúngico. Os resultados mostraram que o teor, tamanho e forma de ZnO interferem nas propriedades reológicas, físicas e biocidas dos compostos TPE. A presença de óxido de zinco também afetou as propriedades mecânicas dos compostos, com pequeno aumento da resistência à tração na ruptura e redução no módulo elástico. A adição de óxido de zinco conferiu aos compostos a propriedade bactericida, porém tornaram-se mais propícios ao desenvolvimento do fungo Aspergillus niger. Em ensaio de envelhecimento térmico em estufa por 7 dias não foi evidenciado degradação dos compostos envelhecidos, no entanto a propriedade biocida foi afetada. Em geral, os compostos com o aditivo ZnO-WR apresentaram melhores resultados que o ZnO-Pe tanto nas propriedades físico-mecânicas avaliadas quanto nas propriedades de biocida. / Thermoplastic elastomers (TPE) are widely used in society actualy. Some of the common uses are in household articles, home appliances and in medicine. These applications bring to the forefront an important property for materials, the biocidal property. This feature can prevent the spread of diseases caused by fungi and bacteria. In this sense, the objective of this work is evaluate the use of zinc oxides as an antimicrobial additive on the physical-mechanical behavior and biocidal action in TPE compounds based on copolymer styrene-etylene/butylenes-styrene (SEBS) with polypropylene (PP), oil and calcite aiming free compounds of microbial attack. In this work, SEBS/PP/oil/calcite compounds were prepared with additive commercial zinc oxide (ZnO) from different sources in proportions 0%, 1%, 3% and 5% wt. Compounds were prepared in a co-rotating twin screw extruder with a temperature range of 100°C to 190°C followed by injection molding The samples were also submitted to thermal aging in oven, with air circulation at 105 °C and in cleaning solution at 70 °C, both for 168 h. All samples, with and without aging, were characterized by their rheological, physical, mechanical, thermal, chemical, bacterial activity and fungal growth. Results showed that the content, size and shape of ZnO act in the rheological, physical and biocidal properties of TPE compounds. The presence of zinc oxide affected the mechanical properties of the compounds, with small increase in tensile strength at rupture and reduction in elastic modulus. The addition of zinc oxide conferred to compounds bactericidal property, but they became more propitious to the development of the fungus Aspergillus niger. There were not evidential of degradation on aged compounds, although biocidal properties were affected. In general, the ZnO-WR additive showed better results than ZnO-Pe in both the physicochemical properties evaluated and the biocidal properties.
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Determinação da atividade antibacteriana e inibição de biofilme pelo óleo de folhas secas de Eucalyptus staigeriana / Determination of antibacterial activity and biofilm inhibition of dry leaf oil of Eucalyptus staigeriana

Corrêa, Marcos Saldanha January 2017 (has links)
Os óleos essenciais são metabólitos secundários extraídos de plantas e apresentam diversas propriedades para fins medicinais. O objetivo deste trabalho foi caracterizar o óleo essencial de folhas secas de E. staigeriana, verificar sua atividade antimicrobiana e antibiofilme frente a bactérias gram-positivas e gram-negativas e avaliar a expressão dos genes de virulência e resistência em Listeria monocytogenes e Enterococcus faecalis resistente a vancomicina (VRE) na ausência e presença de concentração sub-inibitória do óleo essencial, por PCR quantitativo em tempo real (qPCR). A caracterização do óleo foi realizada por cromatografia gasosa acoplada a massa (GC-MS) verificou-se a presença de 21 compostos, sendo os constituintes majoritários o geranial (28,67 %), neral (19,68 %) e limoneno (17,29 %). A ação antimicrobiana foi avaliada e observou-se que o óleo apresentou atividade frente a bactérias gram-positivas, com diâmetros de halos de inibição de 0 a >45 mm. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada para bactérias gram-positivas, sensíveis e resistentes a agentes antimicrobianos como VRE, e variou de 0,19 a 6,25 %. Ação antibiofilme do óleo foi avaliada tanto na formação, quanto sob um biofilme pré-estabelecido. O óleo essencial apresentou capacidade de inibir a formação do biofilme de todas as cepas testadas, mas pouca ou nenhuma capacidade de remoção do biofilme pré-formado. Na análise de expressão gênica por qPCR para L. monocytogenes, verificou-se que três dos genes de estresse celular (sufS, sod e degU) apresentaram uma diferença significativa na presença do óleo. Para a cepa de E. faecalis VRE, nenhum gene selecionado apresentou alteração na expressão gênica. Como conclusão, este estudo demonstrou que o óleo essencial de folhas secas de E. staigeriana possui atividade antimicrobiana do frente a bactérias gram-positivas e sem atividade em gram-negativas. / Essential oils are secondary metabolites extracted from plants and they have been showing several medicinal properties. The aim of this study was to characterize the essential oil extracted from dry leaf of E. staigeriana, as well as to verify the antimicrobial and anti-biofilm activities against gram-positive and gram-negative bacteria, and to evaluate the expression of virulence and resistance genes in Listeria monocytogenes and Enterococcus faecalis vancomycin resistant (VRE) in the absence and presence of sub-inhibitory concentration of the essential oil by quantitative real time PCR (qPCR). The oil characterization was performed by CG-MS and it was verified the presence of 21 compounds, being the geranial (28.67 %), neral (19.68 %) and limonene (17.29 %) the major compounds. The antimicrobial activity was evaluated and it was observed that the essential oil has effect against gram-positive, with inhibition zone diameter ranges from 0 to 45 mm. The minimum inhibitory concentration (MIC) was determined, to sensible and resistant gram-positive bacteria to antimicrobial agents, such as VRE, and varied between 0.19 to 6.25 %. The anti-biofilm action of the oil was verified on formation, and under a pre-established biofilm. The essential oil showed capacity to inhibit the biofilm formation for all tested strains, but few or no ability to remove the pre-established biofilm. In the analysis of gene expression by qPCR for L. monocytogenes, three cell stress genes (sufS, sod and degU) with significant difference in the presence of the oil. For E. faecalis VRE strain no one of the selected genes showed alteration in the gene expression. In conclusion, this study demonstrates the potential of essential oil from dry leaf of E. staigeriana for future use in the control of gram-positive bacteria.

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