Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 459408.pdf: 1270061 bytes, checksum: a4594eb8c40c25e57008dc9d40066c93 (MD5) Previous issue date: 2014-02-24 / We evaluated haplotype and allele frequencies, as well as statistical forensic parameters, for 23 Y-chromosome short tandem repeats (STRs) loci of the PowerPlex?Y23 system (DYS19, DYS385a/b, DYS389I/II, DYS390, DYS391, DYS392, DYS393, DYS437, DYS438, DYS439, DYS448, DYS456, DYS458, DYS635, Y-GATA-H4, DYS481, DYS533, DYS549, DYS570, DYS576, DYS643) in a sample of 150 apparently healthy males, resident in south Brazil. A total of 150 different haplotypes were identified. The highest gene diversity was observed for the single locus marker DYS570 (GD = 0.7888) and for a two-locus system DYS385 (GD = 0.9009). We also examined 150 father-son pairs by the same system, and observed a total of 13 mutations were identified in the 3,450 father-son allelic transfers, with an overall mutation rate across the 23 loci of 3.768 x 10-3 (95% CI = 3.542 x 10-3 to 3.944 x 10-3). In all cases there was only one locus mutated with gain/loss of repeats in the son (5 one-repeat gains, and 7 one-repeat and 1 two-repeat losses); we observed no instances of mutations involving a non-integral number of repeats. / Foram avaliadas as frequ?ncias al?licas e haplot?picas, bem como os par?metros estat?sticos forenses, para 23 l?cus Short Tandem Repeat (STRs) de cromossomo Y presentes no kit comercial PowerPlex?Y23 system (DYS19, DYS385a/b, DYS389I/II, DYS390, DYS391, DYS392, DYS393, DYS437, DYS438, DYS439, DYS448, DYS456, DYS458, DYS635, Y-GATA-H4, DYS481, DYS533, DYS549, DYS570, DYS576, DYS643) em uma amostra de 150 homens saud?veis, residentes no sul do Brasil. Um total de 150 hapl?tipos diferentes foram identificados. A maior diversidade gen?tica foi observada para o marcador de l?cus ?nico DYS570 (GD = 0,7888) e para o l?cus duplo DYS385 (GD = 0,9009). Tamb?m foram analisados 150 de pares de pai-filho pelo mesmo sistema, e um total de 13 muta??es foram observadas em 3.450 transfer?ncias al?licas entre pais-filhos, com uma taxa geral de muta??o nos 23 l?cus de 3.768 x 10-3 (95% CI = 3.542 x 10-3 - 3.944 x 10-3). Em todos os casos foi encontrado apenas um l?cus mutado com ganho ou perda de repeti??es no filho (5 ganhos de repeti??o ?nica, 7 perdas de repeti??o ?nica e 1 perda de dupla-repeti??o). N?o foi observado nenhum caso de muta??o envolvendo um n?mero n?o integral de muta??es.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 459527.pdf: 855354 bytes, checksum: 2ebbe767e99c1ddc288d33fdf6ff1ebe (MD5) Previous issue date: 2013-03-26 / Salmonella enterica is an important pathogen that causes gastroenteritis, and is transmitted to human through the consumption of contaminated food, especially from animal origin. The use of antimicrobials for therapeutic purposes in veterinary medicine and as growth promoters in animals used for food production has been considered one of the causes of emergence and spread of multi-drug resistant (MDR) S. enterica, representing a major risk to public health. Thus, the aim of this study was to determine antimicrobial resistance profiles as well as to characterize the main determinants involved on phenotypes of resistance in S. enterica isolates from poultry by-product meal and from other samples derived of poultry production chain, especially from environment of broiler houses. A total of 203 S. enterica isolates was analyzed, being 106 from poultry by-product meal and 97 isolated mainly from drag swabs. Higher percentages of resistance were detected in S. enterica isolated from drag swab when compared with isolates from poultry by-product meal. The highest percentages of resistance were found to sulfonamides followed by tetracycline, trimethoprim-sulfamethoxazole, nalidixic acid, streptomycin and spectinomycin. The majority of isolates was sensitive to ciprofloxacin and enrofloxacin. MDR phenotypes were detected in 37 (18.2%) isolates and the profile penta-resistant (ampicillin, chloramphenicol, streptomycin, tetracycline and sulphamethoxazole) was detected in S. Heidelberg, S. Cerro and two S. Senftenberg. Class 1 integrons was found in 26 isolates (12.7 %), and did not detect the presence of class 2 integron. A S. Senftenberg isolated from environment was found to harbor two class 1 integrons: one integron with a typical 3 CS, and the other with an atypical 3′CS linked to the qacH sul3. The sul1, sul2 and sul3 genes were detected in 18.7%, 32.5% and 31.2% S. enterica phenotypically resistant to sulfonamide, respectively. blaCMY, blaCTX-M and blaTEM genes were detected in 23.8%, 9.5% and 85.7% of isolates resistant to β -lactams, respectively. Resistance determinants tetA, tetB and tetC were observed in 70%, 10% and 10% of isolates resistant to tetracycline, respectively. aadA and aadB genes were detected in 26.1% and 32.1% of isolates resistant to aminoglycosides, as well as the presence of strA and strB genes in 44.4% and 34.9% of S. enterica isolates phenotypically resistant to streptomycin. The presence of a heterogeneous profile of antimicrobial determinants and mobile genetic elements in the isolates analyzed indicates the potential risk