Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000425499-Texto+Completo-0.pdf: 1339391 bytes, checksum: 53a9d3961a418fb135035cdccc7d9188 (MD5) Previous issue date: 2010 / Araucaria angusifolia (Bertol. ) Kuntze, known as Brazilian pine, is an endangered species with great ecological and economic importance. Although many efforts have been made to establish commercial plantations of this species, it grows slowly and unevenly, with high mortality. Plant Growth-Promoting Rhizobacteria (PGPR), including some Strepromyces (actinobacteria), represent a class of non-pathogenic soil microorganisms and have a beneficial effect on plant growth. This study evaluated the effect of three autochthonous Streptomyces spp. isolates (PM1, PM4, and PM9) on the early development and metabolism of 50-day-oid A. angustifolia seedlings. The enzymatic activity of phenylalanine ammonialyase (PAL), polyphenol oxidase (PPO), and peroxidase (POX), and the levels of phenolic compounds, flavonoids, and chlorophyll were determined in extracts of roots and leaves from seedlings. Assays were carried out 1, 3 and 9 days after the roots were inoculated with each isolated. Length and fresh mass of shoots and roots as well as the volume and density of roots were evaluated at 100 days after seedlings inoculation. All Streptomyces spp. evaluated showed rhizospheric competence and produce indole-3-acetic acid (IAA). The activities of PPO and POX exhibited a tissue-temporal regulation in the presence of the isolates; however the levels of phenolics, flavonoids and chlorophylls did not change in the period analyzed. PAL activity was reduced only 9 days after root inoculation with PM9. The volume, density and length of roots changed in seedlings that were in contact with isolates for 100 days. The isolate PM9 caused significant changes in plant metabolism, increasing the shoot increment. / Araucaria angustifolia, conhecida como Pinheiro Brasileiro, é uma espécie ameaçada de extinção de grande importância ecológica e econômica. Embora muitos esforços foram feitos para estabelecerem plantios comerciais desta espécie, ela apresenta crescimento lento e heterogêneo, com alta mortalidade. As plant-growth-promoting rhizobacteria (PGPR) representam uma classe de bactérias de solo não patogênicas que promovem efeito benéfico no crescimento do vegetal, destacando-se as actinobactérias do gênero Streptomyces. O trabalho avaliou o efeito de três isolados autóctones de Streptomyces spp. (PM1, PM4 e PM9) no desenvolvimento e no metabolismo inicial de plântulas de Araucaria angustifolia com 50 dias de idade. A atividade enzimática da fenilalanina amônio-liase (FAL), polifenol oxidase (PPO), peroxidase (POX) e os níveis de compostos fenólicos, flavonóides e clorofila foram determinados em extratos de raízes e folhas das plântulas. As análises foram realizadas em 1, 3 e 9 dias após a inoculação das raízes com as rizobactérias. O comprimento e a massa fresca da parte aérea e radicular assim como o volume e densidade das raízes foram avaliados após 100 dias da inoculação. Todos Streptomyces spp. apresentaram competência rizosférica e a capacidade de produzir ácido indol-3-acético (AIA). As atividades da PPO e POX exibiram regulação tecido-temporal na presença dos isolados; entretanto não foram alterados no período analisado os níveis de fenólicos, flavonóides e clorofila. A atividade da FAL foi reduzida somente 9 dias após a inoculação do isolado PM9. O volume, densidade e comprimento das raízes foram alterados nas plântulas inoculadas com as rizobactérias durante 100 dias. PM9 foi o isolado que promoveu as maiores alterações no metabolismo vegetal, aumentando o incremento da parte aérea.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000438120-Texto+Completo-0.pdf: 2337312 bytes, checksum: 3bcbd6b2d333489c6e0cefb866d0b73c (MD5) Previous issue date: 2012 / Ewing’s sarcoma was first described by James Ewing in 1921 and it is the second most common bone tumor in children and young adults. Both chromosomal breakage and translocation occur in this sarcoma. The EWS gene is localized in chromosome 22 and is involved in this translocation. However, little is known about this gene breaking region and what sequences could be involved in higher chromosomal break susceptibility. In this study we aimed to investigate three SNPs in the EWS gene breaking region in a healthy subjects’ population and in Ewing’s sarcoma patients. Genotyping was performed by TaqMan® assay for allelic discrimination using Real-Time PCR System. We conducted analysis of allelic and genotypic frequencies, as well as association and transmission disequilibrium tests. According to our results, the control group showed similar and different genotypes distribution of all SNPs when compared to other populations studied by different projects, which shows how important it is to know the frequencies of our population. To test the hypothesis that some SNP, SNParrangement or haplotype could influence in the susceptibility to develop Ewing’s sarcoma, we compared affected with non-affected individuals using association studies. The results showed one