Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento / Made available in DSpace on 2012-10-25T23:52:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 299609.pdf: 436171 bytes, checksum: ed76a5d58a2c662e70ae2d2bf827337b (MD5) / Kappaphycus alvarezii é uma macroalga de grande importância econômica, devido a extração de kappa carragenana de suas paredes celulares. Apresenta diversas variantes pigmentares tais como: vermelho escuro, marrom, amarelas e diferentes tonalidades de verde. A radiação ultravioleta-B (RUVB) afeta as macroalgas em diversas maneiras importantes, incluindo a redução nas taxas de crescimento, redução na produtividade primária, e mudanças na biologia celular e na organização ultraestrutural. Portanto, nós examinamos o efeito da RUVB na variante marrom de K. alvarezii durante 28 dias de cultivo sendo 3 h diárias de exposição. As plantas controle apresentaram taxas de crescimento de 7.27% dia-1, enquanto as plantas expostas a RUVB cresceram apenas 4.0% dia-1. Diferenças significativas nas taxas de crescimento e nas concentrações de ficobiliproteínas entre controle e plantas a RUVB foram verificadas. Comparado com as plantas controle, as concentrações das ficobiliproteínas apresentaram redução após a exposição RUVB. Além disso, a concentração da clorofila a diminuiu e mostrou diferenças significativas após a exposição RUVB. A RUVB ocasionou mudanças na ultraestrutura das células corticais e subcorticais, incluindo o aumento da espessura da parede celular e o número de plastoglóbulos, redução nos espaços intracelulares, alterações no contorno das células e destruição de organização interna dos cloroplastos. A reação com azul de Toluidina evidenciou um aumento na espessura da parede celular, e o ácido periódico Schiff mostrou uma diminuição no número de grãos de amido. Pelas mudanças significativas nas taxas de crescimento, nas concentrações dos pigmentos fotossintetizantes, e mudanças ultraestruturais observadas, torna-se evidente que RUVB afeta negativamente as macroalgas intermareais e sua viabilidade econômica / The effects of ultraviolet radiation-B (UVBR) in apical segments of the red macroalgae Gracilaria domingensis (Kützing) Sonder ex Dickie were examined in vitro. Over a period of 21 days, the segments were cultivated and exposed to photosynthetically active radiation (PAR) at 80 µmol photons m-2 s-1 and PAR +UVBR at 1.6 Wm-2 for 3 h per day. The samples were processed for electron microscopy, as well as histochemical analysis, and growth rate, photosynthetic pigment contents and photosynthetic performance were measured. Toluidine Blue reaction showed metachromatic granulations in vacuole and lenticular thickness, while Coomassie Brilliant Blue showed a higher concentration of cytoplasmic organelles, and Periodic Acid Schiff stain showed an increase in the number of floridean starch grains. UVBR also caused changes in the ultrastructure of cortical and subcortical cells, which included an increased number of plastoglobuli, changes in mitochondrial organization, destruction of chloroplast internal organization, and the disappearance of phycobilisomes. The algae cultivated under PAR-only showed growth rates of 6.0% day-1, while algae exposed to PAR +UVBR grew only 2.8% day-1. Compared with algae cultivated with PAR-only, the contents of photosynthetic pigments, including chlorophyll a, phycoerythrin, phycocyanin and allophycocyanin, decreased after exposure to PAR + UVBR, and significant differences were observed. Finally, analysis of these four photosynthetic parameters also showed reduction after exposure to PAR + UVBR: maximum photosynthetic rate, photosynthetic efficiency, photoinhibition and relative electron transport rate. Taken together, these findings strongly suggested that UVBR negatively affects the agarophyte G. domingensis

