O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da competição de triathlon na função e morte de neutrófilos de atletas de elite e investigar o possível envolvimento dos ácidos graxos livres (AGs) neste processo. Os neutrófilos foram obtidos do sangue coletado de 11 sedentários e de 12 triatletas em repouso e após competição de triathlon (Half Ironman, 2 Km de natação, 80 Km de ciclismo e 20 Km de corrida). A competição de triathlon aumentou a capacidade dos neutrófilos de migrar e de realizar burst oxidativo, porém inibiu a fagociose realizada por estas células. Além disso, induziu aumento da fragmentação de DNA e externalização de fosfatidilserina. A competição de triathlon aumentou a concentração de AGs no plasma dos triatletas e esta foi correlacionada positivamente com a proporção de neutrófilos com DNA fragmentado e fosfatidilserina externalizada. A elevação da concentração plasmática dos ácidos oléico, linoléico e esteárico induzida pela competição parece estar envolvida nas alterações funcionais e na apoptose verificadas após a competição de triathlon. / The objective of this study was to evaluate the effect of triathlon competition on function and death of neutrophils from elite athletes and to investigate the involvement of fatty acids in this process. Neutrophils were obtained from blood collected from eleven sedentary volunteers and twelve triathletes under rest and after a Half Ironman triathlon competition (2 Km swimming, 80 Km cycling and 20 Km running). The triathlon competition increased the migration and reactive oxygen species production in neutrophils, however it reduced the phagocytosis activity. Moreover, it induced neutrophils death possibly by apoptosis as indicated by DNA fragmentation and phosphatidylserine externalization. The increase in plasma levels of oleic, linoleic and stearic acids induced by the competition may be involved in modulation on neutrophil function and death.

O processo de morte por apoptose pode ser dividido em duas vias: intrínseca e extrínseca. A sinalização via FAS (extrínseca) pode ocorrer independente (células Tipo I) ou dependente da mitocôndria (células Tipo II). É importante considerar que: 1) Resultados prévios mostraram que doses subletais de CHX foram capazes de sensibilizar células Tipo I e Tipo II à apoptose e de converter células Tipo II em Tipo I; 2) Um dos mecanismos envolvidos pode ser o recrutamento de FAS para as \"balsas lipídicas\"; 3) A PGE2 ativa PKA pelo aumento de cAMP via EP2 e EP4, que fosforila ezrina, envolvida nesse processo; 4) A PGE2 pode induzir apoptose em linhagens celulares e sensibilizá-las a esse processo. Assim, formulamos a hipótese de que a PGE2 poderia, assim como a CHX, sensibilizar certas células à apoptose e converter células Tipo II em Tipo I. Esse efeito não foi observado em células DO11.10 nas quais a apoptose foi induzida por CD95L solúvel e em células Tipo I e Tipo II, nas quais a apoptose foi induzida pelo anticorpo agonista anti-FAS. / The death process by apoptosis can be divided into two pathways: intrinsic and extrinsic. The signaling by FAS (extrinsic) may occur in a mitochondrial independent (Type I cells) or dependent (Type II cells) manner. It is important to consider that: 1) Previous results demonstrated that sub-lethal doses of CHX were able to sensitize type I and type II cells to apoptosis and to convert type II cells into type I; 2) One of the mechanisms involved can be FAS recruitment to \"lipid rafts\"; 3) PGE2 activates PKA by increasing cAMP via EP2 and EP4, which phosphorylates of Ezrin, involved in this process; 4) PGE2 can induces apoptosis in cell lines and can to sensitize them to this process. So, we hypothesized that PGE2 could, similarly to CHX, sensitize certain cells to apoptosis and convert type II cells into type I. This effect was not observed in DO11.10 cells in which apoptosis was induced by soluble CD95L and in type I and type II cells, in which apoptosis was induced by agonist anti-FAS antibody.