that these bacteria represent to human health. / A Salmonella enterica ? um importante pat?geno causador de gastrenterite transmitido para humanos atrav?s do consumo de alimentos contaminados, principalmente os de origem animal. O uso de antimicrobianos para fins terap?uticos na medicina veterin?ria e como promotores de crescimento em animais destinados ? produ??o de alimentos tem sido apontado como uma das causas do surgimento e dissemina??o de S. enterica multi-resistentes (MDR), constituindo um grande risco para a sa?de publica. Dessa forma, o objetivo do presente trabalho foi determinar o perfil de resist?ncia a antimicrobianos, bem como caracterizar os principais determinantes envolvidos nos fen?tipos de resist?ncia em isolados de S. enterica provenientes de farinhas de aves e de outras amostras oriundas da cadeia produtiva do frango, especialmente do ambiente de cria??o. Um total de 203 isolados de S. enterica foi analisado, sendo 106 oriundos de farinhas de aves e 97 provenientes, principalmente, de suabes de arrasto. Percentuais mais elevados de resist?ncia foram detectados em S. enterica isoladas de suabe de arrasto, quando comparadas com isolados de farinhas de aves. Os maiores percentuais de resist?ncia foram encontrados para sulfonamida, seguida por tetraciclina, trimetoprim-sulfametoxazol, ?cido nalid?xico, estreptomicina e espectinomicina. A maioria dos isolados foi sens?vel ? ciprofloxacina e ? enrofloxacina. Fen?tipos de MDR foram observados em 37 (18,2%) isolados, sendo que o perfil penta-resistente (ampicilina, cloranfenicol, estreptomicina, sulfametoxazol e tetraciclina) foi detectado em S. Heidelberg, S. Cerro e em duas S. Senftenberg. Integrons de classe 1 foram detectados em 26 isolados (12,7%), e n?o foi observada a presen?a de integron de classe 2. Uma S. Senftenberg isolada a partir do ambiente apresentou dois integrons de classe 1: um com um 3 CS t?pico e outro com 3′CS at?pico ligado a qacH sul3. Os genes sul1, sul2 e sul3 foram detectados, respectivamente, em 18,7%, 32,5% e 31,2% dos isolados de S. enterica fenotipicamente resistentes ? sulfonamida. Os genes blaCMY, blaCTX-M e blaTEM foram detectados 23,8%, 9,5% e 85,7% dos isolados resistentes aos β-lact?micos, respectivamente. Os determinantes de resist?ncia tetA, tetB e tetC foram observados em 70%, 10% e 10% dos isolados resistentes ? tetraciclina, respectivamente. Os genes aadA e aadB foram encontrados em 26,1% e 32,1 % dos isolados resistentes aos aminoglicos?deos, assim como a presen?a dos genes strA e strB foi detectada em 44,4% e 34,9% dos isolados de S. enterica fenotipicamente resistentes ? estreptomicina. A presen?a de um perfil heterog?neo de determinantes de resist?ncia e de elementos gen?ticos m?veis nos isolados analisados indica o potencial risco que estas bact?rias representam para a sa?de humana.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 460008.pdf: 656276 bytes, checksum: f353cd5be78400bf9c6ccd1015321021 (MD5) Previous issue date: 2014-03-25 / Healthy aging is characterized by the ability of the immune system in preserve some of their functions intact, avoiding the appearance of some age-related diseases and thus contributing to reaching longevity. Furthermore, healthy aging is associated to a better stress coping. Studies have demonstrated immunological changes occurred in old individuals, as well as the consequences of stress on aging. However, few studies have addressed such changes in very old subjects. Here, we analyzed emotional factors and the changes in the lymphocytes subpopulations involved on aging, and the role of these changes to reach longevity healthily. A group of twenty healthy very old subjects together with a group of healthy old individuals and a groups of healthy young adults were recruited in this study. Stress levels were assessed by Perceived Stress Scale (PSS), while depression levels were investigated by Beck Depression Inventories II (BDI-II). Lymphocytes were isolated and assessed by flow cytometry. We observed some age-related changes in lymphocyte subpopulations. In particular, it was evidenced a similar CD4/CD8 ratio between very old subjects and young adults, with this rate being increased in old subjects. A significant increase in the percentage of Natural Killer cells (CD56+CD16+) was observed in the very old subjects, showing that the activity of these cells is well preserved in this group of subjects. Also, we noticed that very old subjects are less stressed, when compared to the other groups. Our data suggests that the combination between increasing and decreasing specific immune functions may generate a balance in the immune system, contributing to reach longevity healthily. / O envelhecimento bem sucedido ? caracterizado pela habilidade do sistema imune em manter algumas de suas fun??es intactas, evitando, assim, o aparecimento de doen?as relacionadas ? idade, e, portanto, contribuindo para o alcance da longevidade. Al?m disso, o envelhecimento bem sucedido tamb?m est? relacionado a uma melhor maneira de lidar com o estresse. Diversos estudos v?m demonstrando as altera??es imunol?gicas ocorridas em indiv?duos idosos, assim como as consequ?ncias do estresse para o