Doctor en Farmacología / La cardiopatía coronaria (CC), es la principal causa de muerte en Chile y en países desarrollados. La etiología más frecuente es la ateroesclerosis, reconociéndose ésta como una enfermedad dinámica y progresiva en la que se combina la disfunción endotelial, inflamación y la acumulación de lípidos y elementos fibrosos en las arterias en forma de placas. Los inhibidores de la 3-hidroxi 3-metilglutaril coenzima A reductasa (HMG-CoA), estatinas son uno de los medicamentos más efectivos en el tratamiento de la hipercolesterolemia. Estos han sido ampliamente utilizados en la clínica, para reducción el colesterol total y LDL (cLDL). Además el tratamiento con estatinas también ha mostrado reducir los niveles plasmáticos de la proteína C reactiva (PCR) de una manera independiente de la reducción del colesterol, de igual manera estos fármacos han mostrado poseen propiedades antioxidantes. Aunque los beneficios del tratamiento con estatinas han sido establecidos tanto en la prevención primaria como secundaria de la CC, diferencias farmacológicas interindividuales se observan con este tratamiento, las que se atribuyen a diferencias genéticas. Estudios relacionados con la variaciones genéticas en el gen de la HMGCoA reductasa (HMGCR), el blanco directo del tratamiento con estatinas y su influencia con los cambios en los niveles de los lípidos plasmáticos han sido limitados. Estudios previos han indicado que el polimorfismo (TTA)n de número variable de repeticiones en tandem (VNTR) en el gen HMGCR se asocia a patologías como la CC y la hipercolesterolemia. Se ha descrito el polimorfismo de repetición (TTA)n en el gen de la HMGCR y la absorción de colesterol en respuesta al consumo de esteres de estanol. El objetivo del presente estudio consistió en evaluar la influencia del polimorfismo (TTA)n en el gen de la HMG-CoA reductasa en la magnitud de la reducción del cLDL por atorvastatina en pacientes chilenos con CC. El objetivo secundario fue determinar los cambios en los niveles plasmáticos de colesterol total, PCR ultrasensible (PCRu) y F2-isoprostanos después del tratamiento con atorvastatina y su relación con la presencia del polimorfismo (TTA)n en pacientes con CC. Este estudio fue aprobado por el Comité de Ética del Hospital Clínico de la Universidad de Chile y todos los pacientes dieron su consentimiento para la participación en el estudio. Sesenta y cuatro pacientes con CC documentada, completaron este estudio, ellos recibieron 40 mg/día de atorvastatina por 8 semanas. Los niveles lípidos plasmáticos; colesterol total, colesterol HDL (cHDL) y triglicéridos se determinaron utilizando métodos enzimáticos, el cLDL se calculó utilizando la formula de Friedewald. Los niveles de PCRu se determinaron con una reacción antígeno-anticuerpo utilizando la técnica de látex y los niveles de F2-isoprostanos se midieron utilizando inmunoensayo. La genotipificación de los pacientes participantes del estudio se realizó mediante la técnica de reacción de la polimerasa en cadena (PCR). Los principales resultados de este estudio fueron: • La distribución del polimorfismo (TTA)n en el gen de la HMG-CoA reductasa en 64 pacientes fue: genotipo >10/>10 en 22 pacientes (34%), genotipo >10/10 en 14 pacientes (22%) y genotipo 10/10 en 28 pacientes (44%) • Atorvastatina redujo significativamente los niveles plasmáticos de cLDL en todos los pacientes (p< 0,0001), después de 8 semanas de tratamiento. Esta reducción fue independiente del tipo de alelo (TTA)n en el gen de la HMGCR. • Los niveles de la PCRu disminuyeron en los pacientes tratados con atorvastatina, sólo los alelos (TTA)n >10/>10 y 10/10 en el gen HMGCR (p<0,05). • Los niveles plasmáticos de F2-isoprostanos y colesterol total disminuyeron significativamente después del tratamiento con atorvastatina, para todos los alelos (p< 0,001). A partir de estos resultados se concluye que no hubo asociación entre el polimorfismo (TTA)n presente en el gen de la enzima HMG-CoA reductasa y la magnitud de la reducción de los niveles plasmáticos de cLDL, colesterol total, PCRu y F2-isoprostanos en una muestra de pacientes chilenos con CC crónica estable tratados por 8 semanas con atorvastatina / Coronary Artery Disease (CAD) is the main cause of death in Chile and in developed countries. The most frequent ethiology is the atherosclerosis. Atherosclerosis is recognized as a dynamic and progressive disease, in which ethiology participate a combination of endothelial dysfunction and inflammation and is characterized by the accumulation of lipid and fibrous elements in the large arteries, as plaques fibrous. One of the drugs that has shown to be more effective on the treatment of hipercholesterolaemia, are the inhibitors of 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A (HMG-CoA) reductase, statins have been clinically used for lowering total and lowdensity lipoprotein cholesterol (LDL-C). Statins therapy also lowers C-reactive protein (CRP) levels in a LDL cholesterol-independent manner. Statins also have antioxidant properties. Although the beneficial effects of statins treatment in the primary and secondary prevention of CAD have been established, interindividual pharmacological differences observed with this treatment have been