Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 467154.pdf: 7061163 bytes, checksum: 094a6255137e152d52395cd63a9b0ee4 (MD5) Previous issue date: 2015-03-06 / Alzheimer disease (AD) and Parkinson disease (PD) are the two most common neurodegenerative disorders affecting around 35 and 10 million people worldwide, respectively. These disorders are characterized by neuronal protein deposits and progressive loss of function or structure of central nervous system (CNS). Studies have shown that purinergic system is involved in mechanisms associated with neurodegenerative diseases such as AD and PD. The purinergic signaling is meditated by ATP and adenosine through activation of purinoceptors P2 and P1, respectively. The nucleotide and nucleoside levels are modulated by the action of the ectonucleotidase family, especially by ecto-Nucleoside triphosphate diphosphohydrolases (NTPDases) and ecto-5?-nucleotidase (EC-5?-Nt). These enzymes hydrolyze ATP to adenosine, which is subsequently deaminated by the enzyme Adenosine Deaminase (ADA) to inosine. Adenosine is described as an important neuromodulator and neuroprotective of CNS, and its modulation has proven to be a promising alternative for the treatment of neurodegenerative diseases. Thus, this study aims to evaluate behavioral parameters in models of cognitive impairment induced by scopolamine, 6-hydroxydopamine, and paraquat in zebrafish and study the possible effect of these models on the purinergic system. Our results, using a model of pharmacological cognitive impairment induced by scopolamine in adult zebrafish, showed that selective and non-selective inhibitors of adenosine receptors (Caffeine, ZM241385, and DPCPX) prevented the cognitive deficit induced by scopolamine. The same results were found for the adenosine transporter inhibitor (dipyridamole), and ADA inhibitor (EHNA). These data support the hypothesis of adenosinergic signalling can modulate memory mechanisms. We also developed a new experimental model of neurodegeneration by treating adult zebrafish chronically with paraquat herbicide (Pq) that results in symptoms of PD. Treatment consisted of six ip. injections of Pq in doses of 10 or 20 mg/kg and each injection was administered every three days. Locomotor behavior was assessed 24 hours after each injection and showed a decrease in both doses. The turn angle was also evaluated and showed difference between the doses administered compared to control group. Non-motor behaviors such as anxiety and social interaction were not significantly different after chronic treatment with Pq. However, after Pq exposure, the animals showed a deficit in Y-maze task memory. Apart from the behavioral data, our results presented an increase on dopamine levels, whereas DOPAC decreased in the experimental group showing change in dopamine metabolism. The amount of tyrosine hydroxylase demonstrated no significant difference between control and treated fish; however, dopamine transporter expression decreased in the group treated with 10 mg/kg Pq, and there was no change at the highest dose. Our study also evaluated the effect of chronic exposure of Pq and 6-hydroxydopamine (6-OHDA) neurotoxins, commonly used as an animal model of PD, on extracellular nucleotide and nucleoside metabolism. Two doses of 6-OHDA were tested, 25 and 50 mg/kg, and the animals were sacrificed at six days after exposure. Our data showed no changes in ectonucleotidase activities or ATP, ADP and AMP levels after exposure to Pq. However, a decrease of extracellular adenosine and increase in inosine levels were observed when compared to the control group. The 6-OHDA treatment did not affect the activity of NTPDase, EC-5?-Nt, and ATP levels in both tested doses. In contrast to the previous results, ADP levels were different for each dose used, while the AMP levels decreased in both doses. The adenosine and inosine showed an increase in both doses of 6-OHDA tested in zebrafish brains. These data suggest that the purinergic system can be modulated differently in experimental animals with symptoms of Parkinson's disease. In addition, this study also presented a new model of neurodegeneration using the Pq and confirms the involvement of purinergic system on neurodegeneration as well as its pharmacological potential in neurodegenerative diseases. / As doen?as neurodegenerativas mais prevalentes s?o a doen?a de Alzheimer (DA) e a doen?a de Parkinson (DP) afetando cerca de 35 e 10 milh?es de pessoas no mundo, respectivamente. Essas patologias s?o caracterizadas pelo dep?sito de prote?nas em c?lulas neuronais e pela perda progressiva da fun??o ou estrutura no sistema nervoso central (SNC). Estudos t?m mostrado que o sistema purin?rgico est? envolvido nos mecanismos relacionados a DA e DP. A sinaliza??o purin?rgica ? mediada pela a??o do ATP e da adenosina atrav?s da ativa??o dos receptores P2 e P1, respectivamente. Os n?veis de nucleot?deos e de nucleos?deos s?o modulados pela a??o enzim?tica das ectonucleotidases, especialmente pela ecto-nucleos?deo trifosfato difosfoidrolases (NTPDases) e ecto-5'-nucleotidase (EC-5?