envelhecimento. No entanto, poucos s?o os estudos que visam observar essas altera??es em indiv?duos longevos. Neste estudo, analisamos fatores ps?quicos e altera??es nos subtipos linfocit?rios envolvidos no envelhecimento e o papel destas altera??es para o alcance da longevidade de maneira saud?vel. Vinte longevos (86-99 anos), 15 idosos (60-80 anos) e 13 jovens adultos saud?veis (20-50 anos) foram recrutados neste estudo. Os n?veis de estresse foram avaliados pela Escala de Estresse Percebido (PSS), enquanto que os n?veis de depress?o foram investigados atrav?s do Invent?rio de Depress?o Beck II (BDI-II). As c?lulas mononucleares de sangue perif?rico foram isoladas e os subtipos linfocit?rios avaliados por citometria de fluxo. Dentre as popula??es avaliadas est?o as c?lulas T CD4+, T CD8+, B CD19+ e c?lulas NK CD56+. Observamos diversas altera??es idade dependente nos subtipos linfocit?rios. Em particular, foi evidenciada uma raz?o CD4/CD8 similar entre longevos e jovens, com um aumento desta raz?o ocorrendo em indiv?duos idosos. Um aumento significativo na percentagem das c?lulas Natural Killers (CD56+CD16+) foi observado nos longevos, sugerindo que a atividade destas c?lulas est? bem preservada nestes indiv?duos. Al?m disso, foi visto que os longevos s?o menos estressados, quando comparados aos outros grupos. Concluindo, nossos resultados sugerem que a combina??o entre o aumento e o decr?scimo de fun??es imunes espec?ficas pode gerar um balan?o no sistema imune, contribuindo para que se alcance a longevidade de forma saud?vel.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 460176.pdf: 769931 bytes, checksum: 51ce02520c2340026c784bc9ef36d15d (MD5) Previous issue date: 2014-02-12 / Hepatocellular carcinoma (HCC) is the most frequent primary tumor of the liver, and is currently one of the major neoplastic diseases, representing 85% of primary liver tumors and is the third leading cause of cancer-related death. The development of the majority of hepatocellular carcinomas related to the presence of a disease resulting from cirrhosis, such as hepatitis B and C. Its incidence has increased in recent years due to the number of patients with infections caused by hepatitis C. The aim of this study was investigate the in vitro effect of fructose-1,6-bisphosphate (FBP) on the growth of HepG2 cells, used as a model to hepatocellular carcinoma. The results showed that the FBP decreases cell proliferation in a dose-dependent manner, not being caused by cell cycle arrest or apoptosis verified by flow cytometry. It was observed that at 72 h of treatment FBP decreased levels of IL-8, which is closely related to the tumor progression and the generation of reactive oxygen species. Moreover, FBP decreased oxidative stress by increasing the levels of catalase and decrease TBARS, this effect is possibly caused by the result of low IL- 8. These findings demonstrated that the FBP may be a potential anticancer agent for the treatment of HCC. / O hepatocarcinoma (HCC) ? o tumor prim?rio de f?gado mais frequente, sendo atualmente uma das principais doen?as neopl?sicas, representando 85% dos tumores hep?ticos prim?rios e sendo a terceira maior causa de morte relacionada ao c?ncer. O desenvolvimento da maioria dos hepatocarcinomas relaciona-se com a presen?a de alguma doen?a decorrente do quadro de cirrose, como hepatite B e C. Sua incid?ncia tem aumentado nos ?ltimos anos devido ao n?mero de pacientes com infec??es por hepatite C. O objetivo deste estudo foi investigar,in vitro, o efeito da frutose-1,6-bisfosfato (FBP) sobre o crescimento das c?lulas HepG2, modelo utilizado como carcinoma hepatocelular. Os resultados demonstraram que a FBP diminui a prolifera??o celular em uma rela??o dose-dependente, n?o sendo essa prolifera??o ocasionada por parada no ciclo celular ou apoptose verificado pelos testes de citometria. Observou-se que em 72 h de tratamento a FBP diminuiu os n?veis de Interleucina 8 (IL-8), sendo esta interleucina relacionada com a progress?o tumoral e a gera??o de esp?cies reativas de oxig?nio. Al?m disso, a FBP diminuiu o estresse oxidativo, aumentando os n?veis de catalase e diminuindoa produ??o das subst?ncias reativas ao ?cido tiobarbit?rico(TBARS), sendo esse efeito antioxidante possivelmente ocasionado por conseq??nte diminui??o de IL-8. Estes resultados demonstraram que a FBP pode ser um agente antineopl?sico em potencial para o tratamento de hepatocarcinoma.