significant difference: a higher presence of homozygote T-rs4820804 in Ewing’s Sarcoma patients. Transmission Disequilibrium Test (TDT) was performed to compare data from Ewing’s Sarcoma patients and from their families but no statistically significant result was found. In conclusion, we find that the TT-rs4820804 EWS genotype can be associate with Ewing’s sarcoma and that the rs4820804 SNP can be a candidate to understand the EWS breakage susceptibility. / O sarcoma de Ewing foi primeiramente descrito por James Ewing em 1921 e é o segundo tumor ósseo mais frequente em crianças, adolescente e adultos jovens. Neste sarcoma, é comum ocorrer a quebra e a translocação cromossômica. Dentre os genes envolvidos nesta translocação está o gene EWS, localizado no cromossomo 22. Entretanto, pouco se sabe a respeito da região de quebra deste gene e quais sequências poderiam levar a uma maior susceptibilidade a quebra cromossômica. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi investigar três polimorfismos de base única (SNPs) presentes na região de quebra do gene EWS, em uma população de indivíduos saudáveis e em pacientes afetados pelo Sarcoma de Ewing. A genotipagem para os SNPs selecionados foi realizada usando TaqMan SNP Genotyping Assay pelo sistema de PCR em tempo real. Nós realizamos análises de frequências alélicas e genotípicas, assim como um estudo de associação e de desequilíbrio de transmissão.A comparação das frequências alélicas e genotípicas entre as populações deste estudo e entre populações de projetos já publicados mostrou particularidades entre as populações, revelando a importância de se conhecer tais frequências na população de estudo. Para testar a hipótese de que algum SNP, haplótipo ou combinação específica de SNPs poderia influenciar na susceptibilidade ao Sarcoma de Ewing, comparamos afetados com não-afetados realizando estudos de associação cujos resultados mostraram uma única diferença significativa: a maior incidência no genótipo TT-rs4820804 entre os afetados pelo Sarcoma de Ewing. O Teste de Desequilíbrio de Transmissão (TDT) comparou os dados dos pacientes afetados e os dados de seus familiares, mas nenhum resultado significativo foi encontrado. Em conclusão, o genótipo TT-rs4820804 pode estar associado ao Sarcoma de Ewing e o SNP rs4820804 pode ser candidato para auxílio do entendimento da susceptibilidade de quebra do gene EWS.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000438127-Texto+Completo-0.pdf: 909961 bytes, checksum: 5f9f40febc8291b363b759367f823d98 (MD5) Previous issue date: 2012 / In this study the SNPs rs640098, rs491714, rs611307 into the FLI1 gene were genotyped in a sample of 201 subjects from southern Brazilian population, in 24 Ewing’s sarcoma patients (geographically matched with control group) and 54 of their family members, including parents and siblings. We performed association studies comparing genotypic frequencies of rs640098, rs491714, rs611307 into the FLI1 gene, and all possible genotype combinations between Ewing’s Sarcoma patients and control group. Of the three SNPs investigated individually, only one of them showed a significant result when compared to the control group; our non-combined analysis revealed a significantly higher presence of homozygote A-rs497714 among Ewing’s Sarcoma patients (p=0. 0065; Chi square Test). In all other tested clusters, we always noticed a higher rate of homozygote A-rs497714 among Ewing’s Sarcoma patients independent of the other SNP-arrangements and/or haplotype combinations. In addition, we performed transmission disequilibrium tests comparing data from Ewing’s Sarcoma patients and from their families (parents and siblings), but no statistically significant result was found. In conclusion, the present study provides evidence statistically founded that the AA-rs497714 FLI1 genotype can associated with Ewing's sarcoma. And that this polymorphism can be clinically useful as a potential genetic marker to the prognostic of risk to develop this cancer or to provide insights into FLI1 chromosome breakage context of tumorigenesis. / Neste estudo, os SNPs rs640098, rs491714, rs611307 no gene FLI1 foram genotipados em uma amostra de 201 indivíduos da população do sul do Brasil, e em 24 pacientes portadores de Sarcoma Ewing (geograficamente comparado com grupo controle) e 54 de seus familiares, incluindo pais e irmãos. Realizamos estudos de associação, comparando as freqüências genotípicas do rs640098 e rs491714 e rs611307 no gene FLI1, e todas as combinações possíveis entre o genótipo de pacientes Sarcoma de Ewing e grupo controle. Dos três SNPs investigados individualmente, apenas um deles apresentou um resultado significativo quando comparado com o grupo controle; nossa análise não-combinada revelou uma presença significativamente maior de homozigoto A-rs497714 entre os pacientes de Sarcoma Ewing (p = 0,0065; Chi quadrado). Em todos os outros grupos testados, foi notada uma maior taxa de homozigoto A-rs497714 entre os pacientes com Sarcoma de Ewing, independentemente dos outros arranjos e / ou combinações de SNP e haplótipos. Além disso, foram realizados testes de desequilíbrio de transmissão, comparando dados de pacientes portadores de Sarcoma de Ewing e de suas famílias (pais e irmãos), mas nenhum resultado estatisticamente significativo foi encontrado. Em conclusão, o presente estudo fornece evidências estatisticamente fundada de que o genótipo AA-rs497714 FLI1 pode associado ao sarcoma de Ewing. E que este polimorfismo pode ser clinicamente útil como um potencial marcador genético para o prognóstico de risco para desenvolver este câncer ou para fornecer insights no contexto de quebras cromossômicas de tumorigênese no gene FLI1.