-Nt). Estas enzimas hidrolisam ATP em adenosina, que ? subsequentemente desaminado pela enzima adenosina deaminase (ADA) a inosina. A adenosina ? descrita como importante neuromodulador e neuroprotetor do SNC e sua modula??o tem se mostrado uma alternativa promissora para o tratamento de doen?as neurodegenerativas. Com isso, este estudo visa avaliar par?metros comportamentais em modelos de d?ficit cognitivo induzidos por escopolamina, por 6-hidroxidopamina e por paraquat em peixe-zebra, e estudar o poss?vel efeito desses modelos sobre o sistema purin?rgico. Nossos resultados, utilizando o modelo farmacol?gico de d?ficit cognitivo induzido por escopolamina em peixe-zebra adulto, mostraram que os inibidores seletivos e n?o seletivos dos receptores de adenosina (Cafe?na, ZM241385 e DPCPX) preveniram o d?ficit causado pela escopolamina. Os mesmos resultados foram encontrados para o inibidor do transportador de adenosina (dipiridamol) e inibidor da ADA (EHNA). Esses dados suportam a hip?tese de que a sinaliza??o adenosin?rgica pode modular o processamento da mem?ria. Nosso estudo tamb?m caracterizou um novo modelo experimental de neurodegenera??o, tratando peixes-zebra adultos cronicamente com paraquat (Pq), herbicida associado aos sintomas da DP. O tratamento consistiu de seis inje??es intraperitoniais nas doses de 10 ou 20 mg/kg a cada tr?s dias. O comportamento locomotor foi avaliado 24 horas ap?s cada inje??o e mostrou uma diminui??o em ambas as doses. O ?ngulo de giro tamb?m foi avaliado 24 horas ap?s cada inje??o e demonstrou diferen?a entre as doses administradas. Comportamentos n?o motores como ansiedade e intera??o social n?o apresentaram diferen?a significativa ap?s o tratamento cr?nico com Pq. No entanto, os animais tratados com Pq demonstraram d?ficit de mem?ria em tarefa de labirinto em Y comparados com o grupo controle. Al?m dos dados comportamentais, nossos resultados mostraram um aumento nos n?veis de dopamina, enquanto os de DOPAC diminu?ram nos animais tratados com Pq, mostrando mudan?a no metabolismo. J? a tirosina hidroxilase n?o apresentou diferen?a significativa entre animais do grupo controle e tratados, por?m a express?o do transportador de dopamina diminuiu no grupo tratado com 10 mg/Kg de Pq, n?o havendo altera??o na maior dose. Nosso estudo tamb?m investigou os efeitos da exposi??o cr?nica do Pq e da neurotoxina 6-hidroxidopamina (6-OHDA), comumente usada como modelo animal de DP, sobre o metabolismo extracelular de nucleos?deos e nucleot?deos. Duas doses de 6-OHDA foram testadas, 25 e 50 mg/kg, e os animais foram eutanasiados seis dias ap?s a exposi??o. Nossos dados mostraram que o Pq n?o alterou a atividade das NTPDases e EC-5?-Nt ou os n?veis extracelulares de ATP, ADP e AMP. No entanto, o tratamento cr?nico com Pq diminui os n?veis extracelulares de adenosina e aumentou os n?veis de inosina. Os peixes tratados com 6-OHDA n?o apresentaram altera??es na atividade das NTPDases e EC-5?-Nt, bem como nos n?veis de ATP extracelular nas duas doses testadas. Por?m, houve mudan?as nos n?veis de ADP e uma diminui??o, em ambas as doses, nos n?veis de AMP. J? os n?veis extracelulares de adenosina e inosina apresentaram um aumento. Estes dados sugerem que o sistema purin?rgico pode ser modulado de forma diferente em animais experimentais com sintomas de Parkinson. Al?m disso, este trabalho tamb?m apresentou um novo modelo de neurodegenera??o utilizando o Pq al?m de refor?ar o envolvimento do sistema purin?rgico e o seu potencial farmacol?gico sobre doen?as neurodegenerativas.