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 460859.pdf: 2353123 bytes, checksum: dd594f361c31a6e6ca5c19cd19a8c488 (MD5) Previous issue date: 2014-07-16 / The Mycobacterium tuberculosis NADH-dependent enoyl-acyl carrier protein reductase (MtInhA) catalyzes hydride transfer to long-chain enoyl thioester substrates. MtInhA is a member of the mycobacterial type II dissociated fatty acid biosynthesis system, and is the bona fide target for isoniazid, the most prescribed drug for tuberculosis treatment. Here, a series of piperazine derivatives was synthesized and screened as MtInhA inhibitors, which resulted in the identification of compounds with IC50 values in the submicromolar range. A structure-activity relationship (SAR) evaluation indicated the importance of the chemical environment surrounding the carbonyl group for inhibition. In addition, the structure of one selected compound was supported by crystallographic studies, and experimental geometrical values were compared with semi-empirical quantum chemical calculations. Furthermore, the mode of inhibition and inhibitory dissociation constants were determined for the nine most active compounds. These findings suggest that these compounds interact with MtInhA at the enoyl thioester (2-trans-dodecenoyl-CoA) substrate binding site. Finally, two 9H-fluoren-9-yl-piperazine-containing compounds exhibited moderate antimycobacterial activity against the M. tuberculosis H37Rv strain. / A enzima 2-trans-enoil-ACP redutase de Mycobacterium tuberculosis (MtInhA) catalisa a etapa enzim?tica final no ciclo de alongamento da via de bioss?ntese de ?cidos graxos, convertendo 2-trans-enoil-ACP ? acil-ACP em um mecanismo dependente de NADH. Essa enzima vem sendo descrita como alvo validado para a descoberta de f?rmacos. Nesse trabalho uma s?rie de piperazinas foi sintetizada e avaliada quanto ao potencial inibit?rio da atividade enzim?tica da MtInhA, resultando em compostos com valores de IC50 na faixa de inibi??o de nanomolar. Avalia??es de rela??o estrutura-atividade (SAR) indicam a import?ncia do ambiente qu?mico adjacente ? carbonila para a inibi??o. Al?m disso, a estrutura de um composto foi confirmada por estudos cristalogr?ficos e os valores geom?tricos experimentais foram comparados com valores obtidos atrav?s de c?lculos semi-emp?ricos de obitais moleculares. Experimentos para determina??o do modo de inibi??o e obten??o dos valores das constantes de dissocia??o foram realizados para os nove compostos mais ativos. Os resultados sugerem que esses compostos interagem com MtInhA no s?tio de liga??o dos substratos acil-graxos. Finalmente, dois compostos, contendo na sua estrutura 9H-fluoren-9-il-piperazina exibiram moderada atividade antimicrobiana contra a cepa Mycobacterium tuberculosis H37Rv.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 461390.PDF: 2830978 bytes, checksum: c3b746f15a8c1946dc08a31f60e01821 (MD5) Previous issue date: 2014-03-10 / Hereditary hemochromatosis (HH) is a genetic disease where iron balance is deregulated and this metal accumulates in the liver, causing toxic effects and fibrosis. Fibrosis is an exacerbated wound-healing response with extracellular matrix (ECM) deposition. Hepatic stellate cells (HSC), when activated, are the main responsible for ECM production. Fructose-1,6-bisphosphate (FBP) is a sugar and possess innumerous beneficial effects, like enhance cell antioxidant potential, protects liver from damage and reverts the phenotype of activated HSC. Because of this, we aimed to test the effects of FBP in immortalized HSC line (GRX) exposed to free iron (Fe) tempting to simulate what occurs in patients with HH.Fe (1mg/L) treatment for 8 days increased cell growth, whereas Fe + FBP (1mg/L + 0.6mM) decreased cell proliferation to levels below of control. LDH activity, apoptosis rate and cell cycle were not altered in any group. Oil Red-O (ORO) staining showed a decrease in lipid content when GRX cells were Fe-treated (1mg/L) for 8 days. In Fe + FBP (1mg/L + 0.6mM), GRX cells showed increased lipid content and characteristics of quiescent HSC. PPAR-γ expression was diminished on Fe group and same as control on Fe + FBP group. On the contrary, Fe treatment rose Col-1 expression and Fe + FBP reversed it to control levels. TGF-β1 was unaltered in Fe group. However, on Fe + FBP group, TGF-β1 levelswas far bellow of control and Fe-treated group, showing an antifibrotic activity. FBP didn t present antioxidant activity by DPPH assay. Ferrozine assay showed a decreased absorbance after 120 min in all FBP-tested doses, demonstrating that FBP is an iron chelator. These data demonstrate that FBP reverse the phenotype of GRX cells even when in Fepresence and that this could be caused by regulation of PPAR-γ and COL-1. In conclusion, FBP diminished the growth rate and reversed the phenotype of GRX cell, showing a possible antifibrotic effect. / Hemocromatose heredit?ria (HH) ? uma doen?a gen?tica onde o balan?o do ferro est? desregulado e esse metal se acumula no f?gado, causando efeitos t?xicos e, principalmente, fibrose. Fibrose ? uma resposta de cicatriza??o exacerbada com dep?sito de matriz extracelular (ECM). C?lulas estreladas hep?ticas (HSC) quando ativadas s?o as maiores respons?veis pela produ??o de ECM. Frutose-1,6-bisfosfato (FBP) ? um a??car e possui in?meros efeitos ben?ficos, como melhorar o potencial antioxidante da c?lula, proteger o f?gado de les?o e reverter o fen?tipo de HSC ativadas. Por causa disso, nosso objetivo foi testar os efeitos da FBP em uma linhagem imortalizada de HSC (GRX) expostas a ferro livre (Fe), na tentativa de simular o que ocorre em pacientes com HH.O tratamento com Fe (1mg/L) por 8 dias aumentou a prolifera??o celular enquanto o tratamento com Fe + FBP (1mg/L + 0.6mM) a diminuiu para n?veis menores que os do controle. A atividade da LDH, taxa de apoptose e ciclo celular n?o foi alterada em nenhum grupo. A colora??o com OilRed-O (ORO) mostrou uma diminui??o