Foram estudadas, pelo método da assinatura digital, 35 biópsias esofágicas provenientes de pacientes da província de Linxian, China, classificadas por dois observadores com ampla experiência em patologia gastrointestinal como normais, displasias ou carcinomas (8 casos normais, 6 displasias leves, 8 displasias moderadas, 4 displasias acentuadas, 4 carcinomas suspeitos de invasão e 5 carcinomas invasores). O objetivo do trabalho foi caracterizar os núcleos das populações celulares desses casos de forma que permitisse a derivação de informações diagnósticas e de possível implicação prognóstica a partir do estudo quantitativo das características nucleares de cada caso ou categoria diagnóstica. As biópsias foram coradas pelo método de Feulgen, sendo então selecionados e digitalizados 48 a 50 núcleos de cada uma delas. De cada núcleo foram extraídas 93 características cariométricas, arranjadas arbitrariamente em histograma designado como assinatura nuclear. Da média aritmética de cada característica dos núcleos de uma mesma biópsia resultou a assinatura digital do caso. A análise de funções discriminantes, baseada nas 15 características cariométricas que ofereceram melhor discriminação entre as categorias diagnósticas, mostrou que o grupo classificado como normal foi claramente distinto das demais categorias. A densidade óptica total aumentou progressivamente segundo a classificação das biópsias, do normal à displasia acentuada, sendo o valor do carcinoma semelhante ao da displasia moderada. A matriz de comprimento de seqüência apresentou o mesmo perfil, ou seja, ambas as características ofereceram discriminação clara entre as categorias diagnósticas, com exceção do carcinoma invasor, cujos valores foram superponíveis aos da displasia moderada. O estudo demonstrou a viabilidade da quantificação de características nucleares através das assinaturas nucleares digitais, que demonstraram diferenças estatisticamente significativas entre diferentes categorias diagnósticas e a elevação progressiva dos valores mensurados relacionados com o espectro das lesões, apresentando-as como um histograma (assinatura digital nuclear). / 35 esophageal biopsies of patients from the Linxian province in China, classified by two experienced gastrointestinal pathologists as normal, dysplasias or carcinomas ( 8 normal cases, 6 mild dysplasias, 8 moderate dysplasias, 4 severe dysplasias 4 carcinomas suspicious of invasion and 5 invasive carcinomas) were studied by the method of digital signature. The aim of this study was to characterize the nuclei of these cases cell populations in such a way that diagnostic and prognostic information could be derived from the nuclear quantitative features of each case or each diagnostic category. The biopsies were stained by the Feulgen method, a stechiometric reaction, 48 to 50 nuclei from each biopsy being selected and digitized. 93 kariometric features were obtained from each nucleus and placed arbitrarily in a histogram designated as nuclear signature. The nuclear signatures of a case resulted from the mean values of each nuclear feature of the same biopsy, divided by the standard deviation of the normal cell population. The analysis of discriminant functions, based on the 15 kariometric features with the best discrimination power among diagnostic categories, revealed that the group classified as normal was clearly distinct from the other groups. Optical density augmented progressively according to the biopsy classification from normal to severe dysplasia, the value for carcinoma being similar to that for moderate dysplasia. The run length matrix showed the same profile, that is, both features offered clear discrimination among diagnostic categories, except invasive carcinoma, whose values overlapped those for moderate dysplasia. The study demonstrated the feasibility of the examination of quantitative nuclear features, revealing statistically significant differences among the various diagnostic categories and the progressive elevation of measured values in relation to the increasing degree of the lesion, and demonstrating such differences as histograms (nuclear signatures).