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 390427.pdf: 375935 bytes, checksum: 7b9cf03e42c02f1fe6df14d3ac696bcb (MD5) Previous issue date: 2007-03-19 / Objetivo: Investigar se h? associa??o entre as variantes polim?rficas - 786T>C e 894G>T (Glu298Asp) do gene que codifica para a sintase do ?xido n?trico endotelial (eNOS) e a ocorr?ncia de sepse, choque s?ptico e disfun??es org?nicas em pacientes com condi??es cr?ticas de sa?de. Pacientes e M?todos: Foram selecionados para esse estudo 207 pacientes cr?ticos internados na unidade de tratamento intensivo geral (UTI) do Hospital S?o Lucas da PUCRS, admitidos de mar?o de 2002 a dezembro de 2005. O grupo controle foi constitu?do por 149 doadores volunt?rios saud?veis oriundos da mesma popula??o. A disfun??o org?nica dos pacientes s?pticos foi avaliada durante a primeira semana ap?s admiss?o na UTI, atrav?s do escore SOFA, e foram consideradas as ocorr?ncias de sepse, choque s?ptico e ?bito. Os gen?tipos das variantes polim?rficas -786C>T e 894G>T foram determinados por an?lise de fragmentos de restri??o dos produtos da rea??o em cadeia da polimerase (PCR). Ap?s, foi analisada a freq??ncia da distribui??o dos gen?tipos e dos alelos entre os grupos de pacientes e de indiv?duos saud?veis. Resultados: A freq??ncia de portadores do alelo -786C entre os pacientes cr?ticos e pacientes s?pticos foi significativamente mais alta do que entre os volunt?rios saud?veis (58% vs 46%; P=0,021, OR=1.64, CI 95%: 1.05-2.57, e 60% vs 46%; P=0,012, OR=1.82, CI 95%: 1.10-3.01, respectivamente). Homozigotos - 786CC tiveram significativamente um maior grau de disfun??o org?nica, medido pelo escore SOFA durante a crucial primeira semana de interna??o na UTI (P=0,001) sem, no entanto, haver diferen?a significativa na taxa de mortalidade. Homozigotos 894TT foram mais freq?entes entre os pacientes cr?ticos e pacientes s?pticos do que entre indiv?duos saud?veis (25% vs 14%; P=0,017, OR=0.49, CI 95%: 0.25-0.92, e 25% vs 14%; P=0,024, OR=0.46, CI 95%: 0.22-0.96, respectivamente). Por outro lado, portadores do alelo 894G tiveram escores SOFA significativamente mais altos (P=0,028) e n?o houve rela??o significativa com a mortalidade. Detectou-se a presen?a significativamente superior do duplo-homozigoto -786CC/894TT no grupo de pacientes (P=0,002) se comparada ao grupo de sujeitos saud?veis, e o duplohomozigoto 786TT/894GG significativamente mais freq?ente no grupo de volunt?rios (P=0,002) do que no grupo de pacientes. Conclus?o: Ambas variantes polim?rficas -786C>T e 894G>T da eNOS podem estar associadas com um maior risco de suscetibilidade ao desenvolvimento de condi??es cl?nicas cr?ticas mais graves, ? sepse e ao choque s?ptico.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 391140.pdf: 3891847 bytes, checksum: a692cff7af22978c19d6e2954a337d26 (MD5) Previous issue date: 2007-05-16 / A depress?o ? a manifesta??o mais comum dos dist?rbios afetivos. ? uma das doen?as mais debilitadoras e causa problemas tanto para o indiv?duo quanto para a sociedade e, se n?o for tratada, pode levar ao aumento da morbidade e mortalidade. O uso de f?rmacos antidepressivos ? a base dos tratamentos para depress?o. Os inibidores seletivos da recapta??o de serotonina, como a fluoxetina e a sertralina, e os antidepressivos tric?clicos, nortriptilina e clomipramina, s?o constantemente utilizados no tratamento para a depress?o. Evid?ncias t?m demonstrado o importante papel desempenhado pelo ATP e a adenosina no sistema nervoso central. O ATP pode ser armazenado e co-liberado juntamente com outros neurotransmissores, tais como a noradrenalina e a serotonina. O ATP extracelular pode ser hidrolisado at? adenosina pela a??o de um grupo de ecto-nucleotidases. Estas ecto-enzimas promovem a convers?o enzim?tica de ATP, controlando os n?veis deste nucleot?deo e do seu nucleos?deo adenosina. Dentro do grupo das ecto-nucleotidases, podemos destacar a fam?lia das NTPDases (Nucleos?deo trifosfato difosfoidrolases) e a ecto-5?- nucleotidase. Considerando que: (i) a adenosina exerce um importante papel neuromodulador, (ii) o ATP pode ser co-liberado com serotonina e noradrenalina e (iii) as ecto-nucleotidases representam a principal rota de forma??o de adenosina extracelular atrav?s do catabolismo do ATP, torna-se importante avaliar o efeito de f?rmacos antidepressivos sobre a via das ecto-nucleotidases. Fluoxetina, sertralina, nortriptilina e clomipramina foram testadas no tratamento in vitro, nas concentra??es de 100, 250 e 500 ?M no soro e em sinaptossomas de hipocampo e c?rtex cerebral de ratos. A hidr?lise de ATP e ADP foram inibidas de maneira dose-dependente no tratamento in vitro realizado com os quatro f?rmacos em sinaptosomas de hipocampo e c?rtex cerebral de ratos, mas a hidr?lise de AMP n?o foi alterada. O tratamento in vitro em soro de ratos n?o afetou nenhuma das atividades enzim?ticas estudadas. Fluoxetina e nortriptilina foram testadas no tratamento in vivo, na dose de 10mg/Kg. O tratamento agudo (1 hora ap?s a administra??o) com nortriptilina provocou uma inibi??o na hidr?lise de ATP em soro de ratos. Entretanto, o tratamento cr?nico (14 dias) com ambas as drogas provocou uma inibi??o na atividade das NTPDases e da ecto-5?