na quantidade de lip?dio intracelular quando as c?lulas foram tratadas com Fe por 8 dias. No grupo Fe + FBP, houve um aumento do conte?do lip?dico e as c?lulas apresentaram caracter?sticas morfol?gicas de c?lulas quiescentes. A express?o de PPAR-γ foi diminu?da no grupo Fe e igual ao controle no grupo Fe + FBP. Ao contr?rio, o Fe aumentou os n?veis de express?o de Col?geno tipo I (Col-1) e o tratamento concomitante com FBP reverteu esse efeito, ficando igual ao controle. A produ??o de TGF-β1 se manteve inalterada no grupo Fe e foi menor que o controle no tratamento com Fe + FBP, mostrando uma atividade antifibr?tica da FBP. O teste de DPPH mostrou que a FBP n?o possui atividade antioxidante em nenhuma dose testada. O teste de Ferrozine mostrou uma diminui??o da absorb?ncia depois de 120 minutos de incuba??o de FBP + Fe em todas as doses testadas, mostrando que a FBP ? um quelante de ferro.Esses dados demonstram que FBP reverte o fen?tipo das c?lulas GRX mesmo quando em presen?a do Fe e que isso pode ser causado pela regula??o da express?o do PPAR-γ e COL-1.Em conclus?o, a FBP diminuiu o crescimentoe reverteu o fen?tipo de c?lulas GRX, mostrando um poss?vel efeito antifibr?tico.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 462085.pdf: 1068489 bytes, checksum: 5d6806fb1169973228c8e48e31e91c88 (MD5) Previous issue date: 2014-08-19 / We have compared the behaviour and neurochemical effects of synthetic cathinones mephedrone and methedrone in mice, with attempts to evaluate some the mechanisms of action of methedrone, as well as the influence of nightclub-like stimulation on the behaviour. The effects of cathinone derivatives were examined in a series of behavioural tests in mice, and monoamine brain levels were determined by HPLC. Since there is a correlation between club parties and consume of recreational drugs, separated groups were pre-exposed to nightclub-like environment. Cathinone derivatives caused marked hyperlocomotion, allied to motor coordination inability, through 30 min after injection. Moreover, mephedrone caused anxiolytic-like effects, while methedrone induced anxiogenic actions. Both cathinone derivatives increased the latency in the hot-plate test, with a significant reduction of immobility time in tail suspension test. Mephedrone triggered 2- and 3-fold increase of dopamine and serotonin levels, respectively, in the nucleus accumbens, with 1.5-fold elevation of dopamine contents in the frontal cortex. Methedrone caused a 2-fold increase of dopamine in the nucleus accumbens and striatum, and 1.5-fold increase of serotonin levels in the hippocampus and striatum. Part of methedrone effects appear to be dependent on dopamine and serotonin modulation. Noteworthy, nightclub-like stimulation produced a further increase of latency to thermal stimulation, in both mephedrone and methedrone-treated mice. Mephedrone and methedrone induced a series of distinct behavioural changes likely by modulation of dopamine and serotonin systems. Curiously, increased latency to thermal stimulation elicited by cathinones was intensified by nightclub-like environment. / O presente estudo comparou os efeitos das catinonas sint?ticas metiladas, mefedrona e metedrona, sobre diversos par?metros comportamentais e bioqu?micos em camundongos, al?m de avaliar alguns dos poss?veis mecanismos relacionados com os efeitos in vivo da metedrona. Al?m disso, tamb?m foram analisados os efeitos da estimula??o semelhante a nightclubs sobre os efeitos comportamentais das duas subst?ncias de abuso. Os efeitos das catinonas, mefedrona e metedrona, foram avaliados em diversos paradigmas comportamentais e, ainda, sobre os n?veis cerebrais de monoaminas em camundongos, atrav?s de HPLC. Considerando a correla??o entre nightclubs e o consumo de drogas recreacionais, alguns grupos experimentais foram pr?-expostos a um ambiente com temperatura elevada, m?sica eletr?nica e luzes estrobosc?picas, durante sete dias antes da administra??o das subst?ncias-teste, a fim de reproduzir o local de consumo das catinonas. Os derivados das catinonas, mefedrona e metedrona, causaram hiperlocomo??o, associada com sinais de redu??o da coordena??o motora, durante 30 min ap?s os tratamentos. Al?m disso, a mefedrona causou efeitos ansiol?ticos, enquanto a metedrona induziu comportamento ansiog?nico. Ambos os derivados da catinona causaram um aumento da lat?ncia ? estimula??o t?rmica na placa-quente, acompanhado de redu??o marcante do tempo de imobilidade no teste de suspens?o da cauda. A administra??o de mefedrona induziu um aumento r?pido dos n?veis de dopamina e serotonina no nucleus accumbens (2 e 3 vezes, respectivamente), com um aumento na dopamina de 1,5 vezes, no c?rtex frontal. Por outro lado, a metedrona causou uma eleva??o de duas vezes nos n?veis de dopamina no nucleus accumbens e no estriado, al?m de um aumento de 1,5 vezes dos conte?dos de serotonina, no hipocampo e no estriado. A utiliza??o de diferentes ferramentas farmacol?gicas demonstrou que parte dos efeitos da metedrona est? relacionada com a modula??o dos sistemas dopamin?rgico e serotonin?rgico. Finalmente, foi demonstrado que a estimula??o ambiental do semelhante a nightclubs produziu um aumento dos efeitos analg?sicos da mefedrona e da metedrona no teste de placa-quente. A mefedrona e a metedrona induziram uma s?rie de altera??es comportamentais, que foram semelhantes ou distintas, dependendo do paradigma experimental avaliado. Os efeitos destas catinonas sint?ticas parecem estar diretamente relacionados com a modula??o dopamin?rgica e serotonin?rgica. Curiosamente, o aumento da lat?ncia ? estimula??o t?rmica ?s catinonas foi potencializado pela ambienta??o tipo nightclub.