Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-10-27T10:18:03Z No. of bitstreams: 1 475905 - Texto Completo.pdf: 1401811 bytes, checksum: 19cd968fdd31375f38cfc99aff08663c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-27T10:18:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 475905 - Texto Completo.pdf: 1401811 bytes, checksum: 19cd968fdd31375f38cfc99aff08663c (MD5) Previous issue date: 2015-09-28 / In this study, we evaluated the antinociceptive, antiinflammatory and antioxidant effects of lavender essential oil. The antioxidant activity was tested in vitro and used as screening for subsequent experiments. In animals, the effect of lavender essential oil was compared to those displayed by known antiinflammatory and analgesic drugs (dexamethasone, tramadol and indomethacine). Attempts have been made in order to suggest a probable mechanism of action. Considering the pharmacological potential of the lavender essential oil, we have also investigated its possible toxic effects. We demonstrated that the dose of 0,6 g/kg is well tolerated orally. This dose was considered safe and was used in subsequent experiments. The antiinflamatory activity was tested using two models of acute inflammation: the pleurisy induced by carrageenan and the ear edema induced by croton oil. The inflammatory response evoked by carrageenan and by croton oil were reduced by the pre-treatment of animals with lavender oil. On pleurisy, the drug used as positive control, dexamethasone, was more efficacious. However, in the ear swelling, the antiedematogenic effect of the oil was similar to the obtained for dexamethasone.The antinociceptive activity was tested using the model of pain induced by formalin injection into the hind paw of rats. In this model, lavender oil consistently inhibited nociception and presented a similar effect to tramadol. This finding suggests that the mechanism involved in the antiinflammatory effect of lavender may be related to interference in the system of intracellular second messenger phospholipase C/inositol phosphate. In conclusion, the results of this study reveal remarkable analgesic and antiinflammatory activities for the lavender essential oil. Furthermore, the effectiveness of the oil associated with the low toxicity support the interest for the application of lavender essential oil in aromatherapy, and demonstrated its important therapeutic potential. / Neste estudo, foram avaliadas as atividades antinociceptiva, antiiflamat?ria e antioxidante do ?leo essencial de lavanda. A atividade antioxidante foi testada in vitro e serviu como screening para os experimentos posteriores. Em animais, o efeito do ?leo essencial de lavanda foi comparado com drogas analg?sicas e anti-inflamat?rias conhecidas (dexametasona, tramadol e indometacina, respectivamente). Isto foi feito na tentativa de sugerir um prov?vel mecanismo de a??o. Considerando o potencial terap?utico do ?leo essencial de lavanda foi realizado tamb?m um estudo de toxicidade aguda, no qual foi demonstrado que o ?leo essencial de lavanda na dose de 600 mg/kg ? bem tolerado oralmente. Esta dose foi considerada segura e utilizada nos experimentos posteriores. A atividade anti-inflamat?ria foi testada atrav?s de dois modelos de inflama??o aguda: pleurisia induzida por carragenina e edema de orelha induzido pelo ?leo de cr?ton. As respostas inflamat?rias produzidas pela carragenina e pelo ?leo de cr?ton foram significativamente reduzidas ap?s o tratamento com ?leo de lavanda.Enquanto na pleurisia a droga usada como controle, dexametasona, foi mais eficaz, no edema de orelha o efeito antiedematog?nico do ?leo foi similar ao observado para a dexametasona. A atividade antinociceptiva foi testada utilizando o modelo de dor induzida por formalina injetada na pata de ratos. Neste modelo, o ?leo de lavanda inibiu a nocicep??o espont?nea provocada pela formalina e apresentou efeito similar ao tramadol. Esses resultados sugerem que o mecanismo envolvido no efeito anti-inflamat?rio da lavanda pode estar relacionado a um antagonismo de receptores acoplados a prote?na G ou interfer?ncia no sistema de segundo mensageiros intracelulares fosfolipase C/fosfato de inositol. Em conclus?o, os resultados deste estudo revelam atividades anti-inflamat?rias e antinociceptivas do ?leo essencial de lavanda. Al?m disso, essas atividades paralelas ? baixa toxicidade encontrada tamb?m suportam o interesse para aplica??o do ?leo de lavanda na aromaterapia e demostram seu importante potencial terap?utico.