Os métodos convencionais para o diagnóstico da tuberculose (TB) pleural possuem várias limitações, assim métodos mais sensíveis e específicos são necessários. O objetivo deste estudo foi avaliar uma metodologia de hibridização em microplaca e uma técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real para a detecção de DNA de Mycobacterium tuberculosis em amostras de líquido pleural, fragmento de pleura e soro. Adicionalmente, foi avaliada a utilidade da PCR em tempo real em paralelo com a cultura do líquido pleural para o diagnóstico de TB pleural. Foram avaliados 161 pacientes com derrame pleural e submetidos à toracocentese e biópsia pleural. O padrão-ouro para definição de um caso de TB pleural baseou-se na combinação de baciloscopia, cultura, exame histopatológico e critérios clínicos. Cento e sete dos 161 pacientes com derrame pleural receberam diagnóstico de TB pleural. Os resultados da metodologia de hibridização em microplaca não foram satisfatórios, assim foi desenvolvida uma técnica de PCR em tempo real. Nas amostras de líquido pleural, a PCR em tempo real mostrou uma sensibilidade de 46% (IC 95%, 36%-56%) com especificidade de 100%, enquanto a cultura obteve uma sensibilidade de 29% (IC 95%, 20%- 38%). A PCR em tempo real realizada em associação com a cultura no líquido pleural apresentou uma sensibilidade de 60% (IC 95%, 50%-70%). Para as amostras de fragmento pleural, a PCR em tempo real mostrou uma sensibilidade de 42% (IC 95%, 26%-59%) e especificidade de 100%, para este tipo de amostra o exame histopatológico apresentou a maior sensibilidade (90% - IC 95%, 84%- 96%). Nas amostras de soro a PCR em tempo real foi positiva em apenas dois pacientes, os quais também apresentaram resultado positivo nos outros tipos de amostras. Estes resultados indicam que a PCR em tempo real realizada no líquido pleural pode ser uma forma útil para obter um diagnóstico de TB pleural mais rápido, específico e com um procedimento menos invasivo para coleta das amostras. / Conventional tests for pleural tuberculosis (TB) have several limitations and more sensitive and specific methods are needed. The aim of this study was to evaluate microwell hybridization and real-time PCR (polimerase chain reaction) for detection of Mycobacterium tuberculosis DNA in pleural fluid, pleural tissue and serum. Additionally, the utility of real-time PCR in parallel with culture in pleural fluid for the diagnosis of pleural TB was assessed. One hundred sixty one patients with a pleural effusion submitted to a thoracentesis and pleural biopsy were evaluated. The gold-standard for case definition of pleural TB were the combination of acid-fast bacilli, culture, histopathologic examination and clinical parameters. One hundred seven of the 161 patients with pleural effusion received diagnosis of pleural TB. Results of microwell hybridization were not satisfactory, thus we developed a real-time PCR assay. In pleural fluid specimens, real-time PCR showed a sensitivity of 46% (CI 95%, 36%-56%) with specificity of 100%, while the sensitivity of culture was 29% (CI 95%, 20%-38%). The combination of real time PCR and culture in pleural fluid showed a sensitivity of 60% (CI 95%, 50%-70%). For the pleural tissue, real-time PCR showed a sensitivity of 42% (CI 95%, 26%-59%) with specificity of 100%, for this specimen histopathologic examination had the highest sensitivity (90% - CI 95%, 84%-96%). In the serum real-time PCR was positive in only two patients, which also had positive results in other specimens. Our results indicate that the real-time PCR is a useful approach to achieve a more rapid and specific diagnosis for pleural TB with a less invasive procedure for specimen collection.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-05-23T04:12:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 345773.pdf: 2975746 bytes, checksum: 75cb9b7e973aa13e7c87f1908fea3eb7 (MD5) Previous issue date: 2016 / A neurotoxicidade do metilmercúrio (MeHg) em indivíduos adultos é relativamente conhecida, contudo são escassos os trabalhos que analisam os estudos sobre a ação desse metal em duas estruturas do SNC durante o desenvolvimento. Este trabalho teve como objetivo relacionar os efeitos do MeHg sobre a organização estrutural e ultraestrutural do mesencéfalo e cerebelo, bem como identificar sua ação nos processos de proliferação e diferenciação celular, utilizando como modelo experimental embriões de Gallus domesticus. Os embriões foram tratados in ovo no 3° dia de incubação (E3) com uma única dose de metilmercúrio (MeHg) (0,1 µg diluído em 50 µL de salina) e analisados no 10° dia de incubação (E10). Os embriões do grupo controle foram tratados somente com 50 µL de solução salina.As análises morfológicas e morfométricas do mesencéfalo e cerebelo foram realizadas a partir de secções histológicas coradas com HE. A quantificação e imunolocalização de proteínas relacionados ao ciclo celular (ciclina E; p21 e p53), diferenciação celular (NeuN; TubulinaIII e GFAP), proliferação celular (fosfohistona H3) e dano ao DNA(?PH2Ax), bem como relacionados a dinâmica mitocondrial (Drp-1 eMfn-1) foram obtidos a partir de técnicas de imuno-histoquímica e citometria de fluxo. Foram realizados ensaios de detecção do MeHg através do espectrofotômetro de absorção atômica e análises por microscopia eletrônica