Les intégrines sont les principaux récepteurs d'adhésion des cellules à la matrice extracellulaire. La perturbation de cette adhésion induit l’anoïkose (mort par détachement). Les intégrines suppriment donc l’anoïkose en adhérant à la matrice extracellulaire. Dans l'intestin, l'intégrine α2β1 est exprimée dans les cryptes (cellules indifférenciées). Nous avons démontré précédemment que le fait de bloquer l’intégrine α2β1 à l’aide d’anticorps bloquants dirigés contre celle-ci induisait la mort cellulaire chez les entérocytes indifférenciés et différenciés. Cependant, il n’avait pas été déterminé par quelles voies de signalisation cette intégrine transmettait ses signaux de survie ou quelle était son implication dans la survie des cellules carcinomateuses de côlon. L’hypothèse de la présente étude est donc que l’intégrine α2β1 contribue à la suppression de l’anoïkose entérocytaire humaine. Le premier objectif pour y répondre était de confirmer le rôle de l’intégrine α2β1 dans la suppression de l’anoïkose chez les cellules absorbantes indifférenciées. Ainsi, nous avons vérifié l’impact de l’invalidation d’α2 sur la survie cellulaire, puis nous avons analysé la signalisation affectée dans ces conditions, soient les voies majeures de la survie cellulaire, les voies PI3K/Akt et MAPK/ERK. Le second objectif était d’analyser le rôle de l’intégrine α2β1 dans la résistance à l’anoïkose exhibée par les cellules carcinomateuses de côlon humain, puisque cette caractéristique contribue à leur capacité à former des métastases. Dans ce cas-ci, nous avons vérifié l’impact de son atténuation sur la résistance à l’anoïkose et évalué son rôle dans la survie de deux modèles cellulaires exhibant une résistance à cette mort cellulaire par leur activation des mêmes voies que chez les entérocytes indifférenciés. Nos résultats indiquent que chez les cellules entérocytaires indifférenciées, la contribution d’α2β1 à la suppression de l’anoïkose pourrait dépendre de son niveau d’expression et de la compensation par d’autres intégrines telle qu’α5β1. De plus, elle communiquerait ces signaux de survie en stimulant l’activation de la voie MAPK/ERK. Par contre, chez les cellules carcinomateuses de côlon, α2β1 ne semble pas jouer de rôle majeur dans la suppression de l’anoïkose entérocytaire humaine et son rôle dans la signalisation de survie demeure incertain.

Le testicule des mammifères possède deux fonctions majeures : la production des spermatozoïdes et la synthèse des androgènes. Le maintien et la régulation de cette fonction sont sous le contrôle des facteurs endocrines et paracrines, mais sont aussi liés à l’homéostasie des lipides, notamment le cholestérol. Les récepteurs nucléaires des oxystérols (LXRs) sont des facteurs de transcription appartenant à la superfamille des récepteurs nucléaires. Les LXRs sont exprimés dans le tractus génital mâle et les testicules et leurs ligands y sont présents à des concentrations physiologiquement actives. Dans ces organes, ces récepteurs régulent l’homéostasie du cholestérol, un précurseur indispensable pour la synthèse des stéroïdes testiculaires. Ils contrôlent aussi les différentes étapes de la stéroïdogenèse en régulant les enzymes de la stéroïdogenèse. Enfin, leur rôle dans la balance prolifération/apoptose des cellules germinales est éminent. On assiste depuis les dernières décennies à une augmentation des anomalies de la différenciation de l’appareil génital mâle (hypospadias, cryptorchidisme) et du cancer du testicule, ainsi qu’à une diminution quantitative et qualitative de la production de spermatozoïdes. Il a été proposé que ces anomalies aient pour origine une perturbation du développement du testicule pendant la vie foetale. Des arguments écologiques, expérimentaux et cliniques laissent