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Avaliação das atividades antimicrobiana, antioxidante e capacidade de bioacumulação de selênio em células de Enterococcus

Pieniz, Simone January 2010 (has links)
As bactérias ácido lácticas (BAL) possuem papel importante em uma ampla variedade de alimentos, incluindo produtos lácteos e cárneos. Neste trabalho foram investigadas as atividades antimicrobiana e antioxidante, do sobrenadante bruto e do extrato intracelular, de 36 BAL isoladas de produtos lácteos e cárneos. Estas bactérias foram identificadas através do seqüenciamento do rRNA da região 16S. A análise através do GenBank BLAST revelou que todos os isolados pertencem ao gênero Enterococcus. Três isolados foram identificados como E. hirae, um isolado como Enterococcus sp., 17 como E. faecium e 15 como E. faecalis. A atividade antimicrobiana frente ao microrganismo indicador Listeria monocytogenes foi observado em 21 isolados, utilizando o sobrenadante bruto, destacando-se com os maiores halos de inibição os isolados IS 196 (10,7 mm) e IS 197 (11,0 mm) e, em 7 isolados, utilizando o extrato intracelular, os maiores halos de inibição foram obtidos com os isolados IS 196 (9,7 mm) e IS 197 (9,3 mm), sendo estes dois isolados identificados como E. faecium. A avaliação da atividade antioxidante foi realizada por três métodos distintos. Os 36 isolados apresentaram atividade antioxidante pela determinação às Substâncias Reativas ao Ácido Tiobarbiturico (TBARS), utilizando tanto o sobrenadante bruto quanto o extrato intracelular. A A capacidade antioxidante também foi verificada pelo seqüestro de radicais livres através do método de ABTS (2,2 azino-bis (3-•+etilbenzotiazolino-6-ácido sulfônico)) e pela captura do radical DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazil). Nestes dois métodos verificou-se que apenas as amostras do sobrenadante bruto demonstraram capacidade antioxidante. A atividade antioxidante mais elevada foi observada nos isolados IS 196 e IS 197. Foi realizado também o enriquecimento das espécies de Enterococcus com selênio (Selenito de Sódio - Se(IV)). Neste estudo, selecionaram-se os isolados que bioacumularam maior concentração de Se(IV) na biomassa, BAL 14 e BAL 18, identificados como E. faecalis e E. faecium, respectivamente. Os isolados tiveram ótimo crescimento à 35ºC por 24 h (DO BAL 14=1,4 e BAL 18=1,5), a remoção 600ótima do selênio foi verificada com o pH inicial de 7,0 e temperatura de 25ºC. Através da curva de crescimento observou-se que após 8 h de incubação, as culturas BAL 14 e BAL 18 apresentaram a maior produção de biomassa (DO=1,42 e 1,41) e bioremoção do Se(IV) (14,89 e 14,79 mg L), 600-1respectivamente. Quantidade considerável de selênio foi detectada na biomassa de E. faecium (0,4599 mg g de peso seco e E. faecalis (0,4759 mg g de peso -1-1seco). Estes resultados mostram que estas bactérias podem auxiliar particularmente na redução ou inibição de microrganismos patogênicos, na inibição da oxidação de alimentos e ração animal, bem como reduzir os danos oxidativos provocados pela produção de radicais livres nos organismos vivos. A absorção significativa de Se(IV) pelas espécies de Enterococcus observados neste estudo, indicam que estes microrganismos podem ser utilizados para estudos posteriores visando à suplementação alimentar animal, através da utilização da biomassa produzida pelos Enterococcus enriquecidos com Se(IV). / The lactic acid bacteria (LAB) have an important role in a wide variety of foods, including dairy products, meat and fermented foods. In this study, antimicrobial and antioxidant activities of culture supernatants and intracellular extracts of 36 LAB isolated from meat and dairy products were investigated. These bacterial were identified by 16S rRNA sequencing. GenBank BLAST analysis revealed that all the isolates belong to the genus Enterococcus. Three isolates were identified as E. hirae, one isolate as Enterococcus sp., 17 as E. faecium and 15 as E. faecalis. Antimicrobial activity against the indicator microorganism Listeria monocytogenes was observed for 21 supernatants culture, it is highlighted with the largest inhibition zones the strains IS196 (10.7 mm) and IS197 (11.0 mm), and 7 strains using cell extracts, showed the highest inhibition zones. Strains IS196 (9.7 mm) and IS197 (9.3 mm) were identified as E. faecium. Evaluation of antioxidant activity was performed by three different methods. The 36 isolates showed antioxidant activity to determination Thiobarbituric Acid Reactive Substances (TBARS) method with supernatant culture and cell-free extract. Antioxidant capacity was also observed for the scavenger of free radicals by the method of ABTS (2,2-bis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)) and the capture of the •+radical DPPH (2,2-diphenyl-1 - picrylhydrazyl). These two methods showed that only supernatant culture samples had antioxidant capacity. The highest antimicrobial and antioxidant activities were observed by E. faecium, IS196 and IS197. It also was performed the enrichment of Enterococcus species with Selenium (Sodium selenite - Se(IV)). In these study, it was selected the isolates with highest selenium bioaccumulation capacity, LAB 14 and LAB 18, identified as E. faecalis and E. faecium, respectively. The isolates had high growth at 35ºC for 24 h (DO BAL 14=1.4 and BAL 18=1.5), and the Se(IV) removal was maximum 600at inicial pH 7.0 and 25ºC. Time course experiment showed that both LAB 14 and LAB 18 had highest biomass production (OD=1.42 and 1.41) and Se(IV) 600bioremoval (14.89 and 14.79 mg L) respectively -1after 8 h of incubation. Substantial amount of selenium was detected in biomass of E. faecium (0.4599 mg g-1 of dry weight and E. faecalis (0.4759 mg g-1 of dry weight). These results showed that these bacteria can particularly help to reduce or inhibit pathogenic microorganisms, in the inhibition of oxidative spoilage in foods and animal feed, as well as, reduce oxidative damage caused by free radical production in living organisms. The significant uptake of Se(IV) by the Enterococcus species observed in this study, indicate that they can be used to deliver dietary selenium through feed augmentation with Se(IV)-enriched Enterococcus biomass.