attributed to genetic differences. Studies about genetic variations in HMG-CoA reductase gene (HMGCR), the direct target of statin therapy, and the relation with the changes in lipid levels with statin therapy are limited. Previous studies have indicated that variable number of tandem repeats (VNTR) polymorphism (TTA)n of the HMGCR gene was associated with pathologies such as CAD and hypercholesterolemia. Moreover, it has been reported an almost significant difference between the (TTA)n repeat polymorphism in the HMGCR gene and cholesterol absorption in response to plant stanol consumption. The aim of the present study was to evaluate the role of HMG-CoA reductase gene (HMGCR) (TTA)n repeat polymorphism in relation to the LDL-C lowering efficacy of atorvastatin in Chilean patients with CAD. A secondary objective was to determine the change in levels of total cholesterol, high-sensitivity CRP (hsCRP) and free F2- isoprostanes after atorvastatin treatment and its relation with the presence of HMGCR (TTA)n polymorphism in patients with CAD. This study was approved by the Ethics Committee of the Clinical Hospital of the University of Chile, and all patients gave their informed consent. Sixty-four patients with documented CAD completed the trial receiving 40 mg of atorvastatin daily for 8 weeks. Lipid levels as, total cholesterol, high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C) and serum triglyceride levels were determined using enzymatic methods. LDL-C was calculated using the Friedewald´s formula. The hsCRP levels were determined by latex method assay and free F2-isoprostanes were performed using enzyme immunoassay (EIA). Genotyping was done by the polymerase chain reaction. The results of this study were: • The genotype distribution of the HMGCR (TTA)n polymorphism was: Allele >10/>10 in 22 of 64 patients (34%) Allele >10/10 in 14 of 64 patients (22%) Allele 10/10 in 28 of 64 patients (44%). • Atorvastatin significantly reduced LDL-C levels in all patients (p<0.0001), regardless the type of HMGCR (TTA)n polymorphism. • Reduction on hsCRP were observed in atorvastatin-treated patients with HMGCR (TTA)n alleles >10/>10 and 10/10 (p<0.05). • Free F2-isoprostanes and total cholesterol were also reduced significantly after treatment for all alleles (p<0.001). In summary we found in a sample of patients with chronic stable CAD, no associations were found in the atorvastatin-induced reduction of LDL-C, total cholesterol, hsCRP and free F2- isoprostanes with the HMGCR (TTA)n polymorphism

Orientador: Leonardo Perez Faverani / Resumo: Objetivo: O presente estudo teve como objetivo comparar o efeito da Atorvastatina, aplicada de forma local e sistêmica, em defeitos críticos de calotas de ratos. Material e médodos: 36 (trinta e seis) ratos (Rattus norvegicus, albinus, Wistar), adultos foram divididos aleatoriamente em 3 grupos, o grupo aplicação de membrana de colágeno com água destilada (GAD) com defeitos de tamanho crítico contendo água destilada; o grupo aplicação Sistêmica de Atorvastatina (GAS) foram realizado defeitos de tamanho crítico e os animais foram tratados com atorvastatina (3,6mg/kg/dia) por gavagem; e o grupo de aplicação local de Atorvastatina (GAL) com defeitos de tamanho crítico contendo Atorvastatina. Cada grupo foi avaliado através da histometria, mensuração do defeito residual, área de osso néo formado (AON), área de membrana e tecido mole, contagem de células (osteócitos, osteoblastos, células inflamatórias) e imunoistoquímica (OSTEOCALCINA e CD31), nos períodos de 14 e 28 dias. Resultados: Os dados mostraram diminuição do defeito residual para GAS quando comparada ao GAL (p=0,024) e ao GAD (p=0,033), o GAS revelou diminuição de número de osteócitos em comparação ao GAD (p=0,026), e em comparação com GAL (p=0,020). Os osteoblastos não apresentaram diferença entre os grupos (p>0,05), a quantidade de fibroblastos mostrou maiores somente para o GAL de 14 para 28 dias (p=0,019). Aos 28 dias, tanto para GAL quanto GAS, a quantidade de células inflamatórias foram maiores comparadas ao GAD (p... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Objective: This study aimed to compare the effect of Atorvastatin, applied locally and systemically, on critical defects of rat caps. Material and medicaments: 36 (thirty-six) rats (Rattus norvegicus, albinus, Wistar), adults were randomly divided into 3 groups, the collagen membrane application group with distilled water (GAD) with critical size defects containing distilled water; the systemic application group of Atorvastatin (GAS) was performed with critical size defects and the animals were treated with atorvastatin (3.6mg/kg/day) per gavage; and the local application group of Atorvastatin (GAL) with critical size defects containing Atorvastatin. Each group was evaluated by histometry, measurement of the residual defect, area of neo formed bone (AON), area of membrane and soft tissue, cell count (osteocytes, osteoblasts, inflammatory cells) and immunohistochemistry (OSTEOCALCINE and CD31), in periods of 14 and 28 days. Results: The data showed a decrease of residual defect for GAS when compared to GAL (p=0.024) and GAD (p=0.033), GAS showed a decrease of osteocytes in comparison to GAD (p=0.026), and in comparison to GAL (p=0.020). The osteoblasts did not present difference between the groups (p>0.05), the amount of fibroblasts showed higher only for the GAL from 14 to 28 days (p=0.019). At 28 days, both for GAL and GAS, the amount of inflammatory cells were higher compared to GAD (p<0.05). The immunohistochemistry marking for CD31 showed no change, and CSF in osteoblasts... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:36:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 340833.pdf: 3205840 bytes, checksum: 95520217f8b3b1a98d1f219fc5a34778 (MD5) Previous issue date: 2016 / A atorvastatina é um fármaco da classe das estatinas, utilizado na clínica médica há algumas décadas para o tratamento dos altos níveis de colesterol sérico. Estudos têm demonstrado que além deste efeito primário, a atorvastatina desencadeia efeitos pleiotrópicos. Os efeitos neuroprotetor e tipo-antidepressivo da atorvastatina têm sido demonstrados, no entanto, os mecanismos celulares e moleculares, a participação de vias de sinalização e neurotransmissores, bem como a associação entre esses eventos ainda precisam ser elucidados. Desta forma, investigou-se: i) o envolvimento dos sistemas adenosinérgico, serotonérgico e da via de sinalização PI3K/Akt /GSK-3ß/mTOR no efeito tipo-antidepressivo da atorvastatina e ii) o efeito tipoantidepressivo e neuroprotetor do tratamento repetido com atorvastatina frente as alterações induzidas pelo peptídeo Aß1-40, bem como pela toxicidade induzida por glutamato. Os resultados demonstraram que a atorvastatina desencadeia efeito tipo-antidepressivo que depende da modulação dos receptores A1 de adenosina, mas não dos receptores A2A ou dos níveis de adenosina. O efeito tipo-antidepressivo da atorvastatina também depende da modulação dos receptores de serotonina (5-HT) dos subtipos 5-HT1A e 5-HT2A/C e dos níveis encefálicos de 5-HT. Demonstrou-se que a via de sinalização PI3K/Akt/GSK-3ß/mTOR é crucial para o efeito tipo-antidepressivo da atorvastina, através de testes comportamentais e pelo aumento da fosforilação hipocampal das proteínas Akt, GSK-3ß e mTOR. O efeito tipo-antidepressivo e neuroprotetor da atorvastatina frente às alterações comportamentais e neurotóxicas induzidas pelo peptídeo Aß1-40 dependem do aumento da razão mBDNF/pró-BDNF ocasionado pela clivagem induzida pelas proteases tPA e p11. A atorvastatina previne ainda o aumento hipocampal de óxido nítrico, de espécies reativas de oxigênio, bem como a alteração do potencial de membrana mitocondrial e a perda de viabilidade celular ocasionada pela toxicidade induzida por glutamato in vitro. Resultado similar foi observado para o tratamento com fluoxetina. A associação entre o efeito tipo-antidepressivo e neuroprotetor do tratamento repetido com atorvastatina foi evidenciado, e demonstrou-se que o tratamento agudo com atorvastatina não exerce efeito neuroprotetor frente à toxicidade glutamatérgica. Desta forma, esta tese contribui para demonstrar os mecanismos celulares e moleculares envolvidos no efeito tipo-antidepressivo e neuroprotetor da atorvastatina.<br> / Abstract : Atorvastatin is a drug that belongs to statins group and that is largely used in clinical medicine for the treatment of high serum cholesterol levels. Studies have shown that in addition to this primary effect, atorvastatin also triggers pleiotropic effects. The neuroprotective and antidepressant-like effects of atorvastatin have been demonstrated, however cellular and molecular mechanisms, the involvement of signaling pathways and neurotransmitters, as well as the association between these events remain to be elucidated. Thus we investigated: i) the involvement of adenosinergic and serotonergic systems and the PI3K/Akt/GSK-3ß/mTOR signaling pathway in the antidepressant-like effect of atorvastatin, and ii) the neuroprotective and antidepressant- like effect provided by repeated atorvastatin treatment against Aß1-40- induced alterations or glutamate-induced toxicity. Atorvastatin exerts antidepressant-like effect that depends on the adenosine A1 receptors, but not on adenosine levels or A2A receptors. The atorvastatin antidepressant-like effect also depends on serotonin (5-HT) levels and 5- HT1A and 5-HT2A/C receptors subtypes. We also demonstrated that PI3K/Akt/GSK-3ß/mTOR signaling pathway is critical for atorvastatin antidepressant-like effect, by behavioral tests and increased phosphorylation of Akt, GSK-3ß and mTOR in mice hippocampus. The neuroprotective and antidepressant-like effect of atorvastatin against Aß1-40-induced toxicity depends on the increase in mBDNF/pro-BDNF ratio promoted by tPA and p11 proteases. Atorvastatin also prevents hippocampal increase of nitric oxide, reactive oxygen species and the alteration of mitochondrial membrane potential and cell viability induced by in vitro glutamate challenge. Similar results were observed for fluoxetine treatment. The association between the antidepressant-like and neuroprotective effect of atorvastatin-repeated treatment was shown and acute atorvastatin treatment showed no effect on glutamate-induced toxicity. This study contributed to unravel the cellular and molecular mechanisms involved in the neuroprotective and antidepressant-like effects of atorvastatin.