supposer que ces troubles résultent, au moins en partie, de l’augmentation du nombre et de la concentration des perturbateurs endocriniens dans l’environnement et dans la nourriture. Ainsi, les xénoestrogènes comme le diéthylstilbestrol (DES), agissent sur les récepteurs des oestrogènes en provoquant des effets néfastes sur la fonction de reproduction masculine. Le but de ce travail a été d’évaluer l’effet postnatal du DES sur la fonction de reproduction chez la souris mâle. Pour pouvoir comprendre l’intervention des LXRs, nous avons choisi d’étudier cet effet chez les souris KO pour les deux isoformes de ces récepteurs nucléaires (lxrαβ-/-). Ce modèle doit nous permettre d’identifier si les effets délétères du DES sur le testicule passent par lxrαβ et d’identifier plus précisément les mécanismes mis en jeu. Nous avons pu montrer que le DES provoque la perturbation de la stéroïdogenèse en diminuant les transcrits de la plupart des gènes stéroïdogéniques (StAR, Cyp11A1, Cyp17a1). Les analyses histologiques montrent que le DES altère la balance prolifération/apoptose quel que soit le génotype, indiquant la perturbation des spermatogonies pré- et post-méiotiques. Nous avons pu montrer également que l’effet du DES sur le phénotype lxrαβ-/- est plus accentué, suggérant un effet protecteur des LXRs in vivo contre l’effet délétère du diéthylstilbestrol. / The mammalian testis has two major functions, sperm production, and synthesis of androgens. The maintenance and regulation of those two functions are under the control of endocrine and paracrine factors, but are also related to lipid homeostasis, including cholesterol. The nuclear oxysterol receptors (LXRs) are transcription factors belonging to the superfamily of nuclear receptors. The LXRs are expressed in the male genital tract and testis, and their ligands are active at physiological concentrations. In these organs, these receptors regulate cholesterol homeostasis, a precursor essential for the synthesis of testicular steroids. They also control the different steps of steroidogenesis by regulating the enzymes of steroidogenesis. In the end, their role in the balance proliferation / apoptosis of germ cells is prominent. In recent decades, there has been an increase in abnormal differentiation of the male genital tract (hypospadias, cryptorchidism) and testicular cancer, as well as a decrease in quantity and quality of sperm production. It was proposed that these abnormalities originate from a disturbance of testicular development during fetal life. Environmental, experimental and clinical arguments suggest that these disorders result, at least in part, to the increased number and concentration of endocrine disruptors in the environment and in food. Thus, xenoestrogens such as diethylstilbestrol (DES) act on the estrogen receptors, causing adverse effects on male reproductive function. The aim of this study was to assess the effect of DES on postnatal reproductive function in male mice. To understand the involvement of nuclear oxysterol receptors, we chose to study this effect in LXRαβ-null mice (lxrαβ-/-). This model should allow us to determine whether the deleterious effects of DES on testis go through lxrαβ and to identify more precisely the mechanisms involved. We have shown that DES causes disruption of steroidogenesis by decreasing transcripts of most steroidogenic genes (StAR, CYP11A1 and Cyp17a1). The histological analysis showed that DES alters the proliferation / apoptosis ratio whatever the genotype, indicating the disruption of pre-and post-meiotic spermatogonia. We have also shown that the effect of DES on the phenotype lxrαβ-/- is more pronounced, suggesting a protective effect of LXRs in vivo against the deleterious effect of diethylstilbestrol.

