A VP3, ou Apoptina, é uma das proteínas codificadas pelo vírus da anemia infecciosa das galinhas (CAV). Esta proteína é capaz de induzir apoptose em células humanas tumorais; entretanto, o mesmo não ocorre em células normais. Assim, esta proteína apresenta-se como uma promissora candidata como agente antineoplásico. O girovírus aviário 2 (AGV2), descrito em 2011, é relacionado ao CAV e codifica proteínas homólogas às expressas por este vírus, incluindo a VP3. A comparação da sequência de aminoácidos da VP3 do AGV2 com a da Apoptina do CAV revela uma identidade de 32,2% e o compartilhamento de domínios importantes para a atividade pró-apoptótica tumor-especifica. Nesse trabalho objetivamos investigar o potencial de três variantes da VP3 do AGV2 em induzir seletivamente a morte de células humanas tumorais. Os genes das VP3 foram expressos através de um sistema de expressão adenoviral. Após a transdução dos adenovírus recombinantes expressando as VP3 do AGV2 nas células humanas tumorais A549 e normais MRC-5, a localização subcelular dessas proteínas foi analisada por imunofluorescência e suas implicações sobre a viabilidade celular foram determinadas pelo ensaio de MTT. Nossos resultados evidenciam que os adenovírus expressando as variantes da VP3 do AGV2 possuem a habilidade de inibir preferencialmente a proliferação de células tumorais. Demonstramos também que as VP3 do AGV2 acumulam-se no núcleo das células tumorais, enquanto que na maior parte das células normais essas proteínas ficam restritas ao citoplasma. No entanto, inesperadamente detectamos, em menor proporção, a expressão de VP3 do AGV2 também no núcleo das células normais. Ainda, analisando as sequências de aminoácidos das variantes da VP3 do AGV2, pudemos conjecturar que a presença de um sinal de exportação nuclear com menor eficiência do que o existente na Apoptina do CAV pode estar correlacionado com a localização nuclear dessas proteínas nas células normais e com a inibição da proliferação celular verificada nessas células. Este é o primeiro trabalho demonstrando o potencial da proteína VP3 codificada pelo AGV2 em induzir preferencialmente a morte de células humanas tumorais. / VP3, also known as Apoptin, is one of the proteins encoded by the chicken anemia virus (CAV). This protein is able to induce apoptosis in tumor cells; however, the same does not occur in normal cells. Thus, this protein appears as a promising candidate for anticancer therapy. The recently discovered avian gyrovirus 2 (AGV2) is related to CAV and encodes CAV-homologous proteins, including VP3. The comparison of the AGV2-VP3 amino acid sequence with CAV-Apoptin shows an identity of 32.2% and the presence of functional domains that seem to be important for its tumor-specific pro-apoptotic activity. In this work, we aim to investigate the potential of three AGV2-VP3 protein variants as inducers of apoptosis in human tumor cells. VP3 genes were expressed through an adenoviral expression system. After transduction of the recombinant adenoviruses expressing the AGV2-VP3 variants in human tumor A549 cells and normal MRC-5 cells, subcellular localization of these proteins was analyzed by immunofluorescence and their effects on cell viability was determined by MTT assay. Our results show that the adenoviruses expressing AGV2-VP3 have the ability to inhibit preferentially the proliferation of tumor cells. We also demonstrate that AGV2-VP3 variants accumulate in the nucleus of tumor cells, whereas in most normal MRC-5 cells these proteins are restricted to cytoplasm. However, we unexpectedly detected the expression of AGV2-VP3 proteins, in a lesser extent, in the nucleus of normal cells. Furthermore, analyzing the amino acid sequences of AGV2-VP3 variants we could speculate that the presence of a nuclear export signal (NES) with a lower efficiency than CAV-Apoptin NES may be correlated to the nuclear localization of these proteins in normal cells and to the cell proliferation inhibition observed in these cells. This is the first study validating the potential of AGV2-VP3 protein to preferably induce death of human tumor cells.