Unidad de práctica para optar al título de Químico Farmacéutico / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento / La bioequivalencia en medicamentos permite demostrar que dos productos farmacéuticos son equivalentes terapéuticos entre ellos por medio de pruebas in vivo e in vitro, las que dependerán de las características intrínsecas que estos posean, asegurando así, que ambos son intercambiables para ser administrados en un tratamiento determinado. Dentro de las pruebas comparativas in vitro, se encuentran las bioexenciones, las que pueden ser realizadas por medio de una proporcionalidad de dosis. El presente trabajo tiene como objetivo dar a conocer el desarrollo y resultados de la validación de la metodología analítica y la cinética de liberación-disolución que se realizó e implementó para optar a la bioxención de atorvastatina base en comprimidos recubiertos de 10mg y 20mg a través de proporcionalidad de dosis con respecto a su biolote de atorvastatina base del mismo medicamento en comprimidos recubiertos de 40mg. La validación de la metodología analítica para la identificación y cuantificación de atorvastatina fue realizada a través de los parámetros recomendados internacionalmente para este tipo de estudios. La cuantificación del principio activo en el proceso de validación y en las cinéticas de liberación-disolución se realizó mediante cromatografía líquida de alta eficiencia con detector ultravioleta. Los resultados obtenidos en las distintas pruebas de la validación cumplen con las exigencias necesarias para demostrar que los datos generados son confiables y reproducibles, lo que garantiza la veracidad y calidad del estudio realizado. En relación a los perfiles de liberación-disolución, se demostró que las distintas dosis de atorvastatina base se liberan y se disuelven de forma similar a su biolote

Orientador: Osvaldo Magro Filho / Coorientador: Leonardo Perez Faverani / Banca: Roberta Okamoto / Banca: André Luís da Silva Fabris / Resumo: Esse estudo objetivou-se em avaliar o papel da membrana de fibrina rica em plaquetas na reparação óssea em defeito crítico de calota de ratos induzidos à hipercolesterolemia, bem como a atuação do tratamento de atorvastatina nesse processo. Quarenta defeitos críticos de 6 mm de diâmetro foram criados em calotas cranianas de ratos. Cada defeito foi aleatoriamente dividido em 8 grupos experimentais (GC, GCPRF, GCA, GCH, GHA, GPRFA, GPRFH, GPRFHA), avaliados aos 28 dias pós-operatórios com análises histológica e microtomográfica. Os resultados mostraram que houve formação óssea em todos os grupos analisados. O grupo GPRFH apresentou formação óssea mais acentuada com relação aos demais grupos. Dos grupos em que foi administrado atorvastatina, o GPRFHA apresentou maior taxa de formação óssea (p < 0,05). Com a metodologia utilizada, a fibrina rica em plaquetas, quando associada à condição de hipercolesterolemia, induziu ao aumento da formação óssea / Abstract: Objectives: The aim of this study was to evaluate the efficacy of Platelet Rich Fibrin (PRF) in the healing process of surgically created critical-size defects in rat calvarial induced to hypercholesterolemia treated or not with atorvastatin. Materials and method: 40 critical defects were created with 6 mm diameter calvaria of rats. Each defect was randomly divided into eight experimental groups (GC, GCPRF, GCA, GCH, GHA, GPRFA, GPRFH, GPRFHA), evaluated at 28 postoperative days for histomorphometry and microtomography. Results: The results showed new bone formation in all groups. The GPRFH group just did differ from all groups in the new bone formation (p < 0.05). Among the groups treated with atorvastatin, the GPRFHA group showed the highest bone formation rate. Conclusion: With the methodology used, the platelet-rich fibrin associated with the hypercholesterolemia induced to new bone formation. Clinical relevance: Based on these results, it is necessary to unveil the mechanisms of the association of platelet-rich fibrin with hypercholesterolemia and how it interferes in PRF microstructure and bone regeneration, to confer clinical predictability in patients in this condition who will undergo bone reconstruction and implant rehabilitation / Mestre

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-09-05T04:12:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 348187.pdf: 10629585 bytes, checksum: 7a6d459b8d7a269bdaae02626adf406e (MD5) Previous issue date: 2017 / Gliomas são tumores altamente agressivos e malignos, de ocorrência no Sistema Nervoso Central. As baixas taxas de sobrevida são relacionadas à alta capacidade proliferativa, migratória e invasiva e consequente resistência a drogas. Dentre os fármacos mais utilizados está a Temozolomida (TMZ). A TMZ é um agente alquilante, eficaz na terapia de diversas neoplasias, entretanto mecanismos de resistência a esse composto acarretam em prognósticos ruins. Assim, o estudo de compostos citotóxicos é substancialmente importante para compreender os mecanismos da doença e o estudo de novas terapias. A Guanosina (GUO) e a Atorvastatina (ATOR) já demonstraram ter potencial modulatório sobre o sistema glutamatérgico. Sendo este um sistema importante no desenvolvimento dos gliomas, compostos que o modulem podem ter potencial citotóxico sobre as células de glioma. Dessa maneira, investigou-se: 1. O potencial citotóxico da ATOR em células de glioma A172 e o efeito desta em processos do desenvolvimento do glioma; 2. O potencial citotóxico da GUO em células de glioma A172, o efeito dela nos processos de desenvolvimento do glioma e mecanismos envolvidos nesse efeito. Os resultados revelam que a ATOR apresenta efeito citotóxico às células de glioma, ainda, ATOR não apresenta efeito citotóxico a astrócitos em concentração similar. ATOR reduz a migração e a proliferação celular do glioma. ATOR induz aumento nos níveis de apoptose e a co-incubação com TMZ acarreta em uma potenciação deste efeito. A ATOR aumenta a presença de organelas vesiculares ácidas, indicando aumento da autofagia. Além disso, a inibição de receptores de glutamato foi capaz de prevenir parcialmente o efeito citotóxico da ATOR, demonstrando uma possível interação desta estatina com tais receptores na indução do efeito citotóxico. A GUO também demonstrou efeito citotóxico e redução da migração das células de glioma nos mesmos níveis que a TMZ. GUO reduziu a proliferação celular em células de glioma. GUO não alterou os níveis de apoptose, contudo a co-incubação com TMZ mostrou um efeito sinérgico. Esta sinergia foi também observada na diminuição do potencial de membrana mitocondrial e na indução de dano ao DNA. O aumento da liberação de glutamato observado por TMZ foi prevenido com a co-incubação com GUO. A inibição dos receptores de adenosina A1 ou A2A levou a um bloqueio parcial do efeito citotóxico da GUO. Assim sendo, esta tese contribuiu para demonstrar o efeito antitumoral da ATOR e da GUO, bem como elucidar alguns dos mecanismos de ação envolvidos neste efeito.