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-11-05T12:26:05Z No. of bitstreams: 1 476006 - Texto Completo.pdf: 2870247 bytes, checksum: 76076f40e5be705d3be21ff4d7ceb1f3 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-05T12:26:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 476006 - Texto Completo.pdf: 2870247 bytes, checksum: 76076f40e5be705d3be21ff4d7ceb1f3 (MD5) Previous issue date: 2015-07-29 / Aging has been associated with increased generation of free radicals as well as immunosenescence. Previous studies have identified older individuals with inverted T CD4:CD8 cell ratio and increased immunity to cytomegalovirus (CMV). Here, we investigated markers of oxidative stress and antioxidant defences in older individuals with inverted CD4:CD8 T-cell ratio. From 421 healthy community-dwelling older adults recruited, 61 subjects were identified with inverted CD4:CD8 T-cell ratio. Older individuals with a CD4:CD8 ratio < 1 had increased levels of plasma advanced oxidation protein products (AOPP) and Ferric Reducing Ability of Plasma (FRAP), but reduced levels of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) as compared to subjects with normal CD4:CD8 T-cell ratio. The CMV IgG serology was negatively correlated with CD4:CD8 ratio. These markers were more evident among elderly men than women. Our data suggest a close relationship between chronic CMV infection and oxidative profile in older individuals in the midst of its influence on the peripheral T-cell subsets. / O envelhecimento tem sido associado com o aumento da gera??o de radicais livres, bem como com a imunossenesc?ncia. Estudos anteriores j? haviam identificado os idosos que apresentavam a invers?o da raz?o CD4:CD8 e a sorologia mais acentuada para citomegalov?rus (CMV). Aqui, investigamos marcadores de estresse oxidativo e as defesas antioxidantes em idosos com a rela??o invertida entre as c?lulas T CD4 e CD8. De um total de 421 idosos recrutados na comunidade, 61 sujeitos foram identificados com a invers?o da raz?o CD4:CD8. Os idosos com CD4:CD8<1 tinham n?veis aumentados de produtos proteicos de oxida??o avan?ada (AOPP) e atividade antioxidante total pelo m?todo de redu??o do ferro (FRAP) no plasma, mas n?veis reduzidos de subst?ncias reativas ao ?cido tiobarbit?rico (TBARS), em compara??o com indiv?duos com raz?o CD4:CD8 normais. A sorologia para CMV (IgG) foi negativamente correlacionada com a raz?o CD4:CD8. Estes marcadores foram mais evidentes entre os homens do que as mulheres idosas. Nossos dados sugerem uma estreita rela??o entre a infec??o por CMV cr?nica e perfil oxidativo em indiv?duos mais velhos no meio de sua influ?ncia sobre os subtipos de c?lulas T perif?ricas.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-01-14T11:44:34Z No. of bitstreams: 1 TES_THIAGO_DE_JESUS_BORGES_COMPLETO.pdf: 18287406 bytes, checksum: a76247b63c9874ac8f9c628b100c9e0b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-14T11:44:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_THIAGO_DE_JESUS_BORGES_COMPLETO.pdf: 18287406 bytes, checksum: a76247b63c9874ac8f9c628b100c9e0b (MD5) Previous issue date: 2015-11-27 / Dendritic cells (DCs) are the major antigen-presenting cells. They provide three main signals to fully activate T cells. Signal one is when the complex peptide:MHC (p:MHC) expressed by DC is recognized by T cell receptor; signal two is the expression of co-stimulatory molecules from the B7 family (CD80 and CD86). The third signal consists in the cytokines produced by DCs, which will bias the quality of T cell response. Once one of this signal is blocked/interrupted, T cells are not fully activated. T cells are involved in the eradication of pathogens, but also in the pathogenesis of several disorders and, strategies that modulate signal two are being used to treat these disorders. Novel therapies that inhibit the second signal (checkpoint blockade) or T cell modulation by these molecules have being used/tested to manage tumors, autoimmune disorders and transplant rejection. Our group demonstrated that the M. tuberculosis protein DnaK (prokaryote Hsp70) has an immunosuppressive role on DCs, and can suppress rejection in a murine skin allograft model. Nevertheless, the molecular mechanism involved in this response need to be further elucidated. In the present work, we demonstrated that the treatment of murine DC with DnaK could decrease the basal levels TNF-?, IFN-? and MCP-1 produced by these cells. This modulation was concomitant with a downregulation of the transcription factors C/EBP? and C/EBP? in a TLR2-ERK-STAT3-IL-10-dependent way. Beyond the signal three, DnaK could also downregulate the expression of MHC II (signal one) and CD86 (signal theree) on DCs, through the induction of a molecule called MARCH1. We developed an-situ treatment of skin grafts with DnaK prior the transplant. We observed that this treatment prolongs allograft survival with a decreased alloimmunity, and this dependent on MARCH1. The molecular pathway TLR2-ERK-STAT3-IL-10 