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000423971-Texto+Completo-0.pdf: 420258 bytes, checksum: 53b4c1e4ced71be9f6cf930e265f01fb (MD5) Previous issue date: 2010 / The zebrafish is a small teleost that has been considered an ideal model for studying many human diseases. Studies have shown that many genes are similar to mammals’, including humans. Evidence has indicated the important role played by ATP and adenosine in the central nervous system (CNS). The neurotransmitter ATP is stored in a vesicular manner and released into the synaptic cleft, where it can act on specific receptors located in the cell membrane. The inactivation of the signal mediated by extracellular ATP is performed by a family of enzymes called ectonucleotidases, including NTPDases (nucleoside triphosphate difosfohydrolases) and ecto-5'-nucleotidase. These enzymes are responsible for the extracellular catabolism of the neurotransmitter ATP to adenosine. Studies from our laboratory showed the presence of ectonucleotidases, such as NTPDases and ecto-5'- nucleotidase in the CNS of zebrafish. The objective of this study was to investigate the in vivo effects of subchronic exposure (96 hours) to arsenic on NTPDases and ecto-5'-nucleotidase activities in zebrafish brain and to evaluate the behavioral changes induced by arsenic in this species. For the behavioral parameters, there was a decrease in locomotor activity of animals exposed to 5 mg/L arsenic (30. 5%) when compared with the control group whereas there were no changes in the distance traveled during 5 minutes of analysis. During 5 minutes of behavioral assessment, no significant changes were observed in mean speed and in absolute turn for all arsenic concentrations tested. The time spent in the upper tank was not changed between the groups tested with different arsenic concentrations. The time spent in the middle of the tank significantly decreased at 0. 05 mg/L (55%), 5 mg/L (62%) and 15 mg/L (62%) when compared to control group. Moreover, the time spent in the lower region is significantly higher (28%) only in the group treated with 5 mg/L arsênio when compared to control. There was a significant decrease in ATP hydrolysis in the presence of 0. 05 mg/L (37. 6%), 5 mg/L (34. 8%), and 15 mg/L (30. 6%) arsenic when compared to control. The inhibitory effect was also observed in ADP hydrolysis at 0. 05 mg/L (25%), 5 mg/L (38%) and 15 mg/L (41%) when compared to control. Regarding to 5'-nucleotidase activity, a reduction in AMP was promoted by arsenic 0. 05 mg/L (37. 7%), 5 mg/L (26. 7%), and 15 mg/L (35%). The results demonstrated that changes on ectonucleotidases after arsenic treatments can be one of the factors involved in behavioral and neurotoxic effects induced by this contaminant in the central nervous system. / O peixe zebra é um pequeno teleósteo que vem sendo considerado um modelo ideal para estudos de numerosas doenças humanas. Estudos demonstraram que muitos genes deste peixe são similares ao de mamíferos, inclusive humanos. Evidências têm indicado o importante papel desempenhado pelo ATP e a adenosina no sistema nervoso central (SNC). O neurotransmissor ATP é armazenado de forma vesicular e liberado na fenda sináptica, onde pode agir em receptores específicos localizados na membrana celular. A inativação do sinal mediado pelo ATP extracelular é realizada por uma família de enzimas denominadas ectonucleotidases, incluindo as NTPDases (nucleosídeo trifosfato difosfoidrolases) e a ecto-5´-nucleotidase. Estas enzimas são responsáveis pelo catabolismo extracelular do neurotransmissor ATP até adenosina. Estudos do nosso laboratório demonstraram a presença de ectonucleotidases como as NTPDases e a ecto-5´-nucleotidase no SNC de zebrafish. O objetivo deste trabalho foi investigar o efeito in vivo da exposição subcrônica (96 horas) ao arsênio sobre a atividade das NTPDases e ecto-5’- nucleotidase em cérebro de peixe zebra, além de avaliar as alterações comportamentais induzidas pelo arsênio nesta espécie. Quanto aos parâmetros comportamentais, houve uma diminuição na atividade locomotora de animais submetidos a 5 mg/L de arsênio (30,5%) quando comparado com o grupo controle, sendo que não houve alteração na distância percorrida durante 5 minutos de análise. Durante 5 minutos de avaliação comportamental, não foram observadas alterações na velocidade média e no ângulo do nado dos peixes em todas as concentrações testadas de arsênio (0,05 mg/L, 5 mg/L e 15 mg/L). O tempo gasto no terço superior do tanque não foi alterado entre os grupos testados com