Submitted by ALINE GARCIA AUN null (aline.aun@hotmail.com) on 2017-03-29T17:52:34Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO FINAL- ALINE GARCIA AUN.pdf: 1399916 bytes, checksum: a3e1434d9c722fb1316620c055de5672 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-03-30T18:01:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 aun_ag_me_bot.pdf: 1399916 bytes, checksum: a3e1434d9c722fb1316620c055de5672 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-30T18:01:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 aun_ag_me_bot.pdf: 1399916 bytes, checksum: a3e1434d9c722fb1316620c055de5672 (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente estudo monitorou os danos genéticos, citotóxicos e de estresse oxidativo em médicos expostos ocupacionalmente aos anestésicos inalatórios durante o primeiro ano de residência médica. Esse follow-up foi realizado no Hospital das Clínicas de Botucatu em 26 jovens médicos atuantes em salas cirúrgicas com sistema parcial de exaustão de ar e expostos ocupacionalmente aos modernos anestésicos isoflurano, sevoflurano e desflurano, juntamente ao óxido nitroso. Amostras de sangue foram coletadas antes do início do programa de residência médica em anestesiologia e cirurgia (antes da exposição) e após seis meses e um ano de exposição. Os participantes foram avaliados quanto à genotoxicidade (quebras de DNA, pelo teste do cometa), citotoxicidade (apoptose precoce e perda de potencial de membrana mitocondrial, por citometria de fluxo) e marcadores de estresse oxidativo (peroxidação lipídica por dosagens de malonaldeído e 4-hidroxinonenal; oxidação proteica por dosagem de proteínas carboniladas e teste de capacidade antioxidante). Não foram encontradas alterações significativas nos biomarcadores de genotoxicidade (p = 0,15), citotoxicidade (p > 0,05) e malonaldeído (p = 0,69) e 4-hidroxinonenal (p = 0,84) plasmáticos ao longo dos três momentos avaliados. Por outro lado, houve aumento significativo de marcador de oxidação lipídica (malonaldeído detectado em hemácias lavadas; p = 0,007) e proteica (proteínas carboniladas) aos seis meses de exposição, sendo que as proteínas carboniladas tiveram aumento progressivo até os 12 meses de exposição (p < 0,001). Também houve aumento da capacidade antioxidante após um ano de exposição ocupacional (p < 0,001). Assim, o biomonitoramento durante o primeiro ano de residência médica mostrou que a exposição às concentrações residuais dos anestésicos não induz danos celulares precoces em médicos residentes, entretanto já demonstra indução de estresse oxidativo. Portanto, é de grande relevância a continuação do seguimento deste estudo nesses jovens profissionais, em início de carreira, a fim de se compreender os possíveis mecanismos e efeitos tóxicos que a exposição aos anestésicos inalatórios pode ocasionar, por se tratar de importante questão ocupacional. / The present study monitored genetic and cytotoxic damages, beyond oxidative stress in physicians occupationally exposed to inhalation anesthetics during the first year of medical residency. This follow-up was performed at the “Hospital das Clínicas de Botucatu” in 26 young physicians who worked in partially scavenging operating rooms and were occupationally exposed to the modern anesthetics isoflurane, sevoflurane and desflurane, together with nitrous oxide. Blood samples were collected before the start of the residency program in anesthesiology and surgery (before exposure) and after ½ year and one year of exposure. The subjects were monitored for genotoxicity (DNA breaks, by comet assay), cytotoxicity (early apoptosis and loss of mitochondrial membrane potential, by flow cytometry) and markers of oxidative stress (malondialdehyde and 4-hydroxynonenal; protein carbonyls; and antioxidant capacity). There were no significant differences concerning genotoxicity (p = 0.15), cytotoxicity (p > 0.05), plasma malondialdehyde (p = 0.69) and 4-hydroxynonenal (p = 0.84) among the three time points. On the other hand, there was a significant increase of lipid (malondialdehyde detected in washed red blood cells; p = 0.007) and protein (protein carbonyls) oxidation markers at six months of exposure, and the protein carbonyls showed progressive increase until 12 months of exposure (p < 0.001). There was also an increase in antioxidant capacity after one year of occupational exposure (p < 0.001). Thus, biomonitoring during the first year of medical residency showed that exposure to waste concentration of anesthetics does not induce early cell damage in these physicians; however, it already leads to oxidative stress. Therefore, it is of great importance to continue this follow-up in these young professionals, at the beginning of their careers, to have better understanding of the possible mechanisms and toxic effects of exposure to inhalation anesthetics, since this is an important occupational issue. / CNPq: 446252/2014-0 / FAPESP: 2013/21130-0