was required for MARCH1 induction by DnaK. Moreover, we found that DnaK modulates a specific skin migratory DC ? the CD103+ DCs. This is the major subset involved in skin allograft rejection. We tested in which innate receptors DnaK could bind and found that DnaK could not bind directly on TLR2, but in the LOX-1 and Siglec-E receptor, in a LOX-1/Siglec-E/TLR2 complex. Finally, from the data obtained we patented a new formulation and method to treat allografts prior the transplantation. Thus, DnaK tolerizes dendritic cells through the modulation of the three signals required to activate T cells. We believe that consists an innovative strategy to treat inflammatory disorders, rejection, asthma and sepsis. / C?lulas dendr?ticas (DCs) s?o as principais c?lulas apresentadoras de ant?genos e fornecem tr?s sinais principais para a ativa??o completa das c?lulas T. O primeiro sinal consiste na apresenta??o do complexo pept?deo:MHC; o segundo sinal ? a express?o de mol?culas co-estimulat?rias da fam?lia B7, como o CD80 e CD86, e o terceiro consiste no conjunto de citocinas produzidas pelas DCs que ir?o moldar o tipo de resposta T que ser? gerada. Uma vez que algum desses dois sinais ? interrompido as c?lulas T n?o s?o ativadas de forma completa e, ainda, podem entrar em anergia ou apoptose. As c?lulas T est?o envolvidas n?o apenas em respostas de defesa, mas tamb?m em uma s?rie de patologias, e estrat?gias que visam sua ativa??o ou inibi??o vem sendo usadas no manejo dessas doen?as. Terapias que visam a inibi??o do segundo sinal (checkpoint blockade) ou a modula??o das c?lulas T pelas mol?culas co-inibit?rias tem sido testadas e utilizadas para tumores, autoimunidade e transplantes. Nosso grupo demonstrou que a prote?na DnaK (Hsp70 procari?tica) de M. tuberculosis tem papel imunossupressor em c?lulas dendr?ticas e in vivo, podendo diminuir a rejei??o de transplantes cut?neos em camundongos. Por?m, os mecanismos envolvidos nessa resposta ainda precisam ser elucidados. No presente trabalho, mostramos que a DnaK foi capaz de diminuir a express?o basal de TNF-?, IFN-? e MCP-1 em DCs de camundongos. Essa modula??o foi concomitante com a diminui??o de dois fatores de transcri??o ? C/EBP? e C/EBP? ? de maneira dependente da via molecular TLR2-ERK-STAT3-IL-10 nas DCs. Al?m do terceiro sinal, a DnaK pode modular a express?o dos n?veis de MHC II (primeiro sinal) e CD86 (segundo sinal) nas DCs, atrav?s da indu??o de uma mol?cula chave chamada MARCH1. Em um modelo murino de aloenxerto cut?neo, o tratamento local com a DnaK, antes do transplante, prolongou a sobrevida do enxerto e diminuiu a aloimunidade de maneira dependente de MARCH1. A indu??o de MARCH1 pela DnaK foi dependente da via molecular TLR2-ERK-STAT3-IL-10 nas DCs. Al?m disso, demonstramos que a DnaK modula exclusivamente um subtipo de DC migrat?rio da pele ? as DCs CD103+. Tamb?m observamos que esse subtipo de DC ? o principal subtipo celular envolvido na rejei??o de transplantes de pele, gerando um conceito biol?gico novo nessa ?rea. Mapeamos os receptores inatos nos quais a DnaK pode se ligar. Testamos dez receptores inatos e vimos que essa prote?na n?o se liga diretamente no TLR2, mas sim nos receptores LOX-1 e Siglec-E, formando o complexo LOX-1/Siglec-E/TLR2. Finalmente, a partir dos dados obtidos nessa tese, formulamos uma composi??o e um m?todo para a modula??o do enxerto antes da realiza??o do transplante, e depositamos uma patente junto ao INPI. Portanto, a DnaK pode tolerizar as c?lulas dendr?ticas atrav?s da modula??o dos tr?s sinais necess?rios para a ativa??o das c?lulas T. Acreditamos que essa estrat?gia pode ser utilizada no tratamento de patologias inflamat?rias, incluindo a rejei??o a transplantes.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-05-10T11:19:25Z No. of bitstreams: 1 TES_MARINA_PETERSEN_GEHRING_COMPLETO.pdf: 5818535 bytes, checksum: 5b089589ca820b17117fd0c8e9d1cc90 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-10T11:19:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_MARINA_PETERSEN_GEHRING_COMPLETO.pdf: 5818535 bytes, checksum: 5b089589ca820b17117fd0c8e9d1cc90 (MD5) Previous issue date: 2016-01-11 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Gliomas represent the most common class of malignant tumors of the central nervous system being the most aggressive, and lethal brain tumors in primary brain tumors. Among the treatments, radiation is one of the most used therapies, but the intrinsic radioresistance of these tumors remains a critical problem in the management of these patients. Currently it is known that the effect of radiation extends beyond the directly cytotoxicity caused in tumor cells. Radiation therapy appears to induce an immunogenic cell death that among the features is ATP