diferentes concentrações de arsênio.O tempo gasto na zona média do tanque diminuiu significativamente nas concentrações de 0,05 mg/L (55%), 5 mg/L (62%) e 15 mg/L (62%) quando comparado ao grupo controle. Além disso, o tempo gasto na zona inferior foi significativamente maior (28%) apenas no grupo tratado com 5 mg/L arsênio quando comparado ao controle. Houve uma diminuição significativa na hidrólise de ATP na presença de 0,05 mg/L (37,6%), 5 mg/L (34,8%) e 15 mg/L (30,6%) de arsênio quando comparado ao controle. O efeito inibitório também foi observado sobre a hidrólise do ADP nas concentrações de 0,05 mg/L (25%), 5 mg/L (38%) e 15 mg/L (41%) quando comparado ao controle. Com relação a atividade da 5’-nucleotidase, uma redução na hidrólise do AMP foi promovida pelo arsênio nas concentrações de 50 mg/L (37,7%), 5 mg/L (26,7%) e 15 mg/L (35 %). Os resultados demonstraram que as alterações sobre ectonucleotidases após tratamentos com arsênio podem ser um dos fatores envolvidos nos efeitos neurotóxicos e comportamentais induzidos por este contaminante no sistema nervoso central.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000437673-Texto+Completo-0.pdf: 92662 bytes, checksum: 2b30c84319d430865447f76a9dfff88b (MD5) Previous issue date: 2011 / Forensic genetics has developed in recent years due to its recognized importance in helping to solve a wide variety of criminal cases. This recognition has led to an increase in demand and hence the need to achieve results on samples that previously were not worked (due to the high degree of degradation) or inconclusive reports generated. The development of new methods of analysis and search for new genetic markers for forensic use is constant, and the biallelic markers of have shown great capacity for individualization and identification of a sample. We studied the frequencies of 47 autosomal and 13 X-chromosome insertiondeletion polymorphism (InDel) markers in a sample of 90 individuals in the population of Rio Grande do Sul state, to evaluate its applicability in forensic cases. Haplotype (DH) and haploid genetic (h) diversity, and information index (I) for X-chromosome markers, and observed heterozygosity (Ho), power of discrimination (PD), power of exclusion (PE) matching probability (MP), typical paternity index (TPI) and polymorphism information content (PIC) for autosomal markers, were calculated. For the 47 autosomes indels studied, the combined power of discrimination and the combined power of exclusion were 99. 999999999999998956% and 99. 64%, respectively. We did not observe a significant substructure in the population studied, and the global estimated admixture components for the sample were 72. 35%, 18. 10%, and 9. 54% for European, Native American, and African DNA. / A genética forense tem se desenvolvido muito nos últimos anos devido à sua reconhecida importância no auxílio para resolver os mais diversos casos criminais. Este reconhecimento levou a um aumento na demanda e, consequentemente, na necessidade de se obter resultados em amostras que anteriormente nem eram trabalhadas (devido ao alto grau de degradação) ou geravam laudos inconclusivos. O desenvolvimento de novas metodologias de análise e busca de novos marcadores genéticos para o uso forense é constante, e os marcadores bialélicos têm mostrado grande capacidade de individualização e identificação de uma amostra. Neste estudo foram analisadas as frequências de 47 marcadores autossômicos e 13 marcadores do cromossomo X de polimorfismos bialélicos do tipo inserção-deleção (Indel) em uma amostra de 90 indivíduos da população do Rio Grande do Sul, para avaliar sua aplicabilidade em casos forenses. Diversidade genética haplotípica (DH) e haplóide (h), e informações de índice (I) para marcadores do cromossomo X, e heterozigosidade observada (Ho), poder de discriminação (PD), poder de exclusão (PE), probabilidade de correspondência (MP), índice de paternidade (TPI) e conteúdo de informação de polimórfica (PIC) para os marcadores autossômicos foram calculados. Para os 47 indels autossômicos estudados, o poder combinado de discriminação e o poder combinado de exclusão foram de 99,999999999999998956% e 99,64%, respectivamente. Não foi observada uma subestruturação significativa na população estudada, e os componentes da mistura global estimados para a amostra foram 72,35%, 18,10% e 9,54% de DNA de europeus, nativo-americanos e africanos.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000410040-Texto+Parcial-0.pdf: 122324 bytes, checksum: 45a894ba60e6f927801a47a55af0ba93 (MD5) Previous issue date: 2009 / O câncer da cavidade bucal e o câncer orofaríngeo representam o 6º tipo mais comum de câncer no mundo, sendo que 90% desses tumores bucais são do tipo carcinoma de células escamosas. Para que ocorra o estabelecimento, a expansão e a metastatização de neoplasias é fundamental que tumores estimulem a produção de sua própria rede vascular, processo conhecido como angiogênese tumoral. Assim, o resultado é uma nova rede de vasos adequada ao crescimento e a viabilização de metástases. Os vasos do tumor são considerados como imaturos e diferem dos vasos normais, apresentando formas tortuosas, irregulares, revestidos por células endoteliais amplamente fenestradas e muitas vezes com ausência de membrana basal. Os objetivos deste trabalho foram: definir um protocolo para estudo da angioarquitetura em réplicas vasculares de tumores quimicamente induzidos na bolsa jugal de hamster sírio dourado Mesocricetus auratus, descrever a histologia do órgão normal por microscopia de luz (ML) e a angioarquitetura por microscopia eletrônica de varredura (MEV), analisar qualitativamente a rede vascular neoformada em bolsas jugais de hamster sírios após indução química de tumor em três tempos diferentes. 