L’athérosclérose est une pathologie chronique inflammatoire qui résulte du dérèglement d’une réaction inflammatoire non résolue ayant pour but initial d’éliminer l’accumulation excessive de lipides au niveau de l’intima. Cette élimination est exercée par les monocytes/macrophages, dont l’infiltration et l’accumulation au niveau des lésions contribue à l’inflammation chronique locale.SR-BI est un récepteur scavenger multi-fonction capable de reconnaître un large spectre de ligands allant des lipoprotéines natives et modifiées jusqu’aux endotoxines. Outre de jouer un rôle crucial dans l’homéostasie du cholestérol dans le foie, est considéré comme un PRR capable d’être impliqué dans l’immunité inné. Un nombre croissant de données suggère un rôle athéro-protecteur de SR-BI dans les cellules dérivées de la moelle osseuse et notamment dans les macrophages. La contribution de SR-BI dans les macrophages au cours de l’athérosclérose et l’identification des mécanismes sous-jacents ne sont pas élucidées. Nous avons démontré que la délétion de SR-BI dans les macrophages entraîne une accélération du développement de l’athérosclérose et une augmentation de la cellularité au sein des lésions en absence d’effet sur la cholestérolémie. Ces effets athéro-protecteurs peuvent être attribués à une diminution de l’apoptose et à une augmentation de la prolifération cellulaire au sein des plaques.Nos données suggèrent également que la diminution de la susceptibilité à l’apoptose des macrophages déficients en SR-BI pourrait impliquer la voie d’activation P38. En parallèle de cette étude, le rôle de SR-BI dans la réponse inflammatoire a été exploré dans des conditions d’endotoxémie. / Atherosclerosis is a chronic inflammatory pathology which results from an uncontrolled inflammatory reaction secondary to an abnormal accumulation of lipids in the intima. The lipid clearance is performed by monocytes/macrophages. Their infiltration and accumulation in lesions contribute/ enhance the chronic local inflammation. SR-BI is a multifunction scavenger receptor capable of recognizing and binding a large spectrum of ligands from native and modified lipoproteins to endotoxins. Besides its crucial role in cholesterol homeostasis in the liver, SR-BI is also described as a PRR. An increasing number of data suggests that SR-BI exerts an atheroprotective role in bone marrow-derived cells and in particular macrophages.The specific contribution of SR-BI in macrophages in atherosclerosis development and the identification of the underlying mechanisms have yet to be elucidated.We have demonstrated that SR-BI deletion in macrophages increases atherosclerosis development and lesion cellularity without affecting cholesterolemia. These atheroprotective effects could be explained by decreased apoptosis and increased cell proliferation in plaques.Our data also suggest that the decrease in apoptosis sensitivity in SR-BI deficient macrophages could involve the P38 MAPK and STAT1 signaling pathways.In parallel to this study, the role of SR-BI in the inflammatory response has also been explored in endotoxemia and sepsis.

Le glaucome est défini par une dégénérescence du nerf optique dont le principal facteur de risque est l’hypertension oculaire due à des altérations du tissu trabéculaire. Les traitements incluent des agonistes du récepteur FP, les agonistes du récepteur EP2 pouvant également avoir des effets bénéfiques.Au cours de cette thèse, un modèle de cellules trabéculaires primaires humaines a été défini et les effets du latanoprost, un agoniste FP, et du butaprost, un agoniste EP2, ont été étudiés, d'une part, sur la survie des cellules trabéculaires, et d’autre part, sur la transition myofibroblastique. Il a été montré que l’activation du récepteur EP2 permet de protéger les cellules trabéculaires d’un stress du réticulum endoplasmique par une diminution de l’accumulation de p53 qui résulte en l’inhibition de l’expression de Puma. Enfin, le butaprost entraîne l’augmentation de l’expression de Bcl-2 et la phosphorylation de Bad qui participent à l’inhibition de l’apoptose.D’autre part, le latanoprost induit une contraction des cellules trabéculaires tandis que le butaprost inhibe la contraction induite par le TGF-B2. En revanche, les deux agonistes inhibent la déposition du collagène.En conclusion, indépendamment de leur effet hypotenseur connu, le latanoprost favoriserait l’acquisition par les cellules trabéculaires d’un phénotype contractile et l’activation du récepteur EP2 pourrait limiter le développement de la dysfonction trabéculaire en protégeant de la mort cellulaire et en favorisant une relaxation. Ces résultats suggèrent que la stimulation du récepteur EP2 pourrait limiter le développement du glaucome et serait plus favorable que les agonistes du récepteur FP. / Glaucoma is defined as an optic neuropathy whose main risk factor is ocular hypertension due to alterations of the trabecular meshwork (TM). The first-line therapies for glaucoma are agonists of the FP receptor. Agonists of the EP2 receptor could also present beneficial effects.During the thesis project, a model of primary human TM cells has been defined and the effects of latanoprost, an FP agonist, and butaprost, an EP2 agonist, have been studied on, firstly, the survival of TM cells and, secondly, on the myofibroblast transition.We have shown that activation of the EP2 receptor protects TM cells from an endoplasmic reticulum stress by a decreased accumulation of p53 which results in the inhibition of Puma transcription. Finally, butaprost mediates an increased expression of Bcl-2 and an elevation of Bad phosphorylation which contribute to protection against TM cell death.Moreover, latanoprost induces TM cell contraction while butaprost inhibits TGF-B2-dependent contraction. On the other hand, both agonists inhibit collagen.In conclusion, independently of their hypotensive effects, latanoprost would favor the acquisition by TM cells of a contractile phenotype while stimulation of EP2 receptor could limit TM dysfunction by protecting against TM cell death and relaxing the tissue. These results suggest that activation of EP2 receptor could slow down or inhibit the course of glaucoma progression and would be more favorable than the FP agonists currently used.