release. The ATP can cause cytotoxicity via P2X7 receptor and also acts as a sign of damage activating the immune system. The ATP can be hydrolyzed by enzymes of the purinergic system, among them the ectonucleotidase CD39, to adenosine, which has an opposite effect to ATP, causing immunosuppression. The radiation-induced ATP release and the ability of this nucleotide in modulate immune responses raised the hypothesis about the purinergic signaling participation in the tumor and immune cells response to radiation. Therefore, this study investigated: i) the role of ectonucleotidase CD39/NTPDase1 in the radiation-induced immune response in gliomas, ii) the importance of ATP-P2X7 receptor in the gliomas response to radiotherapy. Using knockout mice for CD39/NTPDase1, we observed that the deletion of this enzyme combined with radiotherapy significantly reduced the immunosuppressive cells Tregs in the tumor and spleen, attenuated the infiltration of myeloid derived suppressor cells caused by radiation and increased CCR7 expression in splenic dendritic cells and macrophages, indicating the presence of freshly mobilized antigen presenting cells available to differentiate in immune-effector cells that sustain a more prolonged antigen-specific T-cell?mediated immune response. Thereby, showing that blocking the activity of CD39/NTPDase1 can control immunosuppressive mechanisms generated by the tumor and promises to improve the radiotherapy response. Furthermore, in this study we observed that radiation actives the P2X7 receptor and by silencing this receptor on the GL261 glioma cell line, we have shown that radiotherapy is less efficient in vivo when compared with mice injected with GL261 WT cells, which constitutively express the P2X7 receptor. We also showed that patients with glioma that overexpress the P2X7 receptor, showed a better response to radiotherapy, revealing the importance of the expression of this receptor on glioma cells as a useful marker to analyze the tumor sensitivity to radiation and a successful radiotherapy response. In summary, our data shed light on the purinergic signaling for modulating the radiotherapy response in gliomas. / Os gliomas representam a classe mais comum de tumores malignos do sistema nervoso central, sendo o tumor cerebral mais agressivo e letal entre os tumores cerebrais prim?rios. Dentre os tratamentos, a radia??o ? uma das terapias mais utilizadas, por?m a radiorresist?ncia intr?nseca destes tumores continua a ser um problema cr?tico na gest?o de destes pacientes. Atualmente, sabe-se que o efeito da radia??o se estende al?m da citotoxicidade direta causada nas c?lulas tumorais. A radioterapia parece induzir uma morte celular imunog?nica, que entre as caracter?sticas est? a libera??o de ATP. O ATP pode causar citotoxicidade atrav?s do receptor P2X7 e tamb?m atua como um sinal de dano celular ativando o sistema imune. O ATP pode ser hidrolisado por enzimas do sistema purin?rgico, dentre elas a ectonucleotidase CD39/NTPDase1, ? adenosina, que tem um efeito aposto ao ATP, causando imunossupress?o. A secre??o de ATP induzida pela radioterapia e a capacidade deste nucleot?deo em modular a resposta imune, levantou a hip?tese da participa??o da sinaliza??o purin?rgica na resposta de c?lulas tumorais ? radia??o e na resposta imune induzida pela radioterapia. Portanto, neste estudo visou-se investigar: i) o papel da ectonucleotidase CD39/NTPDase1 na resposta imune induzida pela radioterapia em gliomas, ii) a import?ncia da via ATP-receptor P2X7 na resposta de gliomas ? radioterapia. Atrav?s de camundongos knockout para a enzima CD39/NTPDase1, observamos que a dele??o desta enzima combinada com a radioterapia reduziu significativamente as c?lulas imunossupressoras Tregs no tumor e no ba?o, atenuou a infiltra??o de c?lulas mieloides supressoras causada pela radia??o, e aumentou a express?o de CCR7 em c?lulas dentr?ticas e macr?fagos localizados no ba?o, indicando a presen?a c?lulas apresentadoras de ant?geno rec?mmobilizadas e dispon?veis para se diferenciarem em c?lulas imunes efetoras que sustentam uma resposta imune mais prolongada mediada por c?lulas T ant?geno espec?ficas. Deste modo, mostrou-se que o bloqueio da atividade da CD39/NTPDase1 pode controlar mecanismos imunossupressores gerados pelo tumor e promete melhorar a resposta ? radioterapia. Al?m disso, neste estudo observou-se que a radioterapia ativa o receptor P2X7 e atrav?s do silenciamento deste receptor na linhagem de glioma GL261, demonstramos que a radioterapia foi pouco eficiente in vivo, quando comparado com camundongos injetados com a GL261 WT, que expressa constitutivamente o receptor P2X7. Tamb?m demonstramos que pacientes com glioma que expressaram mais o receptor P2X7, apresentaram uma melhor resposta a radioterapia, revelando a import?ncia da express?o deste receptor em c?lulas de glioma como um marcador ?til para analisar a sensibilidade tumoral ? radioterapia e para uma resposta bem-sucedida ? radioterapia. Em suma, nossos dados lan?am luz sobre a sinaliza??o purin?rgica para a modula??o da resposta ? radioterapia em gliomas.