24 hamsters sírios machos e com cinco semanas de vida, divididos em três grupos de oito animais cada, tiveram suas bolsas jugais direitas tratadas três vezes por semana com dimetilbenzantraceno (DMBA) e duas vezes por semana com peróxido de carbamida por 55, 70 e 90 dias, respectivamente cada grupo. A bolsa esquerda foi isenta de tratamento e considerada como controle. Posteriormente à indução do tumor, cinco animais de cada grupo tiveram suas redes vasculares moldadas pela resina Mercox® e analisadas em microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os três animais restantes de cada grupo tiveram suas bolsas preparadas para análise em microscopia de luz (ML).Após 55 dias de indução tumoral, todos os espécimes analisados por ML já apresentavam carcinoma de células escamosas na bolsa jugal tratada e este resultado se consolidou aos 70 e 90 dias de tratamento. O menor tempo necessário para a indução tumoral comparado a estudos anteriores e o sucesso na produção do tumor em todos os animais submetidos ao tratamento foi correlacionado a ação do peróxido de carbamida e ao enriquecimento ambiental empregado durante o experimento. Foi possível concluir que o protocolo desenvolvido pode ser útil à análise da angioarquitetura dos tumores em bolsas jugais de hamster sírio. A técnica de MEV possibilitou diferenciar vasos arteriais de venosos, como também replicar estruturas como esfíncteres, bifurcações, anastomoses e sugestionar a presença de sproutings. No estudo da bolsa jugal normal com ML foram evidenciadas três túnicas: a túnica mucosa, a túnica muscular e a túnica adventícia. Quando analisadas por MEV, as replicas vasculares das bolsas controle apresentavam sua rede vascular composta por vasos paralelos ao seu maior eixo, conforme a fisiologia do órgão. Nas bolsas submetidas à indução tumoral observou-se a formação de uma nova rede vascular, com a presença de vasos tortuosos e paralelos. Durante a progressão do tumor houve perda do paralelismo vascular e um aumento do calibre dos vasos. Estururas [sic] de angiogênese também foram observadas.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000425543-Texto+Completo-0.pdf: 747447 bytes, checksum: 25a6005ed4d57ac7cb87a5a7d22ed8de (MD5) Previous issue date: 2010 / Aging is associated with the gradual decline in the immune system function (immunosenescence), both in humoral immunity as well in cellmediated responses, resulting in an increased susceptibility to infections and cancer, as well as reduced response to vaccination. Dendritic cells (DCs) are the most powerful and efficient antigen-presenting cells (APC), playing a pivotal role in the presentation and consequent T-cell mediated immune response. However, most of the studies focusing on immunosenescence focus on T cells. Also, most of the data on aged dendritic cells come from in vitro studies. The interaction between dendritic and T cells affects the processing and consequent presentation of antigens, influencing the effectiveness of T cell-mediated immune responses. The goal of this study was to evaluate the stimulatory capacity of dendritic cells from old mice in a specific T CD4+ response compared to young mice in vivo. Transgenic T cells from TEa mice, specific for the Ea:IAb complex were transferred to normal C57Bl/6 mice. T cells from young mice being transferred into young and old animals, and T cells from old mice transferred into young and old animals. The results demonstrate that, after immunization with EaRFP antigen, young dendritic cells stimulated equally young and old T cells. However, dendritic cells from old animals were less capable of stimulating old as well as young T cells. While both T cells, young and old, acquired CD44+ phenotype when transferred to young animals, young T cells when transferred to old animals did not acquired the same phenotype. This fact suggested that dendritic cells from old animals possess lower capacity to stimulate T cells, even if these cells come from a young animal. We hypothesized that this could be due to an extremely diminished dendritic cells number in old animals, or rather to some deficiency in one of the signals supplied by dendritic cells in T lymphocyte priming (antigen presentation or costimulatory signals). The dendritic cells total number was lower in old mice compared to young mice. Also, the number of antigen presenting cells was lower in draining lymph nodes of old animals and the expression of CD86 by dendritic cells did not differ between old