L'athérosclérose est un processus physiopathologique chronique impliqué dans la majorité des maladies cardio-vasculaires. Le développement des lésions d'athérosclérose est caractérisé par l'accumulation de lipides extra et intracellulaires dans la paroi artérielle à l'origine d'une forte réponse inflammatoire impliquant notamment les macrophages. Les macrophages sont considérés comme des acteurs clés dans le développement des plaques d'athérosclérose. En effet, de par leur capacité à métaboliser le cholestérol (captation, stockage, efflux), à réguler l'inflammation et à phagocyter les cellules apoptotiques, ils exercent des fonctions pro et/ou anti-athèrogènes qui peuvent être modulées à des fins thérapeutiques. Dans cette perspective, nous avons évalué le pouvoir thérapeutique des " macrophages protégés de l'apoptose " sur la progression des lésions d'athérosclérose constituées. Nous avons démontré que l'augmentation de la survie des macrophages permet de ralentir la progression des lésions, de stabiliser les lésions et de diminuer la cholestérolémie. Ces effets athéro-protecteurs sont attribués à l'augmentation des cellules de Kupffer et des monocytes Ly-6Clow en partie par leur capacité à produire de l'apolipoprotéine E. Nous montrons également que les cellules de Kupffer participent à la clairance des lipoprotéines pro-athérogènes. L'augmentation du pool d'apoE ainsi que l'augmentation des cellules de Kupffer permettent de diminuer la cholestérolémie et ainsi de diminuer la progression des lésions. / Atherosclerosis represents a chronic pathophysiological process implicated in the majority of cardiovascular diseases. The development of atherosclerotic lesions is characterized by an accumulation of extra and intracellular lipids in the arterial wall at the origin of a strong inflammatory response involving macrophages.Macrophages are considered key actors in the development of atherosclerotic plaques. Indeed, because of their ability to metabolize cholesterol (capture, storage, efflux), to regulate inflammation and to phagocyte apoptotic cells, they exert pro and/or anti-atherogenic functions that may be modulated therapeutically. In this context, we evaluated the therapeutic potential of macrophages protected against apoptosis, on the progression of established atherosclerotic lesions.We have demonstrated that increased macrophage survival can slow down the progression of established lesions, stabilize lesion and reduce cholesterol levels. These athero-protective effects are attributed to the increase in Kupffer cells and Ly-6Clow monocytes partly due to their ability to produce apolipoprotein E. We also show that Kupffer cells are involved in the clearance of pro-atherogenic lipoproteins. The increase in ApoE pool and in Kupffer cells reduces cholesterol levels and thus lesion progression.