de transmissão, para investigar alterações ultraestruturais. Os resultados mostraram deposição de Hg no mesencéfalo e cerebelo. A exposição ao MeHg provocou aumento da expressão da p21 no mesencéfalo e p53 no cerebelo, e significativa redução da expressão da ciclina E e de fosfohistona H3, sugerindo parada no ciclo celular e da proliferação celular. No grupo tratado foram observadas alterações ultraestruturais, sendo as mais evidentes nas mitocôndrias das células do mesencéfalo e principalmente do cerebelo. Os insultos ao ciclo e a estrutura celular alteraram os processos de diferenciação, provocando uma diminuição no número das células das linhagens neural e glial. Este estudo revelou que os insultos do MeHg no cerebelo foram mais severos do que no mesencéfalo, demonstrando que a toxicodinâmica do MeHg é dependente do período do desenvolvimento, podendo comprometer funções importantes para a sobrevivência do embrião.<br> / Abstract : Neurotoxicity of Methylmercury (MeHg) has been studied for years, but their relationship with the development of two CNS structures (midbrain and cerebellum) is highly unusual. This study aimed to analyze the effects of MeHg in the structural and ultrastructural organization and its influence on the processes of proliferation, differentiation and cell cycle of the midbrain and cerebellum of Gallus domesticus embryos. The embryos were treated in ovo on the 3rd day of incubation (E3) with a single dose of methylmercury (MeHg) (0.1ug in 50 uL of diluted saline) and analyzed on the 10th day of incubation (E10). The control group embryos were treated only with 50 uL saline solution. The morphological and morphometric analysis of the midbrain and cerebellum sections were taken from histological sections stained with hematoxylin-eosin. The quantification and immunolocalization of proteins related to cell cycle (Cyclin E, p21and p53), cell differentiation (NeuN; tubulin III and GFAP), cell proliferation (phosphohistone H3) and DNA damage (yPH2Ax) and related mitochondrial dynamics (Drp-1 and Mfn-1) were obtained from immunohistochemistry and flow cytometry techniques. Metal detection assays were conducted using the atomic absorption spectrophotometer and analysis by transmission electron microscopy to investigate ultrastructural changes. The results showed deposition of Hg in the midbrain and cerebellum. Exposure to MeHg caused increased p21 expression in the midbrain and p53 in the cerebellum, and significant reduction in the expression of cyclin E and phosphohistone H3, suggesting cell cycle arrest and cell proliferation. Ultrastructural changes were observed, being more evident in the mitochondria of cells of the midbrain and especially of cerebellum. The insults to the cycle and the cellular structure altered the processes of differentiation, causing a decrease in the number of cells of neural and glial lineages. This study revealed that MeHg insults in the cerebellum were more severe than in the midbrain, demonstrating that the toxicology of MeHg is dependent on the developmental period and could compromise functions important for the survival of the embryo.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-10-10T17:49:38Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 971689 bytes, checksum: b8481fed35051aa8e4779320d434fbc2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-10T17:49:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 971689 bytes, checksum: b8481fed35051aa8e4779320d434fbc2 (MD5) Previous issue date: 2001-12-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Foram analisadas mitocôndrias isoladas de hipocótilos de soja, coleóptiles de milho, raízes de beterraba e tubérculos de batata, no sentido de comparar ultraestruralmente mitocôndrias que apresentam transportador de Ca 2+ (soja e milho) com outras que são incapazes de acumular este cátion (beterraba e batata). As mitocôndrias foram analisadas quanto à sua atividade respiratória, grau de acoplamento, consumo de Ca 2+ e aspectos de sua ultraestrutura. A análise ultraestrutural evidenciou o alto grau de purificação das mitocôndrias isoladas, com membranas íntegras, em sua maioria, variando do estado ortodoxo, para o estado condensado, em consequência da adição de ADP ao meio de reação e retorno ao estado ortodoxo inicial, após a fosforilação de todo o ADP adicionado. Na matriz, finamente granulosa, foram observados grânulos esféricos e uniformes, presentes em todos os tipos de mitocôndrias, independente de serem capazes de captar Ca 2+ ou não. Não foram observadas alterações nesse tipo de granulação quando as mitocôndrias de soja e de milho encontravam-se em atividade de captação de Ca 2+ . Entretanto, ao contrário das mitocôndrias isoladas de beterraba, as mitocôndrias de soja e de milho passaram para a conformação condensada, enquanto captavam Ca 2+ do meio de reação. / Mitochondria isolated from soybean hypocotyls, maize coleoptiles, sugarbeet roots and potato tubers were searched by considering a group able in capturing Ca 2+ (soybean and maize) and another one unable in that activity (sugarbeet and potato). Mitochondria were evaluated in relation to respiratory activity, coupling degree, Ca 2+ uptake and ultrastructural profile. The electron microscopy showed a high degree of purification, and little contamination with other organelles, such as peroxisomes and proplastids. Mostly, the isolated mitochondria showed complete membranes, varying from the orthodox to the condensed state, as a response to ADP additions. In all types of mitochondria, uniform and spherical granules were present in their matrix, independently on their ability to capture Ca 2+ . Only mitochondria from soybean and maize changed from orthodox to condensed state while performing Ca 2+ uptake, without exhibiting alterations in the granulation pattern. / Dissertação importada do Alexandria