and young animals. Altogether, the results suggest that the impairment of antigen presentation capacity presented by aged dendritic cells is critical for their loss of stimulatory potential of CD4+ T cells. / O envelhecimento está associado com o declínio progressivo nas funções do sistema imunológico (imunosenescência), tanto na imunidade humoral quanto na imunidade mediada por células, resultando em maior suscetibilidade a infecções e câncer, além da diminuição na capacidade de responder a vacinas. As células dendríticas (DCs) são as mais poderosas e eficientes apresentadoras de antígenos (APC), desempenhando um papel primordial na apresentação e conseqüente resposta imune mediada por células T. Poucos estudos enfocam a atividade das células dendríticas no envelhecimento, sendo que a maioria dos dados são relativos às funções das células T. As interações entre as células dendríticas e as células T afetam o processamento e consequente apresentação de antígenos, influenciando a efetividade das respostas imunes mediadas por células T. Este trabalho teve como objetivo avaliar a capacidade estimulatória de células dendríticas de camundongos velhos em uma resposta específica T CD4+ comparada à resposta imune de camundongos jovens. Para isso, células T de camundongos transgênicos TEa, específicas para o complexo Ea:IAb foram transferidas para camundongos normais C57Bl/6, células T de camundongos jovens para animais velhos e jovens, e células T de camundongos velhos para animais velhos e jovens. Os resultados demonstram que, após imunização com o antígeno EaRFP, tanto as células T jovens quanto as células T velhas foram estimuladas de modo semelhante por células dendríticas jovens. Contudo, células dendríticas de animais velhos não foram capazes de estimular suficientemente as células T de animais velhos nem mesmo as células T de animais jovens. Enquanto ambas as células T, jovens e velhas, adquiriram o fenótipo CD44+ quando transferidas para os animais jovens, células T jovens transferidas para animais velhos não adquiriram o mesmo fenótipo. Esse fato sugeriu que células dendríticas de animais velhos possuem baixa capacidade de estimular células T, mesmo que essas células venham de um animal jovem. Nós hipotetizamos que esse resultado poderia estar ligado a um número extremamente diminuído de células dendríticas nos animais velhos, ou ainda em uma deficiência em um dos sinais fornecidos pelas células dendríticas no priming de linfócitos T (apresentação de antígeno ou sinais coestimulatórios). O número total de células dendríticas foi significativamente menor em camundongos velhos comparado a camundongos jovens. Além disso, o número de células apresentando antígeno foi menor no linfonodo drenante de animais velhos, e a expressão de CD86 por células dendríticas de animais velhos não foi diferente da dos animais jovens. Os resultados sugerem que a diminuição da capacidade de apresentação de antígeno apresentada no envelhecimento é crítica para a perda do potencial estimulatório de células T CD4+ por células dendríticas.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000426213-Texto+Completo-0.pdf: 938672 bytes, checksum: c9d69c710254cf6314b911e44b264f1f (MD5) Previous issue date: 2010 / Studies have suggested that neuronal loss in Parkinson’s disease could be related to the pacemaker activity of the substantia nigra pars compacta generated by Ltype Cav1. 3 calcium channels, which progressively substitute voltagedependent sodium channels in this region during aging. Besides this mechanism, which leads to increases in intracellular calcium, other factors are also known to play a role in dopaminergic cell death due to overproduction of reactive oxygen species. Thus, dihydropyridines, a class of calcium channel blockers, and resveratrol, a polyphenol that presents antioxidant properties, may represent therapeutic alternatives for the prevention of PD. In the present study we tested the effects of the dihydropyridines isradipine, nifedipine and nimodipine and of resveratrol upon locomotor behavior in Drosophila melanogaster. As previously described, paraquat induced parkinsonianlike motor deficits. Moreover, none of the drugs tested were able to prevent the motor deficits produced by paraquat. Additionally, isradipine, nifedipine, resveratrol and ethanol (vehicle), when used in isolation, induced motor deficits in flies. This study is the first demonstration that dyhidropyridines and resveratrol are unable to reverse the locomotor impairments induced by paraquat in Drosophila melanogaster. / Estudos recentes demonstram que a perda neuronal na doença de Parkinson pode estar relacionada à atividade marcapasso dos neurônios dopaminérgicos da substância nigra pars compacta, que é gerada por canais de cálcio voltagemdependentes, os quais substituem canais de sódio voltagemdependentes, nessas células, durante o envelhecimento. Além desse mecanismo, que leva ao aumento dos níveis intracelulares de cálcio, outros fatores também são implicados na morte de células dopaminérgicas observada na doença de Parkinson, como a elevada geração de espécies reativas de oxigênio. Deste