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Determinação da atividade antimicrobiana na fase vapor do óleo essencial de Hesperozygis myrtoides (St.Hil. ex Benth.) Epling / Determination of antimicrobial activity in the vapor phase of essential oil Hesperozygis myrtoides (St.Hil. Ex Benth.) Epling

Marcos Aurélio Almeida Pereira 01 September 2016 (has links)
O uso de plantas aromáticas ricas em óleos essenciais (OE) como agentes saneantes ou conservantes remonta às civilizações antigas. Nos dias atuais, o aumento nos surtos de infecções em hospitais e creches, bem como da resistência bacteriana, aumentou também a demanda por desinfetantes. Os OE\'s são reconhecidos por sua atividade antimicrobiana, mas a maioria dos estudos foi realizada na fase líquida. Buscando aproveitar a característica de alta volatilidade dos OE´s, desenvolvemos uma metodologia para a avaliação da atividade antimicrobiana na fase vapor. Nesse sentido, utilizamos o OE extraído de Hesperozygis myrtoides (St.Hil. ex Benth.) Epling (Lamiaceae), uma espécie nativa com ocorrência nos estados do sudeste do Brasil. A planta foi coletada em Campos do Jordão e o óleo teve um rendimento médio de 1,99% (m/m), sendo os componentes majoritários pulegona (48,8%) e isomentona (16,2%). A atividade antimicrobiana foi comparada na fase líquida, pelo método da microdiluição em placa, com a fase vapor, pelo método da placa invertida modificado. Os resultados indicaram uma atividade mais potente para a fase vapor do que na fase líquida. Staphylococcus aureus apresentou CIM de 0,392 mg. L-1 na fase vapor e 19 mg. L-1 na líquida, já para Candida albicans foi 0,833 mg. L-1 , na fase vapor e 94,4 mg. L-1 na fase líquida. Entretanto, para Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Bacilus subtillis e Aspergillus brasiliensis os valores da CIM, em ambas as fases, foram acima de 100 mg. L-1, sendo então considerado inativo. A atividade antimicrobiana na fase vapor é mais intensa devido aos OE´s se ligarem diretamente ao microrganismo sem a interferência do solvente. A toxicidade do OE foi avaliada frente a células tumorais humanas de mama (MCF-7) e próstata (CP-3) e em células de fibroblastos murinos normais (BALB/3T3) e indicaram uma DL50 superior a 2.014 mg.Kg-1, podendo ser considerado seguro. A atividade antimicrobiana associada à baixa toxicidade é um forte indicativo que este OE pode ser utilizado para descontaminação ambiental na fase vapor, inclusive em ambientes habitados. / Aromatic plants rich in essential oils (EO) have been used as sanitizing agents or preservatives since early civilizations. Nowadays, the increase in infectious outbreaks in hospitals and nurseries, as well as the bacterial resistance has also increased the demand for disinfectants. EO\'s are known for their antimicrobial activity, but most reports is in the liquid phase. Due to the EO high volatility, we have developed a methodology for evaluating the antimicrobial activity in the vapor phase. In this sense, we use the Hesperozygis myrtoides (St.Hil. Ex Benth.) Epling (Lamiaceae) EO, a native species occurring in southeastern Brazil. The plant was collected in Campos do Jordão (SP) and the oil had an average yield of 1.99% (m/m) and as major components pulegone (48.8%) and isomenthone (16.2%). Antimicrobial activity was compared in the liquid phase, microdilution method, with the vapor phase, modified inverted plate method. The results indicated that the vapor phase was a more potent than the liquid. Staphylococcus aureus afforded MIC 0.392 mg. L-1 for the vapor phase and 19 mg. L-1 for the liquid phase, while for Candida albicans it was 0.833 mg. L-1 for the vapor and 94.4 mg. L-1 for the liquid. However, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis and Aspergillus brasiliensis had in both phases MIC\'s higher than 100 mg. L-1, considered then inactive. The vapor phase antimicrobial activity is more intense because the EO are free to directly bind with the microorganism without the solvent interference. Toxicity was evaluated against human breast tumor cells (MCF-7) and prostate cancer (PC-3) and with normal murine fibroblast cells (BALB/3T3) indicating a DL50 higher 2,014 mg.Kg-1, and it was considered safe. The antimicrobial activity associated with the low toxicity is a strong indication that this EO vapors can be used for environmental decontamination, even in inhabited places.