-nucleotidase em soro. O tratamento agudo com fluoxetina n?o alterou a atividade das enzimas em sinaptossomas de hipocampo e c?rtex cerebral. Entretanto, o tratamento agudo com nortriptilina levou a um aumento na hidr?lise de ADP no c?rtex cerebral e induziu uma diminui??o na hidr?lise de ATP e ADP no hipocampo. O tratamento cr?nico com fluoxetina provocou uma inibi??o na hidr?lise de ATP no hipocampo e no c?rtex cerebral e aumentou a hidr?lise de ADP e AMP no c?rtex cerebral. Ap?s tratamento cr?nico com nortriptilina, houve uma diminui??o da hidr?lise de ATP no hipocampo, mas foi observado um aumento nas atividades destas enzimas no c?rtex cerebral. A express?o g?nica das NTPDases e ecto-5?-nucleotidase foi alterada ap?s os tratamentos agudo e cr?nico com fluoxetina e nortriptilina em hipocampo e c?rtex cerebral de ratos. Os resultados demonstram que estes f?rmacos antidepressivos podem influenciar as enzimas envolvidas na forma??o do neuromodulador adenosina, sugerindo que o sistema purin?rgico pode ser alvo dos efeitos neuroqu?micos promovidos por estes f?rmacos

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 392208.pdf: 680503 bytes, checksum: f878615d3cb5271fa0bad4f5e273c6b6 (MD5) Previous issue date: 2006-10-17 / A disfun??o de m?ltplos ?rg?os e a Insufici?ncia renal aguda compartilham muitos dos fatores fisiopatol?gicos envolvidos na sua instala??o. Estudos recentes correlacionam a heran?a gen?tica com a suscetibilidade ? disfun??o de org?os entre pacientes criticamente doentes. Muitos consideram que o gene da ECA poderia ser um potencial candidato a fator de risco genetico em pacientes de UTI. Em nosso estudo, examinamos os efeitos dos polimorfismos I/D e -262A>T do gene da ECA na fun??o renal em pacientes criticamente doentes de uma UTI do sul do Brasil. Um escore de disfun??o multiorg?nico mundialmente reconhecido, o SOFA (avalia??o seq?encial da disfun??o do ?rg?o), foi empregado para determinar o estado basal da sa?de no primeiro dia de admiss?o ? UTI. Considerando o escore SOFA da admiss?o e a tend?ncia da fun??o renal (atrav?s do escore di?rio do SOFA renal, determinado pela medida di?ria da creatinina s?rica e da diurese), n?s consideramos a hip?tese de que os polimorfismos I/D e -262A>T do gene ECA poderiam influenciar na tend?ncia da fun??o renal em pacientes de ICU. Um total de 153 pacientes adultos, criticamente doentes (79 homens e 77 mulheres), foi inclu?do neste estudo. N?s monitoramos os pacientes diariamente durante sua perman?ncia na UTI e hospitalar (per?odo m?ximo de observa??o de 224 dias). Foi observada a progress?o ? disfun??o renal (valores 3 e 4 de escores SOFA) nos primeiros sete dias da interna??o em UTI e a necessidade de di?lise durante este per?odo. As freq??ncias genot?picas totais em nossa amostra foram II=0.17; ID=0.46; DD=0.37 e AA=0.30; AT=0.55; TT=0.15, e as freq??ncias al?lica foram I=0.40; D=0.60 e A=0.56; T=0.44. Este ? o primeiro estudo delineado para verificar a influ?ncia de polimorfismos I/D e -262A>T do gene ECA na disfun??o renal aguda entre pacientes de UTI. Nenhuma associa??o significativa foi encontrada entre a evolu??o da fun??o renal durante a primeira semana de interna??o na UTI e os gen?tipos ou freq??ncias al?licas dos polimomrfismos em quest?o. Os polimorfismos I/D e -262A>T n?o apresentaram nenhum impacto significativo na tend?ncia da fun??o renal durante a primeira semana de interna??o na UTI, igualmente, n?o houve influ?ncia da heran?a gen?tica sobre a mortalidade nos pacientes criticamente doentes estudados

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 389451.pdf: 5571098 bytes, checksum: 770defaacf3399bd51f2eda83ca17963 (MD5) Previous issue date: 2007-04-04 / A forma?ao dos complexos protefna DNA depende da complementaridade de cargas entre as cadelas laterals dos amino?cidos que comp?ern a protelna e os nudeotIdeos que compOern a cadeia de DNA (reconhecimento direto) e do reconhecirnento da estrutura, da conforma?ao tridimensional, adotada ou capaz de ser adotada pela cadeia de DNA (reconhecimento indireto). A prote?na PDEF est? relacionada com o controle da transcri??o de genes respons?veis pelo desenvolvimento de tumores em tecidos sujeitos ? regula??o por horm?nios sexuais; principalmente c?ncer de mama e de pr?stata. Assim como as demais prote?nas da fam?lia ETS de fatores de transcri??o, a PDEF reconhece e se liga ? cadeia de DNA atrav?s do dom?nio ETS, que caracteriza esta fam?lia. As prote?nas ETS apresentam maior depend?ncia dos fatores