Orientador: Hélio Amante Miot / Coorientador: Mariangela Esther Alencar Marques / Banca: Ricardo Romitti / Banca: Neusa Valente / Resumo: Alopecia de padrão feminino, ou alopecia androgenética feminina, é a principal causa de queda de cabelos em mulheres adultas, e inflige importante impacto na qualidade de vida das pacientes. Decorre da progressiva miniaturização de folículos pilosos e posterior diminuição da densidade dos fios, originando um quadro de alopecia difusa não cicatricial, com padrão clínico, dermatoscópico e histológico característicos. Apesar da elevada frequência e da relevância quanto ao impacto psicológico, sua fisiopatogenia não é ainda totalmente esclarecida, sofrendo influência de elementos genéticos, hormonais e ambientais. Além disso, a resposta ao tratamento é inconstante. Os receptores de hidrocarboneto arílico (AhR) podem ser ativados por diversos ligantes ambientais como poluentes (p. ex. dioxinas), fumaça do tabaco, radiação ultravioleta e pela ação microbiana (p.ex. Malassezia sp.), podendo exercer atividade proinflamatória, proapopótica, hormonal e carcinogênica, de acordo com o fator ativador e tecido alvo. Sua ação no folículo piloso e na alopecia de padrão feminino não foi ainda estudada. Neste trabalho, os autores avaliam a apoptose, infiltrado inflamatório e expressão de receptores de hidrocarboneto arílico nos folículos pilosos de pacientes com alopecia de padrão feminino. Foi conduzido um estudo transversal envolvendo 17 mulheres com alopecia de padrão feminino e cinco controles. Avaliaram-se amostras de pele do couro cabeludo que foram processados para HE, técnica do TUNEL e imuno-histoquímica para receptor de hidrocarboneto arílico. As variáveis foram comparadas de acordo com o grupo de folículos (terminal versus miniaturizado) e os grupos de pacientes (alopecia versus controles). Houve maior índice de apoptose (TUNEL) entre os folículos miniaturizados e entre os casos, além de significativa interação entre a categoria folicular e casos (p<0,01). Folículos miniaturizados apresentaram maior ... / Abstract: Female pattern alopecia, or female androgenetic alopecia, is the main cause of hair loss in adult women and causes major impact on patient's quality of life. It evolves from the progressive miniaturization of follicles that lead to a subsequent decrease of the hair density, leading to a non-scarring diffuse alopecia, with characteristic clinical, dermoscopic and histological pattern. Despite the high frequency and relevance about the psychological impact, its pathogenesis is not yet fully understood, but is influenced by genetic, hormonal and environmental factors. In addition, response to treatment is incostant. In this article, authors discuss the main clinical, epidemiological and physiopathological aspects of female pattern hair loss / Mestre

Orientador: Renée Laufer Amorim / Coorientador: José Luiz Laus / Banca: Juliany Quitzan Gomes / Banca: Alvio Isao Shiguematsu / Resumo: Não disponível / Abstract: Purpose: The aims of this study were to better understand the mechanism of cell death by apoptosis in a glaucoma model (ischemia / reperfusion) and evaluate the role of apoptosis in this model and if treatment with Sildenafil helps prevent apoptosis. Methods: 36 rats, from 4 to 6 months, males, Lewis and weighing ± 350g were divided in 5 groups: control group (6 animals) and for groups with ischemia / reperfusion (7 and 21 days), two groups consisting of ten animals treated with sildenafil and two groups of Five animals treated with placebo. Paracentesis of the anterior chamber with needle 30G coupled to saline (0.9%) was made and maintained for 60 minutes. Intraocular pressure was measured by rebound tonometer (Tonovet®). There was histological, morphometric by hematoxylin and eosin and, immunohistochemical staining and qRT-PCR analysis by Caspase-7, Caspase-6, Caspase-9, Tnf-r2, Fas-l, Bcl-2 and Bax. For statistic analysis we used ANOVA and t-test for morphometric analysis and, for immunohistochemistry and qRT-PCR, Fisher exact test was employed with a statistical significance level of p <0.05 Results: Histology and morphometric analysis, proved more changes in the untreated group compared to the treatment and control group. Analysis of immunohistochemistry and qRT-PCR observed the more significant expression in untreated eyes. Conclusion: Sildenafil apperead to be protective to ganglion cell apoptosis. Cell survival was evident in histology and morphometry. For immunohistochemistry and RT-PCR was observed protective effect in the apoptosis pathways with similar or below expression compared to the control / Mestre