<br> / Abstract : Gliomas are a group of tumors considered the most aggressive and malignant type, occurring in the Central Nervous System. Low patients overall survival rates are related to high proliferative, migratory and invasive behavior of these cells and drug resistance. Among the drugs most used to treat this disease is Temozolomide (TMZ). TMZ is an alkylant agent that demonstrated efficacy on several neoplasias treatment, however resistance mechanism to TMZ lead to bad prognoses. In this way, the study of compounds that show cytotoxic potencial is considerably relevant to understand the disease mechanisms and to enable the study of new therapies. Guanosine (GUO) and Atorvastatin (ATOR) have already been shown modulatory potential on glutamatergic system of neurotransmission. As this system is so important to glioma development, modulating drugs may show cytotoxic potential against glioma cells. Thus we investigated: 1. ATOR cytotoxic potential to human A172 glioma cells and its effects on development glioma processes. 2. GUO cytotoxic potential to human A172 glioma cells, it effects on development glioma processes and signaling pathways involved. ATOR showed cytotoxic effect to glioma cells in similar levels to TMZ. ATOR did not show cytotoxic effect to normal astrocytes. ATOR decreased migration and proliferation of glioma cells, similarly to TMZ levels. ATOR increases apoptosis and ATOR plus TMZ potentiates this effect. ATOR also increases acid vesicular organelles, indicating induction of autophagy. Furthermore, the ionotropic and metabotropic glutamate receptors inhibition partially prevents ATOR cytotoxic effect, suggesting a possible interaction between ATOR and glutamate receptors on ATOR cytotoxic effect. GUO also showed cytotoxic effects and reduces migration similar to TMZ levels to human A172 glioma cells. GUO decreases cell proliferation of glioma cells, and this effect is abolished when GUO and TMZ are co-incubated. GUO do not change apoptosis, nonetheless GUO+TMZ show synergistic effect in increasing apoptosis. The same effect was observed on decreasing mitochondrial membrane potential and DNA damage induction. GUO does not change glutamate release. TMZ increases glutamate release and this is prevented by GUO+TMZ co-incubation. A1 or A2A adenosine receptors inhibition partially blockade GUO cytotoxic effect. The A1R and A2AR blockade reduces cell viability and the A1R inhibition and A2AR activation do not change cell viability or GUO effect. Therefore, this study contributed to unravel the ATOR and GUO antitumoral effect as well as elucidate some of the mechanism involved in this effect.

Introduction: Peripheral nerve lesions are frequent in clinical practice, causing hyperalgesia and loss of motor function. Gabapentin (GABAP) is used in this condition for the treatment of pain, while statins such as atorvastatin (ATORV) have been demonstrating neuroprotective effects in preclinical nerve injury studies. Objective: To investigate the influence of treatment with GABAP and ATORV on aspects related to nerve regeneration. Methods: Male Swiss mice (25-35 g) were subjected to nerve injury by partial ligation of the sciatic nerve. The influence of the drugs on mechanical hyperalgesia and grip force was assessed at baseline (before injury), 7, 14 and 21 days after injury, following daily treatment (intragastric) with GABAP (30 mg / kg) and ATORV (3 or 10 mg/kg), alone or in combination. Data were evaluated by 1 or 2-way ANOVA (Tukey or Dunnett, respectively, p< 0.05). Results: GABAP (26.67  4.21% of response) and ATORV (36.67  10.85% of response), alone or in combination, reduced mechanical hyperalgesia (vehicle: 76.00  11.66% of response); besides of this, there was an important effect for the association of these drugs on the grip force (vehicle: -4.19  0.5 g; GABAP+ATORV: -1.29  1.22g). The two agents also influenced the levels of brain derived neurotrophic factor, BDNF, (vehicle: 105.30  12.53 pg/mg of protein; GABAP: 34.92  5.92 pg/mg of protein; ATORV: 33.77  4.20 pg/mg of protein) and and insulin-like growth factor-1, IGF-1, (vehicle: 399.60  61.30 pg/mg of protein; GABAP: 388.30  38.57 pg/mg of protein; ATORV: 306.50  16.72 pg/mg of protein), while levels of interleucin 10 (IL-10), were not affected by treatments. Conclusion: It is suggested that the association of these substances of different pharmacological classes, GABAP and ATORV, may bring benefits on hyperalgesia and motor function associated with nerve lesions. / Submitted by Roberto Henrique Benedetti (roberto.benedetti@unisul.br) on 2018-08-16T14:30:49Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Benedetti-2018.pdf: 2198483 bytes, checksum: 428390b9e64984be1485debcae231696 (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Correa da Cruz (caroline.cruz@unisul.br) on 2018-08-16T14:44:08Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Benedetti-2018.pdf: 2198483 bytes, checksum: 428390b9e64984be1485debcae231696 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T14:44:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Benedetti-2018.pdf: 2198483 bytes, checksum: 428390b9e64984be1485debcae231696 (MD5) Previous issue date: 2018 / Introdução: As lesões nervosas periféricas são frequentes na prática clínica, causando hiperalgesia e perda da função motora. A gabapentina (GABAP) é utilizada nesta condição para o tratamento da dor, enquanto as estatinas como a atorvastatina (ATORV) vêm demonstrando efeitos neuroprotetores em estudos pré-clínicos de lesão nervosa. Objetivo: Investigar a influência do tratamento com GABAP e ATORV sobre aspectos relacionados à regeneração nervosa. Métodos: Utilizou-se camundongos Swiss, machos (25-35 g), com lesão nervosa por ligadura parcial do nervo isquiático. A influência dos fármacos sobre a hiperalgesia mecânica e a força de preensão foi avaliada nos dias zero (basal), 7, 14 e 21 após a lesão, após tratamento diário (via intragástrica) com GABAP (30 mg/kg) e ATORV (3 ou 10 mg/kg), isoladamente ou em associação. Dados avaliados por ANOVA de 1 ou 2 vias (Tukey ou Dunnett, respectivamente, p< 0,05). Resultados: A GABAP (26,67  4,21 % de resposta) e a ATORV (36,67  10,85 % de resposta), isoladamente, reduziram a hiperalgesia mecânica (veículo: 76,00  11,66 % de resposta) e, além disso, houve um importante efeito para a associação destes fármacos sobre a força de preensão (veículo: -4,19  0,57 g; GABAP+ATORV: -1,29  1,22 g). Os dois agentes influenciaram também os níveis de fator neurotrófico derivado do encéfalo, BDNF, (veículo: 105,30  12,53 pg/mg de proteína; GABAP: 34,92  5,92 pg/mg de proteína; ATORV: 33,77  4,20 pg/mg de proteína) e fator de crescimento semelhante à insulina-1, IGF-1, (veículo: 399,60  61,30 pg/mg de proteína; GABAP: 388,30  38,57 pg/mg de proteína; ATORV: 306,50  16,72 pg/mg de proteína), já os níveis de interleucina 10 (IL-10), não foram alterados pelos tratamentos. Conclusão: Sugere-se que a associação destas substâncias de diferentes classes farmacológicas, GABAP e a ATORV, pode trazer benefícios sobre a hiperalgesia e a função motora associadas às lesões nervosas.