de reconhecimento indiretos na forma??o dos complexos prote?na - DNA. Ou seja, a conforma??o adotada pela cadeia de DNA tem maior influ?ncia sobre a afinidade de liga??o da prote?na do que a pr?pria seq??ncia de nucleot?deos. Ao contr?rio das demais prote?nas ETS, que reconhecem com alta afinidade a seq??ncia 5 -GGAA-3, e apresentam baixa ou nenhuma afinidade pela seq??ncia 5 -GGAT-3, a prote?na PDEF apresenta alta afinidade de liga??o pela seq??ncia 5 -GGAT-3 e n?o forma complexos com cadeias de DNA que contenham o s?tio de liga??o 5 -GGAA-3. A PDEF apresenta ainda substitui??es ?nicas de amino?cidos na h?lice de reconhecimento da cadeia de DNA.Para avaliar os efeitos destas substitui??es de amino?cidos e das substitui??es de pares de base no s?tio de liga??o da prote?na na conforma??o tridimensional da cadeia de DNA, e consequentemente, na afinidade de liga??o entre prote?na e DNA, foram realizadas an?lises das seq??ncias de amino?cidos das prote?nas ETS e das intera??es observadas experimentalmente na interface prote?na-DNA e simula??es pela din?mica molecular dos tridec?meros de DNA que cont?m as seq??ncias de alta e de baixa afinidade pela prote?na PDEF (GGAT e GGAG, respectivamente) e do sistema controle sem afinidade de liga??o, GGAA. Os resultados das an?lises e das simula??es pela din?mica molecular indicam que as altera??es na seq??ncia de amino?cidos da prote?na, e a substitui??o dos grupamentos expostos no sulco maior da cadeia de DNA (padr?o de reconhecimento direto, ou intermolecular), aliados a altera??es na conforma??o da cadeia de DNA induzidas pelas substitui??es das bases na posi??o +4 do sitio de liga??o (padr?o de reconhecimento indireto ou intramolecular) parecem ser respons?veis pelo padr?o de afinidade distinto da PDEF. No entanto, a n?o conserva??o dos res?duos que interagem com a cadeia de DNA, e a grande n?mero de contatos n?o espec?ficos com a cadeia fosfato-a??car corroboram o padr?o de leitura intramolecular como o principal mecanismo de reconhecimento da cadeia de DNA pelas prote?nas ETS.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 393359.pdf: 3706184 bytes, checksum: 69c5551b27d8ba08aadf9a5c582b8491 (MD5) Previous issue date: 2007-07-05 / A resist?ncia natural das plantas a doen?as ? baseada tanto em mecanismos pr?-formados quanto em mecanismos induzidos. Esse estudo pretendeu analisar os n?veis de compostos fen?licos, incluindo o grupo dos flavon?ides e as atividades das enzimas polifenoloxidases (PPOs) e peroxidases (POX) em Solanum tuberosum cv. ?gata, em resposta ?s inocula??es com as bact?rias fitopatog?nicas incompat?veis Xanthomonas axonopodis, Ralstonia solanacearum, e compat?veis Erwinia carotovora. A compatibilidade das bact?rias foi avaliada atrav?s da inocula??o de tub?rculos. Tub?rculos infiltrados com E. carotovora exibiram sinais de doen?a e com R. solanacearum e X. axonopodis n?o desenvolveram doen?a. As inocula??es nas folhas foram realizadas dependendo do n?mero e das localiza??es das folhas nos ramos. As inocula??es m?ltiplas foram realizadas nas folhas basais, intermedi?rias e apicais e as inocula??es simples ocorreram nas folhas intermedi?rias. As folhas inoculadas com as suspens?es de X. axonopodis e R. solanacearum exibiram a resposta de hipersensibilidade (HR) dentro de 24 hpi, enquanto que as folhas inoculadas com E. carotovora evidenciaram sintomas de doen?a. Portanto, o isolado de R. solanacearum utilizado nos experimentos n?o mostrou virul?ncia a esta cultivar de batata. Independentemente do tratamento bacteriano, as folhas basais apresentaram nas inocula??es m?ltiplas, as mais altas atividades das PPOs e das POX e os n?veis mais baixos de compostos fen?licos totais e de flavon?ides, quando comparadas com as folhas apicais. As folhas basais e as intermedi?rias inoculadas com R. solanacearum e com X. axonopodis mostraram um aumento nos n?veis de compostos fen?licos totais e de flavon?ides. Esses aumentos foram similares ou maiores que os n?veis observados nas folhas apicais n?o inoculadas. De um modo geral, as inocula??es m?ltiplas exibiram os maiores n?veis de compostos fen?licos totais e de flavon?ides, enquanto que as inocula??es simples apresentaram os maiores aumentos nas atividades das PPOs. Contudo, as atividades das POX n?o apresentaram diferen?as significativas entre as inocula??es m?ltiplas e simples. No presente estudo, o metabolismo de defesa nesta cultivar de batata foi estimulado pelas bact?rias incompat?veis, indicando a sua posterior utiliza??o como indutoras da defesa da planta contra o ataque subseq?ente de pat?genos compat?veis.