modo, o tratamento com diidropiridinas, uma classe de bloqueadores de canais de cálcio, e com resveratrol, um polifenol que apresenta propriedades antioxidantes, podem representar alternativas terapêuticas para a prevenção da doença de Parkinson. Neste estudo foram testados os efeitos das diidropiridinas isradipina, nifedipina e nimodipina e do resveratrol no comportamento motor de Drosophila melanogaster. Assim como em estudos anteriores, o tratamento com paraquat foi capaz de induzir parkinsonismo, evidenciado pelos déficits motores observados nos animais. Além disso, nenhuma das drogas testadas foi capaz de prevenir os déficits locomotores induzido pelo paraquat. Ademais, os tratamentos isolados com isradipina, nifedipina, resveratrol e etanol (veículo) foram capazes de gerar diminuição da atividade motora nesses animais. Este estudo é o primeiro a demonstrar que os tratamentos com diidropiridinas e resveratrol são incapazes de reverter os déficits locomotores induzidos por paraquat em Drosophila melanogaster.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000432146-Texto+Completo-0.pdf: 1043859 bytes, checksum: 1179861d46757576425c11737bcf1dc7 (MD5) Previous issue date: 2011 / Cannabidiol, the main non-psychotropic constituent of Cannabis sativa, has a large number of pharmacological effects including anticonvulsant, sedative, hypnotic, antipsychotic, antiinflammatory and neuroprotective, as demonstrated in both clinical and pre-clinical studies. Many neurodegenerative disorders involve cognitive deficits, and this has led to interest in whether cannabidiol could be useful in the treatment of memory impairment associated to these diseases. Here, we used an animal model of cognitive impairment, induced by iron overload in order to test the effects of cannabidiol in memory-impaired rats. Rats received vehicle or 10. 0 mg/kg Fe+2 orally at postnatal days 12-14. When animals reached the age of 2 months, they received an acute intraperitoneal injection of vehicle or cannabidiol (5. 0 or 10. 0 mg/kg) immediately after the training session of the novel object recognition task. In order to investigate the effects of chronic cannabidiol, neonatally iron-treated rats received daily intraperitoneal injections of cannabidiol (5. 0 or 10. 0 mg/kg) for 14 days. Twenty-four hours after the last injection, they were submitted to object recognition training. Retention test sessions were performed 24 hours after training. Results indicated that animals that received iron in the neonatal period show severe memory deficits. A single acute injection of cannabidiol at the highest dose was able to partially recover memory in iron-treated rats. Chronic cannabidiol improved recognition memory in iron-treated rats in a dose-dependent manner. Acute or chronic cannabidiol does not affect memory in control rats. The present findings provide evidence that suggest the potential use of cannabidiol for the treatment of cognitive decline associated to neurodegenerative disorders. Further studies, including clinical trials are warranted in order to determine the usefulness of cannabidiol in humans suffering from neurodegenerative disorders. / O canabidiol é o principal constituinte não-psicotrópico da Cannabis sativa e possui uma ampla variedade de efeitos farmacológicos, incluindo efeito anticonvulsivante, sedativo, hipnótico, antipsicótico, antiinflamatório e neuroprotetor como demonstrado em estudos clínicos e pré-clínicos. Muitas doenças neurodegenerativas envolvem déficits cognitivos e isto tem levado ao questionamento sobre a possibilidade de utilização do canabidiol no tratamento dos danos de memória associado a essas patologias. No presente trabalho utilizou-se um modelo animal de dano cognitivo induzido pela sobrecarga de ferro a fim de investigar os efeitos do canabidiol na disfunção de memória. Ratos Wistar machos receberam veículo ou 10. 0 mg/kg Fe⁺² por via oral nos dias 12-14 pós-natal. Quando os animais completaram 2 meses de idade (idade adulta), receberam uma injeção intraperitonial aguda de veículo ou canabidiol (5. 0 ou 10. 0 mg/kg) imediatamente após a sessão de treino da tarefa de reconhecimento do objeto. Para investigar os efeitos do uso crônico de canabidiol os ratos tratados com ferro no período neonatal receberam injeções diárias intraperitoniais de canabidiol (5. 0 ou 10. 0 mg/kg) durante 14 dias. Vinte e quatro horas após a última injeção eles foram submetidos ao treino de reconhecimento de objeto. As sessões de teste de retenção foram realizadas 24 horas após o treino. Os resultados indicaram que os animais que receberam ferro no período neonatal apresentaram déficits severos de memória. Uma única injeção aguda de canabidiol na sua dose mais alta foi capaz de recuperar parcialmente a memória dos ratos tratados com ferro. O uso crônico de canabidiol melhorou a memória de reconhecimento dos ratos tratados com ferro de forma dose dependente. O uso agudo ou crônico de canabidiol não afeta a memória dos ratos controles. Os resultados do presente trabalho fornecem evidências que apontam para o uso do canabidiol no tratamento de déficit cognitivo associados às doenças neurodegenerativas. Investigações futuras, envolvendo ensaios clínicos seriam necessárias para determinar a utilidade deste fármaco no tratamento de seres humanos acometidos por doenças neurodegenerativas.