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Avaliação das atividades antioxidante e antimicrobiana de extratos de Apoclada simplex McClure & Smith (Poaceae: Bambusoideae) / Evaluation of antioxidant and antimicrobial activities of Apoclada simplex McClure & Smith (Poaceae: Bambusoideae) extracts

Fabiana Inacio da Costa Issa 16 October 2015 (has links)
A substituição dos conservantes sintéticos em cosméticos por produtos naturais é uma tendência, direcionando as pesquisas para a busca de novas alternativas de compostos antimicrobianos naturais. Extratos de bambus asiáticos têm ampla aplicação na indústria cosmética, sendo muito utilizados em diversas formulações. No Brasil, a triagem química de espécies nativas de bambus para futuras aplicações na indústria ainda é incipiente. O objetivo do trabalho foi avaliar as atividades antioxidante e antimicrobiana de extratos e frações de folhas e colmos de A. simplex McClure & Smith. Extratos brutos de folhas e colmos foram obtidos por percolação com etanol 60%, liofilizados, e fracionados com solventes de polaridade crescente. A capacidade antioxidante foi quantificada pelo método de redução do radical DPPH, sendo a fração clorofórmica dos colmos a que apresentou melhor atividade (IC50= 24,02 µg/mL). A atividade antimicrobiana foi determinada pelo método de microdiluição frente Escherichia coli (ATCC 8739), Staphylococcus aureus (ATCC 6538), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027), Candida albicans (ATCC 10231) e Apergillus brasilensis (ATCC 16404). Os extratos brutos e frações de folhas e colmos de A. simplex apresentaram baixa atividade antimicrobiana com concentração inibitória mínima (CIM) > 1mg/mL para todos os micro-organismos. O efeito sinérgico dos extratos com parabenos foi realizado utilizando o delineamento experimental centroide simplex para uma mistura de metilparabeno, propilparabeno e extrato. As misturas foram testadas frente aos micro-organismos utilizados no ensaio de atividade antimicrobiana. O sinergismo foi observado em maior intensidade em S. aureus e C. albicans. Adicionalmente, os resultados da quantificação de flavonoides e compostos fenólicos totais sugeriram que o sinergismo entre esses compostos e os parabenos poderia ser responsável pela atividade antimicrobiana. / The replacing synthetic preservatives in cosmetics with natural products, is a tendency, research to investigate new natural antimicrobial compounds. Although Asian bamboo extracts have wide application in the cosmetics industry and are widely used in various formulations, Brazilian native species were not yet been investigated for future industrial applications. Thus, the purpose of this study was to evaluate the antioxidant and antimicrobial activities of extracts and fractions from A. simplex McClure & Smith leaves and culms. Crude leaf and culm extracts were obtained by percolation with 60% ethanol, lyophilized and fractionated with increasing polarity solvents. Antioxidant capacity was measured by the DPPH radical scavenging method in which the culm chloroform fraction presented the highest activity (IC50=24.02 µg/mL). Antimicrobial activity was determined by the microdilution method against Escherichia coli (ATCC 8739), Staphylococcus aureus (ATCC 6538), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027), Candida albicans (ATCC 10231) and Apergillus brasiliensis (ATCC 16404). All the extracts and fractions from A. simplex showed low antimicrobial activity with Minimal Inhibitory Concentration (MIC) > 1 mg/mL for all microorganisms. The synergistic effect of the extracts mixed with methyl and propyl parabens was tested using a simplex centroid design. The mixtures were tested against the same microorganisms used for extracts evaluation. A stronger synergic effect was observed for S. aureus and C. albicans. Additionaly, the quantification results of flavonoids and total phenolic compounds suggested that the synergism among these compounds and the parabenos could be responsible for the antimicrobial activity.
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Plantas medicinais em atenção primária veterinária : atividade antimicrobiana frente a bactérias relacionadas com mastite bovina e a dermatófitos.

Schuch, Luiz Filipe Damé January 2008 (has links)
As plantas medicinais são utilizadas pelo homem desde os primórdios da humanidade. O conhecimento com relação a sua identificação e uso estabelecido pelo processo de experimentação, acertos e erros, é um patrimônio cultural dos povos. Com base nos princípios estabelecidos pela Organização Mundial da Saúde, o resgate destes conhecimentos está sendo valorizado, através das etnociências. As práticas tradicionais em veterinária seguem o mesmo caminho. O novo paradigma para a produção agropecuária, trazido pela agroecologia, integra os conhecimentos tradicionais e aqueles ditos “modernos” para a moldagem de uma agricultura social, cultural, econômica e ecologicamente sustentável. Com base nesses parâmetros, este trabalho teve por objetivo avaliar plantas medicinais indicadas para uso como anti-séptico/desinfetante em situações-problema em produção animal, mais especificamente, em mastite bovina e dermatofitose, por uma comunidade agrícola. A coleta de informações referente ao uso das plantas foi realizada junto a COOPAVA, Cooperativa de Agricultores Assentados da reforma agrária, localizada no Município de Piratini, RS, utilizando método participativo, na moldagem de um planejamento de produção de leite em transição agroecológica. As plantas selecionadas foram Baccharis trimera, Bidens pilosa, Eucalyptus sp., Polygonum hydropiper e Tagetes minuta. Utilizaram-se extratos hidroalcoólicos (EHA) e decoctos (DEC) das plantas selecionadas – soluções desinfetantes - para avaliar: atividade antibacteriana frente a microrganismos causadores de mastite, utilizando o método da microdiluição serial em placas para estabelecer atividade inibidora e inativadora dos extratos; concentração inibitória mínima para dermatófitos de interesse em saúde animal e humana; e a cinética de inativação de microrganismos relacionados a mastite bovina pelas soluções desinfetantes. Essas soluções desinfetantes foram confrontadas com 25 amostras bacterianas, sendo nove Staphylococcus coagulase positiva, sete Staphylococcus coagulase negativa, oito Streptococcus spp. e uma Pseudomonas aeruginosa. Todos os extratos avaliados apresentaram ação antibacteriana. O EHA de Eucalyptus foi o que apresentou maior atividade inibidora bacteriana no conjunto do experimento. Quanto à inativação, o EHA de Eucalyptus, o EHA B. trimera e o DEC T. minuta apresentaram os melhores resultados, inclusive atuando frente a P. aeruginosa, embora em concentração mais alta do que frente às outras bactérias (p<0,05). Obteve-se atividade antifúngica de todos os EHA frente a todos os isolados avaliados, variando a CIM de 5,5% para EHA de T. minuta a 19,5% para EHA de B. trimera. Os decoctos de B. trimera e P. hydropiper foram os únicos ativos contra esses fungos. Os três EHA testados quanto a tempo de inativação tiveram bom desempenho frente a bactérias Gram positivas, com eficácia semelhante ao controle clorexidina a 0,18% (p>0,05) frente a S. agalactiae, com e sem a presença de matéria orgânica e, com exceção do EHA de B. trimera, frente a S. aureus sem matéria orgânica. Os decoctos tiveram desempenho inferior, apresentando bom desempenho somente frente a S. agalactiae. O desinfetante controle foi o mais eficaz quando confrontado com P. aeruginosa. Todas as soluções desinfetantes