Alguns estudos caracterizaram a microbiota de canais radiculares de dentes decíduos com necrose pulpar como polimicrobiana, com predomínio de microrganismos anaeróbios. No entanto, nenhum estudo até o presente momento investigou a presença de genes de resistência a antimicrobianos em diferentes ecossistemas da cavidade oral de crianças. Este estudo tem por objetivo determinar a presença de espécies de Prevotella e do gene cfxa/cfxa2 associados à resistência à beta-lactâmicos, em diferentes ecossistemas orais de crianças com necrose pulpar. Vinte e sete crianças, que estavam sob cuidados odontológicos no Ambulatório de Clínica Infanto-Juvenil da Faculdade de Odontologia da UFRGS, e que apresentavam, pelo menos, um dente decíduo com necrose pulpar foram selecionados para este estudo. Foram coletadas amostras de saliva, biofilme supragengival, biofilme da câmara pulpar e do canal radicular de 32 dentes (27 posteriores e 5 anteriores). Após isolamento do DNA microbiano, a presença das bactérias Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae e do gene cfxA/cfxA2 foi avaliada através do método de PCR. A amostra foi composta de pacientes com idade média de 5,5 anos (± 1,76). A taxa total de espécies de Prevotella foi de 29,1%, 25%, 21,8% e 32,29% em amostras de saliva, biofilme, câmara pulpar e canal radicular, respectivamente. As três espécies juntas não foram detectadas em todos os micro-ambientes do mesmo paciente, mas estavam presentes em 3,1% (n=1) de amostras do canal radicular. Prevotella nigrescens foi a bactéria mais frequentemente encontrada em todos os ecossistemas estudados. Foram observadas diferenças estatisticamente significativas em relação à presença de P. nigrescens em pelo menos um local e idade do paciente (teste t, p = 0,04). Também foi encontrada associação entre a presença desta bactéria, em pelo menos um local e uso de antimicrobianos (teste exato de Fisher, p = 0,014). A presença do gene de resistência à beta-lactâmicos, cfxA/cfxA2, foi testada em 12 pacientes da amostra, nos quatro micro-ambientes orais. Entre esses pacientes, 55,6% eram meninas, com idade média de 6 anos (± 2,5). Não foi detectada a presença deste gene em nenhuma amostra investigada. Os dados sugerem que a cavidade bucal de crianças com necrose pulpar apresenta presença diversificada de espécies de Prevotella em diferentes micro-ambientes orais. A ausência do gene cfxA/cfxA2 foi observada em todas as amostras investigadas. Estudos futuros, testando a presença de outros genes de resistência à beta-lactâmicos, são importantes para uma investigação abrangente. / Some studies characterized the microbiota of root canals of primary teeth with pulp necrosis as polymicrobial, with a predominance of anaerobic microorganisms. However, no study to date has investigated the presence of antimicrobial resistance genes in different ecosystems of the oral cavity of children. This study aims to determine the presence of Prevotella species and genes associated with resistance to beta-lactams in different oral enviroments of children with pulp necrosis. Twenty-seven children who were under dental care at the Children and Youth Clinic (Dental School, UFRGS, Porto Alegre, Brazil), and who had at least one primary tooth with pulp necrosis were selected for this study. Saliva, supragingival biofilm, pulp chamber biofilm and root canal biofilm were collected of 32 teeth (27 posterior and 5 anterior). After isolation of microbial DNA, the presence of Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae and cfxA/cfxA2 gene were evaluated using the PCR. The sample consisted of patients with a mean age of 5.5 years (± 1.76). The total rate of Prevotella species was 29.1%, 25%, 21.8% and 32.29% in saliva samples, biofilm, pulp chamber and root canal, respectively. The three strains were not detected in all enviroments of the same patient, but were present at 3.1% (n = 1) of the root canal samples. Prevotella nigrescens was the most common bacteria in all oral enviroments. Statistical significant differences were observed for the presence of P. nigrescens at least one oral enviroment and age of the patient (t-test, p = 0.04). Also an association was observed, among the presence of these bacteria in at least one enviroment and use of antimicrobials (Fisher's exact test, p = 0.014). The presence of the resistance gene to beta-lactams, cfxA/cfxA2, was tested on 12 patients of the sample at all four oral enviroments. Among these patients, 55.6% were girls with a mean age of 6 years (± 2.5). Absence of this gene in the sample investigated was detected. The absence of cfxA/cfxA2 gene was observed in all the investigated samples. Future studies testing the presence of other resistance genes to beta-lactams, are important for a comprehensive investigation.