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-05-17T12:16:55Z No. of bitstreams: 1 DIS_JULIANA_ROMEU_MARQUES_COMPLETO.pdf: 1432001 bytes, checksum: 2d6dc8303449f3f554bf97804d426795 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-17T12:16:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIS_JULIANA_ROMEU_MARQUES_COMPLETO.pdf: 1432001 bytes, checksum: 2d6dc8303449f3f554bf97804d426795 (MD5) Previous issue date: 2016-02-16 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The liraglutide is a glucagon-like peptide 1 (GLP-1) based therapy and an alternative treatment to type 2 diabetes mellitus (T2DM). Apart from its hypogliycemic effect, the drug has been also associated with the prevention of cardiovascular diseases, regulation of blood lipid and anti-inflammatory action. Reports indicate, however, that liraglutide can increase the risk of thyroid cancer and cause pancreatitis. Besides, studies demonstrated that some analogues of GLP-1 have a deleterious bone effect, while others demonstrated to be benefic to the bone. The aim of this study was to evaluate the effect in vitro of liraglutide in mouse pre-osteoblastic cells, MC3T3-E1. The results demonstrated that liraglutide significantly decreased the number of viable cells without inducing apoptosis. The mechanism of this effect is associated to the reactive oxygen species production (ROS), which resulted in an increase of cell autophagy. The decreased number of viable cells indicates therefore that liraglutide may affect the bone formation. / A liraglutida ? uma terapia baseada no horm?nio GLP-1 utilizada como tratamento alternativo para a diabetes mellitus tipo 2 (DM2). O medicamento, al?m do efeito hipoglicemiante, tem sido associado ? preven??o de doen?as cardiovasculares, diminui??o dos lip?deos no sangue e ? a??o anti-inflamat?ria. Relatos indicam, por?m, que a liraglutida pode aumentar o risco de c?ncer de tireoide e provocar pancreatite. Al?m disso, estudos demonstram que alguns an?logos do GLP-1 t?m efeito ?sseo delet?rio, enquanto outros t?m efeito ben?fico. O objetivo deste estudo ? avaliar o efeito da liraglutida sobre o crescimento de c?lulas pr?-osteobl?sticas (MC3T3-E1). Os resultados t?m demonstrado que a liraglutida diminuiu significativamente o n?mero de c?lulas sem induzir a apoptose. O mecanismo deste efeito est? associado ? produ??o de esp?cies reativas de oxig?nio, que resulta em um aumento da autofagia das c?lulas, indicando, desta forma, que pode afetar a forma??o ?ssea.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:33:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 393516.pdf: 10259147 bytes, checksum: 763119f3451fafb413c3fb6cda86f10f (MD5) Previous issue date: 2007-07-23 / Introdu??o: A les?o hip?xico-isqu?mica neonatal ? uma causa importante de mortalidade e morbidade na inf?ncia, levando, freq?entemente, a retardo mental, epilepsia e paralisia cerebral. O sangue do cord?o umbilical humano, rico em c?lulas-tronco adultas, ? uma fonte potencial para a terapia celular em perinatologia. Objetivo: Investigar os efeitos das c?lulas-tronco de cord?o umbilical humano na mem?ria de orienta??o espacial, no desempenho motor e nos desfechos histol?gicos em ratos neonatos submetidos ? hip?xia-isquemia neonatal (HI). M?todos: Ratos de 7 dias de vida foram submetidos ? oclus?o da art?ria car?tida direita seguida por exposi??o a ambiente hip?xico (8% O2) por 2 h. Ap?s vinte e quatro horas, os ratos receberam solu??o salina ou c?lulas-tronco de cord?o umbilical humano por via intravenosa. Um grupo de animais cirurgia-simulada tamb?m foi adicionado. Ap?s tr?s semanas, a mem?ria espacial foi avaliada atrav?s do labirinto aqu?tico de Morris e as avalia??es motoras aplicadas foram o campo aberto, os testes do cilindro, da grade e da trave. Subseq?entemente, os ratos foram sacrificados para as avalia??es histol?gicas. Resultados: Ratos com HI mostraram um significativo preju?zo na mem?ria espacial e uma redu??o volum?trica do hemisf?rio ipsilateral ? oclus?o arterial. Nos testes motores, os animais submetidos ? HI mostraram apenas uma tend?ncia a d?ficits nos testes do cilindro e da grade. No entanto, os animais tratados com c?lulas-tronco de cord?o umbilical humano n?o mostraram diferen?as estat?sticas nos testes comportamentais e na atrofia cerebral quando comparados ao grupo que recebeu solu??o salina. Conclus?o: Este estudo sugere que a inje??o intravenosa de c?lulas-tronco de cord?o umbilical humano n?o melhora os desfechos comportamentais e histol?gicos em ratos ap?s HI severa. Investiga??es adicionais, considerando aspectos como dose, tempo para o transplante, m?todos de inje??o, uso de imunossupress?o e de terapias associadas s?o necess?rias para avaliar a relev?ncia cl?nica da terapia celular na les?o cerebral neonatal.