foram sensíveis à matéria orgânica. Pode-se concluir que as plantas medicinais com indicativo anti-séptico/desinfetante podem ser úteis em sistemas de produção agroecológicos, em situações-problema relacionadas aos agentes testados. / Since these ancient times, the succeeding civilization all over the world had used medicinal plants, in human and animal healthcare. The knowledge about it has evolutioned through trial and error methods and it’s the cultural patrimony of the peoples. In consonance to the WHO strategies, the identification and valorization this knowledge is on, by the ethno sciences. Agroecology is the new paradigm that it focuses on a systemic vision to integrate of the traditional and non-traditional practices. Two can complement one another to achieve a cultural, economic, ecologic and social sustainable livestock health care delivery system. This purpose of the present study was to evaluable “in vitro” activity of medicinal plants used to disinfectant/antiseptic in practice livestock to bovine mastitis and dermatophytes disease. The informants were familiar agriculturist on the agrarian reform seatment, on Piratini city, RS, as previous report, using participatory approaches. The five medicinal plants were selectioned: Baccharis trimera, Bidens pilosa, Eucalyptus sp., Polygonum hydropiper and Tagetes minuta. Antibacterial activity (bacteriostatic or bactericidal) of the hidroalchoolic (EHA) or decoction (DEC) extracts were determined through the serial dilution method in the multiple tube system in the microplate against 25 contagious bovine mastitis bacterial – nine Staphylococcus coagulase positive, seven Staphylococcus coagulase negative, eight Streptococcus spp and a P. aeruginosa. Minimal Inhibitory Concentration for six samples of dermatophytes was determined by dilution methods in the microplates. To test antibacterial kinetic, EHA and DEC of B. trimera, Eucalyptus and T. minuta were confronted to S. aureus, S. agalactiae and P. aeruginosa in different times and with or without organic load, included chlorhexidine 0.18% by control. All extracts were antibacterial. EHA from leaves of Eucalyptus sp. was the most bacteriostatic effective, and the same extract plus EHA B. trimera and DEC T. minuta were the best bactericidal. P. aeruginosa was more resistant that Gram positive bacterial (p<0.05). All EHA inhibited all dermatophytes valued. MIC was between 5.5% to EHA T. minuta and 19.5% to EHA B. trimera. DEC B. trimera and P. hydropiper were effective. In the kinetics experiment, the three EHA exhibited a good activity against Gram positive organisms. It were as strong to control, in presence or absence to organic load against S. agalactiae, and excluded EHA B. trimera, against S. aureus without organic load. The DECs were fewer effective. It was acted against S. agalactiae only. Chlorexidine was the best against P. aeruginosa. All disinfection solutions were sensible to organic load. The conclusion were that medicinal plants used ethnoknowledge system can to improved livestock health in the agroecologic systems, related to the studied transmitted agents.
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Atividade antimicrobiana in vitro dos óleos essenciais de canela da china (cinnamomun cassia), orégano (origanum vulgare), pimenta negra (piper nigrum) e tomilho (thymus vulgaris) branco frente à amostras de Salmonella enterica isoladas de aves / In vitro antimicrobial activity of essential oils of cinnamon (cinnamomun cassia), oregano (Origanum vulgare), thyme (Thymus vulgaris) and black pepper (Piper nigrum) against strains of Salmonella enterica isolated from poultry

Laviniki, Vanessa January 2013 (has links)
Infecções por bactérias do gênero Salmonella podem causar doenças em aves levando a perdas produtivas, como, queda de postura, diminuição do ganho de peso e mortalidade. Além disso, os produtos avícolas estão entre as principais causas de toxi-infecções alimentares em humanos. O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana in vitro dos óleos essenciais de Canela da China, Orégano, Pimenta Negra e Tomilho Branco frente a amostras de Salmonella enterica isoladas de aves, bem como comparar as técnicas de disco difusão e microdiluição em caldo. Para avaliar o efeito inibitório dos óleos essenciais no crescimento dos micro-organismos usou-se uma técnica de microdiluição em caldo empregando-se resazurina como indicador de viabilidade celular. Dos quatro óleos testados, apenas a pimenta negra não exibiu efeito inibitório sobre o crescimento das bactérias testadas e o óleo de orégano foi o único que apresentou atividade frente a todas as amostras com valores de concentração inibitória mínima (CIM) variando de 8-1% (v/v). Enquanto que, os óleos de tomilho e canela foram efetivos para 91,3% (42/46) e 80,43% (37/46) das amostras, respectivamente. Os valores de CIM para o tomilho variaram de 8-4% (v/v) e para a canela foram de 8-2% (v/v). Em relação às técnicas, pode-se observar que a técnica de microdiluição em caldo apresentou melhores resultados que a disco difusão, embora seja difícil comparar os resultados devido às características peculiares dos óleos, como a viscosidade, volatilidade e diferente afinidade com a água. Além disso, a microdiluição em caldo nos fornece valores semi-quantitativos, enquanto que o método de disco difusão os resultados são descritos qualitativamente. Embora não se tenha ainda hoje padronizações para avaliar o efeito inibitório dos óleos no crescimento dos micro-organismos, com este estudo podemos observar que os óleos, principalmente orégano, são uma alternativa natural para aplicações na indústria visando a redução de Salmonella nos produtos. / Infections with bacteria of the genus Salmonella can cause disease in poultry leading to production losses, as falling posture, decreased weight gain and mortality. Furthermore, poultry products are among the major causes of human alimentary toxinfections. The aim of this study was to evaluate the in vitro antimicrobial activity of essential oils of cinnamon from China, Oregano, Thyme and Black Pepper White against strains of Salmonella enterica isolated from poultry and compare the techniques disk diffusion and microdilution. To assess the inhibitory effect of essential oils on the growth of micro-organisms used was a broth microdilution technique employing resazurin as an indicator of cell viability. Of the four oils tested, only black pepper showed no inhibitory effect on the growth of bacteria and tested oregano oil was the only one that showed activity against all samples with values of minimum inhibitory concentration (MIC) ranging from 8-1% ( v / v). While the oils of thyme and cinnamon were effective in 91.3% (42/46) and 80.43% (37/46) of samples, respectively. MIC values for the peas ranged from 8-4% (v / v) and cinnamon were 8-2% (v / v). Regarding the techniques, one can observe that the microdilution broth showed better results than disk diffusion, although it is difficult to compare the results due to the peculiar characteristics of oils, as viscosity, volatility, and different affinity for water. Furthermore, the broth microdilution provides semi-quantitative values, while the disk diffusion method results are described qualitatively. Although no standardizations today to evaluate the inhibitory effect of oils on the growth of micro-organisms, with this study we can see that the oils, especially oregano, are a natural alternative for applications in industry for the reduction of Salmonella in products.