Resumo não disponível

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-29 / O Papilomavírus Bovino infecta epitélios, ocasionando tanto lesões cutâneas, geralmente benignas, como também cânceres no trato digestivo e urinário. Objetivos: Neste trabalho, foram estabelecidas culturas primárias obtidas de lesões de animais infectados por BPV com diferentes características clínicas e avaliadas as diferenças morfológicas, citogenéticas e moleculares dessas células primárias em relação às células de cultivo de animais sadios e alguns parâmetros comparado com células de cultivos temporários de linfócitos de sangue periférico. Métodos: Foram coletadas amostras de sangue e biópsias de 9 animais avaliados clinicamente como sadios, com papilomatose cutânea, papilomatose esofágica e hematúria enzoótica. Tais amostras foram analisadas histopatologicamente, citogeneticamente e submetidas à investigação de presença de sequências de DNA viral. Foram estabelecidos cultivos primários de cada grupo de amostras e realizada a caracterização morfológica, curva de crescimento e senescência, marcação de proteínas de citoesqueleto (vimentinas, citoqueratinas e actinas), adesão focal (paxilina e vinculina) e proteína do capsídeo viral L1. Resultados: Detectou-se a presença do DNA viral nas primeiras passagens dos cultivos estabelecidos assim como se observou maior número de células com alterações cromossômicas nos três grupos de animais clinicamente afetados em relação aos sadios, tanto nos cultivos primários quanto nos cultivos temporários de linfócitos de sangue periférico, destacando-se rearranjos com adições e deleções, seguidos das quebras cromatídicas e fragmentos acêntricos. As células dos grupos clinicamente afetados por BPV apresentaram marcação dupla de vimentina e citoqueratina, sugerindo um fenômeno chamado transição epitelial-mesenquimal já visto em alguns casos de cânceres. Nesses cultivos, as marcações das fibras de actina e das proteínas de adesão focal mostraram desarranjo, retração das fibras e formação de lamelipodia, provavelmente fruto da ação das proteínas virais. Também foi detectada por imunofluorescência a presença de proteína do capsídeo viral na região nuclear e perinuclear. Conclusões: A presença do DNA do vírus através das passagens, as alterações cromossômicas e a expressão da proteína viral são evidências pela primeira vez apresentadas de que os vírus mantém alguma atividade in vitro. Alterações tanto das proteínas do citoesqueleto como de adesão focal apontam para que essas mesmas células já estejam sofrendo as primeiras mudanças para um processo neoplásico. / The bovine papillomavirus is responsible for infecting epithelia causing skin lesions, usually benign, but also cancers of the digestive and urinary tract. Objectives: In this study, we evaluated the morphological, cytogenetic and molecular aspects of primary cells cultures presenting BPV DNA sequences, collected from animals with diffe rent clinical features and compared to cells from healthy animals. Methods: We collected blood samples and biopsies from healthy animals, bovines with cutaneous papillomatosis, esophageal papillomatosis, and enzootic hematuria, which were analyzed by histopathology, cytogenetics and viral DNA sequence detectio n. We established primary cultures of samples collected from each group and made the cell characterization by morphology, growth and senescence patterns, protein cytoskelet on (vimentin, cytokeratin and actin), focal adhesion (paxillin and vinculin) and vir al capsid L1 protein detection. Results: We detected the presence of viral DNA sequences in the early passages of primary cell cultures and observed a greater number o f cells with chromosomal alterations in the three groups presenting BPV DNA sequences, when compared to healthy animals, both in primary cells and blood lymphocyte cultures, being the most evident alterations the rearrangements with additions or deletions of segments, followed by the chromatid breaks and Acentric Fragments. Th e cells of the groups obtained from BPV infected lesions had showed a concomitant vimentin and cytokeratin labeling, suggesting a phenomenon identified as epithelial-m esenchymal transition often described in cancers. In these cell lines infected, the actin fibers and focal adhesion proteins showed disarray, retraction of actin fibers and a lamella r formation, probably resulting from the viral proteins action. It was also detected by immunofluorescence the presence of viral capsid L1 protein in the nuclear a nd perinuclear region. Conclusions: The presence of the virus DNA sequences through the passages, chromosomal alterations and expression of viral protein indicate, for the first time, that the virus maintains some activity in vitro . Alterations in cytoskeleton and focal adhesion proteins pointed out that these cells cultures are already suffe ring the early changes to a malign process. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-06T04:06:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334702.pdf: 1926534 bytes, checksum: e711854e530b3173555ba9ad179c9cfd (MD5) Previous issue date: 2015 / O glifosato é um herbicida utilizado para inibir o crescimento de plantas daninhas. Este herbicida é solúvel em água e, quando aplicado em sistemas terrestres, infiltra no solo atingindo os ecossistemas aquáticos e consequentemente, afetando organismos não-alvo. O objetivo deste estudo foi caracterizar os efeitos de 65 µg/L glifosato sobre a organização estrutural e ultraestrutural das células somáticas e germinativas durante a espermatogênese de Danio rerio. A concentração de glifosato utilizada corresponde ao limite máximo estabelecido pelo CONAMA para águas de abastecimento par consumo humano. Os resultados mostram aumento significativo de micronúcleos, além de aumento significativo no índice gonadossomático (IGS) nos machos expostos por 360 h. A análise estrutural permitiu o reconhecimento em todos grupos de três estágios de cistos germinativos organizados próximos a parede dos testículos, que correspondem aqueles compostos por: (i) espermatogônias, (ii) espermatócitos, (iii) espermátides (iniciais e tardias); além da presença de espermatozoides no lúmen do túbulo seminífero. Na análise ultraestrutural observou-se alterações nas células de Sertoli, com perda da densidade do citoplasma e das organelas, bem como o aparecimento de estruturas com aspecto vesicular. Além dessas, foram observadas alterações das interações entre células de Sertoli e células germinativas e perda das pontes citoplasmáticas entre as células germinativas. Na análise de expressão da proteína envolvida no estresse celular foi observado no grupo exposto por 144 h, aumento significativo de HSP70 induzível, a qual não foi mais observado em 360 h. Na quantificação de FASL, envolvida na indução à apoptose, observou-se aumento significativo nos machos expostos por 360 h. Embora neste estudo, tenha sido reconhecido uma aumento de FASL, não foram observadas modificações na expressão nenhuma das proteínas de ativação à apoptose investigadas (BCL2, BAK e caspase 3). Os efeitos adversos do glifosato sobre os testículos, principalmente sobre células de Sertoli, são um importante indicativo sobre as consequências na reprodução de peixes, que podem abranger desde o nível celular, sistêmico e populacional. Por fim, este estudo demonstrou a importância de se investigar a toxicidade do glifosato sobre a reprodução masculina, utilizando testículos de peixe como modelo experimental.<br> / Abstract : Glyphosate is herbicide used to inhibit the growth of weeds. This herbicide is soluble in water, and when applied in terrestrial systems, glyphosate infiltrates into the soil, reaching aquatic ecosystems and consequently affecting nontarget organisms. The aim of this study was to characterize the effect of 65 µg/L glyphosate on the structural and ultrastructural organization of somatic and germ cells during Danio rerio spermatogenesis. Glyphosate concentration used corresponds to the maximum level stated by CONAMA for waters for human consumption. Our results showed significant increase of the micronuclei, as well as, significant increase in GSI on males exposed to glyphosate for 360 h. Structural analysis allowed the recognition in all groups of three germ cysts stages, organized near to the testes wall, that correspond to those that contains: (i) spermatogonia, (ii) spermatocytes (iii) spermatids (early and late), and the presence of sperm in the lumen of the seminiferous tubule. On the ultrastructural analysis, alterations were observed in Sertoli cells, with density loss of the cytoplasm and organelles, as