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:42:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000416908-Texto+Completo-0.pdf: 885300 bytes, checksum: 5452bf642a3ce3b68b89d90eab1512b5 (MD5) Previous issue date: 2009 / Zebrafish is a small teleost currently used as a model organism in several different areas of research. Its molecular neurobiology and genome similarities to humans allow its use in different types of studies including toxicological, genetic and pathological analysis. Studies have shown iron deficiency can cause anemia and its overload can be related to pathologies such as hereditary haemocromatosis in the liver and neurodegenerative diseases in the brain like Alzheimer and Parkinson. The cholinergic system has been widely used as a parameter to evaluate the action of toxic agents and behavior pattern alternation. Once removed, the acetylcholineterase can cause the accumulation of acetylcholine in the nerves synapses and muscle junctions, resulting in an excitatory transmission increase. The AChE gene was cloned and sequenced in the zebrafish. The increasing use of zebrafish in several studies involving exposure to toxic agents and drugs, supports its use as an attractive experimental model to evaluate the effects of iron in different tissues. Accordingly, the purpose of this study was to evaluate the effects of the exposure to different concentrations of iron on the activity of acetylcholinesterase in brain and liver of adult zebrafish, as well as, to investigate its possible correlation with the content of iron accumulated in each tissue analyzed. In in vitro tests, the iron was able to promote a significant increase in the activity of acetylcholinesterase in brain (52%) and liver (53%) when the tissues were exposed to high concentration of iron tested (2. 6 mM). An increase of enzyme activity was observed in tests in vivo in the presence of 15mg / L of iron, both in brain (62%) and in liver (70%). The analysis of semi-quantitative PCR showed no modulation in the levels of transcripts of the gene encoding acetylcholinesterase in both tissues of zebrafish. Furthermore, it was demonstrated that the iron in the liver was significantly increased when the fish were exposed to 15mg/ L (226%) and 150mg/L (200%) but not in brain. These results indicate that iron can promote significant changes in the activity of acetylcholinesterase, but that increased activity does not appear to be directly related to the increase of iron in tissues of zebrafish. / O zebrafish é um pequeno teleósteo usado atualmente como organismo modelo em diversas áreas das ciências. As bases moleculares da neurobiologia e o genoma similar ao dos humanos proporcionam o seu uso em diversos tipos de estudos, que incluem toxicológicos, genéticos e patológicos. Estudos demonstraram que o déficit de ferro pode gerar diversos tipos de anemias enquanto seu acúmulo pode estar relacionado com diversas patologias, como a Hemocromatose Hereditária, no fígado e Doenças Neurodegenerativas, como Alzheimer e Parkinson, no cérebro. O sistema colinérgico tem sido amplamente utilizado como parâmetro para avaliar a ação de agentes tóxicos e alteração de padrões comportamentais. A enzima Acetilcolinesterase (AChE), uma vez inibida, pode gerar um acúmulo de acetilcolina nas sinapses nervosas e junções musculares, resultando em um aumento da transmissão excitatória. O gene da AChE foi clonado e seqüenciado no zebrafish. O uso crescente do zebrafish em diversos estudos envolvendo exposição a agentes tóxicos e fármacos, dá suporte a seu uso como um modelo experimental atrativo para avaliar os efeitos do ferro em diferentes tecidos. Neste sentido, o objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos da exposição a diferentes concentrações de ferro sobre a atividade da acetilcolinesterase em cérebro e fígado de zebrafish adultos, assim como investigar a possível correlação destes efeitos com o conteúdo de ferro acumulado em cada um dos tecidos analisados. Nos ensaios in vitro, o ferro foi capaz de promover um aumento significativo na atividade da acetilcolinesterase em cérebro (52%) e fígado (53%) quando os tecidos foram expostos a mais alta concentração de ferro testada (2. 6 mM). Um aumento desta atividade enzimática foi observado nos ensaios in vivo, na presença de 15mg/L de ferro, tanto em cérebro (62%) quanto em fígado (70%). A análise de PCR semiquantitativo mostrou não haver modulação nos níveis de transcritos do gene que codifica a AchE em ambos os tecidos de zebrafish. Além disto, foi demonstrado que o ferro estava significativamente aumentado no fígado quando os peixes foram expostos a 15mg/L (226%) e 150mg/L (200%), mas não no cérebro. Estes resultados indicam que o ferro pode promover alterações significativas na atividade da AchE, mas que o aumento da atividade não parece estar diretamente relacionado com o aumento de ferro nestes tecidos de zebrafish.