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Ação cicatrizante e atividade antibacteriana a estirpes de Staphylococcus resistentes do extrato etanólico de Psidium guajava

SILVA, Adriano Barbosa da 23 February 2016 (has links)
Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-08-01T13:14:44Z No. of bitstreams: 1 Adriano Barbosa da Silva.pdf: 2027014 bytes, checksum: 25e6582ac2ac89419339fdf4fb2243ac (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-01T13:14:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Adriano Barbosa da Silva.pdf: 2027014 bytes, checksum: 25e6582ac2ac89419339fdf4fb2243ac (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The use of medicinal plants is a human therapeutic resource dated years before the Christian era being the popular knowledge a vehicle for spreading the efficiency of such herbal medicines which will serve technological generations in the development of new low-cost drugs and lower residual impact. The objective of this research was to evaluate the antimicrobial activity and healing of Psidium guajava on strains of Staphylococcus. Four strains of Staphylococcus sciuri (SsI, SsII, SsIII and SsIV), one of Staphylococcus xylosus (Sx) as well as the control strain Staphylococcus aureus (Sa) were compared to the P. guajava extract and antibiotics. For infection control tests 20 Wistar mice were used, all males, separated into 4 groups of 5 mice each. The leaves of the plant were crushed to obtain the extract and 10, 50, 120, 210, 330, 400, 480, 530, 650 and 900 μL/ml treatments. Its toxicity was evaluated by DL-50. The resistance profile and antimicrobial activity were evaluated by the disk-diffusion method, the control of infection and healing were recorded after the subcutaneous application of the extract and the positive control (antibiotic). Only the treatments with 650 and 900 uL/mL were considered toxic with LD-50 values over 50%. All strains were sensitive to the extract with inhibition halos over 20 mm. They were considered to be resistant to oxacillin antibiotics and penicillin G strains SsII, Sx and SsIV and the immuno-histochemistry evaluation showed that in the groups of animals that received the extract as a treatment there was re-epithelialisation with denser collagen fibers as compared to other groups. Thus there is a great therapeutic potential of P. guajava as a promising natural resource for the development of more affordable drugs to the population and low residual impact. / O uso de plantas medicinais é um recurso terapêutico popular difundido pelas gerações ao longo dos tempos de forma empírica. A crescente necessidade de fármacos mais eficientes e com menores efeitos adversos tem levado ao estudo aprofundado desses fitoquímicos por diversos grupos de pesquisa. O objetivo desta pesquisa foi avaliar as atividades antimicrobiana e cicatrizante do extrato etanólico de Psidium guajava L. sobre estirpes de Staphylococcus. Foram avaliadas quatro estirpes de Staphylococcus sciuri (SsI, SsII, SsIII e SsIV) e uma de Staphylococcus xylosus (Sx), além da cepa controle ATCC 25923 de Staphylococcus aureus (Sa) frente ao extrato de P. guajava e antibióticos. Para os teste de controle de infecção foram utilizados 20 ratos Wistar todos machos adultos separados em 4 grupos com 5 ratos cada. As folhas do vegetal foram trituradas para obtenção do extrato etanólico e tratamentos de 10, 50, 120, 210, 330, 400, 480, 530, 650 e 900 μL/mL. Sua toxicidade foi avaliada por DL-50. O perfil de resistência e a atividade antimicrobiana foram avaliados pelo método de disco-difusão, sendo o controle de infecção e cicatrização verificado a partir da aplicação subcutânea do extrato e do controle positivo (antibióticos). Apenas os tratamentos de 650 e 900 μL/mL foram considerados tóxicos com valores de DL-50 maiores que 50%. Todas as estirpes se mostraram sensíveis ao extrato com halos de inibição maiores de 20 mm. Foram consideradas como resistentes aos antibióticos oxacilina e penicilina G as estirpes SsII, Sx e SsIV e a avaliação histoquímico demonstrou que nos grupos dos animais que receberam o extrato como tratamento houve reepitelização com fibras colágenas mais densas em comparação aos demais grupos. Com isso verifica-se um grande potencial terapêutico de P. guajava como promissor recurso natural para o desenvolvimento de fármacos mais acessíveis às populações e de baixo impacto residual.
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Estudo farmacognóstico e determinação da atividade biológica de Caesalpinia pyramidalis Tull. e Schinopsis brasiliensis Engl. frente a cepas de Staphylococcus aureus MRSA multirresistentes

Marcos Saraiva, Antonio January 2007 (has links)
Made available in DSpace on 2014-06-12T16:31:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6185_1.pdf: 1986687 bytes, checksum: 8a72beab280fcdc564c73079c55a4aee (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / O aumento da resistência bacteriana aos antibióticos é uma ameaça à saúde da população mundial, aumentando as recorrências por doenças infecciosas, devido ao surgimento de bactérias multirresistentes que dificulta e onera o tratamento antimicrobiano. Um exemplo importante destes germes, é o S. aureus MRSA que no Brasil, como em outras partes do mundo, são os microorganismos frequentemente isolados, tendo sua maior prevalência a nível hospitalar, sendo também uma importante causa de infecções na comunidade. A ocorrência de S. aureus MRSA multirresistentes susceptíveis só a vancomicina, constitui um grave problema a resolver, ainda mais, com o surgimento recente de cepas de S. aureus com susceptibilidade intermediária e resistentes a vancomicina. Deste fato, é de fundamental importância, a pesquisa de compostos alternativos, principalmente a partir de plantas medicinais que constitui uma fonte inesgotável de novas moléculas. No presente trabalho, foram escolhidas duas plantas para estudar o perfil fitoquímico e antimicrobiano: Caesalpinia pyramidalis Tull. (Catingueira), das leguminosas e Schinopsis brasiliensis Engl. (Baraúna ou braúna), das anacardiáceas, ambas as famílias com representantes de reconhecida atividade biológica, incluída a antimicrobiana. Neste sentido foi estudada a atividade dos extratos secos (por extração hexanólica, em acetato de etila ou metanol) da folha, casca do caule, casca da raiz, flor, vagem e semente da Braúna e Catingueira inicialmente frente a padrões ATCC de bactérias