O saco vitelino esta presente em todas as espécies de vertebrados e desempenha importantes funções no desenvolvimento do embrião até a fase de placentação. O objetivo deste estudo foi avaliar o funcionamento do saco vitelino de embriões bovinos atentando para os aspectos morfológicos, bioquímicos e moleculares e suas relações ultraestruturais, bioquímicas e moleculares. Foram avaliados 69 amostras de SVEB distribuídos da seguinte forma: Grupo I (23-27), Grupo II (28-32), Grupo III (33-37), Grupo IV (38-42), Grupo V (43-47) e Grupo VI (48-52) dais de gestação. Os resultados inferem que o saco vitelino de embriões bovinos apresenta atividade proliferativa durante os primeiros dois grupos analisados, a presença de apoptose e necrose foram encontrados nos grupos restantes. A presença de importantes metabolitos como a alanina, mio-inositol, taurina, colina, glicerofosfocolina, cadaverina, glutamato, glutamina, lactato, hidrouracila, creatina, creatinina, aspartato e lisina; e proteínas como filamentos de actina ou tubulina do citoesqueleto, histona, sub unidades da hemoglobina, HSP-&beta;1, proteína ribossomal, marcadores da matrix extracelular vimentina, alfafetoproteina e transferrina. Estas proteínas estão relacionadas diretamente com a formação de metabólitos secundários e foram encontradas durante todos os períodos estudados, com exceção da alanina que foi identificada somente no grupo I, ativando diversas proteínas e metabolitos, que estão envolvidos em vias de sinalização que promovem a ativação dos mecanismos de morte celular programada e na diferenciação celular, as quais iniciam as etapas da involução do saco vitelino e de outras estruturas no embrião, e assim dar inicio à placentação. / The yolk sac is present in all vertebrate species, and plays important roles in the developing embryo until the arrival of the placenta. The objective of this study was to evaluate the functioning of the yolk sac of bovine embryos and how the morphological, biochemical and molecular related, one ultrastructural analysis, biochemical and molecular analysis was performed. For these purpose we evaluated 69 samples of YSBE distributed as follows: Group I (23- 27), Group II (28-32), Group III (33-37), Group IV (38-42), Group V (43-47) and Group VI (48-52) days of pregnancy. The results infer that the yolk sac of bovine embryos has proliferative activity during the first two groups analyzed, the presence of apoptosis and necrosis were found in the remaining groups. The presence of major metabolites such as alanine, myo-inositol, taurine, choline, glicerofosfocolina, cadaverine, glutamate, glutamine, lactate, hydrouracile, creatine, creatinine, aspartate and lysine, proteins such as tubulin and actin cytoskeleton, histone, subunits of hemoglobin, HSP-&beta;1, ribosomal protein, vimentin, markers of extracellular matrix, alpha-1-fetoprotein and transferrin. These proteins are related to the metabolites and were found throughout the study period, with the exception of alanine which was found in Group I, activating many proteins and metabolites that are involved in signaling pathways that trigger cell death mechanisms that originated the involution of the yolk sac, and thus give way to the beginning of placentation.

A fagocitose de células apoptóticas, também denominada eferocitose, é um processo dinâmico e de fundamental importância para homeostase dos tecidos após uma injúria. Estudos demonstraram previamente que a fagocitose de células apoptóticas promove a síntese de mediadores anti-inflamatórios como PGE2, TGF-? e IL-10, podendo resultar num microambiente supressor e aumento da susceptibilidade do hospedeiro contra agentes infecciosos. Entretanto, a fagocitose de células apoptóticas infectadas por células dendríticas promove a geração não apenas de citocinas anti-inflamatórias como TGF-?, mas também de IL-6 e IL-23, levando a um efeito imunoestimulador, a diferenciação de células Th17. A atuação da PGE2 na imunidade adaptativa vem sendo investigada quanto à diferenciação e ativação de linfócitos Th1, Treg e Th17. Nossos resultados demonstram que a fagocitose de células apoptóticas infectadas com E. coli promove a ativação e migração de células dendríticas, assim como a produção de citocinas pró- e anti-inflamatórias e altos níveis de PGE2. No entanto, diferente da hipótese inicial, a presença de altas concentrações de PGE2 inibe drasticamente a diferenciação de células Th17 no contexto de fagocitose de células apoptóticas infectadas com E. coli por células dendríticas, in vitro. O tratamento de linfócitos T CD4+naive com antagonistas e agonistas de EP2/EP4 demonstram que o efeito supressor de PGE2 é mediado primordialmente pelo receptor EP4. Por fim, nossos resultados in vivo comprovam os resultados obtidos in vitro, demonstrando o papel supressor de PGE2 na diferenciação de células Th17 no contexto de fagocitose de células apoptóticas infectadas em modelo de infecção pulmonar. / The phagocytosis of apoptotic cells, also called efferocytosis, is a dynamic process critical for tissue homeostasis after injury. We