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:34:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 404135.pdf: 1490615 bytes, checksum: b5509cc2d05c00816334141421e9d2b2 (MD5) Previous issue date: 2008-06-27 / Introdu??o: Recentemente, o tecido adiposo obtido atrav?s da lipoaspira??o foi identificado como uma fonte alternativa de c?lulas-tronco adultas. A facilidade de obten??o e a abund?ncia de material facilitam n?o s? a pesquisa, mas principalmente a aplica??o cl?nica destas c?lulas. Os estudos que tratam deste assunto n?o avaliam de forma precisa a exist?ncia ou n?o de diferen?a na concentra??o destas c?lulas nas diferentes poss?veis zonas de coleta do corpo. Objetivo: Avaliar a influ?ncia da zona doadora na concentra??o de c?lulas-tronco derivadas do tecido adiposo em mulheres. M?todo: Estudo transversal prospectivo. Foram inclu?dos no estudo 25 pacientes com indica??o de lipoaspira??o em 4 ou mais zonas diferentes em um mesmo procedimento cir?rgico. Ap?s a lipoaspira??o seletiva, o material foi processado para a dissocia??o do tecido e extra??o das c?lulas-tronco adultas para posterior quantifica??o. Foram avaliadas as seguintes zonas de coleta: abdome superior, abdome inferior, zona trocant?rica, zona crural, joelho e flanco. A concentra??o celular obtida em cada zona foi comparada atrav?s de an?lise de vari?ncia para modelos mistos. Resultados: Verificou-se diferen?a significativa na concentra??o celular obtida nas diferentes zonas doadoras. A concentra??o celular no abdome inferior foi superior ?s demais; por?m, n?o apresentou diferen?a significativa em rela??o ? zona crural. Conclus?o: O abdome inferior e a zona crural parecem ter maiores concentra??es de c?lulas-tronco derivadas do tecido adiposo.

O ciclo de vida de Dictyostelium discoideum é composto de duas fases independentes. Durante o crescimento vegetativo, as amebas crescem isoladas até que a fonte de nutrientes seja esgotada. A carência nutricional induz sua entrada num processo de desenvolvimento, que inclui a parada do crescimento, a agregação das células e a formação de um organismo multicelular onde as células se diferenciam em esporos que sobrevivem as condições desfavoráveis. A proteína quinase YakA é requerida para a transição entre o crescimento e o desenvolvimento. YakA regula os níveis da PKA. Mutantes yakA- apresentam o crescimento acelerado, são deficientes no processo de agregação e são hiper-sensíveis a estresse oxidativo e nitrosoativo. Uma mutação em um segundo sítio em keaA, suprime a morte induzida por SNP (um gerador de óxido nítrico) no mutante yakA-. O papel de keaA foi determinado em resposta a estresse oxidativo, nitrosoativo e carênica nutricional. O gene keaA é necessário para o crescimento e desenvolvimento. Uma mutação em keaA confere resistência a estresse nitrosoativoloxidativo confirmando que uma mutação em keaA confere resistência a estresse. Um segundo supressor da morte induzida por SNP no mutante yakA- foi isolado pela mesma técnica de REMI e identificado como pkaC um regulador da resposta a estresse. YakA e PKA integradam a resposta a vários estresse em Dictyostelium. Os resultados indicam que a yakA regula a parada do ciclo celular em resposta a estresses através da modulação de keaA. keaA regula, por sua vez, a expressão da pkaC, um regulador chave da produção de cAMP e do processo de desenvolvimento. A interação gênica entre estes elementos é complexa e deve ser ajustada para permitir que as células sobrevivam a mudanças ambientais encontradas durante o seu ciclo de vida. / Dictyostelium discoideum\'s life cycle is composed of two phases. During the vegetative phase, amoebae grow as single cells until the nutrients are depleted. Starvation induces a developmental program where isolated amoebae adopt a multicellular mode of living and differentiate into spores to survive the harsh conditions. The protein Kinase YakA is required for the growth to development transition. YakA regulates the leveis of PKA. yakA null cells have a faster cell cycle, are aggregation deficient and are hypersensitive to nitrosoative/oxidative stress. A second-site mutation in keaA, supresses the death induced by SNP, a generator of nitric oxide. The role for keaA has been determined in response to oxidative, nitrosoative and nutrient starvation stresses. keaA is required for proper growth and development. The keaA- cells are more resistant to nitrosoative and oxidative stress confirming that a mutation in keaA confers stress resistance. A second supressor of the death induced by SNP in the mutant yakA- was isolated with REMI and identified pkaC as a regulator of the nitrosoative stress response. YakA and PKA may integrate the responses to several stresses in Dictyostelium. The results indicate that yakA regulates the cell cycle arrest in response to stress through the modulation of keaA. KeaA regulates the expression of pkaC, a key regulator of cAMP prodution and development. Genetic interactions among these elements is complex and must be finely tuned in the many environmental changes cells endure during the life cycle.