Gram negativas e Gram positivas, confirmando-se uma melhor ação para Staphylococcus aureus. Na segunda etapa os ensaios foram realizados com 22 cepas de Staphylococcus aureus, 18 isolados clínicos MRSA multirresistentes identificados como Clones Epidêmicos, 2 isolados S. aureus MSSA e 2 cepas padrões ATCC. Dos resultados obtidos para as plantas em estudo, a Schinopsis brasiliensis apresentou melhor atividade sobre as cepas de S. aureus, inclusive os clones epidêmicos mais resistentes. Os extratos secos de extração metanólica foram mais ativos com dados de CMI para a flor e raiz de Braúna de 125 &#956;g.mL-1 quanto que pela técnica de poços foram obtidos para uma das cepas de Staphylococcus aureus MRSA multirresistente (CEB) halos da ordem de 20 mm. Os extratos secos de extração por acetato de etila mostraram-se menor ação, o que pode ser atribuído à uma difusão diminuída no agar. Nos testes, os antibióticos usados como padrão foram tetraciclina e oxacilina na determinação das CMI e tetraciclina na técnica de poços, confirmando a oxacilina o caráter MRSA ou MSSA das cepas e a tetraciclina seu perfil de resistência. Os dois diluentes utilizados DMSO à 50% e Tween 80 à 4% não apresentaram nenhuma inibição. Concluindo, considera-se que as plantas em estudo e particularmente a Schinopsis brasiliensis apresentou uma atividade promissora sobre as cepas de S. aureus MRSA inclusive os clones multirresistentes, considerando-se que em parte esta atividade é justificada pela presença de flavonóides e, especialmente, ácidos fenólicos que foram detectados experimentalmente por bioautografia confirmando dados da literatura e por screening fitoquímico
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Plantas medicinais tradicionalmente utilizadas no Nordeste do Brasil: potencial antimicrobiano para tratar distúrbios das vias gênito-urinárias

MARANGONI, Carmen 15 April 2015 (has links)
Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-05-09T14:32:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Carmen Marangoni_PPGBV_CCB_2015.pdf: 2902792 bytes, checksum: be5b9acdf98bf4f4ba08a353a0ed4480 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-09T14:32:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Carmen Marangoni_PPGBV_CCB_2015.pdf: 2902792 bytes, checksum: be5b9acdf98bf4f4ba08a353a0ed4480 (MD5) Previous issue date: 2015-04-15 / CNPq / As infecções das vias gênito-urinárias são uma realidade muito difundida mundialmente. São causadas por bactérias, fungos e protozoários que colonizam os tecidos urogenitais. Existem muitos produtos naturais à base de plantas que demostraram ter eficácia no tratamento desses distúrbios. No Brasil, em muitas regiões, o emprego das plantas medicinais é prática comum. Estudos etnobotânicos realizados no Nordeste do Brasil com populações tradicionais, incluindo tribos indígenas, indicam que muitas plantas são utilizadas para tratar distúrbios das vias gênito-urinárias. Para melhor entender as práticas de cura tradicionais e corroborar as suas eficácia, neste estudo avaliou-se o potencial antimicrobiano in vitro de uma seleção de plantas medicinais tradicionalmente utilizadas para tratar esses tipo de transtorno por duas populações indígenas, os Pankararu e os Fulni-ô, que habitam a região semiárida do Nordeste do Brasil. As plantas foram coletadas no final da estação chuvosa na comunidade rural de Riachão de Malhada de Pedra, município de Caruaru. Extratos aquosos e hidroalcoólicos foram preparados com a parte da planta tradicionalmente utilizada e a avaliação da atividade antimicrobiana foi realizada com a técnica da microdiluição, testando os extratos frente microrganismos capazes de colonizar o aparelho urogenital (Candida albicans, C. tropicalis, Enterococcus faecalis, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, S. saprophyticus). A avaliação da atividade anti- Trichomonas vaginalis foi realizada através do teste da viabilidade dos trofozooides. Foi realizado o perfil fitoquímico e avaliada a atividade antioxidante dos extratos obtidos da forma tradicional. Foi também testada a correlação entre atividade antimicrobiana e uso tradicional, reportado como índice de Importância Relativa de Uso. Os resultados mostraram que os microrganismos mais susceptíveis foram os dois pertencentes ao gênero Staphylococcus, sendo os extratos aquoso e hidroalcoólico de Maytenus rigida e Spondias tuberosa os mais ativos (MIC = 0.2 mg/mL). As plantas cujos extratos da casca demonstraram maior espectro de ação foram Anacardium occidentale, Myracrodruon urundeuva e S. tuberosa. A maioria dos extratos testados mostrou atividade frente ao protozoário T. vaginalis. Os extratos de Sideroxylon obtusifolium mostraram uma toxicidade contra ao parasita comparável à do metrodinazol. O teor de taninos encontrado nos extratos mostrou ter uma correlação significativa com a atividade antimicrobiana, indicando um papel dessa classe de compostos na atividade aqui registrada. Encontrou-se também uma correlação significativa entre a atividade antimicrobiana e o uso tradicional. As espécies que apresentam maior atividade antioxidante foram Anadenanthera colubrina, M. urundeuva, S. tuberosa que coincidiram com as espécies que apresentaram os maiores teor de fenóis totais. O teor de flavonoides não parece estar correlato com a atividade antioxidante. Os resultados aqui apresentados apontam que as espécies A. occidentale, M. urundeuva e S. tuberosa produzem substâncias ativas frente a todos os microrganismos testados, justificando o uso tradicional. Essas três espécies, juntas com M. rigida e S. obtusifolium mostraram atividades promissora para o desenvolvimento de novos tratamentos contra T. vaginalis. / The urogenital infections are a common reality worldwide, caused by bacteria, yeasts and protozoans which are able to colonize the urogenital tissues. Several plant-based products demonstrated efficacy in treating this kind of disturbs. Ethnopharmacological surveys realized with traditional populations, including indigenous ones, in the Northeastern semiarid region of Brazil, showed that several plant species are utilized to treat urinary and genital tracts infections. To better understand the traditional medicine practices and corroborate their efficacy, in this study the antimicrobial potential of eight medicinal plants used to treat urogenital infections by two indigenous tribes, Pankararu e Fulni-ô, located in the Northeastern