L’apoptose, mort cellulaire observée suite à l’activation des caspases effectrices, est un moyen de défense contre les pathogènes, en particulier les virus. Le virus de la vaccine (VACV) est un virus contenant un grand génome à ADN codant pour environ 200 protéines, dont plusieurs inhibent l’apoptose. Cette apparente redondance fonctionnelle complique l’étude des protéines antiapoptotiques du virus dans un contexte d’infection virale. Dans ce travail, nous comparerons les propriétés antiapoptotiques des protéines B13, F1, GAAP et N1 de VACV. Cette comparaison sera établie dans un premier temps en dehors de toute infection virale. En utilisant des vecteurs lentiviraux, nous avons obtenu des lignées cellulaires stables (U2-OS) exprimant ces protéines en isolation. Nous avons alors pu tester les capacités antiapoptotiques de ces protéines en réponse à des stimuli provoquant l’apoptose extrinsèque et intrinsèque. Les résultats ont montré que B13 était la plus puissante molécule inhibitrice de l’apoptose intrinsèque et qu’elle était la seule à inhiber l’apoptose extrinsèque. Ensuite nous avons tiré avantage d’un virus de la vaccine déficient (vv811) qui ne possède aucune de ces protéines antiapoptotiques, capable à lui seul d’induire l’apoptose, en l’absence de toute autre stimulus. En infectant nos lignées cellulaires exprimant les molécules in trans avec vv811, nous avons pu montrer que B13 inhibait cette apoptose induite par le virus beaucoup plus efficacement que F1. GAAP et N1 dans ce contexte n’ont pas démontré de propriétés antiapoptotiques. Enfin, nous avons construit par mutagénèse des virus vv811 recombinants exprimant les molécules étudiées in cis. Suite à l’infection par ces virus de cellules U2-OS et Hela, B13, de nouveau, et F1 ont montré des capacités d’inhibition importantes de l’apoptose. L’action de GAAP s’est révélée dépendante du type cellulaire et N1 n’a pas pu inhiber l’apoptose induite par ce virus déficient dans aucune des cellules testées. En utilisant ces différentes approches, nous avons pu nous affranchir des problèmes de redondance et comparer 4 molécules antiapoptotiques du virus de la vaccine, y compris dans un contexte d’infection virale. Les résultats ont confirmé que toutes les protéines étudiées possédaient des propriétés antiapoptiques et ont clairement montré que B13 était la plus puissante / Apoptosis, which occurs following activation of effector caspases, can restrict the replication of intracellular pathogens, especially viruses. Vaccinia virus (VACV) is a large dsDNA virus encoding approximately 200 proteins, several of which inhibit apoptosis. This redundancy of viral anti-apoptotic proteins complicates the study of these proteins in the context of viral infection. Here a comparative study of the anti-apoptotic proteins B13, F1, GAAP and N1 with and without virus infection is presented. Firstly, using lentiviral constructs, we generated transduced cell lines expressing the anti-apoptotic proteins in isolation and we analysed their ability to protect against extrinsic and intrinsic apoptosis induced by different drugs. In that context B13 was the most potent inhibitor of intrinsic apoptosis and the only protein to inhibit both extrinsic and intrinsic apoptosis. We then used a deficient VACV strain, vv811, that lacks the genes coding for the four anti-apoptotic proteins. Infection with vv811 can induce apoptosis without the need for any other stimulus. After vv811 infection of cell lines expressing the anti-apoptotic proteins in trans, B13 and to a lesser extent F1, inhibited apoptosis. Finally, we introduced each gene separately into vv811 by genetic recombination. Using these recombinant viruses to induce apoptosis, B13 and F1 were very potent inhibitors. The protection conferred by GAAP was cell type dependant and N1 failed to protect any of the tested cells from the virus induced apoptosis. Using these different approaches, we have been able to overcome the redundancy issue to compare 4 anti-apoptotic proteins from VACV, including in the context of viral infection. The results illustrate that vv811 is a useful tool to determine the role of VACV anti-apoptotic proteins during infection and that whilst all of these proteins have some anti-apoptotic activity, B13 is most potent.