Resumo não disponível

ATP-difosfohidrolases, comumente denominadas de apirases, descritas pela primeira vez à cerca de quarenta anos atrás, são enzimas que hidrolisam nucleosídeos di ou trifosfatados por um mecanismo que parece ser sequencial, mas sem a formação de um intermediário energético, e de funções metabólicas ainda desconhecidas. Elas tem sido encontradas nas células dos mais diversos pró- e eucariotos investigados e também em tumores. A vasta abundância dessas enzimas e a sua alta atividade enzimática sugerem que as mesmas estariam envolvidas em importantes funções do metabolismo celular. No presente trabalho, identificamos e caracterizamos a presença de uma nova enzima em Trypanosoma cruzi, o agente causador da doença de Chagas, uma apirase, com características semelliantes à outras apirases já descritas em diversos organismos. Diversos ensaios enzimáticos foram feitos mostrando uma atividade enzimática que não foi anulada pelos inibidores clássicos de ATPases tipo-P, tipo-F ou tipo-V. Esta enzima mostrou depende~n·cla para Mg2+, na~o acontecendo o mesmo para Ca2+. Experimentos usando soros imunes contra apirases de outras fontes, reveleram não apenas reação cruzada, mas também sugeriram que a massa molecular dessa enzima no T cruzi, estaria em tomo de 57,5 kDa. Ensaios citoquímicos (imunoflorescência) com o soro imune anti- NTPase de Toxoxplasma gondii, apresentou fluorescência contra diferentes estágios desse protozoa. No entanto, a localização subcelular dessa enzima no T cruzi não ficou muito clara, tomando-se necessário uma microscopia eletrônica para resolver esse problema. Um dado interessante e particular nesse traballio, foi a presença dessa enzima nos diversos estágios do ciclo de vida do parasita, com atividades enzimáticas diferentes para esses mesmos estágios. / ATP-diphosphohydrolases which are generally called apyrases were described for the first time some forty years ago. These are enzymes which hydrolyze di- and triphosphate nucleosides through a mechanism which seems to be sequential, without forming a high-energy enzyme intermediate. Their metabolic function is yet unknown. ATP-diphosphohydrolases have been found in a number of pro- and eucariotic cells and also in tumor cells. The vast abundance ofthese enzymes and their high enzymatic activity suggest that they are involved in important functions in the cell metabolism. In the present work we have identified and characterized the presence of a new enzyme in Trypanosoma cruzi, the agent of Chagas disease, namely an apyrase with characteristics which are similar to other apyrases already described in different organisms. A number of enzymatic assays showed that the enzyme is not inhibited by the classical inhibitors of P-type, F-type or V-type ATPases. The enzyme exhibited a marked dependence on Mg2+ and not on Ca2+. Experiments using immune sera against apyrases of other sources showed cross- reactivity and suggested that the molecular mass of the enzyme in cruzi is around 57.5 kDa. Immunofluorescence cytochemistry using antiToxoplasma gondii NTPase antibodies showed that fluorescence was present in different stages of the protozoa. However, the exact sub-cellular localization of the enzyme in T cruzi was not clear and electron microscopy will be necessary to answer this question. An interesting result of our work is the identification of the enzyme in different stages of the life cycle of the parasite, with different enzymatic activities among the stages.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000443742-Texto+Completo-0.pdf: 569133 bytes, checksum: 71572bf56d3664471f8b311fafbd7bba (MD5) Previous issue date: 2012 / Metabolic syndrome (MetS) is associated with increased risk of incidence type 2 diabetes, cardiovascular disease and insulin resistance and is considered an important cause of mortality and morbidity from cardiovascular disease. According to guidelines from the National Cholesterol Evaluation Program for Adult Treatment Panel III (NCEP ATP III) diagnosis of this syndrome occurs when a person has three or more risk factors between central obesity, hyperglycemia, hypertriglyceridemia, high blood pressure and low HDL-cholesterol. Others risk factors also been associated with MetS are inflammation, genetic and environmental factors. Among the genetic factors investigated as possible risk factors are identified some polymorphisms in the gene interleukin 6 receptor, already associated with dyslipidemia, obesity and insulin resistance. The objective of this study was to evaluate the response of individuals with Metabolic Syndrome (MetS) to a lifestyle modification intervention and the influence of polymorphism 48867A>C of IL6R (rs2228145) in this response. Seventy-seven sedentary individuals with at least three criteria for MetS were included and randomly divided into two groups: NI, nutritional intervention; NIE, nutritional intervention and exercise practice. Parameters were analyzed before and after three months of intervention. When comparing the effect of different intervention according to genotype, a decrease in triglyceride levels was observed (significant for AA genotype; for AC genotype only in NIE group); a significant reduction of fasting glucose level was observed in AA genotype, independent of intervention group, but for AC