A Doença de Alzheimer é uma doença neurodegenerativa relacionada à idade, que se caracterizada pela perda progressiva da memória, pela incapacidade de realizar atividades do cotidiano e alterações de personalidade. Esta doença é caracterizada histopatologicamente pela presença de placas senis e dos emaranhados neurofibrilares e também pela perda sináptica e morte neuronal. Além disso, já está bem estabelecido que a neuroinflamação é uma característica proeminente do cérebro de pacientes com doença de Alzheimer, no qual respostas inflamatórias desempenham um papel significativo na progressão da doença. Infelizmente, os fármacos utilizados no tratamento desta doença são limitados a inibidores da acetilcolinesterase que não têm impacto na patogênese da doença. As estatinas, que pertencem à classe de drogas redutoras de colesterol, têm sido propostas como novos agentes úteis na terapia da doença de Alzheimer devido às suas propriedades neuroprotetoras e anti-inflamatórias. Neste estudo, avaliamos o efeito neuroprotetor da atorvastatina, um inibidor da HMG-CoA redutase contra a toxicidade induzida pelo peptídeo Aβ25-35 em culturas organotípicas de hipocampo de ratos. As culturas foram tratadas com 2,5 uM ou 5μM de atorvastatina e então expostas a 25μM do peptídeo Aβ25-35 durante 48h. Também foi investigado o envolvimento da via de sinalização PI3K, as respostas oxidativas, a ativação astroglial, e os níveis de sinaptofisina (marcador pré-sináptico) e de citocinas. O tratamento com atorvastatina impediu a lesão celular induzida pela exposição ao Aβ25-35, reduziu as respostas inflamatórias e oxidativa e aumentou o imunoconteúdo de sinaptofisina. Além disso, a atorvastatina preveniu significativamente a ativação da GSK-3β, a ativação astroglial e o aumento nos níveis de TNF-α e IL-6. Tomados em conjunto, estas observações sugerem que a atorvastatina pode proporcionar uma eficaz ação neuroprotetora contra a neurotoxicidade induzida pelo Aβ através da ativação da via de sinalização PI3K/AKT e atenuação das respostas oxidativas e neuroinflamatórias, podendo ser uma potencial terapia a ser usada na DA. / Alzheimer’s disease is an age-related neurodegenerative disorder characterized by progressive memory loss, inability to perform the activities of daily living and personality changes. AD is characterized histopathologically by the presence of senile plaques, neurofibrillary tangles, synapse loss and neuronal death. Moreover, it is now recognized that neuroinflammation is a proeminent feature of Alzheimer’s disease brain, with inflammatory responses playing a significant role in modulating disease progression. Unfortunately, drugs effective for this disease are limited to acetylcholinesterase inhibitors that do not impact disease pathogenesis. Statins, which belong to the class of cholesterol-reducing drugs, were proposed as novel agents useful in AD therapy due the neuroprotective and anti-inflammatory properties that they have. In this study, we evaluated the neuroprotective effect of atorvastatin, a HMG-CoA reductase inhibitor, against Aβ25-35 peptide induced toxicity in organotypic hippocampal slice cultures. The cultures were treated with 2.5μM or 5μM of atorvastatin and then exposed to 25μM of Aβ25-35 for 48h. We also investigated the involvement of PI3K signaling pathway, oxidative responses, astroglial activation, and synaptophysin (pre-synaptic marker) and cytokines levels on the atorvastatin protection against β-amyloid-induced toxicity. Atorvastatin treatment prevented the cell damage induced by the exposure to peptide Aβ25-35, reduced inflammatory and oxidative responses and increased the immunocontent of synaptophysin. In addition, atorvastatin significantly prevented the activation of GSK-3β, the astroglial activation and the β-amyloid-induced increase in TNF- and IL-6 levels. Taken together, these observations suggest that atorvastatin may provide an effective neuroprotective action against neurotoxicity induced by Aβ through the activation of the PI3K/AKT signaling pathway and attenuation of oxidative responses and neuroinflammation, and could be a potencial drug used on Alzheimer disease.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-10-06T11:26:30Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 697207 bytes, checksum: fb986e6d6a9b11c6081a4c4b0a20d472 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-06T11:26:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 697207 bytes, checksum: fb986e6d6a9b11c6081a4c4b0a20d472 (MD5) Previous issue date: 2004-09-14 / Este trabalho consistiu de dois ensaios biológicos com o objetivo de estudar as influências do bifosfonato alendronato de sódio, da estatina atorvastatina cálcica e do flavonóide ipriflavona, isoladamente e em associação, na osteoporose induzida pelo glicocorticóide dexametasona, em ratas da raça Wistar, adultas, pesando 250 ± 20g. O processo da indução da osteoporose consistiu na administração de dexametasona, na dose de 7 mg/kg de peso corporal, por via IM, uma vez por semana, durante cinco semanas, nos seis animais de todos os grupos, à exceção dos animais que constituiu o grupo controle (G1), que receberam, via IM, solução de NaCl à 0,9%. Os animais do grupo 2 (G2), chamado osteoporótico, receberam apenas dexametasona; Após a indução, iniciou-se os tratamentos. No primeiro ensaio, o grupo 3 (G3) que recebeu dexametasona mais alendronato de sódio na dose de 0,2 mg/kg; grupo 4 (G4) que recebeu dexametasona mais