Brazil, was tested in vitro. The plant material was collected at the end of the rain season in the rural community Riachão de Malhada de Pedra, Caruaru district, in the agreste of the Pernambuco state. Aqueous and hidroalcoholic extracts were obtained using the part of the plant traditionally used. The antimicrobial assay was performed with the microdiluition method against human pathogens able to colonize the urogenital system (Candida albicans, C. tropicalis, Enterococcus faecalis, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, S. saprophyticus). The anti-Trichomonas vaginalis activity was evaluate testing the viability of the trophozoites. The phytochemical profile of the extracts was realized and the antioxidant activity was measured too. Furthermore the correlation between the antimicrobial activity and the traditional use, using the Relative Use Importance index, was tested. The results showed that the most susceptive of the tested microorganism were the two Staphylococcus species, being the aqueous and hidoalcoholic extracts of Maytenus rigida and Spondias tuberosa the most active ones (MIC = 0,2 mg/mL). Anacardium occidentale, Myracrodruon urundeuva and S. tuberosa bark extracts were found to have the broadest spectrum of activity. The majority of the extracts showed an anti-T. vaginalis activity. Sideroxylon obtusifolium extracts showed the higher activity toward the parasite, comparable with metrodinazol one. A positive correlation was encountered between the quantity of tannins and the antimicrobial activity, this indicates the role of this class of compounds in the activity here reported. A significant correlation was also found between the antimicrobial activity and the traditional use. The species presenting the higher antioxidant activities were Anadenanthera colubrina, M. urundeuva, S. tuberosa, which are the species with the higher total phenols content. No correlation between flavonoids content and antioxidant activity was found. The results of this study indicate that A. occidentale, M. urundeuva e S. tuberosa synthetize substances which act towards all the tested microorganism, justifing the traditional use of these medicinal plants. These three species, along with M. rigida and S. tuberosa showed a strong anti-T. vaginalis activity, which is promising for the development of new treatments for this protozoan infections.
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Avaliação toxicológica e atividades antimicrobiana e antiinflamatória de extrato etanólico de folhas de Morus Alba L. (Moraceae)

OLIVEIRA, Alisson Macário de 13 August 2015 (has links)
Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-12-12T13:41:02Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Alisson_Disssertação_Final_2015.pdf: 4745802 bytes, checksum: 6e96787b9b69ca08b2dfe6e99ae18b3f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-12T13:41:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Alisson_Disssertação_Final_2015.pdf: 4745802 bytes, checksum: 6e96787b9b69ca08b2dfe6e99ae18b3f (MD5) Previous issue date: 2015-08-13 / CAPES / FACEPE / CNPQ / Morus alba L. (amoreira branca) é uma planta utilizada em todo o mundo no tratamento de diversas enfermidades, incluindo distúrbios inflamatórios. Essa planta tem origem asiática, mas demonstrou boa adaptação ao solo brasileiro. Diante da expansão do uso medicinal de M. alba, inclusive comercialmente, o presente trabalho teve por objetivos construir um painel de toxicidade para extrato etanólico das folhas dessa planta e determinar seu potencial como agente antimicrobiano e anti-inflamatório. O extrato foi analisado quanto à composição química por cromatografia em camada delgada. As análises toxicológicas realizadas foram: ensaio de letalidade para o microcrustáceo Artemia salina (concentrações: 100–1000 μg/mL); ensaio de toxicidade aguda por via oral para camundongos (doses: 300 e 2000 mg/kg); determinação da genotoxicidade in vivo para camundongos através do teste do micronúcleo (doses: 75, 150 e 300 mg/kg v.o.); e ensaios de citotoxicidade para as células tumorais humanas NCI-H292, HEp-2, HT-29, MCF-7 e HL-60 (concentração: 50 μg/mL). Na avaliação do potencial anti-inflamatório, foi utilizado o modelo de inflamação aguda induzida por carragenina em bolsão de ar (doses: 75, 150 e 300 mg/kg v.o.). A ação anti-inflamatória foi avaliada através da quantificação do número de leucócitos nos exsudatos coletados dos bolsões. Atividade antimicrobiana foi avaliada contra bactérias e fungos de importância médica. A análise fitoquímica revelou a presença de cumarinas, flavonoides, taninos e triterpenos no extrato, o qual não promoveu mortalidade dos náuplios de A. salina. No teste de toxicidade aguda, não houve mortalidade nem alterações comportamentais nos camundongos tratados com o extrato durante 14 dias. Contudo, a análise de parâmetros hematológicos e bioquímicos revelou que os animais que receberam a dose mais alta apresentaram valores significativamente (p < 0,05) menores de volume corpuscular médio eritrocitário (VCM) e concentração média de hemoglobina corpuscular (CMHC), bem como atividade aumentada de fosfatase alcalina no plasma. Nos tratamentos com o extrato a 300 e 2000 mg/kg, houve redução no número de leucócitos, com diminuição da percentagem de linfócitos e aumento na proporção de células segmentadas. Análise histopatológica dos órgãos dos animais tratados com o extrato a 2000 mg/kg revelou turgidez dos túbulos contorcidos renais, presença de infiltrado leucocitário ao redor da veia centrilobular hepática e elevada dispersão da polpa branca esplênica. Avaliação do potencial genotóxico in vivo revelou que o extrato não causou aumento na frequência de micronúcleos, em comparação com o controle negativo. O extrato também não demonstrou citotoxicidade para as linhagens celulares testadas. Com base nos resultados obtidos nos testes de toxicidade, o potencial anti-inflamatório do extrato foi avaliado utilizando doses menores e igual a 300 mg/kg. Foi verificada redução do número de leucócitos nos grupos tratados com 75 (56,8%), 150 (62,9%) e 300 (65,6%) mg/kg, em comparação com o grupo controle. A dose de 300 mg/kg mostrou efeito de inibição similar ao observado no grupo padrão, que recebeu indometacina a 10 mg/kg, i.p (64,7%). Por fim, o extrato apresentou atividade antimicrobiana contra Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, Candida krusei, Candida tropicalis e