genotype, only in NI group; systolic blood pressure (SBP) showed significant reduction for AA and AC genotype. When analyzing parameters mean value according to genotype (isolated and in combination) before and after intervention, triglyceride mean levels differed significantly after intervention among genotypes and for AA compared to AC+CC; SBP showed difference before intervention for AA genotype and after intervention, among genotypes and for homozygous A. The analysis of number of individuals with altered parameters revealed statistically significant difference for AA genotype before intervention for triglycerides and diastolic blood pressure (DBP). After intervention, significance was observed for triglycerides, SBP and DBP among genotypes and for AA compared to AC+CC. In conclusion, our results suggest that response to intervention based on nutritional control and exercise practice could benefit mainly individuals homozygous AA of IL6R gene 48867A>C polymorphism. / A síndrome metabólica (SM) está associada a um risco aumentado de incidência de diabetes tipo 2, doenças cardiovasculares e resistência à insulina, sendo considerada uma importante causa de mortalidade e morbidade por doença cardiovascular. Segundo orientações da National Cholesterol Evaluation Program for Adult Treatment Panel III (NCEP ATP III) o diagnóstico dessa síndrome acontece quando um indivíduo apresenta três ou mais fatores de risco entre obesidade central; elevados níveis de glicemia, de triglicerídeos e de pressão arterial e baixos níveis de HDL-colesterol. Outros fatores que também têm sido associados à SM, são inflamação, fatores genéticos e ambientais. Entre os fatores genéticos investigados como possível fator de risco estão alguns polimorfismos identificados no gene do receptor da interleucina 6, já associados a dislipidemias, obesidade e resistência à insulina. O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta de indivíduos com síndrome metabólica (SM) a uma intervenção de modificação do estilo e a influência do polimorfismo 48867A> C do IL6R (rs2228145) nesta resposta. Setenta e sete indivíduos sedentários, com pelo menos três critérios para síndrome metabólica foram incluídos e divididos aleatoriamente em dois grupos: IN, intervenção nutricional; INE, intervenção nutricional e prática de exercícios. Os parâmetros foram analisados antes e após três meses de intervenção. Quando foi comparado o efeito das diferentes intervenções de acordo com o genótipo, foi observada uma diminuição dos níveis de triglicerídeos (significativa para o genótipo AA, mas para o genótipo AC somente no grupo INE); uma redução significativa do nível de glicose em jejum foi observada no genótipo AA, independente do grupo de intervenção, mas para o genótipo AC, somente no IN grupo; a pressão arterial sistólica (PAS) mostrou redução significativa nos genótipos AA e AC. Quando valor médio dos parâmetros foi analisado de acordo com os genótipos (isolados e em combinação) antes e após a intervenção, os níveis médios de triglicerídeos diferiram significativamente após a intervenção entre os genótipos e no genótipo AA comparado com AC+CC; a PAS mostrou diferença antes da intervenção para o genótipo AA e após a intervenção, entre os genótipos e para homozigotos A. A análise do número de indivíduos com parâmetros alterados revelou diferença estatisticamente significante para o genótipo AA, antes da intervenção, para triglicerídeos e pressão arterial diastólica (PAD). Após a intervenção, foi observada significância para triglicerídeos, PAS e PAD entre os genótipos e para o genótipo AA quando comparado com AC+CC. Em conclusão, nossos resultados sugerem que a resposta à intervenção baseada no controle nutricional e na prática de exercícios pode beneficiar, principalmente, os indivíduos homozigotos AA do polimorfismo 48867A> C do gene IL6R.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:30Z (GMT). No. of bitstreams: 3 000426842-Texto+Completo+Parte+A-0.pdf: 3364122 bytes, checksum: 2f879605f3f2e21948815733de4aa60f (MD5) 000426842-Texto+Completo+Parte+B-1.pdf: 6563357 bytes, checksum: f0d8e25ab9e59069e153a4f424aaeb38 (MD5) 000426842-Texto+Completo+Parte+C-2.pdf: 6903772 bytes, checksum: a8b4320823d3843e93a8766e95aedaac (MD5) Previous issue date: 2010 / This study aimed at evaluating the effect of resveratrol on bone neoformation in bone defects created in the tibias of rabbits, in both cellular and molecular levels. New Zealand rabbits of both sexes were used, weighing 3500g. For the determination of the resveratrol concentration added to the total weight of the inorganic bovine bone (used as the main vehicle of this study), 4 experimental groups were established. The percentages added to the total weight of the inorganic bovine bone of each experimental group were: experimental group 1 – 20%; experimental group 2 – 40%; experimental group 3 – 60%; experimental group 4 – 80%. For the evaluation of behavior and cellular activity, bone growth marks were used in three control groups at different periods (Alizarin – 14 and 21 days; Calcein – 28 and 35 days; Tetracycline – 42 and 49 days). In control group 1, the defect was only filled with clot; in control group 2, the defect was only filled with the inorganic bovine bone; and in control group 3, the defects were filled by the material