atorvastatina cálcica na dose de 1,2 mg/kg e grupo 5 (G5) que recebeu dexametasona mais ipriflavona na dose de 100 mg/kg. No segundo ensaio, procedeu as combinações das respectivas substâncias, sendo: (G3) que recebeu dexametasona mais alendronato de sódio a 0,1 mg/kg + atorvastatina cálcica a 0,6 mg/kg; (G4) que recebeu dexametasona mais alendronato de sódio a 0,1 mg/kg + ipriflavona a 50 mg/kg e (G5) que recebeu dexametasona mais atorvastatina cálcica a 0,6 mg/kg + iprilfavona a 50 mg/kg. Todas as substâncias foram administradas por via oral, diariamente. Nos períodos de 7, 14, 21 e 28 dias, após o início dos tratamentos, foram coletados amostras de sangue para dosagens de cálcio e fósforo no equipamento multiparamétrico de bioquímica Alizé com “kits” da marca BioMerieux, e fosfatase alcalina óssea no equipamento de quimioluminescência Access Immunoassay System da Beckman Coulter com “kits” Ostase. Após o sacrifício, foi coletado fêmur direito de cada animal que, uma vez processado rotineiramente e obtido as lâminas, cujos cortes foram corados com hematoxilina e eosina, foi estudado histologicamente em microscopia de luz. Procedeu-se o cálculo percentual da densidade trabecular óssea, à partir da imagem amostral de osso trabecular, contida na região subcondral, de cada corte histológico, em microscópio óptico equipado com câmara digital (TCL-984 P), analisada em monitor de microcomputador de 14 polegadas, utilizando-se da técnica de histomorfometria de contagem de pontos. Os ensaios biológicos foram realizados segundo delineamento inteiramente casualizado, com cinco tratamentos em seis repetições. Os resultados obtidos foram submetidos à análise de variância e ao teste F (p<0,05). Os grupos controles (G1 e G2) foram comparados entre si, por meio do teste F. Os grupos tratados (G3, G4 e G5) foram comparados entre si, através do teste de Tukey à 5% de probabilidade. As comparações também foram realizadas entre os grupos tratados e os controles G1 e G2, sendo que, para o mesmo, foi aplicado o teste de Dunnet à 5% de probabilidade. Os resultados não mostraram diferenças significativas entre o grupo controle (G1) e o grupo osteoporótico (G2), bem como, entre eles e os grupos tratados (G3, G4 e G5) e, também, entre os grupos tratados entre si, em todos os períodos, quanto aos valores sérico de cálcio, fósforo e fosfatase alcalina óssea, tanto no primeiro, como no segundo ensaio biológico. Assim, estes marcadores bioquímicos não apresentaram indícios para condução de diagnóstico e acompanhamento da patologia óssea osteoporótica. Todavia, os valores percentuais de densidade trabecular óssea foram significativos em todos os períodos, quando se compara o G1, (±60%), com G2, (±40%), mostrando que a indução osteoporótica com o glicocorticóide dexametasona foi um sucesso. Quanto aos grupos tratados, comparados com o G2, constata-se que os tratamentos com alendronato de sódio (G3) e atorvastatina cálcica (G4), isoladamente, alcançaram valores percentuais de densidade trabecular óssea significativos, já no período de 14 dias, repetindo-se nos períodos de 21 e 28 dias e o tratamento com ipriflavona obteve valores significativos nos períodos de 21 e 28 dias. O grupo tratado com alendronato de sódio obteve valores semelhantes ao do grupo controle (G1), nos períodos de 21 e 28 dias. Demonstra-se, assim, a capacidade destas substâncias de restaurar o tecido trabecular ósseo nos animais osteoporóticos induzidos com glicocorticóide. As associações, por sua vez, apresentaram resultados superiores. Todos os grupos tratados (G3, G4 e G5) apresentaram resultados significativos em relação ao grupo (G2) nos períodos de 14, 21 e 28 dias. Ademais, o grupo G4 (alendronato + ipriflavona) mostrou valores significativos, acima dos apresentados pelo grupo controle (G1), que é constituído de animais normais, nos períodos de 14, 21 e 28 dias e o grupo G3 (alendronato + atorvastastina), nos períodos de 21 e 28 dias. Tornou-se evidente, que as associações resultaram em maior eficácia, particularmente, aquelas com alendronato, com capacidade de restaurar o tecido trabecular ósseo. Considerando que as doses individuais das substâncias associadas foram reduzidas à metade daquelas, quando administradas isoladamente, e os resultados foram superiores, caracteriza-se, assim, efeito sinérgico de supradição ou potenciação farmacológica. Muito embora os marcadores bioquímicos utilizados neste trabalho não demonstraram diferenças que evidenciasse alteração metabólica óssea, a histomorfometria e a histopatologia permitiu análise estática e dinâmica, bem como a avaliação das alterações tissulares na unidade metabólica óssea, especialmente, no osso trabecular. Deste modo, as substâncias usadas isoladamente ou as suas associações, podem ser promissoras no tratamento prolongado com glicocorticóide ou no tratamento da osteoporose estabelecida. Ressalva-se, no entanto, que estudos posteriores das dosagens, interações, biodisponibilidades, além dos efeitos toxicológicos dessas substâncias farmacológicas, fazem-se necessários. / This work consisted of two biological assays with objective of studying the influences of the bisphosphonate alendronate of sodium, statin atorvastatin calcic and flavonoid ipriflavone, separately and in association, in osteoporotic female Wistar rats, adults, weighing 250 ± 20g, induced with glucocorticoid dexamethasone. Induction of osteoporosis consisted of the dexamethasone administration, in the dose of 7 mg/kg, IM, once