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:27:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 341241.pdf: 3543052 bytes, checksum: 36790c5c0f439dd829f9e8eaefb5aa21 (MD5) Previous issue date: 2016 / As neoplasias hematológicas, que incluem as leucemias agudas e o mieloma múltiplo compreendem um grupo heterogêneo de doenças originadas a partir da proliferação anormal e descontrolada de uma célula clonal neoplásica de origem hematopoiética. Não é incomum a observação de células neoplásicas que desenvolvem resistência aos fármacos utilizados e pacientes que apresentam morbidade associada ao uso de quimioterápicos. Dessa forma, há necessidade de se investigar novas estruturas para o desenvolvimento de fármacos que tenham maior eficiência em induzir morte apenas nas células tumorais, que sejam de fácil administração, que não causem resistência e com poucos ou insignificantes efeitos adversos. Duas classes de compostos, as sulfonamidas e as quinonas, são bastante relatadas na literatura com atividade citotóxica. Nessa perspectiva, este estudo objetivou investigar o efeito citotóxico de um grupo de sulfonamidas e de uma quinona (GE2, primina) sobre linhagens celulares de neoplasias hematológicas. Entre as 26 sulfonamidas avaliadas, pelo método do MTT, o composto DFS16 (N-(3,3-difenilpropil)-2,4-dinitrobenzenosulfonamida) foi o selecionado para os ensaios posteriores, por apresentar maior atividade citotóxica sobre as três linhagens celulares utilizadas nesse trabalho (K562, Jurkat e MM.1S). Os resultados desse estudo permitem sugerir que a sulfonamida DFS16 possui atividade citotóxica sobre células K562 e Jurkat pela indução de apoptose (observada na microscopia com brometo de etídio e laranjada de acridina, fragmentação de DNA e marcação com Anexina V) por meio da ativação das vias intrínseca e extrínseca, além do envolvimento de alterações do potencial de membrana mitocondrial. A ativação da via intrínseca nessas células parece estar relacionada com a diminuição da expressão da proteína Bcl-2 e aumento da expressão da proteína Bax. Além disso, a diminuição da expressão da proteína de proliferação celular Ki-67 e o aumento da expressão do fator indutor de apoptose, observados por citometria de fluxo, demonstram possível relação com o mecanismo de morte induzido pelo tratamento com DFS16 nas células Jurkat. A apoptose induzida pela sulfonamida DFS16 nas células MM.1S sugere que a ativação ocorre por uma via diferente daquelas investigadas nesse trabalho, sem relação com a sinalização de caspases e com o envolvimento do bloqueio na progressão do ciclo celular na fase G2/M. Os resultados encontrados para a quinona GE2 indicam que a apoptose possivelmente é ativada pelas vias intrínseca e extrínseca nas células K562, Jurkat e MM.1S, com diminuição do potencial mitocondrial, além de diminuição da expressão da proteína Ki-67. Assim como, a quinona GE2 apresentou excelente seletividade para as células neoplásicas quando comparado com o tratamento em células não neoplásicas. O conjunto de resultados sugere que os compostos DFS16 e GE2 são promissores protótipos para o estudo e desenvolvimento de novos fármacos para o tratamento de neoplasias hematológicas.<br> / Abstract : Hematological malignancies, including acute leukemias and multiple myeloma, comprise a heterogeneous group of diseases originated from an abnormal and uncontrolled proliferation of neoplastic clonal cells of hematopoietic origin. It is not uncommon to observe neoplastic cells that develop resistance to the used drugs, as well as patients with morbidity associated to chemotherapy. Thus, it is necessary to investigate new structures for the development of drugs that present higher efficiency and specificity in inducing tumor cells death, that are easy to administer, that do not cause resistance and that have little or negligible adverse effects. Two classes of compounds, sulfonamides and quinones, were reported in the literature with a wide range of pharmacological properties and among them, the antitumor activity. In this perspective, this study aimed to investigate the cytotoxic effect of a group of sulfonamides and a quinone (GE2, primina) on hematological malignancies cell lines. Among the 26 sulfonamides evaluated, by MTT method, the compound DFS16 (N-(3,3-diphenylpropyl)-2,4-dinitrobenzenesulfonamide) was selected for the further tests due to its