prepared with 60% of resveratrol in relation to the weight of the inorganic bone (experimental group 3). For the molecular study of verification of possible surgical stress modulation by the resveratrol, groups were prepared to determine the NF-kB activation curve and control the process used, and also to study the resveratrol activity in this process. The results demonstrated that resveratrol acted as a potential modulator of bone formation, increasing the response of this tissue. However, the concentration mixture demonstrated better results when used in quantities of 60% in relation to the material used as vehicle, which in this case was the inorganic bovine bone. Several groups were proposed after the determination of the peak activation of NF-kB such as, the irrigated group and the resveratrol group. It was observed that in the irrigated group, a reduction of the activation of the NF-kB in the zero position in the periostal region, even though there was no significant statistical results in relation to the control (animals of the activation curve determination group, in which the peak of NF-kB activation achieved the cortical bone in 6h). In the resveratrol group, the reduction of the activation of the NF-kB was observed in the zero and one position, with the activation fall being more significant at position zero. In this study, it was also observed that the immunoreactivity for NF-kB was not restricted to the injured region, but it spread throughout the bone cortex, increasing at the knee region. We concluded in this study: 1 – that the resveratrol may influence the process of bone repairing, significantly increasing the quality of response; 2 – resveratrol may modulate NF-kB when applied in situ in bone processes; 3 – with the obtained results, it may be proposed that the surgical trauma control is directly related to the quality and quantity of the bone tissue response; 4- the amount of resveratrol added to an osteoconductive material must be balanced and measured to obtain adequate results. / Esse trabalho teve como objetivo avaliar o efeito do resveratrol na neoformação óssea em defeitos criados na tíbia de coelhos, tanto celular como molecularmente. Foram utilizados coelhos New Zeland de ambos os sexos, pesando, em média, 3500 g, em cada etapa desse estudo. Para a determinação da concentração de resveratrol adicionado ao peso total de osso bovino inorgânico, esse utilizado como veículo, foram separados 4 grupos: grupo experimental 1, onde foi adicionado resveratrol em 20% do peso do osso bovino; grupo experimental 2, onde foi adicionado resveratrol em 40% do peso do osso bovino; grupo experimental 3, onde foi adicionado resveratrol em 60% do peso do osso bovino; grupo experimental 4, onde foi adicionado resveratrol em 80% do peso do osso bovino. Para a avaliação do comportamento e atividade celular foram utilizados marcadores de crescimento ósseo em diferentes tempos (Alizarina – 14 e 21 dias; Calceína – 28 e 35 dias; Tetraciclina – 42 e 49 dias), foram criados 3 grupos: grupo controle 1, onde o defeito foi preenchido somente com o coágulo; grupo controle 2, onde o defeito foi preenchido somente com o osso bovino inorgânico; grupo experimental 1, onde os defeitos foram preenchidos pelo material preparado com 60% de reveratrol em relação ao peso de osso bovino inorgânico. Para o estudo molecular de verificação da possibilidade de modulação do estresse cirúrgico pelo resveratrol, foram elaborados grupos para a determinação da curva de ativação do NF-kB e para controle do processo utilizado e, grupos para o estudo da atividade do resveratrol nesse processo. Os resultados demonstraram que o resveratrol apresenta um potencial modulador para o processo de neoformaçáo óssea, aumentando a resposta desse tecido. Entretanto, a quantidade adicionada a essa mistura demonstrou melhores resultados quando colocado em uma quantidade de 60% em relação ao material utilizado como veículo, nesse caso o osso bovino inorgânico. Diversos grupos foram propostos após a determinação do pico de ativação da NF-kB, tais como, o grupo irrigado e grupo resveratrol, sendo que no grupo irrigado observou-se uma redução da ativação do NF-kB na posição zero na região periostal, porém, os resultados estatísticos não indicaram significância em relação ao controle (animais do grupo determinação da curva de ativação, nos quais o pico de ativação do NF-kB em cortical óssea foi atingido em 6h); no grupo resveratrol, observou-se uma redução da ativação do NF-kB na posição 0 e 1, com a queda de ativação sendo mais significativa na posição 0. Nesse trabalho, também foi observado que a imunorreatividade para o NF-kB não se restringiu à região lesada, mas se estendeu por toda a cortical óssea, aumentando na região do joelho. Conclui-se, então, nesse estudo: 1- que o resveratrol pode influenciar o processo de reparação óssea, aumentando significativamente a qualidade da resposta; 2- o resveratrol pode modular o NFkB quando aplicado in loco nos processos ósseos; 3 – pelos resultados obtidos pode-se propor que o controle do trauma cirúrgico está diretamente relacionado com a qualidade e quantidade de resposta do tecido ósseo; 4 – a quantidade de resveratrol adicionada a um material osteocondutor deve ser equilibrada e quantificada para a obtenção de resultados adequados.