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-03-04T18:46:38Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AnaliseInteracaoVitro.pdf: 11076207 bytes, checksum: d5fc5bd6532bdaceb159c5cb59308b40 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-03-05T15:37:51Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AnaliseInteracaoVitro.pdf: 11076207 bytes, checksum: d5fc5bd6532bdaceb159c5cb59308b40 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-05T15:37:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AnaliseInteracaoVitro.pdf: 11076207 bytes, checksum: d5fc5bd6532bdaceb159c5cb59308b40 (MD5) Previous issue date: 2008 / A cromoblastomicose e uma infeccao subcutanea cronica, granulomatosa, causada pela implantacao traumatica de diversas especies de fungos demaceos, sendo Fonsecaea pedrosoi o principal agente etiologico. O Brasil possui a segunda maior prevalencia mundial da doenca, sendo o estado do Para a maior area endemica. Histologicamente, a cromomicose e caracterizada pela presenca de celulas gigantes, onde podem ser observadas celulas escleroticas fagocitadas por macrofagos. O objetivo do presente estudo foi analisar os diferentes aspectos da interacao de macrofagos peritoneais de camundongos BALB/c e C57/BL6 com conidios ou celulas escleroticas de F. pedrosoi, determinando os indices de infeccao, fagocitose e fusao celular. Os resultados mostraram indices de fagocitose e infeccao maiores em conidios do que em celulas escleroticas para BALB/c (p<0.05), ocorrendo efeito inverso no indice de fusao, com a formacao de celulas gigantes do tipo Langhans na interacao com celulas escleroticas e celulas gigantes do tipo corpo estranho na interacao com conidios. Os macrofagos de BALB/c em interacao com conidios produziram mais TNF-α que o controle nos tempos de 3 a 72h; e mais IL-10 apos 3h. Macrofagos interagindo com celulas escleroticas produziram mais TNF-α que o controle nos tempos de 1h e 3h; e a quantidade de IL- 10 foi maior apos 72h de interacao. No co-cultivo de macrofagos de C57/BL6 com conidios observou-se a presenca de vacuolos aumentados apos 24h, enquanto na interacao com celulas escleroticas, os macrofagos se desprenderam da laminula nos tempos posteriores a 24 h. A quantidade de TNF-α e maior na interacao de conidios comparado ao controle em 1 e 72 h; e a quantidade de IL-10, no tempo de 48h. Ja na interacao com celulas escleroticas, apenas a quantidade de IL-10 diferiu do controle, sendo maior nos tempos de 1 a 48h. Estes dados sugerem que a resposta e macrofagos ao fungo e diferente entre os camundongos de BALB/c e C57/BL6, diferindo tambem a resposta de um mesmo tipo de macrofago para cada forma fungica, sendo as celulas escleroticas aparentemente mais imunogenicas que os conidios. / Chromoblastomycosis (CBM) is a chronic, subcutaneous, granulomatous infection caused by traumatic implantation in the skin of several dematiaceous fungi, usually Fonsecaea pedrosoi. Brazil has second highest disease prevalence in the world and Para State is the most endemic area. Histologically, CBM is characterized by the presence of multinucleated giant cells and sclerotic cells can be found engulfed by macrophages. The objective of this study was to analyze the different aspects of interaction between peritoneal macrophages from BALB/c or C57/BL6 mice with F. pedrosoi conidia or sclerotic cells, calculating infection, phagocytosis and cellular fusion rates. The results showed phagocytosis and infection rates with conidia higher than sclerotic cells to BALB/c (p <0.05), while the rate of cellular fusion was higher for sclerotic cells interaction, with Langhans giant cells formation, in comparison to foreign-body giant cells after interaction with conidia. Macrophages from BALB/c co-cultured with conidia produced more TNF-α than control group after 3 to 72 hours, and more IL-10 after 3h. Macrophages interacting with sclerotic cells produced more TNF-α than control group after 1h and 3h, and the amount of IL-10 was higher after 72h of interaction. In the co-culture of C57/BL6 macrophages with conidia, the presence of large vacuoles after 24h was observed, while in the coculture with sclerotic cells, macrophages were detached from coverslip glasses after 24 h. Our results indicate higher levels of TNF-α after interaction of conidia compared to controls at 1 and 72 h and increase of IL-10 after 48h. However, after interaction with sclerotic cells, only IL-10 differed from control, being higher after 1 to 48 hours. All of these data suggest that macrophage response to fungus is different between BALB/c and C57/BL6 mice, differing also on the response of the same type macrophage for each fungal form, sclerotic cells apparently being more immunogenic than conidia.