for week, for five weeks, in six animals of all groups, except those constituted the control group (G1), which received solution of NaCl to 0.9%, IM. The animals of the group 2 (G2), named osteoporotic, just received dexamethasone; After the induction, began the treatments. In the first rehearsal, the group 3 (G3) that received dexamethasone more alendronate of sodium in the dose of 0.2 mg/kg; group 4 (G4) that received dexamethasone more atorvastatin calcic in the dose of 1.2 mg/kg and group 5 (G5) that received dexamethasone more ipriflavone in the dose of 100 mg/kg. In the second rehearsal, proceeded the combinations of substances: (G3) that received dexamethasone more alendronate of sodium for 0.1 mg/kg + atorvastatin calcic for 0.6 mg/kg; (G4) that received dexamethasone more alendronate of sodium for 0.1 mg/kg + ipriflavone for 50 mg/kg and (G5) that received dexamethasone more atorvastatin calcic for 0.6 mg/kg + iprilfavone for 50 mg/kg. The substances were administered orally, daily. To the periods of 7, 14, 21 and 28 days of treatments, were collected sample blood for dosages of calcium and phosphorus in the biochemical multiparametric Alizé equipment with "kits" BioMerieux, and bone alkaline phosphatase in the quimioluminescence Access Immunoassay System equipment of Beckman Coulter with "kits" Ostase. After the sacrifice, was collected right femur of each animal that, once processed and obtained microscopic slides, whose cuts were colored with hematoxylin and eosin, was histological studied in light microscopy. The percentile calculation of bone trabecular density from sample image of bone trabecular was proceeded, contained in the area subcondral of each histological cut, in optical microscope equipped with digital camera (TCL-984 P), analyzed in monitor of microcomputer of 14 inches, for histomorphometric technique of point scores. The biological assays were accomplished entirely according to casual delineation with five treatments in six repetitions. The results obtained were submitted to the variance analysis and the test F (p <0,05). The control groups (G1 and G2) were compared to each other by means of the test F. The treated groups (G3, G4 and G5) were compared to each other through the test of Tukey to 5% of probability. The comparisons were also accomplished between the treated groups and the control G1 and G2, and was applied of Dunnet test to 5% of probability. The results didn't show difference significants among group control (G1) and the osteoporotic group (G2), as well as between them and the treated groups (G3, G4 and G5) and also among the treated groups to each other, in all the periods, with relationship to the levels of calcium, phosphorus and bone alkaline phosphatase serum, so much in the first as in the second biological assays. Thus, these biochemical markers didn't present indications for diagnosis conduction and accompaniment of the bone osteoporotic pathology. Though, the percentile values of bone trabecular density were significant in all the periods, when it is compared G1, (±60%), with G2, (±40%), showing that osteoporotic induction with glucocorticoid dexamethasone was a success. With relationship to the treated groups, compared with the G2, it is verified that the treatments with alendronate of sodium (G3) and atorvastatin calcic (G4), separately, reached percentile values significant of bone trabecular density, already in the period of 14 days, repeating in the periods of 21 and 28 days and the treatment with ipriflavone obtained values significant in the periods of 21 and 28 days. The treated group with alendronate of sodium obtained values similar to controls group (G1), in periods of 21 e 28 days. It is demonstrated, like this, the capacity of these substances to restore bone trabecular tissue in the osteoporotic animals induced with glucocorticoid. The associations, for its time, presented results better. All treated groups (G3, G4 and G5) presented significant results in relation to the group (G2) in the periods of 14, 21 and 28 days. Furthermore, group G4 (alendronate + ipriflavone) showed significant values, above presented them for the group controls (G1), that is constituted of normal animals, in the periods of 14, 21 and 28 days and group G3 (alendronate + atorvastastin), in the periods of 21 and 28 days. Became evident, that associations resulted in larger effectiveness, particularly, those with alendronate, with capacity of restore bone trabecular tissue. Considering that individual doses of the associated substances were in half reduced of those, when administered separately, and the results were superiors, it is characterized, like this, supraddition synergistc effect or pharmacological potentiation. The biochemical markers used in this work didn't demonstrate differences that evidenced bone metabolic alteration. However, histomorphometric and histopatology allowed static and dynamic analysis, as well as the evaluation of tissue alterations in the bone metabolic unit, particularly, in the bone trabecular. This way, the substances used separately or its associations, can be promising in the treatment prolonged with glucocorticoid or in the treatment of the established osteoporosis. It is excepted, however, that further studies of dosages, interactions, bioavailability, besides the toxicological effects those pharmacogical substances, are necessaries. / Tese importada do Alexandria

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