and other groups previously have shown that phagocytosis of apoptotic cells promotes the synthesis of anti-inflammatory mediators such as PGE2, TGF-? and IL-10, that may result in the suppression of host defense against microorganisms. However, an elegant study using infected apoptotic cells showed that phagocytosis of these cells promote not only the generation of anti-inflammatory cytokines such as TGF-? but also IL-6 and IL-23, resulting in an immunostimulatory effect, the differentiation of Th17 cells. The role of PGE2 in adaptive immunity has been investigated regarding differentiation and activation of Th1, Th17 and Treg. Our results demonstrate that engulfment of E.coli infected apoptotic cells promotes the activation and migration of dendritic cells as well as production of pro and anti-inflammatory cytokines together with high levels of PGE2. However, differing from our hypothesis, high levels of PGE2 inhibits drastically the differentiation of Th17 cells on the context of engulfment of E.coli infected apoptotic cells by dendritic cells in vitro. The treatment of T CD4+naive cells with antagonist or agonists of EP2/EP4 receptors demonstrates the suppressor effect is mainly mediated by EP4 receptor. Finally, the instillation of E.coli infected apoptotic cells in E.coli infected animals resulted on modest Th17 increase but treatment with cox inhibitor increased Th17 cell differentiation. Therefore, our in vivo results prove the in vitro results.

Resveratrol (RESV), um polifenol presente em diversos compostos naturais, incluindo o vinho, tem sido associado a um efeito quimiopreventivo em diversos tipos de câncer, inclusive no câncer colorretal (CCR). Esse efeito benéfico observado em diversos estudos vem sendo atribuído, sobretudo, à sua ação anti-oxidante; muito embora o RESV também esteja envolvido em diversos outros mecanismos celulares, incluindo a apoptose. Não obstante, uma análise mais acurada sobre a potencial ação antineoplásica do RESV na promoção do CCR ainda se faz necessária. O CCR é um dos tipos de câncer mais frequentes no mundo ocidental, cuja incidência vem aumentando nos países em desenvolvimento e apesar dos esforços dos cientistas e do surgimento de novas drogas, esse tipo de câncer ainda possui altas taxas de morbidade e mortalidade. O presente estudo avaliou a potencial ação anti-neoplásica do RESV, puro e associado ao etanol (EtOH), na carcinogênese do câncer de cólon induzido por Nmetil-N\'-nitro-N-nitrosoguanidina (MNNG) em ratos através da análise de estresse oxidativo com malondialdeído (MDA) e imunoexpressão de Caspase-3 (Casp-3), gamma-H2AX (H2AX), iPCNA (PCNA) e Caveolina-1 (CAV-1). O experimento foi realizado com 48 ratos wistar, os quais foram submetidos à indução da carcinogênese (0.5 ml de solução de MNNG (5 mg/ml) e tratados com placebo, RESV (1mg/kg/dia) e RESV (1mg/kg/dia) associado com EtOH (0,377g/kg/dia). Os ratos foram subdivididos em 6 grupos: controle (G1), MNNG (G2), RESV (G3), RESV+MNNG (G4), RESV + EtOH (G5) e RESV + EtOH + MNNG (G6). Como resultado, o RESV diminuiu a produção de MDA em todos os grupos tratados, evidenciando seu efeito antioxidante sistêmico. RESV aumentou o número de corpúsculos apoptóticos e da apoptose nas criptas displásicas, levando ao aparecimento de espaços criptais acelulares (ECA) e, consequentemente, a uma redução estatisticamente significativa no número de criptas displásicas nos grupos tratados. Através da diminuição da expressão de H2AX, PCNA e CAV1, observamos que o RESV apresentou um efeito protetor no desenvolvimento de lesões pré-neoplásicas na carcinogênese induzida por MNNG. Atribuímos esse efeito à sua ação pró-apoptótica que demonstrou ser um mecanismo efetivo na carcinogênese colônica em ratos, diminuindo o número de criptas displásicas e levando a formação de ECA\'s, um fenômeno ainda não descrito na literatura. Diferente da hipótese inicial, o EtOH mitigou os efeitos pró-apoptóticos do RESV, sem, contudo, diminuir sua ação antioxidante. Assim, concluímos que a ação anti-neoplásica e quimiopreventiva do RESV é efetiva na fase de promoção da carcinogênese colônica induzida por MNNG e que a associação entre RESV + EtOh, a mesma encontrada nos vinhos, não demonstrou ser tão efetiva quanto ao RESV isolado / Resveratrol (RESV), a polyphenol present in several natural compounds, including wine, has been associated with a chemopreventive effect in different types of cancer, including colorectal cancer (CRC). This beneficial effect observed in several studies has been attributed especially due to its anti-oxidant action; more than that, RESV also is involved in several other cellular mechanisms, including apoptosis. Despite of it, a more accurate analysis of a potential anti-neoplastic action of RESV in the promotion phase of CRC is still ongoing. CRC is one of the most frequent types of cancer in the Western world, with