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vivian_Favero2.pdf: 2965291 bytes, checksum: d155fba5197427c1d537989b043c51f8 (MD5) Previous issue date: 2014-07-23 / Schistosomiasis is endemic in 74 countries, affecting more than 200 million people. In Brazil, Schistosoma mansoni is the only causative agent of schistosomiasis, which affects 19 states. Control measurements and effective treatment can result in a decrease of the parasitic load of individuals with the severe form. In this matter, when diagnostic methods with adequate sensitivity for monitoring are not used, those measurements may difficult diagnosis, favoring the persistence of the infection for long periods, as well as the environmental contamination and consequently exposure to local population reinfection. In these areas, or where there was recent introduction of S. mansoni, classic parasitological methods to find eggs in feces are not efficient. Although immunological and molecular techniques are currently considered as main diagnostic tools, parasitological methods re necessary to confirm the infection. Helmintex? has been recently described as highly sensitive diagnostic method that isolates eggs from 30 gram of feces through the interaction of eggs with paramagnetic microspheres in a magnetic field. Despite the sensibility, its limitation lies in the number of slides to be analyzed, making the process time consuming and not applicable for clinical routine. In this context, this work opens perspectives for the use of new tools in an attempt to optimize S. mansoni egg detection in the last step of the Helmintex?, using chemiluminescence, and ninhydrin staining. Another alternative tested was the ninhydrin staining. Helmintex? sediments containing S. mansoni eggs were fixed with 70% ethanol and deposited on Whatman Grade 541 filter paper, immersed in a solution of ninhydrin:ethanol (30: 70 %) for later eggs visualization at the optical microscope. Reading time for each filter was counted and registered. Ideal conditions for incubation with ninhydrin were established in 15 minutes at 24 ?C. Reading time for each sample was, in general, of 23 minutes. When compared to the original Helmintex? method, the use of ninhydrin decreased the reading time of the final sediment in, at least, 450 minutes. The results of this work showed that the implementation of new tools in existent diagnostic methods may contribute to a better performance of sensitive techniques with limited application in field studies, and open perspectives to new studies that aim to investigate and to optimize primordial steps of concentration methods. / A esquistossomose ? end?mica em 74 pa?ses, afetando mais de 200 milh?es de pessoas. No Brasil, o Schistosoma mansoni ? o ?nico agente etiol?gico da esquistossomose, que atinge 19 estados. Medidas de controle e tratamento efetivo podem resultar em diminui??o da carga parasit?ria de indiv?duos com a forma severa da doen?a. Assim, quando n?o forem utilizados m?todos diagn?sticos com sensibilidade adequada para acompanhamento, essas medidas podem dificultar o diagn?stico, favorecendo a perman?ncia da infec??o por longos per?odos, al?m da contamina??o ambiental e consequentemente a exposi??o ? popula??o local ? reinfec??o. Nestas ?reas, ou onde ocorreu introdu??o recente de S. mansoni, os m?todos parasitol?gicos cl?ssicos para encontrar ovos nas fezes n?o demonstram efic?cia. Embora as t?cnicas imunol?gicas e moleculares sejam consideradas atualmente as principais ferramentas de diagn?stico, s?o necess?rios m?todos parasitol?gicos para a confirma??o da infec??o. Recentemente, o Helmintex? foi descrito como um m?todo diagn?stico altamente sens?vel que isola ovos a partir de 30 gramas de fezes atrav?s da intera??o dos ovos com microesferas paramagn?ticos em um campo magn?tico. Apesar da sensibilidade, sua limita??o est? no n?mero de l?minas a serem analisadas, tornando o processo demorado e invi?vel para aplica??o na rotina cl?nica. Neste contexto, este trabalho abre perspectivas para a utiliza??o de novas ferramentas na tentativa de otimizar a detec??o de ovos de S. mansoni na ?ltima etapa do m?todo Helmintex?, utilizando a quimioluminesc?ncia, e a colora??o por ninidrina. Outra alternativa testada foi a colora??o do sedimento final com ninidrina. Os sedimentos de Helmintex? contendo ovos de S. mansoni foram fixados com etanol 70 % e depositados em papel filtro Whatman Grau 541, imersos em uma solu??o de ninidrina:etanol (30:70%) para posterior visualiza??o dos ovos corados em microsc?pio ?ptico. O tempo de leitura de cada filtro foi cronometrado. As condi??es ideais para incuba??o com a ninidrina foram estabelecidas em 15 minutos ? 