Aspergillus flavus. Em conclusão, o extrato etanólico de folhas de M. alba apresentou potencial anti-inflamatório e antimicrobiano, não sendo letal nem apresentando efeito genotóxico para camundongos quando ingerido na dose de 300 mg/kg. Contudo, a utilização do extrato na dose de 2000 mg/kg deve ser evitada, devido às alterações bioquímicas, hematológicas e histopatológicas detectadas no ensaio de toxicidade aguda. / Morus alba L. (white mulberry) is a plant used around the world for treatment of several infirmities, including inflammatory disorders. This plant is originated from Asia but showed good adaptation to Brazilian soil. In view of the expansion of the medicinal use of M. alba, including commercially, the present work aimed to build a toxicity panel for an ethanolic extract from leaves of this plant and to determine its potential as antimicrobial and anti-inflammatory agents. The extract was analyzed for chemical composition through thin layer chromatography. The toxicological analyses performed were: lethality assay with the microcrustacean Artemia salina (concentrations: 100–1000 μg/mL); acute oral toxicity assay to mice (doses: 300 and 2000 mg/kg); determination of in vivo genotoxicity to mice by micronucleus test (doses: 75, 150 and 300 mg/kg per os); and cytotoxicity assays to the human tumor cells NCI-H292, HEp-2, HT-29, MCF-7 and HL-60 (concentration: 50 μg/mL). In the evaluation of anti-inflammatory potential, it was used the model of acute inflammation induced by carrageenan in air pouch (doses: 75, 150 and 300 mg/kg per os). The anti-inflammatory action was evaluated by the quantification of the number of leukocytes in exudates collected from the pouches. Antimicrobial activity was evaluated against bacteria and fungi of medical importance. The phytochemical analysis revealed the presence of coumarins, flavonoids, tannins and triterpenes in the extract, which did not promote mortality of A. salina nauplii. In the acute oral toxicity assay, there was no mortality or behavioral alterations in mice treated with the extract during 14 days. However, the analysis of hematologic and biochemical parameters revealed that animals that received the highest dose showed significantly (p < 0.05) lower values of mean erythrocyte corpuscular volume (MCV) and mean concentration of corpuscular hemoglobin (MCHC) as well as increased activity of alkaline phosphatase in plasma. In the treatments with the extract at 300 and 2000 mg/kg, there was reduction in the number of leukocytes, with decrease of lymphocyte percentage and increase in the proportion of segmented cells. Histopathological analysis of the organs from animals treated with the extract at 2000 mg/kg revealed turgidity of renal contorted tubules, presence of leukocyte infiltration around the hepatic centrilobular vein and high dispersion of the spleen white pulp. Evaluation of the in vivo genotoxic potential revealed that the extract did not cause increase in the frequency of micronuclei, in comparison with negative control. The extract also did not show cytotoxicity to the cell lines tested. Based on the results obtained in the toxicity assays, the anti-inflammatory potential of the extract was evaluated using doses lower and equal to 300 mg/kg. It was verified a reduction in the number of leukocytes in the groups treated with the extract at 75 (56.8%), 150 (62.9%) and 300 (65.6%) mg/kg, in comparison with control group. The dose of 300 mg/kg showed inhibitory effect similar to that observed in the standard group, which received indometacin 10 mg/kg, i.p (64.7%). Finally, the extract showed antimicrobial activity against Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, Candida krusei, Candida tropicalis and Aspergillus flavus. In conclusion, the ethanolic extract from M. alba leaves showed anti-inflammatory and antimicrobial potential, being not lethal and showing no genotoxic effect when ingested by mice at the dose of 300 mg/kg. However, the use of the extract at 2000 mg/kg should be avoided, due to the biochemical, hematological and histopathological alterations detected in the acute toxicity assay.
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DERIVADOS DA GLUCOSAMINA: SÍNTESE E ATIVIDADE BIOLÓGICA

Santos, Maura Zubiaurre dos 26 March 2010 (has links)
Made available in DSpace on 2018-06-27T18:56:32Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Maura Zubiaurre dos Santos.pdf: 1338832 bytes, checksum: 234dfe007337129aa96815091aad7c42 (MD5) Maura Zubiaurre dos Santos.pdf.txt: 74878 bytes, checksum: fe3a8ab94635867f402fde8650d28b72 (MD5) Maura Zubiaurre dos Santos.pdf.jpg: 3071 bytes, checksum: 63c016cce951cddaa53f7b933b5a025c (MD5) Previous issue date: 2010-03-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / In the present work, several compounds derived from monosacharide D-Glucosamine were synthetized. These compounds were used successfully against gram-positive and gram-negative microorganisms. In the synthesis of compounds, classical methods in organic chemistry were used.The products were readily prepared from D-Glucosamine in few easy steps. In the first step, we have obtained he imine derivatives 2a or 2b. The resultant imines were protected in the OH groups at C1, C3, C4 and C6 positions with acetyl group. Selective desprotection of C2 aminogroup and coupling with cmnamic acid fford compound 5. All compounds were tested as antimicrobial agents against gram-positive and gram-negative microorganisms. Best results were obtained when compound 2b was used. / No presente trabalho, foram sintetizados vários compostos derivados da D-Glucosamina. Estes compostos foram usados com sucesso contra microorganismos grampositivos e gram-negativos. Na síntese dos compostos, foram utilizados métodos clássicos em química orgânica. Os produtos foram facilmente preparados a partir da D-glucosamina em poucas etapas. Na primeira etapa, foram obtidas as iminas derivadas 2a ou 2b. As iminas resultantes foram protegidas nos grupamentos OH ligados nas posições C1, C3, C4 e C6, por grupos acetila. Desproteção seletiva do grupamento amino ligado na posição C2, e posterior acoplamento com ácido cinâmico, forneceu o composto 5. Todos os compostos foram testados como agentes antimicrobiannos contra microorganismos gram-positivos e gram-negativos. Os melhores resultados foram obtidos quando o composto 2b foi utilizado.

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