incidence increasing in developing countries and despite the efforts of scientists and the development of new drugs, this type of cancer still has high rates of morbidity and mortality. The present study evaluated a potential anti-neoplastic action of RESV, pure and associated with ethanol, on the carcinogenesis of colorectal cancer induced by Nmethyl-N\'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) in rats through the analysis of oxidative stress with malondialdehyde (MDA) and immunoexpression of Caspase-3 (Casp-3), gamma-H2AX (H2AX), iPCNA (PCNA) and Caveolina-1 (CAV-1). Our experiments were performed with 48 wistar rats, which were subjected to carcinogenesis (0.5 ml of MNNG solution (5 mg / ml) and treated with placebo, RESV (1 mg / kg / day) and RESV (1 mg / kg / (G1), RESV + EtOH (G5), RESV + MNNG (G4), RESV + EtOH (G5) and RESV + EtOH + MNNG (G6). As a result, RESV decreases the production of MDA in all treated groups, evidencing its systemic antioxidant effect. RESV increased the number of apoptotic corpuscles and apoptosis in dysplastic crypts, leading to the appearance of acellular cryptic spaces (ACE) and, consequently, to a statistically significant reduction in the number of dysplastic crypts in the treated groups. By decreasing expression of H2AX, PCNA and CAV1, we observed that RESV had a protective effect on the development of pre-neoplastic lesions in MNNG-induced carcinogenesis. We attributed this effect to its pro-apoptotic action, which has been shown to be an effective mechanism in colonic carcinogenesis in rats, decreasing the number of dysplastic crypts and leading to the formation of ACE\'s, a phenomenon not yet described in the literature. Unlike the initial hypothesis, EtOH mitigated the pro-apoptotic effects of RESV, but did not diminish its antioxidant action. Thus, we conclude that the anti-neoplastic and chemopreventive action of RESV is effective in the promotion phase of MNNG-induced colonic carcinogenesis and that the association between RESV + EtOh, the same as that found in wines, has not been shown to be as effective as isolated RESV.

O líquen plano oral (LPO) é uma doença inflamatória crônica de causa desconhecida, e seu potencial de malignização é um tema bastante controverso. Diversos estudos têm sugerido que pacientes portadores de líquen plano apresentam um maior risco de desenvolver câncer. Contudo, muitos autores acreditam que não haja dados suficientes que provem uma associação entre líquen plano e câncer. Para esses autores, a maioria dos casos que sofreram transformação maligna é decorrente de falhas no diagnóstico inicial da lesão. Portanto, objetivou-se avaliar a expressão imuno-histoquímica das proteínas relacionadas à apoptose e proliferação celular, respectivamente caspase-3 ativa, Bcl-2 e Ki-67 no LPO e em displasias epiteliais na tentativa de explicar a polêmica em relação ao potencial de transformação maligna do LPO e enfatizar a importância de um acompanhamento de longo prazo dos pacientes com esta doença. Com esse propósito, foram selecionadas 14 amostras de LPO, 14 amostras de leucoplasia com displasia epitelial, além de 09 amostras de mucosa bucal normal como controle. A avaliação da expressão de caspase-3 ativa, Bcl-2 e Ki-67 foi conduzida de acordo com a técnica da imunoperoxidase. A contagem das células imunomarcadas nas amostras de LPO, de leucoplasia com displasia epitelial e de mucosa bucal normal resultou em número destas células por mm2 nas diferentes regiões (camada basal, camada suprabasal e infiltrado inflamatório) para cada imunomarcador. A expressão de Bcl-2 em células epiteliais, da camada basal, ocorreu mais frequentemente no grupo da leucoplasia com displasia epitelial, com diferença estatística entre o grupo do LPO e o grupo controle. Verificou-se também, uma alta expressão da proteína Bcl-2 em células inflamatórias de lesões de LPO e de leucoplasia com displasia epitelial. A expressão do marcador Ki-67 foi superior em todos os níveis teciduais analisados nas lesões de LPO e de leucoplasia com displasia epitelial quando comparados com o grupo controle. Concluiu-se que a expressão mais elevada das proteínas Bcl-2 e Ki-67 nos casos de LPO e de leucoplasia com displasia epitelial, podem revelar a possibilidade da presença de alterações moleculares morfologicamente imperceptíveis. / The oral lichen planus (OLP) is a chronic inflammatory disease of unknown cause, and its malignant potential is a very controversial issue. Several studies have suggested that patients with lichen planus have a higher risk of developing cancer. However, many authors believe that there is insufficient evidence to prove an association between lichen planus and cancer. For these authors, most of the cases that had undergone malignant transformation is due to flaws in the lesion initial diagnosis. Therefore, the aim was to evaluate the immunohistochemical