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-01-22T18:12:10Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoMetodoFotooxidacao.pdf: 132738540 bytes, checksum: 24543aac4b55976eda3a952ad9d57a98 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2014-01-24T14:33:10Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoMetodoFotooxidacao.pdf: 132738540 bytes, checksum: 24543aac4b55976eda3a952ad9d57a98 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-01-24T14:33:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoMetodoFotooxidacao.pdf: 132738540 bytes, checksum: 24543aac4b55976eda3a952ad9d57a98 (MD5) Previous issue date: 2013 / A análise da morfologia celular é um aspecto crucial da neurobiologia, pois a relação entre forma e função pode definir os processos fisiológicos na saúde e na doença. Um dos principais métodos para avaliar a morfologia celular é por meio da fotooxidação de marcadores fluorescentes intracelulares, dentre os quais se tem o percloreto de 1,1’-dioctadecil-3,3,3’,3’-tetrametil-indocarbocianina (DiI), uma carbocianina lipofílica que pode marcar células vivas ou fixadas. O DiI foi escolhido para este trabalho devido, dentre outros fatores, à sua importante utilização para estudos de morfologia celular. Como modelo para avaliar a qualidade da fotooxidação do aparelho construído para essa finalidade, elegeu-se as células horizontais da retina humana com o intuito de prosseguir com estudo morfométrico posterior dessas células, tendo em vista a escassez de trabalhos com essa abordagem em retina humana. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar a qualidade do método de fotooxidação do DiI através de LED e utilizando como modelo células horizontais da retina humana. O material foi obtido do Banco de Olhos do Hospital Ophir Loyola e, em sequência dissecado, marcado com cristais de DiI e fotooxidado com o aparelho de LED. As imagens que resultaram do novo método de iluminação para fotooxidação de traçador fluorescente apresentou elevada qualidade de detalhes da morfologia neuronal, similares aos resultados obtidos em reações de fotoconversão convencional com microscópio, o que permite concluir que o aparelho mantém a eficiência da fotooxidação por revelar detalhes finos da morfologia celular, inclusive com as vantagens de processar áreas maiores de tecido e considerável redução de custo por dispensar o emprego de microscópio para o processo. / The analysis of cell morphology is a crucial aspect of neurobiology, since the relationship between form and function can define the physiological processes in health and disease. One of the main methods to evaluate cell morphology is through photooxidation of intracellular fluorescent markers, among which is the perchlorate of 1,1 '-dioctadecyl-3, 3,3', 3'-tetramethyl-indocarbocianina (DiI) a lipophilic carbocyanine that can make living or fixed cells. The DiI was chosen for this work because, among other factors, it is used for important studies of cell morphology. As a model for evaluating the quality of photooxidation of the apparatus constructed for this purpose, horizontal cells of human retina were elected in order to proceed with morphometric study these cells further, in view of the lack of studies with this approach in human retina. This study evaluated the quality of the DiI method photooxidation via LED and used the horizontal cells of the human retina as a model. The material was obtained from the Eye Bank of Ophir Loyola Hospital and sequence dissected, labeled with DiI crystals and photooxided with the LED device. The images resulting from the new method of lighting fluorescent tracer showed photooxidation of high-quality detailed neuronal morphology, similar to the results obtained in reactions of convencional photoconversion with a microscope, which indicates that the device maintains the efficiency of the photooxidation for revealing fine details of cellular morphology, including the advantages of larger areas of tissue processing and a considerable cost reduction for the use of microscopy dispensed into the process.