24 ?C. O tempo de leitura para cada amostra foi, em m?dia, de 23 minutos. Em compara??o com o m?todo Helmintex? original, a utiliza??o de ninidrina diminuiu o tempo de leitura do sedimento final em, ao menos, 450 minutos. Os resultados deste trabalho mostraram que a implementa??o de novas ferramentas em m?todos diagn?sticos j? existentes podem contribuir para um melhor desempenho de t?cnicas sens?veis, por?m com aplica??o limitada em estudos de campo, e abrem perspectivas para novos estudos que visam investigar e otimizar etapas primordiais de m?todos de concentra??o.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 464249.pdf: 13663409 bytes, checksum: 370383758e5762e6645f52a510e7dfab (MD5) Previous issue date: 2014-12-10 / Lung cancer is the most commonly diagnosed type of cancer and the leading cause of cancer related mortality in the world, causing nearly one million deaths per year. Among all histological types, adenocarcinoma is the most frequent one (75-80%). Gastrin-releasing peptide (GRP) is considered to be a mitogen, capable of inducing cell proliferation, since it is involved in fetal lung development. This neuropeptide had its effect on tumor growth first identified in human cells of small cell lung cancer, acting as an autocrine growth factor for tumor tissues by binding to its receptor GRPR. The receptor has been found in many tumor types such as prostate, breast, stomach, pancreas and colon. Moreover, this peptide acts as a morphogen, in angiogenesis and is related to inflammatory processes and in the regulation of cells of the immune system. Furthermore, asymptomatic smokers have high levels of GRP in bronchoalveolar lavage and urine. However, little is known about its effects in tumorigenesis and metastasis, and which molecular mechanisms and signaling pathways are responsible for the effects found. Our group demonstrated recently that GRP could act as a chemotactic molecule for neutrophils. Thus, we hypothesized that GRP could be also a chemotactic stimulus to tumor cells expressing the GRPR. In this study, we tested this hypothesis by examining the effect of GRP on proliferation, survival and migration of cells from the adenocarcinoma cell line A549, seeking to identify the mechanisms of action of this peptide. These cells express high levels of GRPR and treatment with GRP leads to activation of kinases such as AKT and ERK1/2 that are involved in the cellular processes mentioned. Our results suggest that GRP is a migratory stimulus to these cells without evidence of significant effect on their proliferation or survival to treatment with the chemotherapy drug cisplatin (CDDP). Nonetheless, they become more sensitive to CDDP when the drug is combined with a GRPR antagonist. Thus, we believe that future studies should consider a possible role for GRP in metastasis of NSCLC. / O c?ncer de pulm?o ? o tipo de c?ncer que mais comumente diagnosticado e o que mais mata no mundo levando a quase 1 milh?o de mortes por ano. Entre todos os tipos histol?gicos, o adenocarcinoma ? o mais frequente (75-80%). O pept?deo liberador de gastrina (GRP) ? considerado um agente mitog?nico, capaz de induzir a prolifera??o celular, uma vez que est? envolvido no desenvolvimento fetal dos pulm?es. Este pept?deo teve sua a??o sobre o crescimento tumoral primeiramente identificada em c?lulas humanas de c?ncer de pulm?o de pequenas c?lulas, atuando como fator aut?crino de crescimento de tecidos e tumores atrav?s da liga??o ao seu receptor GRPR. Este receptor foi encontrado em diversos tipos de tumores como pr?stata, mama, est?mago, p?ncreas e c?lon. Al?m disso, este pept?deo atua como um morf?geno, na angiog?nese e, est? relacionado a processos inflamat?rios e na regula??o de c?lulas do sistema imune. E, fumantes assintom?ticos possuem altos n?veis de GRP no lavado broncoalveolar e na urina. No entanto, pouco se conhece sobre os seus efeitos na tumorig?nese e met?stase e, quais os mecanismos moleculares e as vias de sinaliza??o que s?o respons?veis pelos efeitos encontrados. Nosso grupo demonstrou, recentemente, que o GRP pode atuar como uma mol?cula quimiot?tica para neutr?filos. Desta forma, hipotetizamos que o GRP poderia constituir num estimulo quimiot?tico tamb?m para as c?lulas tumorais que express?o o GRPR. Neste trabalho, testamos essa hip?tese, analisando o efeito do GRP sobre a prolifera??o, sobreviv?ncia e migra??o de c?lulas da linhagem de adenocarcinoma A549, buscando identificar mecanismos de a??o desse pept?deo. Esta linhagem expressa altos n?veis de GRPR. O tratamento com GRP leva a ativa??o de quinases como a AKT e ERK1/2 que est?o envolvidas nestes processos celulares. Nossos resultados sugerem que o GRP ? principalmente um est?mulo migrat?rio para estas c?lulas, sem evid?ncias de efeito significativo sobre a sua prolifera??o ou sobreviv?ncia ao tratamento com a droga quimioter?pica cisplatina, mas tornam-se mais sens?veis quando a droga ? combinada com um antagonista do GRPR. Dessa forma, acreditamos que estudos futuros devam considerar um poss?vel papel para o GRP na met?stase.