higher cytotoxic activity against the three cell lines that were analyzed in this study (K562, Jurkat and MM.1S). The results suggest that sulfonamide DFS16 has cytotoxic activity against K562 and Jurkat cells by apoptosis induction (observed in ethidium bromide and acridine orange microscopy, DNA fragmentation and labeling with Annexin V) by the intrinsic and the extrinsic pathways, involving also the mithocondrial membrane potential. The activation of the intrinsic pathway in these cells appears to be related by decreased Bcl-2 expression and increased Bax expression. Furthermore, the decreased expression of the cellular proliferation protein Ki-67 and the increased expression of apoptosis-inducing factor, observed by flow cytometry, also appear to be related to the death mechanism induced by DFS16 in Jurkat cells. Apoptosis induced by sulfonamide DFS16 in MM.1S cells appear to be activated by a different pathway from those investigated in this work, i.e. no relation with caspase signaling and blocking the cell cycle progression at G2/M phase. The quinone GE2 appears to induce apoptosis by activation of the intrinsic and the extrinsic pathways in K562, Jurkat and MM.1S cell lines, and by decreasing the expression of Ki-67 protein. The results suggest that the compounds DFS16 and GE2 are promising molecules for the use in hematological malignancies therapy or as prototypes for the development of new chemotherapics.

Mastocitoma é uma das principais neoplasias cutâneas em cães, caracterizada por uma multiplicação anormal de mastócitos, com comportamento biológico muito variável. Os principais fatores prognósticos incluem grau histopatológico, marcadores de proliferação, como índice mitótico, Ki67 e AgNOR, além de estadiamento clínico. Diversos estudos concentram-se na avaliação da relação da apoptose com a oncogênese e seu papel no prognóstico. Em condições fisiológicas, a apoptose ocorre na maturação e senescência celular, mantendo a homeostasia dos diferentes tecidos, removendo do organismo células que tenham sofrido alguma mutação. A genética da apoptose pode ser interrompida frente à ocorrência de mutações, levando à perda do controle na proliferação celular, o que resulta no desenvolvimento de uma neoplasia. O presente estudo avaliou a ocorrência de apoptose por meio de ensaio TUNEL em mastocitomas cutâneos caninos, com o objetivo de testar sua relação com as graduações histopatológicas e o valor prognóstico quanto à sobrevida pós-cirúrgica, assim como compará-lo à expressão imuno-histoquímica de caspase 3 e Ki67. Quarenta e quatro mastocitomas cutâneos caninos, provenientes de 36 cães, foram submetidos à avaliação histopatológica para graduação quanto à diferenciação tumoral, à análise imuno-histoquímica para avaliação das expressões de Ki67 e caspase 3. A marcação positiva para TUNEL não mostrou relação com grau histopatológico, nem foi um bom indicador para sobrevida ou mortalidade em função da doença. Apesar disso, houve correlação positiva entre os índices apoptóticos. / Mast cell tumor is a very common neoplasm in dogs and characterized by an abnormal proliferation of mast cells, with variable biological behavior. The main prognostic factors include histological grade, proliferation markers, such as mitotic index, Ki67 and AgNOR, and clinical staging. Several studies focus in the relation of apoptosis and oncogenesis and its role in prognostication. In physiological conditions, apoptosis occurs due to aging and cell senescence, maintaining the homeostasis of different tissues by removing mutated cells. The genetics of apoptosis can be interrupted by mutations, leading to loss of control in cellular proliferation, and resulting in cancer development. This study evaluated the occurrence of apoptosis by TUNEL assay in canine cutaneous mast cell tumors, compared it with histopathological grading and the immunohistochemical expressions of caspase-3 and Ki67, as well as tested its prognostic value for post-surgical survival. Forty-four canine cutaneous mast cell tumors, from 36 dogs were submitted to histopathologic and immunohistochemical analyses. Positive staining for TUNEL showed no relation with histological grade, and was not considered a good indicator for survival or mortality. Nevertheless, a positive correlation between the apoptotic indexes was found.