well as, the appearence of structures with vesicular aspect. Moreover, alterations on interactions between Sertoli and germ cells and loss of cytoplasmic bridges between the germ cells. On the analysis of protein expression involved in cell stress, was observed after 144 h a significant increase in the inducible HSP70 protein, which is no observed at 360 h. In the quantification of FASL, involved in apoptosis induction, there was a significant increase in males exposed for 360 h. Although in this study has been recognized a FASL increasing, there was no observed modifications on expression of the investigated proteins that activate apoptosis (BCL2, BAK and Caspase 3). The adverse effects of glyphosate on the testicles, mainly on Sertoli cells, are an important indicative of the consequences on fish reproduction, which may include from the cellular, systemic and population levels. Finally, this study demonstrated the importance of investigating the glyphosate toxicity on male reproduction, using fish testicles as experimental model.

Made available in DSpace on 2016-02-26T13:34:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 leandro_neto_ioc_mest_2013.pdf: 1062337 bytes, checksum: 9883a46c5550a2fd2408f865ac3622e1 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O Tripanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, constitui um grave problema de saúde pública que afeta 18 milhões de pessoas na América latina. Para produzir a infecção formas tripomastigotas metacíclica de T. cruzi , liberadas durante a picada do inseto vetor, precisam evadir o sistema imune inato do hospedeiro vertebrado para infectar as células. O sistema complemento, devido à sua capacidade para rapidamente reconhecer e eliminar microrganismos constitui a principal linha de defesa do sistema imune inato. O sistema do complemento é composto por várias proteínas, ativadas em cascata por serino proteases, que culmina com a formação do complexo de ataque a membrana e lise do patógeno. Todavia, muitos organismos patogênicos desenvolveram formas de escapar do ataque do sistema do complemento por meio de diversos mecanismos. Visando à melhor caracterização dos fatores de virulência do T. cruzi, o grupo foi verificar se os sobrenadantes de formas metacíclicas apresentam atividade inibitória de complemento. Devido às vias do complemento serem ativadas por serino proteases, foi realizada uma busca no banco genômico de T. cruzi atrás de motivos de SERPINAS (inibidores de serino protease) que o parasito poderia estar liberando no primeiro contato parasito-hospedeiro. Foram realizados experimentos de lise mediada pelo complemento com sobrenadantes das formas metacíclicas de T. cruzi. Observou-se, ainda, que os sobrenadantes das formas metacíclicas do T. cruzi são capazes de inibir a lise mediada pelo complemento de formas epimastigotas / The Try panosoma cruzi, etiologic agent of Chagas disease, is a serious public health concernthat affects 18 million people in Latin America. To produce the infection, metacyclic trypomastigotes de T cruzi released during the bite of the insect vector must evade the innate immune system of the vertebrate host to infect cells. The complement system, due to its ability to rapidly recognize and eliminate microorganisms is the major line of innate immune system defense. The complement system is composed of various proteins, activated by serine proteases cascade that culminates in the formation of the membrane attack complex and lysis of the pathogen. However, many pathogens have developed ways to evade the attack of the complement system through several mechanisms. Aiming to better characterize the virulence factors of T. cruzi, the team was to verify whether the supernatants of metacyclic forms exhibit inhibitory activity of complement. Due to the complement pathways are activated by serine proteases, we seek in genomic library of T. cruzi motifs related t o serpin (serine protease inhibitors) , a protein that the parasite could be releasing at the first parasite - host contact . Experiments were carried out to complement - mediated lysis with supernatants of metacyclic forms of T. cruzi . F urthermore , i t was ob served, that the supernatants of metacyclic forms of T. cruzi are capable of inhibiting the complement mediated lysis of epimastigotes