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 467140.pdf: 2666780 bytes, checksum: 69d9316002f8596f9f09b6c05ceb6081 (MD5) Previous issue date: 2015-01-14 / Tuberculosis (TB) is the leading cause of bacterial infectious disease mortality. The etiological agent, Mycobacterium tuberculosis (Mtb) is responsible for 1.5 million deaths and 9 million people infected in 2013. The World Health Organization (WHO) estimates that one-third of the world?s population is infected with latent form of Mtb. Thus, there is a continuous need to find promising molecular targets for the development of anti-TB agents. The shikimate pathway produces an important precursor of aromatic compounds in bacteria, fungi, plants and apicomplexan parasites, chorismate. The pathway comprises seven enzymes, which convert erythrose-4-phosphate and phosphoenolpyruvate into chorismate, the precursor for the synthesis of aromatic amino acids, folic acid, ubiquinone, and many other aromatic compounds. This pathway is essential for growth of Mtb. The aroD gene, that codes for 3-dehydroquinate dehydratase (DHQase), catalyzes the reversible reaction of 3-dehydroquinate into 3-dehydroshikimate and the aroE gene, that codes for the NADP(H) dependent shikimate-5-dehydrogenase (SD), catalyzes the reduction of 3-dehydroshikimate into shikimate. The aim of the present study was to identify new dug-like molecules as inhibitors for MtbDHQase and MtbSD using structure-based modeling and virtual screening. The availability of the crystal structure bound with an inhibitor of MtbDHQase was explored using pharmacophore models based on interaction energy and docking to yield diverse leads. For MtbSD, due the absence of crystal structure and reported inhibitors, the tridimensional structure was achieved by molecular modelling. Structure-based pharmacophore and virtual screening of the in house database containing 3000 unique molecules retrieved twelve hit compounds with good docking score and interaction pattern for MtbDHQase. For MtbSD, the commercially available database Asinex, with 500,000 molecules, were used and seventeen compounds were selected based in its docking score, interaction pattern with amino acids in the active site, number of hydrogen bonds and GOLD score. MtbDHQase inhibitors were tested and, after inhibition assay, series of chemical modifications were made in the lead compound. The top two derivate presented IC50 values of 17.1 and 31.5 μM as well as MIC values of 25 and 6.25 μg/mL and cytotoxicity below 15% at 100 μM respectively. The MtbSD compounds selected as possible inhibitors will be tested for inhibition, MIC value and cytotoxicity. / A Tuberculose (TB) ? a principal causa de mortalidade devido a infec??es bacterianas. Seu agente etiol?gico, o Mycobacterium tuberculosis (Mtb) foi respons?vel por 1,5 milh?es de mortes e por 9 milh?es de pessoas infectadas em 2013. A Organiza??o Mundial da Sa?de (OMS) estima que um ter?o da popula??o mundial est? infectada com a forma latente do Mtb. Assim, h? uma cont?nua necessidade de buscar alvos moleculares promissores para o desenvolvimento de agentes anti-TB. A via do chiquimato produz um importante precursor de compostos arom?ticos em bact?rias, fungos, plantas e parasitas do filo Apicomplexa, o corismato. A via ? composta por sete enzimas, as quais convertem eritrose-4-fosfato e fosfenolpiruvato em corismato, o precursor para a s?ntese de amino?cidos arom?ticos, ?cido f?lico, ubiquinonas e muitos outros compostos arom?ticos. Esta via ? essencial para o crescimento do Mtb. O gene aroD, que codifica a enzima 3-desidroquinato desidratase (DHQase), catalisa a rea??o revers?vel do 3-desidroquinato em 3-desidrochiquimato e o gene aroE, que codifica a enzima dependente de NADP(H) chiquimato-5-desidrogenase (SD), catalisa a redu??o do 3-desidrochiquimato em chiquimato. O objetivo do presente estudo foi identificar novas mol?culas como inibidores para a MtbDHQase e MtbSD utilizando modelagem baseada em estrutura e triagem virtual. A disponibilidade da estrutura cristalogr?fica ligada a um inibidor da MtbDHQase foi explorada utilizando modelos farmac?foros baseados na energia de intera??o e docagem para gerar diversos prot?tipos. Para a MtbSD, devido ? aus?ncia de estrutura cristalogr?fica e de inibidores, foi realizado atrav?s de modelagem molecular, um modelo da estrutura. A abordagem do farmacof?rico baseado na estrutura, juntamente com a triagem virtual da base de dados in house contendo 3000 estruturas in?ditas geraram compostos escolhidos com bom valor de docagem e padr?o de intera??o com amino?cidos do s?tio ativo. Para a MtbSD, foi utilizada a base de dados Asinex, que cont?m 500000 mol?culas. Dezessete compostos foram encontrados baseados nos seus valores de docagem, no padr?o de intera??o com os amino?cidos do s?tio ativo, no n?mero de intera??es de hidrog?nio e no valor de GOLD. Os inibidores da MtbDHQase foram testados e, ap?s os ensaios de inibi??o, foram realizadas diversas deriva??es qu?micas no composto prot?tipo. Os dois melhores compostos derivados apresentaram um valor de IC50 de 17,1 e 31,5 μM, um valor de MIC de 25 e 6,25 μg/mL e citotoxicidade abaixo de 15% a 100μM, respectivamente. Os compostos selecionados como poss?veis inibidores para a MtbSD ser?o futuramente testados quanto a sua inibi??o, valor de CIM e citotoxicidade.