expression of proteins related to apoptosis and cell proliferation, respectively active caspase-3, Bcl-2 and Ki-67 in epithelial dysplasia and LPO in an attempt to explain the controversy regarding the potential malignant transformation of OLP and emphasize the importance of a long-term monitoring of patients with this disease. For this purpose, we selected 14 samples of OLP, 14 samples of leukoplakia with epithelial dysplasia, and 09 samples of normal oral mucosa as controls. The evaluation of the expression of active caspase-3, Bcl-2 and Ki-67 was conducted in accordance with the immunoperoxidase technique. The immunostained cells counting in samples of OLP, epithelial dysplasia in leukoplakia and normal oral mucosa resulted in a number of these cells per mm2 in the different regions (basal layer, suprabasal layer and inflammatory infiltrate) for each immunostained. The expression of Bcl-2 in epithelial cells, the basal layer, occurred more frequently in the group of leukoplakia with epithelial dysplasia, with statistical difference between the group of OLP and the control group. There was a high expression of Bcl-2 protein in inflammatory cells in OLP lesions and leukoplakia with epithelial dysplasia. The expression of the marker Ki-67 was superior in all analyzed tissue levels in OLP lesions and leukoplakia with epithelial dysplasia when compared to the control group. It was concluded that the highest expression of Bcl-2 protein and Ki-67 in cases of OLP and leukoplakia with epithelial dysplasia, can reveal the possible presence of molecular changes morphologically imperceptible.

Recentemente o câncer de um modo geral, sobretudo o câncer de pulmão tem sido causa de grande preocupação no mundo. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antitumoral do óleo (Copaifera reticulata Ducke) in natura e sua fração resina em linhagens celulares não cancerosas (E10) e cancerosas (E9) de pulmão de camundongo. O óleo foi submetido a hidrodestilação para a obtenção da fração resina. As células após o cultivo a 37&deg;C foram tratadas com 8 diferentes concentrações do óleo e da resina, foram mantidas na mesma temperatura por mais 48h na estufa. Depois adicionou-se o reagente Thyazolyl blue tetrazolium bromide para o teste de citotoxicidade e determinação da concentração inibitória de 50% de células viáveis (IC50). Com os resultados, observou-se que ambos os tratamentos agiram como antitumorais e quando comparados entre si percebe-se que o óleo in natura agiu melhor que sua fração resina, sugerindo ser mais citotóxico para as células cancerosas a uma concentração aproximadamente onze vezes menor (E9 [0,0287&micro;L/mL]) do que para as células não cancerosas (E10 [0,3142&micro;L/mL]). A fração resina também inibiu a proliferação celular, na concentração E10 [0,0930&micro;L/mL] e E9 [0,8002&micro;L/mL]. Verificou-se através da técnica de fluorescência com Laranja de Acridina e Brometo de Etídio que os tratamentos induziram a morte das células por apoptose. Conclui-se que o óleo in natura da C. reticulata Ducke agiu melhor como agente antitumoral do que a resina, sugerindo que ocorre um sinergismo entre suas frações e que estudos futuros in vitro e in vivo são necessários para garantir a sua padronização e utilização. / In recent times cancer in general, especially lung cancer has been a cause of great concern in the world. The objective of this work was to evaluate the antitumor activity of the oil (Copaifera reticulata Ducke) in natura and its resin fraction in non-cancerous (E10) and cancerous (E9) lung cells lines of mouse. The oil was subjected to hydrodistillation to obtain the resin fraction. Cells after cultivation at 37&deg;C were treated with 8 different concentrations of oil and resin, and were maintained at the same temperature for another 48h in the oven. The MTT reagent was then added for the cytotoxicity test and determination of the 50% viable cell inhibitory concentration (IC50). The results showed that both treatments acted as antitumor and when the data were compared it was observed that the oil in natura acted better than its resin fraction because it was more cytotoxic to the cancer cells at a concentration almost eleven times smaller (E9 [0,0287&micro;L/mL) than for non-cancer cells (E10 [0,3142&micro;L/mL]). The resin fraction also inhibited cell proliferation, but at a very close concentration for the two cells line (E10 [0,0930&micro;L/mL] and E9 [0,8002 &micro;L/mL]). It was verified by the fluorescence technique with Acridine Orange and Ethidium Bromide that the treatments induced the death of the cells by apoptosis. Its concluded that the in natura oil of C. reticulata Ducke acted better as an antitumor than the resin, suggesting that synergism occurs between its fractions and that future in vitro and in vivo studies are necessary to guarantee its standardization and use.

A leucemia linfóide aguda de células T (LLA-T) é um tipo agressivo de câncer hematológico que surge a partir da transformação maligna de progenitores de células T. Apesar do progresso significativo no tratamento atual, os desafios concentram-se na morbidade após os regimes de quimioterapia convencionais e na sobrevida pós-recaída. Além disso, os pacientes com LLA-T apresentam pior prognóstico quando comparados àqueles com precursores de células B, consequentemente, novas abordagens terapêuticas ainda se fazem necessárias para aprimorar os resultados naquele subtipo. YM-155 é um derivado imidazólico originalmente classificado como supressor transcricional de survivina e tem demonstrado potente efeito antiproliferativo sobre uma grande variedade de tumores humanos, porém a atividade desse composto ainda é pouco explorada em linhagens de células T. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos de YM-155 no crescimento e morte celular em linhagens de LLA-T infantil. O presente estudo demonstrou que YM-155 exibiu atividade antiproliferativa e potente efeito indutor de apoptose nessas células, na qual a linhagem JURKAT mostrou ser mais sensível ao tratamento em relação a CCRF-CEM, apresentando o valor de CI50, respectivamente, 73,11 ± 7,65 nM e 2,17 ± 0,08 μM. Além disso, YM-155 diminuiu significativamente a capacidade de formação de colônias e induziu o bloqueio do ciclo celular da CCRF-CEM na fase S e, na linhagem JURKAT, diminuiu substancialmente a população em G2/M e aumentou a fração Sub-G1. No entanto, em ambas, não foi observada a inibição da expressão de survivina após tratamento com YM-155, assim como a inibição da expressão dos genes VEGF e Bcl-xL, o que sugere que esse composto, em linhagens LLA-T mutadas para TP53, esteja atuando de forma independe da inibição de survivina e do fator de transcrição SP-1. Conclui-se que YM-155 é eficaz na redução do crescimento e aumento de morte celular, portanto representa um agente antitumoral promissor em linhagens de leucemia linfóide aguda de células T. / T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) is an aggressive hematological cancer that arises from the malignant transformation of T-cell progenitors. Despite the significant progress in current treatment, challenges remain the lifelong morbidity after present chemotherapy regimens and post-relapse survival. Additionally, patients with T-ALL have poor prognosis compared to those with B-cell precursor, consequently, novel therapeutic approaches are still needed to improve the outcome in this cohort. YM-155 is an imidazolium derivative originally discovered as supressant of survivin transcription and has potent antiproliferative effects on a variety of human cancer, but, YM-155 effect in T-ALL cell line is underexplored. Based on this information, the present study aimed to evaluate YM-155 effect on cell lines derived from pediatric T-ALL. The drug exhibited antiproliferative activity and induced apoptosis. JURKAT cells (IC50 value: was 73.11 ± 7.65 nM) was more sensitive to treatment than CCRF-CEM (IC50 value: 2.17 ± 0.08 uM). Moreover, YM- 155 decreased clonogenic capacity and affected cell cycle dynamic. In CCRF- CEM, the treatment induced S phase arrest and, in JURKAT cells, decreased G2/M population and increased sub-G1 fraction. However, in both cell line, inhibition of survivin expression was not observed after treatment with YM-155, as well as the inhibition of VEGF and Bcl-xL genes expression, suggesting that this compound, in p53-deficient T-ALL cell line, is acting independently of survivin and SP-1 transcription factor inhibition. This results reinforcing the likelihood of using YM-155 as a therapeutic approach to combat leukemia and increase knowledge about mechanisms in vitro.